Estudio de los mecanismos de resistencia asociados al tratamiento con inhibidores de tirosina kinasas en leucemias philadelphia positivas

En la Leucemia Mieloide Crónica la resistencia al tratamiento puede deberse, entre otras causas, a mutaciones en el BCR-ABL1, a la sobreexpresión de Src kinasas o subexpresión de genes oncosupresores. La presencia del BCR-ABL1 en la Leucemia Linfoblástica Aguda (LLA) confiere mal pronóstico, por ello se han desarrollado protocolos más agresivos que incluyen inhibidores de tirosina kinasa (ITK). La hipótesis de este trabajo fue determinar si la detección temprana de las mutaciones en BCR-ABL1 y la expresión de los genes LYN y PTEN estarían involucradas en la resistencia al tratamiento. Mediante high resolution melting y ARMS-qPCR se incrementó la detección de mutaciones en un 16% respecto de la secuenciación directa. Se analizó la dinámica del clon mutado y de los transcriptos BCR-ABL1, permitiendo definir el rol de la mutación en la resistencia, seleccionar el ITK adecuado y evaluar respuesta al tratamiento. El análisis de la expresión LYN/PTEN en pacientes resistentes a imatinib o nilotinib y sin mutaciones, permitió asociar la falta de respuesta al tratamiento con la expresión alterada de estos genes. La cuantificación de BCR-ABL1P190 en LLA demostró ser una herramienta importante para evaluar la respuesta al tratamiento y definir enfermedad mínima residual, previo al trasplante de médula ósea.

The resistance to treatment in Chronic Myeloid Leukemia may be due, between others, to mutations in the BCR-ABL1, overexpression of Src-kinases or down-regulation of onco-suppressors genes. The presence of the BCR-ABL1 in Acute Lymphoblastic Leukemia (ALL) is associated with poor prognosis; therefore more aggressive protocols were developed including tyrosine kinase inhibitors (TKI). The hypothesis of this study was to determine if early mutations detection in BCR-ABL1, and expression of LYN and PTEN genes would be involved in treatment resistance. Using high resolution melting and ARMS-qPCR the detection of mutations was increased in 16% with respect to direct sequencing. The analysis of dynamics of mutated clone and the BCR-ABL1 transcripts, allowed to define the role of mutation in the resistance, selecting the appropriate TKI and to evaluate treatment response. The analysis of LYN/PTEN expression in imatinib or nilotinib resistant patients without mutations, allowed associating the lack of response to treatment with altered expression of these genes. The quantification of BCR-ABL1P190 in ALL, proved to be an important tool to evaluate treatment response and define minimum residual disease prior to bone marrow transplantation.