Identificación de variantes zoonóticas de Cryptosporidium, Blastocystis y Enterocytozoon en terneros de la provincia de Buenos Aires, Argentina

Cryptosporidium, Blastocystis y Enterocytozoon son parásitos cosmopolitas que pueden causar cuadros clínicos gastrointestinales en humanos y animales y en algunos casos puede ser letal en personas inmunocomprometidas. El ganado vacuno puede llegar a ser una fuente importante de infección de estos agentes zoonóticos si el desarrollo de la industria ganadera no se acompaña de medidas preventivas adecuadas para el manejo de los desechos provenientes de estos animales. Durante el período 2011-2013 se realizó un relevamiento de Cryptosporidium, Enterocytozoon bieneusi y Blastocystis en establecimientos lecheros distribuidos en 12 municipios de la Cuenca Mar y Sierras, Provincia de Buenos Aires. Se obtuvieron muestras fecales de 209 terneros de menos de 2 meses de edad las cuales se analizaron por métodos moleculares para identificar y caracterizar molecularmente a dichos microorganismos. Para la detección de Cryptosporidium se efectuó un protocolo de PCR anidada para la identificación del gen 18S rRNA. La detección de subtipos de C. parvum, se realizó una PCR anidada que identifica al gen de la glicoproteína de superficie GP60. En el caso de E. bieneusi, se amplificó mediante PCR anidada un fragmento de 400 pb correspondiente a toda la region ITS y las porciones flanqueantes tanto de la subunidad menor como mayor del rADN. Para identificar Blastocystis, se efectuó una PCR para detectar un fragmento del gen SSU rDNA. Un total de 87 muestras resultaron positivas para Cryptosporidium (41,62%). Cryptosporidium bovis se detectó en una sola muestra, mientras que el resto fueron positivas para C. parvum. La subtipificación de las muestras positivas para C. parvum reveló una amplia variedad de subtipos zoonóticos: IIaA16G1R1, IIaA18G1R1, IIaA19G1R1, IIaA20G1R1, IIaA21G1R1, IIaA22G1R1, IIaA23G1R1. Se detectaron coinfecciones en dos muestras con los subtipos IIaA21G1R1 y IIaA22G1R1. E. bieneusi se detectó en 10 muestras (4,8%). Seis genotipos fueron encontrados de los cuales cinco de ellos fueron detectados con anterioridad en humanos. Los genotipos D, I, J y BEB4, descrito previamente en terneros los seres humanos fueron identificados. EbpC, que ha sido descrito previamente en los seres humanos, se encontró por primera vez en los terneros. Un nuevo genotipo, BEB10, fue identificado en un ternero. El genotipo más frecuente fue el J, seguido por I. No se detectaron infecciones mixtas. Un total de 6 muestras de heces mostraron coinfección por Cryptosporidium y E. bieneusi. Se encontraron las siguientes asociaciones: C. bovis con genotipo J, C. parvum subtipo IIaA18G1R1 con genotipo I, IIaA20G1R1 con el genotipo D, IIaA20G1R1 con el genotipo J, IIaA21G1R1 con genotipo BEB4 y IIaA22G1R1 con el genotipo J. Blastocystis no fue detectado en ninguna muestra. Estos resultados indican una amplia diversidad genética de subtipos y genotipos zoonóticos de C. parvum y E. bieneusi respectivamente, en terneros en la provincia de Buenos Aires. La presencia de estos microorganismos en terneros sugiere que estos animales podrían representar un riesgo para la salud pública a través de la contaminación del agua potable y productos frescos. Para una mejor comprensión de la transmisión zoonótica de estos agentes es esencial llevar a cabo estudios moleculares de muestras provenientes de seres humanos que viven o están en contacto con estos animales.

Cryptosporidium, Blastocystis, and Enterocytozoon are cosmopolitan microscopic parasites that can cause severe diarrheal disease in humans and animals, and can be lethal in immunocompromised individuals..Cattle can become a major source of infection of those zoonotic agents for humans if the development of the livestock industry is not accompanied by appropriate preventive measures for their manure management. During the period 2011-2013 a survey of Cryptosporidium, Enterocytozoon bieneusi and Blastocystis was conducted in dairy farms distributed in 12 municipalities of the Cuenca Mar y Sierras, Province of Buenos Aires. Fecal specimens of 209 calves less than 2 months of age were collected and analyzed by molecular methods to identify and molecularly characterize Cryptosporidium, Enterocytozoon bieneusi and Blastocystis . A nested PCR protocol for identification of 18S rRNA gene was used for the detection of Cryptosporidium. To detect C. parvum subtypes, a nested PCR for a genetic polymorphic marker ?surface glycoprotein GP60 gene- was used. For E. bieneusi identification, a 400 bp fragment corresponding to the entire region of ITS region and flanking portions of both major and minor subunits rDNA was amplified by nested PCR. To identify Blastocystis, a PCR based on the detection of a fragment of SSU rDNA gene was performed. A total of 87 samples were positive for Cryptosporidium (41,62%). Cryptosporidium bovis was detected in a single sample while the rest were all C. parvum. Subtyping of the C. parvum isolates revealed a wide variety of zoonotic subtypes: IIaA16G1R1, IIaA18G1R1, IIaA19G1R1, IIaA20G1R1, IIaA21G1R1, IIaA22G1R1, IIaA23G1R1 were detected. Coinfections were detected in two samples with IIaA22G1R1 and IIaA21G1R1. E. bieneusi was detected in 10 samples (4.8%). Six genotypes were found with five of them being previously reported in humans. Genotypes D, I, J and BEB4, previously described in calves and humans, were identified. EbpC, which has been previously described in humans, was found for the first time in calves. A new genotype, BEB10, was identified in a calf. The most prevalent genotype was the J, followed by I. No mixed infections were detected. A total of 6 stool samples showed coinfection by Cryptosporidium and E. bieneusi. The following associations were found: C. bovis with genotype J, C. parvum subtype IIaA18G1R1 with genotype I, IIaA20G1R1 with genotype D, IIaA20G1R1 with genotype J, IIaA21G1R1 with genotype BEB4 and IIaA22G1R1 with genotype J. Blastocystis was not detected. These results show a wide genetic diversity of C. parvum and E. bieneusi with zoonotic genotypes and subtypes in calves in Buenos Aires province. The presence of these microorganisms in calves suggests that these animals could represent a risk to public health through contamination of drinking water and fresh produce. For a better understanding of zoonotic transmission of these agents it is essential to carry out molecular studies of isolates from humans who live with or are in contact with these animals.