Descripción: La enfermedad articular degenerativa u osteoartritis (OA) es la enfermedad articular más frecuente en el caballo y es considerada a nivel internacional como responsable del 60 % de las claudicaciones del equino deportivo.En los deportes en los cuales la vida útil del equino es prolongada, es frecuente observar formas crónicas de esta enfermedad debidas al fracaso del cartílago articular para soportar el trauma cíclico de la actividad deportiva, sumado a los cambios propios de la edad. En animales jóvenes, las lesiones reiteradas pueden llevar al caballo al retiro de la competencia aún a edades relativamente tempranas. Este trauma repetido, producto de la competencia deportiva, produce sinovitis y capsulitis, daño a ligamentos colaterales, fracturas intra articulares y lesión del hueso subcondral. Estos procesos llevan a las manifestaciones clínicas de la OA, tanto agudas o crónicas con reagudizaciones recidivantes características de esta enfermedad. La OA puede ser definida como una enfermedad progresiva, degenerativa que se caracteriza por una pérdida del cartílago articular, eburnificación del hueso subcondral e inflamación de la membrana sinovial y aumento del líquido sinovial. Los procesos inflamatorios resultantes producen citoquinas proinflamatorias que activan metaloproteinasas (MMPs) que a su vez retroalimentan el proceso por destrucción de la matriz extracelular cartilaginosa (MEC). El diagnóstico de la OA se basa en la semiología clínica y en métodos complementarios. En el diagnóstico clínico es de fundamental importancia la descripción estandarizada de los síntomas de una enfermedad, asi como los signos de su evolución o progresión en el tiempo para unificar los criterios de diagnóstico entre los profesionales, para determinar el tipo y el nivel de gravedad de la misma, para definir las pautas de inclusión de los pacientes en trabajos de investigación, para caracterizar los modelos animales utilizados en la investigación de enfermedades que afectan al ser humano y finalmente, para poder cuantificar estadísticamente los progresos, los éxitos y los fracasos en los tratamientos. En Medicina Humana se describen varios índices para evaluar a la OA desarrollados por organizaciones como el International Knee Documentation Comittee (IKDC) y la International Cartilage Repair Society (ICRS). Estos índices incluyen evaluaciones subjetivas, con participación del paciente, objetivas, realizadas por exámenes clínicos y complementarios, e índices que incluyen ambos tipos de evaluaciones.En Medicina Veterinaria, la colaboración del paciente en la anamnesis es nula y la del responsable del animal puede ser incompleta o poco confiable. Por lo tanto, la elaboración de índices está basada fundamentalmente en las observaciones realizadas por el médico veterinario. Nuestro grupo de trabajo desarrollo un índice clínico para evaluar la articulación tarso astragalina que incluye el índice de la AAEP modificado, las maniobras de palpación presión y flexión forzada, la observación del perfil articular y del grado de hidrartrosis y las características físicas del líquido sinovial.En el análisis tradicional del líquido sinovial se ha utilizado la medición de enzimas (AST, LDH, FA), proteínas totales, urea y el recuento de leucocitos. A partir del descubrimiento de nuevos biomarcadores (BMs) y de sus efectores en la cascada inflamatoria, se han comenzado a estudiar su aplicación en el diagnóstico precoz de la OA, el desarrollo de nuevos tratamientos y el seguimiento de los mismos. Un BM es un indicador molecular, directo o indirecto, de recambio anormal del tejido articular, que corresponde a un componente normal o a un subproducto de los procesos metabólicos del tejido articular. Dentro de los BM indirectos se incluyen las citoquinas y las MMPs. Las citoquinas son proteínas de comunicación celular, secretadas por las células de la inmunidad innata y adaptativa en respuesta a la presencia de distintos antígenos. Estas citoquinas median los procesos fisiológicos de las células inmunitarias y del tejido óseo y cartilaginoso y estimulan distintas respuestas defensivas e inflamatorias, tanto a nivel local (articular) como sistémico. En las afecciones articulares, se consideran de importancia al factor de necrosis tumoral ? (TNF-?), las interleuquinas 1 ? (IL-1 ?), 4 (IL-4) y 6 (IL-6), presentes en el líquido sinovial pero en niveles diferentes en los animales sanos y en aquellos que presentan signos clínicos de OA Las MMPs que tienen valor diagnóstico en la OA son, fundamentalmente, la MMPs 2 y 9, las cuales son gelatinasas, zinc y calcio dependientes, que participan en el recambio fisiológico y patológico de la MEC del cartílago, degradándola en los procesos de OA. Cuando existe un recambio óseo fisiológico, la liberación por parte de condrocitos, células sinoviales y fibroblastos de TNF-? e IL-1 ?, produce una respuesta de los osteoblastos que aumenta su producción de MMPs dentro de un rango de normalidad. La expresión de estas enzimas está altamente controlada por inhibidores tisulares de metaloproteasas (TIMs) Esta tesis plantea como hipótesis general que, en los equinos, las modificaciones de los marcadores biológicos del líquido sinovial, en las fases iniciales o tempranas de la OA, anteceden a la presentación de signos clínicos manifiestos y radiológicos. Además, es factible observar modificaciones bioquímicas en los periodos de remisión de la enfermedad. Sus objetivos son: ? Analizar el valor diagnóstico de los biomarcadores moleculares del líquido sinovial como predictores tempranos de la manifestación clínica de la osteoartritis y en el seguimiento de su evolución. ? Determinar si existe una interrelación temporal entre el diagnóstico clínico y el análisis bioquímico del líquido sinovial, en equinos con y sin signos clínicos de OA.? Establecer un índice clínico que permita el diagnóstico y seguimiento de la evolución de la enfermedad en sus distintas fases.? Evaluar si existe una relación entre la presencia o ausencia de signos clínicos y los cambios bioquímicos tempranos en el líquido sinovial.Para establecer valores de índice clínico poblacional, se trabajo con 123 equinos de salto y SPC tomados al azar de edades comprendidas entre 1 y 28 años. De este grupo inicial, se tomaron tres grupos de animales en función de su categoría etaria, para obtener valores de referencia de citoquinas y MMPs con el objetivo de caracterizar el perfil de estos biomarcadores en el líquido sinovial de equinos normales de distintas edades y en equinos con signos clínicos de OA. Los grupos fueron: i) potrillos sanos entre 1 y 2 años (n=21), ii) adultos con edad entre 3 y 14 años (n=84) sanos y con grados variables de enfermedad articular y iii) Adultos mayores a 15 años normales pero con problemas articulares por envejecimiento (n=18). A todos se le efectuó un examen clínico general y particular enfocado en los tarsos (articulación tibio astragalina) de ambos miembros posteriores, y se les extrajo líquido sinovial de ambos tarsos.En el líquido sinovial, se determinaron IL-1 ?, IL-4 IL-6, TNF-?, MMPs 2 y 9, Proteína C reativa (PCR), proteínas totales, albúminas y urea. A fin de cuantificar el examen clínico de la articulación, se desarrolló el siguiente índice clínico: A) Grado de Claudicación: 0. No perceptible. 1. Difícil de observar y no siempre aparente (dolor a la flexión forzada). 2. Difícil de observar al paso o al trote en línea recta pero aparente en ciertas circunstancias de mayor esfuerzo (trabajo en círculo). 3. Observable al trote bajo toda circunstancia - Sensibilidad a la palpación presión (de menor a mayor): 0 (-), 1 (+), 2 (++) y 3 (+++). - Flexión Forzada: 0 (-), 1 (+), 2 (++) y 3 (+++). B) Análisis macroscópico del líquido sinovial - Apreciación visual del volumen: 0. No hay 0,5. Escaso (- de 2 ml) 1. Intermedio (de 2 a 10 ml) 1,5. Abundante (+ de 10 ml) - Color: 0. Claro.0,4. Blanquecino transparente. 0,8. Amarillo fuerte.1,2. Sanguinolento.1,6. Rojizo hemorrágico.2. Sangre. - Turbidez: si (1) / no (0) - Formación de ?hilo? (estiramiento): 0,4: 5 cm. 0,8: 3 cm.1,2: 1 cm. 1,6: CoagulaC) Grado de alteración del perfil articular 1. Normal.2. Aumento del líquido extraído.3. Hidrartrosis leve. 4. Hidrartrosis severa con o sin fibrosis de la cápsula. 5. Inflamación articular (aumento de tamaño, dolor y calor).Al puntaje del índice clínico propuesto le corresponde un mínimo de 2,3 puntos (sin manifestación clínica) y un máximo de 20,1 puntos, considerado de máxima severidad.A los efectos de evaluar el valor de los diferentes niveles de BMs en relación al índice clínico, se trabajó con los valores de referencia de citoquinas y MMPs en líquido sinovial establecidos previamente en nuestro laboratorio Los resultados de la medición de las citoquinas (pg/ml) y MMPs (% de un control interno) se dividieron en 3 categorías etarias, potrillos, adultos y mayores de 15 años, debido a que los resultados de los animales jóvenes (IL-1 ?: 120.96 ± 42.49 ª; IL-4; 6.10 ± 1.43 d, g; IL-6: 115.14 ± 52.49; TNF-?: 41.42 ± 13.64 ª; MMP-2: 140.47 ± 61.98 ª; MMP-9: 55.45 ± 58.17 ª, e) y mayores (IL-1 ?: 57.12 ± 8.38; IL-4: 10.83 ± 4.20c; IL-6: 134.21 ± 45.24; TNF-?: 86.35 ± 43.25e; MMP-2: 49.13 ± 18.50; MMP-9: 8.28 ± 7.63) presentaban un comportamiento diferencial con el grupo de adultos y los adultos, entre ellos. En el grupo de animales adultos, en la mayoría de las variables estudiadas se observó una distribución claramente definida en grupos bajo (IL-1 ?: 37.37 ± 12.25 b; IL-4: 2.94 ± 0.93 ª, d; IL-6: 62.68 ± 25.16; TNF-?: 30.61 ± 6.39; MMP-2: 63.23± 25.61; MMP-9: 0.34 ± 0.15), medio (IL-1 ?: 61.75 ± 7.02; IL-4: 7.41 ± 0.71 d, g; IL-6: 148.66±28.86; TNF-?: 46.45 ± 10.94; MMP-2: 128.27±24.80 f; MMP-9: 11.19 ± 3.96) y alto (IL-1 ?: 171.56± 132.68; IL-4: 14.61 ± 5.37 g; IL-6: 363.73± 123.06 e; TNF-?: 108.71 ± 50.39 e; MMP-2: 354.29± 174.88 e; MMP-9: 85.95 ± 47.97 e). Sin embargo, en el caso del TNF-? y la IL-1 ? la distribución en tres grupos no fue tan marcada no encontrándose diferencia significativa entre los valores medios del grupo bajo y medio (a P < .001 vs. Adultos mayores; b P < .05 vs. Alto; c P < .01 vs. Alto; d P < .001 vs. Alto; e P < .001 vs. los otros grupos, f P < .05 vs. Adultos mayores; g P < .01 vs Adultos mayores). Respecto a la IL-1 ? se observó que los potrillos sanos presentaban un valor más elevado que el resto de los otros grupos. El valor medio del grupo de potrillos fue superado, aunque no significativamente (p>0.005), por el grupo de adultos con valores elevados.Finalmente, utilizando el índice clínico propuesto en 123 animales y en asociación con los resultados de los niveles de citoquinas y MMPs en el líquido sinovial se clasifico a la población en los siguientes rangos o categorías:Grupo 1: Potrillos Equinos jóvenes entre uno y dos años, los cuales no presentaban alteraciones clínicas articulares, ni variaciones de los biomarcadores debido a OCD.Grupo 2: Basal. Equinos adultos con índice clínico no superior a 4. Animales clínicamente sanos, sin alteraciones en los BMs articulares inflamatorios o con leves alteraciones de los mismos. Grupo 3: Equinos adultos con índice clínico 4-6 con leve sintomatología clínica de OA.3a forma no activa con disminución de IL-4 3b forma activa con aumento de varios BMs.Grupo 4: Equinos adultos con índice clínico 6-10 con sintomatología de OA con/sindeformaciones articulares.4a forma no activa con leve aumento general de BMs 4b forma activa con aumento de MMP 2, expresión de MMP9 y elevada la IL-6 y otros BMs.Grupo 5: Gerontes. Equinos adultos mayores de 15 años. Síntomas crónicos de OA por envejecimiento, con aumento de algunos BM y disminución de otros, característicos del proceso de envejecimiento. Una vez comprobada la respuesta de las diferentes citoquinas y MMPs en cuadros de OA en sus distintos estadios agudo, en período de remisión y crónico se efectuó la correlación de esos resultados con el índice clínico para validarlo y poder utilizarlo sistemáticamente en el diagnóstico clínico de la OA, al menos en las localizaciones tarsianas (r2= 0.65 para MMP 2 y r2= 0.82 para MMP ).Aparentemente, la modificación o elevación de las citoquinas y MMPs es un signo precoz que antecede a la alteración del índice clínico. Por otra parte en las diferentes categorías clínicas se observaron diferentes combinaciones siendo el descenso de la IL-4 un signo incipiente de alteración en el entorno articular. Por ejemplo, en los animales del grupo 4b, se observo un perfil característico, presente en un 30 % de los animales, caracterizado por IL-4 e IL-6 elevadas acompañadas de MMP 2 elevada. En el grupo basal y grupo 3b con citoquinas elevadas en un 25 % se presentó la asociación de IL-1 ? e IL-6 elevada pero con IL-4 normal o disminuida y MMP 2 normal. Y en los índices superiores más de 13 fue muy habitual encontrar la expresión de la MMP 9, ausente en el grupo Basal y valores de MMP 2 elevados. El seguimiento de un paciente con OA implica contar con técnicas semiológicas estandarizadas que desarrollen un examen fijo, repetible y con resultados validados por medio de métodos complementarios correlacionados, como ser artroscopías, análisis de biomarcadores, entre otros. Para lograr este objetivo, se debe contar con un índice que contemple la mayor parte de las observaciones anamnésicas y clínicas posibles.En esta experiencia, hemos implementado un índice utilizando una combinación de índices clínicos que recibieron un valor numérico cuya suma resultó en un puntaje máximo de 20,1 y un corte mínimo de 2,3, considerándose este valor el correspondiente al índice clínico de un animal sin alteraciones clínicas. Aparentemente, el índice clínico aumentado será el resultado de la alteración mecánica que la enfermedad articular produce. La evolución del índice clínico en la OA en general es un proceso paulatino, a excepción de lo que ocurre en los casos de artritis aguda, este va aumentando a medida que la función fisiológica del cartílago articular y el hueso subcondral se va alterando con el tiempo de permanencia de la enfermedad activa. Y los periodos de remisión a medida que avanza la OA son cada vez son de más corta duración.En el caso de los gerontes, se observaron índices clínicos superiores a 7, sin signos aparentes de OA, solo de envejecimiento, y en estos casos los valores en el índice clínico fueron muy difíciles de retrotraer no obstante observar descenso en los BMs.Los BMs indirectos del metabolismo del cartílago, estudiados en esta experiencia, han sido las IL-1 ?, IL-4, IL-6, el TNF-? y las MMPs 2 y 9. La IL-1 y el TNF-? son liberados por la membrana sinovial y los condrocitos ante una sinovitis, producto del trauma articular. Ambas citoquinas se liberan en exceso y aumentan la tasa de degradación de proteoglicanos, disminuyen su síntesis o actúan en forma conjunta en ambos procesos. Esto se logra, en parte por la liberación de MMPs y prostaglandina E2. La IL-6 puede ser producida por fibroblastos sinoviales y condrocitos articulares, inducida por la síntesis de IL-1 ? y TNF-?. A su vez, la IL-6 estimula a nivel hepático la síntesis de proteínas de fase aguda como la PCR. En los grupos clínicos de mayor grado, la IL-4 vuelve a aumentar a los niveles basales e incluso en algunos casos aumentar al doble del basal, pero en forma asociada con niveles elevados de IL-6. Por otra parte, pareciera observarse que los niveles elevados de biomarcadores se presentan más asiduamente en la categoría de mayor índice clínico y que, generalmente, comprenden a animales de mayor edad con alteraciones de mayor cronicidad.Los resultados preliminares obtenidos por nuestro grupo de trabajo mostraron la ausencia de BMs en animales sanos o en períodos de remisión y su presencia en animales con OA activa. Sin embargo, nosotros hemos aportado el conocimiento que en animales con ausencia de síntomas clínicos es dable encontrar BMs elevados como indicador precoz de futuras OA.El TNF-? es el principal mediador de la respuesta aguda que desencadena el proceso osteoartrítico. El aumento del TNF-? se produce en los primeros momentos del proceso inflamatorio, por lo que es muy probable no encontrarlo en niveles elevados en el líquido sinovial. En nuestra experiencia, el TNF-? se encontró en poca cantidad de caballos tanto clínicamente sanos como en fase no activa de la OA. Por lo tanto, su valor radica en encontrarlo presente en niveles elevados para confirmar el proceso inflamatorio agudo. Pero a la inversa, su ausencia no tiene valor diagnóstico para determinar la no existencia de la enfermedad. En este punto también es importante mencionar la relación existente entre TNF-? e IL-1 ? ya que la liberación del TNF-? produce un aumento en la liberación de IL-1 ? y ésta tiene mayor capacidad de activación de los tipos celulares antes descriptos para la liberación de MMPs. La IL-1 ? se presentó elevada en los animales que se encontraban en fase activa de la OA como puede observarse en la sub clasificación ?b? de las distintas categorías del índice clínico presentado en esta tesis. A su vez se debe considerar que para reducir la liberación de MMPs, habría que inhibir también la IL-6 porque se plantea un efecto redundante en el cual ante la ausencia de una, la otra llevaría a cabo las acciones, por lo tanto si se inhibe solamente una de las dos, la actividad enzimática no se vería reducida. En equinos clínicamente sanos, pero con elevación de IL-6, dado que es una citoquina proinflamatoria se podría considerar que estos animales estaban en período de remisión o que ya existía una destrucción del cartílago articular. Las MMPs 2 y 9 se encuentran aumentadas en proceso patológicos osteoarticulares, superando las concentraciones de TIMs. Sin embargo, la MMP 2 no presenta valores tan elevados como la MMP 9 en estos cuadros y puede considerarse que presenta una acción homeostática al remover el cartílago anormal o envejecido. Por otro lado, la MMP 9 o bien no se puede detectar en condiciones normales o se encuentra en valores basales muy bajos, aumentando notablemente en cuadros de OA, artritis sépticas de evolución lenta y artritis reumatoidea en el ser humano. Por lo tanto, según el perfil de MMPs presentes, se puede inferir que se está ante un cuadro de remodelación normal mediada por la MMP 2 o ante una intensa degradación del cartílago con expresión aumentada de la MMP 9.En nuestros trabajos hemos observado valores bajos de MMP 2 y ausencia de MMP 9 en animales clínicamente sanos. En animales con OA en período activo, la MMP 2 aumentó significativamente (p<0.001) sobre los valores de referencia en equinos sanos. La MMP 9 aumentó levemente en equinos en fase de remisión no activa y en valores superiores en fase crónica de la enfermedad.En conclusión, los equinos que presentaron sintomatología clínica compatible con OA, tuvieron alteraciones en los valores de citoquinas, MMPs y perfiles proteómicos en líquido sinovial, mientras aquellos libres de síntomas, presentaron valores compatibles con articulaciones normales. Sin embargo, animales sin síntomas clínicos evidentes o subclínicos presentaron alteraciones en el perfil de citoquinas y MMPs como un signo precoz de alteración del medio intraarticular o como indicador del estadío de remisión clínica. El índice clínico presentó alta correlación con las modificaciones bioquímicas agudas, crónicas o recidivantes en equinos con OA o en equinos sin presencia de la enfermedad. Por lo tanto, este índice puede ser utilizado en el diagnóstico clínico de OA ya que los BMs sinoviales validan su evolución tanto positiva como negativa. De la misma manera, los BMs estudiados en esta experiencia pueden ser utilizados como métodos complementarios precoces en la detección, seguimiento y evolución terapéutica de OA

Descripción: El objetivo principal del presente trabajo fue demostrar que la cuenca alta del rio Limay está libre de los agentes etiológicos de Necrosis hematopoyética infecciosa (NHI), Septicemia hemorrágica viral (SHV) y Anemia infecciosa del salmón (AIS). Esta zona incluye el embalse Alicura que es donde se produce el mayor volumen de truchas de Argentina. Se realizaron 8 muestreos entre el 2006 y 2008 en los que se obtuvieron muestras de 1249 animales adultos correspondientes a peces silvestres y de cultivo de las especies de trucha arcoíris (Oncorhynchus mykiss), trucha marrón (Salmo trutta) y salmón del Atlántico (Salmo salar). También se realizaron controles sobre hatcheries que producían alevinos para ingresar al embalse. De cada ejemplar adulto se tomaron muestras de órganos y se procesaron histológicamente. Además, 20 ejemplares por muestreo fueron procesados mediante técnicas de PCR. No se hallaron lesiones histopatológicas compatibles con las enfermedades bajo estudio, ni se detectaron sus secuencias especificas. Asimismo, se realizó la evaluación de riesgo de introducción de dos de las enfermedades, SHV y AIS, a la zona. Se identificaron las potenciales vías de ingreso, alevinos y ovas, acuática, plantas procesadoras y transmisión mecánica. De cada una se definieron las vías secundarias y se cuantificó su probabilidad de ocurrencia. Los resultados demostraron que en las condiciones actuales, el riesgo de introducción de estos agentes es insignificante. Los camiones que transportan producto y equipos de pesca deportiva fueron las únicas vías que presentaron probabilidad > 0.

Descripción: La producción in vitro de embriones porcinos es poco eficiente, la misma abarca una serie de técnicas incluidas: la maduración in vitro del ovocito (MIV), la fecundación in vitro (FIV) y el cultivo embrionario (CE). Una correcta y completa maduración nuclear y citoplasmática de los ovocitos, son procesos fundamentales que deben lograrse para alcanzar un buen rendimiento. En los últimos años se ha alcanzado con éxito la maduración nuclear de los ovocitos, pero la falla en la maduración citoplasmática trae en consecuencia una baja tasa de formación de pronúcleo masculino (PNM) y la elevada polispérmia, lo que indica que las técnicas de MIV deben perfeccionarse. Para ello en esencial un estudio en profundidad de los requerimientos necesarios que presenta el complejo ovocito cumulus (COC) en el ambiente in vitro. La glucosa es un sustrato fundamental para la maduración del ovocito, las células del cumulus metabolizan gran parte de esta hexosa a través de diversas rutas metabólicas. Sin embargo, su exceso puede causar glicosilaciones de proteínas y lípidos en mayor proporción que las desarrolladas en situaciones fisiológicas, afectando así su funcionalidad. La glucosa ingresa a las células mediante transportadores específicos (GLUTs) entre los cuales, el GLUT 4 es regulado por la acción de la insulina. Las gonadotrofinas y la insulina son hormonas frecuentemente empleadas para la MIV, pero sus efectos individuales en dichos sistemas no han sido analizados en profundidad. El objetivo del trabajo fue estudiar la vía de incorporación de glucosa en el COC porcino durante la maduración in vitro y su posible regulación hormonal. Para ello se estudió el efecto de las gonadotrofinas (FSH y LH) y la insulina sobre la incorporación y consumo de glucosa en el COC porcino durante la MIV y su influencia en la maduración nuclear y citoplasmática del ovocito. También se determinó la presencia del glucotransportador 4 y su variación por acción de dichas hormonas. Los COCs maduraron bajo tres tratamientos: gonadotrofinas, insulina y ambas hormonas combinadas. Luego se evaluó el porcentaje de maduración nuclear, el consumo de glucosa y la incorporación de la misma utilizando un análogo no metabolizable (6-NBDG). Para analizar la maduración citoplasmática se realizó una FIV de los ovocitos madurados bajo los mismos tratamientos. La presencia del GLUT 4 se determinó mediante inmunocitoquímica sobre los COCs inmaduros y maduros. El porcentaje de ovocitos nuclearmente maduros aumentó significativamente al suministrar gonadotrofinas (LH y FSH) y gonadotrofinas combinadas con insulina al medio de maduración (p< 0,0001). Mientras que la insulina por sí sola no tuvo efecto sobre la maduración nuclear. Sin embargo, al analizar los efectos de dichas hormonas sobre la maduración citoplasmática, se observó un aumento significativo en los ovocitos madurados bajo influencia de insulina, de gonadotrofinas y de la combinación de ambas (p < 0,0001). Las gonadotrofinas mostraron un efecto positivo sobre el consumo de glucosa, sin embargo la insulina no tuvo efecto sobre esta (p< 0,0001). También se determinó la localización de GLUT 4 tanto en el ovocito como en el cumulus porcino, ambas hormonas mantuvieron la presencia de dicho transportador durante la maduración. Sin embargo ni la insulina, ni las gonadotrofinas ejercieron efecto sobre la incorporación de 6-NBDG al COC (p > 0,05). En conclusión, las gonadotrofinas y la insulina mostraron efectos diferentes durante la maduración, las primeras aumentan las tasas de maduración y el consumo de glucosa, pero no regulan la incorporación del azúcar. Mientras que la insulina ejerce efecto sobre la maduración citoplasmática actuando probablemente, como un factor trófico sin incidencia sobre el consumo ni la velocidad de incorporación de glucosa. La presencia del GLUT 4 persiste por efecto de ambas hormonas y posiblemente este efecto adquiera relevancia hacia estadios postcigóticos.

Descripción: La brucelosis porcina es una zoonosis de importancia para la salud pública y la economía agropecuaria, ya que provoca importantes pérdidas en la producción y restricciones sanitarias en el comercio interno y en las exportaciones. Por ello, es importante tener un diagnóstico rápido y confiable. Hasta la fecha, la prueba confirmatoria de brucelosis es el aislamiento de la bacteria, lo cual es difícil de implementar. Los test diagnósticos vigentes se basan en pruebas serológicas que son útiles para el diagnóstico de piaras pero no permiten obtener un diagnóstico fiable de los animales a nivel individual. Por esta razón, en este trabajo se desarrolló y evaluó un nuevo test diagnóstico. El mismo consiste en un inmunoensayo (iELISA) utilizando como antígeno una glicoproteína recombinante, la cual está formada por el polisacárido O del LPS de Yersinia enterocolitica O:9 (idéntico al polisacárido O de B. suis) unido covalentemente a la proteína transportadora AcrA derivada de Campylobacter jejuni. Este antígeno fue previamente caracterizado y validado para el diagnóstico de brucelosis en humanos y bovinos. A partir del mismo, se desarrolló y validó el glico-iELISA utilizando un panel de sueros positivos y negativos previamente caracterizados por las técnicas de aglutinación con antígeno bufferado en placa (BPA) y Ensayo de Polarización Fluorescente (FPA). Los resultados indican que el glico-iELISA permite discriminar claramente animales positivos de negativos, con un valor de cut-off de 0,56, resultando en una sensibilidad y especificidad diagnóstica de 100%. Además, se desarrolló como prueba de concepto, un inmunoensayo de fluorescencia basado en la unión covalente del mencionado antígeno a micropartículas magnéticas con un panel reducido de sueros. Esta plataforma presenta las ventajas de reducir los tiempos de incubación y los lavados son más eficientes utilizando racks magnéticos sin necesidad de centrifugar, entre otras. Ambos ensayos desarrollados permitieron discriminar animales positivos de negativos, incluso en piaras infectadas identificando puntualmente al animal infectado y diferenciándolo de los animales negativos expuestos.