Descripción: Meliacina (MA), un principio antiviral presente en las hojas de la planta Meliaazedarach L., es capaz de inhibir in-vitro la multiplicación de un amplio espectro de virus,algunos patógenos para el hombre como HSV-1 y el virus Junín (agente de la fiebrehemorrágica argentina), entre otros. El tratamiento con MA de células en cultivo antes de lainfección (pretratamiento) también desencadena un estado antiviral que afecta lamultiplicación de diferentes virus. En el presente trabajo de tesis los objetivos planteadosfueron, caracterizar el establecimiento del estado refractario a la infección viral en células Vero y determinar el mecanismo de acción de MA sobre el virus de la estomatitis vesicular (VSV), elegido como modelo de estudio. Los resultados obtenidos al utilizar inhibidores dediferentes funciones o procesos celulares permiten concluir que para inducir el estadoantiviral MA no requiere de los mecanismos de transcripción y traducción celulares activos;ni de la paiticipación de la PKR ni the ninguna otra quinasa o fosfatasa de Ser/Thr, mientrasque, tanto la actinomicina D como el vanadato y la tirfostina B46 potenciaron suestablecimiento. Al estudiar el efecto de MA sobre distintos pasos del ciclo de multiplicaciónde VSV se logró identificar al desnudamiento y al transporte de la glicoproteína G cómo losblancos de acción del pre y del post-tramiento, respectivamente. Considerando que, ambosprocesos tienen lugar en compartimentos celulares ácidos (endosomas y sistema de Golgi) yque hay una correlación entre la acción antiviral y la basificación que MA provoca en losendosomas, se plantea la hipótesis de que la acción antiviral de MA es una consecuenciadirecta de su efecto sobre la ATPasa vacuolar responsable de la acidificación de dichasorganelas.

Descripción: El objetivo del presente trabajo fue evaluar los posibles mecanismos involucrados en la disminución de la capacidad de acidificación tubular proximal en ratas seniles. Mediante experimentos de micropuntura determinamos la contribución del flujo de bicarbonato (JHCO3-) sensible a EIPA (inhibidor del intercambiador Na+/H+) y a bafilomicina (inhibidor de la V-H+ATPasa) en túbulo contorneado proximal (TCP) de ratas adultas jóvenes (3 meses) y seniles (18-20 meses). Por Western blot evaluamos, en vesículas de membrana luminal de TCP de animales adultos jóvenes y seniles, la abundancia de las isoformas NHE3 y NHE8 del intercambiador Na+/H+ y de la V-H+ATPasa. Realizamos experimentos de RT-PCR en homogenatos de corteza renal de ambos grupos experimentales para evaluar la expresión del ARNm de NHE3, NHE8 y H+ATPasa. Determinamos la concentración plasmática de la hormona paratiroidea (PTH) y la cantidad de AMPc presente en corteza renal de ambos grupos experimentales. Las ratas seniles poseen un JHCO3- 30% menor que los animales adultos jóvenes. En ratas jóvenes, EIPA reduce JHCO3- un 60% y bafilomicina un 30%, mientras que en animales seniles EIPA reduce JHCO3- aproximadamente un 60% y bafilomicina un 50%. La abundancia de la proteína y la expresión del ARNm de NHE3 y de la V-H+ATPasa fueron similares entre ambos grupos experimentales, en tanto que la cantidad de proteína y de ARNm de NHE8 fue menor en los animales seniles que en los adultos jóvenes. La concentración de PTH se encuentra aumentada en los animales seniles. Si bien la concentración de AMPc observada en la corteza renal de animales adultos jóvenes no fue significativamente diferente, en los animales seniles mostró una tendencia a aumentar. Estos resultados sugieren que el intercambiador Na+/H+ está afectado en la reabsorción de bicarbonato en el TCP de ratas seniles y que la isoforma, sensible a EIPA, responsable de la reducción del flujo de bicarbonato en estos animales es NHE8. Sin embargo, no podemos descartar mecanismos de regulación de la actividad de la V-H+ATPasa o de la isoforma NHE3 no relacionados con la transcripción o traducción de estas proteínas. Una de las alternativas para la regulación del intercambiador Na+/H+ sería la inhibición de la PTH sobre su actividad por medio de un mecanismo alternativo al mediado por AMPc.

Descripción: El presente estudio muestra adaptaciones morfológicas y bioquímicas de lasbranquias del cangrejo Chasmagnathus granulatus aclimatado a distintas salinidades (10, 30 y 45 %o). En las tres salinidades, el epitelio que tapiza la branquia 6 está formado porcélulas en pilar, con función de soporte estructural y por ionocítos, con extensodesarrollo de membrana plasmática basolateral y apical, y gran densidad mitocondrial. Los pliegues de membrana apical delimitan espacios subcuticulares que aumentan entamaño al incrementar la salinidad externa. Las uniones septadas extensas yramificadas en las branquias de cangrejos aclimatados a 10 %o, se acortan y sesimplifican en 30 y 45 %o, indicando un aumento en la permeabilidad paracelular ensituaciones de excreción iónica. La fosfatasa alcalina sensible a levamisol (másconcentrada en la fracción de membrana) se induce a 45 %o, lo que sugiere suparticipación en hipo-regulación y modularía de forma positiva a la Na+/K+-ATPasa (NKA). La actividad de anhidrasa carbónica (AC) y de NKA de branquias posterioresse induce a 10 %o, indicando su participación en la captación activa de iones. En mediosoligohalinos (<5 %o), existe una inducción aún mayor de AC y la absorción iónicadirigida por NKA se complementa con un mecanismo de captación activa yelectrogénica que involucra a la AC, V-H+-ATPasa y al intercambiador apical Cl-/ HCO3-. La branquia 5, además de células en pilar y células involucradas en elintercambio gaseoso, posee un tipo celular similar a las células que secretan H+, congran densidad mitocondrial, desarrollo de membrana apical y numerosas vesículas. Aunque aún no determinado, se presume que este tipo celular participa de procesos detransporte transepitelial, como por ejemplo excreción de amonio o equilibrio ácidobase. La actividad de NKA esta regulada por vías intracelulares antagónicas queinvolucran a las protein quinasas A y C (PKA, PKC) y proteín fosfatasas (PP). Laactivación de PKA determina una estimulación en NKA, obteniéndose lo contrario con PKC. La dopamina ejerce una función moduladora sobre la NKA, a través de la via de PKA y no de PKC. En condiciones basales, en las cuales no se hallaba activada la PKA,la unión dopamina-receptor provoca la activación de adenilato ciclasa vía proteina G, yse incrementan las concentraciones de AMPc. Éste, a su vez, activa la PKA, quefosforila (y activa) moléculas de NKA. Luego se produce la inactivación de la adenilatociclasa. Probablemente, la PKA fosforile al receptor y lo inactive (o le cambie suacoplamiento a una proteína G inhibitoria de la adenilato ciclasa), para dar lugar a otroreceptor de dopamina de menor afinidad y acoplado a una proteína Gi. La disminuciónen las concentraciones de AMPc, ocasiona una reducción en la actividad de PKA. Estopermitiría la liberación de la inhibición de PP, que mediante la remoción de fosfatos,devuelven a la NKA a las condiciones iniciales. Cuando la vía de PKA se hallapreviamente activada, la dopamina actúa como un modulador negativo, ya quedispara en forma directa la inhibición de la adenilato ciclasa, obteniéndose unareducción en la actividad de NKA.