Descripción: Los virus fitopatógenos producen alteraciones en el metabolismo y la fisiología de sus hospedantes, que usualmente son la causa de los síntomas de las infecciones. Estos efectos explican, en parte, la reducción del rendimiento de cultivos de importancia agronómica. Los mecanismos subyacentes a estas alteraciones están relacionados con cambios en los patrones de expresión génica, por lo tanto, su comprensión global es importante para proponer estrategias antivirales efectivas o perfeccionar las utilizadas en la actualidad. En trabajos previos el grupo ha demostrado que la proteína de cápside (CP, del inglés) del virus del mosaico de tabaco (TMV, del inglés) modula negativamente la vía de defensa mediada por el ácido salicílico y esta regulación es a través de la estabilización de las proteínas DELLAs. A fin de ampliar el conocimiento de los mecanismos implicados, se ha identificado una red de genes de defensa modulados negativamente por la expresión de la proteína CP. Se detectó, a su vez, un subconjunto de genes corregulados conteniendo motivos de unión a los factores TGAs y WRKYs, inducidos por el factor Non-Expressor of PR 1 (NPR1). El análisis de los genes de la red mostró que su expresión aumenta tempranamente en infecciones con el virus TMV-cg, pero disminuye en tiempos tardíos. Además se observó que los factores NPR1 y TGA10 estarían implicados en la modulación negativa mediada por la CP. Con el objetivo de estudiar el efecto de la proteína CP en el movimiento sistémico viral se realizaron infecciones con un virus defectivo en CP (TMVΔCP), incapaz de moverse sistémicamente en plantas de Nicotiana benthamiana y Nicotiana tabacum. Fue posible observar TMVΔCP en tejidos distales diferentes al sitio de infección inicial, a través de distintas condiciones ensayadas: silenciamiento de genes de la red, expresión transiente de la CP y estabilización de las proteínas DELLAs. Estos resultados nos permiten proponer un modelo global de la interacción del virus TMV con la planta. A tiempos tardíos de infección, CP estabilizaría las proteínas DELLA, las cuales a través de la interacción con el factor TGA10 en una vía dependiente de NPR1, impedirían la activación de genes de defensa, conllevando finalmente, a que el virus se mueva sistémicamente. En conclusión, la función de CP de TMV es requerida para el movimiento sistémico del virus y, a su vez, dicho rol es llevado a cabo a través de la modulación negativa del sistema inmune de la planta. Adicionalmente, los resultados observados sugieren que dicho evento estaría dado en el egreso del virus desde el floema hacia el tejido parenquimático de los órganos sistémicos.

Descripción: La presente Tesis describe el metabolismo de esteroides del testículo de Bufo arenamrm como así también algunos aspectos de la regulación del mismo. Durante el período no reproductivo, la biosíntesis de andrógenos (T y DHT) se realiza por una vía Δ5 que incluye al 5Diol como intermediario. P4 se transforma mayoritariamente en derivados reducidos como 5αP y 5αP3αol,20ona. La función biológica de estos esteroides reducidos en el testiculo de B. arenam se desconoce hasta el momento. En los animales capturados durante el período de reproducción, la capacidad biosintética del testículo se modifica. Este cambio va desde el predominio de esteroides con 19 átomos de carbono, que se observa en el período no reproductivo, hacia la formación de esteroides de 21 átomos de carbono. Así, se encuentra aumentada la transformación de P5 en P4 y la producción de 5αP; 5αP3α,20ona; 5αP3α,20(α/β)diol y un metabolito no caracterizado. La disminución de la síntesis de andrógenos, in vitro, se correlaciona con una disminución de la concentración plasmática de los mismos. Este cambio en el patrón esteroidogénico podría relacionarse con el final de la espermatogénesis (que depende de andrógenos) y el comienzo de la época de apareamiento. El mecanismo por el cual ocurren estos cambios consistiría, principalmente, en la reducción de la actividad de la enzima P450C17. Se confirma el fuerte efecto inhibitorio de CNK sobre la actividad de 3βHSD reportado previamente para interrenal de esta especie. SPNL ejerce un 50 % de inhibición de la actividad de C17-20 liasa, pero presenta un menor efecto sobre la hidroxilación en la posición C17. Finasteride es incapaz de inhibir a la 5αRed de sapo independientemente del sustrato utilizado. Esta enzima es de localización microsomal, tiene dependencia de NADPH como cofactor, presenta un Km menor para P4 que para T y un amplio rango de pH óptimo, entre 6 y 8. Las características mencionadas previamente son válidas tanto para la conversión de P4 como de T, lo que estaría sugiriendo la existencia de un único tipo enzimático para ambas reacciones. La falta de sensibilidad a Finasteride y el rango de pH óptimo de esta enzima se asemejan al tipo I caracterizado en mamíferos. Independientemente de la concentración utilizada, el tratamiento agudo con hCG in vitro no tiene efecto sobre la actividad de 5αRed. Sin embargo, el tratamiento crónico con hCG y FSH provoca una reducción de la actividad enzimática. Por otro lado, GnRH induce un aumento de la actividad de 5αRed, sólo en la menor concentración utilizada. Las actividades asociadas a la enzima P450c17 son inhibidas por el tratamiento crónico tanto con FSH como con GnRH en todas las concentraciones utilizadas y con hCG sólo en la mayor concentracion ensayada. Sin embargo, la actividad de 3βHSD no se ve influenciada por ninguno de estos tratamientos. GnRH, cuyos receptores testiculares se caracterizan en esta tesis, reduce la liberación de T inmunoreactiva tanto basal como estimulada por hCG. El efecto sobre la liberación basal de T solo se observa en la concentración más baja, al igual que lo que ocurre sobre la 5αRed. Por otro lado, el bloqueo de la acción de hCG sobre la secreción de andrógenos se ejerce en todas las concentraciones probadas. Estas diferencias sugieren que los mecanismos subyacentes para cada una de las inhibiciones provocadas por GnRH son diferentes.

Descripción: En los anfibios estudiados, tanto la esteroidogénesis como la espermiación pueden ser estimuladas por las distintas gonadotrofinas: la hormona luteinizante (LH), la gonadotrofina coriónica humana (hCG) y la hormona folículoestimulante (FSH). En Rhinella arenarum, la acción de hCG sobre la espermiación no requiere de la biosíntesis de esteroides aunque para la regulación de ambos procesos se requeriría la activación de la proteína quinasa A (PKA). Uno de los objetivos de esta tesis fue estudiar la participación de la PKA y de la proteína quinasa C (PKC) en la acción de las gonadotrofinas sobre la proteína StAR (Steroidogenic Acute Regulator protein), considerada en mamíferos el paso limitante y hormonalmente regulable de la esteroidogénesis, y sobre el proceso de espermiación. Para el estudio de la regulación de la esteroidogénesis, primero se llevó a cabo la caracterización molecular del ADN copia (ADNc) de StAR. Los resultados obtenidos mostraron no solo un alto porcentaje de similitud de la secuencia de StAR con la proteína de otros vertebrados sino también la conservación de los sitios consenso para la fosforilación por PKA descriptos en mamíferos. Esto último resultó consistente con el aumento de la expresión del ARN mensajero ante los estímulos de hCG o de activadores de PKA, aumentos que no se observaron en la expresión de la proteína. Además, dado que en esta especie los glucocorticoides disminuyen la síntesis de andrógenos, procedimos al análisis del efecto de los mismos sobre la proteína StAR y sobre la producción de esteroides. No se observaron variaciones en la expresión basal de la proteína ni en la estimulada por hCG, luego del tratamiento con distintas dosis de corticosterona o dexametasona. Esto permite inferir que la disminución de la síntesis de andrógenos por efecto de los glucocorticoides no está relacionada con la proteína StAR. Para el estudio de la espermiación, proceso dependiente de gonadotrofinas, se analizaron tanto la función no canónica de la bomba Na+/K+ como la activación de las vías de PKA y PKC. los resultados obtenidos refuerzan la propuesta de la participación de la forma no canónica de la bomba Na+/K+ y del rol de PKA en el proceso de espermiación pero no de PKC. Por otra parte, sólo la activación de PKA afectó significativamente la producción de testosterona, confirmando que la esteroidogénesis y la espermiación se regulan por distintos mecanismos.

Descripción: La presente tesis describe los estudios realizados sobre la actividad de la enzima 3β-hidroxiesteroide deshidrogenasa/isomerasa (3βHSD/I), así como su participación en la regulación de la espermiación inducida por hCG en testículos de Bufo arenarum. La enzima 3βHSD/I se localiza en las fracciones mitocondrial y microsomal. Ambas localizaciones muestran diferente especificidad de sustrato, dehidroepiandrosterona (DHE) es el sustrato preferido de la enzima microsomal en tanto que la mitocondrial utiliza solamente pregnenolona. Esta doble localización establecería una compartimentalización de las dos vías de síntesis de esteroides previamente descriptas en B. arenarum: la via Δ4 en las mitocondrias y la via Δ5 en los microsomas. La actividad de ambas fracciones subcelulares es mayor en el período reproductivo que en el no reproductivo. Cuando se incluye DHE en el análisis cinético de la transformación de pregnenolona, se observa una importante modificación de la Vmax, en tanto que el Km permanece constante. Estos resultados indican que DHE se comporta como un inhibidor no competitivo de la conversión de pregnenolona. Los valores de Km y Ki sugieren la presencia de dos sitios de unión. Por otra parte, cuando se utiliza pregnenolona como inhibidor de la transformación de DHE, solo se modifica ligeramente el valor de Km, en tanto que la Vmáx se mantiene constante. Esto indica que pregnenolona se comporta como un inhibidor competitivo. Los valores del coeficiente de Hill para la transformación de DHE y pregnenolona son, respectivamente, 1.04 and 1.01. Estos estudios sugieren que en esta especie la biosíntesis de andrógenos y progesterona es catalizada por sitios activos diferentes. En esta tesis también se ha utilizado un sistema de espermiación in vitro, con el objeto de identificar, en el sapo, los posibles mediadores esteroideos de la espermiación. La espemiación fue inducida con hCG, utilizándose además distintos inhibidores de la esteroidogénesis. Cianocetona, inhibidor de la síntesis de 3-oxo-4-ene esteroides, no afectó la espermiación inducida por hCG aún cuando la síntesis de aquellos esteroides y sus derivados reducidos disminuyó en más de un 95%. Aminoglutetimida, usada en una concentración que bloqueó la síntesis de esteroides, tampoco afectó la espermiación estimulada por la gonadotrofina. Resultados similares se obtuvieron con spironolactona, inhibidor de la enzima 17α-hidroxilasa/17-20 liasa. Como conclusión, puede decirse que en B. arenarum, la espermiación inducida por hCG no está mediada por la síntesis de esteroides. Cuando el ensayo de espermiación se realizó utilizando FSH Humana recombinante (FSHrh), se observó tanto inducción de la espermiación como aumento en la síntesis de esteroides. La capacidad esteroidogénica de las células de Leydig ha sido establecida desde hace tiempo, sin embargo, la potencialidad esteroidogénica de las células de Sertoli es aún controversial. En este trabajo se informa, también, la separación de dos poblaciones celulares que responden diferencialmente a las gonadotrofinas humanas. Las fracciones con una densidad de 1.05 g/ml respondieron a hCG con un aumento en la producción de testosterona (T). Sin embargo no respondieron a FSHrh con un aumento de andrógenos ni de cAMP. La formación de cAMP fue estimulada en las fracciones con una densidad de 1.038 g/ml. Estas también respondieron a FSHrh con un aumento en la síntesis de T. Cuando FSHrh se ensayó sobre fragmentos de testículo, se observó también un aumento dosis-dependiente de la secreción de T. El método utilizado permitió la separación de dos poblaciones de células con características similares a las células de Leydig y Sertoli de cerdo y trucha. Sin embargo, la fracción con una densidad semejante a las células de Sertoli, respondió a FSHrh no solo con un aumento en la formación de cAMP, sino también con un incremento en T. Se podría concluir que el testículo de B. arenarum tendría células de Sertoli con capacidad esteroidogénica, como fuera descripto para otras especies, y que la espermiación podría ser inducida por las gonadotrofinas directamente sobre las células de Sertoli.

Descripción: Los machos de anfibios anuros tienen variaciones estacionales en losandrógenos y los estrógenos plasmáticos, aunque poco se conoce acerca delos cambios estacionales en las gonadotrofinas. En Rhinella arenarum, losandrógenos plasmáticos disminuyen durante el período reproductivo y losestrógenos aumentan. Los objetivos de esta tesis fueron: caracterizar lahistología de los órganos involucrados y analizar la localización de factorescomo GnRH y Kispeptinas en el eje hipotálamo-hipófisis-gonadal;caracterizar la secuencia del ADNc de LHβ y FSHβ de la hipófisis del sapo;estudiar los cambios estacionales en los dos mensajeros por RT-PCR entiempo real, relacionando dichos cambios con la concentración de esteroidessexuales y la espermatogénesis y estudiar el rol de dichos esteroides en laregulación de las gonadotrofinas. El análisis de los marcos de lecturaabiertos de los ADNc de LHβ y FSHβ indicó que las proteínas tienen,respectivamente, 113 y 104 aminoácidos. Los alineamientos múltiples de lasecuencia de aminoácidos de ambas subunidades β sugieren que lostetrápodos estudiados tienen 12 cisteínas conservadas y uno (LH) y dos (FSH) sitios de N-glicosilación. LHβ de sapo es más cercana a los teleósteosque a los mamíferos y las aves mientras que FSHβ es más parecida a losmamíferos. La expresión del ARNm de LHβ y FSHβ tiene cambiosestacionales, con un perfil de expresión opuesto a la concentración deandrógenos y el tratamiento con andrógenos durante el períodoreproductivo inhibe la expresión de ARNm LHβ. En conclusión, existe unabuena correlación entre los andrógenos y estrógenos plasmáticos y laexpresión de LHβ, y entre FSHβ y la espermatogénesis.

Descripción: Los cuadros de inflamación e infección del aparato reproductor masculino constituyen una de las principales causas de infertilidad. La orquitis autoinmune experimental (OAE) fue inducida por inmunización activa, en la rata, con antígenos espermáticos y adyuvantes y constituye un modelo útil para estudiar inflamación testicular y autoinmunidad específica de órgano. La OAE se caracteriza por la presencia de un infiltrado linfomonocitario intersticial y lesión de los túbulos seminíferos con células germinales que sufren apoptosis y descamación. Nos propusimos estudiar, en la OAE, las principales quemoquinas y moléculas de adhesión involucradas en la migración y extravasación de linfomonocitos. Mediante técnicas de ELISA se detectó, en las ratas con orquitis, respecto de controles, un aumento en la concentración testicular de MIP-1? durante el período de inmunización mientras que MCP-1 aumentó durante el desarrollo completo del cuadro incluyendo el período de lesión severa. Se observó un aumento en el número de linfomonocitos testiculares que expresan los receptores específicos de dichas quemoquinas, CCR2 y CCR5. Por citometría de flujo, se detectó una disminución en el número linfomonocitos CD44+ en sangre periférica, simultánea a un aumento de dichas células en el intersticio testicular. A nivel del endotelio testicular, aumentó el número de células PECAM-1+ que expresan VCAM-1. Los resultados sugieren que las quemoquinas y moléculas de adhesión estudiadas constituyen un componente del circuito de amplificación de la respuesta inmune, esencial para el reclutamiento linfomonocitario y la inducción de una orquitis autoinmune severa, en el contexto de una inflamación crónica.

Descripción: Los anfibios anuros tienen variaciones estacionales en los andrógenos y glucocorticoides (GCs) plasmáticos. En Rhinella arenarum la concentración plasmática de GCs aumenta durante el período reproductivo provocando una disminución en la síntesis de andrógenos vía un receptor citosólico (GR). El objetivo de esta tesis fue evaluar las variaciones estacionales en la sensibilidad testicular a la acción de los GCs. Para ello se estudiaron los cambios en la cantidad de GR así como el efecto de los andrógenos, los GCs y la melatonina en la regulación de dichos cambios. Los estudios de la interrelación entre la glándula interrenal y el testículo indicaron que la cantidad de proteína GR testicular varía estacionalmente y que los GCs regulan de manera positiva su propio receptor mientras que melatonina disminuye la unión del GC al GR y antagoniza el efecto de los GCs. En cambio, melatonina no disminuye la síntesis de andrógenos de manera directa. En la glándula interrenal, una concentración de andrógenos alta (período prerreproductivo) disminuye la síntesis de GCs. El estudio histológico de la glándula mostró que hay dos tipos de células esteroidogénicas que podrían producir distinta cantidad de GCs y que ambas presentan una regionalización antero-posterior. Se infiere que las variaciones estacionales de andrógenos y GCs están determinadas, en parte, por la regulación recíproca entre ambas hormonas y que la sensibilidad del testículo a la acción de los GCs, cuando se considera la cantidad de GR, varía de manera estacional y está regulada por los mismos GCs y la melatonina.

Descripción: El órgano de Bidder (BO) es una estructura característica de los bufónidos,entre ellos, Rhinella arenarum. Este órgano expresa varias enzimasesteroidogénicas, incluyendo la aromatasa, responsable de la síntesis deestrógenos. En algunos anfibios se propuso que el estradiol (E2) tiene unefecto negativo directo sobre la función testicular, más allá de la regulaciónde las gonadotrofinas hipofisarias. En este marco, y utilizando como modeloexperimental machos de R. arenarum, los objetivos de esta tesis fueron:analizar la capacidad del BO de producir E2 a partir de sustratos endógenos,medir las variaciones estacionales en la concentración plasmática de E2,determinar la presencia del receptor testicular de estrógenos (ER) y analizarel efecto del E2, a lo largo del año, sobre las enzimas esteroidogénicascitocromo P450 17α-hidroxilasa-C17–20 liasa (CypP450c17) y 3β-hidroxiesteroide deshidrogenasa/ isomerasa (3β-HSD/I), sobre la apoptosisy la proliferación. Los resultados obtenidos muestran que los niveles de E2plasmático son significativamente menores durante el período prereproductivo (PreR) y que el BO es una de las principales fuentes de E2. Además, se determinó la presencia de ER en testículo. El tratamiento con E2no modificó ni la actividad ni la expresión del CypP450c17, mientras que sedetectó una inhibición significativa de la actividad de 3β-HSD/I durante elperíodo post reproductivo (PostR). Por otra parte, se observó una elevadatasa de proliferación espermatogonial durante el período reproductivo (R) yuna marcada apoptosis durante el PostR. El tratamiento con E2 estimuló laapoptosis solo durante el período R y no se observó efecto en laproliferación de la línea espermatogénica. En conclusión, esta tesis describelas variaciones estacionales en el E2 plasmático, la apoptosis y laproliferación testicular, y demuestra que el E2 regula la esteroidogénesistesticular y la espermatogénesis.

Descripción: A pesar de que el testículo es un “órgano inmunoprivilegiado”, pueden generarse reacciones inflamatorias que alteran su función y pueden inducir infertilidad. Un modelo útil para estudiar autoinmunidad específica de órgano e inflamación testicular es la orquitis autoinmune experimental (OAE) que se caracteriza por la presencia de un infiltrado linfomonocitario intersticial y daño de las células germinales que sufren apoptosis y descamación. Nuestro objetivo fue estudiar las características fenotípicas y funcionales de las células presentadoras de antígeno (CPA) en el testículo normal y durante la OAE. En este cuadro, se observó un incremento en el número de macrófagos (residentes y no residentes) y de células dendríticas en el intersticio testicular. Mediante experimentos in vivo, utilizando liposomas conteniendo clodronato, demostramos que los macrófagos desempeñan un importante papel patogénico en la OAE. Detectamos que los macrófagos testiculares secretan un mayor nivel de citoquinas pro-inflamatorias (IL-6, IFNγ y TNFα) durante la orquitis. Utilizando ratones deficientes en la expresión de TNFR1, demostramos, in vivo, que esta molécula está involucrada en el desarrollo de la OAE. Observamos que la IL-6 es capaz de inducir, in vitro, la apoptosis de las células germinales y detectamos, in vivo, un aumento significativo en el número de células germinales IL6R+ en las ratas con orquitis. A su vez, observamos variaciones en la expresión de moléculas del CMH II y co-estimulatorias (CD80 y CD86) en las CPA testiculares. Concluímos que las CPA testiculares están fuertemente involucradas en el desarrollo de la OAE, a través de la secreción de citoquinas pro-inflamatorias y de la presentación antigénica a los linfocitos T.

Descripción: La melatonina, hormona secretada por la glándula pineal, regula la función testicular a través del eje hipotálamo-hipofisario y mediante acciones directas ejercidas en las células somáticas del testículo. En este trabajo de Tesis Doctoral hemos evaluado biopsias testiculares humanas con y sin alteraciones histológicas evidentes. En comparación con testículos sin cambios morfológicos significativos, las gónadas con alteraciones en la espermatogénesis presentaron un aumento en el número de macrófagos, en los niveles de marcadores inflamatorios, en el grado de peroxidación lipídica y en la expresión de enzimas anti-oxidantes, una mayor desorganización y densidad de las fibras de colágeno de la pared tubular y una menor concentración de melatonina. Al evaluar el impacto de la suplementación oral diaria con 3 mg de melatonina se observó un aumento en los niveles testiculares de esta indolamina, una disminución en la incidencia de procesos inflamatorios y de estrés oxidativo a nivel gonadal, y una mejora en el aspecto de la pared tubular. Se realizaron también estudios funcionales a fin de establecer los efectos de la melatonina sobre las células peritubulares de la pared de los túbulos seminíferos. Para ello, se aislaron y caracterizaron cultivos primarios de células peritubulares provenientes de testículos de hámsteres dorados inmaduros. En dichos cultivos, la melatonina disminuyó la expresión de marcadores inflamatorios y aumentó la expresión del factor neurotrófico derivado de la glía (GDNF), de la enzima ciclooxigenasa 2 (COX2), de componentes de la matriz extracelular y mejoró su capacidad contráctil. En resumen, la melatonina ejercería acciones beneficiosas sobre el estado inflamatorio y oxidativo testicular a través, entre otros, de la modulación de la actividad de las células peritubulares.

Descripción: La melatonina, hormona secretada por la glándula pineal, modula los ritmosbiológicos diarios y los ciclos de sueño/vigilia. A través de su acción regulatoriasobre la producción y secreción de hormonas hipotalámicas e hipofisarias,participa también en la modulación de la actividad sexual en especies con ciclosreproductivos anuales controlados por el fotoperíodo. En este Trabajo de Tesis Doctoral se investigaron dos mecanismos de acción diferenciales de la melatoninaen el testículo: su rol como hormona y su rol como agente anti/pro oxidante. Los estudios realizados permitieron establecer: a) las señales intracelularesasociadas al rol inhibitorio ejercido por el sistema melatonina/CRH sobre laregulación de la esteroidogénesis en células de Leydig del hámster Dorado, b) laconcentración testicular de melatonina y la expresión de los principalescomponentes de la cascada de señalización del sistema melatonina/CRH en eltestículo de pacientes que padecen infertilidad idiopática, y c) la acción regulatoriaejercida por melatonina sobre la proliferación, estado oxidativo y capacidadsecretoria en macrófagos y mastocitos testiculares. La melatonina desempeñaría un rol clave en la modulación de laesteroidogénesis testicular en el hámster. En el testículo humano patológico,ejercería además acciones regulatorias sobre la población local de macrófagos ymastocitos.

Descripción: La fecundación involucra eventos de adhesión celular ovocitoespermatozoide dependientes de Ca2+. Cadherina epitelial (cadE) es una glicoproteína de membrana de 120 KDa, con 5 dominios extracelulares, 1 transmembrana y 1 citoplasmático. CadE se asocia al citoesqueleto de actina a través de moléculas adaptadoras como β-catenina y está involucrada en la adhesión celular dependiente de Ca2+. CadE participa en el desarrollo embrionario, la organogénesis y mantenimiento de tejidos y la tumorigénesis. El objetivo de este proyecto fue evaluar la expresión de cadE en tejidos reproductivos, su presencia y localización en ovocitos y espermatozoides y su participación en la fecundación. Se emplearon 2 modelos: humano y murino. Los estudios describen 1) la expresión del ARNm de cadE en testículo y epidídimo y 2) la presencia de la proteína en extractos de epidídimo y su localización en las células epiteliales 3) la presencia de cadE en estructuras membranosas del plasma seminal humano y del fluido epididimario murino 4) la presencia, formas proteicas y localización de cadE, β-catenina y actina en espermatozoides murinos epididimarios y humanos eyaculados 5) la localización de cadE en espermatozoides capacitados y reaccionados 6) la localización de cadE en ovocitos y formas proteicas en ovocitos murinos 7) la capacidad de anticuerpos bloqueantes de la función adhesiva de cadE de inhibir la interacción espermatozoide-ovocito 8) la evaluación de la presencia de cadE en pacientes en tratamiento por infertilidad e identificación de alteraciones en algunos casos. Este es el primer estudio que aborda de manera exhaustiva la detección de cadE en las gametas humanas y murinas y muestra evidencias de su rol en la fecundación.

Descripción: Las prostaglandinas son biomoléculas derivadas del ácido araquidónico por acción de la enzima ciclooxigenasa, que participan en el control de procesos fisio-patológicos en reproducción. No obstante, se desconoce aún el papel que desempeñarían en el testículo. En este Trabajo de Tesis Doctoral se investigaron los mecanismos regulatorios de la síntesis de prostaglandinas en el testículo, enfatizando en el análisis de aquellos factores locales involucrados en la modulación de la expresión de ciclooxigenasa 2 en células de Leydig y Sertoli. Los estudios realizados han permitido establecer: a) la participación de hormonas hipofisarias (LH, FSH y PRL) y andrógenos (testosterona, DHT) en la regulación de la expresión de ciclooxigenasa 2 y la síntesis de prostaglandinas en cultivos primarios de células de Leydig y Sertoli de hámsteres Dorados, b) la existencia de análogos moleculares de carga de la PRL hipofisaria que presentan bioactividades diferenciales sobre la expresión de ciclooxigenasa 2 en testículos de hámsteres, y c) el rol estimulatorio ejercido por IL-1β sobre la producción de prostaglandinas en el testículo de pacientes que padecen infertilidad idiopática. Así, las prostaglandinas desempeñarían un rol clave en la regulación de la actividad testicular en situaciones fisiológicas en el hámster, así como también durante el desarrollo y/o mantenimiento de ciertas disfunciones gonadales que conducen a una espermatogénesis alterada en el testículo humano.

Descripción: Este trabajo de Tesis se basa en una completa descripción del aparato genital masculino del sapo Bufo arenarum, desarrollando un modelo que permite el estudio dinámico de los procesos fisiológicos involucrados en la espermiación; a la vez que posibilita el análisis de los neuropéptidos expresados en el testículo y el espermatozoide del sapo. La expresión de neuropéptidos en las gónadas representa una forma posible de comunicación intercelular. La inervación peptidérgica presente en el testículo sugiere una regulación neural que, operando en coordinación con la conocida regulación hormonal, interactuaría con mecanismos de control autócrinos y parácrinos mediados por sustancias producidas localmente. En este sentido, la localización de los neuropéptidos en los espermatozoides sugiere distintos roles en la función espermática y su estudio permitirá entonces, profundizar el conocimiento del proceso de la fertilización.

Descripción: En el presente estudio se ha determinado que, en las zonas muestreadas en Argentina, la anguila criolla, S. marmoratus, es una especie protogínica diándrica,presentando dos tipos de machos: los primarios, que nacen como tales y los secundariosque provienen de la reversión sexual de hembras funcionales. La población estudiadapresentó un 20% de machos primarios y un 80% de secundarios. Utilizando técnicas para microscopía óptica y electrónica, se caracterizaronanatómica e histológicamente las gónadas de ambos tipos de machos y de losrevertantes así como la espermatogénesis y el ciclo testicular anual. Ambos machosposeen testículos de tipo lobular irrestricto y la espermatogénesis se desarrolla a lo largodel año. Las gónadas poseen un compartimiento germinal, organizado en lóbulos dondela diferenciación celular es sincrónica dentro de cada espermatocisto. En elcompartimiento intersticial se observan células de Leydig, células mioides, fibrascolágenas y vasos sanguíneos. El ciclo anual fue dividido en 5 clases reproductivas: regresada, maduracióntemprana, maduración media, maduración final y en regresión, basándose en loscambios del epitelio germinal y en la preponderancia de los distintos tipos de célulasgerminales. Se observó la presencia de un epitelio germinal permanente y no se hanencontrado diferencias entre ambos tipos de machos. Se identificaron las formas de GnRH en cerebro (salmón y chicken-II). Se indujoartificialmente la esperrniación utilizando un análogo superactivo de GnRH y unantagonista dopaminérgico, obteniéndose un 100% de liberación de esperma a la tercerasemana de tratamiento. Esto se corroboró a nivel histológico. Se observó un aumentosignificativo de los niveles de testosterona y estradiol en sangre respecto de los animalescontrol.