Descripción: En el presente trabajo se estudió la aplicación de enzimas aisladas y célulasenteras de microorganismos en la síntesis y transformación de compuestos orgánicos. Se estudió la actividad de lipasas comerciales y una proveniente de un agroresiduo,en la síntesis de ésteres de ácido 2-oxoglutárico. Los resultados obtenidospermitieron no sólo la preparación de seis productos novedosos sino también otorgarleun valor y utilidad a un agro-residuo ampliamente disponible. La aplicación de lipasas en la reacción de acilación de hidrocortisona y en ladesacetilación de su derivado peracetilado, permitió la preparación de nueve derivados,ocho de los cuales resultaron novedosos. Además se estudió una lipasa heteróloga del hongo Rhizopus oryzae en laacetilación del esteroide cortexolona. Se evaluó el biocatalizador en su forma nativa einmovilizado sobre diversos soportes. Se aplicó un modelo matemático con el objetivode lograr una mejor optimización de los parámetros de reacción. Finalmente se describió la aplicación de células enteras de diferentes cepasfúngicas del Orden Mucorales en la biotransformación de la drospirenona, progestina deorigen sintético usada en terapia hormonal combinada. A través de la biotransformaciónse obtuvieron cuatro productos, tres de ellos novedosos y uno mayoritario.

Descripción: Los withanólidos son un grupo de esteroides naturales de 28 carbonos aislados de plantas pertenecientes al género Solanacea. En particular un pequeño grupo de withanólidos con un anillo D aromático de seis miembros se aisló de la planta Salpichroa origanifolia. Estos compuestos presentan actividad antialimentaria y antiproliferativa. Para determinar la relevancia del anillo D aromático en las propiedades biológicas de los salpichrólidos, en este trabajo de Tesis se sintetizaron ocho esteroides con anillo D aromático, análogos de los salpichrólidos con cadena lateral simplificada. Se describe una nueva metodología para la preparación de esteroides con anillo D aromático, la cual involucra la abstracción de HBr a partir de un homoesteroide dibromado por tratamiento con DABCO. Todos los nuevos compuestos fueron caracterizados usando técnicas de RMN 2D y espectrometría de masas. Se determinaron las actividades antiestrogénica y antifúngica de los análogos sintéticos y de tres salpichrólidos naturales.

Descripción: En esta tesis se investigó la influencia de la conformación global del esqueleto esteroidal sobre la actividad de los esteroides neuroactivos y de los glucocorticoides. Por un lado, se diseñaron y sintetizaron tres 1,11-epoxiesteroides y un 11,19-epoxiesteroide, análogos de esteroides neuroactivos cuya conformación está restringida por la presencia del puente epóxido. Por otra parte, se estudió la actividad glucocorticoide y las bases moleculares de acción de dos análogos rígidos: 21-hidroxi-6,19-epoxiprogesterona (21OH-6,19OP), y su 21-hemisuccinato derivado, 21-hemisuccinoiloxi-6,19-epoxiprogesterona (21HS-6,19OP). La actividad transcripcional de ambos compuestos se determinó utilizando el gen reportero MMTV-LUC y evaluando la capacidad de los mismos de inhibir la actividad del factor de transcripción NFκB. También se estudió el efecto apoptótico de estos compuestos en los fibroblastos de ratón L929. El conjunto de estos resultados muestra que estos análogos rígidos poseen potenciales aplicaciones como drogas glucocorticoides. Finalmente, utilizando la herramienta computacional denominada simulación por dinámica molecular se investigaron las bases moleculares de acción de 21OH- 6,19OP y 21HS-6,19OP. Para ello se determinó el comportamiento dinámico del dominio de unión a ligando del receptor de glucocorticoides unido a cada uno de estos análogos rígidos. Los resultados muestran que cambios en regiones claves del receptor podrían ser utilizadas para explicar los resultados experimentales obtenidos.

Descripción: Una alternativa para resolver los problemas que enfrenta la terapia antiviral actual, como laaparición de infecciones emergentes y mutantes resistentes a las drogas de uso clínico, es encontrar compuestos que interfieran con factores celulares esenciales para la propagación viral, pero prescindibles para la viabilidad celular. De este modo, también se obtendrían antivirales con mayor espectro de acción. Por otro lado, muchos virus provocan inmunopatologías, siendo necesaria la administración de glucocorticoides junto con el antiviral, aunque esto está contraindicado para las infecciones herpéticas porque produce la reactivación del virus. Por esta razón, resultaría de gran utilidad descubrir antivirales que posean además propiedades inmunomoduladoras. En este sentido, los esteroides representan una opción diferente a las estructuras químicas de los antivirales tradicionales, que son normalmente análogos de nucleosidos. Los objetivos de esta tesis fueron sintetizar nuevos compuestos esteroidales polifuncionalizados, estudiar sus propiedades antivirales contra diferentes virus y evaluar la actividad inmunomoduladora de aquellos más efectivos. Los estudios biológicos efectuados sobre dos series de esteroides, que fueron sintetizadas mediante la reacción multicomponente de Ugi, permitieron identificar un compuesto con actividad contra herpes virus simplex tipo 1, y otro de acción más amplia, activo contra los virus de la estomatitis vesicular, herpes y adeno. Ambos alteraron el transporte intracelular y el patrón de glicosilación de glicoproteínas virales. Asimismo, ambos esteroides modularon la producción de citoquinas sin provocar la activación del receptor de glucocorticoides ni del factor de transcripción NF-kappaB. En conclusión, las bioactividades descriptas convierten a los dos esteroides sintéticos en buenos candidatos para tratar aquellas inmunopatologias virales sin terapia disponible, o como alternativa para inhibir las cepas resistentes a aciclovir.

Descripción: Kisspeptina, GnRH y GABA juegan un papel fundamental en la regulación del ejegonadotrófico, si bien la interacción entre ellos está poco caracterizada. Estudiosprevios en ratones carentes del RGABAB funcional (GABAB1KO) sugerían alteracionesreproductivas, principalmente en la hembra. Nuestra hipótesis fue que GABA, a través de sus RGABAB, interviene en la regulaciónde la reproducción impactando sobre los sistemas GnRH/kisspeptina en el cerebro,durante el desarrollo y en la adultez. Demostramos por primera vez la co‐localización del RGABAB1 en neuronas Kiss1 del AVPV/PeN y ARC. La falta de un RGABAB funcional impacta diferencialmente según laedad evaluada. En ratones de 4 días de edad los cambios se observan en el hipotálamomedio basal, mientras que en ratones adultos aparecen en el hipotálamo anterior. Sinembargo, no se deberían a alteraciones hipotalámicas de Kiss1 ni a los niveles deesteroides circulantes. Además, los ratones GABAB1KO adultos presentaron unaumento drástico de Kiss1 en áreas extra hipotalámicas (MeA, BNST y Septum)relacionadas con la reproducción y la conducta sexual. En conclusión, GABA, a través de sus RGABAB, interactuaría con GnRH y kisspeptinaen la regulación del eje gonadotrófico de manera diferencial durante el desarrollo yentre los sexos, alterando la reproducción.

Descripción: En este trabajo de Tesis se describe la síntesis y caracterización de familias de compuestos esteroidales y no esteroidales y la evaluación de su acción biológica como moduladores de la actividad androgénica, tanto frente a la enzima óxido-reductasa 17α-hidroxilasa/17,20-liasa (CYP17), como frente al receptor de andrógenos (AR). La inhibición de estas enzimas es un objetivo en la búsqueda de nuevos tratamientos antitumorales. La reacción utilizada como clave sintética fue la reacción multicomponente de Ugi, que involucra cuatro reactivos diferentes: aldehído, ácido carboxílico, isonitrilo y amina, en un único paso de reacción para generar familias de compuestos con variedad estructural. Esta reacción, no catalizada, es una vía sintética suave muy efectiva en la construcción de bibliotecas de compuestos, con alta eficiencia atómica ya que solo se pierde una molécula de agua y el rendimiento químico en general es alto. En la síntesis de las familias de compuestos esteroidales, se utilizaron compuestos comerciales los cuales fueron adecuadamente funcionalizados con grupos apropiados para ser utilizados como uno de los componentes de la reacción de Ugi. Los aductos se transformaron mediante reacciones post-condensación, para de esta manera generar estructuras heterocíclicas unidas al anillo D del esqueleto esteroidal. En este caso se estudió la influencia de la estructura esteroidal en la esteroselectividad de la reacción multicomponente. En la síntesis de familias de compuestos no esteroidales, se desarrolló una estrategia sintética para lograr compuestos que actúen estructuralmente como miméticos de esteroides. Se partió de compuestos aromáticos, se utilizaron reacciones multicomponentes, postcondensación y reacciones de cicloadición para generar diversidad estructural. La actividad biológica se evaluó cuantificando la actividad de CYP17 de rata en presencia y ausencia de inhibidor, mediante el uso de la técnica de HPLC encontrándose valores similares a los inhibidores ya descriptos para esta enzima. Por otro lado, se evalúo el comportamiento de los compuestos sobre la actividad transcripcional del AR, encontrándose actividad inhibitoria dual para algunos compuestos. Por último, se realizó un estudio complementario por métodos computacionales (docking y dinámica molecular) sobre el comportamiento de varios de los compuestos sintetizados frente a la enzima CYP17 y el AR, con el objeto de establecer correlaciones de estructura-actividad.

Descripción: Existen numerosas evidencias en la literatura que demuestran que laexposición a situaciones de estrés durante el período de la gestacion producealteraciones a largo plazo en los niveles de hormonas sexuales y en eldesarrollo del sistema dopaminérgico de la descendencia. En nuestrolaboratorio, empleando un modelo en la rata, observamos que dichasalteraciones en el sistema dopaminérgico variaban según si éstas se evaluabanantes o después de la adolescencia. Por otra parte, en el ser humano se hademostrado ampliamente que varias psicopatologías tales como laesquizofrenia, adicciones a sustancias de abuso y depresión se desencadenandurante o hacia el final de la adolescencia. Definida como el período detransición entre la niñez y la vida adulta, la adolescencia es una etapa dondelas hormonas gonadales ejercen sus efectos sobre los tejidos periféricosinduciendo la aparición de los caracteres sexuales secundarios, pero tambiénactúan centralmente influyendo sobre el remodelado y desarrollo final delcerebro. Teniendo en cuenta estos antecedentes hipotetizamos que el estrés prenatalestaría interfiriendo con el desarrollo del eje hipotálamo-hipófiso-gonadal, a lavez que modificaría la maduración del sistema dopaminérgico mesocórticolímbicodeviniéndolo vulnerable a los cambios hormonales que ocurren durantela adolescencia. En este contexto, el objetivo general en el que se encuadraeste trabajo de tesis consiste en avanzar sobre el conocimiento del rol de lashormonas gonadales masculinas sobre las alteraciones de la neurotransmisiondopaminérgica en la cría estresada prenatalmente. En una aproximación haciala evaluación de este objetivo se caracterizó el efecto del estrés prenatal sobreel eje reproductor masculino y sobre ciertos aspectos del sistemadopaminérgico, para por último intentar simular el efecto del estrés prenataladministrando prenatalmente a un antagonista del receptor de andrógenos: laflutamida. Mediante el empleo de un modelo de estrés prenatal por inmovilización de lamadre durante la última semana de gestación en ratas Wistar, se evaluó la reactividad del sistema de estrés de las crías macho, al mismo tiempo que seestudiaron los efectos del estrés prenatal sobre diversos aspectosmorfológicos, bioquímicos y moleculares del eje reproductor. En el mismomodelo, en crías macho prepuberales y adultas, se examinó la expresión de losreceptores dopaminérgicos del tipo D2, de andrógenos y de estrógenos endiversas áreas cerebrales pertenecientes al sistema dopaminérgicomesocórtico-límbico y se estudiaron las arborizaciones dendríticas en lasmismas áreas. Finalmente mediante la administración de la flutamida durante laúltima semana de gestación, se estudió si la disminución perinatal en losniveles de andrógenos circulantes podría influir sobre el desarrollo del sistemadopaminérgico. Los resultados obtenidos mostraron que el estrés prenatal indujomodificaciones a largo plazo en los niveles de las hormonas pertenecientes aleje reproductor masculino. A su vez, el estrés prenatal modificó parámetros dela morfología sexual externa y de la histomofometría gonadal de ladescendencia. Por su parte, los efectos del estrés gestacional sobre losreceptores dopaminérgicos del tipo D2 y a hormonas sexuales presentes en elcerebro, mostraron variaciones conforme al área en la cual se estabarealizando la observación y a la edad de las crías, mientras que la reducción enlas arborizaciones dendríticas inducida por el estrés prenatal se registró entodas las áreas evaluadas y en ambas edades. Por último demostramos que laadministración prenatal de flutamida afecta la morfología sexual interna yexterna de la descendencia, al mismo tiempo que induce alteraciones enparámetros morfológicos del sistema dopaminérgico mesocórtico-límbico. Deesta manera, la manipulación prenatal de andrógenos mostró consecuanciassimilares a las observadas en individuos que habían recibido estrés prenatal,sugiriendo que uno de los mecanismos por los cuales el estrés gestacionalpodría interferir sobre el desarrollo del cerebro es mediante la alteración del rolorganizacional de los andrógenos y la modulación del rol activacional de losmismos.

Descripción: En el presente trabajo de tesis se investigaron estrategias enzimáticas y químicas de síntesis de compuestos diversos con potenciales propiedades farmacológicas. En primer lugar, se estudió la aplicación de lipasas para la obtención de derivados de vainillilamina, varios de ellos nuevos, de una forma eficiente y sustentable. Además, se evaluó la capacidad antiviral de los compuestos obtenidos contra distintas cepas de herpes, incluidas cepas resistentes al Aciclovir, obteniéndose resultados positivos. También se obtuvieron derivados de ácido hiodesoxicólico (HDCA) de forma regioselectiva utilizando lipasas, obteniendo rendimientos excelentes y muy rápidamente. Adicionalmente, se utilizaron herramientas de modelado molecular para explicar en detalle las diferencias observadas en reactividad en los distintos grupos funcionales de la molécula de HDCA, así como también para entender en profundidad cómo interactúa este sustrato con el sitio catalítico de una de las lipasas más utilizadas en síntesis, como Candida antarctica B. Además, se desarrolló un proceso novedoso de síntesis de alcoholes utilizando una enzima alcohol deshidrogenasa y un solvente eutéctico profundo como “co-sustrato inteligente”, obteniéndose resultados excelentes para la obtención de ciclohexanol y logrando extrapolar esta estrategia para la obtención de otros alcoholes. Por último, mediante síntesis química se obtuvieron numerosos derivados de quinolina, algunos de los cuales mostraron tener una buena actividad antiparasitaria frente a Leishmania mexicana y Trypanosoma cruzi. Además, se postuló un posible mecanismo de acción de los mismos.

Descripción: En este trabajo de tesis se describe la síntesis de diferentes análogos de esteroidessulfatados marinos con el objeto de evaluar su actividad biológica y establecer correlacionesestructura-actividad. Los esteroides sintetizados poseen grupos sulfato en C-2 y C-3 condiferentes configuraciones y funciones oxigenadas en C-6 y fueron obtenidos a partir de lasulfatación de sus análogos hidroxilados. La reacción de sulfatación fue optimizada luego deprobar diferentes condiciones, entre ellas, la selección del agente sulfatante, la relación deequivalentes entre el esteroide y el agente sulfatante, el tiempo y la temperatura dereacción y el método de calentamiento. Todos los análogos sintéticos se obtuvieron a partirde un precursor común, la 5α-colest-2-en-6-ona, que se sintetizó mediante sucesivasreacciones de oxidación y reordenamientos a partir del colesterol. Se ensayó la actividad de inhibición de la enzima acetilcolinesterasa de los compuestossulfatados y sus análogos hidroxilados y se observó que el compuesto 2β,3α-dihidroxi-5α-colestan-6-ona disulfato resultó ser el más activo de la serie. Por ello, este compuesto fue elelegido como modelo para el estudio de la cinética de la reacción de inhibición. En base a lacinética de la reacción, se realizó un estudio de docking molecular del compuesto y de suanálogo desulfatado, el cual no inhibe a la enzima acetilcolinesterasa. Luego se realizaronestudios de dinámica molecular verificándose la estabilidad de los complejos enzimaesteroideobtenidos en el estudio de docking. En el caso del análogo inactivo, si bien secomprobó la estabilidad del complejo, se observó la apertura de un canal secundario en lasuperficie de la enzima que comunica con el sitio activo, lo que explicaría la razón por la quedicho esteroide no inhibe a la enzima. Debido a los antecedentes de citotoxicidad de los 6E-hidroximino esteroides, sesintetizaron cuatro oximas novedosas a partir de los correspondientes 6-cetoesteroidesobtenidos previamente. Se estudió la citotoxicidad de las oximas sintéticas y de algunosesteroides polihidroxilados sulfatados relacionados -para evaluar la influencia de gruposhidroxilo, sulfato y carbonilo en C-6 en la actividad- frente a dos líneas celulares tumoralesde cáncer de próstata humano, PC-3 (andrógeno independiente) y LNCaP (andrógenodependiente). Los resultados indicaron que el compuesto 2β,3α,6β-trihidroxi-5α-colestanotrisulfato fue el más activo frente a la línea celular LNCaP y la oxima 2β,3α-dihidroxi-6E-hidroximino- 5α-colestano, frente a PC-3. Por último, se estudió la actividad antiviral y virucida de los compuestos sulfatados y susanálogos desulfatados frente a los virus herpes simplex tipo 1 (HSV-1) y Junín (JV),responsable de la fiebre hemorrágica argentina. La oxima 2β,3α-dihidroxi-6E-hidroximino- 5α-colestano resultó ser el compuesto más activo frente al virus HSV-1, mientras que loscompuestos 2β,3α-dihidroxi-5α-colestan-6-ona disulfato y 2β,3α,6β-trihidroxi-5α-colestano- 2,3-disulfato fueron los más activos frente al virus Junín. Ambos resultados ponen demanifiesto la importancia de los grupos sulfato para la actividad antiviral de estosesteroides.

Descripción: El presente trabajo se dividió en dos panes. En el capítulo 1 se describió anatomo-liistológicamenteel ovario. Se caracterimron las etapas de la oogénesis y la dinámica ovárica anual, que mostró cuatroperiodos diferentes: (l) reproductivo, (2) de regresión, (3) de reposo y (4) Vitelogénesis. También seanalimron la estructura y función de los centros melano-macrofágicos encontrados en las gónadas. Porúltimo se describió a nivel ultraestructural la aparición y formación de las membranas oocitarias durante eldesarrollo folicular. En el capítulo 2 fueron identificados los factores dc liberación de gonadotrofinas (GnRH) presentesen cerebro (variantes salmón y chicken-II). En hipóftsis no se inmunodetectó ninguna forma. Se analizaronlas posibles causas. Finalmente se realizaron experiencias de inducción de la maduración final y ovulaciónde gametas usando un análogo superactivo de GnRH y un antagonista dopaminergico. Los efectos seevaluaron utilizando los siguientes parámetros: (l) liberación de gametas, (2) Histología gonadal y (3)niveles de esteroides sexuales en sangre. Los resultados obtenidos demostraron que: (l) El tratamiento noprodujo liberación de gametas, (2) Las gónadas femeninas mostraron inicio de reversión sexual en latotalidad de los casos y (3) los niveles de testosterona y estradiol en sangre aumentaron significativamenterespecto de los animales control.

Descripción: La presencia de todos los componentes del sistema renina-angiotensina (RAS) en la adenohipófisis hasugerido que el componente activo de este sistema, el octapéptido Angiotensina II (AngII), actuaría endicha glándula como un factor autócrino o parácrino. Aún cuando se ha demostrado que AngII liberaprolactina (PRL) y adrenocorticotrofina (ACTH) tanto in vivo como in vitro a través de sus receptores detipo l (ATl), sc ignora todavía la relevancia fisiológica dc estos efectos. El objetivo de esta Tesis fueestudiar la participación del octapéptido cn la función hipofisaria normal y cómo la misma puedealterarse por procesos patológicos característicos dc la glándula. Con tal motivo, los ensayos serealizaron en adenohipófisis de ratas hembra adultas normales y en dos modelos experimentales deadenomas hipofisarios prolactinosecretantes (prolactinomas). Dado que AngII es un secretagogo de PRLutilizamos como parametros de estudio diferentes aspectos del proceso prolactinoliberador de AngII,incluyendo su mecanismo de transducción de señales (especialmente la señalización de Ca2+i y lossubtipos receptores del octapéptido involucrados en el mismo. En una primera caracterización de los efectos de AngII en adenohipófisis de rata normal (grupo control, CON), demostramos que la producción de inositol trifosfato (IP3), la movilización de Ca2+i y la liberaciónde PRL inducidas por AngII sufren una rápida y prolongada desensibilización homóloga y heteróloga. Asimismo, puesto que el Ca2+i es un factor esencial para la secreción hormonal y la proliferación ydiferenciación celular, ampliamos nuestro estudio del mecanismo de señalización intracelular del Ca2+i enla hipófisis normal y lo comparamos en detalle con los modelos experimentales mencionados. En experimentos de cultivo primario de células adenohipofisarias y ensayos de señalización de [Ca2+]iobservamos que AngII libera PRL a concentraciones fisiológicas en la hipófisis normal (grupo CON) através de una respuesta de [Ca2+]i bifásica, la cual se compone de una espiga inicial dependiente de lamovilización del contenido de Ca2+ de reservorios intracelulares sensibles a tapsigargina e IP3 y una faseposterior de meseta dependiente del influjo de Ca2+e. En contraste, el efecto prolactinoliberador del octapéptido se encuentra significativamente disminuido encélulas adenohipofisarias provenientes de prolactinomas inducidos mediante el tratamiento crónico invivo con dietilstilbestrol (grupo DES). Además de la disminución del número de receptores hipofisarios AT1 ya descripta en este modelo experimental, la atenuación del efecto prolactinoliberador deloctapéptido en estas células se encontró asociada con una profunda alteración de su patrón deseñalización de [Ca2+]i, que se caracterizó por la ausencia completa de la fase inicial de espiga de [Ca2+]iy la presencia de una señal monofásica de tipo meseta enteramente dependiente del influjo de Ca2+e ymediada parcialmente por canales de calcio dependientes del voltaje tipo L (VDCC). A pesar de estasmodificaciones, las respuestas fueron mediadas por el mismo subtipo receptor (AT1) en ambos gruposexperimentales. En otros ensayos, demostramos la especificidad de la alteración de la señal de Ca2+i en respuesta al estímulo de AngII, cuyo patrón característico fue reproducido en prolactinomas de ratonescon deficiencia funcional del receptor dopaminérgico D2. Por otra parte, dado que se ha descripto que el octapéptido actúa como factor angiogénico y mitogénicoen varios tejidos, evaluamos la capacidad de AngII para inducir la proliferación y la activación dep44/p42 en células adenohipofisarias normales e hiperplásicas. Experimentos de incorporación de 3 [3H]-timidinaindicaron que el octapéptido no promueve la proliferación celular en células adenohipofisariastanto normales (grupo CON) como hiperplásicas (grupo DES), a pesar de que dicho agonista estimulasignificativamente la actividad de p44/p42 en ambos grupos. El tratamiento in vivo de las ratas estrogenizadas con el agonista dopaminérgico D2, bromocriptina (DES+Bro), retornó parcialmente la prolactinemia a niveles normales e indujo una marcada regresión delos prolactinomas, si bien no fue evidente una recuperación del contenido hipofisario de PRL. Larecuperación parcial de los parámetros in vivo se correlacionó con una restauración paralela de lasecreción de PRL y la espiga de Ca2+i inducidas in vitro por AngII en células hipofisarias de este grupo. Inesperadamente, el tratamiento in vivo de la hiperplasia hipofisaria con progesterona (grupo DES+P4)potenció el efecto prolactinoliberador del octapéptido a través de un mecanismo sinérgico entre losreceptores AT1 y AT2, a pesar de que dicho progestágeno no revirtió ni la hiperprolactinemia ni eltamaño de los tumores. Resultados de Western Blot indicaron por primera vez la presencia de losreceptores AT2 en la adenohipófisis, cuya expresión se encontró marcadamente aumentada en los gruposhiperplásicos (DES y DES+P4). Por otra parte, cuando la hiperplasia fue revertida con el tratamiento invivo con bromocriptina (DES+Bro), la expresión del receptor AT2 disminuyó hasta recuperar el nivelexpresado en el grupo control. Ninguno de los cotratamientos empleados (bromocriptina o P4) indujocambios en la baja expresión de los receptores AT1 característica del grupo DES. En conclusión, los presentes estudios en modelos animales de prolactinoma indicarían la existencia deuna compleja interrelación entre el RAS hipofisario, el sistema dopaminérgico, y los esteroides ováricosen la función hipofisaria. Modificaciones en esta delicada red de interacciones, podrían explicar laalteración del comportamiento hipofisario frente a ciertos secretagogos como AngII. Los resultadosobtenidos son compatibles con la hipótesis de una activación del RAS hipofisario durante el proceso dehiperplasia y podrían ser de potencial interés en diversas áreas de la farmacoterapia como el tratamientode prolactinomas resistentes o no a agonistas D2, el tratamiento hormonal de reemplazo en lapostmenopausia y el tratamiento de enfermedades cardiovasculares como la insuficiencia cardíaca y lahipertensión.

Descripción: En esta Tesis Doctoral se estudiaron distintos aspectos de la regulación del eje hipotálamo-hipófiso-gonadal (HHG) en un modelo de ratones transgénicos que produce niveles elevados de la hormona gonadotrofina coriónica humana (hCG) y desarrolla tumores gonadales (ratones hCGDE+). Se partió de la hipótesis que los elevados niveles de esteroides sexuales inducidos por la hipersecreción de hCG desde edades tempranas del desarrollo, actuarían sobre el eje HHG alterando la síntesis y secreción de hormonas y factores claves en la función reproductiva, participando directa o indirectamente en el inicio y progresión de los tumores gonadales que presentan estos ratones. En una primera etapa se caracterizó en profundidad el fenotipo de machos y hembras hCGDE+, estudiando parámetros morfológicos, bioquímicos y moleculares de la función gonadal e hipotálamo- hipofisaria. Se observaron marcadas diferencias sexuales en el modelo, donde los machos transgénicos resultaron severamente comprometidos a nivel de la regulación de la unidad hipotálamo-hipofisaria desde edades tempranas del desarrollo, mientras que las hembras mostraron alteraciones gonadales que condujeron al desarrollo de teratomas ováricos al inicio de la edad reproductiva. En una segunda etapa se aplicaron tratamientos antihormonales y gonadectomía, siendo nuestro particular interés estudiar el rol de los esteroides sexuales en el fenotipo de los machos y hembras hCGDE+. Los resultados obtenidos ponen de manifiesto que la hipersecreción de hCG, a través de la estimulación de la esteroidogénesis gonadal, altera la funcionalidad del eje reproductivo y participa en el desarrollo de patologías gonadales.

Descripción: La búsqueda de compuestos sintéticos bioactivos es siempre un desafío complejo y presenta un interés permanente. En este trabajo de Tesis se propuso abordar este problema utilizando una estrategia sintética centrada en la obtención de miméticos de productos naturales, y que emplea reacciones multicomponentes como pasos clave, para incorporar así diversidad estructural y generar relevancia biológica en los compuestos finales. Particularmente, se tomaron como puntos de partida el esqueleto tetracíclico de los esteroides y un bloque tipo 9,10-dihidrofenantreno para modificarlos mediante la reacción multicomponente de Ugi. Esto condujo a una biblioteca de 122 compuestos novedosos que fueron completamente caracterizados. Posteriormente se aplicaron herramientas de quimioinformática para estudiar estadísticamente las propiedades de los compuestos obtenidos para determinar la similitud con los productos naturales. Como resultado de este estudio, encontramos que todos los compuestos pueden ser considerados miméticos de productos naturales biológicamente relevantes. Esta última característica se puso de manifiesto a través de una serie de ensayos biológicos fenotípicos in vitro, en particular la capacidad de los compuestos para inhibir el crecimiento de hongos patógenos de plantas y la acción antiproliferativa en células tumorales. Hallamos que varios de los compuestos sintetizados presentaron algún grado de actividad en los sistemas ensayados. Como conclusión, podemos decir que, si bien no hay un consenso que contemple cuál es el camino óptimo a seguir, la metodología elegida en este trabajo demostró ser eficiente en cuanto a la potencialidad que brinda en el contexto del descubrimiento de nuevas moléculas orgánicas bioactivas.

Descripción: Los receptores nucleares (RN) son factores de transcripción activados por la unión de pequeñas moléculas lipofílicas que juegan un papel importante en la regulación de diversos procesos biológicos, tales como el metabolismo, el desarrollo y la reproducción. El nematodo de vida libre Caenorhabitis elegans es capaz de ajustar su ciclo de vida basado en su entorno. En condiciones favorables, este nematodo sufre un rápido desarrollo a través de cuatro etapas larvales (L1 a L4), mientras que frente a condiciones adversas, puede tomar la decisión de entrar en un ciclo de vida alternativo (dauer).Este ciclo de vida está regulado por un sistema endrócrino en el cual participa el DAF-12y cuyos ligandos son compuestos esteroidales denominados ácidos dafacrónicos (AD).Si bien este sistema fue descripto inicialmente en C. elegans, se demostró posteriormente que el mismo es funcional en gusanos parásitos. Estudios anteriores demostraron que algunos esteroides sintéticos son capaces de regular el ciclo de vida de C. elegans presentando actividad agonista en gusanos mutantes capaces de abandonar el estadio dauer y retomar el ciclo reproductivo mediante la unión selectiva al DAF-12, y por otro lado presentaron actividad antagonista retrasando el desarrollo en gusanos salvajes. Por lo tanto, es posible pensar que otros compuestos análogos pueden servir para interrumpir el ciclo de vida de los parásitos debido a que poseen una etapa equivalente al estadio dauer que constituye la etapa infecciosa. En esta tesis se estudió la actividad de una serie de compuestos sintéticos esteroidales análogos a los AD con actividad antagonista derivados de los estudiados anteriormente a los cuales se les agregaron cadenas laterales difluorometilo modificadas para modular selectivamente la unión al receptor, y compuestos con actividad agonista mediante otra estrategia simple y rápida que permitió la generación de una pequeña biblioteca de esteroides que tienen α-aminoacilamidas estructuralmente diversas como cadenas laterales. Se caracterizaron funcionalmente a estos ligandos sintéticos mediante ensayos de genes reporteros en células e in vivo en C. elegans. Basados en la idea de que los parásitos tenían el mismo sistema de regulación, se pensó en analizar el efecto de estos compuestos en el tratamiento de parásitos de plantas, en particular del parásito emergente Meloidogyne incognita. Se buscaron genes ortólogos de CeDAF-12 en el proteoma de M. incognita, mediante estudios bioinformáticos. Una vez confirmada la existencia de estos genes por homología, probamos los compuestos agonistas y antagonistas que fueron caracterizados en C. elegans, como blancos del DAF-12 de M. incognita que controlen el ciclo de vida infectivo de este fitonematodo, obteniendo un control efectivo con un compuesto antagonista en plantas de Tomate platense.

Descripción: En todos los vertebrados, la enzima citocromo P450 aromatasa, es la responsable de la síntesis deestrógenos a partir de andrógenos. En ciertas áreas específicas del cerebro de los peces teleósteos laproducción de estrógenos cerebrales es entre 100 y 1000 veces mayor comparada con las regiones homólogasdel cerebro de otros grupos de vertebrados. La base de tales niveles radica en parte a la expresión de unavariante de la enzima aromatasa, conocida como aromatasa cerebral, producto de uno de los dos genesparálogos que codifican para aromatasas (cerebral y gonadal) en teleósteos. Ya que la distribuciónneuroanatómica de las células productoras de aromatasa cerebral coincide parcialmente con áreas del cerebroinvolucradas en la regulación de comportamientos sociales, decidimos analizar el papel de la misma en laregulación del comportamiento agonístico y del cuidado maternal, en la chanchita Cichlasoma dimerus. Pormedio de un protocolo de inmunohitoquímica se detectó la presencia de esta enzima en el cerebro anterior dela chanchita, en áreas involucradas en la regulación de comportamientos sociales. Luego, se caracterizaron lafisiología y el comportamiento de machos de chanchita de distinto estatus social (dominante vs. subordinado),y su relación con la expresión de aromatasa cerebral en el cerebro y la hipófisis. Los machos dominantespresentaron niveles mayores de andrógenos circulantes, mientras que los machos subordinados secaracterizaron por poseer niveles más altos de 17β-estradiol, y una tasa espermatogénica relativamentemenor. Si bien no se observó un efecto del estatus social sobre la expresión de la enzima, los niveles deexpresión de la misma en hipófisis correlacionaron con la frecuencia de comportamientos agonísticos,sugiriendo un papel novedoso de la hipófisis en la regulación del comportamiento social a través de la síntesisde estrógenos. En las hembras se analizaron los perfiles de expresión de ambas variantes de la enzimaaromatasa (cerebral y gonadal) a lo largo del período de cuidado parental, y su relación con parámetrosfisiológicos y reproductivos. El inicio del cuidado maternal resultó en una caída específica de la síntesis deesteroides sexuales y de la tasa de maduración ovárica, mientras que los niveles de expresión de ambasaromatasas resultaron independientes de la presencia de la progenie. Por lo tanto, el estatus social en losmachos y el cuidado parental en las hembras, repercuten fuertemente sobre los niveles de esteroides sexualesy el estado de las gónadas, o viceversa, sin que resulte afectada la expresión de aromatasa en cerebro anteriore hipófisis.

Descripción: A partir del extracto polar de la estrella Cosmasterias lurida (Philippi, 1858) se aislaron y caracterizaron dos glicósidos esteroidales (Luridósidos A y B) y cuatro asterosaponinas (Cosmasterósidos A, B, C, y D), todos ellos de estructura novedosa. Se aislaron también el Pycnopodiósido C, Ophidianósido F y Forbésido H reportados con anterioridad en Pycnopodia helianthoides, Ophidiaster ophidianus y Asterias forbesi, respectivamente. El Cosmasterósido A contiene la misma cadena de oligosacárido que el Ophidianósido F con la aglicona (20S)-5α-colesta-9(11),24-dieno-3β,6α,20-triol3β-sulfato. Los Cosmasterósidos B, C y D contienen Thomasterol A como aglicona y difieren en el número e identidad de los monosacáridos de la cadena de azúcares. El Cosmasterósido B contiene una cadena de oligosacáridos novedosa que difiere de la del Ophidianósido F en el reemplazo de la unidad de quinovosa unida a C-6 de la aglicona por glucosa. Los tetrasacáridos Cosmasterósidos C y D están relacionados con el Cosmasterósido B y el Ophidianósido F respectivamente por la pérdida de la fucosa terminal. Del asteroideo Luidia ludwigi scotti Bell (1917) se aislaron dos asterosaponinas, los Acanthaglicósidos B y C aislados previamente de la estrella Acanthaster planci y tres esteroides polihidroxilados. Dos de ellos, 5α-colesta-3β,5,6β,15α, 16β,26-hexaol y Sα-colesta- 3β,5,6β,15α,26-pentol 15-sulfato, fueron previamente aislados de las estrellas Myxoderma platyacanthum y Luidia maculata respectivamente y 5α-colesta-3β,5,6β,15α,26-pentol 26-sulfato resultó novedoso. La presencia de una función hidroxilo en C-26 es común en esteroides polihidroxilados aislados de estrellas. Sin embargo, un grupo sulfato en esa posición es muy poco usual. Los cuatro esteroides polares aislados de Ophioplocus januarii (Lütken 1856) presentan grupos sulfato en C-3α y C-21,los anillos A/B fusionados en cis, y grupos hidroxilos en los carbonos C-4α y C-11β. El esteroide 24-norcolest-(22E)-5β-22-en-3α,4α,11β, 21-tetraol 3,21-disulfato resultó novedoso. Los otros tres esteroides fueron aislados previamente de los ofiuros Ophiocoma dentata, Ophiarthrum elegans y Ophiarachna incrassata. Se estudió la actividad antiviral de los compuestos aislados de Ophioplocus januarii contra cuatro virus patógenos en humanos: virus del Herpes simplex tipo 1 (HSV-1), virus Junin (JV), virus sincitial respiratorio (RSV) y virus del polio (PV). A partir del ofiuro antártico Ophionotus victoriae (Bell, 1902) se aislaron cuatro esteroides sulfatados, resultando dos de ellos novedosos. El estudio del ofiuro Ophiocoma echinata (Lamarck, 1816) permitió aislar dos esteroides polihidroxilados sulfatados 5β-colest-3α,4α,11β,12β,21-pentol-3,21-disulfato y 5β-colest- 3α,4α,11β,21-tetraol-3,21disulfato aislados previamente de Ophioderma longicaudum y Ophiocoma dentata respectivamente y un alqueno sulfatado de estrudura novedosa. El extrado polar del ofiuro antártico Astrotoma agassizii (Lyman, 1875) permitió aislar 5 esteroides polihidroxilados sulfatados. La presencia del grupo sulfato en C-2 es una característica poco común en los esteroides polares aislados de ofiuros. Además, los compuestos novedosos presentan un grupo isoprenilo en la cadena lateral y constituyen los primeros ejemplos de esta cadena en ofiuros. Los dos compuestos conocidos fueron aislados previamente del ofiuro antártico Ophiosparte gigas.

Descripción: En este trabajo se detalla el aislamiento y elucidación estructural de los metabolitos secundarios presentes en los extractos orgánicos de las esponjas Siphonochalina fortis y Tedania sp.; de los octocorales Anthomastus bathyproctus, Primnoella divaricata, Primnoella scotiae y Paramuricea sp.; de los tunicados Aplidium conicum y Aplidium sp. y del briozoo Aspidostoma giganteum. Todos los extractos de las especies estudiadas fueron fraccionados mediante distintas técnicas de cromatografía hasta la obtención de los metabolitos secundarios de interés puros. La elucidación estructural se realizó utilizando los experimentos de RMN 1D y 2D, espectrometría de masa y reacciones de derivatización. De la esponja Siphonochalina fortis, colectada en Bahía Bustamante, Chubut, se aislaron tres ácidos biliares acetilados (70-72). Este trabajo es el primer aislamiento de ácidos biliares acetilados a partir de esponjas. El compuesto 71 fue detectado por primera vez como producto natural. De la especie Tedania sp., recolectada en el Golfo de San José, Península Valdés, Chubut, se aislaron tres nucleósidos: 2´-desoxiuridina (85), 2´-desoxiadenosina (86) y timidina (87) y un Anor esteroide (88). Del octocoral Anthomastus bathyproctus, recolectado en las islas Shetland del Sur, se aislaron 5 nuevos esteroides (103-107). De los octocorales Primnoella divaricata y Primnoella scotiae, colectados en el Golfo de San Jorge, Chubut, se obtuvieron dos ácidos biliares oxidados (108-109) y por último, del octocoral Paramuricea sp., recolectado cerca de las Islas Shetland del Sur, se aislaron 3 guayanólidos (110, 112 y 113). El compuesto 113 es nuevo. Del tunicado Aplidium conicum, recolectado en la Península Valdés, Chubut, se aisló el meroterpenoide, (+)-conicol (144). Del tunicado Aplidium sp., colectado en la Península Valdés, Chubut, se aislaron los rubrólidos L (146) y O (145). Del briozoo Aspidostoma giganteum, recolectado en el Golfo de San Jorge, Chubut, se aislaron 10 nuevos alcaloides bromados, las aspidostomidas A-H (198, 207, 210-212, 220-222, 225, 227). Este es el primer reporte de este tipo de alcaloides en briozoos. Cinco de estas aspidostomidas, presentan una estructura derivada de tirosina unida a un anillo pirrólico altamente halogenado, a través de un enlace amida, mientras que otros 3 compuestos presentan una estructura derivada de triptofano unido a un anillo de pirrolocetopiperazina, altamente halogenado. Por ultimo, la diaspidostomida, es un ejemplo único de una estructura dimérica que exhibe una estructura N,N-diacil hidrazida en su esqueleto.