Descripción: Fil: Sabarís Di Lorenzo, Gonzalo Julián. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: La activación de las redes de regulación genética (RRGs) conduce a procesos de diferenciación celular, proliferación, apoptosis y homeostasis durante el desarrollo. Muchos de los genes dentro de las RRGs poseen regiones regulatorias de la transcripción con una arquitectura genética compleja. Dentro de las regiones regulatorias existen distintos tipos de elementos regulatorios, siendo los enhancers los elementos más profundamente estudiados. Los enhancers contienen la información necesaria para establecer dónde, cuándo y cuánto seexpresa un gen. En esta tesis estudiamos la estructura y función de la región regulatoria de la transcripción del gen shavenbaby (svb) de Drosophila melanogaster. Este gen se expresa en las células epidérmicas y promueve la formación de estructuras no sensoriales con forma de pelo (llamadas tricomas) en la cutícula. Al sintetizarse, Svb se comporta como un represor transcripcional (Svb-REP) y luego de un proceso de degradación de su extremo aminoterminal se convierte en un activador transcripcional (Svb-ACT). Svb-ACT activa la expresión de los genes efectores, los cuales ejecutan la formación de los tricomas en la cutícula. El patrón de expresión embrionario de svb es generado por siete enhancers que están localizados en una región de 90 kilobases ubicada río arriba del sitio de inicio de la transcripción del gen. Además del embrión, svb se expresa en las células epidérmicas de lapupa/adulto, que producen los tricomas de la cabeza, tórax, abdomen, patas y alas. Sabemos que los siete enhancers embrionarios también están activos en la epidermis de la pupa. Análisis de conservación de secuencia en la región regulatoria de svb sugieren que existen más enhancers con actividad en pupa, además de los ya conocidos. Con el objeto de determinar cuántos enhancers están activos durante el estadio pupal y cómo están distribuidos dentro de la región regulatoria de svb, llevamos a cabo experimentos que nos permitieron comprender como funciona la región regulatoria de svb en la pupa. En primer lugar, realizamos una caracterización del patrón de expresión de svb en la epidermis de la pupa. Encontramos que svb comienza a expresarse en la epidermis abdominal de la pupa a las 35 hrs. después de la formación del pupario (APF) y que a partir de las 40 hrs. APF se convierte en un activador transcripcional (Svb-ACT). Una vez que definimos la dinámicatemporal de expresión y actividad de svb/Svb en el abdomen de la pupa, decidimos estudiarla regulación transcripcional de svb en ese contexto. Analizamos la apertura de la cromatina (con la técnica ATAC-seq) y la presencia de la marca epigenética H3K27ac (con la técnica CUT&RUN) y realizamos ensayos funcionales con construcciones reporteras. Encontramos siete enhancers nuevos de svb activos en la epidermis pupa. Estos enhancers se suman a los siete enhancers embrionarios, que también presentan actividad en ese estadio del desarrollo.Al analizar el paisaje regulatorio del locus svb en la pupa, observamos que los 14 fragmentos con actividad enhancer cubren prácticamente toda la región en cis de svb. Esta arquitectura regulatoria es diferente a la epidermis del embrión, en donde la expresión de svbes generada por 7 enhancers discretos dispersos en las 90 kb de la región regulatoria del gen. Luego, nos propusimos determinar posibles genes blanco de Svb en la epidermis abdominal de la pupa. Nuestro objetivo era determinar si dichos genes son los mismos que son activados por Svb en la epidermis embrionaria. Realizamos un ensayo de RNA-seq y obtuvimos una lista de genes con diferentes niveles expresión en la epidermis abdominal de la pupa. Encontramos que aproximadamente el 93% de los genes blanco de Svb validados en el embrión están también expresados en la epidermis abdominal de la pupa. En esta tesis analizamos la regulación transcripcional de un gen durante el desarrollo de D.melanogaster. Nuestros resultados aportan a la comprensión de la arquitectura genética de las regiones regulatorias de la transcripción de genes pleiotrópicos.