Descripción: En el presente trabajo se estudiaron anomalías en el corazón y elpulmón fetal en un modelo de diabetes moderada en rata y se evaluaron los efectos dela administración de agonistas de los receptores activados por proliferadoresperoxisomales α y γ (PPARα, PPARγ) sobre dichas alteraciones. En el corazón y el pulmón fetal de rata diabética se evidenció en forma sexodependiente,sobreacumulación de lípidos, disminución en la expresión de enzimas deoxidación lipídica, aumento en la producción de óxido nítrico (NO) y lipoperoxidos ydisminución de la expresión de PPARα y PPARγ. La administración intrafetal de agonistas de PPARα (LTB4) y PPARγ (15dPGJ2)hacia finales de la gestación o tratamientos maternos con dietas enriquecidas enácidos grasos agonistas de los PPAR durante toda la preñez, mostraron regular variosparámetros alterados por la diabetes materna en corazón y pulmón fetal, entre ellos laanómala expresión de los PPAR y de enzimas y transportadores involucrados en elmetabolismo lipídico, la sobreproducción de NO y el daño oxidativo a lípidos. Variosde los efectos de los agonistas de PPAR variaron de acuerdo al órgano y el sexo fetal. Además, los tratamientos dietarios mostraron efectos particulares de acuerdo al tipode ácido graso suplementado en la dieta materna. De esta forma se identificaron anomalías en el metabolismo de lípidos ymarcadores de un estado pro-inflamatorio y pro-oxidante en corazones ypulmones fetales durante la gestación de rata diabética a término, que sevinculan con alteraciones en la expresión y función de los receptores nucleares PPAR. Estas anomalías podrían condicionar el desarrollo y función de dichosórganos teniendo consecuencias en la vida posnatal. A su vez, se describieronefectos benéficos de los agonistas de PPAR como moduladores de las alteracionesfetales provocadas por la diabetes materna.

Descripción: El cáncer de pulmón es la causa principal de muerte por cáncer en todo el mundo y se clasifica en dos tipos principales: de células pequeñas y de células no pequeñas (NSCLC). El factor de crecimiento transformante beta (TGFβ) regula un amplio espectro de funciones celulares y juega un rol importante en las enfermedades del pulmón, incluyendo el NSCLC. El objetivo de este trabajo de tesis fue estudiar el papel del TGFβ en la progresión tumoral de la línea de adenocarcinoma de pulmón murino LP07. Más aún, se realizó un estudio retrospectivo con muestras de tumores de pacientes con NSCLC estadios I-III para evaluar el rol clínico-patológico y la significancia pronóstico de moléculas moduladas por TGFβ; incluyendo la galectina-1 (gal-1), el receptor de TGFβ tipo I (TβRI) y los factores de transcripción FoxM1 y DEC2. En el modelo experimental LP07, el TGFβ moduló múltiples aspectos vinculados con la progresión tumoral, incluyendo la proliferación, la apoptosis, la migración, la actividad de enzimas proteolíticas, la secreción de citoquinas, la angiogénesis, el acondicionamiento del órgano blanco de la metástasis y la retención de las células tumorales en el pulmón. Se demostró que si bien el tratamiento con TGFβ retrasó el crecimiento en el sitio primario, no indujo un programa de quiescencia sostenido, y se observó un cambio hacia la progresión maligna en el sitio metastásico. En los pacientes con NSCLC, se definió el valor como biomarcadores de pronóstico de la expresión alta de gal-1 conjuntamente en las células tumorales y el estroma, así como la expresión alta de TβRI en la membrana de las células tumorales, que se asociaron con menor supervivencia global y mayor riesgo de caída, respectivamente, luego del ajuste por otros pronosticadores. Por otro lado, la expresión del supresor tumoral candidato DEC2 en las células tumorales se asoció con una mejor supervivencia global, en particular para los pacientes con tamaño tumoral T2. La evaluación de la expresión del marcador de proliferación FoxM1 en las células tumorales o el infiltrado no arrojó datos de importancia clínica, aunque el análisis conjunto de la expresión contrapuesta de FoxM1 y DEC2 en los tumores podría aportar información de pronóstico en una cohorte de pacientes mayor. En conjunto, este trabajo demuestra la modulación por TGFβ del comportamiento de los tumores de pulmón y proporciona potenciales herramientas de pronóstico y posibles blancos moleculares para el tratamiento.

Descripción: La infección causada por el nematode Trichinella spiralis, trichinellosis o triquinosis, induce una estimulación temprana del sistema inmune común asociado a mucosas a nivel intestinal. La respuesta generada produce la eliminación de los parásitos alojados en ese órgano. En simultáneo, dicha estimulación genera una respuesta inflamatoria a nivel pulmonar. El estadio de larva migrante o larva recién nacida (LRN) durante su migración atraviesa diferentes órganos, entre ellos el pulmón. Ha sido demostrado que el mecanismo efector contra dicho estadio parasitario es mediado por leucocitos activados por anticuerpos específicos contra antígenos de la superficie de la LRN (citotoxicidad celular dependiente de anticuerpo; CCDA). Resultados previos de nuestro grupo de investigación demostraron la capacidad que tienen células pulmonares de realizar CCDA contra la LRN; esto sumado al hallazgo de la LRN en pulmón nos permitió proponer a este órgano como uno de los sitios propicios para que se produzca este ataque. El objetivo general de la presente Tesis de Doctorado fue profundizar el conocimiento sobre la respuesta inflamatoria que se desarrolla tempranamente en el tejido pulmonar. A tal fin, se estudiaron: 1) parámetros de importancia en el ataque citotóxico, ejercido por células pulmonares, contra la LRN; 2) la cinética de aparición de parámetros relacionados con la regulación de la respuesta inflamatoria; 3) la capacidad de la LRN de modular la activación de macrófagos pulmonares; 4) la función pulmonar durante la respuesta inflamatoria y su relación con la presencia de ciertos parámetros inmunológicos alérgicos. Se realizaron ensayos in vitro de citotoxicidad celular en los cuales se cultivaron LRN con células pulmonares en presencia o ausencia de sueros anti-LRN. Se utilizaron LRN de 2 y 20 horas de vida ya que presentan diferencias antigénicas en su superficie. Los resultados demostraron que: I) los fenómenos celulares y humorales asociados a la respuesta inflamatoria pulmonar aumentan la capacidad helmintocitotóxica de las células pulmonares. Dentro de estos fenómenos se destaca el aumento de leucocitos pulmonares que expresan el receptor Fc de alta afinidad para la IgE (RFcεI). II) Las variaciones antigénicas de la superficie de la LRN modifican la susceptibilidad a dicho ataque citotóxico. III) El mecanismo de CCDA descripto es independiente del complemento y altamente dependiente de la IgE y del RFcεI. Se demostró la aparición de parámetros regulatorios pulmonares durante el período post-infección (p.i.) de mayor pasaje de LRN por el órgano. En suspensiones celulares de pulmón se detectaron aumentos en los niveles de linfocitos T regulatorios (CD4+CD25+Foxp3+) y macrófagos alternativamente activados (M2). En extractos pulmonares se detectó un aumento en la concentración de TGF-β. A través de ensayos in vitro se reveló la capacidad que tiene la LRN de modular la activación de macrófagos pulmonares, a través de sus productos metabólicos y/o moléculas de superficie. La LRN induce en esta población celular tanto el fenotipo clásico (M1) como el alternativo (M2). Los experimentos que evaluaron la función pulmonar permitieron demostrar que la respuesta pulmonar genera hiperreactividad de las vías aéreas. La cinética realizada y el aumento de histamina detectado en lavado broncoalveolar sugieren que el pasaje de la LRN por pulmón podría exacerbar este fenómeno. En conclusión, el presente trabajo refuerza la importancia del pulmón como órgano de destrucción parasitaria. Durante el desarrollo de la respuesta inflamatoria pulmonar y el pasaje de la LRN por el órgano se ponen en juego mecanismos efectores, reguladores y moduladores que afectan tanto al hospedero como al parásito. Teniendo en cuenta la comunicación entre la mucosa intestinal y la pulmonar en la infección causada por T. spiralis, los resultados presentados constituyen un avance en el conocimiento de base para el desarrollo de protocolos de inmunoprotección a nivel del sistema inmune común asociado a mucosas.

Descripción: Diversos tipos de tumores poseen elevados niveles de expresión de la ciclooxigenasa-2 y de producción de prostaglandinas. El uso de los antiinflamatorios no esteroides resultó beneficioso en el tratamiento de distintos modelos tumorales, a veces independientemente de la expresión de las ciclooxigenasas, sus blancos primarios. Nuestro objetivo en este trabajo de tesis fue estudiar el papel de la COX-2 en la progresión de distintos modelos tumorales. Utilizamos el adenocarcinoma de pulmón murino LP07 y hallamos que la COX-2 es un componente importante del comportamiento maligno de estas células. En este modelo, la inhibición de la COX-2 redujo el crecimiento del tumor primario y el desarrollo metastásico así como también los síndromes paraneoplásicos provocados por el tumor. La COX-2 y la PGE2 tienen un papel clave en la modulación de la supervivencia de las células LP07, que ejerce modulando las actividades de las quinasas Akt y p38, así como también la actividad del factor de transcripción NF-κB. En los adenocarcinomas de mama murinos LM3 y LMM3 la importancia de la COX-2 es menos relevante, ya que si bien el uso de un inhibidor selectivo de esta enzima, el celecoxib, produjo esencialmente los mismos resultados que en las células LP07, un análogo carente de actividad inhibitoria se comportó de manera similar. La PGE2 exógena no revirtió ninguno de los efectos del celecoxib. En estas células, la modulación de la biología tumoral involucró también un aumento de la apoptosis y el arresto del ciclo celular posiblemente mediado por p21 y p27. Finalmente, utilizamos un modelo más complejo, con el cocultivo de células de un carcinoma ductal in situ de mama humano y fibroblastos inflamatorios de artritis reumática. Las células del CDIS MCF10DCIS.com no expresan COX-2, la cual es inducida cuando son cocultivadas con los fibroblastos de AR. Encontramos que los fibroblastos inducen la progresión hacia el carcinoma invasivo, en parte modulada por la COX-2, cuya inhibición disminuyó los niveles de la MMP-14 y la actividad de la MMP-9. La inhibición de la COX-2, el NF-κB y la MMP-9 redujo la capacidad invasiva de las células MCF10DCIS.com inducida por las interacciones con los fibroblastos inflamatorios. En conjunto, este trabajo sugiere la utilidad de los inhibidores de la COX-2 para el tratamiento de la progresión tumoral y la participación de esta enzima en la modulación del comportamiento de algunos tumores ya sea mediante su expresión constitutiva o inducida por un microambiente inflamatorio.