Descripción: En esta tesis estudiamos la respuesta fisiológica de individuos de C. quadricarinatus, una langosta de agua dulce originaria de los ríos del norte de Australia, expuestos a condiciones de estrés térmico, salino, o a la combinación de ambos factores. Demostramos que la combinación de ambos tratamientos produjo una inhibición en la ganancia de peso de los juveniles avanzados expuestos. El efecto de la temperatura sobre la fisiología del animal fue notable; la disminución de la temperatura impidió, en los juveniles expuestos, la eficiente regulación de los niveles de Na+ y K+ y generó incrementos superiores al 100 % en los niveles de glucosa, en hemolinfa. A su vez, la tasa metabólica varió levemente ante las diferentes condiciones ensayadas. Con el objetivo de estudiar la participación de la Hormona Hiperglucemiante de Crustáceos (CHH) en este tipo de estrés, medimos sus niveles de expresión por RT-PCR. Con ello demostramos que CHH se induce, bajo condiciones de estrés, en el tejido nervioso del pedúnculo ocular, sitio en el cual CHH es sintetizada, almacenada y secretada. Luego de producir CHH recombinante (rCqCHH) en bacterias, demostramos que la administración prolongada de esta hormona condujo a una disminución en los niveles de glucógeno en el hepatopáncreas y a un aumento de glucosa en la hemolinfa. Contrariamente, los niveles de glucógeno se mantuvieron estables en el músculo abdominal, luego de la administración de rCqCHH. Demostramos también que el aumento de los iones Na+ y K+ inducido por condiciones de alta salinidad, disminuyó por la administración de rCqCHH. Finalmente, las condiciones de estrés utilizadas en este trabajo condujeron a una desregulación en la expresión de PEPCK, enzima fundamental de la gluconeogénesis. En su conjunto, estos resultados sugieren una participación directa de la hormona CHH en el metabolismo energético asociado al mantenimiento de la homeostasis bajo condiciones de estrés térmico y salino. En línea con esta hipótesis, demostramos que bajo las condiciones de estrés mencionadas, los animales inyectados con rCqCHH poseen un significativo incremento en la ganancia de peso (200-300 %). El descubrimiento de la función de CHH como modulador del metabolismo energético en condiciones de estrés térmico y salino puede contribuir al desarrollo de nuevas tecnologías que puedan ser utilizadas para estimular el crecimiento de C. quadricarinatus en condiciones subóptimas, favoreciendo así la producción de la especie con fines comerciales.

Descripción: En este trabajo se evaluó en el cangrejo de estuario Chasmagnathus granulatus el posible efecto de losmetales pesados cadmio y cobre, a concentraciones subletales, sobre el control hormonal de la glucemia y dela reproducción. La exposición crónica de cangrejos intactos a ambos metales, provocó un severo y significativodescenso de la glucemia. Se observó una tipica relación dosis-respuesta al exponer estos animales adiferentes concentraciones de cadmio y cobre, con una mayor sensibilidad a este último metal. El bajo nivelde glucosa detectado en los animales intactos expuestos, fue similar al registrado en animales ablacionadosde sus pedúnculos oculares, lo cuál está indicando un posible efecto inhibitorio de ambos metales sobre lasecreción y/o sintesis de la hormona hiperglucemiante, CHH, que se produce y secreta en tales pedúnculos. La ausencia de diferencias entre los animales ablacionados controles (sin metal) y ablacionados expuestos acada metal, está indicando por otra parte que no existe un efecto directo de los tóxicos sobre el nivel basal deglucosa (no regulado por CHH peduncular). Cuando el extracto de pedúnculo ocular de cangrejospreviamente expuestos a cadmio o cobre se inyectó en animales intactos, provocó un incrementosignificativo de la glucemia similar al que provocó la inyección de extractos de animales controles,indicando que no existe un efecto de los tóxicos sobre el contenido de CHH en los pedúnculos oculares, loque sugiere a su vez que la síntesis hormonal no se veria afectada. Por otra parte, la inyección de CHHpurificada de Cancer pagurus, sobre animales intactos expuestos crónicamente a los tóxicos, provocó lareversión del efecto hipoglucémico causado por los metales. Los animales expuestos a cadmio alcanzaron unnivel de glucemia elevado y similar al registrado en cangrejos inyectados con CHH pero no expuestos,demostrando que éste metal no interfiere con la interacción hormona-receptor y/o la transducción de la señalhormonal en los tejidos blanco. Los animales expuestos a cobre incrementaron también la glucemia peroalcanzando un nivel similar al medido en cangrejos no expuestos inyectados con solución salina, lo cuálindica que el cobre afectaría en alguna medida la interacción hormona-receptor, y/o algún paso en latransducción de la señal hormonal máxima. En consecuencia, los resultados obtenidos en esta primera partede la Tesis apoyan la Hipótesis de que la hipoglucemia observada en animales intactos por exposición a losmetales estudiados, se debe a una inhibición que esos metales ejercen sobre la secreción de CHH por partedel centro neuroendocrino ubicado en los pedúnculos oculares, sumado, para el caso de cobre en particular, auna interferencia con los efectos hormonales a nivel de órganos blanco. Con respecto a los ensayos sobre el control de la reproducción, se realizaron ensayos in vivo (14 días) ein vitro (24 horas), con hembras adultas de C. granulatus. En los ensayos in vivo, no se observaron cambiossignificativos en el indice gonadosomático (IG) de hembras intactas de sus pedúnculos oculares expuestas acadmio o cobre, mientras que ambos metales provocaron un descenso significativo en el IG de los cangrejosablacionados. En función de estos resultados, pusimos a prueba la Hipótesis de que esos metales esténinterfiriendo con la via estimuladora extrapeduncular del crecimiento gonadal. Para esto, se realizaronensayos in vitro coincubando ovario con ganglio torácico, fuente de la hormona estimuladora gonadal; comoresultado, no se detectaron diferencias entre los grupos control y expuestos a los metales pesados. Sinembargo, cuando el ovario fue incubado con metil farnesoato o l7-hidroxiprogesterona, ambas hormonasestimuladoras del crecimiento gonadal, la incorporación de leucina tritiada fue significativamente menor enlos grupos expuestos, corroborando la Hipótesis planteada en términos de una interferencia de cadmio ycobre con los mecanismos de transducción de tales hormonas estimulatorias a nivel gonadal. Por otro lado,ovarios coincubados con tejido peduncular y expuestos a ambos metales pesados, mostraron unaincorporación de leucina tritiada significativamente mayor que en los controles (ovario y pedúnculos, perosin metales en el medio de incubación), sugiriendo un efecto inhibitorio de los tóxicos ensayados sobre lasecreción de la hormona inhibidora gonadal (GIH) desde los pedúnculos oculares. La interferencia de cadmioy cobre con los mecanismos de transducción de GIH a nivel ovárico fue descartada como hipótesisalternativa, ya que el agregado de extracto de pedúnculo ocular al medio de incubación fue capaz de revertirpor completo el efecto causado por cada tóxico. Por último, el conjunto de resultados obtenidos in vitro conambos metales, i.e., interferencia con el efecto de hormonas estimulantes (metil famesoato y l7-hidroxiprogesterona)e inhibición de la secreción de la hormona inhibibora GIH, permiten explicar el similarcrecimiento gonadal observado en animales intactos, entre controles y expuestos a los metales.