Descripción: Las dihidropiranonas quirales son precursores útiles de productos naturales ymoléculas asimétricas biológicamente activas. El sistema carbonilo α,β-insaturado lesconfiere a las dihidropiranonas una gran versatilidad para diversos tipos detransformaciones químicas. Además, la presencia de estereocentros en sus moléculas lespermite el control de la enantioselectividad en una variedad de reacciones. A partir de estaspremisas, se planteó como objetivo general de esta Tesis el estudio de la reactividad delsistema carbonílico α,β-insaturado de dihidropiranonas derivadas de azúcares y lainfluencia de los estereocentros de las mismas en el curso estereoquímico de las reaccionesaplicadas. Además de cumplimentarse este objetivo general, se alcanzaron los siguientesobjetivos específicos: l) Mediante una secuencia de reacciones simples y estereocontroladas, se obtuvo unglicósido de la D-epi-purpurosamina, un aminotetradesoxiazúcar del tipo encontrado enantibióticos aminoglicosídicos. Se utilizó como compuesto de partida quiral unadihidropiranona derivada de D-galactosa. 2) Se construyeron sistemas carbociclicos mediante adiciones de Diels-Alder de dienos a lamencionada dihidropiranona y a otra derivada de la L-fucosa. Estos carbociclos, generadosbajo estereocontrol, eran ópticamente puros y presentaban numerosas funcionalidades, porlo cual constituían intermediarios útiles para posteriores transformaciones sintéticas. 3) La dihidropiranona derivada de D-galactosa presentaba una reactividad limitada comodienófilo. Por eso, se prepararon dihidropiranonas derivadas de pentosas. Se estableció laconfiguración absoluta y la pureza óptica de estos compuestos portadores de un únicoestereocentro. Asimismo, se prepararon dihidropiranonas enantioméricamente puras porglicosidación de glicales con alcoholes quirales. 4) Las 2-alcoxi-2H-pirán-3(6H)-onas derivadas de pentosas resultaron excelentesdienófilos, tanto con butadienos como con dienos cíclicos. Se optimizaron las condicionesde las reacciones de cicloadición y se obtuvieron una variedad de carbociclos bajoestereocontrol. 5) Se determinaron las estructuras de los carbociclos obtenidos mediante técnicas de RMN,y se confirmaron las mismas por conversión de los cicloaductos en policiclos. Estosúltimos resultan intermediarios útiles en la síntesis de una variedad de moléculas quirales.

Descripción: La levadura Saccharomyces cerevisiae puede utilizar una gran variedad de compuestos como fuente de nitrógeno. En presencia de fuentes ricas de nitrógeno los genes de las vías de utilización de las fuentes pobres no se expresan. Dicho mecanismo es conocido como Nitrogen Catabolite Repression (NCR). Últimamente se han obtenido evidencias de que también hay una jerarquía dentro del uso de las fuentes pobres. El factor de transcripción Dal81 participa en la regulación de genes involucrados en varias vías de utilización de fuentes pobres de nitrógeno. Para activar la transcripción dependiente del factor Dal81 de cada gen (o grupo de genes), también es necesaria la participación de otro factor (específico de inductor) que sería el responsable de la especificidad de la respuesta. Así, para el catabolismo de fuentes pobres de nitrógeno, como alantoína y leucina, son necesarios el factor de transcripción pleiotrópico Dal81 y otro factor específico de cada fuente (Dal82 y Stp1/Stp2) para que se produzca la activación transcripcional de los genes que codifican para permeasas tales como Dur3, Agp1, Bap2 y Bap3. Por otra parte, para que ocurra la inducción de los genes de la utilización del GABA en respuesta a este compuesto, Dal81 actúa en conjunto con el factor de transcripción específico Uga3. La existencia de un factor de transcripción compartido entre estas vías inducibles, podría permitir una activación jerarquizada de las mismas y la regulación de otros procesos biológicos sincrónicos, cuando varias de las fuentes de nitrógeno antes mencionadas se encuentran disponibles simultáneamente. El objetivo general de este trabajo fue estudiar los mecanismos moleculares a través de los cuales se determina la regulación coordinada de genes involucrados en el uso de fuentes de nitrógeno pobres. En este trabajo, demostramos que Uga3, conocido hasta ahora como un factor específico de la vía del GABA, regula al gen BAP2, responsable de la incorporación de aminoácidos ramificados a las células. Encontramos también que Uga3, además de afectar la utilización de GABA y leucina, promueve la tolerancia a estrés térmico y oxidativo. Además, mediante co-inmunoprecipitación de diferentes factores de transcripción, encontramos que Dal81 se encuentra unido al factor de transcripción Uga3 aún en ausencia de GABA y de manera independiente de la secuencia UASGABA de los genes UGA. Por otra parte, también detectamos una interacción independiente de inductor entre Leu3 y Uga3. Mediante el análisis global del proteoma de células deficientes en UGA3, identificamos 17 proteínas sobre-representadas en esta mutante, mientras que otras 50 se encuentran sub-representadas. A través de análisis in sílico de las 67 proteínas expresadas diferencialmente, encontramos que 8 de ellas participan del metabolismo de fuentes pobres de nitrógeno o son permeasas de aminoácidos. Demostramos que Arg5,6, está regulado por Uga3 a nivel de su transcripción, y que la represión por arginina de este gen depende de Uga3. Sin embargo, no detectamos interacción entre Uga3 y la región regulatoria de ARG5,6. Por último, demostramos que la ausencia de Uga3, así como también la de Dal81, también produce cambios significativos en el contenido de varios aminoácidos. Encontramos correlaciones entre estas modificaciones y la expresión diferencial de proteínas asociadas al metabolismo de fuentes de nitrógeno y permeasas. La mutante uga3 tiene un alto contenido de arginina intracelular. Se sabe que la acumulación intracelular de arginina promueve la tolerancia a estrés por etanol, por lo que podría relacionarse al menos parcialmente, con los efectos de tolerancia a estrés observados. Sin embargo, en nuestras condiciones de trabajo, no encontramos cambios significativos en la tolerancia a etanol entre esta mutante y la cepa wild type [fórmula aproximada, revisar la misma en el original].

Descripción: Se ha estudiado la estabilidad de l,4 benzodiazepinas frente a diferentes factoresambientales. En primer lugar se estudian cinéticamente las reacciones de solvólisis de varias 0-aminobenzofenonas, los principales productos de degradación hidrolítica de Diazepam, (enestudios previos se había caracterizado cinco 0-aminobenzofenonas de la degradación porhidrólisis ácida de diazepam). El mecanismo de formación de estas cinco 0-aminobenzofenonassigue un esquema complejo, en el presente estudio se describen losresultados de mediciones cinéticas realizados bajo diferentes condiciones de reacción, cálculode las constantes de velocidad mediante la aplicación de un programa de calculo iterativo paraproponer mecanismos de reacción consistentes con los resultados encontrados y diversasexperiencias adicionales para confirmar los mismos. Por otra parte, también se presentan los resultados de los estudios de estabilidad de Alprazolam, (8-cloro-1-metil-6-fenil-4H-s-triazo-[4,3-α][1,4]benzodiazepina), cuyomecanismos de degradación es completamente diferente a las anteriores 1,4 benzodiazepinasya que no es susceptible a la hidrólisis. Se estudió la estabilidad de este compuesto endiferentes condiciones de descomposición severas, mostrándose lábil solamente a la acción dela luz. Se aislaron los múltiples productos formados de este proceso de fotodegradación ensoluciones de Alprazolam en medio acuoso y metanólico, mediante la aplicación decromatografia de capa preparativa y se caracterizó los principales. Los resultados encontradosindican que el mecanismo de fotólisis es diferente de acuerdo al solvente. En solución acuosase encontraron productos provenientes de la contracción del anillo diazepínico a un anillo deseis miembros, otro proveniente de la decloración de Alprazolam y otro de hidrólisis; mientrasque en metanol predominaron dos compuestos provenientes de solvólisis. Se estudio mediante HPLC y Espectrofotometria de Fluorescencia la influencia del pHde las soluciones en la velocidad de descomposición, en orden a determinar las (kobs). Observándose que la fotodegradación es dependiente del pH de la solución: la velocidad dedescomposición aumenta a medida que se disminuye el pH bajo condiciones naturales deestrés. Para concluir este trabajo se estudio la fotodegradación de Alprazolam en comprimidoscomerciales, mediante un método de HPLC previamente validado. Dos de los productosaislados se forman bajo condiciones de radiación en estado sólido y bajo el influjo de laradiación solar.

Descripción: Los hidratos de carbono son los componentes mayoritarios de la biomasa renovable. Su abundancia ha promovido su uso para la obtención de polímeros, como fuente renovable alternativa al petróleo, un bien cada vez más escaso. Además, los materiales resultantes generalmente son biocompatibles, biodegradables y evitan la polución. Por otra parte, los hidratos de carbono poseen una alta versatilidad química y pueden ser modificados fácilmente mediante protocolos sintéticos de rutina. En particular, los derivados con funcionalidades azida o alquino constituyen monómeros adecuados para la reacción de cicloadición 1,3-dipolar entre azida y alquino. En este contexto, el objetivo principal de esta Tesis fue la síntesis sustentable y aplicaciones potenciales de politriazoles derivados de D-galactosa, mediante la polimerización clickentre azida y alquino, benigna para el medioambiente. En primer término, ante la dificultad de adquirir comercialmente D-galactono-1,4-lactona se optimizó su síntesis por oxidación de galactosa. También se prepararon derivados sintéticamente útiles de la D-galactono-1,4-lactona, incluyendo dos monómeros α-azido-ω-alquino: el 6-azido-6-desoxi-2,3:4,5-di-O-isopropilidén-D-galactonato de propargilo y la 6-azido-6-desoxi-2,3:4,5-di-O-isopropilidén-(N-propargil)-D-galactonamida. La polimerización cabeza cola de estos monómeros con Cu(I) como catalizador produjo respectivamente poli(éster-triazol) y poli(amida-triazol), con alta regioselectividad en favor de los triazoles-1,4-disustituidos. Por el contrario, en las polimerizaciones térmicas se obtuvieron anillos 1,4-y 1,5-disustituidos alternados aleatoriamente a lo largo de la cadena. En ambos casos se observó la formación de oligómeros cíclicos. Las condiciones de polimerización se optimizaron de manera de obtener pesos moleculares altos(Mwen el rango de 35-85 kDa), alta regioselectividad, baja polidispersidad, y baja proporción de productos secundarios. Los poli(éster-triazol) eran sólidos semicristalinos, estables hasta los 250 °C y con transiciones vítreas entre los 90 y 100°C. Estudios de estabilidad mostraron que se degradaban tanto en medio básico (pH 10, 80 °C) como en medio ácido (TFA 0,5 M, 65 °C), pero el ensayo de biodegradabilidad inmediata OECD 301C dio negativo. Los poli(amida-triazol) también dieron negativo este ensayo, aunque experimentaban degradación en medio básico o ácido. Además, la combinación de grupos protectores acetal lábiles en medio ácido con uniones amida, relativamente resistentes, permitió la preparación de poli(amida-triazol) parcialmente protegidos los cuales fueron posteriormente sustituidos con cadenas cortas de policaprolactona mediante la estrategia grafting from. Los poli(amida-triazol) 1,4-disustituidos protegidos presentaban mayores Mwy mayor transición vítrea(Tgen el rango 123-135°C) que el polímero parcialmente protegido (Tg= 46,8°C). Más aún, el polímero injertado no mostraba Tgen el rango de T empleado, lo cual se atribuyó a un proceso de plastificación interna. Los poli(éster-triazol) y poli(amida-triazol) se utilizaron para la encapsulación de cilostazol. Este medicamento presenta baja biodisponibilidad y solubilidad en agua y es actualmente utilizado en el tratamiento de la enfermedad periférica arterial. Se sintetizaron nanopartículas por el método de nanoprecipitación y emulsificación-evaporación del solvente. Las nanopartículas se caracterizaron y se ensayó su citotoxicidad en células del túbulo proximal de rata.

Descripción: Se investigó la influencia del estado de agregación de varios compuestos organolíticos en su estructura y en su reactividad frente a reacciones de índole muy diversa. El estudio de la carbonilación de aril-litios monoméricos permitió controlar la relación entre los isómeros geométricos del 1,2-diacetoxi-1,2-bismesitileteno y condujo a1 desarrollo de un método de sintesis de diarildicetonas impedidas. La relación enérgetica entre los isómeros calculada por MNDO justifica la tendencia observada con dichos compuestos. Las características diméricas del fenil-litio en THF determinaron que al ser utilizado en exceso en la reacción con E-cinamaldehído se logre obtener especificamente dihidrochalcona, producto de un reordenamiento en el cual se evidencia la participación del dímero del organolítico, en lugar del producto de adición 1,2. Se propuso un mecanismo para esta nueva reacción que se verificó por medio de estudios experimentales, espectroscópicos y teóricos. La formación de posibles agregados mixtos amiduro de litio-amina se estudió por métodos semiempíricos, ab initio y DFT para el sistema morfolil-litio- morfolina. En dicha evaluación se tuvieron en cuenta los resultados obtenidos con el piperidil-litio y se determinó el probable sitio de unión entre la amina y el amiduro. Se sintetizaron y caracterizaron nuevos complejos organometálicos de cromo (III), que tienen la particularidad de ser altamente selectivos en sus reacciones de adición. Su reactividad se investigó por medio de adiciones a compuestos carbonílicos en diversas condiciones de reacción, incluyendo variaciones del solvente, de la relación reactivo:sustrato y de la naturaleza del compuesto carbonílico. Se sintetizó una variedad de aminoalcoholes quirales y se verificó su actividad como catalizadores quirales. Como modelo, se realizó un estudio preliminar sobre la enantioselectividad de los complejos de cromo del tipo RCrCl2(THF)3 en la adición a aldehídos en presencia de ligandos quirales.

Descripción: La 5-Aminolevúlico dehidrasa (ALA-D), segunda enzima de la biosíntesis del hemo,es una metaloenzima que cataliza la condensación de dos moléculas de ácido 5-aminolevúlico (ALA) para formar el único monopirrol natural, el Porfobilinógeno (PBG). El ALA-D en general no es la enzima limitante de la síntesis de hemo. En la mayoríade los organismos estudiados su actividad es muy superior a la necesaria para la formaciónde la cantidad requerida de hemo, con la excepción de Neurospora crassa y levadura,organismos en los cuales se le ha asignado un rol regulatorio. Es una enzima altamenteconservada, aún entre organismos filogenéticamente muy distantes. Sin embargo, existendiferencias en cuanto al requerimiento por metales que cumplen un papel fundamental en lacatálisis y estado de oligomerización de la proteína. La enzima de mamíferos y aves,levadura y algunas bacterias requieren Zn++. Por el contrario, la enzima de plantas y algunasbacterias requiere Mg++ en lugar de Zn++; mientras que en Rp. spheroides el requerimientopor el metal puede sustituirse por K+. Se ha propuesto que en E. coli, P. sativum y B.japonicum están presentes ambos cationes, en diferentes proporciones. Los hongos dimórficos son un grupo de organismos capaces de crecer comolevadura o micelio en respuesta a las condiciones de crecimiento; según sean estasmodificaciones pueden inducir, además, la transición morfológica de levadura a micelio oviceversa. Esta propiedad, los hace interesantes para investigar los mecanismosbioquímicos y moleculares que operan durante la diferenciación celular. En el hongodimórfico Mucor rouxii existen evidencias de que el ALA -D también cumpliría un papelregulatorio en la biosíntesis del hemo y que esta enzima, a través de la mitocondriogénesisparticiparía en la transición morfogénica de levadura a micelio. En primer lugar se determinaron las condiciones óptimas para la extracción de laproteína y medición de la actividad enzimática de ambas formas, se encontró que ésta seduplica al pasar del estado fermentativo al del micelio aeróbico. Empleando diferentes técnicas para la purificación de proteínas, como diversascolumnas de geles de afinidad, hidrofóbicos, iónicos y sulfosustituídos, se purificó la enzimade ambas formas obteniéndose preparaciones enriquecidas alrededor de 700 y 500 vecespara micelio y levadura respectivamente. En ambos casos, el peso molecular fue de 280.000 Da, coincidiendo con el determinado para el ALA-D proveniente de otras fuentes. Tanto las propiedades de estabilidad térmica como cinéticas, también resultaronsimilares para ambas formas morfogénicas del hongo, comportándose en ambos casoscomo una enzima con cinética michaeliana y valores de Km comparables. Del estudio del efecto de cationes divalentes sobre la actividad enzimática seencontró que en la enzima de Mucor rouxii, el metal involucrado es el Zn++. Se postula laexistencia de diferentes sitios de interacción del Zn++, un sitio A, en el cual el metal seencuentra fuertemente unido, un sitio B, en el que el catión se puede eliminar por diálisis yreemplazarlo parcialmente por otros cationes y sitios C, donde el Zn++ actuaría cuando laenzima se encuentre en un medio no reductor, en cuyo caso, los grupos sulfhidrilosoxidados provocarían la pérdida de la actividad catalítica, en tal situación, este catión seríacapaz de restablecer las condiciones reductoras. Se estudió además la conocida inhibiciónde la actividad del ALA-D por el Pb++. Se demostró que este metal se puede unir a todos lossitios en los que se une el Zn++, produciendo una significativa inhibición. Se sabe que los átomos de Zn++ se unen a la proteína a través de una secuenciaaltamente conservada, rica en cisteínas e histidinas. Empleándose diversos agentesbloqueantes de grupos SH se comprobó la participación de residuos cisteína que sonesenciales para la actividad enzimática y/o unión del metal; su titulación indicó la existenciade 5 grupos SH por subunidad, de los cuales 1 no se encuentra expuesto. La inhibición por DEP reveló la presencia de 2 grupos histidina por subunidad catalítica, uno de ellos esesencial para la catálisis. Cuando se modificaron algunos parámetros de las condiciones de crecimiento, seencontró que en ambas formas del Mucor rouxii el camino metabólico del hemo es funcionaly se puede inducir por el agregado de concentraciones de ALA 10Exp-5–10Exp-3 M en el medio decultivo. La captación de ALA, acumulación de precursores y porfirinas y la actividad de ALADfue significativamente mayor para micelio que para levadura. El crecimiento encondiciones aeróbicas para el micelio requiere de un mayor contenido de hemoproteínas,fundamentalmente citocromos. Esta demanda se satisface por medio del funcionamientomás activo del camino biosintético de las porfirinas en micelio que en levadura. Así, los niveles de actividad del ALA-D en levadura fueron inferiores a los del micelio. Se demostró, además, su capacidad para regular la concentración de ALA acumuladointracelularmente. Durante la transformación dimórfica inducida mediante aireación del cultivo delevadura se observó la existencia de un camino biosintético del hemo eficientementeregulado. Por lo tanto si bien la inducción de la morfogénesis desde levadura a micelioestimuló la biosíntesis de porfirinas, lo que se puso en evidencia por el aumento de actividaddel ALA-D durante la misma, no se encontró acumulación significativa ni de precursores nide porfirinas. Los resultados obtenidos permiten asignar un rol regulatorio para el ALA-D enlevadura del hongo dimórfico Mucor rouxii.

Descripción: Los polímeros conductores son ampliamente utilizados para diversasaplicaciones. Entre ellas se destaca la fabricación de sensores químicos. Se handesarrollado diversos sensores a base de polianilina para la detección de variasmoléculas como NADH, H202, glucosa y ácido ascórbico. Estos sensores tiene grandesventajas como que permiten detectar bajas concentraciones de analito midiendocorrientes relativamente altas. Son estables y permiten el reuso. Por otro lado tambiénposeen algunas limitaciones como la dificultad de derivatizar polianilina para lograrsistemas integrados en los que todos los reactivos necesarios estén unidoscovalentemente a la superficie del electrodo. Otra limitación importantísima es el hechode que la polianilina necesita pH ácido para experimentar sus transiciones de estado deoxidación con los consiguientes cambios de conductividad. Esto limita el uso desensores a base de polianilina a pHs menores que 5. En esta tesis se presentan enfoques que apuntan a resolver estos problemasinherentes a la quimica de la polianilina y de esta manera desarrollar sensores quepuedan sobreponerse a estas limitaciones. Se presenta un método de síntesis de uncopolímero de anilina y o-aminobencilamina (ABA) que posee un comportamientorédox y de conductividad muy similar al de la polianilina, pero cuenta con grupos aminodisponibles para practicar reacciones químicas que permitan derivatizar el polímero. Sedemuestra que la derivatizacíón del copolímero con ferroceno aldehído no cambiademasiado su conductividad. Asimismo se presenta una caracterización fisico químicade los diversos copolímeros obtenidos a partir de distintas proporciones de ABA yanilina en una solución por FTIR, XPS y voltametría cíclica. En cuanto al problema del pH, se presenta un método sencillo y rápido queconsiste en una reacción en fase heterogénea entre la polianilina y propano sultona puraque da como resultado un derivado de polianilina que posee alrededor del 30 % de losátomos de N sustituidos con un grupo propilsulfonato (PSPANI). Este polímero poseeuna conductividad 3 órdenes de magnitud mayor que la polianilina a pH neutro. Finalmente, se desarrolló un sensor a base de PSPANI que permitió detectarconcetraciones de H202 tan bajas como 10 μM. Por último, se analizan los alcances deeste nuevo copolímero para la determinación de otros analitos.

Descripción: NF-kappa B es un factor de transcripción cuya activación es necesaria para laconsolidación de la memoria a largo plazo en varias especies. Este factor de transcripciónse activa y se transloca al núcleo de las células en una ventana temporal específica durantela consolidación. NF-kappa B tiene una amplia distribución en el sistema nervioso, con unafuerte presencia en dendritas y terminales sinápticas. Esta tesis se centra en la activación,localización y dinámica de NF-kappa B en tareas de aprendizaje que se adquieren con unsolo ensayo, la evitación inhibitoria (IA) y una tarea adquirida en el mismo contexto pero designo opuesto. Los ratones son entrenados de dos modos diferentes; ya sea recibiendo o no unestímulo eléctrico al entrar en un compartimiento oscuro (aversivo con choque eléctrico vs.apetitivo sin choque). Cuarenta y ocho horas después el desempeño de los animales esevaluado. Durante la sesión de evaluación, las latencias de entrada al compartimientooscuro (independientemente del tipo de entrenamiento) fueron significativamente diferentesal día de entrenamiento y a las latencias de un grupo control que en el día delentrenamiento recibe un choque no relacionado con el contexto. Además, la actividadnuclear de NF-kappa B se vió aumentada durante la consolidación de ambas tareascomparando con animales control y naïve. La inhibición de NF-kappa B con sulfasalazinainyectada en el hipocampo, amígdala o el núcleo accumbens inmediatamente luego delentrenamiento produjo un deterioro en la retención de la memoria en ambas versiones de latarea. Los resultados sugieren que en ratón, NF-kappa B es un paso molecular crítico endiferentes áreas del cerebro para la consolidación de la memoria de largo término en unatarea de evitación inhibitoria y en una versión “apetitiva” de la misma. La activación de este factor de transcripción en el núcleo de las células delhipocampo ha sido descrita a exhaustivamente. La presencia del factor de transcripción enla sinapsis nos llevó a investigar un posible rol local en la sinapsis, activación y dinámica eneste sitio. En este trabajo se describen los cambios en la localización sináptica de NF-kappa B y de su actividad, durante la consolidación de la memoria a largo plazo, tanto de la tareaaversiva como apetitiva asociada al IA. La comparación de la actividad sinaptosomal ynuclear de NF-kappa B indican diferentes dinámicas para ambas localizaciones. Además,se identifican dos fracciones de NF-kappa B sinaptosomal, una que se obtiene soluble en elcontenido sinaptosomal (fracción libre) y la otra se encuentra fuertemente unida a lasmembranas sinaptosomales. Durante las primeras etapas de la consolidación la fracciónlibre se activa, la fracción asociada a membrana aumenta mientras que la cantidad de lafracción libre disminuye. Estos resultados sugieren que la activación sináptica de NF-kappa B y su translocación a membranas son parte de la consolidación de la memoria a largoplazo en ratones. Existen evidencias que demuestran que NF-kappa B se activa a través de laactividad del receptor de NMDA. Tomando en cuenta este dato se apuntó a disociar la señaleléctrica que llega al núcleo de la señal de transducción molecular local en la sinapsis paraestudiar la función sináptica local del NF-kappa B. Para abordar este objetivo se trabajó conpéptidos que impiden la interacción de PSD-95 (proteína de andamiaje postsináptico) con elreceptor de NMDA. En este trabajo se muestra que la inyección intra-hipocampo de estepéptido interfiere de forma reversible con la consolidación de la memoria de Evitación Inhibitoria (IA). Los resultados presentados en esta tesis aportan datos cruciales para entender lafunción sináptica local del NF-kappa B durante la consolidación de la memoria, tanto paralas tareas de aprendizaje aversivas como apetitivas.

Descripción: El objetivo de esta tesis es estudiar la dinámica de solvatación en mezclas de solventes. Para ello seemplearon técnicas espectrocópicas y fotoquímicas como la absorción y emisión de luz, y el decaimientode fluorescencia y de estados metaestables. Se eligieron dos tipos de sondas cuyas propiedades sonsensibles al medio. En el primer caso se estudió el solvatocromismo y la cinética de isomerización de una fotomerocianina (MC). Esta MC se obtiene por irradiación de luz UV de un espiropirano (SP). Se obtuvieron los espectrosde absorción y emisión de la MC en mezclas de un solvente polar: etanol o acetonitrilo y un solvente nopolar: hexano o tolueno. Se estudió además, la cinética de la reacción de vuelta (MC —>SP) en lasmismas mezclas de solventes. Tanto las propiedades solvatocrómicas (corrimientos de Stokes) como losparámetros cinéticos (constantes cinéticas, k, energías de activación, Ea, y entropías de activación, ΔSα) secorrelacionaron con el parámetro solvatocrómico de Reichardt, ET (30). Mientras los corrimientos de Stokes presentan una correlación lineal con ET (30), los parámetros cinéticos requiren un análisis porseparado. El ln k presenta una correlación lineal con ET (30). En cambio, Ea presenta cambios abruptoscon este parámetro que son compensados por cambios de ΔSα, resultando una única correlación linealentre Ea y ΔSα para todas las mezclas estudiadas. En el segundo caso se estudió el solvatocromismo y el termocromismo de dos aminoftalimidas (AP y AMP) en mezclas de un solvente polar: etanol o acetonitrilo y un solvente no polar: tolueno o C02supercrítico a través de medidas de absorción y fluorescencia en estado estacionario y resuelta en eltiempo. Las propiedades espectroscópicas estacionarias (máximos de absorción, máximos de emisión,distribución espectral) y su evolución temporal, presentan una fuerte dependencia con el medio. Lacorrelación con parámetros solvatrocrómicos muestra que las aminoftalimidas son sondas sensibles a lapolaridad del medio y a la capacidad donora de hidrógeno del mismo y presentan una solvataciónpreferencial por el solvente polar en mezclas como las estudiadas. En el caso de las aminoftalimidas, la escala de tiempo en la que ocurren los procesos de relajación desolvente es comparable con el tiempo de desactivación de la fluorescencia. Un análisis cinético de losresultados explica la evolución temporal de los espectros de emisión en mezclas mediante un modelo deintercambio de solvente por pasos. El análisis cinético, junto con la información espectral, permiteformular un ciclo termodinámico que provee las constantes de asociación del solvente polar con el estadofundamental y el excitado de AP.

Descripción: La octopamina (OA) es una amina biogénica estructural y funcionalmente relacionada con la noradrenalina que posee un rol fisiológico restringido a los invertebrados. En la presente Tesis nos planteamos estudiar el rol de la OA sobre dos procesos comportamentales disímiles en el crangrejo Chasmagnathus granulatus: la memoria asociativa y la agresión. Inicialmente analizamos del rol de la OA en las diferentes etapas de una memoria de tipo aversiva, centrándonos en las fases de consolidación y reconsolidación. Los resultados obtenidos demostraron que la OA tiene un efecto amnésico temporalmente acotado sobre ambas fases. Luego, en base a trabajos realizados en insectos, analizamos la posibilidad de que la OA constituyera una mediadora de estímulos apetitivos, abriendo la perspectiva para desarrollar un nuevo paradigma de aprendizaje apetitivo. Comprobamos que efectivamente la OA estaría implicada en la señalización del estímulo apetitivo en el sistema nervioso. De este modo, una misma sustancia actuaría de modo contrapuesto en dos procesos de aprendizaje de significado opuesto para el animal. Asimismo, proponemos que este sistema tendría un valor biológico en situaciones donde un individuo se enfrenta a diferentes tipos de aprendizajes. Paralelamente, realizamos una caracterización del comportamiento agresivo del cangrejo en condiciones de laboratorio, y analizamos su mudulación por la OA. A partir de enfrentamientos entre pares de animales de igual tamaño, demostramos que la OA tiende a reducir la agresividad individual. Finalmente, analizamos la influencia de un enfrentamiento agonístico sobre la memoria aversiva, demostrando que los animales subordinados tienen una mayor capacidad amnésica que los dominantes. A partir de estos datos, planteamos la hipótesis integradora de que la OA podría ser un posible vínculo fisiológico entre al memoria y la agresión.

Descripción: El objetivo de esta tesis fue en primer lugar, estudiar el rol de las proteína- quinasas activadas por mitógenos (MAPK) en distintas fases de la formación de la memoria en el paradigma de Memoria Contexto–Señal (MCS) del cangrejo Chasmagnathus. En segundo lugar, una vez establecida la participación de estas quinasas en dicho modelo, evaluar su rol en la interferencia sobre la memoria ejercida por péptidos β-amiloide de origen humano en este paradigma de memoria en invertebrados. Se observó activación de ERK 1 h luego de un entrenamiento espaciado (que induce formación de una memoria de largo término [MLT]) en fracciones citosólicas pero no nucleares. Dos entrenamientos control (que no inducen MLT) evidenciaron activación de ERK y JNK citosólicas inmediatamente luego del entrenamiento, decayendo 1 h después. En concordancia, un inhibidor de la vía de ERK1/2 (PD098059) indujo amnesia durante la evaluación de la MLT, solo cuando fue administrado 45 min después del entrenamiento, y no inmediatamente pre- o post-entrenamiento, o cuando se evaluó la memoria de corto término (MCT). Dosis muy bajas de fibrillas de Aβ naturalmente secretadas (FN) impidieron la retención de la memoria solo cuando fueron administradas peri-entrenamiento, e indujeron activación generalizada de ERK/MAPK 1 h luego de su administración. La inyección de péptidos sintéticos de βA1-42 y βA3-42 fibrilados (pero no oligomerizados) resultó amnésica. Sin embargo, no se observó este efecto por administración de βA1-40 o βA11-42 fibrilados. En conclusión, la consolidación de la MLT, a diferencia de su reconsolidación o de la MCT, requiere la fosforilación diferencial de sustratos extra-nucleares de ERK en este modelo. Aβ parece inducir alteraciones fisiológicas y transitorias en el cerebro, más que permanentes y neuropatológicas, dada la especificidad temporal y de vías de señalización implicadas a partir de la administración de bajas dosis de fibrillas. Este efecto específico sobre la memoria está mediado, al menos en parte, por la activación generalizada de ERK que interferiría con la consolidación de la memoria.

Descripción: Epimastigotes de Trypanosoma cruzi, el protozoo parásito que causa la enfermedad de Chagas, contienen dos glutamato dehidrogenasas diferentes (GluDHs), NAD y NADPdependientes. En este sentido los parásitos se asemejan a las bacterias, hongos y plantasy se diferencian de animales superiores que poseen sólo una enzima inespecífica paracoenzima. La GluDH-NADP dependiente (EC 1.4.1.4) es un hexámero formado porsubunidades idénticas de 47kDa, mostrando ser muy semejante a la correspondienteenzima de E. coli en cuanto a la secuencia de aminoácidos del extremo N-terminal. Laforma NADP dependiente podría ser biosintética mientras la forma NAD dependientepodría tener un rol catabólico. La GluDH-NADP dependiente fue purificada a homogeneidad proteica a partir deepimastigotes de Trypanosoma cruzi mediante un protocolo mejorado que incluyecromatografía de afinidad en Blue Sepharose. Se determinó la secuencia de aminoácidosde 11 péptidos internos, obtenidos por digestión con BrCN, tripsina, endopeptidasa Arg-Co endopeptidasa Lys-C. Dichas secuencias, correspondientes aproximadamente al 30%de la molécula, mostraron una identidad del 74% con la enzima similar de E. coli. Utilizandoun suero policlonal monoespecífico producido contra la proteína purificada se realizó elrastreo de una biblioteca de expresión genómica de T. cruzi en el vector λgt11. De estaforma pudo seleccionarse un único clon conteniendo 270 pb correspondientes al extremo 3' del gen que fue secuenciado completamente. Reacciones de PCR usando iniciadoresconstruídos de acuerdo a la secuencia de aminoácidos del extremo N-terminal de la enzimamadura y con la secuencia del clon correspondiente al extremo C-terminal pudieronclonarse y secuenciarse dos ORFs completos (TcGluDH1 y TcGluDH2). Las secuenciasobtenidas muestran mayor homología con la enzima de Escherichia coli (70-72% deidentidad), y menor homologia (52-57%)con la correspondiente enzima de eucariontesinferiores. A partir de la secuencia de ADN se predijo una proteína que contiene 446aminoácidos. Usando el gen TcGluDH1 como sonda se realizaron experimentos de Southern blot, usando fragmentos de restricción o cromosomas enteros separados porelectroforesis en campo pulsado, indicando variaciones entre los diferentes clones y cepasde parásitos, sugiriendo la presencia de varios genes codificando para la GluDH-NADP. Laexpresión de la enzima resultó ser diferente en los distintos estadíos del desarrollo. Laforma epimastigote presenta mayor cantidad de ARNm y proteína (a juzgar por la actividadenzimática y ensayos de Western blot), en comparación con otras formas del parásito. Elgen clonado TcGluDH1 fue expresado en E. coli, produciendo una enzima recombinanteactiva con constantes cinéticas similares a la enzima natural. A pesar de que las evidenciasbioquímicas sugieren que la enzima se localiza tanto en el citoplasma como en lamitocondria, nuestros resultados indican una localización exclusivamente citosólica parala GluDH-NADP.

Descripción: El primer paso en la biosíntesis del hemo en las células animales es catalizado por laenzima mitocondrial δ-aminolevulinato sintetasa (ALA-S), que condensa glicina ysuccinil CoA para formar ácido 6-aminolevulínico y que, al menos en hígado, es lalimitante de la velocidad. En hígado esta enzima constitutiva regula la producción dehemo necesario para sintetizar las proteínas citocromos P-450. Aunque en los tejidos animales el nivel de enzima es muy bajo, la transcripción delgen de ALA-S en hígado de animales de experimentación aumenta cuando se lesadministran compuestos porfirinogénicos como el fenobarbital. Diferentes mecanismosfueron propuestos por los que el hemo puede regular la expresión de ALA-S a niveltranscripcional reprimiendo la sintesis del RNA, a nivel postranscipcional disminuyendola estabilidad del mensajero y a nivel postraduccional inhibiendo la entrada de la enzimaa la mitocondria. En el presente trabajo examinamos el mecanismo ejercido por cAMP y glucosa sobrela expresión génica de ALA-S en hepatocitos de ratas normales y con diabetesexperimental, y en cultivos de células HepG2. Se ha demostrado que el cAMP potenciala inducción mediada por fenobarbital, aumentando la cantidad del mRNA de ALA-S através de la activación de la quinasa de proteínas dependiente de cAMP. El efectoinductor ejercido por el fenobarbital es mayor en hepatocitos diabéticos que en normalesdebido probablemente al nivel de cAMP elevado que presentan. Por otro lado, se hademostrado que la glucosa inhibe la inducción de la expresión de ALA-S mediada porfenobarbital en hepatocitos normales pero no en diabéticos. Este efecto glucosa esrevertido por la presencia de dibutiril CAMP,de activadores de la adenilil ciclasa o de uninhibidor de fosfodiesterasa. Se presentan evidencias que los efectos del cAMP y laglucosa son ejercidos a nivel transcripcional. La vida media del mRNA de ALA-S no semodifica en presencia de ellos. Mas aún, los efectos de cAMP y la glucosa semanifiestan en el análisis de tranfecciones transientes de células HepG2 con un vectorque contenie la región promotora del gen ALA-S clonada en 5’ del gen de lacloramfenicol acetiltransferasa. En este tipo de experimentos hemos confirmado ademásque el efecto de cAMP requiere la activación de la proteina quinasa dependiente decAMP ya que hemos obtenido resultados similares cotransfectando con la subunidad Cde la PKA. Finalmente se demuestra que la activación de la PKC actúa negativamentesobre el mRNA de ALA-S, probablemente a nivel transcripcional, de acuerdo a lasdeterminaciones por Northern, slot blot y análisis de transfecciones transientes de células HepG2. Asimismo se observa que el efecto del éster de forbol TPA anula el efectoinductor del cAMP. Es posible que ambos caminos de transducción de señales, queinvolucran la activación de PKA y PKC, estén interconectados en la regulación de laexpresión génica de ALA-S.

Descripción: En el desarrollo de esta tesis se estudió la manipulación de diferentes mecanismos fisiológicos implicados en lacaptación o pérdida de agua del sapo común Rhinella arenarum con el fin de encontrar diferentes reforzadoresque pudieran ser aplicados en protocolos de aprendizaje instrumental. En primer lugar, se verificó que lossapos aprenden a encontrar agua deionizada (reforzador apetitivo) localizada en una posición fija con respectoa su cuerpo (a la derecha o a la izquierda) y que dependiendo de la osmolaridad externa de la solución éstapuede ser aversiva (pierden peso), neutra (no ganan ni pierden peso) o apetitiva (ganan peso) produciendocambios en el comportamiento de animales parcialmente deshidratados (alejamiento, cuando están expuestosa una solución aversiva, y acercamiento, cuando está presente una solución apetitiva). Luego, se comenzó conel estudio de los mecanismos de transporte de membrana (canales de sodio sensibles a amilorida), hormonales (arginina- vasotocina -AVT-) y nerviosos (vías colinérgicas) que podrían estar involucrados en la variación depeso de los individuos. El bloqueo de los canales de sodio, mediante amilorida, produjo una disminución dela captación de agua y de la permeabilidad de la piel. En contraste, el bloqueo de los receptores colinérgicosmuscarínicos, mediante atropina, aumentó la captación de agua y la permeabilidad de la piel. Este últimoefecto se contrapone con el efecto encontrado cuando se bloquean los receptores β adrénergicos, sobre labase de estudios previos obtenidos en nuestro laboratorio. De esta manera, se describe por primera vez, invivo, en esta situación la participación de las vías colinérgicas y su antagonismo con las vías adrenérgicas enanfibios. No se encontró efecto de AVT sobre la variación de peso. Es más, ninguna de las drogas utilizadasproduce cambios en la permeabilidad o en la pérdida de agua cuando los individuos están expuestos a unasolución neutra de 300mM de cloruro de sodio. Esto último indicaría que los mecanismos involucrados en lacaptación de agua son diferentes a los de preservación de la misma. Globalmente, los resultados de esta tesisnos permiten ahora estar en condiciones de encarar a futuro experimentos de aprendizaje (considerando lasituación estándar de los protocolos de entrenamiento en sapos) utilizando soluciones salinas y manipulandolos mecanismos colinérgicos asociados de intercambio hidrosalino. De esta forma, la utilización de estosnuevos conocimientos ampliarán las posibilidades de entender la dinámica del balance hidrosalino en anfibiosen situaciones de aprendizaje.

Descripción: La Esclerosis Lateral Amiotrófica (ELA) es una enfermedad neurodegenerativa demotoneuronas. Se encuentra mayormente asociada a una forma esporádica deetiología desconocida. Numerosas evidencias favorecen a la auto-inmunidad comouno de los potenciales contribuyentes a esta patología. Para estudiar los posibles antígenos que interactúan con las IgGs depacientes con ELA esporádica (IgGs-ELA), evaluamos su inmuno-reactividad haciala placa neuromuscular (PNM), comparando animales normales con aquelloscarentes de la subunidad formadora del poro del canal de calcio (Ca2+) de tipo P/Q (CaV2.1). Las IgGs-ELA mostraron una importante reactividad hacia la PNM deratones CaV2.1+/+ e incrementaron la frecuencia de potenciales de placa miniatura (MEPPs). Ambos parámetros disminuyeron significativamente al evaluar tejido deanimales CaV2.1-/-. Ensayos de inmuno-precipitación y western blot indican que elblanco de los anticuerpos no sería el canal mismo sino una proteína asociada. Estudios de proteómica sugieren a la proteína BASP-1 (proteína ácida soluble decerebro-1) como un candidato a evaluar en forma más detallada en fututosensayos. Nuestros resultados adicionan evidencias a favor de la auto-inmunidad comouno de los posibles mecanismos contribuyentes a la patología de ELA. Tambiénsugieren que los auto-anticuerpos en el suero de una serie de pacientes interactúancon proteínas cuya presencia en la PNM disminuye cuando los canales de Ca2+ detipo P/Q se encuentran ausentes.

Descripción: En el presente trabajo de tesis se evaluó la aplicación de biocatálisis en la transformación y síntesis de compuestos de muy diversa naturaleza con potencial utilidad para múltiples aplicaciones. Primeramente se propuso la aplicación de lipasas en la acilación selectiva de varios pregnanos hidroxilados en la posición 20. Los resultados obtenidos en este trabajo permitieron la preparación de nueve productos novedosos y la inclusión de un paso biocatalítico en la síntesis de 20ß-hemisucciniloxi-5aH-pregnan-3-ona, un intermediario en la síntesis de un conjugado esteroide-proteína. En segundo lugar se estudió la acilación quimioenzimática de quinicina. Este sesquiterpenoide natural ha mostrado interesantes propiedades en cuanto a su actividad biológica. Por otro lado posee una estructura muy compleja y lábil, con lo que su derivatización requiere de varias precauciones. La utilización de lipasas en este caso permitió la preparación de diez derivados, siete de ellos novedosos, de este producto natural. A continuación se describió la aplicación de células enteras de Rhodotorula minuta en la preparación de una serie de a-hidroxicetonas y a-dioles quirales. Estos compuestos son importantes en la preparación de bloques de construcción, auxiliares y catalizadores quirales. Finalmente se emplearon lipasas en la primera síntesis de poliamidoaminas lineales a partir de acrilato de etilo y N-metil-1,3-diaminopropano en un solo paso. En este caso, la capacidad de las lipasas para catalizar tanto reacciones de aminólisis como de adición de Michael permitió la obtención de un material polimérico altamente regular y monodisperso.

Descripción: En el presente trabajo de tesis, por un lado, se analizan en forma teórica diversosproblemas relacionados con el estudio de parámetros espectroscópicos de RMN y depolarizabilidades moleculares con el método IPPP-CLOPPA (Inner Projection of the Polarization Propagator-Contributions from Localized Orbitals to the Polarization Propagator Approach). Por el otro, se presentan modificaciones y/o nuevas implementaciones que sonparticularmente apropiadas para tratar algunos de estos problemas. Se analizan diferentes efectos electrónicos y estructurales en fenetoles en base alapantallamiento magnético. Se propone una modificación (AM1*) de los parámetros para Sn enel método RPA AM1 que mejora significativamente el cálculo de acoplamientos indirectos deespin nuclear J(XSn). Se presenta la implementación del método IPPP-CLOPPA en el contextode cálculos semiempíricos INDO/S para el análisis tanto del tensor de acoplamiento de espinnuclear como del tensor de polarizabilidad estática molecular, lo que resulta muy promisoriodada la flexibilidad de dicho método semiempírico. Se obtienen, así, resultados deacoplamientos J(XSn) donde se produce una notable mejora con respecto a los hallados con elmétodo AMI*. En lo referente a la polarizabilidad molecular, se comparan los valores de estapropiedad en la serie etano, etileno y acetileno con distintas bases a nivel semiempírico,agregándose orbitales de polarización, con un estudio similar a nivel ab initio para analizar laaplicabilidad del método. Se aplica luego al estudio de moléculas de interés biológico. Lainterrelación entre el efecto de sustituyente en acoplamientos ³J(C1M)α y la polarizabilidad delenlace C3—Mα en l-X-3-M-biciclo[l.l.l]pentanos sustituidos (X=H y M=H, F y CH3) sediscute con los métodos mencionados tanto a nivel ab initio como INDO/S. Los métodospresentados demuestran ser una herramienta interesante para el análisis de diversos problemasen el campo de la química cuántica.

Descripción: En la presente Tesis se ha estudiado la enzima NBAD-sintetasa, responsable de lasíntesis de NBAD, el principal precursor de esclerotización de las cutículas marrones delos insectos. Se la caracterizó en detalle y se estudió su expresión en el ciclo de vida de C.capitata. El aporte principal ha sido, justamente, el estudio en detalle de esta enzima. Anteriormente a esta Tesis, ésta era una enzima prácticamente desconocida. Si bien sehabía postulado que el NBAD era el principal precursor de esclerotización de lascutículas marrones de los insectos, excepto nuestro laboratorio, nadie había publicadonada sobre la enzima que lo sintetiza. Se determinó la expresión de la NBAD-sintetasa enla metamorfosis. Se la caracterizó y se demostró que la misma posee una ampliaespecificidad de sustratos. Se demostró por primera vez la actividad de esta enzima ensistema nervioso y respuesta inmune. Se clonó y secuenció por primera vez un mutantemelánico de D. melanogaster, carente de esta actividad enzimática. Por su amplíaespecificidad de sustratos hemos denominado a esta enzima como Catecolamina-B-alanilligasa (CBAL). Los principales resultados obtenidos son: -Se determinó el patrón de expresión de la enzima en el tejido epidérmico duranteel ciclo de vida de C. capítata. La actividad de esta enzima se detectó en momentos muyacotados del ciclo de vida, coincidiendo con los momentos en que los individuos necesitanesclerotizar sus cutículas. Esta actividad es dependiente de la hormona de la muda 20-OH-ecdisona. La actividad está ausente en el tegumento de las larvas, pues las mismas son decutícula blanda y no sufren el proceso de esclerotización. El primer momento durante elciclo de vida en que se detectó la actividad fue en las prepupas cuando se forma el pupario. Luego de varias horas la actividad fue indetectable hasta el estadío de adulto farado dondese volvió a registrar la actividad extendiéndose ésta hasta la emergencia del adulto. -Se descubrió y se dosó por primera vez in vitro la actividad NBAD-sintetasa entejido nervioso. Se estudió el patrón de expresión y se determinó que la actividad en estetejido es constante a lo largo del ciclo de vida. Incluso se detectó actividad en el “cerebro”de las larvas, hecho significativo puesto que en este estadío nunca se detectó esta actividaden la epidermis. En adultos se demostró que la actividad en el sistema nervioso permanece constante durante todo el estadío, mientras que en la epidermis, luego de las primeras 48horas, cuando ya ha finalizado el proceso de la esclerotización, no se detecta más laactividad. - Por primera vez se observó que la NBAD-sintetasa participa en la respuestainmune innata de los insectos. Esta actividad se manifiesta solamente cuando losindividuos son invadidos por un patógeno o cuando se produce una injuria en la cutícula. También se determinó la función antibacteriana del NBAD. - Se caracterizaron las diferentes actividades enzimáticas y se concluyó que todascorresponderían a una misma enzima. La misma mostró una amplia especificidad desustrato, siendo capaz de conjugar β-alanina con catecolaminas, indolaminas eimidoaminas. Por primera vez se logró sintetizar in vitro: NBANE, NBAOA; NBATA, NBASHT, NBAHA (carcinina) y NBATyr (sarcofagina). Debido a la amplia especificidadde sustrato que mostró, hemos denominado a esta enzima como “Catecolamina-β-alanilligasa” (CBAL). - Se estudiaron los mutantes melánicos niger de C. capitata y ebony de D.melanogaster. Se determinó que ambos mutantes son homólogos; los dos carecen de laactividad NBAD-sintetasa en epidermis (esclerotización y respuesta inmune) y en sistemanervioso. Ambos mutantes muestran deficiencias en el comportamiento. El estudio de losmutantes demostró que las proteínas responsables de las actividades enzimáticascorresponden a un único gen. - Se clonó y secuenció el gen ebony de D. melanogaster en la cepa salvaje y elmutante e4. Se demostró, mediante Northern blots, que el ARNm del mutante es de menortamaño que el de la cepa salvaje. Luego se secuenció y se comprobó que el gen delmutante posee una deleción de 447 pb en el primer exón. Además se observó que en elsitio de la deleción se insertaron 15 nucleótidos pertenecientes a una secuencia extraña, lacual fue analizada y arrojó homología con una secuencia perteneciente a un gen debaculovirus. Se analizó, además, la región promotora y se encontraron secuencias dereconocimiento para genes que responden a 20-OH-ecdisona, factores de transcripción queactúan en tejido epidérmico, tejido nervioso o en la respuesta inmune. - Se comenzó a estudiar preliminarmente la enzima NBAD-hidrolasa. La mismamostró un patrón de expresión diferente a la sintetasa. La expresión de esta enzima se registró durante todo el ciclo de vida. También se observó que se expresa en tejidonervioso. Esta enzima también mostró una amplia especificidad de sustrato, siendo capazde hidrolizar los diferentes productos que sintetiza la NBAD-sintetasa. Los resultados obtenidos han permitido poner en evidencia la actividad de laenzima CBAL durante el ciclo de vida de C. capitata y los procesos fisiológicos en los queinterviene, claves en la evolución de los insectos. También se abrió un nuevo panorama enel estudio del metabolismo de aminas biogénicas y se aportó información para conocer elmetabolismo de β-alanina en insectos.

Descripción: A medida que envejece, el cerebro de los mamíferos sufre modificaciones bioquímicas, estructurales y funcionales que disminuyen la plasticidad de sus circuitos. Estos cambios han sido propuestos como responsables del déficit cognitivo y del aumento en la incidencia de las enfermedades neurodegenerativas que se presentan con la edad. El giro dentado del hipocampo cuenta con una forma de plasticidad singular dada por la producción de nuevas neuronas granulares a lo largo de toda la vida. Mediante transducción retroviral con proteínas reporteras y/o transgenes relacionados con la patogénesis de la enfermedad de Alzheimer se logró utilizar a estas neuronas como vehículo para monitorear los efectos del envejecimiento normal y patológico sobre la plasticidad neuronal. Utilizando inmunofluorescencia y microscopía confocal en ratones wild type envejecidos y en transgénicos modelando la enfermedad de Alzheimer pudimos observar que, aunque el número de neuronas generadas disminuye a lo largo de la vida, estas no se ven afectadas en su migración ni en la densidad de los contactos sinápticos aferentes que desarrollan durante el envejecimiento normal o patológico. Por otro lado, combinando registros electrofisiológicos con análisis morfológico encontramos que la expresión autónoma de célula de diferentes variedades de la proteína precursora de amiloide (APP) altera transitoriamente la forma en que estas neuronas se conectan al circuito del giro dentado. Llamativamente, este efecto parecería no estar mediado por el péptido β amiloide, sino por algún dominio contenido en el extremo C-terminal de APP. En conjunto estos resultados estarían indicando que a pesar de la diversidad de los cambios que se presentan en el cerebro durante el envejecimiento y la neurodegeneración, las neuronas granulares que se desarrollan en el giro dentado bajo tales circunstancias pueden incorporarse anatómica y funcionalmente al circuito. Sin embargo, la dinámica con que se da esta integración se ve afectada por la sobreexpresión de APP en forma autónoma de célula. Alteraciones sutiles como esta podrían subyacer a las manifestaciones cognitivas iniciales encontradas en la enfermedad de Alzheimer.