Descripción: Si bien hace más de un siglo que Ringer demostró, en múscuio cardíaco,la dependencia que existe entre la fuerza contráctil y la concentración de Ca en el medio extracelular, la fuente de Ca responsable del mantenimientode la contracción cardíaca continúa siendo un problema no resuelto. Se hanpostulado dos modelos que, teniendo en cuenta al Ca extracelular en el eventocontráctil, proponen para su entrada a la célula, diferentes papeles. Uno de ellos sugiere que la entrada de Ca sería insuficiente para activara los miofilamentos, pero que sería utilizado para liberar Ca del RS el quea su vez activaría a los miofilamentos. El otro postula que el influjo de Ca sería suficiente para activar a la maquinaria contráctil, otorgándoleal RS el papel de organela buffer de los cambios de la concentración de Caintracelular. Debido a que el costo energético de la movilización de Cavaría según el mecanismo y/o compartimiento que participe, resulta importantedilucidar el papel de cada uno de ellos. Con el objeto de estudiarla participación mecánico-energética del RS en el evento contráctil, sehan utilizado músculos ventriculares de tres especies, elegidas por su distintogrado de desarrollo de esta organela. Esta característica biológicadiferencial se sometió al efecto de la variación de frecuecia de estimulaciónen presencia y ausencia de cafeína, droga capaz de deplecionar de Caal RS por un doble efecto, el de estimular la liberación del mismo e inhibirsu recaptación. En el presente trabajo, el análisis del comportamiento mecánico de lastres especies estudiadas sugiere que en el ventrículo de rata la generaciónde fuerza sería más dependiente de mecanismos cafeino-sensibles (como la liberación de Ca del RS) que en el conejo, en el cual predominaría el efectoinhibitorio de la cafeína sobre la remoción del Ca citosólico. Independientemente de esto, la eficiencia del proceso de excitación-contracción-relajaciónse encuentra disminuída en presencia de cafeína en estas dos especies,lo que sería explicable por la distinta eficiencia de los mecanismosresponsables de la remoción de Ca citosólico. Al inhibir la cafeína la captaciónde Ca por el RS (sonsumo de 1 ATP por cada 2 Ca removidos), el Cautilizado para la contracción deberá ser removido por otros sistemas, menoseficientes, como la bomba de Ca de sarcolema o el intercambiador NaxCa (ambos con una estequeometría equivalente a un consumo de 1 ATP por Ca removido). Los resultados obtenidos en el ventrículo de sapo dan apoyo a estahipótesis. En efecto, la virtual ausencia del sistema retículo sarcoplásmicoen el ventrículo de sapo explicaría de por si la falta de efectode la cafeína sobre la economía del proceso de excitación-contracción relajación. Por otra parte, la frecuencia de estimulación aumentó la eficienciamuscular global en las tres especies, lo que necesariamente implica un mejoraprovechamiento del metabolismo basal. Esto se ve potenciado en el ventrículode rata cuyo metabolismo basal es el más elevado tal que, a pesar dela disminución en la fuerza generada, la economía muscular global se incrementamarcadamente con la frecuencia. La presencia de cafeína disminuyó laeficiencia muscular global en los ventrículos de mamíferos por dos vías:debido al incremento en el metabolismo basal y a la disminución de la economíacon que el ciclo contráctil se lleva a cabo. En el caso del ventrículode sapo, el incremento de la generación de calor total se ve compensadopor el aumento de la fuerza generada en el estado activo indicando queen esta especie los mecanismos que de ser afectados en presencia de la drogacomprometerían la economía muscular, o no son afectados o bien están ausentes, lo que de sorrelaciona con la virtual ausencia de un RS activo. Asimismo,el incremento observado en el metabolismo basal en las tres especiesen presencia de cafeína, se correlaciona con el grado de desarrollo del RSde las mismas. En el presente trabajo, se desglosa la participación mecánico-energéticadel RS en cuanto a su función en la generación de fuerza, su papel en larelajación y en el mantenimiento del estado de reposo mecánico en músculocardíaco. Por otra parte, muestra la estrecha relación existente entre laactividad de esta organela y la economía con que el músculo cardíaco es capazde mantener su actividad contráctil.

Descripción: Fil: Aguilera, Regina Beatriz. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Los objetivos del presente trabajo son investigar la extensión del conteo de coincidencia gamma-gamma en pico suma a la calibración de emisores de rayos gamma con particulares esquemas de desintegración y además verificar la exactitud obtenida, por medio de la comparación con un método preciso como es el conteo de coincidncia beta-gamma. Con tal fin se han desarrollado nuevos estudios teóricos y experiencias que demuestran la confiabilidad del procedimiento, lográndose incertidumbres menores que el 1% en la medición de ciertas fuentes radiactivas, con gran sencillez desde el punto de vista experimental. Dificultades de orden práctico impidieron efectuar determinaciones experimentales de actividad absoluta para algunos nucleidos de interés; sin embargo utilizando en ciertos casos las mediciones de otros autores se lograron resultados igualmente satisfactorios. Se ha estudiado la aplicación del método a fuentes de 60Co, 22Na, 47Ca y 148Pm. Finalmente se ha buscado sentar las bases teóricas del conteo de coincidencia gamma-gamma en pico suma para su posible aplicación como método alternativo en la determinación de actividades absolutas. En tal sentido se efectuaron estudios teóricos para nucleidos que decaen por desintegración beta positiva, beta negativa y por captura electrónica; acompañada o no según el caso por la emisión de rayos gamma en coincidencia. Los mismos comprenden esquemas de desintegración con hasta tres niveles excitados del nucleido hijo y para distintos tipos de geometría; proponiéndose además las expresiones para una posible generalización del método.

Descripción: El objetivo de este trabajo es presentar la calibración radiométrica de pre lanzamiento dela cámara infrarroja New Infrared Sensor Technology (NIRST). NIRST es uno de los ochoinstrumentos a bordo de la misión SAC-D/Aquarius puesta en órbita el 10 de junio de 2011. Está compuesta por una cámara en el infrarrojo medio (Middle Wave Infrared) y otra en elinfrarrojo térmico (Long Wave Infrared), cada una con 3 arreglos de 512 microbolómetros. NIRST además cuenta con un espejo móvil de berilio con el fin de reducir el período derevisita del instrumento. Con el propósito de calibrar radiométricamente la NIRST en tierra, se llevó a cabo unaserie de mediciones en laboratorio utilizando fuentes de cuerpo negro. La calibración absolutadel instrumento se realizó mediante ajustes polinomiales de los datos obtenidos, relacionandola temperatura sensada y la potencia recibida por los detectores con las cuentas digitales. También se realizó la calibración relativa con el fin de obtener una respuesta ecualizada encada uno de los arreglos. En este caso, se realizaron ajustes polinomiales relacionando lascuentas medidas en cada uno de los microbolómetros de un dado arreglo con respecto a undetector de referencia dentro del mismo arreglo. El grado del polinomio para las calibracionesabsoluta y relativa de NIRST, así como la elección del detector de referencia son objetode análisis en el presente trabajo. También se llevó a cabo la caracterización del espejoestudiando la respuesta en función del ángulo de apuntamiento. El análisis de los datos obtenidos durante la calibración radiométrica puso en evidenciala no uniformidad en la sensibilidad de los microbolómetros que conforman cada arreglo. Por otro lado, resultó necesario utilizar grados elevados en los polinomios de calibraciónabsoluta y relativa indicando esto la no linealidad de los detectores. Con respecto al espejo,si bien el mismo presenta una respuesta lineal, se observó que ésta se depende del ángulo deapuntamiento β. Asimismo, los resultados correspondientes a la caracterización del espejopermitieron descubrir la existencia de un gradiente de temperatura en la superficie emisorade los cuerpos negros de laboratorio empleados durante la calibración radiométrica. En base a los resultados obtenidos en el presente trabajo, se proveen algunas recomendacionescon el objetivo de contribuir a futuras misiones espaciales de la CONAE. Estassugerencias son aplicables tanto al dise~no del instrumento como a las metodologías de calibración radiométrica de cámaras infrarrojas.

Descripción: Fil: Gallo Mendoza, Lucas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: El guanaco (Lama guanicoe) es el herbívoro autóctono dominante de las zonas áridas de Argentina. Es una especie con numerosas características anatómico-fisiológicas de gran valor adaptativo que le permitenhabitar zonas hostiles en cuanto a sus rasgos ambientales. La distribución de esta especie ha sufrido una fuerte disminución con respecto a las áreas de distribución originales. Las principales causas de esta declinación poblacional fueron la degradación del hábitat, lacompetencia con el ganado doméstico y la caza. Debido a la importancia intrínseca de la especie, ya que cumple un rol ecológico fundamental en los ecosistemas de la Patagonia, y considerando su potencial parael desarrollo socio-económico en áreas de baja productividad, desde distintos organismos se han impulsado medidas para promover su conservación, como el uso de la especie de manera sustentable. Esta especie presenta una estructura social conformada por grupos familiares, de solteros, mixtos e individuos solitarios; siendo de carácter migratorio o sedentario. El guanaco posee numerosas adaptaciones etológicas y fisiológicas y, por su forma de alimentación, son reconocidos como ramoneadores-pastoreadores de selectividad intermedia, pudiendo modificar sus dietasde manera estacional. Posee un sistema digestivo especialmente adaptado para una ingesta reducida de vegetación fibrosa y de baja calidad, con una alta eficiencia de digestión. Una aproximación clásica a los estudios de calidad de dieta es través de índices fisiológicos de nutrición. Estos índices son utilizados como una medida indirecta de la capacidad de los animales para cubrir sus necesidades energéticas. El contenido de nitrógeno en las heces es el indicador de calidad de dieta másfrecuentemente usado y debido a que el nitrógeno es un componente de las proteínas, compuestos de alto valor nutricional, ha sido utilizado para evaluar la calidad de la dieta de numerosas especies de rumiantes,tanto silvestres como domésticos. El presente trabajo tuvo como objetivo global estudiar cómo los factores ambientales modifican la disponibilidad de recursos y la calidad de dieta en dos poblaciones silvestres de guanacos, de dos reservasnaturales de la Patagonia Norte (Área Natural Protegida Auca Mahuida y Reserva Provincial La Payunia). Se determinó la incidencia de la calidad de la dieta sobre parámetros fisiológicos específicos tales como la demanda energética. Los objetivos específicos que se plantearon fueron los siguientes: 1- Analizar cómo la disponibilidad de recursos, determinada por la variación estacional, las características geográficas, los atributos de la vegetación, la productividad primaria neta y la presión de herbivoría, influyen sobre la calidad de dieta de los guanacos silvestres. 2- Estudiar cómo se manifiesta la calidad de la dieta en cada uno de los sexos y las agrupaciones sociales, analizando las implicancias asociadas. 3- Estudiar la influencia de la calidad de dieta sobre aspectos fisiológicos específicos como son los niveles de glucocorticoides, como mediadores de las demandas energéticas. 4- Proponer un modelo conceptual que permita integrar estos aspectos estudiados. Entre los principales resultados de la presente tesis son de destacar: La existencia de claros patrones estacionales de calidad de dieta, según los cuales la calidad es mínima en la estación invernal y máxima en la estación estival. Estas evidencias han sido previamente documentadas en la bibliografía, para otros ungulados silvestres en otros tipos de ambientes, y se condice con las predicciones planteadas en el presente trabajo. Asimismo, se han evidenciado relaciones entre los atributos de las comunidades vegetales (diversidad, dominancia, productividad primaria), las densidades de herbívoros y la calidad de dieta encontrada en cada unos de estos ambientes, siendo los pastizales, con mayor productividad primaria y con cargas de herbívoros en valores intermedios, los sitios de mayor calidadde la dieta. Con respecto a las unidades sociales, las calidades de dieta inferiores son características en los individuos machos solitarios, en ambas estaciones, en las dos poblaciones. Los grupos mixtos, familiares yde solteros mostraron calidades de dieta superiores, con variabilidad a lo largo de las diferentes estaciones muestreadas. Estos patrones no son exactamente coincidentes en las dos poblaciones analizadas. Se discuteen profundidad acerca de estas evidencias, atribuyendo a los rangos de acción de las diferentes unidades estas diferencias en la calidad de la dieta. Con respecto a las relaciones entre la demanda energética en función de la calidad de dieta, se han detectado correlaciones cuadráticas en ambas poblaciones. Este último patrón es atribuible a dos factores que estarían operando de manera paralela, uno de naturaleza energético-nutricional y un segundo factor de características energético-reproductivas. Estas evidencias, han permitido inferir una serie de hipótesis referidas a la administración de los recursos energéticos, dando lugar a la formulación de un nuevo modelo conceptual para guanacos silvestres. Este modelo busca explicar la modulación estacional de los mediadores fisiológicos de la demanda energética, en función de la calidad de la dieta, dentro y fuera de la estación reproductiva Estos resultados permiten profundizar y reforzar la idea de una especie con fuertes atributos adaptativos en términos ecofisiológicos, ampliando el conocimiento de la biología del guanaco. Las nuevas contribuciones, aportadas en el presente trabajo, permiten acceder a una mirada más integral de las dinámicas y las características de estos ambientes, generando nueva información que sirve de herramienta para el manejo de los recursos en estas áreas.

Descripción: Fil: Seijó, Margarita I.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: La costa argentina presenta un comportamiento heterogéneo, quedepende de distintos parámetros. La variación en la intensidad del procesoerosivo permite dividir la costa según zonas, que responden al clima de olas,nivel del mar, resistencia a la compresión y meteorización de los afloramientos,características geomorfológicas y diseño de contorno costero. La energía de olas, según datos obtenidos, no muestra patrones queconsecuentemente permitan efectuar una zonificación, según potenciaincidente sobre la costa. Esta imposibilidad se adjudica a la falta de datosoceanográficos. De la observación de olas y geoformas consecuentes sedetermina que la energía de olas en la costa ubicada aproximadamente al surdel paralelo 42, es mayor que en el área norte. Esta observación puede estarenmascarada por una menor exposición del contorno a las olas. El nivel del mar como influyente en los procesos erosivos, se refiere alos eventos de tormenta y amplitudes de marea, que permitan una incidenciade olas a niveles superiores sobre la línea de costa. La incidencia de tormentasy los rangos de marea mayores, también se dan en el área austral. Los valores de resistencia a la compresión, que determinan el grado deerosionabilidad de los afloramientos indican que las rocas más resistentescorresponden a los afloramientos de volcanitas y sedimentitas muyconsolidadas. Los afloramientos con bajo grado de consolidación, en generalcorresponden al Terciario y Pleistoceno, y presentan un bajo grado deresistencia a la erosión. La incidencia de olas, sumada a las características del contorno y ladisponibilidadde sedimentos sueltos sobre la línea de costa indican grados dederiva litoral, que se traducen en movilidad, exposición a las olas de losafloramientos y consecuente erosión sobre la costa. En los principales ríos patagónicos, no se dan las condicioneshidráulicas para el transporte de gravas. La falta de aporte de material tamañograva por parte de los ríos actuales a la costa, indica que las formas deacreción presentes en la faja litoral, constituidas por esa fracción clástica,corresponden a formas relícticas. La condición de formación de esos depósitos se daba en períodos enque los caudales imperantes estaban en relación con los tamaños de cauce. La erosión se da primero por falta de acumulación directa (la carga delos ríos no llega a la línea de costa) y segundo por el efecto de erosión inducidaya que al no saturarse los flujos por el aporte fluvial,estos lo hacen a expensasde la erosión de los afloramientos costeros. El nivel de base de los rios del Pleistoceno se hallaba unos 150 metrosmás bajo que en el presente, por ello es de esperar la presencia de líneas decosta sumergidas con abundante material proveniente de los mismos duranteesos períodos. La presencia de cañones submarinos en el área costera, encontinuidad con cauces de ríos actualmente efímeros o permanentes de bajacapacidad erosiva, indica un cambio climático y no sólo un cambio en el niveldel mar. Entre las características de las geoformas de erosión marina, sedescribe la presencia de Terraplenes Litorales (Ramparts). Dentro de un modelo de evolución, elaborado en función de la relaciónentre olas incidentes y contorno costero, se presentan las tendencias a laerosión o acumulación de la faja costera. Los afloramientos del Terciario, presentes en el área costera patagónica,se hallan en erosión. Durante el Cuatemario alto, la costa fue afectada por variacionesrelativas del nivel del mar y cambios climáticos que desactivaron en granmedida el sistema fluvial. La composición arenosa de las playas patagónicas habría provenido,principalmente, de la erosión de las rocas del Terciario mientras que las gravasprovienen de los sedimentos glacifluviales genéricamente denominados "Rodados Patagónicos".

Descripción: La determinación de las tendencias de las variables ambientales costeras a nivel local, en el marco de los cambios esperables tanto globales como hemisféricos, se está tornando una tarea imprescindible. La importancia de esto radica, desde un punto de vista práctico y a largo plazo, en la posibilidad de evaluar el riesgo costero y sus consecuencias tanto humanas como económicas. La pérdida de humedales costeros, como las marismas, parece ser una de las consecuencias del cambio del clima. En el área de la bahía Samborombón, el humedal mixohalino más extenso de Argentina, fueron documentados procesos erosivos significativos, que parecen haberse incrementado. El objetivo de esta tesis es determinar posibles cambios en el clima de olas de la bahía Samborombón y estudiar su influencia en el posible retroceso de la costa. Se evaluó el cambio de la línea de costa a corto plazo mediante mediciones in situ entre 2010 y 2017, en tres sitios del Río de la Plata (RdP) Exterior. Se utilizaron puntos fijos al pie del micro acantilado, donde se estimaron tasas de retroceso comprendidas entre 0.4 y 1.3 m/año. En ninguno de los sitios monitoreados se encontraron signos de progradación. Mientras que a largo plazo (1956 – 2013), se analizaron imágenes remotas del norte de la bahía, mediante un análisis de transectas perpendiculares a la línea de costa (software DSAS) dentro de un Sistema de Información Geográfica. La velocidad de retroceso media obtenida para este análisis fue de 3.9 m/año. Para el análisis del clima de olas, se utilizaron resultados de simulaciones numéricas obtenidos con el modelo SWAN, los cuales se validaron con observaciones in situ y satelitales. Dichas simulaciones resultaron satisfactorias para describir el oleaje de la zona de estudio para el período 1971-2012. Las tendencias de la altura de ola significativa (Hs) direccional fueron estimadas a partir de las Hs medias mensuales resultando tasas de crecimiento significativas en todos los nodos estudiados para las direcciones E y NE, con máximos valores (entre +2 y +3% por década) en los sectores central y S de la bahía Samborombón. Asimismo se computó un aumento en la frecuencia de ocurrencia de olas provenientes del E y NE, entre +3.8 y +7.3% por década, y se apreció una disminución para las direcciones N, NW y W en todos los sitios costeros. El flujo neto anual de energía de ola paralelo a la costa (PlsN), el cual es directamente proporcional al transporte potencial de sedimentos, mostró un patrón convergente en la bahía Samborombón. Se obtuvieron tendencias positivas de PlsN en ambas ramas del flujo convergente en el centro/Sur de la bahía, particularmente en dos sitios, uno ubicado al N (frente a Canal 15) y otro al S de la bahía (frente a la desembocadura del río Ajó). Los resultados obtenidos en esta Tesis evidencian cambios en el clima de olas costero como así también en el del flujo de energía asociado en la zona litoral de la bahía. Finalmente, se concluye que las características del actual clima de olas y los cambios inferidos favorecen la erosión y el retroceso de la costa en la bahía.

Descripción: Las alteraciones epigenéticas cumplen un rol importante en la carcinogénesis, enparticular, las islas CpG de las regiones promotoras de genes supresores de tumor (GST)son consideradas un importante mecanismo epigenético de inactivación génica. Elmieloma múltiple (MM) está caracterizado por la proliferación neoplásica de célulasplasmáticas monoclonales. El curso natural de la enfermedad puede progresar de gamopatía monoclonal de significado incierto (MGUS) a MM. Durante este proceso, múltiples alteraciones genéticas se adquieren secuencialmente, y la metilación aberrante de promotores puede ser uno de los pasos involucrados en dicha progresión. En este estudio evaluamos el estado de metilación de los siguientes GST: p15INK4B, p16INK4A, p14ARF, SOCS-1, p27, RASSF1A y p73, con el fin de determinar si estaban involucrados en la evolución de MGUS a MM. Se estudiaron 44 pacientes con MM (21hombres; edad media 68 años; Estadío clinico Durie-Salmon I: 20%, II: 14% y III: 66%) y 21 pacientes con MGUS (6 hombres; edad media 68 años). Todos los pacientes dieron unconsentimiento informado y el estudio fue aprobado por el Comité de Etica de nuestra institución. Se utilizaron sangre periférica de 10 individuos normales y CpGenome Universal Methylated DNA (Intergen) como controles negativos y positivos, respectivamente. El ADN fue extraído de las células de médula ósea de los pacientes y de sangreperiférica de los controles con el método de fenol/cloroformo. El estado de metilaciónfue analizado usando la técnica de Methylation Specific PCR (MSP). Se utilizaron el test t de Student y el test Exacto de Fischer para el análisis estadístico. Lasobrevida (SV) medida desde el diagnóstico hasta el último seguimiento o la muerte,fue estimada por el método de Kaplan-Meier y comparada por el test de log-rank. Secalculó el índice de metilación (IM; relación entre el número de genes metilados y elnúmero de genes analizados). La metilación de SOCS1 fue significativamente más frecuente enpacientes con MM (52%) que con MGUS (14%) (p=0,006). Las frecuencias de metilaciónde p14ARF, p15INK4B y p16INK4A fueron comparables en ambas entidades; 29%, 32% y 7%,respectivamente para MM; y 29%, 29% y 5% respectivamente, para MGUS. El gen TP73 mostró tendencia a mayor metilación en MM (45%) que en MGUS (33%). Se observó ausencia de metilación de p27 en todos los casos. Mientras que el porcentajede MM con al menos un gen metilado (84%) no mostró diferencias con el de MGUS (66,7%), la media de IM de MGUS fue menor (0,16; rango: 0,1-0,43) que en MM (0,24; rango: 0,14-0,71) (p<0,05). Ninguno de los genes evaluados estaba metilado en los individuos normales. No se halló correlación con: edad, nivel de componente M, tipo de cadenas livianas,estadío clínico de la enfermedad, hemoglobina, albúmina sérica, calcio, B2 microglobulinay LDH. En MM la metilación aberrante de p15INK4B estuvo significativamente asociadacon sexo masculino (p=0,009) y con el isotipo IgG (p=0,038). En MGUS, la metilaciónde SOCS1 aumentó con la edad (p=0,001). Las frecuencias de metilación similares dep14ARF, p15INK4B y p16INK4A observadas en MM y MGUS sugerirían que estos genes no estarían involucrados en la progresión de MGUS. Sin embargo, la metilación de SOCS1 fue significativamente más frecuente en MMque en MGUS, sugiriendo que la metilación de este gen podría estar involucradaen al evolución clonal de MGUS a MM. SOCS1 es un regulador negativo de la señalde citoquinas, de importancia en el desarrollo y la diferenciación de linfocitos. Su silenciamiento podría resultar en una respuesta a citoquinas aumentada, que podría favorecer el desarrollo neoplásico. El presente trabajo constituye la primera evaluación del estado de metilación de GST en MM y MGUS realizada en Argentina.

Descripción: Las actividades humanas han modificado una gran proporción de la superficie terrestre. Sus impactos son extensos en particular sobre la biodiversidad y los bienes y servicios que proveen los ecosistemas. Los humedales son uno de los ecosistemas más afectados por el cambio en el uso del suelo poniendo en riesgo su elevada biodiversidad y los numerosos bienes y servicios ecosistémicos que brindan. En Argentina, el Bajo Delta del Río Paraná es un extenso mosaico de humedales que sostiene una alta biodiversidad. Sin embargo, es una región de alta vulnerabilidad frente a procesos naturales y actividades humanas. En los últimos años el incremento en la actividad ganadera y forestal en la zona ha propiciado una intensificación de las prácticas de manejo de agua (terraplenes, diques y zanjas) que provocan el desecamiento de la vegetación palustre generando un proceso de pampeanización del humedal. Los cambios en el uso y las coberturas del suelo pueden generar cambios e impactos negativos en la biodiversidad. El objetivo de este trabajo fue evaluar el cambio en la diversidad de aves asociado al cambio en el uso del suelo. En primer lugar, se caracterizó el cambio en el uso y las coberturas del Bajo Delta en los últimos 14 años. Mediante imágenes satelitales Landsat 5 TM y 8 OLI se desarrollaron mapas de cobertura y uso del suelo para 1994/99 y 2013, y con árboles de regresión potenciados (BRT) se cuantificó la influencia de variables socioeconómicas, biofísicas y de manejo en la pérdida de humedales (cobertura de vegetación palustre). En segundo lugar, se identificaron los efectos del cambio en el paisaje sobre las aves utilizando dos aproximaciones: un análisis espacial de la riqueza de especies asociada a la estructura del paisaje actual resultante del proceso de pampeanización, y un análisis temporal delos cambios en la riqueza de especies asociados a los cambios en el paisaje en los últimos 14 años. Por un lado, se estudió la relación entre las aves y la composición y configuración del paisaje. Se muestrearon aves por censo de puntos cubriendo todas las coberturas y usos del suelo del Bajo Delta no insular y se cuantificó la influencia de la estructura del paisaje y usos en la riqueza y densidad de aves. Por otro lado, se evaluó la relación entre el cambio temporal en la comunidad de aves (1997-99 vs. 2011-12-13) y el cambio temporal en la composición del paisaje (1999 y 2013). A partir de un muestreo de aves por censo de puntos realizado en 1997 y 1999 en el Bajo Delta no insular, se remuestrearon los mismos puntos en 2011, 2012 y 2013 y se analizó el cambio temporal en la riqueza y composición de aves asociado al cambio en el uso y la cobertura del suelo. En sólo 14 años, un tercio de la cobertura de vegetación palustre del Bajo Delta se perdieron (163.000ha), el 70% de los mismos fueron convertidos en tierras ganaderas y el 20% en plantaciones forestales. Las variables que representan el uso del suelo resultaron los factores determinantes de la pérdida de vegetación palustre, en particular la densidad ganadera y el área endicada. Aunque la densidad de ganado no tiene un efecto negativo sobre la riqueza de aves, la homogeneización del paisaje (producto de la pampeanización del Bajo Delta no insular) caracterizada por una reducción de la cobertura de vegetación palustre y una expansión de la cobertura de pastizales, tuvo un efecto negativo sobre la riqueza total de aves y por gremio de hábitat. La comunidad de aves cambió de 1997/99 a 2011/13. La especies de humedal fueron las más afectadas especialmente si se comparan años húmedos, indicando un efecto importante tanto de la dinámica hidrológica natural como de los cambios en las coberturas del Bajo Delta no insular. A largo plazo, la comunidad de aves estaría controlada por la estructura del paisaje, aunque respondería débilmente a los cambios en la estructura del paisaje en sólo 14 años. En resumen, el proceso de pampeanización del Bajo Delta se ha extendido, convirtiendo grandes extensiones de vegetación palustre en pastizales secos aptos para la actividad ganadera. Las aves del Bajo Delta no insularresponden a esta pampeanización con cambios en la composición de especies. Por ello, es urgente y necesaria la gestión sostenible de los humedales del Delta del río Paraná. Los resultados de este trabajo pueden ser insumos para el desarrollo de normativas nuevas y otras existentes que, de manera efectiva, desaceleren la pérdida de humedales en esta región tan importante no sólo por la alta biodiversidad que alberga sino por los bienes y servicios que brinda a la comunidad local y a los pobladores de la principal área urbana de Argentina.

Descripción: (NMDAR) en interneuronas corticales es central para la patofisiología de la esquizofrenia. En un trabajo previo de nuestro grupo, la ablación restringida del NMDAR a interneuronas parvalbúmina positivas del sistema córtico-límbico (KO) durante el desarrollo postnatal temprano resulta en fenotipos compatibles con esquizofrenia en la adultez. Para adentrarnos en la patofisiología subyacente analizamos el impacto de la mutación y el desarrollo sobre diferentes procesos fisiológicos en un área cortical involucrada en la esquizofrenia. Para ello colocamos tetrodos en la corteza prefrontal media (mPFC) de ratones anestesiados controles y KO, juveniles y adultos. Encontramos un incremento significativo en la frecuencia de disparo espontánea y una sincronización alterada con ritmos locales y distales en las neuronas de ratones KO juveniles y adultos. Dado que los ratones KO juveniles carecen del NMDAR pero no muestran el fenotipo compatible con esquizofrenia, los cambios mencionados anteriormente no pueden explicar las anormalidades comportamentales de los adultos. El podado sináptico normal de las aferencias locales y distales de la mPFC ocurre durante la adolescencia. Analizamos la conectividad funcional de la vía hipocampo ventral-corteza prefrontal media (vHP-mPFC) antes y después de la adolescencia. Los ratones adultos KO presentan una amplitud disminuida de la respuesta evocada en la mPFC. También medimos el estado de plasticidad del circuito y encontramos que los adultos KO y no los juveniles son más susceptibles de sufrir depotenciación a largo plazo (LTD). Proponemos que la ablación temprana del NMDAR en interneuronas lleva a un circuito cortical sobreexcitado e incordiando que propicia la depotenciación durante la adolescencia. Esto resulta en una conectividad funcional disminuida en adultos y podría subyacer el fenotipo compatible con esquizofrenia.

Descripción: Se evaluó la eficiencia de la aplicación de diferentes dosis de ozono en fase acuosa y/o luz ultravioleta de onda corta, aplicados en forma individual o en combinación, como tecnologías de conservación de procesamiento mínimo, en frutos de arándano (Vaccinium corymbosum L.). Los tratamientos de ozono disminuyeron significativamente el crecimiento de la micobiota nativa y Botrytis cinerea. Los cambios provocados por el ozono en las propiedades mecánicas y el color fueron mínimos pero el porcentaje de pérdida de peso durante el almacenamiento se incrementó significativamente, principalmente a las mayores dosis. Los frutos ozonizados presentaron el epicarpo levemente afectado, observándose compactación tangencial, disrupciones de la pared tangencial externa y un ligero incremento en los espacios intracelulares. El ozono provocó un aumento significativo en los compuestos bioactivos evaluados. En los frutos irradiados con luz UV-C se observó una reducción en el crecimiento de la micobiota nativa y de Botrytis cinerea. En general no se observaron mayores modificaciones en las propiedades mecánicas en el almacenamiento y se encontraron cambios en el color en relación al control. El tratamiento provocó pérdidas de peso significativas. Las alteraciones estructurales por efecto de luz UV-C fueron menores. La luz UV-C no indujo cambios significativos en los compuestos bioactivos y la capacidad antioxidante respecto del control. Los tratamientos combinados no produjeron un aumento significativo en la inhibición de la micobiota nativa y de Botrytis cinerea inoculado en los frutos respecto a los tratamientos individuales, ni una mejora en los parámetros de calidad evaluados. Ambos factores emergentes, aplicados en forma individual como pretratamientos al almacenamiento refrigerado, son alternativas para incrementar la vida útil de arándanos sin alterar apreciablemente su calidad. Más aún, los frutos ozonizados mostraron un incremento en el contenido de componentes bioactivos.

Descripción: El conocimiento de la marea es de gran importancia para todas las regiones costeras delmundo, sobre todo aquellas que poseen grandes ciudades ubicadas sobre las costas. Aunqueclásicamente la marea ha sido pensada como un fenómeno estable y determinístico, una serie deestudios recientes sugieren que las mismas podrían sufrir cambios significativos a lo largo deltiempo, como consecuencia de cambios morfológicos, de la ocurrencia de ciclos en el forzanteatmosférico del océano o del aumento del nivel del mar debido al cambio climático. Lasconsecuencias ambientales, sociales y económicas que podrían provocar cambios en las mareas sonamplias y variadas, e involucran las inundaciones, la generación de energía renovable, el transportede sedimentos, la navegación, la morfología costera y de fondo, la ubicación de los frentes demarea y los hábitats inter-mareales y la circulación termohalina, entre otros aspectos. Los cambiosde escala grande podrían tener impacto global, pero aún los cambios más regionales y locales debenser comprendidos tanto como sea posible para incorporarlos en los esquemas de predicción de lamarea y los modelos de marea que se utilizan con muchos fines prácticos. Por lo tanto, el estudio dedichos cambios ya sea a través del análisis de observaciones históricas como de modeladonumérico es muy relevante. En consecuencia, el objetivo general de esta Tesis es estudiar ycuantificar potenciales cambios en la propagación de la marea en las aguas costeras argentinas quepuedan resultar del cambio climático y la variabilidad climática, así como comprender losmecanismos intervinientes. La primera parte tiene como objetivo particular estudiar el impacto deun potencial aumento del nivel del mar que pudiera ocurrir como consecuencia del cambioclimático en la propagación de la marea en la Plataforma Continental Argentina, contribuir a lacomprensión de los mecanismos de los potenciales cambios e identificar las áreas más sensibles. Enla segunda parte se postula que, en el caso particular del Río de la Plata, las constantes armónicasde marea podrían también cambiar con la descarga continental, que muestra significativasvariaciones temporales asociadas a los ciclos de El Niño - Oscilación del Sur. Éste podría ser unefecto adicional y potencialmente mucho más significativo que el aumento del nivel del mar porefecto invernadero, al menos en el corto plazo. El segundo objetivo particular de esta Tesis fue, porlo tanto, estudiar el potencial impacto de los ciclos naturales de variabilidad inter-anual de ladescarga continental en la propagación de la marea en el Río de la Plata, comprender los procesosfísicos involucrados y determinar la porción del estuario que puede ser afectada por este fenómeno. El estudio, en general, es realizado mediante el análisis de las pocas observaciones históricasdisponibles y simulaciones numéricas.

Descripción: Este trabajo de tesis se propone avanzar en el modelado estadístico climático regional de extremos de precipitación en el sudeste de Sudamérica (SESA) y su proyección bajo cambio climático. Se identificaron las principales características de la lluvia extrema –según su frecuencia, intensidad y arealidad– considerando múltiples observaciones de precipitación, reanálisis y modelos climáticos regionales (RCMs) y globales (GCMs). Se encontraron estructuras sinópticas que favorecen los extremos en áreas sectorizadas de SESA, que los modelos logran generalmente reproducir aunque mostrando limitaciones en la ubicación e intensidad de la precipitación. Esta clasificación se empleó para construir modelos estadísticos de reducción de escala (ESD) utilizando modelos lineales generalizados condicionados a cada patrón, que fueron comparados con otras técnicas ESD mostrando un buen desempeño en la lluvia y sus extremos. Se aplicó una selección de modelos ESD a múltiples GCMs, evidenciando que la mayoría muestran valor agregado. Los modelos estadísticos son sensibles a los GCM que los forzaron, aunque la elección de técnica ESD también introduce diferencias. Las proyecciones muestran aumentos en la precipitación, asociados a más eventos extremos, con tasas de cambio consistentes entre simulaciones hasta mediados de siglo, cuando surge una mayor dispersión, destacando el beneficio del ensamble multi-modelo.

Descripción: La activación del eje hipotálamo-hipófiso-adrenal ha sidoampliamente descripta tanto en pacientes como en modelos animales deinsulinorresistencia (IR). Sin embargo, el efecto del desarrollo de esteestado de IR sobre la función adrenal no ha sido dilucidado por completo. En este sentido, el objetivo del presente trabajo de tesis fue estudiar loscambios morfológicos y funcionales que ocurren en la glándula adrenal enanimales con insulinorresistencia inducida por una dieta rica en sacarosa (DRS). Los animales del grupo DRS mostraron un mayor peso corporal y desus depósitos lipídicos junto con una alteración en el perfil metabólicocaracterística de la IR en la séptima semana de tratamiento. En cuanto a lafunción adrenal, estos animales presentaron mayores niveles basales decorticosterona circulantes y una respuesta disminuida al ACTH exógeno. Enforma paralela observamos un aumento en los niveles de expresión deproteínas claves de la esteroidogénesis (StAR y CYP11A1) y unadisminución en la expresión del receptor de ACTH (MC2R). Las glándulasadrenales del grupo DRS fueron más pequeñas y livianas que las de loscorrespondientes controles y mostraron un aumento en la infiltraciónlipídica con predominio de triglicéridos. Demostramos también que losanimales alimentados con DRS desarrollan en forma local un estadoinflamatorio evidenciado por el aumento en la expresión de citoquinas ymarcadores proinflamatorios, en la actividad de NOS y en la expresión de COX-2. También observamos un incremento del sistema de HO-1,posiblemente como respuesta a la generación de estrés oxidativo en lacorteza adrenal. La desregulación en la actividad de estos sistemasposiblemente también afecte la esteroidogénesis adrenal. Finalmente estudiamos el efecto de dos tratamientosinsulinosensibilizadores. Tanto el tratamiento farmacológico como la implementación del protocolo de ejercicio lograron prevenir lasalteraciones funcionales y morfológicas observadas en la corteza adrenalde los animales alimentados con DRS.

Descripción: La sobreexplotación por cacería es una de las amenazas más importantes para lasupervivencia de los mamíferos a escala mundial, siendo los ungulados uno de los grupos demamíferos más afectados. En algunos casos el aumento de la caza está asociado a la aperturade accesos que facilitan la llegada de cazadores a sitios previamente inaccesibles. El guanacoha sido extirpado del 70% de su rango de distribución debido al impacto de actividadeshumanas como la caza y la ganadería. En esta tesis presento un análisis de los cambiospoblacionales y comportamentales del guanaco asociados al incremento del acceso decazadores a través de una extensa red de caminos de exploración petrolera en el norte de Patagonia y la reversión de algunos de esos cambios luego de 10 años de cierre de caminos yaumento del contralor. En el capítulo 1 analizo los cambios en la densidad, estructura social y proporción decrías de guanaco en un área de 15.000 km² en el norte de la provincia de Neuquén en elperíodo 1982 a 2007. Estimé estas variables por medio de transectas de conteo estacional deguanacos a lo largo de caminos secundarios durante 2002-2007 y las comparé con datosdisponibles para 1982-3 de transectas terrestres y aéreas. Luego de 25 años de caza furtivadesde una amplia red de caminos petroleros y con escaso contralor por guardas las densidadespromedio disminuyeron 93-96% en tres sitios. El tamaño promedio de los grupos se redujo de 11.4 (ES=1.4) y 8.1 (ES=1.6) a 5.0 (ES=0.7) y 5.0 (ES 0.4) guanacos por grupo en dos de los sitiosde muestreo. Las proporciones de crías no cambiaron significativamente. En base a unacomparación entre siete sitios con diferente densidad de caminos petroleros, puntos deacceso desde caminos principales y densidad de ganado concluí que la densidad en 2002-2007estuvo asociada de manera negativa principalmente con la disponibilidad de puntos de accesoa los caminos petroleros y en menor medida con la densidad de ganado. En el capítulo 2 presento los resultados de un experimento de restricción de cazafurtiva en un sector de 3.990 km² del área de estudio considerada en el capítulo 1. Entre 2002y 2005 diseñé junto a mi grupo de trabajo y técnicos provinciales una serie de cierres pararestringir el acceso por cazadores furtivos. Hipoteticé que la caza furtiva limita la abundanciade guanacos y provoca cambios en su estructura social, distribución y comportamiento através del aumento de la mortalidad y el acoso y que si la caza es restringida sus efectos serevierten. En febrero de 2006 una empresa petrolera, por solicitud de la Dirección de Áreas Protegidas de Neuquén, cerró 376 caminos petroleros en los sitios que indiqué y en 2010reforzó 94 de esos cierres en un área de 2200 km² que abarcó cinco de los sitiosexperimentales, manteniéndose tres sitios sin cierres. Paralelamente a partir de 2005 la Dirección de Áreas Protegidas y la de Contralor incrementaron el esfuerzo de patrullaje. Entre 2002 y 2015 registré en los ocho sitios el esfuerzo de patrullaje y el ingreso de vehículos noautorizados por medio de sensores de tránsito y monitoreé la densidad estacional, estructurasocial, proporción de crías y comportamiento de escape relevando 6.417 km en 37 transectaspermanentes. Clasifiqué a los ocho sitios por esfuerzo de restricción de caza alto, medio y bajopor el porcentaje de caminos cerrados y los kilómetros recorridos mensuales para contralorpor guardafaunas y guardaparques. El contralor se incrementó en el período 2005-15. El número de vehículos por mes no autorizados que registré con los sensoresdisminuyó significativamente en todos los sitios de estudio y fue menor en los sitios conesfuerzo medio y alto de restricción. Registré un total de 5.978 grupos de guanacos en lastransectas. En dos de los cinco sitios con esfuerzo medio y alto de restricción de caza huboaumentos de densidad de guanacos. En otros dos de esos cinco sitios hubo aumentos inicialesde densidad pero en ambos las densidades se redujeron significativamente durante el restodel estudio. Estas tendencias declinantes pudieron estar asociadas a la actividad de caza de lasúnicas dos familias de pobladores locales que cazaron con frecuencia en el área de estudio. Enlos tres sitios sin cierre de caminos (esfuerzo bajo de restricción) y en otro de los sitios deesfuerzo medio no hubo aumentos de densidad durante el estudio. La distancia deacercamiento hasta escape aumentó en todos los sitios con esfuerzo medio y alto derestricción de caza y no se modificó en los sitios con esfuerzo bajo. El tamaño de gruposfamiliares y de solteros y la proporción de solitarios no respondieron positivamente enninguno de los sitios. Otros factores que pueden haber afectado mis resultados fueron lasdistancias de cada sitio a las ciudades de las que provienen los cazadores que operan convehículos y las distancias a fuentes de inmigración poblacional de guanacos. Mis resultadosilustran la necesidad de enfoques de largo plazo y gran escala espacial para entender losprocesos biológicos que afectan a las poblaciones sometidas a intensa caza furtiva y proveefundamentos para planificar acciones de recuperación y monitoreo de poblaciones y deevaluaciones de la efectividad de las intervenciones. En el capítulo 3 evalué la contribución relativa de la restricción de caza furtiva, ladensidad relativa de ganado y la productividad primaria (EVI) sobre la densidad de guanacosdurante un período de restricción progresiva de la caza). Analicé la asociación entre lasestimaciones de densidad anuales de guanacos durante 2004-10 y las covariables mencionadasmediante un modelo lineal mixto de tipo Poisson considerando el año como variable aleatoria. El análisis indicó que la productividad primaria y la tasa de encuentro de ganado tuvieronasociaciones negativas con la densidad de guanacos y que hubo más guanacos en sitios conalta y media restricción de caza. Sin embargo, para ganado y EVI los coeficientes de laregresión fueron muy bajos, indicando que estas dos variables tuvieron escasa influencia sobrela densidad de guanacos. El ganado en la región tuvo una tendencia declinante en el períodode estudio. Este estudio resalta la importancia de la restricción de caza furtiva (a través de unconjunto de acciones como el cierre de caminos y el aumento de contralor como algofundamental en la recuperación de guanacos a través de los años. Esta tesis es la primera evaluación sistemática de las respuestas poblacionales ycomportamentales del guanaco a la caza y su restricción. En el estudio consideré diferentesescalas temporales y espaciales para evaluar los efectos de la caza favorecida por el desarrollohidrocarburífero y compararlos con otros disturbios antrópicos y ambientales. Mis resultadospueden ser aplicados a la remediación de los impactos de la caza y al monitoreo de laefectividad de las acciones implementadas y de las respuestas de las poblaciones a dicharemediación.

Descripción: En esta tesis se calcula y analiza la autofuerza sobre partículas puntuales asociadas a campos escalares masivos y no masivos acoplados a geometrías cónicas con simetríıa cilíndrica. Se trabaja con topologías triviales y no triviales generadas matemáticamente mediante el pegado de dos subvariedades aplicando el formalismo de thin-shells. En las primeras dos secciones se explican algunos conceptos generales como la noción de autofuerza, las características de las geometrías cónicas con simetría cilíndrica, las cuerdas cósmicas y el entorno téorico en el que surgen. En las secciones 3 y 4 se analiza específicamente la autofuerza sobre campos escalares no masivos y masivos respectivamente. En cada caso se definen zonas de estabilidad donde se eviten divergencias en las soluciones, se renormaliza el campo y se analizan gráficamente los resultados. Las conclusiones se presentan en la sección 5. Se incluyen dos apéndices donde se sintetiza el formalismo de thin-shells y se aplica al cálculo de estabilidad de cáscaras en agujeros de gusano en teorías de gravedad más allá de la Relatividad General.

Descripción: El Ca²+ es un eslabón clave entre la llegada del potencial de acción al terminal sináptico y laliberación del neurotransmisor (Katz, 1969; Katz & Miledi, 1970). El rápido incremento en [Ca²+]ext que ocurre ante la despolarización de la membrana terminal es el resultado de laapertura de canales de Ca²+ dependientes de voltaje (CCVD) que permiten la entrada de Ca²+desde el medio extracelular (Llinás y col., 1976; Augustine & Charlton, 1986). Basándose ensus características biofísicas y farmacológicas se han descripto varias clases de CCVD, loscuales han sido clasificados en los tipos T, L, N y P (Bean 1989; Llinás y col., 1992; Olivera ycol., l994; Dunlap y col., 1995). Más recientemente han sido descriptos los canales de tipo Q,un tipo de canal estrechamente relacionado con los de tipo P, y los canales tipo R, los cualesson resistentes a cualquiera de las drogas y toxinas antagonistas de los otros tipos de CCVD (Zhang y col., l993; Randall & Tsien, l995). Se ha mostrado que varios de estos CCVD,particularmente los de tipo N, L, P y Q, están involucrados en la liberación delneurotransmisor en diferentes sinapsis (ver Olivera y col., 1994; Dunlap y col., 1995). En Ia placa neuromuscular madura del ratón, la transmisión sináptíca es mediada por laentrada de Ca²+ a través de canales de tipo P (y/o Q) (Uchitel y col, l992; Protti & Uchitel, 1993; Bowersox y col., 1995; Hong & Chang, 1995; Wright & Angus, 1996). En estapreparación se ha demostrado que la w-AgaIVA, un bloqueante de CCVD de tipo P y Q,ejerce un fuerte efecto inhibitorio sobre la liberación de [³H]ACh (Wessler y col., 1995), lascorrientes presinápticas de Ca²+ y sobre la liberación evocada neuralmente y por alto K+ (Protti & Uchitel, l993, Hong & Chang, 1995; Bowersox y col., 1995; Wright & Angus, 1996). En vista de la falta de efectos de la (w-CgTx (Sano y col., 1987, Protti y col., 1991; Bowersox y col., 1995) y las DHPs (Atchinson, 1989), se piensa que los canales de tipo N y Lno tienen una participación significativa en el proceso de liberación en condiciones normales. En la placa neuromuscular de la rana, se demostró que la w-CgTx ejerce un fuerte efectoantagónico sobre la liberación (Kerr & Yoshikami, 1984; Sano y col., 1987; Koyano y col., 1987) mientras que los antagonistas de los canales de tipo L resultan ineficaces (Sano y col., 1987). Se ha demostrado también que los sitios de unión de la w-CgTx están co-localizadoscon las zonas activas de liberación dela presinapsis enfrentados justo a los sitios de unión dela α-bungarotoxina en la postsinapsis (Robitaille y col., 1990; Cohen y col., 1991). Estasevidencias indican que los canales de tipo N se hallan involucrados en el proceso deliberación en este sistema. Durante el curso de la maduración de la unión neuromuscular devertebrados, se han reportado cambios en la farmacología de los CCVD acoplados al procesode liberación en aves (Gray y col., l992) y anfibios (Fu & Huang, 1994). Se desconoce, sinembargo, la farmacología de los canales de Ca²+ acoplados al proceso de liberación en lassinapsis recientemente formadas de la unión neuromuscular de mamíferos. Objetivos El propósito de este estudio fue evaluar por medio de técnicas electrofisiológicas yfarmacológicas que tipos de CCVD están involucrados en la liberación del neurotransmisoren la placa neuromuscular normal de mamíferos (ratón) y anfibios (rana) y correlacionar elperfil farmacológico del proceso de liberación con el de las corrientes presinápticas de calcioy de potasio activada por calcio, Ica, y Ikca, respectivamente. Otro objetivo del presente trabajofue evaluar si se producen cambios en los CCVD acoplados al proceso de liberación durantela reinervación de la placa neuromuscular. Métodos Para estudiar la placa neuromuscular normal del ratón, los experimentos se llevaron a cabo enel músculo diafragma o en el levator auris longus de ratones macho adultos de la cepa Swissde 20-30 g de peso corporal. Para estudiar las placas del ratón durante la regeneración, seutilizaron ratones adultos a los cuales se les había provocado un daño “crush” a la ramaauricular posterior del nervio facial que inerva al levator auris izquierdo. Los animales controly los desnervados en diferentes etapas luego de la restauración de la transmisión sinápticafueron anestesiados e inmediatamente desangrados. Par estudiar la placa neuromuscular de larana los experimentos se realizaron en el músculo cutaneous pectoris de Rana caluesbiana de 40-60 g de peso corporal. Las ranas fueron matadas por doble punción (medular-cerebral). Elmúsculo correspondiente, junto con el nervio motor que lo inerva, fue removido y luegodisecado en una caja de Petri con base de Sylgard conteniendo la solución de Ringer normaladecuada para cada preparación. Para ratón, (en mM): NaCl, l37; KCl, 5; CaCl2, 2; MgSO4, 1; NaHCO3, 12; Na2HPO4, 1; glucosa, 11, continuamente burbujeados con 95% O2/5% CO2. Para rana, (en mM): NaCl, ll5; KCl, 2; CaCl2, l.8; MgCl2, 1 y HEPES, 5; pH 7.3. Lapreparación fue luego transferida a la cámara de registros a la cual se le suministró lasdistintas soluciones de trabajo. Los experimentos fueron realizados a temperatura ambiente (19-23 °C), excepto en algunos casos en los cuales se varió la temperatura de la cámara deregistros. la misma fue controlada (i l °C) por medio de dispositivos termoeléctricos Peltier. Los potenciales de placa evocados (EPPs) y espontáneos (MEPPs) fueron registradosintracelularmente con microelectrodos de vidrio convencionales llenados con KCl 3M (resistencia 10-20 MΩ). El contenido cuántico de la respuesta evocada en solución de Ringernormal se evaluó por el método de la varianza (Martin, 1966). La contracción muscular fuesuprimida por medio de d-tubocurarina. Luego de impalar una fibra muscular, el nervio fueestimulado, mediante un electrodo de succión, en forma continua durante 1 min a 0.5 Hz yluego se registraron 50-100 EPPs sucesivos. En las solución de bajo Ca²+-alto Mg²+, elcontenido cuántico se evaluó por el método directo o por el método de las fallas (Martin, 1966). Las corrientes presinápticas se registraron mediante microelectrodos de vidrio llenadoscon NaCl 2M (resistencia 5-15 MΩ) insertados, bajo control visual, en la vaina perineural delas ramas finas del nervio (Mallart, l985a). Los músculos fueron incubados en solución de Ringer normal en presencia d-tubocurarina 30-50 μM. La Ica y la Ik(ca) se obtuvieronmediante el agregado de bloqueantes de los canales de potasio. Para discriminar los distintos tipos de canales de Ca²+ presentes en estos terminales motoresse utilizaron las siguientes drogas y toxinas: Nitrendipina, una dihidropiridina antagonista delos CCVD de tipo L. FTX, toxina derivada del veneno de la araña Agelenopsis aperta,bloqueante de los CCVD de tipo P w-AgaIVA, toxina derivada del veneno de la araña Agelenopsis aparta, bloqueante de los CCVD de tipo P y Q. w-CgTx, toxina derivada delveneno del caracol marino Conus geographus bloqueante de los CCVD de tipo N. w-MVIIDy w-MVIIC toxinas derivadas del veneno del caracol marino Conus magus, bloqueantes de loscanales de tipo N, P y Q. Resultados Placa Neuromuscular Normal del Ratón La w-AgaIVA (l00 nM) y las omega conotoxinas w-MVIIC (1 μM) y w-MVIID (3 μM),antagonizaron fuertemente la liberación del neurotransmisor (> 80-90% de bloqueo). La w-CgTx (5 μM) y la nitrendipina (10-20 μM) no resultaron efectivas. La liberación fue más sensible a la acción de la w-MVIIC (IC50 = 39 nM) que a la w-MVIID (le0 = 1.37 pM). Luego de bloquear la liberación casi completamente (contenido cuántico ~ 0.3% de su valor control) con w-MVIIC 3 μM, elevar la [Ca²+]ext de 2 a lO mM causó unincremento de ~2Ox, tanto en el contenido cuántico estimado como en la amplitud del EPP. La liberación evocada en solución de bajo Ca²+-alto Mg²+ (baja probabilidad de liberación,contenido cuántico = 2.02 ± 0.08) y la liberación evocada en Ringer normal (contenidocuántico = 90.5 ± 3.7) presentaron la misma sensibilidad a la acción de la w-AgaIVA (IC50= 16.8 nM y 14.4 nM, respectivamente) Tanto la Ica como la Ikca, resultaron altamente sensibles a bajas dosis de w-AgaIVA (10-30nM). Estas corrientes presinápticas fueron también fuertemente antagonizadas por la w-MVIIC (1 μM). Placa Neuromuscular Normal de la Rana La liberación evocada fue bloqueada por la FTX (IC50 = 0.02 μl/ml) y por la w-CgTx (1 μM)pero no fue afectada por la w-AgaIVA (0.5 μM). La FTX (0.1 μl/ml) causó un incremento de ~2x en la frecuencia de MEPPs tanto en la solución de Ringer normal como en la de bajo Ca²+/alto Mg²+ y no afectó la amplitud de los MEPPs en ninguna de las dos condiciones. La Ica fue bloqueada completamente por la w-CgTx (5 μM), parcialmente bloqueada por la FTX (l μl/ml) y no fue afectada por la w-AgaIVA (0.5 μM). La Ikca resultó fuertemente antagonizada por la caribdotoxina (300 nM), bloqueante de loscanales de K+ activados por Ca²+, y completamente suprimida por BaCl2 (200 μM). Estacorriente fue también bloqueada por la w-CgTx (5 μM) y por CdCl2 (200 μM) pero no fueafectada por la FTX (1 μl/ml). El bloqueo ejercido por la w-CgTx no pudo ser revertido por elaumento del [Ca²+]ext a 10 mM. Placa Neuromuscular de Ratón en Regeneración La liberación evocada neuralmente fue bloqueada por la w-AgaIVA, (30 y 100 nM causaron ~50 y 90% de inhibición, respectivamente). La w-CgTx (1 y 5 μM), como ocurre en las placasnormales, no afectó significativamente este tipo de liberación durante la reinervación. Lanitrendipina (1-10 μM), antagonizó fuertemente la liberación (~40-6 Consulte el resumen completo en el documento.

Descripción: Fil: Farina, Walter Marcelo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Pérez, Guillermo Javier. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: La acetilcolina moduladores de la funcióncórticoestriatal. Desbalances en su disponibilidad pueden resultar en desórdenesneuropsiquiátricos como la enfermedad de Parkinson. La acetilcolina es liberada por lasinterneuronas colinérgicas estriatales (ICE), que presentan actividad tónicadependiente de mecanismos intrínsecos, y respuestas fásicas a entradas excitatoriastalámicas que codifican eventos ambientales relevantes como recompensas. Un trabajoreciente demostró que las ICE se encuentran hiperactivas en un modelo de rata de laenfermedad de Parkinson. Nuestro primer objetivo fue identificar las corrientes queregulan la excitabilidad de las ICE en rodajas de cerebro de ratón, utilizando laacomodación (disminución de la descarga de potenciales de acción durante unadespolarización sostenida) como indicador. Encontramos que la margatoxina, así comootros bloqueantes selectivos y el knock out de la subunidad Kv1.3, reducen fuertementela acomodación de las ICE y la corriente de K+ subyacente. También encontramos queeste canal regula la actividad tónica de estas neuronas, como así también laintegración sináptica de inputs glutamatérgicos. Sorprendentemente, tambiénencontramos que este canal participa de la corriente IsAHP de las ICE, descriptaclásicamente como una corriente de K+ sensible a Ca2+, pero de la cual hasta elmomento no se habían identificado sus componentes. Luego nos propusimos evaluar sicambios en los canales que contienen la subunidad Kv1.3 contribuyen generar lasalteraciones de excitabilidad que se observan en ICE de ratones modelo de laenfermedad de Parkinson. Observamos que, al igual que en ratas, las ICE tienen unaexcitabilidad aumentada en ratones modelos de la enfermedad de Parkinson, la cual esinsensible a la margatoxina. También encontramos que las ICE de los ratonesparkinsonianos poseen una integración sináptica aumentada y que las corrientessensibles a margatoxina son de menor amplitud. En conjunto, nuestros resultadosrevelan un rol importante de los canales que contienen la subunidad Kv1.3 en laexcitabilidad de las ICE, en la regulación de su actividad tónica y en la integración deseñales externas. En animales modelo de la enfermedad de Parkinson la función deestos canales estaría alterada, contribuyendo a su fenotipo hiperexcitable. Estosresultados nos permiten pensar en los canales Kv1.3 como un potencial nuevo blancoterapéutico para el tratamiento de la enfermedad de Parkinson.

Descripción: Fil: Matos, Elena L.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: El agente causal de la Cancrosis del Álamo es Septoria musiva y entre lasespecies e híbridos del género Populus hay genotipos que van desdetolerantes a muy susceptibles. La hipótesis de esta tesis estableció que esosdiferentes comportamientos se debían a diferencias anatómicas y fisiológicasen los órganos susceptibles que constituían mecanismos de defensa pasivaque podían regular la intensidad de los síntomas. Utilizando métodoshistológicos se describieron y compararon diversas características foliares ycaulinares en clones susceptibles (´I 214`e ´I 488`) y tolerantes (´Conti 12` y ´Ballestra`). Mediante análisis de Componentes Principales se determinó quelos clones tolerantes poseían hojas más gruesas, con células epidérmicas ycutículas de mayor espesor generando una superficie foliar lisa, con unmenores densidades estomáticas y tallos con peridermis más gruesas, con unamenor superficie lenticelar, y con cortezas que forman las peridermisnecrofilacticas más próximas a las lesiones, que los clones susceptibles. Debido a que los clones más difundidos presentaban diferentes niveles deincidencia en los diferentes valles irrigados de la región del Comahue, serealizaron muestreos en diferentes localidades y el patógeno sólo fueencontrado en los valles de Viedma, General Conesa y Río Colorado.

Descripción: En esta tesis se estudian distintas manifestaciones cuánticas del caos en sistemas dependientesde un parámetro. Los sistemas considerados son de una y dos dimensiones. A fin de estudiar las leyes de decaimiento temporal de sistemas Hamiltonianos cuasiligados,hemos considerado dos pozos de potencial unidimensionales de paredes oscilantes, poblados conpartículas no interactuantes. A nivel clásico, mostramos que las leyes de decaimiento puedenser cualitativamente distintas para los diferentes movimientos de las paredes, de acuerdo conlas características de las órbitas periódicas atrapadas en cada caso. Sin embargo, la dinámicacuántica no muestra esa diferencia. Por otro lado, hemos estudiado diferentes aspectos de la mecánica cuántica de un billarcaótico de contorno deformable y area fija. En estos sistemas los niveles de energía experimentaninteracción repulsiva que se manifiestan como cruces evitados cuando se varía un parámetro. Mostramos que si el parámetro se mueve muy lentamente, las transiciones entre niveles vecinosson como las del modelo de Landau-Zener. Se estudió la vinculación de la variación paramétricay la localización en el espacio de fases en las autofunciones del sistema. Para esto se desarrollóun método que permite eliminar los cruces evitados en una región del espectro. Mostramos quela eliminación de los cruces evitados es el mecanismo natural para sacar a la luz las estructuraslocalizadas en órbitas de período corto embebidas en las autofunciones del sistema. Finalmente, se considera la influencia de dicha localización en la dinámica cuántica. En estecaso se estudió la dispersión de la energía cuando las paredes del billar oscilan en forma armónica. Se observó que la distribución de la energía se dispersa difusivamente. Se estudió la constantede difusión como función de la velocidad del contorno donde se observaron diferencias conpredicciones teóricas basadas en la teoría de matrices aleatorias. Mostramos que la localizaciónes la responsable de dichas diferencias.

Descripción: El estudio de la capacidad complejante de un cuerpo de agua constituye un aporte esencial al conocimiento de la biodisponibilidad de los metales contaminantes; así como también sobre la posible distribución de estos metales en las distintas especies del sistema y aún más, estos estudios permiten evaluar el impacto que tendría una descarga de estos metales sobre el ecosistema en estudio. En esta tesis se estudió la capacidad complejante de un sistema con elevada cantidad de material particulado: el estuario del Río de la Plata. Este es el primer estudio reportado sobre un sistema acuático que acarrea elevada cantidad de material en suspensión y sus resultados son importantes ya que son extrapolables a otros sistemas que poseen la misma característica (Amazonas, Orinoco, Mississipi, etc.). Las fracciones solubles y particuladas fueron caracterizadas por distintos métodos. En la fracción soluble se analizaron los iones mayoritarios por cromatografía iónica y los componentes orgánicos por espectroscopia UV-visible. El material particulado fue caracterizado por espectroscopia infrarroja, difracción de rayos x, análisis de superficie específica por la técnica de adsorción de vapor de agua, microscopía de barrido electrónico y potencial Z, obteniéndose información sobre la morfología de las partículas, su distribución de tamaños, su superficie, su carga y su composición. Los resultados de los análisis de los parámetros de complejación recogidos a lo largo de tres años en distintas condiciones climáticas, hidromareológicas y de pH fueron analizados en forma comparativa. Los resultados indican que la capacidad complejante del sistema es muy elevada en comparación con otros estuarios. Esta se debe principalmente al material particulado y depende del grado de agitación de las aguas. El sistema complejante se encuentra bien descripto mediante dos sitios de complejación superficial, los cuales no están asociados al tamaño de partícula y cuyas concentraciones aumentan con la agitación de las aguas. Además se estudió la variación de la capacidad complejante por la competencia entre dos metales pesados (cadmio y plomo). Por otro lado, los resultados obtenidos indican que existe competencia entre ellos en ciertas condiciones y que existen efectos de coprecipitación superficial a elevadas concentraciones de ambos metales. Además, se estudió la competencia entre los ligandos del sistema natural y ligandos antropogénicos (DTPA, NTA, citrato, eligiéndose nuevamente como metal el cadmio. De este estudio se concluye que el DTPA es un ligando lo suficientemente fuerte como para desplazar todo el cadmio que se adsorbe en el material particulado. En el caso del NTA, este no logra desplazar al cadmio totalmente aun en condiciones de elevada concentración de ligando. Los estudios de la competencia con citrato indican una posible formación de complejos mixtos entre el material particulado, el metal y el citrato, lo cual fue corroborado mediante estudios de espectroscopia de reflectancia total atenuada y espectrometría de masas.

Descripción: Los arroyos pampeanos tienen elevados niveles de fósforo y una alta producción primaria,mayoritariamente debida al perifiton. Esta comunidad es esencial en la retención del fósforo. Otracaracterística relevante de estos arroyos es la presencia de arsénico, considerado tóxico para lasalgas. La similitud química entre el arseniato, forma oxidada del As, y el fosfato, ocasiona toxicidadcelular debida a la competencia por la entrada a la célula lo que, a una escala mayor, deriva encambios en los procesos ecosistémicos. Nuestros objetivos fueron relevar la calidad del agua de arroyos pampeanos en relación al P y al As y entender el efecto del As sobre el metabolismo, la retención de P y la tolerancia del perifiton adistintas escalas. Se realizaron experimentos en microcosmos, colonizaciones a campo yexperimentos en el campo. En microcosmos se observó que la exposición crónica al As y al Paumenta la tolerancia al As y que este disminuye la retención de P del perifiton. Con los sustratoscolonizados en el campo se observó que la relación As/P podría explicar el escaso desarrollo debiomasa en algunos ambientes que, aunque tienen adecuadas concentraciones de P, elcrecimiento se vería inhibido por altas concentraciones de As. Asimismo, el As reduciría lacolonización del perifiton excepto en ambientes con alto contenido de P donde el As reduciría suefecto. Este estudio ayuda a dilucidar las implicancias ecológicas de la presencia de As en arroyossistemas fluviales. Los cambios en el metabolismo de los organismos, debidos a la exposicióncrónica al As pueden derivar en una disminución de la retención de nutrientes, una menoreficiencia en la depuración del curso de agua o una menor capacidad para sostener una red trófica.

Descripción: Se consideran en esta tesis los procesos de simple y doble captura electrónica, encolisiones atómicas a energías altas e intermedias. En lo que respecta a la simple captura, la idea es encontrar un método teóricoapropiado para describir las colisiones asimétricas, cuando la carga de uno de los núcleoses mucho mayor que la del otro. Para ello se examina un modelo unidimensional decolisión con tres seudo-partículas, que simulan un núcleo proyectil, un núcleo blanco,y un electrón activo. En este modelo se analiza la probabilidad de captura en funciónde la velocidad del proyectil y de la fuerza del núcleo blanco. Se evaluan diez aproximaciones teóricas: cuatro aproximaciones de Born de segundoorden basadas en diferentes funciones de Green, una expresión fraccional de Schwinger,y cinco métodos de onda distorsionada; y se comparan los resultados con los valoresexactos. Para sistemas simétricos, la aproximación de onda distorsionada del continuoprovee buenos resultados, mientras que para los casos asimétricos la aproximaciónimpulsiva semigeneralizada presenta el mejor comportamiento cuando la fuerza delnúcleo blanco aumenta. Como una consecuencia del análisis de los métodos teóricos en el modelo unidimensional,se elige la aproximación eikonal impulsiva para calcular los procesos de simplecaptura electrónica en colisiones de protones sobre diferentes blancos. Se presentansecciones eficaces totales para una gran variedad de sistemas, que van desde el sistemaasimétrico p-Ar hasta el sistema simétrico p-H. Se evaluan también parámetrosrelacionados con la matriz densidad para las colisiones p-H y p-He, y se comparanlos resultados con los experimentos y con otros valores teóricos. Se concluye que laaproximación eikonal impulsiva puede ser usada con confianza para tratar colisionesasimétricas en los regímenes de energías intermedias y altas, y colisiones simétricas aaltas energías de impacto. Se investigan también, en distintas aproximaciones aplicadas a procesos de simplecaptura, las contribuciones de las tranformadas de Fourier de las correspondientesfunciones de Green (llamadas propagadores), considerando en especial los términos off-shell y su continuidad alrededor del límite on-shell; y se encuentra que la aproximacióneikonal impulsiva presenta una contribución lineal off-shell. Para estudiar la doble captura electrónica por impacto de proyectiles pesados sobreátomos similares al helio, se presenta en esta tesis un modelo de dos electronesque considera el proceso como una colisión en dos pasos. En el marco del formalismode onda distorsionada, este modelo de colisión esta relacionado al segundo orden conun operador de Green que representa un electrón en cada centro, y después de ciertasaproximaciones adicionales conduce al modelo de electrón independiente. Se usa, enparticular, la aproximación impulsiva para evaluar las matrices de transición de simplecaptura involucradas, y la repulsión electrónica se incluye como una perturbacióndinámica en primer orden. Se calcula con este modelo la transición 1S2 —> 1S2 en la colisión He++ — He, utilizandouna función de onda de interacción de configuraciones para describir el estadofundamental del Helio. Las diferencias entre estos resultados y los obtenidos utilizandouna función de onda de Hartree-Fock para representar el estado fundamental son despreciables,por lo cual, la captura a estados simplemente excitados para el mismo sistemase evalua empleando funciones de onda de Hartree-Fock y variacionales. Tambiénse estudia la doble captura electrónica en colisiones de iones múltiplemente cargadossobre helio, y se evaluan secciones eficaces diferenciales para el sistema He++ — He,siendo los resultados comparados con los datos experimentales disponibles. La teoríaproduce en todos los casos un muy buen acuerdo con los experimentos.

Descripción: La Captura Neutrónica en Boro (BNCT) es una terapia binaria que se basa en la acumulación selectiva de compuestos borados dentro del tumor y la subsiguiente irradiación con neutrones térmicos. La reacción de captura que se produce entre el 10B y los neutrones genera partículas letales de corto alcance que dañan el tumor sin causar daño significativo al tejido normal. Previamente en nuestro laboratorio se reportó el éxito terapéutico de una única aplicación de BNCT mediada por los compuestos borados borofenilalanina (BPA), decahidrodecaborato de sodio (GB-10) o la administración combinada de ambos, para el tratamiento del cáncer bucal en un modelo de hámster. Si bien los resultados en términos de eficacia terapéutica fueron muy buenos, pueden ser mejorados. En este trabajo de tesis, buscamos optimizar la terapia de BNCT potenciando el control tumoral y minimizando su radiotoxicidad. Para ello desarrollamos una nueva modalidad terapéutica denominada BNCT secuencial (BPA-BNCT seguido de GB-10-BNCT luego de 24 ó 48 horas), establecimos un método para inducir la normalización de los vasos sanguíneos tumorales (con talidomida) y evaluamos el efecto de esta normalización en la eficacia terapéutica del BNCT mediado por BPA. Complementariamente estudiamos la combinación de ambas modalidades (normalización con talidomida y BNCT secuencial). Asimismo, realizamos un análisis exhaustivo de los posibles cambios en la microdistribución de los compuestos borados por autorradiografía neutrónica. En el presente estudio demostramos que el BNCT secuencial mejora el control del cáncer bucal, que el tratamiento previo con talidomida aumenta la eficacia terapéutica del BNCT mediado por BPA a través de la normalización de los vasos sanguíneos aberrantes del tumor, y que con el tratamiento con talidomida previo al BNCT secuencial se alcanza una respuesta tumoral total (respuesta completa + parcial) del 100% de los tumores. Además, en todos los casos se redujo la radiotoxicidad en el tejido precanceroso circundante al tumor.

Descripción: En esta tesis estudiamos caracterizaciones estructurales para grafos arcocirculares, grafos circulo, grafos probe de intervalos, grafos probe de interva 10s unitarios, grafos probe de bloques y grafos probe co-bipartitos. Un grafo es arc0 circular (circulo) si es el grafo de interseccion de una familia de arcos (cuerdas) en una circunferencia. Dada una familia hereditaria de grafos G, un grafo es probe G si sus vertices pueden particionarse en dos conjuntos: un conjunto de vertices probe y un conjunto de vertices nonprobe, de forma tal que el conjunto de vertices nonprobe es un conjunto independiente y es posible obtener un grafo en la clase G agregando aristas entre ellos. Los grafos probe G forman una superclase de la familia G. Por lo tanto, 10s grafos probe de intervalos y 10s grafos probe de intervalos unitarios generalizan la clase de 10s grafos de intervalos y 10s grafos de intervalos unitarios respectivamente. Caracterizamos parcialmente a 10s grafos arco-circulares, grafos circulo, grafos probe de intervalos y probe de interval0 unitario mediante subgrafos prohibidos dentro de ciertas familias hereditarias de grafos. Finalmente, es presentada una caracterizacion de 10s grafos probe co-bipartitos que lleva a un algoritmo de reconocimiento de tiempo polinomial para dicha clase y 10s grafos probe de bloques son caracterizados mediante una lista de subgrafos prohibidos.

Descripción: En Neurospora crassa la inhibición de la síntesis deproteínas producida por cicloheximida a concentraciones subletales,determina la inducción a nivel transcripcional de varios genes,entre ellos el CI-1. El producto de este gen (cip70) es unaproteina de 70 kD. El incremento en la expresión de este gen no es unaconsecuencia directa de la inhibición de la síntesis proteica. Eneste sentido la inhibición determinada en una cepa deficiente enuna enzima clave en la biosíntesis de aminoácidos aromáticos, deprivadade los mismos, no muestra tener niveles incrementados delmRNA del gen CI-1. Por el contrario la inducción de otros genesde Neurospora crassa por la cicloheximida parecería ser una consecuenciadirecta de la inhibición de la sintesis proteica. El DNA genómico correspondiente al gen CI-1 y su respectivocDNA fueron secuenciados, comprobandose que el gen estaríaestructurado al menos por 4 exones y 3 intrones. Por otro lado, la secuencia primaria de la proteina deducidaa partir de la correspondiente secuencia nucleotídica delcDNA, presentó a nivel de la región carboxílo terminal una altahomología con tres integrantes de la superfamilia de genes delcitocromo P450. Una de las caracteristicas principales que presentantodos los citocromos P450 hasta ahora estudiados, es la conservaciónde una secuencia que contiene el sitio activo de este tipode monooxigenasas. Dicha secuencia también se encuentra presenteen la cip70. Hasta el momento, sólo se ha reportado un gen de eucariotesinferiores que codifica para un citocromo P450, el gen lande levaduras. Estos resultados indican por pimera vez en Néurosporacrassa la posible participación del citocromo P-450 en los mecanismosde detoxificación ante la agresión provocada por un agentequímico, en este caso la cicloheximida.

Descripción: Fil: Guersenzvaig, Natalio Héctor. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: La tuberculosis (TB) es un problema de salud a nivel mundial. Un millón y medio de personas al año mueren por esta enfermedad, siendo la primera causa de muerte entre los infectados con el virus de la inmunodeficiencia humana (HIV). El microorganismo causante de la enfermedad, Mycobacterium tuberculosis (Mtb.), es una bacteria de crecimiento lento que vive dentro de los macrófagos del hospedador, en donde puede residir por años sin producir síntomas, en un estado que se conoce como de latencia. Dentro del macrófago la mycobacteria se encuentra sometida a una serie de condiciones de estrés como hipoxia, falta de nutrientes y presencia de especies reactivas de oxígeno y nitrógeno (ERON). Mtb posee varias estrategias que le permiten sobrevivir en dicho ambiente tan adverso. Las Ser/Thr quinasas son proteínas que han mostrado ser centrales para el control de diversos procesos celulares en una gran variedad de organismos. Es por ello que son reconocidas como importantes blancos farmacológicos para el tratamiento de diversas patologías, y más recientemente, para combatir enfermedades infecciosas como la tuberculosis. Las quinasas tienen un rol central en la cadena de transducción de señales y es por esto que su actividad está altamente regulada. Debido a la versatilidad del dominio quinasa, hay proteínas que han evolucionado mecanismos particulares para regular su actividad, como es el caso de la PknG de Mtb. PknG es una quinasa particular, ya que por un lado carece de loop de activación, y por otro tiene un dominio Rubredoxina (Rbx), un dominio pequeño con un centro metálico coordinado por 4 cisteínas, con interacción directa con el dominio quinasa. Se ha demostrado que PknG posee un rol clave tanto en la patogenia como en la regulación del ciclo de ácidos tricarboxílicos (TCA) y síntesis del glutamato. Se ha propuesto que esta regulación sería importante en el estado de latencia Mtb; de este modo, PknG estaría generando cambios metabólicos que permiten que el bacilo sobreviva dentro de los macrófagos. El mecanismo propuesto es que las ERON producidas dentro del macrófago serían “sensadas” por el dominio Rbx que a su vez funcionaría como un regulador de la actividad quinasa de PknG. Sin embargo esto no ha sido demostrado. El presente trabajo de tesis tiene como principal objetivo comprender los mecanismos de regulación (activación/inhibición) de la actividad quinasa de la serin treonin quinasa G (PknG) de Mtb, y se encuentra dividido en tres partes. Se sabe que esta quinasa regula al ciclo TCA y la síntesis de glutamato mediante la fosforilación de GarA. GarA es una proteína pequeña que posee como elemento de regulación dos treoninas susceptibles de ser fosforiladas: la Thr 21 y la Thr 22. Cuando GarA se encuentra sin fosforilar, interactúa e inhibe a las enzimas glutamato deshidrogenasa (GDH) y α -cetoglutarato descarboxilasa (KGD), y se une y activa la glutamina oxoglutarato aminotransferasa (GOGAT). KGD es una proteína central en el TCA, mientras que las otras dos regulan la síntesis del glutamato. PknG fosforila a GarA en el residuo 21, mientras que PknB, otra quinasa de Mtb, la fosforila en el residuo 22. Ambos eventos son específicos y excluyentes, y hasta el momento no se conoce el motivo de su especificidad, el cual fue estudiado a nivel atómico en la primera sección de esta tesis, mediante simulaciones computacionales y ensayos de actividad in vitro utilizando péptidos derivados de GarA. En la segunda parte, se realizó una caracterización fisicoquímica de PknG in vitro, para lo cual se caracterizó el centro metálico por técnicas de absorción y emisión molecular. Estos resultados han permitido determinar la presencia de Zn, Cd y Fe en el centro de Rbx. Posteriormente, se analizó la relevancia del metal unido en la actividad quinasa. Sumamente importante, en el caso de la proteína que posee hierro (el estado propuesto en Mtb), se analizó el efecto del estado de oxidación sobre la actividad de la misma. Para ello se hicieron estudios por técnicas espectroscópicas UV-VIS y Raman Resonante. Nuevamente se correlacionaron los resultados con las actividades medidas, observándose que el estado de oxidación (II) presenta la mayor actividad (similar a cuando posee Cd y Zn). En la tercera parte, se analizó la actividad de PknG en presencia de ERON, en particular NO, HNO/NOy H2O2. En estos caso pudimos observar que el poder de modular el estado de oxidación del hierro varía según la capacidad reductora/oxidante de las especies reactivas, y que el estado de oxidación del metal regula la actividad de PknG. Nuestros resultados en su conjunto permiten comprender que PknG es una proteína constitutivamente activa, que posee un sitio hidrofóbico de reconocimiento a sustrato bien diferente de PknB y cuya actividad quinasa es regulada por el estado de oxidación del centro metálico del dominio Rbx. Finalmente, pudimos determinar que la óxido/reducción puede ser mediada por ERON de interés fisiológico.

Descripción: El flujo neto de agua es registrado minuto a minuto enel ciego de rata control y adaptada a una dieta rica enpotasio; en el colon humano y en monocapas de líneascelulares HT29y CaCo2. Este flujo de agua es correlacionadocon la diferencia de potencial, la corriente decortocircuito y los flujos unidireccionales de Na+, Cl- y Rb+ con los siguientes resultados: 1) Existe en todos estosepitelios un flujo neto de agua absortivo que es funciónlineal de los gradientes osmóticos o hidraúlicos aplicados. La diferencia de potencial es positiva con una resistenciade aproximadamente de 100 λ.cm2, valores típicos deepitelios abiertos. 2) Una fración del flujo neto observadoen condiciones basales está asociado al transporte de ionesy es Na+ dependiente. 3) La presencia de un gradienteosmótico transepitelial induce un potencial de difusiónpositivo en el ciego de rata control, no ocurriendo lo mismocon un gradiente de presión hidrostática. 4) Otrosmecanismos de transporte se distinguen en el ciego de ratacuando estas son alimentadas por 12 días con dietaincrementada en su concentración en KCl. 5) El ciego de rataes en este caso sensible al amiloride debido a la adaptaciónal potasio, no observándose este efecto en animalescontroles. 6) La absorción de agua en el colon humano esdependiente de Na+ y Cl-, siendo afectada por AMPcynorepinefrina. 7) En el colon humano existen epiteliosespontáneamente secretorios; en ellos podría estarincrementada la concentración de AMPc intracelular. Lanorepinefrina 1.10^(-6) M, incrementa la absorción de agua,probablemente por inhibición del componente secretor delflujo de agua. 8) En monocapas celulares diferenciadas (CaCo2),existe un flujo neto asociado a transporte secretorque se correlaciona estrechamente con flujos netossecretorios de Na+ y Cl-. 9) En las células CaCo2, tambiénse observó un transporte diferencial de manitol y glucosa a 37°C; este último 100 veces mayor es sensible al amiloride. 10) Las monocapas epiteliales de CaCo2 y HT29, en ausenciade Ca++ ven incrementado su flujo neto de agua hasta 10veces, mientras que la resitencia transepitelial es nosignificativamente distinta de cero. Se observa porcriofractura que en esta condición las bandas de las unionesestrechas están desorganizadas. Para su mejor comprensión esta tesis ha sido divididaen capítulos y en cada uno de ellos se muestran losresultados encontrados en cada línea experimental, dando acontinuación una discusión detallada de estos. En el últimocapítulo, Conclusiones generales, se dan modelos hipotéticosque surgen de reunir estos datos y los de la literatura paraproponer posibles mecanismos para el movimiento de agua eiones en el intestino grueso. Esta experimentación fue realizada en el Laboratorio de Biomembranas del Departamento de Fisiología y Biofísica dela Facultad de Medicina, UBA, bajo la dirección del Dr Mario Parisi, a quien quiero agradecer muy especialmente por suexcelente disposición en todo momento para la discución delas ideas y el análisis de los resultados y por sobre todoenseñarme un riguroso desarollo de las ideas y del métodocientífico. Cabe asimismo el agradecimiento a su entereza ycomprensión en los dificiles momentos transcurridos en elperíodo de realización de este trabajo. Parte de esta tesis fue realizada en Francia, en el Instituto Pasteur (París) y en Le Centre D'Etudes Nuclairesde Saclay (Saclay). Es por ello que quiero agradecer a los Dres. Jacques Bourguet, Pierre Ripoche y Daniel Louvard,quienes gentilmente dispusieron lo necesario para larealización de la experimentación en cultivos celulares ytambién por su hospitalidad durante mi estadía allí. Esteagradecimiento abarca a mis colegas de ambos institutos quesiempre me brindaron toda su hospitalidad y confianza. Quiero agradecer a Cristina Ibarra, por intermedio dequien meinicié en el estudio del transporte de epitelios, a Claudia Capurro y Ricardo Dorr, mis colegas y amigos durantetodos estos años, con quienes hemos discutido primariamenteestos resultados y sobre todo por su atenta lectura de estetrabajo y su acertada critica que contribuyó a sumejoramiento. Agradezco a la Universidad de Buenos Aires y al Conicetlos subsidios acordados, con lo que se solvento parcialmenteeste trabajo. Finalmente, debo agradecer a la Fundación Antorchas, la Fundación Roemmers y al INSERM(Francia), quienessubvencionaron parte de este trabajo de tesis.

Descripción: La enfermedad de Chagas es una parasitosis endémica en América Latina causada por el protozoo flagelado Trypanosoma cruzi. Hasta el momento no se han hallado vacunas ni drogas efectivas para su prevención y tratamiento. Dentro de las estrategias de búsqueda y desarrollo de fármacos, los productos naturales son una fuente de moléculas activas contra diferentes enfermedades. En nuestro laboratorio se ensayó el efecto del extracto acuoso del té verde de Camellia sinensis sobre la forma de tripomastigote sanguíneo del parásito. Por medio de este ensayo biológico se guió la purificación e identificación de compuestos tripanocidas del té verde utilizando extracciones con solventes orgánicos y técnicas cromatográficas. Los compuestos caracterizados son catequinas, polifenoles pertenecientes a la familia de los flavan-3-ol, ampliamente estudiadas por sus actividades biológicas y farmacológicas. Las catequinas fueron efectivas a concentraciones del orden de pM sobre tripomastigotes sanguíneos, siendo las más activas la galato de galocatequina (GCg) y la galato de epigalocatequina (EGCg), con valores de IC50 de 0.12 y 0.53 pM respectivamente. La administración de 0.8 mg/kg/día de EGCg vía intraperitoneal durante 45 días a un grupo de ratones BALB/c infectados con T. cruzi, diminuyó la parasitemia y aumentó la sobrevida de éstos con respecto al grupo control. La fragmentación oligosomal del ADN de epimastigotes de cultivo luego de la incubación con EGCg, indica que el mecanismo de acción tripanocida de esta catequina estaría dado por la inducción de muerte celular programada. Las bajas concentraciones a las cuales estas moléculas fueron activas in vitro, y los resultados de uno de los experimentos in vivo, confieren a las catequinas la posibilidad de ser efectivas en la quimioterapia de la enfermedad de Chagas a concentraciones no tóxicas para el hospedador.

Descripción: Fil: Giménez, Hilda B.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Scolaro, Luis Alberto. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: E7 es una proteína de ~100 aminoácidos codificada en el genoma de los papilomavirus para la cual no se ha descripto actividad enzimática alguna, hasta la fecha. E7 interactúa con más de 40 proteínas celulares, siendo el supresor de tumores Retinoblastoma, el blanco más destacado. Posee la capacidad de transformar a la célula que la expresa, además de modificar rutas metabólicas como la glucólisis. E7 es una proteína inestable, de vida media corta y por lo tanto la concentración intracelular de esta proteína es baja. Uno de los paradigmas de la biología moderna es el concepto de una estructura-una función, que se basa en que las proteínas adoptan una estructura definida de acuerdo a los principios de la termodinámica y esta estructura está relacionada con una función particular, como puede ser alguna actividad enzimática. Así, una nucleasa poseerá un ordenamiento tridimensional total o parcialmente distinto a una quinasa y estas proteínas presentarán funciones diferentes. Esta tesis desarrolla algunos argumentos que explicarían como una pequeña proteína, cuya estructura tridimensional no se conoce, puede interactuar con tantos blancos proteicos, desregular el ciclo celular y finalmente transformar la célula. Basándonos en técnicas biofísicas, caracterizamos el comportamiento de E7 de la cepa de alto riesgo HPV16 en solución y sus propiedades de unión a ligandos. Analizamos las modificaciones post-traduccionales que E7 puede sufrir y las consecuencias conformacionales que estas producen en la proteína. Describimos la reactividad de los residuos de cisteína de la molécula frente a distintos agentes oxidantes de relevancia fisiológica como el glutatión y el peróxido de hidrógeno y caracterizamos conformacionalmente las especies oxidadas de E7. Determinamos que E7 es una proteína modular. El dominio amino-terminal es extendido, carece de elementos de estructura secundaria estables y posee propiedades de las proteínas llamadas “ intrínsecamente desordenadas”. Esta ausencia de estructura secundaria canónica permitiría a esta región de la proteína adaptarse a distintas superficies de contacto con otras macromoléculas. El dominio carboxilo terminal está ordenado, posee estructura secundaria y terciaria y es el responsable de las propiedades de oligomerización de la molécula. En este dominio se encuentran los motivos de unión a zinc. E7 puede formar oligómeros solubles esféricos de alto peso molecular (E7SOs) cuando se desplaza el átomo de zinc coordinado en su extremo carboxilo terminal. Estos oligómeros son capaces de interactuar inespecíficamente con regiones no nativas de otras proteínas y poseen actividad chaperona similar a la que poseen las heat shock proteins. Esta actividad chaperona sería responsable de la unión a diversos blancos celulares para los cuales, claramente, no puede existir especificidad. Finalmente proponemos un modelo que relaciona las funciones de E7 con las propiedades conformacionales de la proteína. Este modelo, si bien insuficiente para explicar la totalidad de los datos bioquímicos-funcionales, permite justificar e interpretar varios datos experimentales que de otra forma se consideraban incongruentes.

Descripción: Fil: Steyerthal, Noemí Lucía. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Gonadotropin-releasing hormone (GnRH) variants were characterized by gradient reversephase high performance liquid chromatography (RP-HPLC) and radioimmunoassays withdifferent antisera in brain and pituitary extracts of pejerrey, Odontesthes bonariensis (Atheriniformes). The results showed that three forms of GnRH are expressed in braintisuue: two of them are chromatographic and immunologically similar to cGnRH-II (chicken) and sGnRH (salmon) while the third GnRH appeared to be different from theeleven known forms of the vertebrate hormone. This novel form is the only variant presentin pituitary gland extracts. The distribution of GnRH neurons and fibers in the brain was demonstrated withimmunocytochemical methods using specific antisera. The results indicate that ir-GnRHperikaria were observed in three different nucleus: nucleus olfactoretinalis, nucleuspreopticus periventricularis and in the midbrain tegmentum. Immunoreactive GnRH (ir-GnRH) fibers reached the three areas of the adenohypophisis:rostral pars distalis, proximal pars distalis and pars intermedia. A close associationbetween ir-GnRH fibers with growth hormone (GH) and prolactin (PRL) cells in thepituitary gland was also demonstrate. Furthermore, colocalization of GnRH receptors withsomatotropin and prolactin expressing cells in pituitary primary cell culture was alsoshown.

Descripción: Los polisacáridos juegan un papel esencial en el metabolismo celular y en el funcionamiento delos organismos. Son sintetizados empleando enzimas glicosiltransferasas (GTs), cuyaspropiedades determinan el tamaño y la estructura del producto final. Muchas GTs estánlocalizadas en membranas celulares, dificultando su purificación y caracterización. En estetrabajo de Tesis se estudian bioquímica y biofísicamente dos GTs que participan en la síntesisdel polisacárido xantano producido por Xanthomonas campestris. La primer GT es GumI, de la cual sólo había escasos antecedentes genéticos. En esta Tesis sepresenta la primera caracterización bioquímica y funcional de GumI, demostrando su actividadglicosiltransferasa previamente propuesta. Se realizaron ensayos de complementación funcional,demostrando su actividad manosiltransferasa in vivo. Además, se demostró que GumI está unidaa la membrana, y que la interacción está mediada por interacciones hidrofóbicas yelectrostáticas. GumI fue purificada y su actividad fue estudiada in vitro, obteniéndose losparámetros óptimos de reacción. GumI dio origen a una nueva familia, GT-94, en laclasificación Carbohydrate Active EnZymes. Finalmente, mediante ensayos de cristalización seobtuvieron agujas bidimensionales que al presente no fueron aptas para resolver la estructura de GumI por cristalografía de rayos-X. La segunda GT es GumK, cuya estructura cristalina se resolvió en el laboratorio y, como GumI,es una GT monotópica de membrana. Se profundizó sobre las bases moleculares de la unión asus sustratos y a la membrana. Se realizaron diferentes mutaciones sobre la zona propuesta deunión a la membrana, demostrando la complejidad de dicha interacción. Además, se realizaronestudios por simulación computacional con el fin de obtener la estructura del complejo GumK/UDP-GlcA. El modelo obtenido explicaría la especificidad por este sustrato. Estudiosrealizados en este trabajo mediante diversas técnicas -tales como proteólisis limitada,fluorescencia, dicroísmo circular, calorimetría isotérmica de titulación, resonancia magnéticanuclear y dispersión de rayos-X a bajo ángulo- sugieren fuertemente la presencia de cambiosconformacionales disparados por la unión de UDP-GlcA.

Descripción: La UDP-Glc:glicoproteína glucosiltransferasa (UGGT) es el sensor de la conformación de las glicoproteínas en el “Control de Calidad de Plegamiento de Glicoproteínas” ya que sólo presenta actividad sobre glicoproteínas que no se encuentran en su conformación nativa. Las glicoproteínas que presentan oligosacáridos monoglucosilados interaccionan con lectinas-chaperonas presentes en el Retículo endoplásmico (RE) como Calnexina y Calreticulina lo cual previene que los intermediarios de plegamiento inmaduros continúen su camino hacia el Aparato de Golgi. En C. elegans existen dos genes, uggt-1 y uggt-2, homólogos a los que codifican para las UGGT en diferentes organismos. La expresión de las proteínas UGGT-1 y UGGT-2 en S. pombe alg6 gpt1-, que carece de actividad de UGGT, permitió demostrar que uggt-1 codifica para una UGGT activa (CeUGGT-1), mientras que la proteína codificada por uggt-2 carece de actividad de UGGT (CeUGGT-2). Mediante la construcción de proteínas quiméricas, se determinó que el dominio C-terminal de CeUGGT-2 es incapaz de transferir glucosa a proteínas mal plegadas. El estudio del gusano mutante de uggt-2 (VC1961) reveló que CeUGGT-2 es esencial para la viablidad del nematodo ya que los gusanos uggt-2 -/- se arrestan en estadíos embrionarios y en L1 mostrando un tamaño menor y posibles defectos en la cutícula. Mediante Real Time PCR observamos que ambos genes se expresan durante todo el ciclo de vida de C. elegans. Mediante la construcción de gusanos transgénicos pudimos detectar expresión de CeUGGT-1 en todas las células y tejidos del nematodo. uggt-1 se induce en condiciones de estrés de RE a través de la vía de señalización de ire-1 en la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR), mientras que uggt-2 no lo hace. El silenciamiento de la expresión de la proteína UGGT-1 y UGGT-2 por ensayos de RNAi produjeron un retraso en el desarrollo en gusanos uggt-1(RNAi) y uggt-2(RNAi) y resultaron en una disminución de la sobrevida de gusanos uggt-1(RNAi). CeUGGT-1 y CeUGGT-2 juegan un rol protector ante condiciones de estrés de RE ya que con 10 μg/ml de Tunicamicina (TN) se arrestó el crecimiento de gusanos uggt-1(RNAi) y uggt-2(RNAi) en L2/L3 pero no el de gusanos control. Además ensayos de RNAi a bajas concentraciones de TN en ausencia de ire-1, sugirieron que CeUGGT-2 es importante para aliviar los bajos niveles de estrés de RE en ausencia de esta vía de la UPR. Estos resultados indicarían que ambos homólogos de UGGT de C. elegans poseerían distintas funciones biológicas.

Descripción: La enzima UDP-glucosa: proteína transglucosilasa (UPTG) es una glicosiltransferasaautocatalítica descripta inicialmente en tubérculo de papa (Solanum tuberosum L.). Se habíapropuesto que la UPTG era capaz de iniciar la síntesis de α-glucanos unidos a proteína in vitroy que tendría una función de proteína iniciadora de la biosíntesis del almidón. La UPTG detubérculo de papa se purificó hasta aparente homogeneidad, se desarrollaron anticuerpospoliclonales específicos contra la misma y se clonaron cADNs correspondientes a la UPTG porscreening de genotecas de expresión de papa. Ensayos de Northern blot y Western blotmostraron que tanto el ARN mensajero como la proteína UPTG están presentes en un nivelsemejante en todos los tejidos de la planta. Algunas de las secuencias clonadas se expresaron en E. coli obteniéndose UPTG recombinante enzimáticamente activa. Se encontró que tanto lasproteínas recombinantes como la purificada de tubérculo pueden ser glicosiladas a partir de UDP-Glc, UDP-Xil o UDP-Gal y que la glicosilación es reversible. Dos cADNs obtenidosfueron secuenciados totalmente, esto permitió detectar un muy alto grado de identidad (~ 90%)entre la secuencia de la UPTG y varias secuencias de proteínas vegetales de función aún nodeterminada que localizan específicamente en la región trans del aparato de Golgi. La secuenciade la UPTG no presenta zonas hidrofóbicas que puedan corresponder a regiones transmembranani un posible péptido señal que permita su entrada a plástidos o al sistema de endomembranasde la célula. Estos resultados sugieren que la enzima localizaría en el lado citoplásmico delaparato de Golgi y no en los plástidos en donde ocurre la síntesis del almidón, por lo tanto estánen contra de un posible rol de la UPTG en la síntesis de este polisacárido. En ningún organismoque no sea vegetal se encontró una proteína que pueda considerarse homóloga a la UPTG. Estacaracterística, sumada a su localización indicarían una posible función relacionada con la síntesisde los polisacáridos complejos de la pared, función exclusiva del aparato de Golgi de las célulasvegetales. La especificidad de la UPTG por distintos nucleótidos azúcares y la reversibilidad dela reacción de glicosilación hacen pensar que la UPTG podría estar formando parte de unsistema complejo que acople el transporte de nucleótidos azúcares con la síntesis depolisacáridos estructurales.

Descripción: La enzima UDP-glucosa: proteína transglucosilasa (UPTG) es unaglicosiltransferasa autocatalítica descripta tanto en tubérculo de papa (Solanum tuberosum L.) como en endosperma de maíz (Zea mays), involucrada en la síntesis de polisacáridos. Encontramos diferentes isoformas de UPTG de papa las cuales se expresaron en E.coli y se caracterizaron bioquímicamente. Las isoformas UPTG1 y UPTG2 no sólopresentan características cinéticas diferentes sino que además se expresan diferencialmenteen los diversos tejidos de la planta. Se encontró una alta expresión de los transcriptos de UPTGl en estolones, tubérculos y raíces mientras que la expresión de los mensajeros de UPTG2 era elevada en todos los tejidos analizados, principalmente en hojas y tallos. Elanálisis del ADN genómico de papa sugiere la existencia de nuevas isoformas de UPTG, loque sumado a la presencia de proteínas homólogas a la UPTG en otras especies vegetales,muestran que dichas glicosiltransferasas autocatalíticas constituirían una pequeña familiamultigénica presente sólo en plantas superiores. Los estudios bioquímicos de la reacción de glicosilación de la UPTG mostraron queun único residuo de glucosa, xilosa o galactosa se une a la enzima en configuración β, conun tipo de unión que se comportaria más bien como las del tipo N. Además, el análisis de lareversibilidad de la reacción de glicosilación mostró que la UPTG catalizaría la ruptura delenlace glicosídico. El estudio de la naturaleza del inhibidor de la UPTG en maíz reveló que éste seria laisoforma SS1 de la sacarosa sintetasa presente principalmente en el endosperma. Laisoforma SS1 ha sido relacionada recientemente con la biosíntesis de polisacáridos de paredcelular y su asociación con la UPTG de maíz aporta una nueva evidencia a favor de dichahipótesis. Los resultados de esta Tesis muestran que la UPTG de papa podía ser fosforilada invitro. El tratamiento con fosfatasa de la proteína UPTG recombinante mostró que ladefosforilación de la UPTG incrementa su glicosilación y que a su vez, la glicosilación dela enzima favorece la aparición de formas de mayor tamaño molecular inmunológicamenterelacionadas con la UPTG. Se piensa que la defosforilación de UPTG incrementaría suglicosilación promoviendo la asociación de la proteína a otras proteínas o a sí misma. Se propone que la proteína UPTG se asociaría funcionalmente a elementos deanclaje, desconocidos hasta el momento, presentes en la membrana del Golgi facilitando eltransporte de los UDP-azúcares sustratos de la biosíntesis de pectinas y hemicelulosas. Así,no podemos descartar que la defosforilación de la UPTG favorezca su asociación amembranas lo que podria involucrar un mecanismo de localización de la enzima. Losresultados con respecto al análisis de la expresión de ARNm de UPTG, sugieren que laenzima se expresaría principalmente en tejidos cuyas células estarían en estado de activocrecimiento y/o elongación. Basados en el hecho que en tejidos en elongación hay unaactiva síntesis principalmente de pectinas y hemicelulosas, los datos mostrados constituyenuna fuerte evidencia que apoya la hipótesis que propone que la UPTG estaría involucradaen la síntesis de los polisacáridos no celulósicos que componen la pared celular vegetal. Más aún, la existencia de isoenzímas redundantes de UPTG sugiere que la enzima formaríapane de un sistema complejo esencial para la viabilidad de la célula vegetal.

Descripción: El presente trabajo tuvo como objetivo estudiar el rol de la proteina espermáticahumana proacrosina/acrosina como molécula de adhesión a las glicoproteínas de lazona pellucída (ZP). En una primera etapa, se llevó a cabo un análisis bioinformático sobre lasecuencia aminoacídica de proacrosina con el propósito de identificar sitiospotenciales de unión a glicoproteínas de la ZP. El resultado de este análisis reveló quelos residuos Lys74. Lys169, Arg172, Arg199, Arg249, Lys251, Arg252 y la secuencia KRLQQKLIE, localizada entre los residuos 367-374, conformarían sitios potenciales deunión a la ZP. A continuación se realizaron experimentos para evaluar la interacción entreproacrosina/acrosina con glicoproteínas de la ZP. Para ello se desarrolló unaestrategia de subclonado del ADNc de proacrosina humana en vectores de expresiónprocariotas (pET-22b, pGEX-3X) para la expresión de proacrosina recombinante. Utilizando el sistema de expresión en forma directa (pET-22b) se obtuvo un productode expresión recombinante correspondiente a la proenzima (Rec-40), y productostruncados del extremo N-terminal de la proteína (Rec-30, Rec-20, Rec-10). Estasproteinas fueron caracterizadas mediante la utilización de anticuerpos especificos yanálisis de secuenciación de aminoácidos, determinándose que Rec-30correspondería a los residuos 1-300, Rec-20 a 1-190 y Rec-10 a 1-160 de proacrosinahumana. Utilizando el mismo sistema de expresión se sintetizó un producto deexpresión correspondiente a los residuos 1-59 de proacrosina (Rec-6). Los productosde expresión, obtenidos como cuerpos de inclusión, fueron solubilizados y aisladosmediante electroforesis preparativa. El estudio de la interacción entre proacrosina/acrosina recombinante y lasglicoproteínas de la ZP se llevó a cabo utilizando ensayos de unión en fase sólida ("Ligand blot", "Dot blot", ensayo en placa de poliestireno). Se utilizaron glicoproteínasobtenidas de ovocitos humanos de descarte de programas de fecundación in vitro, asícomo glicoproteínas obtenidas por expresión en células CHO a partir del ADNc (rec-hZPA,rec-hZPB, rec-hZPC). El resultado de estos estudios indicó que proacrosinarecombinante (Rec-40) y fragmentos del extremo N-terminal de la proteína (Rec-30, 20y 10) tienen capacidad de unión a glicoproteínas de la ZP y a azúcares. Lasglicoproteínas de la ZP mostraron diferente capacidad de unión aproacrosina/acrosina, siendo hZPA el ligando principal. El mecanismo de unióninvolucraría interacciones electrostáticas entre aminoácidos cargados positivamenteen proacrosina/acrosina, y oligosacáridos sulfatados en la ZP, así como elreconocimiento de residuos de fucosa y manosa presentes en los oligosacáridos de la ZP. El resultado del mapeo de los sitios de unión en la molécula de proacrosinapermite proponer que éstos estarían localizados en dos regiones de la proteína. Unaregión estaría comprendida entre los residuos 59-160 (Dominio II), y otra entre losresiduos 300-402 (Dominio III). Los sitios de unión localizados en el Dominio II de laproteina estarían estabilizados por uniones no covalentes y puentes disulfuro, mientrasque los sitios localizados en el Domino II estarían estabilizados por interacciones nocovalentes, y tendrían una contribución principal a la afinidad de la interacción. Endichas regiones, los residuos Lys74, Lys108, Lys114 y el motivo KRLQQKLIE (residuos 367-374), identificados mediante el análisis de secuencias, participarían enla interacción con glicoproteinas de la ZP y azúcares. En resumen, este trabajo muestra que proacrosina/acrosina humana presenta La capacidad de reconocer glicoproteinas de la ZP. de manera independiente de laactividad de proteasa. Esto permite proponer que proacrosina/acrosina participaríacomo molécula de adhesión en la unión secundaria del espermatozoide a la ZP en elhumano.

Descripción: La capacidad de respuesta de una planta ante los cambios ambientales circundantes asegura su supervivencia. Los mecanismos de respuesta a estres biótico y abiótico están regulados por vías que dependen de la activación de genes en la cual una red de transducción de señales abarca desde la percepción de las señales hasta la expresión de genes de respuesta permitiendo la adaptación de la planta a su entorno, debiendo para ello integrar las señales externas e internas. Las nucleosido di fosfato quinasas (NDPKs) son enzimas que transfieren el fosfato γ de nucleósidos tri fosfatos (NTPs) a nucleósidos di fosfatos (NDPs) a través de un intermediario fosforilado en una histidina conservada, participando de la red de comunicación energética intracelular y pudiendo alterar el pool de NTPs. En plantas se han visto recientemente involucradas en varias cascadas de señalización. El objetivo general del trabajo es caracterizar las isoformas de NDPK en plantas de papa (S. tuberosum, var. Spunta) y estudiar su participación en la percepción de señales ambientales, analizando su expresión en respuesta a señales de estrés biótico y abiótico. La hipótesis planteada es que, dado que en toda situación de estrés subyace un compromiso energético y considerando que las NDPKs poseen actividad de fosfo-transferasa, éstas podrían estar involucradas en las respuestas a estímulos ambientales. A partir de los EST correspondientes a isoformas de NDPKs (STMED71, STMHY37) detectados en los microarreglos TIGR 10K de ARNm de brotes de papa cultivados en luz/oscuridad, se clonó de la secuencia codificante completa de StNDPK1 (GB FJ743686) a partir de brotes de papa y se sub-clonó un fragmento de la secuencia codificante de StNDPK2 (GB JF832386) a partir de una biblioteca de estolones. Se comparó la expresión de ambas en los distintos tejidos vegetativos y reproductivos de la planta y en tres estadios de tuberización por RT-PCR semi cuantitativa. StNDPK1 se expresa con distintos niveles de ARNm tanto en los tejidos como en los estadios de tuberización, mientras que StNDPK2 se expresaría en algún estadio de estolón tuberizante que no se pudo determinar. El análisis in silico de la secuencia aminoacidica de StNDPK1 muestra que tiene 238 amino ácidos de longitud, un peso molecular aproximado de 26 kDa y un punto isoeléctrico de 9.24. Codificaría para una proteína mitocondrial, el péptido señal comprendería los primeros 56 aa y el PM de la proteína madura sería de aprox. 20 kDa. La proteína recombinante StNDPK1 marcada con seis histidinas (6xHis) en su N-terminal producida se analizó por Western blot. Un anticuerpo anti-His detectó una banda de 26 kDa, mientras que un anticuerpo anti-NDPK1 dirigido contra el extremo Cterminal de la proteína reveló la banda de 26 kDa y una banda de 18kDa que podría corresponder a la proteína madura. Se detectó actividad de NDPK en extractos crudos y fracciones mitocondriales de brotación tubérculos, pero no en fracciones de cloroplastos. Además, los ensayos de Western blot realizados con el anticuerpo específico antiNDPK1 detectó la enzima en la fracción mitocondrial. El análisis filogenético de la proteína muestra que StNDPK1 está directamente emparentada con NDPK de Spinacia olaracea (que localiza en cloroplastos) y que posee un ancestro común con las otras isoformas de NDPKs de localización mitocondrial (AtNDPK3, BrNDPKIII y PsNDPK3). Además se pudo clonar la secuencia genómica completa de Stndpk1 (GB GU144806) de 3358 nts, posee 7 exones y 6 intrones. El Southern Blot usando como sonda la secuencia codificante de StNDPK1 sugiere que este gen pertenece a una familia multigénica. Por otro lado, se obtuvo el promotor de éste gen de 2385 pb cuyo análisis in silico revela la presencia de elementos regulados por luz, frío, daño mecánico, respuesta a defensa y dos sitios reguladores de los niveles transcripcionales (CAATbox y 5UTR Py-rich stretch). Dado que se disponía de mayor información respecto de la estructura del gen y de los elementos regulatorios que contiene la isoforma 1 de StNDPK y considerando que ésta tenía un perfil de expresión menos complejo que la isoforma 2, se realizaron los estudios de expresión en condiciones de estrés abiótico y biótico sólo para la isoforma 1. Los resultados de las RT-PCR semi-cuantitativas muestran que el nivel de ARNm de StNDPK1 aumenta en la exposición de plantas a oscuridad por tiempos cortos, mientras que en la exposición a bajas temperaturas se produce una disminución inicial de la expresión para luego recuperar los niveles normales. Se observó que tanto en el tratamiento con daño mecánico como el agregado de AJ (10μM) producen un aumento del mensajero de StNDPK1. Por otro lado, se midió actividad de NDPK en extractos de proteínas nativas de fracciones mitocondriales y de cloroplastos; tanto el extracto crudo, como la fracción mitocondrial presentan actividad de NDPK, sin embargo en la fracción de cloroplastos no se detectó actividad alguna. El análisis bio-informático sugiere que las dos isoformas, son de localización sub-celular. Pero en particular, StNDPK1 fue detectada por Western blot en la fracción mitocondrial donde también se midió la actividad enzimática; por lo que StNDPK1 sería una isoforma que localiza en la mitocondria. Al menos dos isoformas de NDPK en plantas de papa muestran un patrón muy diferente de expresión, StNDPK1 tiene diferentes niveles de expresión en tejidos, pero su expresión es ubicua, mientras StNDPK2 muestra un patrón más restringido y sólo se expresa en ciertas etapas de estolones, lo que sugiere que posiblemente su expresión esté asociada a ciertas etapas del desarrollo del tubérculo. Nuestros resultados sugieren fuertemente que StNDPK1 está dirigida a la mitocondria. El análisis de los datos de Stndpk1 promotor es consistente con los resultados de la expresión, lo que sugiere que StNDPK1 podrían estar involucrados en las respuestas ambientales a la disponibilidad de luz, temperaturas bajas o ataque herbívoro.

Descripción: Las señales de calcio son utilizadas por una enorme variedad de células para regular procesos tan distintos como la fertilización o la muerte celular, entre muchos otros. La versatilidad del ión calcio como agente señalizador se basa en la gran diversidad de comportamientos que su concentración puede desplegar dentro de las células. Desentrañar la compleja trama de mecanismos que determinan dichos comportamientos es un enorme desafío que requiere la combinación de estrategias múltiples tanto experimentales como de modelado. En particular, el amplio rango de escalas espaciales y temporales involucradas no puede ser abarcado con un unico tipo de experimentos y es entonces que la elaboración de modelos que permitan conectar observaciones dispares se vuelve indispensable. Por otro lado, para que los modelos puedan cumplir este rol es necesario contar con estimaciones confiables, idealmente obtenidas in situ, de algunas de las cantidades que caracterizan a los fenómenos físicos y químicos involucrados en las señales. El objetivo de esta Tesis ha sido avanzar en la obtención de estas estimaciones realistas realizando experimentos opticos y desarrollando el marco teórico necesario para extraer información cuantitativa de los mismos. Una de las propiedades pobremente caracterizadas es la tasa a la que el calcio se transporta dentro de las células. Existen distintas técnicas opticas para estimar coeficientes de difusión, entre las que se encuentran la espectroscopía de correlación de fluorescencia (FCS) o la recuperación de fluorescencia tras fotoblanqueo (FRAP). La aplicación de las mismas al caso del calcio no es totalmente directa, ya que este ión no sólo difunde al entrar al citosol a través de canales específicos, sino que también reacciona con distintas sustancias (“buffers”) que poseen las células. Para describir este tipo de transporte es posible definir coeficientes efectivos, que contienen información sobre la difusión y las reacciones. Estudios preliminares habrán mostrado la existencia de más de un coeficiente de este tipo. Una de las contribuciones de esta Tesis ha sido estudiar de forma detallada la información que es posible extraer a partir de experimentos de FCS en donde la sustancia observada difunde y reacciona. En particular, se demostró que las técnicas de FCS y FRAP brindan información sobre coeficientes distintos, que puede ser combinada para inferir tasas de reacción yo de difusión libre. Se realizó este estudio teórico para el caso en que la sustancia de interés está marcada fluorescentemente y cuando existen moléculas marcadas y no marcadas en el mismo sistema. Parte de los resultados fueron aplicados para explicar las diferencias observadas en experimentos de FCS y FRAP, realizados para deter minar el coeficiente de difusión del producto del gen bicoid en embriones de moscas Drosophila melanogaster, una sustancia fundamental para el establecimiento del eje dorsoventral en este organismo. La aplicación de técnicas opticas para estudiar el transporte de calcio en células presenta dificultades adicionales. En primer lugar, la observación de la distribución del calcio se hace de modo indirecto, mediante fluoróforos que reaccionan con este ión y cambian sus propiedades espectrales como por ejemplo, aumentar notablemen te la fluorescencia al ligar calcio. Es decir, la sustancia observable (indicador ligado a calcio) está permanentemente transformándose en otra. Por otro lado, para poder inferir a partir de ella la distribución de calcio libre es necesario conocer propiedades del indicador que típicamente no son provistas por quienes lo comercializan, como por ejemplo, los coeficientes de difusión. Otra de las contribuciones de esta Tesis ha sido establecer las bases para la determinación de los coeficientes de difusión y tasas de reacción del calcio y sus fluoróforos, en células. Para tal fin se hicieron, en primer lugar, experimentos de FCS en distintos tipos de soluciones conteniendo calcio e indicador. Se trabajó simultáneamente en los desarrollos teóricos necesarios para el análisis de los mismos. De su aplicación se pudieron determinar coeficientes de difusión y parámetros de reacción en solución. Entre los experimentos se realizó un subconjunto conteniendo calcio, indicador y un “buffer” adicional. A partir del estudio detallado de estos ultimos se elaboró una propuesta de cómo obtener estos coeficientes en células intactas donde las propiedades de los “buffers” presentes son desconocidas. La versatilidad de las señales intracelulares de calcio depende, entre otras cosas, de la distribución espacial y de la cinética de los canales a través de los cuales los iones ingresan al citosol. Entre estos, los receptores de inositol (1,4,5)-trifosfato (IP3 R) constituyen una de las vías más importantes para este ingreso. Estos canales se encuentran en la membrana del retículo endoplasmático organizados en cúmulos que se supone son de unos 100 nm de lado y que están, a su vez, separados por algunos milímetros entre sí. Los canales se abren cuando ligan calcio e IP3 R el que, en condiciones fisiológicas, es sintetizado a partir de elementos presentes en la membrana plasmática cuando la célula recibe una señal. La distribución inhomogénea de los canales junto con el efecto del calcio liberado sobre la probabilidad de aper- tura se combinan para dar lugar a una jerarquía de señales que van desde las muy localizadas hasta las ondas que viajan por toda la célula. Contar con información cuantitativa sobre la geometría de los cúmulos y sobre la cinética de los canales in situ es fundamental para entender la variedad de señales que pueden evocarse. Experimentalmente es posible observar las señales usando los fluoróforos antes mencionados e induciendo la apertura de los canales con IP3 , que es introducido en la célula en forma enjaulada y posteriormente fotoliberado con luz ultravioleta. Otra de las contribuciones del presente trabajo de Tesis ha sido el diseño e implementación de una adaptación relativamente barata de un microscopio confocal Olympus FV1000 para realizar este tipo de experimentos. La habilidad del sistema para fotolizar compuestos enjaulados fue comprobada en distintas situaciones experimentales. Por otro lado, la potencia que llega a la muestra y el tamaño de la zona iluminada fueron cuantificados. Finalmente, en el trabajo se ha mostrado también que con esta adaptación es posible generar un est ́mulo preciso y controlado de IP3 simultáneamente a la obtención de imágenes confocales de señales de calcio, registrando y caracterizando a las mismas en ovocitos de Xenopus Laevis.

Descripción: El Virus de la Diarrea Viral Bovina (BVDV) pertenece al género Pestivirus de lafamilia Flaviviridae y es causante de importantes pérdidas económicas en la industriaganadera regional y mundial. Las manifestaciones clinicas de la infección son variadasy las pérdidas en la producción ganadera se deben principalmente a la disminución enla producción de leche, retraso en el crecimiento, aumento de infecciones secundariasy aumento de la mortalidad en animales jóvenes. El control epidemiológico de BVDV se realiza a través de programas devacunación masiva y eliminación de animales persistentemente infectados, principalesdiseminadores del virus en los rebaños. Los bajos títulos virales obtenidos en cultivo de tejidos constituyen unadificultad importante en la elaboración industrial de vacunas inactivadas. La utilizaciónde cepas atenuadas como vacunas anti BVDV es, por otra parte, un riesgo mayor yaque la aparición de revertantes en un animal pre-infectado con BVDV podríadesencadenar la “enfermedad de las mucosas”, que es fatal y en vacas preñadaspodría dar origen a una camada de terneros persistentemente infectados. Eldiagnóstico de las infecciones con BVDV, realizada a través de la detección deanticuerpos en suero bovino por seroneutralización y/o inmunoensayo enzimática (ELISA) también presenta dificultades debidas, entre otras, a la necesidad de contarcon infraestructuras adecuadas para el cultivo de células y a los desafios técnicos quepresenta la obtención de antígeno purificado. En este trabajo se expresó en sistemas recombinantes y se caracterizóbioquímica e inmunológicamente al principal inmunógeno de BVDV, la glicoproteína E2. La proteína fue expresada en células de mamífero y de insecto, en su formaentera (rE2) y delecionada en su extremo carboxilo terminal de anclaje a membrana (ΔrE2) y se ensayó su desempeño como vacuna y como antígeno para diagnóstico. Laproteína recombinante E2 (rE2) presento características electroforéticas einmunoquímicas idénticas a la E2 viral y resultó ser un potente inmunógeno enbovinos. La incorporación del gen de rE2 en el genoma de un Virus de la estomatitisvesicular (VSV) recombinante permitió, también , la creación de un virus atenuado de VSV (VSV-E2) capaz de inducir una excelente respuesta humoral anti BVDV enratones y óptima producción de E2 recombinante en células de BHK en cultivo. En este trabajo también se demostró que la proteína ΔrE2 es expresada yliberada al sobrenadante del cultivo de células de Drosophila melanogaster lo quepermitió contar con una preparación rápida y relativamente pura de antígeno. Este fueutilizado en un test de ELISA de captura (a través de un anticuerpo monoclonal antirE2, también desarrollado en el curso de este trabajo de Tesis) que presenta altasensibilidad y especificidad para la detección de anticuerpos anti BVDV en suerosbovinos.

Descripción: Fil: Pardo, Patricia Susana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: En esta tesis se estudia el problema de encontrar condiciones sobre dos operadores lineales y acotados T y L que conmutan entre sí y actúan en un espacio de Hilbert separable H, y sobre un conjunto de vectores finito o numerable {vi}ieI cH para que el sistema de iteraciones {TkLjvi} forme un marco de H. Las condiciones obtenidas se basan en establecer una correspondencia vía un isomorfismo entre cada marco de la forma anterior y un marco “canónico” que resulta ser un marco de Parseval de algún subespacio cerrado N de L2 (T, K), donde K es un espacio de Hardy vectorial. Motivados por lo anterior, el segundo problema que se estudia en este trabajo es buscar una descripción explícita de los subespacios de L2 (T, K) que están generados por marcos canónicos. Esto se enmarca en el problema de caracterizar los subespacios invariantes por operadores lineales y acotados actuando en espacios de Hilbert. Para ello se estudian resultados clásicos de Beurling, Helson y Halmos, sobre los subespacios del espacio de Hardy escalar H2, el espacio L2 (T) y el espacio de Hardy vectorial H2 (T, K) que son invariantes por los operadores shift unilateral, shift bilateral y el shift unilateral con multiplicidad, respectivamente. Por último, consideramos una familia de espacios de Hilbert de funciones analíticas con núcleo reproductivo que incluyen al espacio de Hardy escalar H2 y damos respuesta a la pregunta de si la función límite de una sucesión convergente de funciones cíclicas (no cíclicas) es cíclica (no cíclica). En particular, demostramos que el conjunto de las funciones outer no es cerrado en la topología de la norma de H2. Por otro lado, damos una relación cuantitativa entre los polinomios aproximantes óptimos de una sucesión de funciones y los polinomios aproximantes óptimos del límite de dicha sucesión en el caso que ésta sea convergente.

Descripción: Fil: Engel, Juan Carlos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: El objetivo del presente trabajo de Tesis fue caracterizar las células stem tumorales demelanoma cutáneo, en particular si las células obtenidas luego del tratamiento con inhibidores dela vía de MAPK presentan características de células stem tumorales. En primer lugar se analizó la expresión de CD271 y CD133, marcadores de células stemtumorales de melanoma, en líneas celulares de melanoma humano y en biopsias de pacientes demelanoma metastásico y se encontró que la expresión de los mismos no permite identificar unapoblación con características de células stem tumorales. Con el objetivo de enriquecer en célulascon características stem tumorales, y considerando que entre las propiedades que se le atribuyena esta población se encuentra la resistencia a drogas, se estudió el efecto del tratamientoprolongado con inhibidores de BRAF (PLX4032) y MEK (GDC-0973) en líneas celulares demelanoma que presentan la mutación BRAF V600 y son sensibles a estos inhibidores. Se encontróque luego del tratamiento in vitro con los inhibidores PLX4032 y GDC-0973 durante variassemanas, la mayoría de las células moría pero algunas permanecían viables y quiescentes. Sedenominó a esta población celular SUR. Al discontinuar el tratamiento, las células SUR retomaronsu crecimiento y mantuvieron una sensibilidad a los inhibidores similar a las células parentales. Lascélulas SUR presentan elevados niveles de expresión de los marcadores de células stem tumorales CD271 y ABCB5, pero no de CD133, y presentan características asociadas a senescencia, como laactividad de -galactosidasa. Las células SUR retienen su capacidad tumorigénica, ya que soncapaces de generar tumores en ratones inmunodeficientes. Para caracterizar a la población decélulas SUR en profundidad se realizaron experimentos de secuenciación del exoma y deltranscriptoma, además de microarreglos de expresión y microarreglos de proteínas. Las células SUR son lisadas de forma eficiente por linfocitos T citotóxicos que reconocen los antígenos dediferenciación melanocítica MART-1 y gp100. Proponemos la adquisición de un fenotipo concaracterísticas de células stem tumorales como un mecanismo de resistencia plástico a losinhibidores de BRAF y MEK.

Descripción: Los receptores acoplados a proteína G (GPCRs) son los mediadores de las respuestas celulares auna gran cantidad de estímulos, así como también el blanco de muchas drogas terapéuticas. Elrol clásico de los GPCRs es acoplar la unión de ligandos a la activación de proteínas Gheterotriméricas, que a su vez regulan a múltiples proteínas efectoras. Recientemente se hademostrado que los modos de señalización de los GPCR son mucho más complejos,involucrando también mecanismos independientes de proteínas G y señalización dependiente dela internalización del receptor. La hormona liberadora de corticotropina (CRH) ejerce un rol clave en la respuesta integrada alestrés. Además de regular la activación del eje hipotálamo-pituitario-adrenal (HPA), CRH estáampliamente distribuida en el sistema nervioso central, donde funciona como unneuromodulador, integrando aspectos comportamentales y afectivos de la respuesta a estrés. Seha demostrado que la desregulación de la acción de CRH a través de su receptor de alta afinidad, CRHR1, se encuentra involucrada en el desarrollo de estadios patológicos asociados al estréscomo ansiedad y depresión. CRHR1 es un GPCR de clase B, que al activarse principalmente se acopla a proteína Gs y llevaa un aumento del segundo mensajero AMP cíclico (cAMP) y la activación de múltiples vías deseñalización. Es de particular interés la fosforilación de la MAPK ERK1/2, que induce latranscripción de Pomc para activar el eje HPA en corticotrofos, y se dispara en estructuras delcerebro asociadas a aspectos comportamentales de la respuesta a estrés frente a la estimulacióncon CRH. Habíamos descripto previamente que CRHR1 activa mecanismos de señalización dependientesde proteína G y otros dependientes de la endocitosis del receptor. Estos dos componentes derespuesta pueden evidenciarse como dos fases diferentes de activación de ERK1/2 en la líneacelular hipocampal murina HT22 transfectada establemente con CRHR1 (HT22-CRHR1). Eneste trabajo, nos focalizamos en la respuesta de cAMP mediada por CRHR1, utilizando métodosclásicos de biología molecular en combinación con biosensores basados en la transferencia deenergía resonante de Förster (FRET) para estudiar por visualización dinámica de célula únicalos mecanismos de señalización de CRH. En primer lugar demostramos que al estimular CRHR1, el aumento en los niveles de cAMP nosólo está mediado por las adenilil ciclasas transmembrana (tmACs) sino también por una adenilil ciclasa soluble (sAC) en las células HT22-CRHR1. sAC es una fuente atípica de cAMPya que es insensible a proteína G y es regulada por calcio y bicarbonato. Además, se hareportado que sAC está presente en distintas localizaciones subcelulares, formandomicrodominios de señalización. La respuesta de cAMP a CRH también se encontró mediadatanto por tmAC como por sAC en la línea celular derivada de corticotrofos AtT20, pero no asíen las células 3T3L1-CRHR1. Sin embargo, observamos que tanto en células HT22-CRHR1como en AtT20, sAC no participa en la señalización de otros ligandos de GPCRs, comoisoproterenol o PACAP38, respectivamente. Estos resultados indican que el rol de sAC en latransducción de señales de un GPCR depende del contexto celular y del receptor involucrado. La estimulación con CRH genera un aumento en los niveles de calcio intracelular, y al bloquearla respuesta de calcio se observó un patrón de cAMP y ERK1/2 en respuesta a CRH similar alque se obtiene al bloquear sAC. Esto sugiere que calcio es el activador de sAC río abajo de CRHR1. Luego, nos propusimos caracterizar si ambas fuentes de cAMP contribuyen a un pool común decAMP o si pueden identificarse roles particulares para cada adenilil ciclasa en la respuesta. Observamos que tanto tmACs como sAC participan en la fase aguda de activación de ERK1/2,pero que en la fase sostenida de fosfo-ERK1/2, dependiente de la internalización de CRHR1,sólo sAC está involucrada. Más aún, demostramos que el CRHR1 continúa generando cAMPdesde estaciones endocíticas, y que es sAC la responsable de esta producción una vezinternalizado CRHR1. En conclusión, a través de la caracterización de los mecanismos moleculares activados por CRHR1, se hallaron nuevas evidencias que refuerzan el modelo emergente de señalización por GPCR en el que la respuesta de cAMP no ocurre exclusivamente a nivel de la membranaplasmática y donde sAC representa una fuente alternativa de cAMP regulada por GPCRs.

Descripción: A pesar de la importancia del proceso de fertilización, es aún muy escasa lainformación disponible acerca de las moléculas involucradas. Las evidencias denuestro laboratorio indican que las proteínas de la familia CRISP, miembro de lasuperfamilia CAP, serían claros mediadores del proceso de interacción de gametas. Teniendo en cuenta que las CRISP se expresan principalmente en el tractoreproductor masculino, el primer objetivo de esta Tesis ha sido investigar si las mismastambién se expresan en el tracto reproductor femenino y cumplen un rol en el procesode fertilización. Los resultados obtenidos utilizando los modelos de rata y ratónindicaron que mientras CRISP1 se encuentra presente en útero, oviducto, ovario, ycélulas del cúmulus, CRISP2 se detecta sólo en ovario, y CRISP4 no se expresaría enel tracto de la hembra. Ensayos de fertilización in vitro utilizando espermatozoides y COC (complejos ovocito-cúmulus) provenientes de ratones knockout para CRISP1indicaron que la proteína presente en el cúmulus cumpliría una función en el procesode fertilización. Estudios posteriores revelaron que CRISP1 exhibe propiedadesquimioatractantes hacia los espermatozoides, sugiriendo que éste podría ser elmecanismo por el cual CRISP1 del cúmulus participa en el proceso de fertilización. Dada la gran homología entre las CRISP y las GLIPR1, las cuales constituyen las dosfamilias mejor caracterizadas de la superfamila CAP, el segundo objetivo de estetrabajo consistió en estudiar la presencia de proteínas GLIPR1 en el tracto reproductormasculino y su participación en la fertilización. Los resultados indicaron la expresiónde GLIPR1L1 a nivel testicular y de GLIPR1L2 tanto en testículo como en epidídimo deratón. La generación de ambas proteínas en forma recombinante y de suscorrespondientes anticuerpos confirmó la presencia de las mismas en elespermatozoide y su participación específica en la primera etapa de unión a la zonapellucida. La información obtenida acerca del rol de las proteínas CRISP y GLIPR1contribuirá a una mayor comprensión de los mecanismos moleculares involucrados enla interacción de gametas como así también al desarrollo de futuros métodos deregulación de la fertilidad tanto en animales como en el humano.

Descripción: Fil: Salamanca Camargo, Rosa Angela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: El calcio es un segundo mensajero ubicuo en plantas que participa en la señalización de estímulos bióticos y abióticos. Las oscilaciones del catión son decodificadas por distintos sensores, entre ellos se destacan las quinasas de proteínas dependientes de calcio (CDPKs). Estas enzimas presentan un dominio catalítico de quinasa de serina/treonina (KD) fusionado a través de un dominio autoinhibitorio (AD) a un dominio regulador similar a calmodulina (CLD) con cuatro sitios EF-hands de unión al calcio. La familia CDPK en papa (Solanum tuberosum) está compuesta por 26 miembros divididos en cuatro grupos; cinco CDPKS pertenecen al grupo III y tres de ellas, StCDPK22/23/24, presentan sólo tres sitios EF-hands en su dominio regulatorio faltando el sitio más cercano al AD (Fantino et al. 2017). Una nueva búsqueda permitió encontrar un nuevo miembro de este grupo, StCDPK27, que también presenta tres sitios EF-hand, pero en este caso carece del segundo sitio. El análisis filogenético de los miembros del grupo III reveló que las isoformas que carecen del primer sitio EF-hand forman un clado aparte. Se ha reportado que CDPKs con sólo 3 sitios presentan menor sensibilidad por el calcio (Boudsocq et al. 2012). Con el fin de analizar su dependencia por el catión, se amplificaron las secuencias codificantes de StCDPK22 y StCDPK24, y se generaron y purificaron las proteínas recombinantes, StCDPK22:6xHis y StCDPK24:6xHis (524 y 532 aa respectivamente). Ambas isoformas comparten 78% de identidad nucleotídica y 80% a nivel aminoacídico. A pesar de la gran identidad de secuencia de su KD presentan diferencias en su actividad quinasa y en la preferencia por el complejo ATP-Me2+. Se observa que StCDPK24 presenta mucha mayor actividad en todas las condiciones ensayadas y tiene una clara preferencia por el complejo ATP-Mg2+, presenta una dependencia parcial por Ca2+ y antagonistas de calmodulina disminuyen su actividad. Se determinó que Syntide-2 fue el mejor sustrato aceptor y con éste se determinaron los parámetros cinéticos (Vmáx y KM). Por su parte, StCDPK22 tiene muy baja actividad (casi nula), no se observa una clara dependencia por calcio y su actividad mejora cuando se utiliza ATP-Mn2+ como sustrato dador. Ambas isoformas presentan un patrón similar de autofosforilación en ausencia de calcio (Y39 o S33 del NTV, S321 o S323 y T325 o T327 del AD y S521 o S523 del CTV para StCDPK22 o StCDPK24 respectivamente). Además, StCDPK22 se fosforiló en dos residuos del KD (S83 y S297) en ausencia de calcio; mientras que StCDPK24 se autofosforiló en dos residuos del CLD (S438 y S445) sólo en presencia de calcio sugiriendo que esta isoforma es regulada por el catión. Es interesante que AtCPK8 de Arabidopsis también se autofosforila en los mismos residuos del AD y CTV sugiriendo que puede ser una forma de regulación de las CDPKS del clado. Se realizó un modelado in silico de la estructura secundaria y terciaria de ambas enzimas. Los datos de RT-qPCR indican que StCDPK22 presenta una expresión más restringida a flor y estadios tempranos de tuberización mientras que la expresión de StCDPK24 es ubicua, aunque fue mayor en brotes jóvenes, tallo, flor, hoja y estadios de tuberización. El análisis in silico de sus promotores permitió identificar varios motivos de respuesta a ABA y a estrés abiótico, por lo que su expresión se analizó en respuesta a la salinidad utilizando plantas in vitro y de invernadero. StCDPK24 se induce tempranamente (6 h) en respuesta a la sal en plantas in vitro para luego decaer. Lo mismo ocurrió en tallo de plantas de invernadero tratadas con sal (8 h). Nuestros resultados indican que ambas CDPKs difieren tanto en su actividad como en sus perfiles de expresión y la expresión espacio-temporal de StCDPK24 en respuesta al estrés salino sugiere que podría participar en esta cascada de señalización [fórmula aproximada, revisar la misma en el original].

Descripción: La interacción entre los complejos inmunes (CI) y los receptores para el fragmento Fc de las inmunoglobulinas G, induce respuestas inmunes regulatorias y efectoras. En este trabajo, nos propusimos investigar el efecto de los CI precipitantes sobre la diferenciación y las funciones biológicas de las células dendríticas (CD) derivadas de monocitos. Demostramos que el agregado de CI al inicio del cultivo altera la normal diferenciación de las CD. Así, las CD-CI diferenciadas durante 6 días en presencia de CI presentaron una baja expresión de los marcadores CD1a, CD1b, y una alta expresión de los marcadores CD14, MHC II y CD68, en comparación con las CD diferenciadas convencionalmente, sin embargo, no observamos diferencias en la expresión del marcador de células dendríticas CD11c. Estas alteraciones en el fenotipo correlacionaron con alteraciones en la morfología de las CD. Asimismo, evaluamos el efecto de CI solubles y observamos que sólo los CI solubles preparados con ligero exceso de antígeno, ejercieron un efecto sobre la diferenciación de las CD similar al observado con CI precipitantes. Demostramos además, que el efecto de los CI es tiempo y dosis dependiente e irreversible. Mediante el uso de anticuerpos bloqueantes específicos para los distintos FcγRs, determinamos que el efecto de los CI, es ejercido principalmente a través del FcγRI y en menor medida a través del FcγRII. Las CD-CI inmaduras mostraron altos niveles de CD83, CD86 y CD40, y el tratamiento con LPS no indujo un aumento en la expresión de las mismas. Esta alteración en la maduración de las CD se encontró asociada con una menor producción de IL-12 en respuesta al LPS, mientras que la producción de IL-10 no se vio alterada. Las CD-CI mostraron un perfil de producción de quimioquinas alterado, con un incremento en la producción de CXCL8, CCL2 y CCL3. Asimismo, las CD-CI mostraron una capacidad reducida para inducir una respuesta T alogénica y una menor capacidad endocítica. Demostramos que el efecto ejercido por los CI es independiente de IL-10 y prostaglandinas, mientras que la inhibición de la p38 MAP quinasa, abolió dicho efecto. Nuestros resultados demuestran que los CI afectan severamente la diferenciación, maduración y las funciones biológicas de las CD. Por esta razón, creemos que este estudio puede contribuir a un mejor entendimiento de los eventos involucrados en la patogénesis de las enfermedades autoinmunes y los desórdenes inflamatorios crónicos como el lupus eritematoso sistémico (LES), la granulomatosis de Wegener, la crioglobulinemia esencial y artritis reumatoidea (AR).

Descripción: La lignocelulosa es el componente mayoritario de la biomasa vegetal. Está formada por celulosa embebida en una matriz de hemicelulosa y lignina. Los microorganismos celulolíticos aerobios secretan un conjunto de enzimas que les permiten degradar los polisacáridos estructurales (celulosa y hemicelulosas) para utilizarlos como fuente de carbono. Estas enzimas son ampliamente estudiadas y tienen gran importancia, particularmente por su potencial aplicación en el aprovechamiento de biomasa no-alimenticia, como residuos agro-foresto industriales, principalmente para obtener biocombustibles o alimento animal. El aislamiento bacteriano Cellulomonas sp. B6, obtenido a partir de un consorcio celulolítico de suelo forestal, fue capaz de crecer en numerosos sustratos celulósicos, incluyendo biomasa. Los sobrenadantes de cultivo presentaron principalmente actividades endo y exoglucanasa y xilanasa y en los extractos intracelulares se detectaron actividades β-glucosidasa y β-xilosidasa. El crecimiento en biomasa lignocelulósica (residuo de cosecha de caña de azúcar, RAC) resultó en la mayor actividad enzimática en el sobrenadante (0,2 y 0,6 UI/ml para las actividades endoglucanasa y xilanasa, respectivamente). Estas actividades se mantuvieron en un rango de pH de 5 a 8 y de temperatura de 40 a 55°C, indicando la potencialidad del extracto para aplicaciones de degradación de biomasa en esas condiciones. Por zimografía, estas actividades se correlacionaron con proteínas presentes en el sobrenadante de cultivo. El genoma de Cellulomonas sp. B6 fue secuenciado por Illumina MiSeq y ensamblado en 279 contigs, resultando en una cobertura de 83X. El tamaño total del genoma se estimó en 4 Mb y el contenido de GC fue de 75,1%, similar a lo reportado para cepas de referencia del género. Por análisis filogénetico a partir de la secuencia de la subunidad 16S de ARN ribosomal, Cellulomonas sp. B6 se encuentra relacionado con las especies Cellulomonas flavigena y Cellulomonas persica, aunque presenta características genotípicas y metabólicas distintivas, lo que sugiere que podría tratarse de una nueva especie. Mediante anotación del genoma Cellulomonas sp. B6 por las plataformas NCBI y RAST, seguido de análisis por la plataforma dbCAN, se identificaron 3443 secuencias codificantes para proteínas, de las cuales 205 corresponden a enzimas activas sobre carbohidratos (CAZimas). De las CAZimas predichas, 91 son glicosil hidrolasas (GH), de las cuales 32 poseen secuencia codificante para péptido señal, lo que indica que podrían ser extra-celulares. Para identificar las proteínas responsables de la actividad enzimática previamente observada, se analizó por espectrometría de masas el secretoma completo (conjunto de proteínas extracelulares) en sobrenadantes de cultivo en celulosa (carboximetilcelulosa, CMC), residuo agrícola de caña de azúcar molido (RAC) o paja de trigo pretratada por extrusión (PTE), como únicas fuente de carbono. En el sobrenadante de cultivo en CMC se identificaron 2 exoglucanasas (GH6 and GH48) y tres xilanasas GH10, mientras que el crecimiento en biomasa (RAC o PTE) resultó en la identificación de 22 CAZimas, incluyendo endo- y exoglucanasas (2 GH6, 2 GH9 y 1 GH48), xilanasas (7 GH10 y 1 GH11), una xiloglucanasa (GH74), una arabinofuranosidasa/ β-xilosidasa (GH43), una β-glucosidasa (GH3) y una α-glucuronidasa (GH62), entre otras. Adicionalmente, se identificó una oxígenasa lítica de polisacáridos (LPMO) AA10, potencialmente involucrada en la deconstrucción de celulosa cristalina por un mecanismo oxidativo. La diversidad de GH10 secretadas (todas las extracelulares codificadas en el genoma) remarca la importancia de estas enzimas en la deconstrucción de biomasa. Para comenzar a evaluar la contribución individual de las xilanasas de la familia GH10 a la actividad del extracto, una GH10 con un módulo de unión a sustrato CBM2, a la que denominamos GH10XynC, fue expresada de manera recombinante en Escherichia coli y purificada en forma soluble. La enzima recombinante presentó actividad endoxilanasa (EC 3.2.8.1) en el rango de 300 UI/mg, sobre xilano de abedul y sobre arabinoxilano. No presentó actividad sobre celulosa, confirmando que es una xilanasa libre de actividad celulolítica. Los productos de hidrólisis de xilano fueron xilobiosa (X2) y xilosa (X1) en menor proporción y la actividad fue óptima a 50ºC, en un rango de pH de 5 a 7,5. Ensayos de hidrólisis con GH10XynC de paja de cebada y de trigo y el marlo de maíz dulce (MMD) (pre-tratados por extrusión) resultaron en la conversión a xilooligosacáridos, X2 y X1, demostrando la habilidad de la enzima de actuar sobre el xilano contenido en la biomasa. En conjunto, estos resultados demuestran que Cellulomonas sp. B6 constituye una fuente de enzimas con potencial aplicación agro-industrial en el aprovechamiento de biomasa lignocelulósica. Es más, la enzima GH10XynC podría ser aplicada en la utilización de xilanos para las indutrias de biocombustibles, prebióticos y alimento animal.

Descripción: Los sistemas multifásicos se encuentran en una gran cantidad de operaciones y en lagran mayoría de los procesos de la industria química, donde es necesario contactarreactivos presentes en distintas fases. Ejemplos de ellos pueden ser los procesos defermentación que requieren del aireado de una suspensión densa de aglomerados debiomasa o la producción de jugos, que requiere de la trituración de frutas de maneracontinua minimizando el contacto con aire, o el proceso Fisher-Tropsch, que producecombustibles líquidos a partir de gas natural por reacción catalítica en torres de lechofluidizado gas-líquido-sólido. Un ejemplo de creciente impacto económico-social son lostratamientos de efluentes líquidos o gaseosos, que requieren lidiar con sistemas decomposición y reología complejos. Para controlar, diseñar u optimizar un equipo a escala industrial o para contrastarresultados de simulación computacional de fluido dinámica o de dinámica granular, serequiere de información experimental del movimiento y la distribución de las fasespresentes. La información que se utiliza para evaluar la performance y verificar modelosque describen el movimiento de las fases presentes en un reactor, vinculando lafluidodinámica del sistema con el transporte de materia y energía son los campos develocidad de las fases presentes, parámetros de turbulencia, distribución de fases opatrón de flujo, tiempos de residencia y de mezclado. Los equipos industriales suelen serde paredes opacas y, aún si se operara con paredes translúcidas, los mismos sistemasmultifásicos tienen la característica de dispersar la luz intensamente. En consecuencia,las técnicas que explotan la interacción con la luz visible por parte del sistema poseenaplicaciones muy limitadas y resulta apropiado recurrir a técnicas que utilizan radiación dealta energía para obtener información sobre el comportamiento de las fases en sistemasmultifásicos que contribuya a optimizar diseños y monitorear la operación de un equipo. El objetivo general de este trabajo es el estudio de la fluido dinámica de sistemasmultifásicos en equipos de escala piloto, empleando técnicas no-invasivas basadas en eluso de métodos que utilizan la detección de radiación γ. En particular, se optimizó y utilizóla técnica conocida como Radioactive Particle Tracking (RPT) para caracterizar lafluidodinámica de columnas de burbujeo bifásicas y trifásicas y de un reactor slurryagitado. Además, se propuso una simplificación de la técnica de RPT que facilitaría suempleo en instalaciones industriales, comparándose la información extraíble.

Descripción: El procesado de información cuántica es un campo de investigación que desde las últimas décadas se encuentra en constante crecimiento. Ha sido crucial tanto en aspectos fundamentales de la mecánica cuántica como en el desarrollo de una gran cantidad de aplicaciones tecnológicas. Un problema fundamental del área es el de determinar el estado desconocido de un sistema cuántico. En este sentido, el proceso de reconstrucción de un estado general de dimensión d, conocida como tomografía cuántica, consiste en encontrar su matriz densidad. Para efectuar dicha reconstrucción típicamente deben realizarse d² mediciones lo cual dificulta el tratamiento para sistemas cuánticos de alta dimensión. Trabajar en espacios de Hilbert de alta dimensión posibilita una gran tasa de transmisión de datos en información cuántica. Si bien hasta hace unos años era muy difícil generar sistemas cuánticos de dimensión mayor que 2 (qudits) el uso de fotones individuales, en combinación con moduladores espaciales de luz, que permiten el control dinámico de distintas características de la luz, permitieron la manipulación de sistemas cuánticos de alta dimensión. Los moduladores espaciales de luz son elementos que permiten controlar determinadas magnitudes de la radiación emitida por una fuente luminosa, tales como su amplitud, su fase y su polarización. En esta Tesis se estudió la implementación y caracterización de estados y procesos cuánticos mediante el uso de pantallas de cristal líquido trabajando en modo de fase. En una primera etapa se desarrollaron métodos para caracterizar estados fotónicos espaciales, realizando mediciones interferométricas en el plano imagen del frente de onda que los describe. Por un lado presentamos un método para caracterizar cualquier qudit espacial puro, de dimensión arbitraria, que se basa en la técnica clásica de interferometría por corrimiento de fase. En el esquema propuesto un total de solo 4d mediciones son necesarias, lo que implica una reducción significativa con respecto a los esquemas estándar. Al usar esta técnica, hemos reconstruido experimentalmente una gran cantidad de estados que van desde dimensión d = 2 hasta 14 con valores de fidelidad medios superiores a 0, 97. Para ello, los qudits se codificaron en la posición discreta de momento transversal de fotones individuales, lo que se logró enviando los fotones a través de una abertura con d hendiduras. Se llevó a cabo una implementación experimental del método basado en un interferómetro Mach-Zehnder, que permite reducir el número de configuraciones de medición a cuatro, ya que las d ranuras se pueden medir simultáneamente. Por otro lado, presentamos un método para reconstruir qudits espaciales puros de dimensión arbitraria d, pero ahora basado en un interferómetro por difracción de punto. En el esquema propuesto, los estados cuánticos también están codificado en el momento transversal discretizado del frente de ondas del fotón cuando este atraviesa d rendijas, pero con el agregado de una región que provee la fase de referencia. Para hacer la caracterización del estado fotónico, la fase completa del frente de ondas se reconstruye mediante una técnica de corrimiento de fase. Combinado con un detector multipixel, la adquisición se puede paralelizar, y solo cuatro interferogramas se requieren para reconstruir cualquier estado puro de qudit, independientemente de la dimensión d. Probamos el método experimentalmente, para la reconstrucción de estados de dimensión d = 6 elegidos al azar, y obtuvimos una fidelidad media de 0, 95. Adicionalmente, desarrollamos un esquema experimental que permite estimar las aberraciones de fase que afectan al frente de ondas durante la propagación, y por lo tanto permiten mejorar la estimación del estado cuántico. En ese sentido, presentamos una prueba de principio que muestra la posibilidad de corregir la influencia de la turbulencia en procesos de comunicación en el espacio libre, en nuestro caso simulada por máscaras de fase con la distribución estadística de Kolmogorov, en donde logramos obtener fidelidades de reconstrucción medias comparables con el caso sin turbulencia. En una segunda etapa, trabajamos en esquemas de reconstrucción basados en medidas proyectivas. Para estados qudits fotónicos codificados en el momento transversal discretizado del fotón, estas medidas se logran haciendo imagen del estado incógnita sobre un elemento de la base sobre la cual se proyecta, y midiendo en el centro de la transformada de Fourier del frente de ondas emergente. Esto se implementó experimentalmente mediante una arquitectura de procesador óptico 4 − f, que utilizando pantallas de cristal líquido en modo de fase, tanto para la preparación de estados rendija (con fase y amplitud arbitraria), como para representar los estados arbitrarios sobre los cuales se realiza la proyección. Por un lado generalizamos el primer método interferométrico presentado en esta Tesis, el basado en un dispositivo tipo Mach-Zehnder, de tal manera de que la reconstrucción del estado desconocido pueda realizarse a partir del resultado de 4d – 3 proyectores independientemente de la codificación empleada. Es decir que este nuevo método es aplicable a cualquier implementación física de qudits. Otra ventaja de este método, es que las mismas 4d − 3 mediciones permiten verificar la hipótesis a priori de que el estado reconstruido es puro. Se obtuvieron excelentes fidelidades de reconstrucción, comparables con métodos que requieren un número mucho mayor de mediciones, como ser la tomografía cuántica de estados basada en bases mutuamente no sesgadas. Por otro lado, implementamos experimentalmente un esquema de tomografía de procesos cuánticos selectivo y eficiente en dimensión arbitraria. Obtuvimos excelentes fidelidades de reconstrucción y verificamos experimentalmente la eficiencia del método. Los desarrollos en esta Tesis son ideales para ser incorporados en las etapas de calibración y validación de sistemas de computación cuántica y de comunicación cuántica reales.

Descripción: El interés de esta Tesis se centra en la caracterización climática de los episodios de corriente en chorro en capas bajas al este de los Andes (SALLJ) y los campos de precipitación asociados a estos eventos, con énfasis en el impacto sobre la región Sudeste de Sudamérica (SESA). Este estudio utiliza los datos del reanálisis perteneciente al European Center Medium Weather Forecast (ERA), datos de radiación de onda larga saliente, datos de precipitación acumulada diaria y radiosondeos en Resistencia durante la estación cálida de 1979 - 1993. Estudios previos mostraron una relación entre el máximo de precipitación y la convergencia de vapor de agua sobre SESA. Nicolini and Saulo [2000] exploraron la hipótesis de una intensificación mutua en esta dependencia durante los eventos Chaco Jet (CJE). Estos eventos fueron definidos como casos SALLJ que penetran al sur de los 25ºS usando los productos del modelo operativo ETA durante la estación cálida de 1997 - 1998. Los CJEs representan un subensamble de eventos SALLJ poco frecuentes en los datos del ERA. Su duración oscila entre 1 a 10 días extendiéndose más frecuentemente entre 1 a 5 días. Las principales características de la circulación y de los campos termodinámicos que representan este ensamble son: un contraste máximo de masas de aire en 39ºS, la presencia de una vaguada con su eje sobre la cordillera de los Andes, un tren de ondas baroclínicas que penetra desde el Océano Pacífico y un máximo de calor y humedad sobre el norte de Argentina y Paraguay. Durante los CJEs existe un importante flujo de humedad y convergencia en los niveles bajos y medios que es 10 veces más intenso que la media del verano. La intensidad encontrada en las anomalías del flujo de humedad refuerza la importancia del estudio de estos episodios con el propósito de determinar el balance de vapor de agua sobre la SESA. El hecho que los CJEs representan una importante característica del clima de la SESA se basa en que los CJEs sólo representan el 17% (28%) del verano (primavera) y ellos son capaces de explicar una fracción significativa de la precipitación (un máximo de 55%) sobre el noreste de Argentina. Una comparación entre los CJEs y los eventos SALLJ - No Chaco muestra que estos últimos son más (menos) frecuentes durante el verano (primavera), llevando a la estación a comportarse como los SALLJ - No Chaco, mientras los CJEs presentan una fuerte componente baroclínica desarrollada en la escala sinóptica. Los campos medios de geopotencial en niveles bajos, dominados por una baja térmica y el Anticiclón del Atlántico Sur aumentan un patrón frontogenético que finalmente evoluciona en un pasaje frontal que marca el fin del CJE. Un estudio preliminar sobre el ciclo diurno de la convección es presentado en este trabajo utilizando observaciones de tiempo presente en Argentina. Una fase nocturna - matutina (03-09 hora local) en la convección prevalece durante primavera, mientras en verano se desarrolla por la tarde sobre el noreste de Argentina. Por otra parte, en el centro de Argentina la convección presenta una fase nocturna en verano. La misma fase que en primavera se manifiesta durante los CJEs, mientras un máximo a las 18UTC centrado en Formosa y Concordia se observa en los SALLJ - No Chaco durante toda la estación cálida. Otro máximo durante los SALLJ - No Chacho es identificado en verano en Mendoza, Salta y Neuquén en las horas de la mañana.

Descripción: Fil: Saragüeta, Patricia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: La fosforilación reversible de proteínas tiene un rol importante en la señalización asociada al desarrollo y al estrés en plantas. Algunos estudios sugieren que las fosfatasas de proteínas 2A (PP2A) están involucradas en estos procesos. El objetivo de este trabajo fue caracterizar las subunidades catalíticas de PP2A (PP2Ac) en Solanum tuberosum L. y estudiar su participación en la señalización asociada a la tuberización y el estrés. Búsquedas bioinformáticas en bases de datos de ESTs revelaron la presencia de seis isoformas de PP2Ac en S. tuberosum. Estas isoformas muestran patrones de expresión diferentes en distintos órganos de la planta y sus niveles cambian durante la formación del tubérculo. Se ha propuesto que las señales hormonales y ambientales que modulan la tuberización son integradas en las hojas. Para estudiar el rol de las PP2As en respuesta a condiciones que afectan la tuberización, se analizó la expresión en hojas de los genes “específicos de tubérculo” Patatina y Pin2, en presencia o ausencia de inhibidores de estas fosfatasas. Se encontró que una alta relación sacarosa/nitrógeno en el medio (condición promotora de la tuberización) estimula la expresión de Patatina y Pin2 posiblemente mediante el aumento de la actividad de PP2A, sin afectar los niveles de ARNm y proteínas de PP2Ac. Por otro lado, el ácido giberélico (GA, regulador negativo de la tuberización), disminuye el nivel de ARNm de algunas de las subunidades catalíticas, lo que se correlaciona con una menor cantidad de proteínas PP2Ac. Esta disminución causada por el GA inhibiría las señales de tuberización río abajo de los efectos inductores de una alta relación sacarosa/nitrógeno. Por otro lado, para estudiar la participación de las PP2As en la señalización asociada al estrés, se estudió la expresión de genes de respuesta a estrés en presencia o ausencia de un inhibidor de estas fosfatasas y se determinaron los patrones de expresión de las subunidades catalíticas en dichas condiciones. Se observó que las isoformas de PP2Ac son diferencialmente reguladas en respuesta a estrés y que estas fosfatasas tendrían un rol positivo en la señalización asociada a salinidad, mientras que regularían negativamente la transducción del estrés biótico.

Descripción: La arabinosa es el prinicipal azúcar neutro no celulósico de la pared celular de durazno (Prunus persica (L.) Batsch) y de ciruela japonesa (Prunus salicina Lindl), observándose una pérdida neta de arabinosa tanto durante la maduración y el ablandamiento como en etapas previas a dicho proceso. Las α-L-arabinofuranosidasas y α-L-arabinofuranosidasas/β-D-xilosidasas son enzimas responsables de estas modificaciones en la pared celular de Prunus persica (L.) Batsch y de Prunus salicina Lindl. Se obtuvieron clones completos de ADNc desconocidos de durazno (PpARF1) y de ciruela japonesa (PsARF/XYL). Además, el gen PsARF/XYL fue clonado y secuenciado. PsARF/XYL presentó dos variantes de ARNm maduro, uno completamente spliceado y otro con un intrón terminal retenido, probablemente debido a splicing alternativo. La proteína deducida a partir de este último, resulta en un péptido truncado en su porción carboxi-terminal que podría alterar su funcionalidad pero que no implica la pérdida de los aminoácidos del sitio activo. También se obtuvieron secuencias parciales de un gen de ciruelo japonés denominado PsARF1 (por su homología con PpARF1) el cual fue incluido en los análisis de expresión génica. Reacciones de RT-PCR para el gen PsARF/XYL en distintas fases de la ontogenia y maduración del fruto reveló una expresión diferencial de los dos transcriptos alternativamente spliceados. Aunque PsARF1 se expresa durante el climaterio, se inhibe fuertemente ante tratamientos con etileno. En todos los casos analizados, los transcriptos se detectaron en otros tejidos de la planta, tanto vegetativos como reproductivos. Los resultados sugieren fuertemente que la expresión de estos genes de pared celular se encuentra regulada a nivel transcripcional y post-transcripcional en distintos tejidos y estados de desarrollo y que el etileno, hormona de la maduración en frutos climatéricos, podría participar en esa regulación.

Descripción: El objetivo de esta tesis es identificar nuevos genes involucrados enneurodegeneración en Drosophila melanogaster y comprender su función y elmecanismo por el cual provoca dicha patología. En particular, se hizo foco en orsai. Encontramos que adultos envejecidos con la expresión de orsai reducida en lasneuronas que controlan el comportamiento rítmico locomotor presentaban una caídaen la ritmicidad y un alargamiento del período. La reducción de ORSAI en el cerebroadulto envejecido provoca que estos presenten signos de neurodegeneración másseveros que sus controles. También se encontró que la reducción de los niveles de este gen en larvasprovoca arresto en el segundo estadio y la consiguiente letalidad temprana. Estaslarvas tienen un comportamiento anómalo frente a la comida, alejándose de la mismay reptando en un modo de clásico forrajeo, a pesar de tener alimento disponible, hastasu muerte. Encontramos que acotando la reducción de ORSAI a las tráqueas fenocopiaal mutante. También determinamos que la respiración mitocondrial está severamentereducida en el mutante. La alteración de los niveles de ORSAI en distintos tejidos, tantolarvales como adultos, provoca diversos fenotipos, lo que demuestra la importancia deeste gen para la homeostasis celular. El fenotipo en las tráqueas podría, a través de procesos hipóxicos, explicar elcomportamiento de forrajeo en larvas y, sumando a esto la disfunción mitocondrial,los fenotipos observados en adultos.

Descripción: La presente tesis Doctoral analiza cómo variables ambientales, tales como la temperatura (T°), la humedad relativa (HR) y la iluminación pueden afectar la selección de hábitats por parte de los insectos triatominos. El análisis se llevó a cabo integrando estudios de laboratorio y de campo, a fin de realizar una evaluación global de la problemática. En el laboratorio, en 4 especies de triatominos y en individuos de diverso estado nutricional (i.e. ayunados o alimentados), se realizaron experimentos de preferencia térmica e hígrica en gradientes artificiales de T° y de HR,respectivamente. Las diferentes especies prefirieron permanecer en zonas con temperaturas entre 21°C y 32°C. En todos los casos se pudo constatar una preferencia por parte de las vinchucas por ammbientes de baja humedad relativa. La comparación entre especies reveló que Triatoma sordida y T. guasayana presentaron una marcada preferencia por temperaturas relativamente más elevadas (Ayunos: 31,5°C y31,76°C; Alimentados: 31,79°C y 31,87°C, respectivamente) y una preferencia por ambientes relativamente más secos (Ay: 11,52% y 13,80%, Al: 7,21% y 8,16%, respectivamente). Por otro lado, Rhodnius prolixus prefirió ambientes con los menores valores de T° (Ay: 25,35°C, Al:21,41°C) y humedades relativas no tan bajas (Ay: 18,48%, Al: 13,17%). T. infestans prefirió T° intermedias (Ay: 26,28°C, Al: 29.38°C), presentando una marcada diferencia entre insectos ayunados y alimentados en cuanto a su higropreferencia (Ay: 21,30%, Al: 10,74%). Los estudios de campo realizados en distintas regiones de la Antártida y Brasil con alta incidencia de triatominos, permitieron el análisis de la dinámica diaria de temperatura y de humedad relativa en el interior de refugios naturales de vinchucas (microclima) y compararla con la dinámica ambiental local (macroclima). En el interior de la gran mayoría de los refugios analizados, se registraron variaciones microambientales de menor amplitud diaria respecto de la T° y la HR macroambiental, evidenciando un efecto de amortiguación de la variación de dichas variables por parte de los refugios. En algunos casos, tal amortiguación fue claramente asimétrica, generando en el interior de los refugios valores medio de T° y HR diferentes de la media macroambiental. Este resultado revela que las vinchucas pueden experimentar en el interior de los refugios un microclima considerablemente diferente al clima regional. El efecto de la luz en la distribución espacial de las vinchucas se analizó a través del estudio de su atracción hacia fuentes de la luz artificial. En el laboratorio se estudió la orientación de T. infestans y R. prolixus en vuelo frente a fuentes de luz artificial de distinta calidad espectral. T. infestans mostró una tendencia significativa a volar en dirección a una fuente de luz blanca, pero no mostró la misma respuesta frente a una fuente de luz UV. R. prolixus, por su parte, se orientó marcadamente hacia la fuente de luz blanca, y presentó un comportamiento bimodal de atracción/repulsión con respecto a la fuente de luz UV. En los estudios de campo se instalaron trampas de luz endémicas de triatominos. Se probaron fuentes de luz portálites de distinto tipo y calidad espectral en cuanto a su capacidad para atraer a las vinchucas. Las trampas se colocaron en diversas zonas de la Argentina y Brasil, pero sólo se capturaron T. brasiliensis y T. pseudomaculata en la localidad de Curaçá (Brasil). A partir de los resultados obtenidos, se discute la relación entre el microclima en el interior de los refugios de las vinchucas y el clima local, así como la influencia de ambos en la distribución actual y potencial de las vinchucas. Se discute, además, la importancia de la presencia de luces artificiales, como factor que favorecería el ingreso de las vinchucas a las viviendas humanas.

Descripción: La formación y mantenimiento de la memoria tienen lugar como resultado de procesos fisiológicos que ocurren en el ámbito de neuronas individuales. Sin embargo, los modelos experimentales para el estudio de la memoria no permiten investigar estos procesos en el animal vivo en momentos en que se encuentra aprendiendo. El propósito de este trabajo fue desarrollar una preparación experimental que permitiese indagar los cambios neurofisiológicos que ocurren en las neuronas de un animal intacto en el momento mismo del aprendizaje. La preparación desarrollada se basa, por un lado, en la capacidad del cangrejo Chasmgnathus para formar diferentes tipos de memorias visuales y retenerlas por largo tiempo, y por otro lado en que la rigidez del caparazón del animal y la fácil accesibilidad a buena parte de su cerebro ofrecen importantes ventajas metodológicas para la realización de registros intracelulares estables en el animal intacto. Al tratarse de un animal intacto, pudimos investigar el funcionamiento de diversos tipos de neuronas cerebrales frente a la presentación de estímulos casi naturales y biológicamente relevantes. Además, la estabilidad de los registros intracelulares nos permitió teñir las neuronas y estudiar su ubicación y morfología. Efectuamos una caracterización funcional de las neuronas de los primeros neuropilos visuales, realizada en base a la respuesta frente a un pulso de luz, que incluye tanto elementos con respuestas pasivas (depolarizantes e hiperpolarizantes) como neuronas que disparan potenciales de acción. Elementos que a su vez pueden presentar respuestas tónicas o fásicas. Una caracterización morfológica de estos tipos celulares incluye tanto interneuronas locales como de proyección. La comparación de estos resultados con los de otros estudios en insectos y crustáceos apoya la hipótesis de que en los artrópodos los elementos que conforman los primeros neuropilos del sistema visual estarían evolutivamente conservados. El paradigma de memoria visual ampliamente caracterizado en Chasmagnathus implica una modificación duradera de la respuesta de escape del animal frente a un estimulo visual de peligro (EVP) consistente en el movimiento de un objeto por sobre el animal. En el cerebro del cangrejo encontramos interneuronas visuales especializadas en responder al mismo EVP que provoca la respuesta de escape del cangrejo, a las que denominamos neuronas detectoras de movimiento (NDM). Una caracterización de las NDM en función de sus propiedades biofísicas intrínsecas, como también de sus campos receptivos, direccionalidad, adaptabilidad, capacidad de integración multimodal, sensibilidad por el contraste, etc., indican que se trata de un grupo heterogéneo de neuronas. No obstante, todas las NDM se ubican en la lóbula (tercer neuropilo óptico) y proyectan al cerebro medio. La morfología general de las NDM esta representada en dos tipos de patrones de arborización, ambos definidos por la típica disposición colectora de neuronas detectoras de movimiento descriptas en insectos. Encontramos que la presentación repetida del EVP produce modificaciones en la respuesta de las NDM que reflejan de manera muy ajustada las modificaciones comportamentales que ocurren durante el aprendizaje. Más aún, las modificaciones ocurridas como resultado del aprendizaje permanecen en las NDM por largo tiempo, reflejando la memoria de larga duración observada 24 hs luego de la adquisición. Los artrópodos hacen uso de importantes habilidades cognitivas para ejecutar un rico repertorio de comportamientos, muchos de los cuales están dirigidos visualmente. No obstante, el presente constituye el primer trabajo en el que se identifican neuronas individuales que sirven a un aprendizaje visual en un artrópodo. La ubicación y morfología de estas neuronas indican que, contrariamente a la idea general presupuesta, la lóbula de los artrópodos constituye un núcleo cerebral superior involucrado en funciones de aprendizaje y memoria. Los resultados se discuten también en función de su aporte a la fisiología comparada de la visión.

Descripción: El objetivo principal del presente trabajo se centra en determinar los mecanismos asociados a la variabilidad de los caudales de los ríos andinos en relación con la circulación atmosférica y la Temperatura Superficial del Mar (TSM) como forzante del sistema climático. Para la circulación atmosférica el estudio se extiende desde la escala sinóptica a la climática. A lo largo de la Cordillera de los Andes se identifican dos zonas en las cuales el comportamiento de los caudales de los ríos muestra similar variabilidad temporal. Estas regiones están representadas por los ríos Chubut (para el área entre el río Neuquén y el río Senguer) y Atuel (para el área entre el río Jachal y el río Colorado). Es de destacar la baja correlación existente entre los caudales de los ríos de una y otra región, lo cual expresa la independencia estadística entre las mismas. Las condiciones topográficas y climáticas dan regímenes hídricos diferenciables. El río Atuel acumula casi el total de su derrame anual de Noviembre a Marzo, como producto del deshielo estival de la nieve precipitada en altas cumbres durante el invierno previo. Por su parte, el caudal del Chubut presenta un máximo invernal debido a precipitación líquida y otro primaveral debido a la precipitación y el derretimiento de nieve. La relación entre los caudales y la TSM es significativa en amplias regiones del Pacífico central del Hemisferio Sur (HS). Sin embargo, mientras la variabilidad del Atuel parece estar íntimamente ligada a los patrones observados del ciclo El Niño / Southern Oscillation (ENSO), con fuertes señales en el Pacífico ecuatorial-tropical y el Océano Indico; el Chubut parece estar menos vinculado con el ENSO, mostrando señales restringidas sólo al área del Pacífico central subtropical del HS. A partir de la relación entre los caudales de los ríos cordilleranos y las anomalías estandarizadas de TSM en la región Niño3+4, se pueden diferenciar cuatro subregiones: 1) Cuyo Norte, donde la relación entre Niño3+4 y los caudales alcanza a alrededor de 14 meses de antelación al período de máximo caudal, 2) Cuyo Sur, donde esta antelación se produce con alrededor de 8 meses, 3) Patagonia Norte, donde la relación entre caudales y Niño3+4 ocurre en forma simultánea y 4) Patagonia Sur, con características similares a Cuyo Norte. Para las regiones 1, 2 y 4 los campos de correlaciones entre TSM y caudales muestran patrones típicos de eventos El Niño / La Niña, evidenciando la relación entre estas anomalías del Pacífico y la precipitación en Cordillera. Altos caudales en la región del río Atuel estarían asociados al frecuente pasaje de bajas presiones que transitan por el Pacífico en dirección al Este, las cuales inducen una convergencia de humedad desde bajas latitudes y una advección de la misma hacia la región cordillerana. Al legar a las costas de Chile central estos sistemas producirían ascenso con intensas nevadas en las cumbres y un descenso con alta presión relativa a sotavento de la Cordillera. En estas condiciones, sobre la zona del litoral argentino y sur de Brasil se produciría una posterior ciclogénesis y un aumento de la baroclinicidad vinculada a un frente asociado, con una consecuente convergencia de humedad desde Brasil, ascenso y altas temperaturas prefrontales. En los casos de alto caudal en la región del río Chubut, los sistemas de baja presión llegarían desde el Pacífico alcanzando latitudes superiores y pasarían la Cordillera sin discontinuidad arrastrando humedad desde regiones subtropicales hacia mayores latitudes. Estos sistemas están acompañados por una marcada reducción de los Oestes asociada al frecuente pasaje de altas presiones sobre el Pacífico sud-oriental. Estas altas presiones han sido asociadas por varios autores a las anomalías de TSM en el Pacífico ecuatorial y a la variabilidad decadal del tipo ENSO, y forman parte de un tren de ondas que se observa sobre el Pacífico Sur proveniente del Océano Indico. Este tren de ondas se observa al correlacionar la altura geopotencial con los caudales del río Atuel aunque no con los caudales del río Chubut. Configuraciones inversas de circulación y TSM estarían asociadas a condiciones de bajo caudal en las regiones estudiadas. Finalmente, los casos de exceso de caudal en la cordillera cuyana y déficit en la patagónica, presentan un patrón de anomalías de circulación similar al observado para casos de exceso de caudal en Cuyo, pero con anomalías de alta presión sobre el Pacífico Sur al Sudoeste de Sudamérica retiradas más hacia la Patagonia; las cuales, por un lado se interponen en la normal trayectoria de las bajas presiones que circulan por el océano en esas latitudes —desviándolas hacia latitudes subtropicales donde alcanzan las costas de Chile central y provocan precipitaciones en Cuyo—; y por otro, contribuyen a inhibir la precipitación en la Cordillera Patagónica. Las condiciones inversas (i.e. bajas presiones sobre el Sur patagónico provenientes del Pacífico Sur con alta baroclinicidad, e intensificación del anticiclón semipermanente del Pacífico) explicarían las situaciones inversas.

Descripción: Fil: Arcaya Arhuata, Ludmer Edward. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: En este trabajo se evaluó a partir de la técnica de modelado análogo y la interpretación de información sísmica 3D al mecanismo de deformación pasivo de subsidencia diferencial como generador de fallamiento normal en echelon en la región del engolfamiento de la Cuenca Neuquina. El prototipo natural (caso testigo) es un extendido sistema de fallas normales de edad jurásica-cretácica dispuestas en echelon y superpuestas a la población de fallas con orientación general ONO pertenecientes a la etapa de rifting. Los modelos propuestos que dan origen a estas estructuras extensionales son materia de discusión y pueden sintetizarse en: 1) sistemas transcurrentes asociados a la reactivación dextral de fallas profundas (σ2 subvertical y σ1 subhorizontal y con orientación SE-NO), y 2) modelo de subsidencia diferencial asociado a la compactación diferencial del relleno de naturaleza dominantemente volcánico-volcaniclástico de los depocentros precuyanos (σ1 subvertical y σ2 subhorizontal con orientación SE-NO). Las dos series (9 casos) de modelado análogo reprodujeron estructuras semejantes a las observadas en el prototipo natural. Estos resultados permitieron establecer cualitativamente que la orientación principal de propagación del fracturamiento está fuertemente controlada por la orientación del campo de esfuerzos horizontales e independizada de la orientación del eje de subsidencia. A partir de la integración e interpretación sísmica 3D de un amplio sector del engolfamiento Neuquino (superficie ≈6000 km2) se avanzó en el mapeo regional de las estructuras precuyanas (grábenes, hemigrábenes y zonas de transferencia) y del fallamiento normal en echelon superpuesto. El análisis de detalle del fallamiento normal en echelon permitió definir distribuciones de rechazos, cambios de polaridad, geometrías de superficies de falla y mecanismos de crecimiento del fallamiento normal. La falta de evidencias sísmicas diagnósticas de desplazamiento de rumbo en el sector norte del engolfamiento Neuquino, así como los bajos valores de componente de rumbo calculados indican la ausencia o una muy débil reactivación transcurrente, insuficiente para ser la causa del fallamiento normal en echelon. Del análisis realizado en este trabajo se desprende que el mecanismo de deformación pasivo de subsidencia diferencial es el más adecuado para explicar el fallamiento en echelon de esta zona de la Cuenca Neuquina, lo que implicaría que durante el desarrollo del mismo el esfuerzo principal máximo (σ1) regional habría sido subvertical. No se descarta que, hacia el sur, en las proximidades de la Dorsal de Huincul, un campo transcurrente (σ2 vertical) o compresivo (σ3 vertical) haya prevalecido.

Descripción: El maíz, Zea mays ssp. mays, es uno de los cereales más importantes en el mundo, se utiliza tanto como suministro alimenticio para los seres humanos y los animales; así como materia prima básica para la producción de almidón, aceite, proteínas, bebidas alcohólicas, edulcorantes y combustibles. El cultivo de maíz, tanto comercial como nativo, abarca casi la totalidad de América y su amplia diversidad da cuenta de la variabilidad genética del mismo. En la Argentina, la región noroeste (NOA) ha sido considerada centro local de diversidad del cultivo debido al elevado número de razas de maíz propias del lugar. Estudios previos en esta región proponen que las razas nativas representarían una excelente fuente de diversidad aún inexplorada. Debido a la necesidad de profundizar en el conocimiento de la variabilidad de las razas nativas del NOA y su dinámica poblacional, en el presente trabajo de tesis se analizaron 50 entradas de maíz del NOA, pertenecientes al Banco Activo de Germoplasma de INTA Pergamino. Los materiales provenientes de la zona de los Valles (40 entradas) fueron analizados mediante caracteres morfológicos y marcadores moleculares (SSR), mientras que los correspondientes a la zona de Yungas (10 entradas) solo fueron estudiados utilizando marcadores moleculares. Desde el punto de vista morfológico, la evaluación de caracteres cuantitativos en las razas de maíz de los Valles permitió delimitar dos grandes grupos independientemente del método de análisis. Por el contrario, los grupos hallados en base al estudio de caracteres cualitativos resultaron distintos según derivaran de métodos de agrupamiento u ordenación, sin coincidir tampoco con los hallados para los caracteres cuantitativos. Una observación común a ambos conjuntos de datos fue la falta de cohesión entre aquellas entradas asignadas a la misma raza en base a la identificación previa del Banco. Desde el enfoque de la variabilidad molecular, a pesar de pertenecer a una región alejada del centro de origen del maíz, las razas nativas del NOA presentaron niveles de diversidad levemente menores a los reportados para maíces Mejicanos y superiores a los encontrados en otras regiones de América o Europa. El análisis de estructura poblacional, reveló la existencia de dos grupos genéticos principales asociados a la altitud de cultivo. El primero de ellos incluye a materiales cultivados hasta los 1990 msnm (grupo del bajo), en tanto que el segundo está constituido por maíces cultivados por encima de los 2000 msnm (grupo del alto). El análisis de la varianza molecular demostró la existencia de diferenciación genética significativa, aunque moderada, entre ambos grupos. Por otro lado, los índices de diversidad y riqueza alélica exhibieron un patrón de disminución en función del aumento de la altitud. La comparación de las entradas de los Valles con las entradas de las Yungas mostró que estas últimas estarían asociadas con los maíces del bajo. La diferenciación entre grupos y los menores valores de diversidad observados para los maíces del alto podrían ser consecuencia de la co-existencia de germoplasma de distinto origen histórico o de una mayor influencia de la deriva genética en los maíces del alto, debido a la merma en el número de individuos que llegan a la madurez reproductiva, sea por malas condiciones climáticas o por la poca superficie cultivable en condiciones de altura. En conclusión, los resultados del presente trabajo ponen de manifiesto la gran variabilidad morfológica y molecular de las razas nativas del NOA conservadas en el Banco Activo de Germoplasma INTA Pergamino, destacando su potencial como fuente de diversidad para ampliar la base genética de los programas de mejoramiento y aportando información útil para orientar futuros esfuerzos de recolección y conservación

Descripción: Las especies del género Calomys (Rodentia-—Cricetidae), C.musculinus y C.laucha, han sido objeto de especial atención, particularmente desde el punto de vista epidemiológico, constituyendo uno de los géneros de roedores más intensamente estudiados en nuestro pais, desde principios de la década de 1960. En 1959 Parodi y colaboradores postularon la posible relación entre el agente etiológico de la Fiebre Hemorrágica Argentina (FHA), el Virus Junín, y varios roedores, entre ellos las especies de Calomys antes mencionadas. En 1967 Sabattini y colaboradores demostraron experimentalmente que Q.musculinus constituye el reservorio y vector del mencionado Arenavirus. El estudio de los Calomys no se restringió únicamente a aspectos relacionados con la FHA,sino que abarcó diversas áreas de interés biológico. Se publicaron numerosos trabajos sobre su morfología, etoecología, citogenética, parámetros reproductivos, espermeología y polimorfismos proteicos, así como sus relaciones evolutivas con otros cricétidos taxonómicamente relacionados. Sin embargo, los estudios tendientes a aclarar aspectos relativos al material genético primordial, el ácido desoxirribonucleico (ADN), no han sido abordados hasta el presente. Este trabajo se encuadra dentro de la sistemática bioquímica. En el mismo se analizan, en primer lugar, algunas características fisicoquímicas del ADN de las especies Calomys musculinus y calomis laucha. En segundo lugar se determinan los niveles de homologia entre los ADNs de las especies mencionadas, así como entre éstos y los de otros cricétidos, estableciéndose relaciones filogenéticas tentativas a partir de estas comparaciones. Los resultados obtenidos durante la caracterización de los ADNs han puesto de manifiesto diferencias entre ambas especies. La detección de un componente con alto grado de estabilidad térmica en el ADN de C.musculinus abriría nuevos interrogantes. Las comparaciones de los ADNs altamente repetidos sugerirían procesos de marcada amplificación en las especies de cricétidos analizadas.

Descripción: En la presente tesis se exponen los resultados del estudio de la radiación x de alta energía y delos neutrones que son emitidos por un dispositivo plasma focus de 4.7 kJ operado con mezclas dedeuterio y argón. La anisotropía de emisión neutrónica fue estudiada empleando 2 detectores por activación deplata. Dichos detectores se ubicaron sobre el eje de simetría de los electrodos y a 90º. Se exploraronpresiones de carga entre 3 y 6 mbar y mezclas de deuterio con 2.5% y 5% de argón además dedeuterio puro. La anisotropía medida varía entre 1.6 para 3 mbar con 0% de argón y 1.4 para 5 mbar con 5% de argón. Mediante simulaciones de Monte Carlo, con el código MCNP, se estudióla influencia que tienen los materiales que componen la cámara de descargas y los objetos querodean al dispositivo en la anisotropía medida. Los resultados de las simulaciones mostraron quela base de la cámara, construida en Nylon, influye significativamente en la anisotropía de emisióndetectada. Las investigaciones correspondientes a la producción neutrónica, mostraron que una mezcla dedeuterio con 2.5% de argón, respecto del caso con deuterio puro, aumenta la emisión de neutrones. El análisis de los resultados se completó con un modelo que tiene en cuenta el agregado de argón,lográndose un buen acuerdo con los datos experimentales. Para determinar los componentes espectrales de la radiación x, se desarrolló un formalismoque considera el efecto dispersor de los fotones que atraviesan un conjunto de filtros metálicosacoplados a un sistema pantalla-película. La dispersión de los fotones se calculó con el código MCNP, estudiando el espectro generado por fotones monocromáticos de energías entre 20 keV y 600 keV, que inciden sobre una muestra metálica. La información experimental se obtiene del análisisdensitométrico de las radiografías, que fueron expuestas a la radiación atenuada en muestras deplata, cobre, níquel y titanio con espesores entre 0.01 cm y 1.0 cm. Los resultados del espectro reconstruido para distintas presiones y mezclas de gases muestranun pico predominante alrededor de 80 keV con componentes espectrales relevantes entre 55 keVy 150 keV. A partir de simulaciones con MCNP, los espectros experimentales fueron comparadoscon los espectros generados por fuentes monocromáticas de electrones que impactan en la base delánodo.

Descripción: El objetivo en esta tesis fue caracterizar el comportamiento de las fosfatasas de serinay treonina (STPasas) durante el desarrollo del sistema nervioso. Como modelo experimentalse empleó en primera instancia el desarrollo postnatal del cerebelo de ratón, ya que duranteeste período se dan numerosos procesos, como el crecimiento axonal, la formación desinapsis y la apoptosis, en los cuales las distintas STPasas podrían llegar a estar involucradas. Para caracterizar la expresión de los ARNm de las fosfatasas, se diseño una nueva estrategia, SSDD (Single-Strand Differential Display), la cual nos permitió determinar como era laexpresión de los distintos mensajeros a distintas edades. Esta técnica no solo nos permitióobservar que cada una de las STPasas detectadas presenta una expresión diferencial, sino quetambién identificar una nueva variante de splicing de la isoforma gamma de la PP1. Estatécnica también fue empleada con éxito para el estudio de STPsas en tumores del sistemanervioso, pudiéndose observar que tanto la expresión de la isoforma alfa de la PP1 como delas isoformas alfa y beta de la PP2A era mayor en tumores de índole maligna que enbenignos. Además, se detectó por primera vez la isoforma gamma de la calcineurina (CaN Aγ) en tumores del sistema nervioso. Durante el desarrollo del cerebelo, se observó que PP2A no muestra variacionessignificativas ni en la expresión de proteínas ni en la actividad fosfatasa que posee. Por otrolado, PP1 sí muestra diferencias no solo en la expresión de proteínas, donde se observa unaumento a P13 y una disminución posterior a P20, sino también en lo que respecta a suactividad, cuyo incremento coincide con el período en el cual se empiezan a formar lassinapsis entre los axones de las células grano y las espinas dendríticas de las células de Purkinje. En el mutante cerebeloso staggerer, en el cual se encuentran afectadas las célulasde Purkinje y no se produce la estabilización sináptica, se encontró que los niveles proteicosde PP1 no disminuyen a P20 como ocurre en el cerebelo normal, y que la actividad no seincrementaba. Por otro lado, la fosfatasa que mostró mayores variaciones durante eldesarrollo fue la calcineurina. Específicamente, los niveles de proteínas de la isoforma CaN Aα se incrementan gradualmente con el tiempo, lo cual coincide con el período de formaciónde sinapsis. En este período además, se produce un incremento en la actividad de lacalcineurina. En el mutante staggerer, los niveles de esta isoforma son similares hasta P11,pero después no se incrementan como sucede en el ratón normal. La actividad fosfatasa en elmutante decae también a partir de esta edad. Con el fin de estudiar con mayor detalle la función de la calcineurina, se estudió loque ocurría en distintos cultivos del sistema nervioso (células PC12, células NT2 y cultivosprimarios de células grano). Para esto se incubaron los distintos cultivos con inhibidores de lacalcineurina y con oligonucleótidos antisentido contra las dos isoformas. En todos los casosse observó que, tanto la inhibición de la actividad como de la expresión, particularmente de laisoforma CaN Aβ, provocaba que las células murieran por apoptosis, independientemente delestadío de diferenciación en el que ellas se encontraran. Este proceso estaba relacionado conun aumento en los niveles de Bax y una disminución de Bad. Particularmente en el caso delas células NT2, se pudo observar que el aumento de la expresión de Bax coincidía con unincremento en la translocación de la proteína al núcleo, mientras que la disminución de Badlo hacía con la aparición de “parches” en el citoplasma, lo que es indicativo de unatranslocación a mitocondria. Posteriormente se estudió lo que ocurría con estas proteínas pro-apoptóticas en elmutante staggerer, el cual presentaba una muy baja actividad de calcineurina. Bad no mostróvariaciones pero los niveles de Bax a P20 aumentaron considerablemente. Todos estosresultados sugieren que la inhibición de la expresión o de la actividad de la calcineurinaocasiona que las células entren en apoptosis por un mecanismo que involucra, por lo menos,un aumento en los niveles de Bax.

Descripción: Fil: Galvagno, Miguel Angel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: El canal Beagle (CB), al sur del continente americano, es un pasaje interoceánico de 270 km de recorrido que conecta los océanos Pacífico y Atlántico y que transporta aguas subantárticas modificadas por aportes continentales. Esta tesis propone describir el funcionamiento hidrográfico y biogeoquímico del CB considerando los mecanismos físicos que regulan los patrones espacio-temporales de materia particulada en suspensión (MPS) y flujos descendentes de partículas, analizando el carbono y nitrógeno orgánico particulado, clorofila-a, turbidez y distribución de tamaños. Se emplea un enfoque multidisciplinario, que incluye campañas en el mar, fondeos y datos satelitales además de diversas técnicas e instrumental (CTD, LISST, ADCP, trampas de sedimento). Los resultados se organizan en tres capítulos que describen: a) los patrones espaciales y estacionales de MPS alrededor de bahía Ushuaia y a lo largo del CB, comparando las medidas superficiales con estimaciones satelitales; b) los flujos verticales de partículas y de carbono en dos subcuencas contrastantes del CB junto con los factores ambientales que determinan dichos flujos; c) la dinámica estacional de partículas en suspensión, distribución de tamaños y contenido de carbono orgánico de la MPS, complementado con la hidrodinámica e hidrología de la bahía Ushuaia y los impactos en las concentraciones de oxígeno disuelto.

Descripción: La hormona folículo estimulante humana, producida y secretada por la hipófisisanterior, está estrechamente relacionada con la regulación y el mantenimiento de procesosreproductivos esenciales tales como el desarrollo y maduración de los folículos ováricos yla gametogénesis testicular. Esta hormona consiste en un heterodímero formado por dos subunidades, cada unade las cuales tiene unidas al polipéptidodos cadenas de oligosacáridos. Estas cadenas decarbohidratos, si bien comparten el mismo núcleo de azúcares formado por unpentasacárido en la porción interna de la cadena, difieren en la porción externa de lamisma, variando en complejidad, grado de ramificación y en el contenido de residuosterminales de ácido siálico. Las variaciones en la estructura de la cadena carbohidratada,dan lugar a la aparición de una familia heterogénea de isoformas con diferentespropiedades fisicoquímicas y biológicas. Las isoformas presentan diferencias en: suspuntos isoeléctricos, la afinidad de unión a su receptor específico y la vida media encirculación. La abundancia relativa de cada una de estas isohormonas varía con el sexo ycon las condiciones fisiológicas del donante. En los estudios realizados hasta el presente,el contenido de ácido siálico había sido considerado como el principal determinante de laheterogeneidad molecular de la hormona. EI propósito de esta Tesis fue analizar el polimorfismo de la FSH hipofisaria humanay la FSH circulante en diferentes condiciones fisiológicas: fase folicular de ciclosmenstruales normales, postmenopausia y pubertad masculina. Este estudio fueespecialmente diseñado para determinar los efectos producidos por el entorno hormonalsobre las características moleculares y biológicas de esta gonadotrofina. Las isoformas de FSH hipofisaria fueron aisladas, mediante cromatoenfoque, deacuerdo al contenido de ácido siálico, residuo terminal de las cadenas de oligosacáridos. Posteriormente se analizó la distribución de las diferentes isoformas de acuerdo a laestructura interna de sus cadenas de carbohidratos por cromatografía seriada en lectinas. Se relacionó la estructura interna de las cadenas carbohidratadas de las diferentesisoformas con su capacidad de inducir una respuesta biológica a nivel de la célula blanco. Esta respuesta biológica fue evaluada utilizando un bioensayo in vitro. Los resultados obtenidos demuestran que en la regulación de la biopotencia de lahormona participa no sólo el azúcar terminal, sino también el tipo de estructura de cadenacarbohidratada interna al ácido siálico. Los estudios realizados en sueros obtenidos endistintas condiciones fisiológicas demuestran que el entorno hormonal modifica lascaracterísticas estructurales de la molécula, regulando así su biopotencia y su tiempo depermanencia en circulación. Se postula que cada una de las variantes moleculares de estahormona sería responsable de la inducción diferencial de una determinada respuestabiológica.

Descripción: En el órgano de Corti, el epitelio sensorial del sistema auditivo de los mamíferos, las células ciliadas internas (CCIs) transducen los estímulos sonoros a señales eléctricas que son enviadas al sistema nervioso central, mientras que las células ciliadas externas (CCEs) participan del proceso de amplificación y sintonización fina de estos estímulos. Durante el desarrollo, las CCIs presentan actividad espontánea, la cual promueve la liberación de glutamato en la sinapsis entre las CCIs y las dendritas de las neuronas aferentes que forman el nervio auditivo. La actividad espontánea en el sistema auditivo en desarrollo es fundamental tanto para la supervivencia neuronal como para el refinamiento y mantenimiento de los mapas tonotópicos en el cerebro. Desde el nacimiento hasta el comienzo de la audición (postnatal 12-13 en ratones), las CCIs reciben una inervación eferente axo-somática transitoria desde la oliva superior en el tallo cerebral, la cual se postula estaría modulando la actividad espontánea de las CCIs en este período del desarrollo. La sinapsis entre las fibras eferentes mediales olivococleares (MOC) y las células ciliadas es colinérgica, rápida e inhibitoria y está mediada por la activación conjunta del receptor colinérgico nicotínico (nAChR) α9α10 y el canal de potasio activado por calcio SK2. En trabajos previos, se han caracterizado extensamente los cambios que ocurren en la expresión y función del nAChR α9α10 y su acople con el canal SK2, en el corto período en el cual la sinapsis MOC-CCIs es funcional. Sin embargo, es poco lo que se conoce sobre las propiedades de liberación del neurotransmisor y los cambios que ocurren en la presinapsis durante este período. El principal objetivo de esta tesis fue caracterizar las propiedades biofísicas y funcionales de la sinapsis transitoria MOC-CCI durante el desarrollo postnatal previo al comienzo de la audición. Para esto se realizaron registros electrofisiológicos en el modo “whole-cell“ en las CCIs presentes en preparaciones del órgano de Corti del ratón, aisladas en forma aguda, en dos períodos postnatales, mientras se estimulaban eléctricamente los axones eferentes para provocar la liberación del neurotransmisor. Los resultados de este trabajo de investigación muestran que la eficacia sináptica aumenta significativamente entre los días postnatales (P) 5-7 y 9-11. Este fenómeno está acompañado por cambios en el tipo de plasticidad de corto término, en los tipos de canales de Ca²+que median y/o modulan la liberación del neurotransmisor y también por un cambio en la cantidad de vesículas sinápticas disponibles para ser liberadas, sin modificaciones en la probabilidad de liberación de cada sitio activo.

Descripción: Las líneas celulares establecidas a partir de células de riñón del mono verdeafricano, se han usado durante años en Virología. La investigación y el desarrolloque involucra el uso de líneas celulares requiere el conocimiento preciso de lasespecies de origen y su pureza. Esto se lleva a cabo mediante un monitoreoperiódico de los cultivos celulares que comprende varios marcadores genéticos,incluyendo isoenzimas y cromosomas. La estabilidad del cariotipo de la líneacelular VERO se estudió con métodos de coloración diferencial de los cromosomas,en cultivos continuos estáticos (10 pasajes). Bajo estas condiciones el númeromodal (de 58 a 54) y la estructura del cariotipo variaron, tanto en el número decopias de cromosomas normales como en el de marcadores. Los cambioscuantitativos (el aumento del porcentaje de las células diploides, así como lavariación en la fracción de células que tienen el número modal, ocurren a pesar dela estabilidad de la composición cromosómica, que limita el uso de las células Verocomo sustrato para la preparación de vacunas. Para estandarizar las vacunaspatrón en el proceso de producción, se estudió la influencia potencial que losdiferentes pasajes podrían tener en la capacidad inmunogénica del virus, con elobjetivo de establecer el número máximo y minimo de pasajes que cada tipo de virusadmite, sin alterar las características biológicase inmunológicas de las vacunasvirales que se usan en la actualidad. El método desarrollado y evaluado en diezpasajes es apto para la producción de vacunas antirrábicas de referencia en células VERO.

Descripción: Este trabajo de Tesis se ha basado en la producción de anticuerpos monoclonales (AMC) dirigidos contra las células troncales de carcinoma mamario humano. lacaracterización e identificación de los antígenos (Ag) reconocidos por los mismos y laevaluación de la posible utilidad diagnóstica y terapéutica de dichos AMCs. Para suobtención, se inmunizaron ratones Balb/c con células provenientes de un paciente conun carcinoma de mama agresivo y altamente indiferenciado, negativo para laexpresión de ER y PgR, estrategia seguida con la idea de minimizar la producción de AMCs dirigidos contra Ags asociados a la diferenciación celular. De los hibridomas obtenidos fue seleccionado el AMC FC-2.15, de isotipo IgM, el cualreacciona con la mayoría de los carcinomas mamarios humanos, independientementede su tipo histológico y grado de diferenciación, reconociendo en los mismos al 80 %de las células tumorales y al 90 % de las células proliferantes del tumor, entre las quese encuentran las células troncales. El AMC FC-2.15 reconoce otras neoplasias, comocarcinoma de colon y leucemia mieloide crónica y presenta escasa reactividad con lamayoria de los tejidos normales, siendo la principal reacción cruzada con losleucocitos polimorfonucleares (PMN). En cuanto al Ag FC-2.15, la caracterización bioquímica inicial indicó un Ag denaturaleza glicoproteica, residiendo el epitope en la parte hidrocarbonada del mismo. Posteriores experimentos demostraron que el AMC FC-2.15 reconoce específicamenteal trisacárido Lewis˟ o CD15, terminalmente expuesto. Esta conclusión está basadatanto en el reconocimiento específico del AMC FC-2.15 por diferentes estructurasconteniendo Lewis˟ como en la inhibición observada en un ELISA realizado utilizandoun AMC comercial anti-CD15 como inhibidor. Asimismo, se determinó que el AMC FC-2.15no presenta reacción cruzada con el tetrasacárido sialil Lewis˟, ni con su isómero Lewisª, así como tampoco con antígenos de grupo sanguíneo A o B La reactividad del AMC FC-2.15 en los diferentes tejidos FC-2.15 -positivos fueanalizada por Western Blot sobre extractos de membrana y caracterizadadeterminando el efecto de digestiones enzimáticas (con PNGasaF y Neuraminidasa)en la persistencia del Ag. Los resultados obtenidos revelaron que Lewis˟ puede estarformando parte tanto de N-glicoproteínas como de O-mucinas. Según el tipo celularestudiado, Lewis˟ está presente en N-glicoproteínas exclusivamente (bandas de 250, 185 y 105 kDa en muestras de PMN y leucemia), predominantemente en N-glicoproteínas (bandas de 155 y 135 kDa, acompañadas con mucinas de mayor pesomolecular, en células de carcinoma de colon T-84) o predominantemente en O-mucinas (células de carcinoma de mama MCF-7).También puede variar la cantidad delactosaminoglicanos portando sialil Lewis˟, desde la ausencia (MCF-7), pasando poruna baja proporción respecto de los Lewis˟-lactosaminoglicanos (PMN) hasta llegar aun gran predominio de los mismos en leucemias y T-84. Puede concluirse, por lo tanto, que PMN normales y diferentes células tumoralespueden expresar residuos Lewis˟ y sialil Lewis˟ en muy diferente proporción y unidos adiferentes proteínas, aunque la relevancia de Lewis˟ en condiciones normales ypatológicas tiene que ser aún establecida. En cuanto a las propiedades funcionales del AMC FC-2.15, numerosos experimentosse han realizado en esta Tesis tendientes a caracterizar la interacción del AMC FC-2.15con PMN y con MCF-7, tanto in vitro como en un sistema ex vivo de circulaciónsanguínea (SEVCS). Ensayos de aglutinación han demostrado que el AMC FC-2.15 induce la agregaciónhomotípica de PMN in vitro y forma agregados heterotípicos entre PMN y célulastumorales Lewis˟-positivas. Ensayos de liberación de [51Cr]han revelado que el AMC FC-2.15 ejerce un fuerte efecto citotóxico sobre los PMN y células MCF-7 por fijaciónde complemento humano. Posteriormente, con la idea de aproximar a las condicionesen las que el AMC FC-2.15 interacciona in vivo, el ensayo de liberación de [51Cr]fuerealizado en sangre entera en circulación en un SEVCS. Contrariamente a loesperado, el AMC FC-2.15 aglutina, pero no lisa, a los PMN mientras que la lisis de MCF-7 en dicho sistema es prácticamente normal. Estas observaciones permitieron plantear la posibilidad de que en el SEVCS los PMNserían inducidos a agregarse mas rápidamente por la suma de dos mecanismosdistintos: el AMC FC-2.15 que activa a los PMN y el flujo aplicado. En la medida quelos agregados van siendo formados, habría un impedimento estérico progresivo parael acceso de los factores del sistema de complemento a la porción Fc del AMC FC-2.15y por ende los grumos de PMN formados no serían lisados. Los experimentos realizados posteriormente validaron esta hipótesis puesto quedemostraron que el AMC FC-2.15 no lisa agregados homotípicos de PMN preformadosen ensayos in vitro por un lado y que el AMC FC-2.15 es capaz de lisar a los PMN enel SEVCS, cuando la aglutinación de los mismos se impide por pretratamiento concolchicina, por otro. La lisis de MCF-7 en el SEVCS tendría lugar de todas formas debido a su incompletaagregación con los PMN. Puede concluirse entonces que la falta de lisis de los PMN por el AMC FC-2.15 encirculación y, que por el contrario, las células tumorales Lewis˟-positivas seaneficientemente lisadas, son dos caracteristicas importantes que avalan el uso del AMC FC-2.15 en el tratamiento de tumores Lewis˟-positivos, sin riesgo de producir una lisismasiva de los PMN circulantes. Los resultados presentados indican que el AMC FC-2.15 podría ser útil en lainmunoterapia pasiva de pacientes con carcinomas Lewis˟-positivos, sin necesidad deconjugarlo con drogas ni toxinas.

Descripción: La proteína de 24 kDa (p24) del potato virus X (PVX) es una de las tresproteínas responsables del transporte de este virus en plantas infectadas. Eneste trabajo de Tesis se obtuvieron anticuerpos específicos contra p24, con loscuales se pudo detectar y caracterizar su expresión en protoplastos y en tejido deplantas de tabaco infectadas. También, se obtuvieron plantas transgénicas queexpresan p24 y que pueden complementar el transporte de un mutante de PVXdefectivo en este gen. Las plantas transgénicas que producen altos niveles dep24 presentan un fenotipo alterado, que consiste en plantas enanas y cloróticas. Estas plantas mostraron resistencia a la infección con los tobamovirus tobaccomosaic virus (TMV)y tomate virus Ob (ToMV-Ob). Sin embargo, cuando se lasinfectó con PVX o con el potato virus Y (PVY), no mostraron diferencias en losniveles de virus con respecto a las plantas no transformadas, aunque lossíntomas de infección con PVX fueron más severos. Recíprocamente, las plantastransgénicas que expresan la proteína de movimiento (MP) de TMV mostraronresistencia a PVX cuando se inocularon con este virus. Por último, se realizaronestudios de complementación entre mutantes de TMV y de PVX defectivos entransporte, con las plantas transgénicas que expresan p24 y la MP de TMV, paraestudiar el grado de interacción entre los sistemas de transporte de ambos virus.

Descripción: Toxoplasma gondii es una parásito intracelular obligado y un patógeno humano de importancia. Dos formas replicativas son la característica principal del ciclo asexual de éste parásito: uno de replicación rápida (el taquizoito) y otro de división lenta (los bradizoitos enquistados). El proceso que permite la interconversión entre taquizoitos y bradizoitos es central para la patogenicidad y duración de la infección. Todavía no están claramente comprendidos los mecanismos que regulan este proceso de diferenciación. La inducción del desarrollo del estadío bradizoito in vitro se asocia con varios tipos de estresores, estímulos que son conocidos también como inductores de la expresión de proteínas de choque térmico (HSPs). Las HSPs son un enorme grupo de proteínas que se asocian en forma transiente con intermediarios de plegado de proteínas nacientes o también con proteínas desnaturalizadas, con el objeto de evitar la agregación. In vivo, la proteína Hsp90 tiene un rol fundamental en la maduración de componentes de numerosas vías de transducción de señales. El objetivo de esta tesis fue identificar factores asociados con la diferenciación del parásito. Nuestros estudios se centraron en el análisis del perfil de expresión y la regulación durante el desarrollo de la proteína Hsp90 de T. gondii en tres tipos de parásitos, la cepa RH ΔUPRT, la cepa cistogénica ME49 y un clon derivado de esta última, PK todas útiles para estudios de diferenciación in vitro. Nuestros resultados muestran que el transcripto y nivel proteico de Hsp90 se ven incrementados ante condiciones de estrés y de diferenciación del parásito a bradizoíto. Estudios de microscopía confocal e inmunofluorescencia revelaron que la proteína Hsp90 está presente en el citoplasma de taquizoitos y en el citoplasma y núcleo de bradizoitos maduros, lo cual, sugiere una correlación entre la localización subcelular y los dos estadios asexuales de desarrollo. Para caracterizar el papel de la proteína Hsp90 en la diferenciación a bradizoíto, se estudiaron mutantes de T. gondii incapaces de desarrollar a bradizoitos. Bajo condiciones de diferenciación a bradizoitos éstos parásitos mostraron un patrón de localización celular equivalente al observado en taquizoitos. Se utilizó una droga capaz de unirse e inhibir la función de Hsp90, la geldanamicina, la cual, bloqueó la conversión de taquizoito a bradizoíto y también el camino inverso. Estos resultados sugieren un papel crucial para la proteína Hsp90 durante el cambio de estadío. Se sabe, a partir de estudios realizados sobre la maduración de los receptores de esteroides, que la proteína Hsp90 no actúa sola, sino, que lo hace en asociación con variadas co-chaperonas (Hip, Hsp40, Hop, P23). Estas proteínas se unen a la proteína Hsp90 y se organizan en sub-complejos discretos, cada uno conteniendo un grupo diferencial de co-chaperonas. En el genoma de T. gondii pudimos encontrar varias co-chaperonas pertenecientes a la extensivamente estudiada, “maquinaria” chaperona de las proteínas Hsp90/Hsp70. Se clonaron las proteínas Hip y P23, las cuales, una vez expresadas nos permitieron obtener anticuerpos policlonales que las reconozcan. Por ensayos de co-inmunoprecipitación se pudo determinar que Hip y P23 interactúan con la proteína Hsp90. Ambas co-chaperonas colocalizan intracelularmente con Hsp90 en el estadío taquizoito. En el estadío bradizoito solamente P23 colocaliza con Hsp90, manteniéndose Hip excluida del núcleo. También se clonaron y caracterizaron preliminarmente las co-chaperonas Hop y Hsp40.

Descripción: Fil: Muro, Andrés Fernando. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Los objetivos de este trabajo de tesis están relacionados a la evaluación de la resistencia a insecticidas piretroides en los estados embrionarios t postembrionarios de poblaciones de Pediculus humanus capitis de Buenos Aires resistentes a permetrina. Durante el desarrollo de la tesis fueron planteados objetivos a posteriori necesarios para el desarrollo de los objetivos originales. Los objetivos fueron: Observar la posible expresión de resistencia a insecticidas en embriones en poblaciones de P. humanus capitis con resistencia detectada en estadios postembrionarios. Estudiar los mecanismos de resistencia a insecticidas expresados en embriones y estados postembrionarios. Estudiar los mecanismos de resistencia a insecticidas expresados en embriones y estados postembrionarios de P. humanus capitis. Los objetivos a posteriores fueron: Caracterizar morfológicamente el desarrollo embrionario de P. humanus capitis y P. humanus humanus a fin de trabajar con homogéneo en cuanto al tiempo de desarrollo. Determinar las condiciones ambientales óptimas (T°C y HR%) para el desarrollo de P. humanus capitis en laboratorio. Puesta a punto de los métodos de medición de actividad enzimática en los embriones. De acuerdo a estos objetivos se obtuvieron los siguientes resultados y conclusiones: Se caraterizó el desarrollo embrionario según caracteres morfológicos vistos a través de la transparencia del corion. Los caracteres morfológicos fueron: apéndices y manchas oculares. La ombinación de los distintos estados de desarrollo de estos caracteres permitieron determinar rtes etapas en la embriogénesis:etapa temprana, etapa media, y etapa tardía (manchas oculares negras). Se determinaron las condiciones ambientales optimas (temperatura y humedad relativa) en laboratorio para la embriogénesis de P. humanus capitis: 27-31°C de temperatura y 45-75% humedad relativa. Se observó que en poblaciones con resistencia a piretroides y DDT expresada en los estados postembrionarios los embriones también expresan resistencia a los mismos insecticidas. En estados postembrionarios, no se observó resistencia a carbaril ni a spinosad. En embriones no se observ+o resistencia a spinosad pero se determinó una incipiente resistencia a carbaril. Se midió actividad esterasa en embriones por la stres metodologías utilizadas (Gomori, Ellman y Fluorométrico), por el contrario no fue posible determinar actividad del complejo P450 por el método fluorométrico utilizado. Según los resultados de inhibición enzimática in vivo y la determinación de las actividades enzimáticas una mayor actividad esterasa no parece estar involucrada en la resistencia observada en adultos y en embriones. Según el análisis global de los resultados, la resistencia en las poblaciones de P. humanus capitis utilizadas en este trabajo se debería: 1) modificación de sitio de acción de piretroides y DDT (tipo-kdr) (estados embrionarios y postembrionarios), 2) aumento metabolismo oxidativo (estados postembrionarios). Se plantea al insecticida spinosad como posible activo en formulaciones pediculicidas.

Descripción: El gen Rx acl confiere resistencia extrema a infecciones por la mayoria de las razas del virus X (excepto las razas MS y HB), a los cultivares de papa que lo poseen. En este trabajo, se caracterizó lareacción de resistencia extrema a infecciones por la raza avirulenta cp, del virus X de la papa, enprotoplastos y plantas del cultivar de papa Serrana INTA,portador de ese gen. El análisis de la expresión celular de la resistencia extrema, requirió, en una primera etapa, la puesta apunto de un método eficiente y sincrónico de infección con PVX CP, de protoplastos de cultivares depapa susceptibles a este virus, relacionados o no genéticamente con Serrana INTA. La multiplicaciónviral en protoplastos susceptibles se siguió indirectamente a través de la detección de proteína decapside y ARN virales. En los protoplastos susceptibles, la producción de proteina de cápside y el ARN viral, detectados por ELISA o dot-blot, comienza a ser evidente a partir de las 10 horas derealizada la infección (aunque la sintesis de novo de la proteina de cápside viral comienza antes, a las 5horas de realizada la infección). La producción de la proteina de cápside viral sigue una cinéticaexponencial y alcanza un plateau a las 30-40 horas de producida la infección. La cápside viral seencuentra asociada al citoplasma celular y no se detecta en cloroplastos. La multiplicación de PVX cpen protoplastos susceptibles no está asociada a daño y muerte celular, aunque como resultado de estamultiplicación, se observa una redirección en la sintesis de proteinas celulares del hospedantesusceptible. Las infecciones con distinta concentración de inóculo viral, determinaron en todos loscasos que la disminución de la concentración de inóculo viral, de l ng de PVX/pv a 0,01 ng PVX/pv,favorece la tasa de multiplicación viral en protoplastos susceptibles. Distintas infecciones de poblaciones de protoplastos del cultivar resistente Serrana INTA, en presenciade distintas concentraciones de inóculo viral, mostró que el mecanismo de resistencia puede expresarsea nivel celular, pero que esta expresión es dependiente del inóculo de infección. A altos inóculos (mayores de lO pg de PVX cp/pv), el virus X puede multiplicar en esa población celular, en formaequivalente a lo que lo hace en protoplastos susceptibles, pero a inóculos menores (10 pg de PVX cp omenos/pv), existe una inhibición en la multiplicación viral en forma directamente proporcional a ladisminución de inóculo. La menor multiplicación viral se refleja en una menor producción de proteinade cápside y ARN viral. A nivel celular, la expresión de la resistencia extrema afectaría la expresiónde (al menos) del gen de la proteína de cápside viral y/o la transcripción o replicación del ARN viral. El mecanismo de resistencia extrema también se analizó en hojas localmente inoculadas con la razaavirulenta cp del virus X y en partes no inoculadas de las plantas infectadas pertenecientes a Serrana INTA. La resistencia extrema determina en última instancia la multiplicación sistémica del virus X. Enla hoja localmente inoculada, la resistencia extrema inhibe la formación de ARN viral de tamañosubgenómico, la formación de proteina de capside viral, y, en menor grado, la formación de ARN viralde tamaño genómico. En partes no inoculadas de plantas de Serrana INTA infectadas con PVX cp,trazas de ARN genómico, aunque no de ARN viral de tamaño subgenómico, y de proteina de cápsideviral, pueden ser detectadas durante los primeros 20 dias de infección, pero ésta detección se dificulta adias tardios (un mes de realizada la infección). La expresión de la resistencia en plantas infectadas de Serrana INTA con la raza cp de PVX no implicamayores variaciones en la población de ARNm del hospedante, tanto en hojas localmente inoculadascomo en partes no inoculadas de plantas infectadas. Sin embargo, asociado a la incompatibilidad deinteracción Serrana INTA-PVX cp, fue posible detectar en experimentos de traducción in vitro de ARNm total proveniente de hojas localmente inoculadas con PVX cp de Serrana INTA, la presencia deun polipéptido de 26,8 kda. Este polipeptido se detecta al cuarto dia de realizada la infección y no adías tardios (7 o más), o tempranos (dia 2). Existen importantes diferencias en el modo de acción del gen Rx acl con otros mecanismos deresistencia mejor caracterizados como ser la reacción de resistencia hipersensible. Estas son: l) La expresión celular de la resistencia extrema y desde tiempos tempranos de la infección. 2) La presencia de cápside y ARNg viral en las partes no inoculadas de plantas infectadas, encantidades detectables a tiempos tempranos de la infección (aunque no a tiempos tardios como ser almes de infección). 3) El requerimiento no absoluto de las conexiones celula a célula en la expresión de la resistencia defenotipo extremo. 4) La no detección en tejido local y sistémico, de numerosas inducciones génicas especificas deresistencia extrema, tal como se observan en la expresión de la hipersensibilidad. Por último, las características resultantes de la interacción de protoplastos o plantas de Serrana INTA,con las razas avirulenta, cp y virulenta, MS de PVX (con respecto a ese gen), favorecen un modelopositivo de modo de acción de Rx acl (presencia de una molécula inhibitoria y no ausencia desusceptibilidad) y de dominancia incompleta (dependiente de la dosis de las moléculas inhibitorias).

Descripción: Lactobacillus casei es una bacteria que desde larga data ha sido empleada por el hombre en procesos fermentativos para la producción de quesos y chacinados y en los últimos años ha adquirido gran relevancia por su uso como probiótico. Durante los procesos mencionados y en el tracto gastrointestinal, Lb casei es sometida a diferentes tipos de estrés, entre ellos el estrés osmótico. El objetivo de este trabajo fue estudiar las modificaciones genéticas, fisiológicas y estructurales de este microorganismo cuando es sometido a un estrés hipersalino, priorizando el estudio de las actividades relacionadas con los procesos de elaboración de alimentos. En esta tesis se demostró que además de los solutos osmocompatibles generales glicín betaína y camitina, di y tripétidos pueden aumentar la osmotolerancia de Lb casei. Además de estimular el crecimiento en un medio hiperosmótico lograron restituir el grado de superenrollamiento del ADN (recuperación del linking number) de modo análogo a la camitina. La construcción y el análisis de una mutante deficiente en el transporte de di-tripéptidos, dtpT, mostró que aquellos péptidos que no son transportados eficientemente no ejercen osmoprotección, mientras que sí lo ejercen aquellos que son transportados de manera eficiente. Así mismo, se describió la pérdida de la represión ejercida por péptidos en las actividades de PrtP y Per , dos de las enzimas principales del sistema proteolítico y principales proveedoras de péptidos en el extracelular e intracelular respectivamente. En el caso de PrtP, se pudo demostrar que el aumento de la actividad se debe a una pérdida de la represión a nivel transcripcional. La demostración de la interacción de CodY (que había sido postulado como el efector de la represión por péptidos de varios componentes del sistema proteolítico en Lactococcus lactis) de Lb casei con la región promotora de prtP apunta a que ésta proteína reguladora mediaría la pérdida de represión en medio hiperosmótico. En un medio carente de péptidos y en alta sal, en cambio, la elevada actividad de PrtP se debe a un aumento de la velocidad máxima de la enzima durante el crecimiento en alta sal y no a un aumento de la actividad transcripcional. Dado que PrtP se encuentra anclada a la pared celular, la modificación de la actividad de la enzima podría ser consecuencia de modificaciones en el entorno de la proteína. Se describió una sensibilidad diferencial a la lisis y a antibióticos que actúan a nivel de envolturas en células provenientes de un medio con alta sal. El aumento de la sensibilidad a la lisis se debe directamente a alteraciones de la pared, ya que el mismo efecto se observó al emplear paredes purificadas. El análisis de las fotografias de microscopía electrónica reveló un aumento en el tamaño de las células crecidas en alta sal y claras diferencias en la pared de la misma. De estos resultados, se desprende la posibilidad de emplear el precrecimiento en NaCl como un método para facilitar la lisis de un microorganismo que normalmente es resistente a la misma. Los resultados obtenidos en esta tesis, contribuyen al conocimiento de la fisiología de bacterias lácticas en presencia de un efector de estrés que normalmente se encuentra durante los procesos en los que estos microorganismos participan.

Descripción: En esta Tesis se caracterizan las comunidades de pequeños roedores presentes en granjas avícolasdel partido de Exaltación de la Cruz (Provincia de Buenos Aires) en cuanto a su riqueza, diversidadespecífica y abundancias relativas. También se analizan algunas variables reproductivas de las especiespresentes con el objetivo final de reunir información que sirva para aplicar al control de roedores. Para eso se realizaron muestreos estacionales con trampas de captura múltiple continua durante dosaños en 30 granjas. En cada granja se distinguieron 3 hábitats: galpones, perímetros e interfases (perímetrosvecinos a los galpones). Las trampas se ubicaron cada 20m rodeando 3 galpones, alrededor delperímetro y a lo largo de las interfases de cada granja. Los animales capturados fueron determinadosespecíficamente, medidos, sexados y caracterizados según su estado reproductivo. También se extrajeronlos cristalinos para determinar las edades a partir de su peso seco y los úteros para registrar lapresencia y número de embriones. Tanto en las granjas como en cada uno de los hábitats se capturaron 5 especies: Calomys lancha, Mus musculus, Akodon azarae, Oligoryzomysflavescens y Calomys musculinus (según el orden decrecientede sus abundancias en las granjas). La diversidad resultó significativamente mayor en los galponesque en los perímetros debido a que en los primeros hubo 2 especies dominantes (C. laucha y M. musculus),mientras que en los perímetros sólo dominó A. azarae. Todas las especies silvestres fueron más abundantesen las interfases que en los demás hábitats, pero sólo A. azarae resultó significativamente más abundanteen las interfases y los perímetros que en los galpones. M. musculus, por su parte, fue más abundanteen los galpones que en los perímetros. La abundancia de las especies silvestres fue significativamentemayor en las épocas frías que en las cálidas tanto en las granjas como en cada uno de los hábitats, encambio, M. musculus no mostró diferencias significativas entre épocas en ningún caso. Esta especie, quese estaría reproduciendo en los galpones, presentó un período reproductivo prácticamente continuo alolargo del año. C. laucha, en cambio, también se estaría reproduciendo en los galpones, pero interrumpiríasu reproducción durante el invierno, mientras que A. azarae se reproduciría en los perímetros yprolongaría su temporada reproductiva con respecto a la que muestra en el sistema campo-borde. En base a los resultados obtenidos se concluye que las granjas avícolas son colonizadas por roedoressilvestres que ingresan del sistema campo-borde a través del perímetro y las interfases, mientras que M. musculus ingresaría además junto con el alimento balanceado directamente a los galpones. Su ingresodirecto y los recursos y condiciones favorables de los galpones, facilitarían su establecimiento en ellos. Sin embargo, la aplicación de rodenticidas determinaría que desarrolle en este hábitat una estrategiaruderal. A. azarae, por su parte, se establecería en los perímetros por ser un hábitat menos disturbado,pero prolongaría su período reproductivo como consecuencia de alimentarse en los galpones durante elinvierno. La reproducción prolongada en M. musculus y la aplicación de rodenticidas serían las causasde que esta especie no muestre variaciones significativas de abundancia entre épocas, mientras que lasespecies silvestres en conjunto muestran un hiato invernal en su período reproductivo que causaría ladisminución de sus abundancias en las épocas cálidas. Finalmente, los resultados de esta Tesis permiten hacer algunas recomendaciones para el control deroedores en las granjas: mantener en el perímetro y todo el predio una cobertura vegetal baja, evitar lapresencia de interfases y aplicar rodenticidas en los galpones en forma periódica.

Descripción: Esta tesis doctoral se llevó a cabo con la intención de realizar una contribuciónoriginal al conocimiento de las creencias sobre sexualidad y género en elmarco del conocimiento profesional del profesorado, a partir de revisar elcurrículo oculto, considerado un componente esencial de las prácticasdocentes. A través de dicho currículo se ponen en juego las creencias queposeen los y las docentes sobre determinados contenidos y que incidenfuertemente en la construcción de las subjetividades de los y las estudiantes. Para alcanzar dicho objetivo se implementaron métodos de investigacióneducativa de tipo cualitativo. El trabajo de investigación se dividió en 2 etapas. En la primera se trabajó con tres docentes de una escuela estatal de la Ciudad Autónoma de Buenos Aires. Se realizaron observaciones de clase noparticipantes y luego, los datos obtenidos fueron categorizados y analizadospara identificar posibles creencias sobre sexualidad y género. En la segundaetapa, en la que se trabajó con dos de los docentes de la muestra inicial, serealizaron encuentros en los que se implementaron diversas metodologías enla modalidad de taller, en los que se procuró la reflexión conjunta, laestimulación del recuerdo y la metacognición. Como resultado de nuestro trabajo hemos identificado y caracterizadonumerosas creencias del profesorado sobre sexualidad y género, uncomponente central del conocimiento profesional, que se expresan a través delcurrículo oculto escolar. También, mostramos que la implementación deestrategias de reflexión metacognitiva permiten hacer explícitas dichascreencias, lo que es considerado un primer paso para su vigilancia y revisiónpor parte de los y las docentes. Este proceso de análisis a través de unareflexión metacognitiva sobre las propias creencias y cómo luego estas sepueden vigilar para la regulación del currículo oculto escolar, no había sidoinvestigado hasta la fecha. De esta forma, consideramos que el aporte más importante de esta tesis hasido vincular las creencias del profesorado con el currículo oculto escolar y conlas estrategias de reflexión metacognitivas como posibles instrumentos para laexplicitación, por parte del profesorado, de dichas creencias. Nuestrosresultados contribuyen a generar conocimiento relacional sobre dichos camposteóricos y sobre posibles formas de intervención para la regulación del currículooculto Palabras clave: Conocimiento Profesional del Profesorado – Creencias – Sexualidad y Género – Currículo oculto – Metacognición

Descripción: El curso clínico de la enfermedad de Chagas crónica (EChC) depende tanto de la respuesta inmune generada por el huésped como de la capacidad de Trypanosoma cruzi (T. cruzi) para evadirla. El desarrollo de una potente respuesta inflamatoria es nece sario para la eliminación del parásito, pero a su vez contribuye al daño tisular. Así, los mecanismos reguladores de la inmunidad constituyen elementos claves para contener esta respuesta exacerbada y su estudio es fundamental para entender los factores involucrados en la inmunopatología. La función regulatoria de las células B (Bregs), a través de la secreción de citoquinas anti-inflamatorias, principalmente IL-10 (B10), ha sido de interés en el estudio de enfermedades infecciosas y autoinmunes en humano, siendo las poblaciones CD24highCD38high (transicionales) y CD24highCD27+ (memoria), las más enriquecidas en IL-10 en san gre periférica. En el contexto de la EChC, se sabe que T. cruzi modifica la distribución fenotípica de las células B de sangre perifé rica, sin embargo, la población de células B10 continúa siendo poco estudiada. En la presente Tesis se evaluó la frecuencia y la distribución fenotípica, en base a los marcadores CD24, CD27 y CD38, de las células B y en particular de las células B10 de sangre periférica en pacientes con distintas formas clínicas de la EChC, en condiciones ex vivo y frente al estímulo in vitro. Asimismo, se estudió la expresión de la molécula regulatoria PD-L1 en las células B estimuladas in vitro. Para ello, las células mononucleares de sangre periférica (CMN) de pacientes con EChC (con o sin cardiopatía) e individuos no infectados (NI-contro les) se incubaron con PMA+Ionomicina junto con Brefeldina A (PIB) durante 5 hs (condición ex vivo) ó las células B aisladas se estimularon con lisado de T. cruzi, CpG+CD40L o CpG+CD40L+T. cruzi durante 48 hs y las últimas 5 hs junto con PIB, y se marca ron para su análisis por citometría de flujo. Los resultados ex vivo mostraron que los pacientes con cardiopatía presentaron una expansión de las células B transicionales, así como una distribución fenotípica diferencial de las células B10, en particular un incremento de las células B10 vírgenes y B10 CD24-CD27-. La frecuencia de células B10 totales y la expresión de IL-10 en las mismas fueron similares entre los grupos, evidenciando que estas células en los pacientes infectados con T. cruzi mantienen la capacidad para producir IL-10. Adicionalmente, la distribución fenotípica de las células B10 ex vivo fue similar en pacientes sin alteraciones cardíacas e individuos NI. In vitro, el estímulo con T. cruzi indujo una disminución de las células B transicionales en los pacientes con EChC, así como un aumento de las células B10 y de la secreción de IL-10 en todos los grupos, siendo menos pronunciado en los pacientes con compromiso cardíaco. La distribución fenotípica de las células B10 mostró una disminución de las B10 transicionales en los pacientes sin cardiopatía y un aumento de las B10 CD24-CD27- y CD27-CD38+ en los pacientes con la forma cardíaca. Estos resultados sugieren que la estimulación con T. cruzi induce un aumento de tipo innato de células B10, que en los pacientes con cardiopatía estaría asociado con el incremento de poblaciones B10 CD27-, mientras que en los pacientes sin alteraciones y en los NI, estaría dado por poblaciones fenotípicas diferentes a las analizadas en este trabajo. A su vez, las células B de los pacientes con cardiopatía evidenciaron una menor diferenciación a células B10 frente al estímulo con CpG+CD40L. Por otra parte, los pacientes con EChC mostraron un aumento de células B PD-L1+ frente al estímulo con T. cruzi y una menor expre sión de esta molécula regulatoria en las células estimuladas de forma inespecífica. Estos hallazgos muestran una relación entre las alteraciones fenotípicas en las células B10 y las distintas formas clínicas de la EChC, sugiriendo la potencial contribución de estas células en el curso clínico de la infección crónica con T. cruzi.

Descripción: En latitudes extratropicales los ciclos de vida de animales y plantas están modulados por el ciclo anual de la temperatura. En las últimas décadas, se observaron cambios en la percepción del ritmo de las estaciones desde los puntos de vista ecológico, a través del estudios de las fases de crecimiento de las especies vegetales terrestres (estaciones fito-fenológicas) y también climático, a través del ciclo anual de la temperatura (estaciones térmicas). Sin embargo, no existe consenso en cuanto a una definición univer-sal. En la presente Tesis Doctoral, se aborda el concepto de dividir el año en cuatro estaciones a partir de umbrales dinámicos desde estos dos enfoques con el fin de encontrar definiciones que sean aplicables a cualquier región extratropical continental. Además, se busca identificar los principales procesos físicos que caracterizan las estaciones térmicas relacionados con la influen-cia de la radiación neta en superficie, de la partición entre los flujos turbulentos de calor sensible y latente, de la nubosidad y de la circulación atmosférica. Para la definición de la estaciones se utilizaron la temperatura del aire media (TM), la máxima (TX) y la mínima (TN) diarias a 2 metros procedentes de reanálisis (ERA-Interim, JRA-55 y NCEP2), y el índice de vegetación NDVI a partir de información satelital (GIMMS3g) a nivel global para el periodo 1982-2014. Para evitar resultados espurios, los ciclos anuales de estas variables fueron suavizados a partir de splines cúbicos. En primer lugar se definieron las estaciones térmicas a partir de la onda anual de TM identificando los días de máxima (DXT) y mí-nima (DNT) temperatura y los días de máximo calentamiento (DXC) y enfriamiento (DXF). Los resultados muestran que las métri-cas extremas (DXT y DNT) ocurren antes en zonas continentales que en zonas costeras, lo que indica una fuerte influencia oceá-nica. Por otra parte, las métricas intermedias (DXC y DXF) están más relacionadas con la insolación en los equinoccios de prima-vera y otoño, respectivamente. En zonas húmedas, los procesos radiativos tienen una gran influencia sobre DXT, la circulación at-mosférica sobre DNT y la humedad del suelo sobre DXC. En zonas de transición, donde existe acople suelo-atmósfera, los proce-sos radiativos en superficie son los factores dominantes para la ocurrencia de las métricas, excepto para DXT que está más influ-enciado por la advección térmica. Por su parte, en las zonas áridas las métricas estacionales dependen principalmente de la radia-ción neta en superficie. En segundo lugar, se analizaron los desfases entre inicio, fin y duración de la estación térmica cálida (periodo de tiempo compren-dido entre DXC y DXF) y la estación de crecimiento vegetal. Los resultados mostraron patrones regionales coherentes tanto en el inicio como en el fin de la estaciones para las zonas monzónicas, subhúmedas, semiáridas y áridas. Los patrones reflejan limita-ciones regulados por la temperatura en regiones con disponibilidad baja de agua, y por las precipitaciones y su estacionalidad en regiones semiáridas y áridas. También se analizaron, años con anomalías cálidas o húmedas. En general se observa que ante con diciones anómalas la estación térmica es menos sensible que la estación de crecimiento, y que la sensibilidad está modulada por el régimen climático de cada región. Por lo tanto, este análisis aporta una mirada original al estudio de las estaciones a escala glo-bal. Por último, se presenta una definición de las estaciones térmicas a partir de los ciclos anuales de TX y TN, empleando sus percen-tiles 75 y 25 para identificar las estaciones extremas (verano e invierno térmicos) y a partir de ellas las estaciones intermedias (oto-ño y primavera). Se obtuvo que las definiciones térmicas de las estaciones son similares a las definiciones astronómicas con una diferencia máxima de 15 días entre ambas y duraciones de alrededor de 90 días. Anomalías positivas en la radiación de onda cor-ta y en el calor sensible respecto al latente durante el fin de la primavera adelantan el comienzo del verano térmico. El comienzo del invierno está más influenciado por la circulación atmosférica. Anomalías positivas del calor sensible sobre el latente durante el fin del verano se relacionan con atrasos del comienzo del otoño. Con respecto a la primavera, aumentos en la radiación de onda larga se relacionan con retrasos de la llegada de la primavera, si bien la advección térmica y la nubosidad nocturna también cum-plen un rol importante (anomalías positivas de la nubosidad nocturna durante el fin del invierno se relacionan con adelantos en el inicio de la primavera).

Descripción: La Enfermedad de Parkinson (EP) es el desorden neurodegenerativo motor más frecuente,caracterizado por la presencia de agregados proteicos amiloideos intra y extraneuronalesconocidos como Cuerpos de Lewy (CL). El principal componente de estas estructuras esalfa-sinucleína (AS), una proteína presináptica de 140 aminoácidos abundante en célulasdopaminérgicas del cerebro aunque su función fisiológica permanece aún desconocida. Ensu forma libre nativa AS carece de una estructura secundaria definida pudiendo adoptarmúltiples conformaciones en solución y en asociación con otras proteínas y membranas. Secree que los CL y las fibras amiloides maduras (mafs) son el resultado de un proceso demal plegamiento, auto-ensamblado y asociación de AS y que posiblemente sirven comomecanismos de protección para la célula, a través de la redistribución en la población de lasespecies tóxicas intermediarias solubles asociadas a etapas tempranas. Estudio in vitro delas especies y procesos involucrados en la agregación de AS brindan la posibilidad deentender los mecanismos subyacentes en EP. El diseño de nuevas formas de detección delas especies intervinientes en el proceso de agregación y el estudio de los mecanismos deformación de dichos intermediarios tempranos poseen una alta importancia. En esta tesis, se sintetizaron sondas fluorescentes sensibles a cambios en la polaridad desu microentorno que permiten monitorear el proceso de auto-ensamblado y asociación de AS marcada covalentemente con estos compuestos. Dichas sondas demuestran una muyalta sensibilidad al proceso en estudio, proveyendo una novedosa metodología demonitoreo en continuo con la mínima perturbación del sistema. Diversas sondas fueronsintetizadas basándose en la familia de las 3-hidroxicromonas (3HC), compuestosaltamente sensibles a los cambios de polaridad de su entorno. Su particular estructuraquímica posibilita el fenómeno conocido como ESIPT (‘Excited State Intramolecular Proton Transfer o Transferencia Protónica Intramolecular en el Estado Excitado’). En ESIPT seproduce una transferencia protónica intramolecular en el estado excitado obteniendo dosformas excitadas cada una con un nivel de energía distinto. Con lo cual estos compuestosfluorescentes ESIPT presentan dos bandas de emisión en lugar de una sola. La posición,intensidad y relación entre las bandas de emisión se modifican de acuerdo a los cambios enla polaridad, formación de enlaces por puentes de hidrógeno, y acidez/basicidad delmicroentorno de la sonda. Las nuevas sondas 3HC sintetizadas resultaron reporteros muyversátiles para el proceso de agregación de AS, particularmente sensibles a las etapastempranas a cuyos agregados de AS se les adjudica la mayor citotoxicidad. La combinaciónde distintas sondas de polaridad han permitido obtener datos experimentales acerca de laformación y desaparición de intermediarios pre-amiloideos transientes. Las curvas de agregación obtenidas y sus cambios espectroscópicos fueroncomplementadas con un análisis por Microscopia de Fuerza Atómica (AFM). Mediante unestudio sistemático por AFM se lograron identificar las diferentes especies provenientes delproceso de autoensamblado de AS, donde cada una de las especies fue caracterizada ycatalogada. Estudios a diferentes temperaturas permitieron evaluar su influencia en lacinética y termodinámica del proceso de agregación. Incubaciones a baja temperatura (4°C) permitieron definir un mínimo local de energía en la coordenada de la agregación,revelando una novedosa especie supramolecular (la "acuna") que muestra indicios de estardirectamente involucrada en el paso clave de la formación de estructuras fibrilares. Estudios preliminares sobre células SH-SY5Y en cultivo dan indicios de que las acunas soncitotóxicas. A través de la Crio-Microscopía de Transmisión Electrónica (Cryo-ET) se obtuvoinformación estructural con resolución sub-nm de esta novedosa especie supramolecular. Los estudios dieron lugar a la formulación de un nuevo esquema secuencial de agregación (SAS) para AS, basándose en conceptos de química coloidal, de polímeros ysupramolecular. SAS distingue 3 etapas de la agregación: molecular, coloidal y fibrilar, enfunción de las estructuras halladas, su orden secuencial lineal y orquestado deinterconversión, su presencia transiente (aparición y desaparición) y morfologíacaracterística. Además, SAS distingue etapas exergónicas y endotérmicas del procesoglobal, señalando un mínimo local de energía correspondiente con la formación de la acuna. Se prevé que este modelo pudiera ser útil no sólo para AS sino para otras proteínasamiloideas “intrínsicamente desordenadas” asociadas a enfermedades neurodegenerativassimilares, abriendo la posibilidad de la existencia de un mecanismo común y unificado. Esta tesis doctoral involucra un estudio desde lo sintético orgánico y la biofísica estructural,utilizando microscopias de alta resolución y herramientas fluorescentes avocadas al estudioy la descripción del proceso integro de agregación de AS, obteniendo nuevos datosrelevantes al área que son interesantes de continuar y ser explorados por el aporte quepuedan rendir en el contexto biomédico.

Descripción: La autoinmunidad es una causa importante de enfermedad en los seres humanos. El síndrome de Sjögren es una enfermedad inflamatoria crónica que se caracteriza por una pérdida progresiva de la secreción salival y lagrimal. La cepa de ratones diabéticos no obesos (NOD) es el modelo murino más ampliamente utilizado para el estudio de esta enfermedad debido a que el desarrollo de la sialoadenitis está acompañado por una disminución de la respuesta secretoria. Estudios en las glándulas salivales sugieren que el óxido nítrico podría tener un papel en la regulación de la secreción salival. Por tal motivo nuestro objetivo es investigar si la disfunción secretoria de los ratones NOD está asociada a alteraciones en la actividad de la óxido nítrico sintasa y su relación con la aparición de infiltrados linfocitarios en las glándulas o la expresión de citoquinas en las mismas. Los resultados expuestos indican que las glándulas salivales de ratones NOD presentan una menor actividad de NOS a partir de las 12 semanas comparada con la de BALB/c de la misma edad y ratones NOD de 8 semanas. La disminución es total en el caso de las glándulas submaxilares. El efecto sobre la NOS coincide con una reducción del flujo salival estimulado por pilocarpina sola o pilocarpina y VIP. Ambos efectos preceden al aumento de los niveles de citoquinas proinflamatorias en las glándulas y en el suero y a la aparición de infiltrados linfomononucleares en las glándulas. Además los resultados apoyan la hipótesis de una regulación negativa de la NOS por CaM KII, como el mecanismo responsable de la disminución de la actividad observada.

Descripción: Fil: Pucheu, Norma Lucrecia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: El algodón (Gossypium spp.) es un cultivo regional económicamente clave en el noreste argentino, cubriendo en la actualidad 500.000 hectáreas. La enfermedad azul es la principal enfermedad viral del algodón y causa importantes pérdidas en el cultivo si no se implementan medidas adecuadas de control consistentes en la siembra de cultivares resistentes a la enfermedad y en el control de los insectos vectores mediante insecticidas. La enfermedad es producida por el cotton leafroll dwarf virus (CLRDV), una especie dentro del género Polerovirus de la familia Luteoviridae. Los síntomas característicos de la enfermedad son enanismo, enrollamiento de las hojas, textura coriácea con coloración verde oscura‐azulada y clorosis en las nervaduras. El virus es transmitido en forma circulativa y no propagativa por el pulgón del algodón Aphid gossypii, no siendo posible su transmisión mecánica. El CLRDV posee un genoma de RNA de simple cadena (ssRNA) positiva de 5,866 kb. El genoma de los virus pertenecientes al género Polerovirus está formado por siete marcos abiertos de lectura (ORFs). Los ORFs 0, 1 y 2 se traducen a partir del RNA viral dando como producto las proteínas P0, P1 y la proteína P1‐P2 a partir de un cambio de marco traduccional. La proteína P0 corresponde en algunos virus del género al supresor del silenciamiento génico, las proteínas P1 y P1‐P2 serían componentes de la RNA polimerasa dependiente de RNA. Los ORFs 3, 3a, 4 y 5, se traducen a partir de un RNA subgenómico, dando lugar a las proteínas P3, P3a, P4 y P3‐P5. La proteína P3 corresponde a la cápside viral, P3a y P4 corresponderían a las proteínas de movimiento viral y P3‐P5 al dominio readthrough de la proteína de cápside que estaría implicada en la transmisión del virus por el insecto vector. En los programas de mejoramiento del cultivo de algodón, la selección de variedades de algodón con resistencia genética a la enfermedad azul se realiza mediante la infección de las plantas con insectos vectores que son criados en el laboratorio y que poseen el virus. En el presente trabajo se construyó y caracterizó un clon infectivo de cDNA del CLRDV. Este sistema permitió desarrollar una estrategia alternativa de infección mediante la inoculación del virus vía agroinfección, independizándose de la transmisión por el insecto vector, y por otro lado es esencial para el desarrollo de un sistema de genética reversa que permita el estudio de la expresión y función de los genes virales, de la replicación del virus y la interacción plata‐virus a nivel molecular. Se caracterizó el clon infectivo del virus mediante ensayos de agroinfección en plantas de G. hirsutum NC33B (variedad susceptible a la infección por CLRDV). Se registró la aparición de síntomas típicos de la enfermedad en las plantas bajo estudio y se confirmó la infección a distintos tiempos postinfiltración en las hojas sistémicas mediante las técnicas de RTPCR, Northern y Western blot. A su vez, se demostró la transmisibilidad del virus desde plantas agroinfiltadas hacia plantas sanas mediada por áfidos, corroborando así que las partículas virales producidas por la agroinfección son infectivas y transmisibles por el vector natural. Además, se agroinfiltraron plantas de G. hirsutum variedad Guazuncho 2 (resistentes a la infección por CLRDV) y se comprobó que el virus no logra infectar esta variedad. Realizando el mismo tipo de ensayos, se comprobó que el clon infectivo del CLRDV tiene la capacidad de infectar las plantas modelo Arabidopsis thaliana y Nicotiana benthamiana. Si bien en ambas especies los ensayos moleculares demostraron la infección y la movilidad del virus sistémicamente, solo se observaron síntomas (clorosis internerval) en N. benthamiana. El estudio y la caracterización del clon infectivo de CLRDV permitieron desarrollar una técnica más sencilla de infección, que actualmente se está utilizando como sistema de infección de rutina en el programa de mejoramiento de algodón del INTA para la selección de germoplasma resistente a CLRDV. Para la caracterización de las proteínas CLRDV, se estudiaron las interacciones entre proteínas virales mediante el sistema de doble híbrido en levaduras. Se detectó interacción entre la proteína de cápside viral (P3) entre sí y con la proteína minoritaria de capside P3P5 y además se observó interacción de la proteína de movimiento (P4) entre sí. El silenciamiento génico constituye un mecanismo de defensa antiviral en plantas desencadenado por el RNA doble cadena. Como mecanismo de contra defensa, la mayoría de los virus vegetales poseen proteínas con función supresora del silenciamiento. Con el fin de avanzar en la comprensión de las bases moleculares de la enfermedad se investigó si el CLRDV posee una proteína capaz de suprimir el silenciamiento génico. Para ello se utilizaron dos sistemas basados en el silenciamiento de la proteína GFP, que permiten describir el mecanismo de acción y la etapa en la vía del silenciamiento que estaría afectada por el supresor. Estos estudios permitieron determinar que la proteína P0 del CLRDV es un supresor de silenciamiento local, que actúa bloqueando la vía del silenciamiento río arriba del proceso de amplificación. A su vez, no es capaz de inhibir la síntesis de RNAs pequeños (siRNAs) a partir de RNA de doble cadena ni es capaz de bloquear la movilidad sistémica de la señal de silenciamiento. Utilizando los mismos sistemas de silenciamiento se probó la actividad supresora del silenciamiento del clon infectivo de cDNA del CLRDV y se observó que la proteína P0 expresada en el contexto viral conserva la misma actividad supresora. Mediante un software de predicción se identificaron las proteínas P3 y P4 del CLRDV como otros potenciales supresores del silenciamiento génico postranscripcional, y se analizó su actividad de la misma forma que fue evaluada la proteína P0, pero estas proteínas no presentaron actividad supresora del silenciamiento en ninguno de los sistemas utilizados. Además, se evaluó comparativamente la virulencia de la proteína P0 del CLRDV y la proteína P0 del Cotton leafroll dwarf virus‐at (CLRDV‐at). Este virus es una variante nueva del CLRDV que quiebra la resistencia del germoplasma local estableciendo una infección suave con síntomas diferentes a enfermedad azul. Para ello se estudió la virulencia de P0 en el contexto de la infección de un virus heterólogo. Se analizó la exacerbación de los síntomas de PVX en presencia de las proteínas P0 en plantas de N. benthamiana. Se observó que la construcción PVX‐P0^CLRDV desarrollaba síntomas severos con respecto al PVX salvaje y el PVX^P0CLRDV-at desarrollaba síntomas suaves, mostrando que P0^CLRDV presenta mayor virulencia que P0^CLRDV-at. Según se describe en bibliografía la proteína P0 de algunos polerovirus interactúan con la proteína ASK1 del sistema SCF ubiquitina ligasa. Al interaccionar con dicho complejo median la degradación de la proteína ARGONAUTA 1 (AGO1) de la vía de silenciamiento génico de la planta. Utilizando la técnica de doble hibrido en levaduras se determinó que la proteína P0 del CLRDV también interacciona con el sistema SCF ubiquitina ligasa. Para ello se evaluó la interacción de las proteínas ASK de A. thaliana y sus correspondientes ortólogos: SKP1 de N. benthamiana y GSK1 de Gossypium hirsutum. Se determinó que la proteína P0 es capaz de interaccionar con SKP1 y GSK1, pero no fue posible determinar su interacción con ASK mediante la técnica utilizada. Estudios previos indican que la interacción entre la proteína P0 y ASK ocurre a través del dominio F‐box (LPXXL/IX_10-13P) de la proteína P0. Con el objetivo de determinar si la interacción con el sistema SCF ubiquitina ligasa de la proteína P0 del CLRDV es dependiente de la conservación del dominio F‐Box se realizaron mutantes en la región consenso del dominio. A partir del dominio F‐box de P0^CLRDV (LPFIIX_10P) se desarrollaron las mutantes P0^mut1 (LPFIvX_10P), P0^mut2 (aaFIIX_10a) y P0^mut3 (aaFIIX_10P). Teniendo en cuenta la secuencia del P0^CLRDV-at (LPFLvX_10P) se desarrolló el mutante P0^mut1 sobre la secuencia del P0^CLRDV y el mutante P0^mut4 (LPFLiX_10P) sobre la secuencia del P0^CLRDV-at. Se analizó la actividad supresora de los mutantes en el dominio mediante ensayos basados en el silenciamiento de la proteína GFP, en los cuales los mutantes P0^mut2 y P0^mut3 perdieron completamente la actividad supresora mientras que los mutantes P0^mut1 y P0^mut4 conservaron su actividad supresora con una leve variación en las intensidades de supresión. Mientras P0mut1 disminuyó su actividad respecto de P0^CLRDV, P0^mut4 la aumentó respecto de P0^CLRDV‐at. Consistente con los resultados in planta las mutantes P0^mut2 y P0^mut3 perdieron la interacción con las proteínas SKP1 y GSK1 en el sistema de doble híbrido en levaduras, mientras que P0^mut1 y P0^mut4 conservaron la capacidad de interaccionar con ellas. Estos resultados indican que la conservación del consenso LP de dicho dominio es indispensable para que ocurra la interacción y para que la proteína P0 posea su actividad supresora. Por último, mediante ensayos de coagroinfiltración de las proteínas P0 y AGO1, se logró determinar que en presencia de la proteína P0 la proteína AGO1 es degradada. De esta manera se confirmó que el mecanismo de acción de la proteína P0^CLRDV es conservado respecto de otras proteínas P0 caracterizadas previamente. A su vez, aquellos mutantes que perdieron su capacidad supresora tampoco fueron capaces de inducir la degradación de AGO1 señalando que el dominio F‐box está implicado en el mecanismo de patogenicidad de la proteína P0. Finalmente, se analizó la localización subcelular de la proteína P0 mediante la expresión de P0 fusionada a GFP. Mediante microscopía confocal se determinó que la proteína P0 se localiza en citoplasma y núcleo de células del mesófilo foliar de N. benthamiana. El clon infectivo del CLRDV constituye una herramienta que permitirá avanzar en el estudio de la expresión y función de los genes virales y de la replicación viral por genética reversa. Se trata del primer clon infectivo capaz de infectar plantas de algodón y permite acelerar los procesos de búsqueda de genes de resistencia en bancos de germoplasma de algodón. Además, facilitará el trabajo en plantas modelo utilizadas para el estudio de la interacción planta‐patógeno tales como N. benthamiana, así como el uso de las colecciones de mutantes de A. thaliana para profundizar en el estudio de las funciones virales y su interacción con el hospedador. Estos resultados representan un importante avance en el conocimiento de la función de las proteínas codificada por el CLRDV, especialmente en la comprensión de la función e interacciones de P0 con proteínas de sus hospedantes. En conclusión, proporcionan un punto de partida para la comprensión de los mecanismos moleculares involucrados en la enfermedad azul producida por la infección del CLRDV.

Descripción: El presente trabajo se basa en el estudio de las múltiples formas de GnRH (hormona liberadora de gonadotrofinas) en un pez teleósteo de agua dulce del Orden Perciformes mediante técnicas histológicas, inmunohistoquímicas, de hibridación in situ y Western blot. Aunque el objetivo inicial fue localizar anatómicamente las diferentes poblaciones de GnRH y analizar la distribución de sus axones desde un punto de vista morfológico- funcional, también se caracterizaron las gonadotrofinas a lo largo del desarrollo y en adultos, encontrandose expresión de las mismas en cerebro y ovario. A la luz de los resultados obtenidos sobre el origen y la ontogenia de las variantes moleculares de GnRH, se propone una correlación entre la diferenciación de una de estas poblaciones y la diferenciación sexual gonadal. Se discute el uso de una nueva metodología para el estudio de las múltiples formas de GnRH dentro de una misma especie que evita las reacciones cruzadas, comúnmente observadas entre anticuerpos y sondas. Finalmente se propone un nuevo patrón de distribución de dichas poblaciones y un origen diferente para una de ellas que contradice el patrón descripto para el resto de las especies de Perciformes, pero que es consistente con lo observado en el resto de los vertebrados.

Descripción: Se evaluaron los síntomas de intoxicación con deltametrina y cis-permetrina en ninfas III de T. infestans. Se estimaron los TE 50s de distintas dosis para dos efectos: (a) incoordinación, y (b) parálisis total. Deltametrina fue tanto o más rápida en producir el primer efecto (según la dosis), cis-permetrina fue más rápida en producir el segundo. No hubo diferencia significativa entre las DE 50 a diferentes tiempos de los dos piretroides, y las ninfas tratadas con cualquiera de ellos mostraron una importante recuperación en función del tiempo. La recuperación fue inhibida cuando se aplicó simultáneamente butóxido de piperonilo. Se estudió la influencia de distintas variables sobre la toxicidad de deltametrina y cis-permetrina. La temperatura tuvo un efecto importante sobre las CE 50s y DE 50s de los piretroides estudiados. En general la toxicidad aumentó al disminuir la temperatura; pero hubo excepciones que dependieron del insecticida, el estadio ninfal y el rango de temperatura. El efecto de la temperatura sobre los TE 50s fue poco importante. En general la velocidad de acción aumentó al disminuir la temperatura; pero hubo excepciones que dependieron del insecticida, el estadio ninfal y el rango de temperatura. En experimentos con ninfas de distintas edades y estados alimentarios, resultaron más sensibles los individuos de 1 día de edad, y más tolerantes los alimentados 7 días antes. La aplicación tópica en el tórax produjo síntomas de intoxicación más rápidamente que la aplicación tópica en el extremo abdominal. Deltametrina actuó más rápidamente que cis-permetrina en un amplio rango de dosis (2-1.000 ng/insecto). En ninfas I, el isómero cis de la permetrina fue más tóxico que el isómero trans a 26 y 36°C, e igual de tóxico a 16°C. El pretratamiento con butóxido de piperonilo sinergizó la toxicidad de cis-permetrina pero no la de trans-permetrina. El pretratamiento con trifenilfosfato tuvo el efecto opuesto. La mezcla de los dos isómeros produjo un efecto de aditividad (ausencia de interacción). En ninfas III, el isómero cis de la permetrina fue más tóxico que el isómero trans a 16 y 26°C, e igual de tóxico a 36°C. Los pretratamientos con butóxido de piperonilo o trifenilfosfato no modificaron las DE 50s. La mezcla de los dos isómeros produjo un efecto de antagonismo. Ambos piretroides produjeron hiperactividad locomotora en ninfas III. Este efecto estuvo influenciado por el modo y el lugar de aplicación de los insecticidas. La hiperactividad fue inhibida por el pretratamiento con N-etilmaleimida y por el descenso de la temperatura. Ninguno de los dos insecticidas tuvo efectos subletales sobre la ingesta y la mortalidad de ninfas I y III, y sólo deltametrina produjo una disminución en la cantidad de ninfas I mudadas.

Descripción: Caracterizar el funcionamiento y la estructura del cerebro humano conforma uno de los desafíos más interesantes desde tiempos inmemoriales. Entender sus posibles estados y alteraciones a partir de las bases del conocimiento presenta infinidad de obstáculos, algunos de los cuales han podido sortearse. Los avances en materia científica y tecnológica del siglo XX, permitieron un abordaje prometedor en este campo, siendo sin lugar a dudas la técnica de imágenes por resonancia magnética nuclear (MRI) la más prometedora para el estudio del cerebro, constituyendo un claro ejemplo del alcance de la Física a otras disciplinas, como lo es la Medicina. Este tipo de métodos tienen un rol fundamental en los estudios interdisciplinarios ya que empujan constantemente los límites de la ciencia y la tecnología. El principal objetivo de esta Tesis es implementar técnicas de imágenes de difusión de MRI (dMRI) e imágenes funcionales en estado de reposo (fMRI) para evaluar posibles anomalías presentes en la microestructura de fibras nerviosas de sustancia blanca, y en las conectividades funcional y estructural en personas en riesgo genético de padecer la enfermedad de Alzheimer (AD). Con este propósito, se expandieron las métricas ya conocidas para fMRI y dMRI de modo tal de definir posibles predictores de la enfermedad. Para llevarlo a cabo, se ha explorado una muestra de sujetos adultos cognitivamente asintomáticos, pero con antecedentes de la AD en familiares de primer grado, mediante diversas metodologías. Se ha estudiado la arquitectura de las vías que conectan las áreas cerebrales que se ven primeramente afectadas durante la enfermedad mediante el análisis de dMRI. Se caracterizaron también la conectividad funcional y estructural de esta muestra de sujetos y se las comparó con la de un grupo de personas demográficamente equiparables pero sin antecedentes familiares de AD. Además, se asociaron estos aspectos con variables comportamentales y con la morfología de regiones cerebrales de especial interés para la enfermedad. Por último, se buscó construir una métrica que cuantifique el acoplamiento entre las dos conectividades previamente obtenidas, funcional y estructural. Las técnicas puestas a prueba para el estudio de la sustancia blanca han revelado una alteración en su integridad en el grupo de estudio en comparación al grupo control. Este deterioro se observó en la región posterior del cuerpo calloso, un gran haz de fibras que conecta transversalmente los dos hemisferios cerebrales, y una pequeña porción del fórnix derecho. Llamativamente, las conexiones que forman parte de este sector deteriorado de sustancia blanca involucran regiones que se ven afectadas por la AD. Por su parte, se hallaron también diferencias en la conectividad funcional obtenida a partir de la corteza entorrinal, viéndose disminuida en el grupo con antecedentes familiares de AD. Sin embargo, no se encontraron diferencias significativas en la conectividad funcional a partir de los núcleos talámicos anterodorsales ni en la conectividad estructural global. Finalmente, se logró una métrica que describe el acoplamiento de las conectividades en distintos enfoques: por grupo de estudio, por región de interés y por pares de conexión. Para este último caso se han encontrado no solo pares de conexión de regiones cuyo acoplamiento de conectividades es estadísticamente diferente entre grupos, sino también conexiones con acoplamiento significativo en el grupo control y no en el grupo asociado a la AD, marcando una potencial deficiencia. Replicar los resultados aquí presentados en otras muestras similares de sujetos con antecedentes familiares de primer orden podría resultar en importantes implicancias para la definición de la conectividad cerebral en estadios tempranos de la AD.

Descripción: 105 cultivares de trigo pan (Triticum aestivum L.), liberadoscomercialmente en Argentina entre 1932 y 1995, fueron caracterizadosutilizando marcadores genéticos de tipo morfológico y molecular (microsatélitesy AFLP) para obtener una estimación cuantitativa de la diversidad genética y suevolución a lo largo del tiempo, programas de mejoramiento. Un subgrupo de 10 diez SSR (microsatélites) altamente informativos fue seleccionado yutilizado para la construcción de la Matriz de Identificación, que permitió ladiscriminación de todos los cultivares estudiados aqui. Los datos molecularesfueron comparados con los datos morfológicos. Se observaron valores decorrelación significativos,aunque bajos, para las distintas técnicas comparadascon los datos fenotípicos, presentando valores de correlación mayores los AFLPy SSR (r= 0.1334) siguiéndole el de coeficientes de parentesco (r = 0.12239). Los datos obtenidos mediante los marcadores SSR se complementaroncon la información de datos de AFLP a fin de evaluar las relaciones genéticasentre cultivares. La correlación entre las matrices de similitud de datoscombinados de SSR con AFLP y la matriz de coeficientes de parentesco fueestadísticamente significativa (test de Mantel, P<0 01), aunque baja (r = 0.34) Los datos moleculares fueron usados para cuantificar la diversidad genética através de los criaderos y para evaluar la erosión genética. No se hallarondiferencias significativas en la diversidad genética entre los principalesprogramas de mejoramiento privados y públicos. Sólo se hallaron diferenciassignificativas entre los principales criaderos y los menores, tanto con SSR comocon AFLP. Un resultado interesante es que no se hallaron diferenciassignificativas en los valores de diversidad genética de los grupos de cultivaresliberados antes de 1960 y aquellos liberados en las siguientes tres décadas. Los valores de diversidad promedio basados en marcadores SSR fueron casiidénticos para los cuatro periodos analizados La diversidad genetica estimadabasada en datos de AFLP fue similar, pero diferencias levemente significativasfueron halladas entre cultivares liberados en los '70 (PIC= 0.28) y en los 80's (PIC = 0.34). Estos resultados contradicen la visión generalizada de la erosióngenética de los cultivares modernos y muestran que el germoplasma Argentinode trigo pan ha mantenido relativamente constante el nivel de diversidadgenética durante la última mitad del siglo. Se corroboró la factibilidad de la aplicación de microsatélites en dosaspectos: a) el estudio de caracteres cuantitativos de interes agronómico, comoes la calidad panadera, en poblaciones segregantes y b) su aplicación en lacaracterización de germoplasma. a) El microsatélite Xgwm3000 ubicado dentro del locus del gen de las γ-gliadinas (Xps2(Gli-1)) se halló completamente ligado al locus de RFLP XGli-B1 y estrechamente ligado (1 6 cM) a XGlu-B3 en lapoblacion segregante Chinese Spring-Klein 32. La presencia del alelo 252 pb detectado en Klein32 se correlacionó con los aumentosdetectados en los parámetros de calidad. Los microsatélites Xgwm2999 y Xgwm3000 ubicados dentro de los locide γ-gliadinas y gluteninas de bajo peso molecular, respectivamente fueronútiles en la caracterización de la variación alelica de los loci de proteínas dereserva en 105 cultivares de Argentina y 90 de California.

Descripción: Brucella spp. son bacterias Gram-negativas que pertenecen al grupo de las α-2-proteobacterias. Son el agente causal de la brucelosis, una enfermedad zoonótica que produceabortos e infertilidad en animales, y fiebre en humanos. Brucella es un patógeno intracelularfacultativo, el cual reside en un nicho replicativo derivado del retículo endoplásmico. Sucapacidad de sobrevivir dentro de las células hospedadoras se debe a los diversosmecanismos que ha desarrollado para tolerar las distintas condiciones de estrés presentes enel proceso de infección. Las bacterias pueden detectar y responder a cambios en el ambientepor medio de los sistemas de dos componentes, los cuales están formados por una Histidina Quinasa sensora (HK) y un Regulador de Respuesta (RR). Previo al inicio de este trabajo, secaracterizó en Brucella abortus 2308 una proteína histidina quinasa (LOVHK), la cual posee undominio LOV sensible a la luz azul, un dominio PAS, seguido de un domino HK. Cuando laproteína es iluminada con luz azul, el dominio LOV inicia un fotociclo, el cual promueve laautofosforilación del dominio HK iniciando una cascada de transducción de señales queculmina con un incremento en la virulencia de Brucella. En el presente trabajo se ha estudiadola vía de señalización iniciada por LOVHK en Brucella abortus 2308. Por medio de ensayos dedoble híbrido y experimentos de fosfotransferencias, se identificaron dos RRs comocompañeros de interacción de LOVHK: PhyR y LovR. Los resultados in vitro sugieren que LovRpodría funcionar como un sink de fosfato de LOVHK. Ensayos realizados in vivo sugieren que LOVHK, por medio de PhyR, contribuye a la activación del sistema de Respuesta General a Estrés (GSR- por sus siglas en inglés). Además, en ausencia de LOVHK la expresión de virBse encuentra alterada. Estos resultados sugieren que LOVHK podría participar en más de unavía de señalización intracelular. En resumen, los hallazgos del presente trabajo contribuyen alconocimiento del mecanismo de señalización de LOVHK y el efecto de dicha vía en lavirulencia de Brucella.

Descripción: Los mosquitos Aedes aegypti, vector de fiebre amarilla, dengue, Zika y chikungunya, y Anopheles pseudopunctipennis, uno de los principales vectores de malaria en América, se crían en ambientes muy distintos. Ae. aegypti se cría en recipientes artificiales cercanos al domicilio y peridomicilio mientras que An. pseudopunctipennis se cría en márgenes de arroyos de montaña. Estas diferencias pueden tener implicancias importantes en las metodologías de control de estos mosquitos. Además, la información sobre An. pseudopunctipennis es muy escasa debido a la dificultad de criarlo en laboratorio. Por lo tanto, el objetivo general de este trabajo de tesis consistió en caracterizar el comportamiento de An. pseudopunctipennis y Ae. aegypti frente a estímulos naturales y sintéticos, con el fin de generar resultados aplicables a un plan de manejo integrado de vectores. Para ello se realizaron tres abordajes: se estudió el efecto de moduladores del comportamiento y agentes ecológicos en larvas de Ae. aegypti y An. pseudopunctipennis (Capítulo 2). Se caracterizó la respuesta toxicológica y comportamental de larvas de ambas especies frente a cuatro clases de larvicidas (Capítulo 3). Y se evaluó el efecto repelente del aceite esencial de E. nitens en adultos de las especies mencionadas (Capítulo 4). Con respecto al primer abordaje, se determinó una gran riqueza de predadores en los sitios de cría de An. pseudopunctipennis, y los principales candidatos a evaluar en futuros trabajos fueron las larvas de Tropisternus noa, las larvas de Libellulidae, los adultos de Liodessus sp., Microvelia sp. y las larvas de Toxorhynchites sp. También se observó que los compuestos repelentes (DEET e IR3535) aumentaron la actividad de nado de larvas de ambas especies estudiadas pero los cebos atractantes (prolina y levadura) solo disminuyeron la actividad de nado en larvas de Ae. aegypti. Además, se determinaron por primera vez los parámetros toxicológicos de los larvicidas temefós, permetrina, Bti y el aceite esencial de E. nitens en larvas de An. pseudopunctipennis, que resultaron más tolerantes a estos larvicidas que Ae. aegypti. En ambas especies se registró una disminución en la actividad de nado en las larvas expuestas a temefós y permetrina. En cambio, esta disminución solo se observó en las larvas de Ae. aegypti expuestas al formulado de Bti y al aceite esencial de E. nitens, pero no en las larvas de An. pseudopunctipennis. Finalmente, se registró el efecto repelente de la DEET y el aceite esencial de E. nitens en hembras de Ae. aegypti y An. pseudopunctipennis utilizando el método de repelencia en placa. Además, el aceite de E. nitens generó un aumento de la actividad locomotora en hembras de Ae. aegypti. Finalmente, el aceite esencial de E. nitens presentó un alto tiempo de protección total, comparable con el de la DEET, frente a hembras de Ae. aegypti. Los resultados de esta tesis aportan información valiosa para ser utilizada en los programas de control de los mosquitos estudiados, y es el primer estudio detallado sobre los comportamientos de las larvas y adultos de An. pseudopunctipennis.

Descripción: Fil: Picollo de Villar, María Inés. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: En este trabajo caracterizamos el estado vacunal respecto de la serie primaria de vacunación contra pertussis de la población infantil asistente a los distintos centros vacunales del Municipio de Ezeiza en tanto coberturas y retrasos en el cumplimiento del calendario nacional de vacunación. De esta evaluación surge que la situación epidemiológica de Ezeiza es susceptible de ser mejorada ya que en los registros de aplicación de las dosis se observan considerables retrasos y coberturas por debajo del 95%. Utilizamos un modelo matemático de transmisión de la enfermedad para calcular las incidencias de casos graves y totales en el grupo de riesgo (menores de un año) y cómo éstas podrían disminuir si se mejorara el cumplimiento del calendario. Con este objetivo, utilizamos datos publicados de aplicación de dosis vacunales en la zona urbana y suburbana de La Plata y recalculamos las incidencias en estas condiciones. Encontramos que una reducción de los retrasos con que se aplican las dosis y un aumento de las coberturas podrían producir una mejora de hasta el 30% en las incidencias que estimamos para pertussis en el grupo de riesgo en Ezeiza. Los cálculos fueron repetidos asumiendo posibles variaciones en los parámetros del modelo que describen los contactos entre individuos y las eficacias de las distintas dosis vacunales y se encontró que nuestras conclusiones son robustas.

Descripción: La glicosilación de residuos de asparagina en las proteínas ocurre por elmismo mecanismo en todos los eucariotes estudiados, excepto en protozoarios de la familia Trypanosomatidae. Este consiste en la transferencia cotraduccional del oligosacárido Glc3Man9GlcNAc2 a partir del derivado de dolicol-P-P correspondiente. En células de mamífero la biosíntesis de Glc3Man9GlcNAc2-P-P-dolicol seproduce de manera secuencial y siguiendo un orden único, donde GDP-Man cede los primeros cinco restos de manosa, dolicol-P-Man los residuos de manosa restantes, y dolicol-P-Glc los tres residuos de glucosa. En todos los tripanosomátidos estudiados se había demostrado la transferencia a proteínas "in vivo" de oligosacáridos carentes de residuos de glucosa. Además, en algunos de ellos el oligosacárido transferido resultó tenermenos de nueve restos de manosa, pero en esos casos su estructura es la misma que la del oligosacárido del mismo tamaño intermediario en el ciclo del dolicol en mamíferos. Los derivados de dolicol-P-P que se acumulan y transfieren a proteínas son: Man9GlcNAc2 en epimastigotes de Trypanosoma cruzi y en Trypanosoma conorhini, Trypanosoma dionisii, Leptomonas samueli, Herpetomonas samuelpessoai y Herpetomonas muscarum; Man6GlcNAc2 en Leishmania mexicana, Leishmania adleri y Blastocrithidia culicis, y finalmente, Man7GlcNAc2 en Crithidia fascicuiata, Crithidia harmosa y amastigotes de cultivo axénico de T. cruzi. Aquí se han estudiado diversos aspectos del mecanismo de N-glicosilaciónde proteínas en tripanosomátidos con el objeto de determinar el origen de sus peculiaridades. Los principales resultados y conclusiones obtenidas se resumen a continuación. 1. La característica de transferir a proteínas oligosacáridos no glucosilados no es común a todos los protozoarios. Se demostró que el protozoario de vida libre Euglena gracilis transfiere Glc3Man9GlcNAc2 al igual que el resto de los eucariotes previamente estudiados. 2. Contrariamente a lo que se presuponía, miembros de un mismo género de tripanosomátidos pueden acumular derivados de Dol-P-P con oligosacáridos de diferente tamaño. Aquí se presentan evidencias de que células de Leishmania enriettii acumulan Man7GlcNAc2 mientras que previamente se había determinado la síntesis de Man6GlcNAc2-P-P-dolicol en otras dos especies de Leishmania. 3. Preparaciones de membrana de T. cruzi, L. enriettii, C. fasciculata y B. culicis sintetizan dolicol-P-Man pero no dolicol-P-Glc, que es el dador de restos glucosilo en el ensamblaje de lípido-oligosacáridos en otros eucariotes. Se concluye que la deficiencia primaria que conduce a estos tripanosomátidos a formar derivados de dolicol-P-P no glucosilados es la ausencia de actividad de UDP-Glc:dolicol-P-glucosiltransferasa, y por lo tanto su incapacidad de sintetizar dolicol-P-Glc. 4. Se diseñó un ensayo para la medición de actividades de manosiltransferasa dolicol-P-Man dependientes que consiste en la incubación de preparaciones de membrana con dolicol-P, GDP(14C)Man y aceptores exógenos (Man5-8GlcNAc2-P-P-dolicol). Luego por extracción de los derivados de dolicol-P-P sintetizados y análisis de los oligosacáridos radioactivos se puede determinar la presencia o ausencia de ciertas actividades de manosiltransferasa. 5. Utilizando el método que acaba de describirse se pudo determinar que B.culicis, que "in vivo" forma Man6GlcNAc2, "in vitro" es incapaz de transferir el séptimo, octavo y noveno residuo de manosa al lípido-oligosacárido preformado. L. enriettii y C. fasciculata que transfieren Man7GlcNAc2 "in vivo", noproducen la adición del octavo y noveno resto de manosa "in vitro". Seconcluye que: a) existen al menos tres actividades diferentes dedolicol-P-Man:dolicol-P-P-oligosacárido manosiltransferasa, y b) la síntesis de derivados de dolicol-P-P truncados en estos tripanosomátidos se debería a un bloqueo en la adición de determinados restos de manosa, originado por la falta de actividad de ciertas manosiltransferasas dolicol-P-Man dependientes. 6. Se determinó que en C. fasciculata los dadores de restos de manosa en el ensamblaje del dolicol-P-P-oligosacárido son los mismos que en células de mamífero: GDP-Man actúa como dador de los primeros cinco restos de manosa y dolicol-P-Man de los restantes. 7. Por primera vez se estudiaron los oligosacáridos unidos a dolicol-P-P yaquellos presentes en glicoproteínas de alta manosa en las formas tripomastigote (infectiva) y amastigotes intracelulares de T. cruzi. Se determinó que estos últimos transfieren a proteínas Man9GlcNAc2 mientras que la forma infectiva transfiere Man9GlcNA2 y Man7GlcNAc2. En la Fig. 45 se presenta el mecanismo de N-glicosilación de proteínas propuesto para estas dos formas del parásito. 8. En cuanto a las formas epimastigote y amastigotes axénicos de T. cruzi se había determinado que células de clones CA-I transferían a proteínas Man9GlcNAc2 y Man9GlcNAc2 más Man7GlcNAc2, respectivamente. Aquí se presentan evidencias de que las mismas formas de un clon no relacionado (M 80/88) acumulan como derivados de dolicol-P-P los mismos oligosacáridos que habían sido descriptos para clones CA-I. 9. De los puntos 7 y 8 se desprende que durante la diferenciación de T. cruci se produce un cambio en el mecanismo de N-glicosilación que conduce a la transferencia a proteínas de oligosacáridos de diferente tamaño. T. cruzi es el primer eucariote donde se demuestra una modificación en el tamaño del oligosacárido transferido durante la diferenciación. 10. Se estudió el orden de remoción de los primeros restos de manosa durante el procesamiento de glicoproteínas en epimastigotes y tripomastigotes de T. cruzi. En ambas formas el procesamiento comienza con la remoción de losmismos residuos pero en los tripomastigotes se obtienen finalmente oligosacáridos más procesados. 11. En epimastigotes y tripomastigotes de T. cruzi se investigó la presencia de oligosacáridos tipo complejo en glicoproteínas. La detección de restos de galactosa en el material resistente a la enzima endo-β-N-acetilglucosaminidasa H y a la β-eliminación indica que existen oligosacáridos complejos en ambas formas del parásito. Los resultados obtenidos aportan nuevos conocimientos acerca del mecanismode N-glicosilación de proteínas en tripanosomátidos y permitencomprender varias de las peculiaridades que este presenta. Al mismo tiempo se han formulado especulaciones evolutivas que permitirían explicar la síntesis de derivados de dolicol-P-P truncados en ciertos tripanosomátidos.

Descripción: La degradación de proteínas mediada por el sistema ubiquitina/proteasoma es un mecanismo de control de la abundancia de proteínas específicas dentro de la célula. Muchas proteínas son marcadas para su degradación por una familia de E3 ubiquitin-ligasas multiméricas, denominadas complejos SCF. Estos complejos están compuestos por tres polipéptidos constantes – Skp1, Cdc53/Cul1, Rbx1/Hrt1 – y un cuarto componente variable, la proteína adaptadora con motivo F-box. Utilizando el sistema del doble híbrido de levaduras, como así también ensayos de interacción in vitro, hemos identificado por primera vez a los componentes del núcleo invariante de los complejos SCF en la mosca de la fruta Drosophila melanogaster. Mediante experimentos de complementación funcional en S.cerevisiae demostramos que la proteína Rbx1 de Drosophila puede restaurar la viabilidad de mutantes hrt1 de levaduras, indicando que los complejos SCF están funcionalmente conservados en la evolución. Slimb es una proteína de Drosophila con motivo F-box, que cumple distintas funciones en el desarrollo y la fisiología celular. En esta tesis, hemos analizado la función de Slimb durante la ovogénesis de Drosophila. Demostramos que la pérdida de función de Slimb en la línea germinal provoca una reducción en los niveles de dE2F2 y Dp, lo cual se correlaciona con alteraciones en la regulación de los ciclos mitóticos durante la formación del cisto, con anomalías en la endorreplicación del genoma de las células nodrizas y con defectos en el vertido del contenido del citoplasma de las células nodrizas dentro del ovocito. Nuestros resultados sugieren que Slimb regula indirectamente los niveles de E2F2 y Dp, controlando de esta manera el desarrollo del cisto. Por otro lado, la generación de clones mutantes slimb en la línea somática del ovario dio lugar a la aparición de alteraciones en la morfología del germario y a defectos en la encapsulación del cisto por parte del epitelio folicular. Asimismo, ovarios con clones somáticos slimb exhibieron retrasos en la diferenciación del epitelio folicular, lo cual se correlacionó con la aparición de células polares ectópicas, falta de tallos interfoliculares y deslocalización del ovocito dentro del folículo. Encontramos también que en la ovogénesis media, Slimb se necesita en el epitelio folicular para especificar a las células foliculares que darán origen a los apéndices dorsales. La hiperactivación débil de la vía de Dpp dio lugar a la aparición de fenotipos semejantes a los de pérdida de función de slimb, los cuales fueron totalmente suprimidos cuando se sobre-expresó la proteína Slimb simultáneamente con Dpp. Significativamente, en ovarios con clones slimb se observó la expresión ectópica del gen Broad-Complex y del reportero transcripcional dad-LacZ, como así también una acumulación anormal de la proteína co-Smad, Medea. Proponemos que Slimb normalmente regula negativamente a la vía de Dpp, destinando a degradación a la proteína Medea. Finalmente, proporcionamos evidencias de que Slimb interacciona genéticamente con componentes y con reguladores de los complejos SCF, sugiriendo que Slimb funciona como subunidad adaptadora de este complejo en el ovario de Drosophila.

Descripción: El autismo representa un desorden severo del desarrollo neural caracterizado por un impedimento sostenido en la interacción social y en la comunicación, y por patrones de comportamiento estereotipados o restrictivos. Los síntomas inician típicamente durante la infancia, manifestándose completamente alrededor de los 5 años de vida, y tienden a perdurar hasta la adultez. Se han propuesto distintas causas del autismo, tanto genéticas como ambientales, sin embargo a la fecha no se ha podido identificar un único factor etiológico ni caracterizar los mecanismos patofisiológicos del síndrome. Por otro lado, si bien se han hecho grandes avances en el tratamiento del autismo, todavía no existen tratamientos efectivos para todos los casos y se desconocen los mecanismos mediante los cuales actúan aquellos que se utilizan. No obstante, es extensa la evidencia científica que ha estudiado los efectos beneficiosos que tiene el tratamiento postnatal con ambientes enriquecidos, los cuales contienen múltiples oportunidades de exploración y estimulación, tanto en pacientes humanos como en modelos animales. En esta tesis, se utilizó el modelo animal de autismo por exposición prenatal al ácido valproico (VPA) para estudiar el efecto de las interacciones sociales, un componente específico del ambiente enriquecido, sobre las alteraciones en la sociabilidad del modelo. De manera interesante, el tratamiento con estimulación social entre el destete y la adultez de animales tratados prenatalmente con VPA resultó en un aumento en los niveles de sociabilidad. Para dilucidar cuál es el mecanismo mediante el cual la estimulación social revierte el fenotipo conductual, se estudió el efecto de la estimulación social temprana sobre el sistema nervioso central, a través de dos enfoques: un análisis no sesgado de la actividad cerebral a nivel basal y frente a estímulos sociales, y un análisis sobre algunas de las alteraciones fisiológicas previamente reportadas en la bibliografía tales como el estado neuroinflamatorio, la función del eje hipotálamo-pituitaria-adrenal y el estado de la sinapsis excitatoria en regiones del sistema nervioso central relevantes para el autismo, como lo son el hipocampo y el cerebelo. El análisis sobre la actividad basal reveló que la exposición prenatal a VPA resulta en alteraciones en los niveles de actividad en la corteza piriforme, las cuales no se evidenciaron en los animales también tratados prenatalmente con VPA, pero estimulados socialmente. La corteza piriforme está involucrada en múltiples mecanismos de procesamiento de la información olfativa, entre los que se destacan la integración de la información proveniente del bulbo olfatorio y la capacidad de discriminar olores. Curiosamente, la exposición prenatal a VPA resultó en una incorrecta discriminación de olores sociales en la adultez, lo cual también fue revertido por la estimulación social temprana. Por otro lado, no se encontraron alteraciones provocadas por la exposición prenatal a VPA en las funciones neuroinflamatoria y del eje hipotálamo-hipófisis-adrenal, así como tampoco en el estado de la sinapsis excitatoria. En su conjunto, nuestros resultados sugieren que las alteraciones en la sociabilidad podrían estar relacionadas con un incorrecto procesamiento de los estímulos sociales, asociado a alteraciones en la función de la corteza piriforme, y que la exposición a estímulos sociales durante etapas críticas del desarrollo podría revertir estas alteraciones funcionales, dando como resultado una mejor performance en comportamientos sociales adultos. Nuestro estudio contribuye a la caracterización de los cambios celulares y moleculares que se correlacionan con la reducción de la sociabilidad observada en animales prenatalmente expuestos a VPA. Además, demuestra que los déficits en la interacción social pueden ser rescatados por la exposición temprana a estímulos sociales. Este hallazgo da una ventaja adicional a nuestro modelo, ya que los mecanismos celulares y moleculares identificados pueden ser utilizados en el futuro para el estudio de nuevos tratamientos para la enfermedad.

Descripción: Las similitudes morfológicas y fenotípicas entre los carcinomas mamarios más frecuentesen mujeres (carcinomas ductales, positivos para los receptores de estrógenos (ER) y progesterona (PR)), y el modelo de carcinomas mamarios murinos inducidos con acetato demedroxiprogesterona (MPA), hacen de este modelo una herramienta útil para estudiar losmecanismos celulares asociados al tratamiento antitumoral con agentes endocrinos (antagonistasdel ER y PR), e inhibidores de quinasas, entre otros. En este trabajo de Tesis hemos evaluado en el modelo de carcinomas mamarios inducidoscon MPA, mecanismos tempranos de regresión tumoral asociados al tratamiento endocrino con elantiprogestágeno mifepristona (MFP) y el inhibidor de PI3K wortmanin (WORT). En vista de laevidencia clínica actual, que demuestra que la combinación de agentes endocrinos e inhibidoresde la vía PI3K/Akt resulta beneficiosa para el tratamiento adyuvante de pacientes con tumores ERy PR positivos, y de los estudios que señalan a los antiprogestágenos como una terapia válidapara el tratamiento del cáncer de mama, creemos que este trabajo resulta valioso ya queconstituye el primer estudio realizado en un modelo experimental de cáncer de mama en donde seevalúan los efectos de la terapia combinada de antiprogestágenos e inhibidores de PI3K. Analizando variantes tumorales que representan distintos estadios dentro de la progresióndel cáncer de mama (desde la hormono-dependencia a la resistencia endocrina), comprobamosque los agentes MFP y WORT poseen mecanismos diferenciales de acción, tanto en elparénquima como en el estroma tumoral. Dichos mecanismos posibilitan en ciertas variantes quela combinación de ambos sea más efectiva que el tratamiento con cada droga por separado, y queen otras variantes, en cambio, la combinación no sea beneficiosa. De acuerdo a la crecienteimportancia que ha adquirido el microambiente tumoral tanto en la regulación del crecimiento delos tumores como en la respuesta a las terapias, demostramos que en algunas de las variantesanalizadas el estroma tumoral juega un papel activo durante la regresión inducida por eltratamiento endocrino y por la inhibición de PI3K. Los resultados obtenidos en el modeloexperimental plantean la posibilidad de que la expansión del compartimiento estromal que seasocia tempranamente con la regresión de los tumores (fenómeno definido como reacciónestromal), actúe como un indicador de la eficacia de la terapia antitumoral utilizada. Hemos demostrado también que el modelo de cultivo tridimensional en Matrigel es unaherramienta eficaz para evaluar in vitro la sensibilidad diferencial de las células epitelialesderivadas de las variantes tumorales a los distintos agentes ensayados, lo que apoya el uso de este sistema para predecir el comportamiento de las células neoplásicas frente a distintoscompuestos antitumorales. En conclusión, los resultados obtenidos en este trabajo de Tesis contribuyen al estudio dela terapia endocrina del cáncer de mama, presentando evidencia que se suma a los trabajos queplantean el uso de los antiprogestágenos en el tratamiento de esta patología, y demostrando porprimera vez el beneficio potencial, para determinado grupo de tumores, de una terapia combinadade antiprogestágenos con inhibidores de vías de señalización como la vía PI3K/Akt.

Descripción: En Argentina, la podredumbre húmeda del capítulo, causada por el patógeno necrotrófico Sclerotinia sclerotiorum, es una enfermedad que provoca serias mermas en la producción y tiene una incidencia anual promedio sobre la producción de la pampa húmeda del 10-20%. Los síntomas de la enfermedad se manifiestan al final de la etapa de floración o durante el llenado de granos por lesiones en el receptáculo que pueden extenderse y afectar todo el capítulo, produciendo la caída del mismo. En estados avanzados de podredumbre, se forman esclerocios, estructuras de resistencia del hongo, que pueden permanecer en los tejidos o en suelo y mantenerse viables por más de 8 años constituyendo el inóculo para futuras infecciones. La resistencia a Sclerotinia sclerotiorum en girasol es compleja, habiéndose detectado varios loci de carácter cuantitativo (QTL) específicos de línea, órganos y condiciones ambientales de crecimiento. Dicha complejidad ha limitado el desarrollo de germoplasma resistente por medio del mejoramiento clásico, reforzando la necesidad de la utilización de herramientas genómicas que incluyan tanto marcadores neutros para el mapeo de QTL como el desarrollo de marcadores funcionales desarrollados sobre genes candidatos para la resistencia al patógeno. El conocimiento de los factores determinantes de la patogénesis y las respuestas de defensa del hospedante constituyen factores claves para la identificación de dichos genes candidatos. Uno de los aspectos más destacados del mecanismo de invasión de S. sclerotiorum es la degradación de la pared celular, siendo el ácido oxálico producido por el patógeno uno de los determinantes de la patogénesis, a través de la acidificación y el secuestro de Ca^2+ de la pared celular del tejido hospedante. Asimismo, el ácido oxálico ejerce una regulación dual de la producción de especies reactivas de oxigeno (ROS). Por un lado, en los primeros estadios de la infección el ácido oxálico induce la generación de ROS y la inducción de una muerte celular programada (PCD) en una marera dependiente del pH generando un ambiente favorable para el desarrollo del patógeno, la adquisición de nutrientes y el establecimiento de la relación necrotrófica. Por el otro lado a medida que la infección progresa y al ácido oxálico se acumula en los tejidos del hospedante, el pH disminuye acompañado de la inhibición del estallido oxidativo y la PDC provocando así la muerte celular pero de una manera necrotrófica. En el presente trabajo se abordó el análisis del perfil metabólico primario, el perfil transcripcional de genes candidatos y los perfiles hormonales de dos líneas de girasol con comportamiento contrastante frente a la infección producida por S. sclerotiorum (HA 89 susceptible y RHA801 moderadamente resistente). Aplicando un método de estudio de perfiles metabólicos basado en la técnica de GC/MS, fue posible detectar diferentes patrones involucrando 63 metabolitos entre ellos azucares, aminoácidos, ácidos orgánicos, ácidos grasos y algunos metabolitos secundarios en flores de girasol que constituyen el órgano principal de infección de este patógeno. Los análisis estadísticos paramétricos y multivariados mostraron diferencias metabólicas entre estos dos líneas, así como también efectos de interacción entre línea y los días post inoculación. Los análisis de correlación de redes sugieren que estos cambios metabólicos están sincronizados en una manera dependiente del tiempo en respuesta al patógeno. Se detectaron mayor cantidad de cambios metabólicos diferenciales en la línea susceptible que en la resistente, esto se evidencia en el mayor número de interconexiones que presenta la línea susceptible entre los módulos de metabolitos formados por compuestos pertenecientes a las mismas vías. Por otro lado, la línea resistente muestra mayor interconexión entre metabolitos pertenecientes a las mismas vías. La evaluación de estos datos también demuestra una regulación línea específica de las distintas vías metabólicas, sugiriendo la importancia de detección de patrones metabólicos, en lugar de cambios específicos de metabolitos individuales, cuando se buscan marcadores metabólicos que responden diferencialmente a la infección der patógenos. Por otra parte el análisis de patrones de actividad de enzimas claves del metabolismo primario del carbono (sacarosa sintasa y las invertasas de pared celular, citológica y vacuolar), foto-respiración (catalasa) y del metabolismo de los fenilpropanoides (fenilalanina-amonio-liasa-PAL), mostró también diferencias entre líneas a tiempos tempranos del proceso de infección. La actividad catalasa presentó un aumento significativo en la línea resistente, que indicaría una regulación diferencial de la fotorespiración frente a la infección del patógeno, disminuyendo el nivel de ROS. Para la identificación de nuevos genes candidatos involucrados en la resistencia a este patógeno se construyeron colecciones de ADNc basadas en la técnica SSH de flores de girasol inoculadas y no inoculadas a partir de una línea resistente a los 2 y 4 días post inoculación. Esta estrategia dio como resultado la obtención de secuencias diferencialmente expresadas entre las flores inoculadas y no inoculadas. La mayoría de estos genes están involucrados en los procesos de traducción de proteínas, en los procesos de óxido reducción entre los cuales se encuentra un gran número de genes de respuesta a estreses biótico y abiótico, numerosos genes involucrados en el metabolismo primario. Del mismo modo, también se detectó un alto porcentaje de secuencias sin similitud con secuencias disponibles en bases de datos, sugiriendo que podrían codificar para genes no descriptos previamente, involucrados en la respuesta del girasol frente a este patógeno. De las clonotecas generadas se seleccionó un conjunto de genes para validar su comportamiento por qRT-PCR. De este conjunto, los genes quitinasa, un elemento de respuesta a etileno y el factor de transcripción WRKY7 mostraron patrones de expresión diferenciales entre las muestras inoculadas y controles a los distintos días post inoculación, sugiriendo que estos genes se encuentran involucrados en la respuesta del girasol frente a S. sclerotiorum. Asimismo se identificó un número importante de genes asociados a defensa a patógenos que se expresan en altos niveles en flores de girasol de la línea resistente aún en condiciones control, sin inoculación con el patógeno. Se estudiaron los perfiles hormonales para el ácido salicílico y para el ácido jasmónico por medio de la técnica LC-ESI-MS/MS. Estos estudios corroboraron que el ácido salicílico no contribuye a la resistencia contra S. sclerotiorum y que además se acumula en los tejidos infectados por este hongo, particularmente en la línea susceptible. A su vez, estos estudios demostraron que el jasmónico estaría asociado a la resistencia frente a este patógeno en las flores de girasol de la línea resistente. La integración del análisis de perfiles metabólicos, transcripcionales y perfiles hormonales contribuyó a una mejor comprensión de los cambios en el metabolismo en los capítulos de girasol durante los primeros estadios de la infección facilitando la identificación de genes y vías metabólicas involucradas en la respuesta al patógeno necrotrófico S. sclerotiorum. Asimismo la identificación de cambios en perfiles metabólicos y transcripcionales de genes candidatos, entre líneas resistentes y susceptibles, posibilita el desarrollo de biomarcadores metabólicos y marcadores funcionales para su aplicación en el mejoramiento asistido del cultivo de girasol.

Descripción: El receptor huérfano de tipo tirosina quinasa, ROR1, se expresa y cumple diversas funcionesdurante el desarrollo embrionario, mientras que en la adultez, su expresión en los tejidosnormales es baja o nula. Sin embargo, se ha descripto que ROR1 se expresa abundantementeen diversos tipos de tumores y leucemias. A su vez, ROR1 actúa como un receptor celular de Wnt5a, un ligando extracelular que ha sido implicado en la tumorigénesis. Es por esto quedecidimos determinar la expresión y participación de ROR1 en los procesos celulares ymoleculares implicados en la progresión de melanoma. Nuestros resultados indican que ROR1 se expresa en líneas celulares y muestras tumoralesde melanoma humano, y que su expresión se asocia con una menor sobrevida postrecurrenciade los pacientes. Empleando estrategias de pérdida y ganancia de funcióndeterminamos que ROR1 favorece el crecimiento celular, tanto de manera dependiente comoindependiente de un sustrato sólido. A su vez, ROR1 disminuye la adhesión y aumenta lamotilidad y migración de las células de melanoma. Estos procesos son mediados, en parte, através de la regulación positiva de la vía de Akt y del aumento de la expresión de losmarcadores mesenquimales N-cadherina y vimentina. La regulación de N-cadherina dependetanto de la presencia de ROR1 como de la activación de la vía de Akt. En conclusión,demostramos que ROR1 contribuye a la progresión de melanoma y constituye un posiblenuevo marcador pronóstico y blanco terapéutico.

Descripción: Fil: Bilenca, David Norberto. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Las inmunofilinas son una familia de proteínas que presentan un dominio con actividad peptidil-prolil-isomerasa (PPIasa); la mayoría de las cuales unen drogas inmunosupresoras. Dentro esta familia, se encuentran las FKBPs (FK506 Binding Proteins) que unen al macrólido FK506. Nuestro laboratorio demostró que FKBP-51 kDa (FKBP51) y FKBP-52 kDa (FKBP52) regulan antagónicamente la actividad transcripcional y localización subcelular de ciertos factores nucleares (NF-kappaB y receptores esteroides). El objetivo de esta tesis fue estudiar la regulación de las FKBPs sobre el complejo de factores de transcripción AP-1, particularmente sobre c-Fos y c-Jun, en células trofoblásticas (BeWo). Demostramos que FKBP52 favorece la activación sostenida de la quinasa ERK e incrementa la estabilidad proteica, la retención nuclear, la actividad transcripcional, la unión al ADN y los niveles de proteína de los miembros de AP-1. Por el contrario, la sobreexpresión de FKBP51 retrasa y disminuye la importación nuclear de c-Fos, como también inhibe la actividad transcripcional de AP-1. La contribución funcional del dominio PPIasa de ambas FKBPs resultó relevante en la modulación de AP-1. A nivel de los efectos biológicos de genes involucrados en placentación, y blancos de regulación de AP-1 y NF-kappaB, encontramos que FKBP52 aumenta los niveles de proteína de las metaloproteasas de la matriz (MMP-2 y MMP-9) e interleuquina 6 (IL-6). Asimismo, FKBP52 modula positivamente la actividad proteolítica de MMP-2. Mientras que FKBP51 reduce los niveles de proteína y la actividad gelatinasa de MMP-2. Finalmente, observamos que la Epigalocatequina Galato (EGCG, flavonoide presente en el té verde) actúa inhibiendo el efecto positivo de FKBP52 sobre la actividad de AP-1 y NF-kappaB . Los resultados de esta Tesis Doctoral demuestran que FKBP51 y FKBP52 regulan a los factores de transcripción de la familia AP-1. Esta regulación sería dependiente de la actividad PPIasa de estas FKBPs y ocurriría en forma antagónica . Más aún, postulamos que FKBP52 es un potencial blanco farmacológico de EGCG.

Descripción: Se han estudiado en detalle, por primera vez, los eventos moleculares más importantesresponsables de la histolisis de tejidos larvales durante la transición larva-adulto dedípteros. Se han descrípto, por primera vez en los insectos, proteinasas lisosomalesespecíficas de la histolisis y se ha correlacionado su actividad con la de otras enzimasdegradativas y con las imágenes de cambios anatómicos degenerativos en músculos ycuerpo graso. Los principales resultados obtenidos son: l. Se aisló una nueva aspartil-proteínasa de 43.000 daltons, específica de lahistolisis, denominada EMAP (Early metamorphosis aspartyl proteinase), concaracterísticas bioquímicas similares al grupo de las Catepsinas tipo D y cuyasecuencia amino terminal no presentó homología con este grupo. Usando lasecuencia correspondiente al N- terminal se obtuvo un transcripto que fueclonado y secuenciado. La secuencia obtenida mostró homología del 59% concatepsina D de porcino, 51% con una proteinasa aspártica de mosquito y 60%con una proteinasa aspártica de arroz. 2. Se aislaron dos nuevas cisteín proteínasas lisosomales denominadas MCP I y MCPII (metamorphosis cystein proteinase), de 32.000 y 67.000 daltonsrespectivamente. Ambas enzimas fueron caracterizadas bioquímicamente y susextremos amino terminales secuenciados. MCP I mostró característicasbioquímicas similares y alta homología N-terminal con las Catepsinas B demamíferos (55.5%) y con una cisteín proteinasa de la mosca Sarcophaga (44%). MCP II es una endoproteinasa de nuevo tipo, cuyo N-terminal no presentóhomología con ninguna cisteín proteinasa conocida en invenebrados, ni tampocoen vertebrados. 3. El perfil de actividad de las nuevas endopeptidasas coincidió con el de fosfatasaácida, β-glucosidasa y β-galactosidasa lisosomales y correlacionó estrechamentecon un marcado descenso en el contenido de proteínas registrado durante lasetapas tempranas de la metamorfosis. El incremento en la actividad de enzimas lisosomales coincidió temporalmente (entre 20³º y 48 h desde la inmovilización definitiva de la larva) con la apariciónde los primeros signos de muerte celular en los músculos y el cuerpo graso. 4. Es la primera vez que se describe en insectos el progreso temporal de lahistolisis del cuerpo graso larval. Se determinó que la degradación de éste es unproceso gradual, que se inicia a las 20³ºh cuando las células que forman una redse separan unas de otras y finaliza alrededor de las 120 h cuando gran parte delas mismas se han fragmentado. Se determinó que los músculos esqueléticos correspondientes a los segmentosanteriores (l a 5) se fragmentan a partir de las 22 h, mientras que loscorrespondientes a la región abdominal, lo hacen recién a partir de las 72 h. 5. Se encontró una estrecha correlación entre la degradación del cuerpo grasolarval y la depleción en el contenido de las principales moléculas de reserva. Cortes histológicos de cuerpo graso teñidos por PAS demostraron la completadesaparición del glucógeno en horarios posteriores a las 20³º h. El glucógeno fueconsumido principalmente durante la etapa de salto y dispersión de la larva,mientras que el remanente (14% del contenido original, de acuerdo a dosajedirecto) se consumió durante las primeras 20³ºh después de iniciada lametamorfosis. Los lípidos se consumieron principalmente a partir del estadiopupal (40 h), confirmando las imagenes histológicas obtenidas, donde se registróla disminución en el número y tamaño de las vesículas de grasa a partir de estehorario Los resultados alcanzados han permitido obtener un panorama integral de la progresiónde eventos degradativos durante la transición larva-adulto y mostraron por primera vez,que con muy pequeñas variantes, los eventos de la metamorfosis tienen idéntica duraciónrelativa y representan etapas equivalentes del ciclo de vida en todos los insectos dípteros.

Descripción: La biogénesis de estructuras complejas que contienen hidratos decarbono como el lipopolisacárido (LPS), los exopolisacáridos, elpeptidoglicano y los ácidos teicoicos en procariotas y las glicoproteínas eneucariotas se realiza generalmente a partir de precursores nucleótido-azúcaresque transfieren sus restos de azúcares a poliprenoles como elundecaprenol y el dolicol (Dol). Los nucleótido azúcares se encuentrannormalmente disponibles en el citoplasma, mientras que los poliprenolesestán asociados con una bicapa lipídica.Una vez ensamblados, los azúcaresunidos al poliprenol deben atravesar membranas para su posteriorprocesamiento (polimerización como en el caso del LPS o transferencia aproteínas como ocurre en la formación de glicoproteínas). Este proceso noocurre espontaneamente y parece estar mediado por proteinas, aunque sólopara el pasaje a través de Ia membrana interna procariótica de lassubunidades de antígeno O (el componente más variable del LPS) se haidentificado una proteína, denominada Wzx con actividad translocasa o “flipasa”. Las diferentes translocasas Wzx poseen una muy baja homología desecuencias tanto a nivel de DNA como de proteínas. Los intentos parasobreexpresar Wzx han sido infructuosos, lo que no ha permitido la realizaciónde experimentos tendientes a caracterizar estructural y mecanísticamente alas translocasas. En este trabajo se investigó si es necesario que las subunidades O sesinteticen completamente para poder ser translocadas. Se obtuvo unamutante en el gen glf, responsable de la síntesis de galactofuranosa, el últimode los cuatro azúcares que componen la subunidad O16 en Escherichia coli. Se observó que esta mutante es capaz de translocar una subunidadincompleta conteniendo sólo tres azúcares a través de la membrana. Experimentos utilizando la lectina del germen de trigo (WGA) permitieronestablecer que también es posible translocar una subunidad truncadaconteniendo sólo uno o dos residuos e incorporar estos azúcares al core del LPS. Experimentos de complementación realizados en una mutante de E.coli O7 en el gen wzx con translocasas de Salmonella enterica y E. coli O16demostraron que la translocación de subunidades de antígeno O esindependiente de la naturaleza química de la porción glicosídica de lasubunidad O. Por el contrario las putativas translocasas involucradas en lasíntesis de exopolisacáridos no fueron capaces de complementar la mutaciónen wzx. Los resultados presentados en esta Tesis indican que no se requiereque la subunidad O esté completa para que sea reconocida por la maquinariade translocación y se produzca su pasaje a través de la membrana, pudiendotranslocarse subunidades truncadas o completamente diferentes a las quenormalmente se producen en una determinada cepa. Los resultadosobtenidos sugieren además un modelo de biosíntesis de antígeno O queinvolucra el reconocimiento del prenol-oligosacárido por un hipotéticocomplejo compuesto por la putativa translocasa Wzx y otras proteínas queparticipan en la síntesis de antígeno O.

Descripción: En esta tesis se estudió la localización y dinámica de receptores glutamatérgicos tipo NMDA (NMDARs), y su relación con la memoria, en el cangrejo Neohelice granulata. Serealizó un esquema neuroanatómico de su sistema nervioso central (SNC), y se diseñaronmapas detallados de neuropilos y clusters neuronales del cerebro. Se evaluó la presencia ylocalización de NMDARs, realizando técnicas inmunohistoquímicas y ensayos de Westernblot. Se demostró que están ampliamente distribuidos, compuestos por subunidades tipo NR1 y NR2, y con distribución similar a proteínas de anclaje tipo PSD95. Se desarrolló unsistema estereotáxico, para realizar microinyecciones en áreas específicas del SNC,corroborándose con esta técnica el efecto del ácido iboténico sobre de los NMDARs. Luegose estudió la dinámica de NMDARs (tráfico) asociada a procesos mnésicos, demostrandocambios en la proporción entre receptores vesiculizados e insertos en membrana celular,después de un entrenamiento que genera una memoria de largo término. Al evocar estamemoria los cambios correlacionan con el grado de variación de respuesta de los animalesdurante el entrenamiento. Estos resultados sugieren la participación de NMDARs enprocesos mnésicos en este modelo, permitiendo establecer comparaciones con otrasespecies, y posibilitando el posterior análisis del tráfico de estos receptores en otras fasesde la memoria.

Descripción: Esta Tesis Doctoral se basa en la caracterización del RNA ribosomal 288 en los roedores del género Ctenomys. Hallamos que en lugar de estar formado por una única molécula de 4,4 kb, este RNA está fragmentado en dos moléculas de 2,6 y 1,8 kb. Estas dos especies se mantienen apareadas por complementariedad de bases intercatenaria formando Ia subunidad mayor ribosomal. Este fenómeno fue observado en todos los órganos estudiados excepto en testículo, cuyo rRNA muestra, además de los fragmentos, Ia molécula intacta del rRNA 288. Encontramos que al segmento DG(lugar físico que alberga el sitio de clivaje) del cDNA le falta un tracto de 106 nucleótidos que en Ia región genómica correspondiente se encuentra delimitada por una repetición directa de 9 bases. Además, dentro de este tracto se encuentra el sitio de fragmentación. Ensayos de protección a Ia nucleasa S1 demostraron que este segmento de expansión más corto existe en preparaciones de RNA total y el hecho de que las amplificaciones genómicas generen un único producto y que experimentos de Southern Blot muestren una única banda correspondiente al segmento de expansión DS nos condujo a la idea del splicing como mecanismo generador de la especie no clivada en testículo. A pesar de que intentamos reproducir la maduración del rRNA in vitro e in vivo y no lo conseguimos, el splicing sigue siendo el único mecanismo que puede explicar la aparición de más de un RNA maduro a partir de un único DNA molde. Parte de los resultados que aquí se muestran fueron publicados en: Melen GJ, Pesce CG, Rossi MS, KornblihttAR (1999). Novel processing in a mammalian nuclear 288 pre-rRNA: tissue-specific elimination of an “intron” bearing a hidden break site. EMBO J 18: 3107-3118.

Descripción: La familia de proteínas SR, ampliamente caracterizadas como reguladores del proceso de splicing, comparten una estructura modular conservada que consiste en uno o dos motivos de reconocimiento de RNA (RRMs) y un dominio rico en Serinas-Argininas. Hoy sabemos que algunos miembros de esta familia, y en particular SRSF1, están involucrados en una amplia variedad de funciones regulatorias a diferentes niveles de la expresión genética. Trabajos previos de nuestro laboratorio identificaron una nueva función para el factor de splicing SRSF1 como regulador de la conjugación del péptido SUMO a diferentes proteínas blanco o “SUMOilación”. Esta modificación post traduccional involucra una cascada enzimática que se asemeja a la de Ubiquitina, con la particularidad de que para ésta se han reportado una cantidad muy limitada de factores involucrados. El hallazgo de nuevas formas de regulación de la conjugación de SUMO es fundamental para comprender cómo se comporta esta modificación post-traducional de proteínas y cuál es su relevancia para el funcionamiento celular. Esta tesis estuvo orientada a comprender los mecanismos por los cuales SRSF1 es capaz de favorecer la SUMOilación de ciertos sustratos en células de mamífero en cultivo. Con el fin de desacoplar las diversas actividades de SRSF1, hemos trabajado con distintas versiones mutantes de dicha proteína, algunas obtenidas de otros laboratorios y otras desarrolladas en el nuestro. Se validaron estas variantes en su capacidad de regular el splicing alternativo, así como en múltiples aspectos de su localización subcelular. Una vez analizadas en estos rasgos, las diferentes versiones de SRSF1 fueron probadas en ensayos de SUMOilación (global y sustrato-específica), interacciones proteína-proteína, regulación de estabilidad proteica y del RNA, y unión al RNA. Descartamos que el mecanismo involucre algunos aspectos característicos de proteínas que regulan la SUMOilación, como la presencia de sitios de interacción con SUMO (SIM), o la propia conjugación de SRSF1 a este péptido. Detectamos dos variantes de SRSF1 (SRSF1 W134A y SRSF1 NRS) incapaces de estimular la conjugación de SUMO a nivel global. Estos datos, conjuntamente con información preexistente sobre dichas variantes, sugerirían una dependencia de la unión al RNA y de la localización celular en el mecanismo de acción estudiado. Sin embargo, otra de las mutantes utilizadas (SRSF1 FFDD), para la cual se había reportado una pérdida en su capacidad de interaccionar con el RNA, mostró efectos exacerbados en la regulación de la SUMOilación, poniendo en duda esta hipótesis así como también algunos datos bibliográficos. Los hallazgos obtenidos abren múltiples panoramas posibles y generan inquietantes preguntas, no sólo sobre el rol de este factor en la regulación de la SUMOilación, sino también en la caracterización funcional de sus distintos dominios que hacen de SRSF1 una proteína multifacética.

Descripción: Esta Tesis se enfoca en las manifestaciones geotermales del Valle del Cura, ubicado a los 29,5°S y 69,5°O en la Cordillera Frontal de los Andes y sobre el segmento de subducciónsubhorizontal pampeano-chileno. Se realizó un estudio de prospección geotérmica que incluyómétodos geofísicos (especialmente magnetotelúrica), análisis de la composición química eisotópica de fluidos (fase liquida y gaseosa), modelado geoquímico de los fluidos termalesprofundos, mediciones de gases en suelos, dataciones radiocarbono, análisis morfoestructural ygeomorfológico, litoestratigráfico mediante testigos de pozos y de isotermas locales. Se pudocaracterizar los reservorios, zona de recarga y surgencia, tipo de fluidos, procesos profundos ycontroles principales y con los resultados integrados al contexto geológico-estructural seconfeccionó un modelo conceptual de un sistema geotermal que incluyo su variabilidad espacialy clasificación. Los fluidos termales en Valle del Cura son de origen meteórico y el principalaporte proviene del deshielo (según δ18O, δD y Tritio). Las zonas de recarga tienen un fuertecontrol estructural-litoestratigráfico y la infiltración puede ser somera o hasta niveles basales dela cuenca (anomalía conductiva identificada a 5 km de profundidad infiere la presencia desalmueras), activando un sistema de circulación profunda conductivo-dominado. El reservorioestá constituido por rocas volcaniclásticas del Grupo Choiyoi, es del tipo líquido-dominado y sutemperatura alcanza los 180°C y hacia el sur de Despoblados experimenta un incremento en suprofundidad, en la fugacidad de CO2 y una disminución de la permeabilidad. Los modelosmagnetotelúricos muestran imágenes de la geometría de las zonas de surgencia: están controladaspor estructuras permeables enraizadas en la corteza que actúan como conductos de circulación defluidos termales profundos hasta niveles superficiales fríos. Durante el ascenso, los fluidostermales interactúan con acuíferos someros saturados en componentes atmosféricas a partir deprocesos de mezcla, dilución y precipitación de fases minerales (más intensamente en Gollete y Bañitos). Los fluidos termales que alcanzan la superficie descargan aguas cloruradas sódicas conpH neutro y forman manantiales, suelos calcretizados y terrazas de travertino. Los manantialesestán comúnmente asociados a intensa emanación de gases (principalmente CO2; mayor a 96%) y sedestaca la ausencia de vapor de agua (por enfriamiento conductivo durante el ascenso) y deespecies acidas en general (p.ej. H2S). Se propone la existencia de una anomalía térmica que activala convección local, posiblemente vinculada a cuerpos subvolcánicos recientes con característicassimilares a los emplazados en Despoblados durante el Cuaternario. La magnitud del flujo de CO2,de He y de actividad de Rn es consistente con sistemas convectivos-volcánicos. Además, el aportede CO2 magmático al sistema geotermal fue confirmado con las composiciones isotópicas del Carbono y del Helio de las manifestaciones termales de Valle del Cura (δ13C ~-6‰ vs. PDB y R/Ra~1,45). La permeabilidad efectiva y el gradiente térmico local controlan selectivamente eldominio de la convección térmica sobre la conducción térmica de las áreas termales estudiadas. La dinámica del sistema es más intensa en Despoblados (mayor complejidad estructural, relacióne interacción fluido-roca, temperatura del reservorio y aguas menos evolucionadas, con menorshift de δ18O y un reservorio más superficial) que en Gollete y Bañitos. El área de Bañitos esconsiderada una posición distal del sistema convectivo y no se descartan celdas de circulación defluidos parcialmente compartimentalizadas por los lineamientos N120° del basamento. Lascaracterísticas químicas de los fluidos termales y del reservorio son típicas de un sistemageotermal evolucionado –maduro- y consistentes con un cuerpo magmático desgasado queoriginó la anomalía térmica. La neotectónica regional moderada asegura un ambiente geológicoestructuraly magmático suficientemente activo para imponer una evolución del sistemageotermal mediante pulsos de actividad. Como conclusión, el sistema geotermal de Valle del Curaestá caracterizado por a) una leve anomalía térmica local que vigoriza una convección tenuesobreimpuesta al sistema termal conductivo-dominado, b) reservorios de media a alta entalpía,líquido-dominados y por debajo de los 800 m de profundidad y c) una dinámica modulada por lapermeabilidad efectiva y por la cercanía a la anomalía térmica, con mayor intensidad en Despoblados y que se atenúa hacia el sur. En general, se comprobó que un sistema de fallasenraizados en niveles corticales medios que favorecen la infiltración de agua en profundidadsumado a pequeñas anomalías térmicas vinculadas a la actividad magmática modulada por laneotectónica pueden generar sistemas hidrotermales profundos y sistemas geotermales de altaentalpía. Por consiguiente, el ejemplo del sistema geotermal de Valle del Cura fuerza a reevaluarel potencial geotérmico de los segmentos de subducción subhorizontal actuales, hasta el momentoconsiderado de baja entalpía-conducción-dominados, y abre nuevas perspectivas en laexploración de estos recursos a lo largo de los Andes en zonas previamente desestimadas.

Descripción: Los prolactinomas son tumores benignos que en general responden bien al tratamiento con agentes dopaminérgicos. Sin embargo alrededor del 15% de estos tumores son resistentes y aún no existen terapias médicas alternativas. TGF-β1 es un inhibidor de las funciones del lactotropo, y un intermediario de la inhibición que ejerce la dopamina, por lo tanto, resulta un candidato atractivo como blanco terapéutico para prolactinomas resistentes. El objetivo de la presente tesis fue caracterizar el sistema TGF-β1 hipofisario y la regulación de sus componentes, incluyendo los niveles de citoquina total y activa, sus proteínas de latencia (LTBPs) y activadores locales, para evaluar su posible utilidad para el desarrollo de nuevas terapias. Utilizamos dos modelos experimentales de prolactinomas: 1) ratones hembra con mutación nula del receptor dopaminérgico D2 (Drd2-/-); y 2) ratas tratadas crónicamente con estrógenos. Nuestros resultados demuestran que el sistema TGF-β1 se encuentra inhibido en las hipófisis tumorales de ambos modelos. Describimos por primera vez en la literatura una regulación diferencial de los niveles de TGF-β1 activo hipofisario por dopamina y estrógenos que podría explicar en parte las diferencias sexuales en la formación de prolactinomas. Determinamos la expresión de las tres isoformas de LTBPs capaces de unir TGF-β1, y su regulación frente a estímulos con estrógenos y agentes dopaminérgicos. Por último, identificamos a trombospondina 1 (TSP1) y calicreína 1 (KLK1) como posibles activadores de TGF-β1 a nivel local. Asimismo, ensayamos la eficacia de un tratamiento con péptidos análogos de TSP1 (ABT-510 y ABT-898) en el modelo de ratas estrogenizadas. Este tratamiento logró disminuir los niveles de prolactina sérica y el tamaño hipofisario incrementados por los estrógenos. Nuestro estudio contribuye al conocimiento del sistema TGF-β1 hipofisario y su regulación local. Siendo TGF-β1 un inhibidor de la función del lactotropo, proponemos que la restauración de su actividad local podría ser efectiva para frenar el crecimiento de prolactinomas resistentes a los tratamientos clásicos.

Descripción: En este trabajo analizamos el rol de TGF-β en la progresión tumoral, empleando dosmodelos de adenocarcinoma murino, de mama y de pulmón. Nuestro modelo de tumor de mama está constituido por los tumores parentales M3 y MM3, poco y altamente metastásicos, respectivamente, y por las lineas celulares derivadas LM3y LMM3, altamente invasivas y metastásicas. Todas las células de nuestro modelo expresan elsistema completo TGF-β y sus receptores específicos TβRs, y éste es funcional. Además, mediante estudios in vitro determinamos que TGF-β activa la vía detransducción de señales Smads y otras vias, como p38Mapk y MEK/ERK, en las células decarcinoma de mama de nuestro modelo. En cuanto a su acción biológica, TGF-β tiene un efectoantiproliferativo sobre los cultivos primarios de M3 y MM3, mientras que las líneas sonresistentes a dicho efecto. Por otra parte, TGF-β induce la actividad de MMP-9 en todas lascélulas de nuestro modelo. Determinamos por primera vez que las vías de señalización p38Mapky MEK/ERK bloquean la inducción de MMP-9 por TGF-β y que los receptores de señalización TβRI y TβRII son esenciales en esta respuesta. Además, estudiamos el rol de TGF-β sobre laexpresión y/o actividad de distintos componentes del sistema de activación del plasminógeno,incluyendo activadores como el uPA y el uPA unido a membrana, e inhibidores como PAI-1. Detectamos que TGF-β inhibe el balance neto de este sistema en las células poco metastásicas,mientras que lo estimula en las células de fenotipo más agresivo. Por otro lado, analizamos la función de TGF-β en la reorganización del citoesqueleto deacfina y determinamos que TGF-β no modula las tropomiosinas ni la proteina HSP27, moléculasrelacionadas con actina. Sin embargo, demostramos por primera vez que la actividad delcomplejo Arp2/3, fundamental en la polimerización de actina, aumenta en respuesta a TGF-β,sibien su consecuencia biológica debe aún esclarecerse mediante otros estudios. Además, TGF-βinduce una leve remodelación de la actina cortical en nuestro modelo, sin producir cambiosfenotípicos como la formación de fibras de stress y la transición epitelio-mesenquimática comoocurre en sistemas epiteliales no-tumorigénicos. Asimismo, determinamos que la via deseñaligación MEK/ERK bloquea la formación de fibras de stress en las células tumorales enestudio y que además está involucrada en la inducción de la migración celular por TGF-β, juntocon la vía p38Mapk. Por otra parte, TGF-β estimula la capacidad invasiva in vitro de todas las células denuestro modelo de tumor de mama. Observamos que la presencia de TβRI y TβRII funcionales,así como las vías de señalización p38Mapk y MEK/ERK, son esenciales en este proceso. Estosdatos son muy novedosos, ya que no ha sido descripto previamente un mecanismo de acción de TGF-β en la invasión celular. Mediante estudios in vivo determinamos que TGF-β no modula la capacidad angiogénicaen nuestro modelo. Por otro lado, empleando células LM3 transfectadas con formas dominantesnegativas de los receptores de señalización de TGF-β, encontramos que la tasa de crecimientotumoral y la capacidad metastásica de las células de adenocarcinoma mamario en estudiodependen de un sistema funcional TGF-β/TβRs. Por otro lado, estudiamos el sistema TGF-β/TβRs en la línea de adenocarcinoma depulmón LP07, altamente metastásica. Encontramos que estas células han perdido la capacidad de expresar la proteina TGF-β,respecto del tumor P07 que le dio origen. Además, determinamos que las células LP07 expresanlos receptores de señalización TβRI y TβRII. Por medio de estudios in vitro detectamos que si bien las células LP07 no producen TGF-β, la via de Smads y otras vías de transducción de señales pueden ser activadas por TGF-β, por lo que son capaces de responder a la citoquina. Así, TGF-β es un potente inhibidor delcrecimiento de LP07. Además, TGF-β inhibe marcadamente la actividad de las proteasas uPA y MMP-2 en las células LPO7 y controla su motilidad in vitro. Y también es capaz de inhibir laangiogénesis in vivo de LP07. De este modo, nuestros resultados indican que TGF-β podría funcionar como unsupresor tumoral en nuestro modelo de adenocarcinoma de pulmón, y que la pérdida defuncionalidad del sistema TGF-β/TβRs podria contribuir a la progresión tumoral en estas células.

Descripción: La obtención natural o artificial de mutantes es una propiedad común a todos los virus. Estas mutantes se pueden caracterizar por su sensibilidad a la tenperatura, por su patogenicidad en diferentes animales, por su especificidad hacia un determinado huésped, etc.. Cepas atenuadas aisladas en distintos sistemas virales han sido utilizadas como agentes vacunantes con resultados muy alentadores. Actualmente, se están empleando en Venezuela cepas de virus de la fiebre aftosa atenuadas para bovinos en la producción de vacunas. Estas cepas han sido utilizadas teniendo en cuenta su bajo grado de patogenicidad y alta calidad inmunogénica. Sin embargo, el criterio por el cual fueron seleccionadas es altamente empírico ya que se conoce muy poco acerca del mecanismo de atenuación. Principalmente, habian sido estudiadas en cuanto a sus caracteristicas biológicas de multiplicación respecto de las cepas virulentas. En base a lo previamente expuesto, se plantearon los siguientes objetivos para este tema de tesis: 1°) El estudio de los factores celulares y/o virales que influyen en el mecanismo de atenuación. 2°) Las caracteristicas inhibitorias de la multiplicación del virus salvaje por las cepas atenuadas. Estos objetivos fueron enfocados a traves de tres puntos principales: - Caracterización biológica del virus atenuado (infecciosidad, ciclo de multiplicación, etc.). - Caracterización de la interferencia por el virus atenuado en la multiplicación del virus salvaje. - Caracterización fisiquuímica del virus atenuado y de sus componentes (coeficiente de sedimentación, densidad, análisis de su genoma).

Descripción: Fil: da Cruz Cabral, Lucía. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Se estudian aspectos globales en espaciotiempos no triviales a partirde la autointeracción electromagnética de una carga puntual q. Lasgeometrías de fondo tienen simetría esférica o cilíndrica y se construyencon una cáscara delgada de materia, de forma tal que presentanuna o dos regiones asintóticas. Se resuelven las ecuaciones de Maxwellelectrostáticas y se renormaliza el potencial en la posición de la cargapara obtener su autointeracción. La fuerza electrostática sobre la cargapuntual q, medible por un observador local, manifiesta propiedadestopológicas y geométricas del espaciotiempo de fondo. Los resultadosse analizan en función de la curvatura espacial κ± de la superficie dela cáscara embebida (codificada en del tensor de curvatura extrínseca Κ±ij ), y de la topología de la variedad. Los espaciotiempos esféricos se construyen con métricas de Schwarzschild,y para los cilíndricos se usan métricas cónicas obtenidas de lageometría de una cuerda cósmica local. Se asocia la desviación del campoelectrostático al salto de la curvatura espacial κ sobre la cáscara, yse caracteriza el potencial de la carga q a partir de la topología y elefecto que produce la curvatura de la cáscara. En los casos con unaregión asintótica, la autofuerza sobre q cerca de la cáscara se vuelveatractiva si κ > 0, o repulsiva si κ < 0. Los espaciotiempos con dosregiones asintóticas (agujeros de gusano) tienen κwh > 0, correspondiendoa gargantas de materia exótica. El efecto cerca de la gargantaes atractivo excepto en configuraciones esféricas con radio de la cáscarar0 menor al de las órbitas fotónicas de las geometrías de Schwarzschild. En variedades esféricas con dos regiones asintóticas se identifica a lagarganta con una carga imagen neta (ver fórmula en el contenido del pdf) vista desdela región donde se encuentra la partícula con carga q y posición rt´. A losefectos de la autointeracción ésta representa una fuerza de orden r´−3asintóticamente. En los casos cilíndrico se encuentra (ver fórmula en el contenido del pdf)asociada a una distribución superficial de carga imagen que dependede la posición r´. Esta carga caracteriza la variación del flujo asintóticodel campo eléctrico que genera la carga q.

Descripción: Fil: Coso, Omar Adrián. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: El estudio de la corteza insular (CI) es de gran interés en las neurociencias contemporáneas por su participación en múltiples procesos perceptuales, afectivos y cognitivos. Un marco teórico integrador para la comprensión de estos procesos es el estudio de la interocepción y el monitoreo cognitivo. Ambos involucran la percepción y supervisión, tanto del estado corporal como de procesos cognitivos de alto orden respectivamente, y tienen bases funcionales y neuroanatómicas asociadas con la CI. En particular, los déficits en el procesamiento interoceptivo podrían relacionarse con fallas en el monitoreo, y ambos estarían vinculados con un procesamiento insular afectado. De hecho, la CI también se vincula con procesos de autoevaluación y de detección consciente de errores, habilidades necesarias para un monitoreo adecuado. Asimismo, la anosognosia (falta de conciencia de padecer una enfermedad) es un trastorno característico de las demencias y de ciertos accidentes cerebrovasculares (ACV), que también estaría asociado a alteraciones de monitoreo e interocepción. Sin embargo, se conoce poco si las diferencias fisiopatológicas asociadas a la neurodegeneración y a los ACV (en pacientes con lesión insular) afectan en forma diferencial a las redes insulares. En este contexto, se abre una nueva avenida para el estudio del rol de la CI en modelos de lesiones múltiples (degeneración y ACV) por ser una región clave de integración del procesamiento cognitivo y corporal. Esto, además, permitiría un mejor entendimiento de ciertas enfermedades y déficits conductuales subyacentes al daño insular. En la presente tesis se exponen tres estudios que exploraron, mediante el modelo de lesión basado en ACV (lesión focal) y neurodegeneración: (a) la conectividad de la CI y su afectación diferencial según el tipo de fisiopatología; (b) las redes insulares involucradas en las diferentes dimensiones interoceptivas; y (c) los correlatos neuroanatómicos del monitoreo cognitivo explícito e implícito. El modelo de lesión (pacientes con lesión/atrofia insular) permite relacionar la ubicación del daño cerebral con los distintos patrones de conectividad y perfiles de afectación conductual. Por esta razón, se evaluaron pacientes con lesiones cerebrales focales fronto-insulares causadas por ACV (LFI) y con neurodegeneración selectiva fronto-insular asociada a demencia frontotemporal variante conductual (vcDFT). También se estudiaron pacientes con la enfermedad de Alzheimer (EA), como modelo de degeneración contrastiva ya que afecta mayormente áreas cerebrales posteriores (parietales y temporales), y un grupo de sujetos sanos. Los estudios se realizaron a través de la aplicación de tareas conductuales de interocepción cardíaca y monitoreo explícito e implícito, que fueron previamente validadas, y permitieron diferenciar los distintos perfiles patológicos de cada enfermedad. Estas medidas conductuales fueron combinadas con técnicas de morfometría basada en vóxeles (MBV) y de mapeo de síntomas de lesión basado en vóxeles (MSLBV) que posibilitaron asociar la atrofia o lesión de los pacientes con los déficits conductuales. Además, se aplicaron medidas de conectividad funcional en resonancia magnética funcional (RMf) de cerebro para estudiar el grado de acoplamiento de la actividad de la CI y de sus redes y su relación con las tareas administradas. En el Estudio I, se evaluó el impacto diferencial de la neurodegeneración y de las lesiones focales producidas por ACV en la conectividad funcional local y global de las redes insulares. En el Estudio II, se midió (a través de registros de electroencefalografía) el correlato cortical de la interocepción (el potencial evocado cardíaco -PEC-) y la conectividad funcional de las redes insulares en tres dimensiones interoceptivas. En el Estudio III, se abordó el impacto de la neurodegenación y el ACV en el monitoreo implícito y explícito. Los resultados del Estudio I evidenciaron que la conectividad intra-insular, a diferencia de la conectividad global, distinguió mejor entre etiologías diferentes (lesión focales versus neurodegeneración), demostrando que la fisiopatología puede tener un impacto diferencial en la conectividad funcional insular. En el Estudio II, se encontró que los pacientes con LFI y neurodegeneración presentaron alteraciones en el procesamiento interoceptivo basal, que fueron acompañadas por una modulación atípica del marcador cortical cardíaco (PEC). Además, el desempeño en el procesamiento interoceptivo se asoció con la CI y sus conexiones. Por otro lado, la capacidad de aprendizaje interoceptivo (mejora de la precisión interoceptiva después de la retroalimentación cardíaca) estuvo preservada en los pacientes con daño frontal (vcDFT y LFI) y afectada en la EA (asociada al volumen de regiones hipocampales y orbitofrontales). Finalmente, el monitoreo o conciencia interoceptiva (la relación entre el juicio de valor sobre el desempeño interoceptivo y el desempeño real de los participantes) estuvo afectado sólo en los cuadros neurodegenerativos, dependiendo críticamente de regiones de memoria (fronto-hipocampales). En el Estudio III, se administró una tarea perceptual en la cual los participantes tuvieron que brindar juicios de confianza (monitoreo) sobre su desempeño de manera explícita e implícita. Aquí, encontramos un patrón diferencial en los reportes: los pacientes con afectación frontal (vcDFT y LFI) exhibieron un correcto reporte explícito, pero presentaron un exceso de confianza cuando tuvieron que apostar en base a su desempeño (monitoreo implícito). Los pacientes con EA presentaron alteraciones tanto en el monitoreo explícito como implícito. El monitoreo explícito se asoció con áreas ventromediales y el implícito, con áreas fronto-temporo-insulares, lo que permitió realizar un mapeo diferencial de ambos dominios. Los tres estudios que componen esta tesis brindan implicancias teóricas y clínicas respecto de la CI y sus redes. En primer lugar, los mecanismos fisiopatológicos específicos de cada enfermedad (ACV o neurodegeneración) afectan en forma diferencial la conectividad funcional de la CI. El abordaje de pacientes con afectación insular permitió relacionar la ubicación del daño cerebral con los distintos patrones de lesión/atrofia, conectividad y perfiles de afectación conductual, tanto del monitoreo interoceptivo como cognitivo. Los resultados de estas tesis muestran cómo el daño insular compromete conexiones fronto-temporo-insulares, afectando de manera diferencial las dimensiones interoceptivas y de monitoreo, lo que apoya el rol de la CI en ambos procesos. Estos hallazgos brindan evidencia de la importancia de la CI en la caracterización y diferenciación de perfiles cognitivos patológicos, destacando su posible rol como potencial marcador neurocognitivo de enfermedades neurológicas.

Descripción: La sequía es uno de los principales peligros naturales, siendo un fenómeno que ocasiona pérdidas millonarias en diversos sectores socio-económicos. Frecuentemente el sector agrícola es el primero en ser afectado por la sequía, debido a la dependencia al agua y a las reservas de humedad del suelo durante las diversas etapas del crecimiento de los cultivos. El objetivo de esta investigación de tesis se centra en el análisis del nexo entre la variabilidad de la Humedad del Suelo (HDS) y la ocurrencia de sequias meteorológicas y agrícolas, mediante el uso de las estimaciones de HDS de la misión Soil Moisture and Ocean Salinity (SMOS) en gran parte de la Llanura Pampeana. La respuesta de la HDS a la ocurrencia de sequías identificadas mediante el Índice de Precipitación Estandarizada (IPE) se obtiene en ventanas de tiempo de 3 a 5 meses. Esto permite adoptar la serie de IPE en ventana de 3 meses (IPE3), para el monitoreo de condiciones de exceso y déficit de HDS estimada a partir de sensores remotos. Las áreas afectadas por eventos de sequía, condiciones normales y excesos poseen una alta coherencia espacial entre el IPE3 y las anomalías de HDS. Esta coherencia también se observa a nivel temporal, con anomalías negativas de HDS respondiendo a condiciones de sequía severa y extrema (IPE <=-1.5). A partir de esta relación, se desarrolló un índice de sequías agrícolas que considera la HDS de la misión SMOS y la composición del suelo en los primeros centímetros. Se destaca el uso de HDS estimada mediante la misión SMOS como una herramienta de rápida disponibilidad y adecuada precisión, que permite cuantificar y monitorear el balance hídrico en la Llanura Pampeana, teniendo en cuenta las precipitaciones y las pérdidas por evapotranspiración.

Descripción: Fil: Figliolia, Néstor Mario. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Echinococcus granulosus es un pequeño parásito cestode cuyo estadío larval causa la equinococcosis quística o hidatidosis. El objetivo de esta tesis fue analizar el transporte de aminoácidos en el estadío de metacestode y diseccionar los componentes moleculares involucrados en el mismo. Los análisis bioinformáticos realizados han mostrado que en Echinococcus spp. los transcriptos codificantes para transportadores de aminoácidos de la familia DAACS (transportadores de aminoácidos/ dicarboxilatos y catión) se encuentran entre los más representados, siendo los transportadores de aminoácidos excitatorios los más expresados dentro de los miembros de esta familia. Los ensayos de transporte efectuados en quistes hidatídicos infértiles indican que la incorporación de glutamato se daría mediante difusión simple, lo cual sugiere que dicho aminoácido podría ser sintetizado endógenamente. Este resultado estaría en concordancia con el hallazgo bioinformático de genes codificantes para enzimas que intervendrían en la síntesis de novo del aminoácido glutamato. Los análisis transcriptómicos sugieren que habría un aumento muy importante en la expresión de transportadores a nivel del parásito adulto con respecto a la forma lavaria, lo cual sugiere que en el estadío adulto la incorporación de glutamato en forma mediada podría ser esencial. Así mismo, en el protoescólex se han identificado ADNs copia codificantes para transportadores de aminoácidos que podrían estar involucrados en dicho transporte y se han denominado egat1-4. Con el fin de caracterizarlos, se han clonado y determinado las secuencias completas de los ADNs copia correspondientes y se ha hallado que poseen similaridad de secuencia y estructura con miembros de la familia DAACS. Los ensayos de hibridación in situ mostraron que el mensajero de egat1 se localiza en la zona tegumentaria del protoescólex y el correspondiente de egat3 en células del parénquima del protoescólex y en brotes de la capa germinal. Los anticuerpos contra fragmentos de EgAT1 y EgAT2 reconocieron proteínas en extractos del metacestode en ensayos de Western-blot. Se ha observado que EgAT1 se localiza en el subtegumento del protoescólex, ventosas, almohadilla rostelar y en fibras internas. EgAT1 también se localiza en capa germinal y en el subtegumento del parásito adulto. Por otro lado, EgAT2 se localiza en el parénquima del protoescólex y en brotes de la capa germinal. La diferente expresión espacial y temporal de los transportadores de aminoácidos analizados sugiere que cada uno de ellos cumpliría con las distintas necesidades de aminoácidos en diferentes territorios celulares y/o estadíos del ciclo de vida del parásito. EgAT1 se logró expresar en células de mamífero y los estudios funcionales efectuados en dichas células mostraron un pequeño pero significativo nivel de transporte de glutamato. La expresión de los transportadores a lo largo del ciclo de vida del parásito, su localización en estructuras claves para la interacción con el hospedador, su capacidad aunque limitada de incorporar glutamato, junto a las diferencias de estructura primaria y secundaria con sus ortólogos en mamíferos sugieren que estas moléculas podrían ser blancos de drogas contra la hidatidosis, además de proveer las bases moleculares para profundizar en la biología del parásito en lo que respecta al intercambio de metabolitos con el hospedador.

Descripción: La incidencia del melanoma cutáneo maligno se ha incrementado notoriamente en los últimos años. La progresión del melanoma está bien documentada desde el punto de vista fisiopatológico; sin embargo los mecanismos moleculares y los marcadores genéticos asociados a los diferentes estadios de la enfermedad, aún no han sido completamente establecidos. Las células de melanoma expresan antígenos que pueden inducir respuesta inmune celular y humoral. La disponibilidad de líneas celulares y la caracterización de sus patrones de expresión antigénica, son de gran utilidad para el desarrollo de modelos de estudio y tratamiento del melanoma. El presente estudio se llevó a cabo con el objeto de determinar los patrones de expresión de antígenos de tres nuevas líneas celulares de melanoma metastásico humano. Las líneas celulares fueron establecidas a partir de muestras de tejido de metástasis tumoral obtenidas por procedimientos quirúrgicos realizados a tres pacientes con diagnóstico documentado de melanoma cutáneo maligno. Las nuevas líneas celulares fueron denominadas A, B y C. La línea celular de melanoma humano IIB-MEL-IAN se utilizó como control positivo de la expresión de los antígenos estudiados. El análisis de expresión de la tetraspanina CD63 y de los gangliósidos GD2 y GD3 se realizó por técnica de IF indirecta seguida del análisis por FACS. Se utilizó la técnica de RT-PCR para evaluar la expresión de los antígenos de diferenciación melanocítica MART-l, gplOO, TRP-2 y TYR, los antígenos del grupo CT denominados NY-ESO-l y MAGE-l, el antígeno MIA y la quimioquina MCP-1. El análisis realizado por IF y FACS resultó positivo para la expresión de la tetraspanina CD63 y de los gangliósidos GD2 y GD3 en las líneas celulares A y B. En la celular línea C se analizó la expresión de la tetraspanina CD63 y del gangliósido GD2. Ambos marcadores fueron reconocidos por AcMo específicos en dicha línea celular. El análisis realizado por RT-PCR resultó positivo para la expresión de MART-1, gplOO, TRP-Z, TYR, NY-ESO-l, MAGE-l, MIA y MCP-1 en las líneas celulares A y B. En la línea celular C, se investigó y se verificó la expresión de MART-1, TRP-Z, NY-ESO-l y MCP-1. En este estudio se determinaron los patrones de expresión de antígenos de tres nuevas líneas celulares de melanoma metastásico humano. Las líneas celulares caracterizadas expresan los principales AAM inmunogénicos conocidos actualmente. Las líneas celulares de melanoma humano A, B y C representan una importante fuente de antígenos con aplicación en la investigación y en el diseño de nuevas estrategias terapéuticas para el tratamiento del melanoma cutáneo maligno.

Descripción: Una de las últimas técnicas aplicadas en biología molecularpara detectar diferentes niveles de transcripción en distintosestadios de un mismo tipo celular es el Differential Display. Esteensayo se basa en la técnica de RT-PCR, utilizando un oligo dT “anclado” que se une al nacimiento del pon A+ de los ARNmensajeros, y un oligonucleótido corto de secuencia al azar que, endiferentes combinaciones, van a amplificar un set de bandascaracterístico para cada par de oligos elegidos. Estas reacciones secorren en un gel de poliacrilamida desnaturalizante y se observanpor autorradiografía. De esta forma se comparan ambos estadioscelulares y se recuperan del gel aquellas bandas que muestren unaamplificación diferencial como producto de distintos niveles de ARNmensajeros. Utilizando el Differential Display en los estadios no infectivo (epimastigotes) e infectivo (trypomastigotes metacíclicos) delparásito Trypanosomacruzi, causante de la enfermedad de Chagas,se purificaron varias bandas de expresión diferencial. Una de ellasaplicada como sonda en un Northern-blot demostró tener unatranscripción entre 8 y 9 veces mayor en trypomastigotesmetacíclicos. A partir de una biblioteca genómica realizada en elbacteriófago A Fix, se aisló un clon positivo para esta banda que,una vez secuenciado y comparado en bancos de datos, dió unahomología de hasta el 46 % a nivel de aminoácidos con diferentes ARN helicasas. Estas proteínas pertenecen a la familia de lasproteinas DEAD Box y participan en el relajamiento de estructurasde ARN doble cadena. Por lo tanto son importantes en procesoscomo transcripción, traducción, ensamblado de ribosomas, splicingy editing.Además se ha descripto su participación en diferenciacióny desarrollo celular, por lo cual se abre un campo muy importantecon en el estudio de la participación de estas proteinas en losprocesos de metaciclogénesis e infectividad del Trypanosoma cruzi. Por otro lado se demostró por Southern-blot que, a diferenciade la mayoría de los genes conocidos de Trypanosoma cruzi, el gende esta ARN helicasa es de única copia en el genoma. Ensayos de Cromo-blot con ia región que codifica al carboxilo terminal de laproteína mostraron que este gen se encuentra representado en porlo menos nueve cepas del parásito. Por último, se demostró queesta ARN helicasa posee una especificidad enzimática condirección 3’-5’ sobre transcriptos realizados in-vitro, con unaaparente independencia de ATP o GTP, como ocurre con algunosmiembros de esta familia El descubrimiento de este gen de transcripción diferencialentre ambos estadios de la metaciclogénesis de T. cruzi y lacaracterización parcial de su función enzimática, son el principiopara estudiar su participación en la diferenciación y/o infectividad deeste parásito y nos permitirá conocer un poco más de este procesodel cual se sabe tan poco y que es parte del comienzo de laenfermedad de Chagas en los huéspedes vertebrados, entre ellos elhombre.

Descripción: Trabajos previos de nuestro laboratorio permitieron la purificación y clonado de una acil-CoA tioesterasa mitocondrial (MTE-1). Esta proteína pertenece a una nueva familia de acil-CoA tioesterasa con afinidad por ácidos grasos de cadena larga. Estos trabajos permitieron postular la existencia de un nuevo camino metabólico de liberación de ácido araquidónico (AA) con laintervención obligatoria de MTE-1 en la regulación hormonal de la esteroidogénesis. En la presente tesis se demuestra el papel obligatorio de esta enzima y se describe el mecanismo coordinado de una acil-CoA sintetasa 4 (ACS4) y MTE-1 en la liberaciónde ácido araquidónico y esteroidogénesis. Los principales resultados de este trabajo son: -La proteína recombinante purificada liberó AA a partir de araquidonoil-CoA y esta actividad fue afectada por inhibidores dela liberación de AA. -La actividad de acil-CoA tioesterasas mitocondriales de células esteroidogénicas se incrementó significativamente por estimulación hormonal. -Inhibidores de MTE-1 y ACS4 inhiben la esteroidogénesis inducida hormonalmente. Estos inhibidores en concentraciones inefectivas produjeron un efecto sinérgico sobre la inhibición de la esteroidogénesis cuando se utilizaron en forma conjunta. -Por último el papel obligatorio de ambas enzimas fue demostrado por la inhibición de la expresión las mismas utilizandola metodología de ADN copia antisentido y ARN de interferencia. El efecto inhibitorio producido sobre la esteroidogénesis por este tratamiento fue revertido por adición AA exógeno. Estos resultados comprueban el rol obligatorio de ambas enzimas en la regulación hormonal de la iberación AA y la esteroidogénesis, demostrando la presencia de un nuevo camino de liberación AA.

Descripción: Se caracterizaron de forma fenotípica y funcional las células dendríticas (CD)derivadas del cultivo de precursores de médula ósea, y se estudió el mecanismomediante el cual la vacuna CD/Apo-Nec, constituida por CD co-cultivadas con célulasapoptóticas y necróticas del melanoma murino B16F1 (Apo-Nec), genera protecciónanti-tumoral. Las CD se separaron empleando microesferas magnéticas anti-CD11c, y lasdos poblaciones resultantes en términos de positividad para CD11c (CD+ y CD-),se estudiaron junto a las CD. Se demostró que la población de CD obtenida luego de 7 días de cultivo con elfactor estimulador de colonias de macrófagos y granulocitos murino (mGM-CSF), esheterogénea y presenta aproximadamente un 60% de CD CD11c+. El 26,6% de lascélulas presentes en la fracción CD+ co-expresó los antígenos de superficie CD11c y F4/80, y el 75,4% resultó ser doble positiva para CD11c y CD11b. La fracción CD+también expresó Ly6-G. La fracción CD- quedó enriquecida en macrófagos CD11c-/F4/80+ (44,7%), algunos de los cuales co-expresaron Ly6G (41,8%); y en neutrófilos F4/80-/Ly6-G+(34,6%). Las fracciones CD+ y CD- mostraron una capacidad similar para fagocitar yendocitar antígenos, y expresaron niveles similares de moléculas del complejo mayorde histocompatibilidad de tipo II y moléculas co-estimulatorias CD80, CD83 y CD86,respecto a la población de CD. Sin embargo, sólo la vacuna CD/Apo-Nec fue capaz deconferir una protección significativa. Luego del co-cultivo no se detectó interleuquina-12,ni intracelularmente ni en el sobrenadante de la vacuna CD/Apo-Nec. Por lo cual,la protección obtenida sería independiente de su habilidad para secretar esta citoquinaen el momento de ser administrada. No detectamos una polarización de los macrófagos y neutrófilos derivados delcultivo de CD hacia un fenotipo M1/N1 o M2/N2, antes o después del co-cultivo, lo cualpodría relacionarse con la falta de expresión de interferón-γ, y de secreción deinterleuquina-10 e interleuquina-12 por parte de las células. Las vacunas constituidas por las fracciones CD+ y CD-(CD+/Apo-Nec y CD-/Apo-Nec),indujeron en los sitios de inmunización, la expresión de interleuquina-10 y una elevada producción de óxido nítrico, lo cual podría explicar en parte suincapacidad para conferir protección anti-tumoral. Los resultados obtenidos indicarían que existe una interacción entre laspoblaciones celulares que conforman el cultivo de CD. Variaciones en el número dedichas poblaciones resultarían en la falta de protección; por lo cual todas las célulaspresentes en la vacuna CD/Apo-Nec serían necesarias para inducir protección contrael melanoma murino B16-F1.

Descripción: En esta Tesis Doctoral se estudiaron distintos aspectos de la regulación del eje hipotálamo-hipófiso-gonadal (HHG) en un modelo de ratones transgénicos que produce niveles elevados de la hormona gonadotrofina coriónica humana (hCG) y desarrolla tumores gonadales (ratones hCGDE+). Se partió de la hipótesis que los elevados niveles de esteroides sexuales inducidos por la hipersecreción de hCG desde edades tempranas del desarrollo, actuarían sobre el eje HHG alterando la síntesis y secreción de hormonas y factores claves en la función reproductiva, participando directa o indirectamente en el inicio y progresión de los tumores gonadales que presentan estos ratones. En una primera etapa se caracterizó en profundidad el fenotipo de machos y hembras hCGDE+, estudiando parámetros morfológicos, bioquímicos y moleculares de la función gonadal e hipotálamo- hipofisaria. Se observaron marcadas diferencias sexuales en el modelo, donde los machos transgénicos resultaron severamente comprometidos a nivel de la regulación de la unidad hipotálamo-hipofisaria desde edades tempranas del desarrollo, mientras que las hembras mostraron alteraciones gonadales que condujeron al desarrollo de teratomas ováricos al inicio de la edad reproductiva. En una segunda etapa se aplicaron tratamientos antihormonales y gonadectomía, siendo nuestro particular interés estudiar el rol de los esteroides sexuales en el fenotipo de los machos y hembras hCGDE+. Los resultados obtenidos ponen de manifiesto que la hipersecreción de hCG, a través de la estimulación de la esteroidogénesis gonadal, altera la funcionalidad del eje reproductivo y participa en el desarrollo de patologías gonadales.

Descripción: Fil: Wilner, Ariel G.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: La línea BLS1A posee un sistema de letales balanceados localizado en las cercanías del centrómero del cromosoma 6 de maíz formado por un gen letal clorofílico estrechamente ligado en fase de repulsión con un gen letal gamético. Los objetivos de esta tesis fueron los de caracterizar agronómica y molecularmente el segmento cromosómico balanceado de la línea de maíz BLS1A. Los resultados de ensayos a campo mostraron diferencias estadísticamente significativas entre BLS1A y algunos de sus recombinantes. La línea BLS1A mantuvo su vigor a pesar de los años de endocría. La caracterización genética a nivel molecular se realizó a través de la búsqueda de polimorfismos con marcadores moleculares de RAPD, RFLP, STS, AFLP y Microsatélites. Se analizaron más de 13200 loci génicos en todo el genoma de las líneas. Cinco microsatélites resultaron polimórficos para en el segmento y se lograron clonar y secuenciar siete bandas de RAPD y AFLP que mapearon en la región cromosómica en estudio. Las técnicas moleculares permitieron demostrar la alta homocigosis de la línea BLS1A, por fuera del segmento balanceado, luego de más de 25 años de endocría Del resultado de algunos de los ensayos de rendimiento de híbridos se observó que las líneas Rec 9 y Rec 10 que perdieron los letales, debido a la recombinación, parecerían corresponderse a los “homocigotas” de cada uno de los brazos del segmento balanceado original. La línea BLS1A como sus Recombinantes presentan buena aptitud combinatoria con las líneas públicas Mo17 y B73 representativas de los 2 grupos heteróticos más importantes en la producción de híbridos comerciales.

Descripción: En esta Tesis se describe el hallazgo de actividad hemolítica, así comotambién de tres actividades lipolíticas en el medio extracelular delprotozoo ciliado Ietrahymena thermophila. Las enzimas halladas son unafosfolipasa C (EC.3.1.4.3), una fosfolipasa A, (EC.3.1.1.32) y una triacilglicerollipasa (EC.3.1.1.3). Estas enzimas fueron purificadasmediante precipitación fraccionada con sulfato de amonio y cromatografíade intercambio iónico, de filtración en geles y de interacción hidrofóbicaen decil Sepharose 4B. Se encontró así que la fosfolipasa Ccopurífica con actividad hemolítica, no así la triacilglicerol lipasa nila fosfolipasa A, aunque esta última es capaz de acelerar la acciónhemolítica de la fosfolipasa C. Se halló además un segundo factorhemolítico no asociado a fosfolipasas, cuya acción es inhibida porcolesterol y que, junto con la fosfolipasa C, puede dar cuenta de laacción hemolítica causada por el medio extracelular de Tetrahymena. Estesegundo factor podría actuar en forma semejante a ciertas citolisinasbacterianas que causan hemólisis por interacción con el colesterol delas membranas. Las tres enzimas lipolíticas fueron caracterizadas y suspropiedades indican que provienen del sistema lisosomal. El hallazgo delas actividades aquí descriptas proporciona una explicación para elenigmático rol de los fosfonolípidos, un tipo especial de fosfolípidosque predominan en la membrana plasmática de Tetrahymen. Estos compuestospresentan un enlace directo carbono-fósforo que los hace particularmenteresistentes a la hidrólisis enzimática por fosfolipasa C. Poseen,además, un enlace éter en la posición sn-1, que les confiere resistenciaa la acción de fosfolipasa A. Es decir, Tetrahymena, una célula carentede pared celular u otras estructuras protectoras, sería capaz de tolerarsus propias secreciones líticas gracias a este tipo peculiar de fosfolípidos. Otras observaciones presentadas aquí pueden estar relacionadascon particularidades de las membranasde este ciliado. Así debe destacarsela baja proporción de triacilglicerol en la membrana plasmática,contrastando con lo observado para membranas internas de Tetrahymena. Este hecho puede estar vinculado con la secreción de la triacilglicerollipasa. Otro aspecto notable es que esta célula carece totalmente decolesterol, el que es reemplazado por tetrahymanol. Esto puede explicarque el segundo factor hemolitico hallado no actúe sobre la membrana de Tetrahymena y sí sobre la de los eritrocitos. En esta Tesis se proponeque la secreción de enzimas y las particularidades de la membranarepresentan una coadaptación que puede conferir a estos ciliados unaventaja evolutiva, al ser capaces de lisar otras células siendo ellosmismos resistentes. Otros experimentos presentados aquí sugieren, porúltimo, que las actividades lipolíticas secretadas pueden desempeñar unrol destacado en la digestión extracelular e incorporación de fosfolípidosexógenos en este ciliado.

Descripción: Las lesiones cutáneas que abarcan una gran superficie de la piel, requieren el recubrimiento inmediato de la zona afectada para reducir riesgos se sepsis y facilitar la regenración tisular. Entre los múltiples procedimientos terapéuticos aplicados en el tratamiento de estas lesiones, los injertos de piel proveen un medio adecuado y seguro para la regeneración tisular. En esta tesis se estudió un sustituto de piel humana a base de dermis porcina utilizado para ese fin terapéutico, el cual essometidopara su comercialización a un tratamiento industrial que incluye liofilizacipon. El objetivo de la tesis, consistió en la caracterización de este producto comercial, su comparación con la dermis fresca original, y la descripción de ciertos aspectos de su actividad biológica. El análisis consistió en desarrollar la metodología adecuada para el aislamiento y cuantificación de los componentes de importancia biológica. Estos fueron los colágenos del tipo I y III, las proteínas fibronectina y laminina, y los proteoglicanos de ácido hialurónico, keratán sulfato, dermatán sulfato y condroitín sulfatos A y C. Los resultados se esta etapa sugieren que el tratamiento industrial aplicado para su comercialización, no los modificó de manera importante, ya que no hubo alteraciones cuali-cuantitativas relevantes. Además, el análisis de su actividad biológica en un " modelo de cultivo in vitro" de fibroblastos humanos, mostró que la dermis induce un aumento de la proliferación celular. Por lo tanto, este sustituto dérmico puede considerarse una excelente herramienta para el tratamiento de pacientes con heridas cutáneas extensas.

Descripción: El virus de Epstein Barr (EBV) posee dos ciclos de infección, lítica y latente, en linfocitos B, el segundo está asociado a procesos neoplásicos. Se han descripto polimorfismos en los genes BZLF1, BKRF1 (EBNA1) y BNLF1 (LMP1), algunos asociados a linfomas EBV+, a los compartimentos del hospedador o al origen geográfico del virus. Con el objetivo de identificar polimorfismos en estas regiones génicas y su dinámica de distribución en el tiempo y entre los compartimentos del hospedador, se estudió una serie de 35 pacientes pediátricos, 15 con mononucleosis infecciosa (MNI) y 20 con linfoma EBV+, todos de nuestra región geográfica. Mediante amplificación por PCR y posterior secuenciación, se caracterizaron las variantes virales de dichos genes en distintos compartimentos de pacientes i) con MNI al momento del diagnóstico (D0), al mes (D30) y a los tres meses (D90) durante la convalecencia y ii) en muestras de biopsias ganglionares de linfomas EBV+. Se identificaron variantes de BZLF1 estadísticamente asociadas a tumores EBV+, variantes de EBNA1 de circulación exclusiva en nuestra región geográfica y variantes de LMP1 preferentemente asociadas a patologías EBV+, tanto malignas como benignas.

Descripción: Calcium has been identified in a wide variety of biological systems as a secondmessenger. It has been demonstrated that it has a key role in different processes such asexcitation-contraction coupling, neurotransmitter and hormone release, gene activation,some mechanisms associated with learning and memory and many other physiologicalprocesses. According to the vesicular hypothesis, Ca²+ entry into the presynaptic nerve terminalsis a pre-requisite for transmitter release. It has been shown that Ca²+ fluxes are activated bydepolarization and that the amount of transmitter release is dependent on the level ofintracellular calcium concentration. This increase in Cap concentration is achieved by theopening of voltage dependent calcium channels (VDCC) after the arrival of the actionpotential to the nerve terminal. The neuromuscular junction and the squid giant synapse have proved to be excellentpreparations to study the sequence of events that take place during synaptic transmission andare a model for understanding the synaptic mechanisms involved in chemical synapsesthroughout the animal kingdom. Different types of calcium channels have been described, according to their biophysicaland pharmacological properties. Llinas y Yarom (l981) demonstrated the coexistence of atleast two different types of calcium channels, being one of them of low threshold, LVA lowvoltage activated- and the other of high threshold HVA - high voltage activated. Later,the presence of these different calcium currents were shown in chicken DRG (dorsal rootganglion) neurones. LVA currents are activated by weak depolarizations from negativepotentials and decay rapidly after their activation. HVA currents are activated from morepositive holding potentials, and inactivate slowly. The LVA channels are known as T-type calcium channels due to their transientactivation. The HVA channels include a great number of subtypes. At least four different types of HVA channels have been distinguished at nerve cells. The L-type calcium channel issensitive to a family of organic compounds, the dihydropyridines (DHP). There are different DHP, some of them are agonists and others antagonists of the calcium channels. The N-typecalcium channels were first described as sensitive to a toxin derived from a marine snail,omega-conotoxin GVIA (ω-CgTx GVIA). There are many other polipeptides obtained fromsnail and spider venoms which block N-type calcium channels, however, ω-CgTx GVIA isthe most wider used. The P-type calcium channel, was initially described in cerebellar Purkinje cells, it was found to be insensitive to DHP and ω-CgTx GVIA, but was potentlyblocked by a low molecular weight fraction (FTX) and a polypeptide (ω-Aga-IVA), bothtoxins purified from the venom of the funnel-web spider Agelenopsis aparta. More recentlythe Q-type calcium channel was described in cerebellar granule cells. This new type ofchannel is insensitive to DHP and ω-CgTx GVIA, but sensitive to high concentrations of ω-Aga-IVA (hundreds of nanomolar), and also blocked by a polypeptide purified from the snailvenom, ω-CgTx M-VIIC. All these different channels, may coexist at a neuronal soma and also at the nerveterminals. However, in some preparations the combined use of all the calcium channelblockers, cannot suppress Ca²+ currents completely, indicating the existence of stillunidentified VDCC. Increasing information about VDCC is coming from the field of molecular biology. Molecular cloning of genes which code for the al subunit of VDCC, provided informationabout the structure of this transmembrane proteins, and the expression of its products in Xenopus oocytes made their biophysical and pharmacological characterization possible. Although it is possible to establish a relationship between the product of the genes andcalcium channels characterized ‘in situ', in many cases there is no good correlation betweenthe properties of the expressed calcium channels and those studied in situ. The existence of different VDCC, made it interesting to explore about their specificfunction and whether a particular type was responsible for synaptic transmission. Electrophysiological recording is the most confident technique to study the channelswhich take part in synaptic transmission. In 1984, Kerr and Yoshikami showed that frogneuromuscular transmission was abolished by ω-CgTx GVIA, which acted by blocking Ca²+entry into the presynaptic terminal. In contrast, ω-CgTx GVIA does not produce any effectin mammalian synaptic transmission electrically evoked in normal conditions. In the central nervous system (CNS), depending on the structure, it was shown thatdifferent VDCC subtypes are involved. At the neurosecretory terminals of theneurohypophysis it seems that both L- and N- type VDCC mediate neurosecretion (Lemosand Nowicky, 1989). Takahashi and Momiyama (1993) showed that in three different areasof the CNS, P-like and N-type VDCC are involved to varying degrees in synaptictransmission, while L-type seems not to be related with transmitter release. In the synapsebetween hipocampal CA3 and CAI neurons, transmitter release is mediated by N-typecalcium channels and other type of channels, whose pharmacology resembles Q-type calciumchannels. Stanley (1991) determined that transmitter release at the calyx synapse of chickencilliary ganglion is due to Ca²+ flux through N-type calcium channels It is also possible to have an approach about the VDCC involved in transmitterrelease, by means of colorimetric and biochemical techniques. Yawoo et al. showed that Ca²+ concentration was diminished in the presence of ω-CgTx GVIA, from what derives that N-type calcium channels mediate calcium entry at the chick cilliary ganglion synapse. Manygroups showed that K+ evoked neurotransmitter release in CNS slices, is inhibited by coCng GVIA as well as by ω-Aga-IVA, depending on the neurotransmitter and the areastudied (Turner et al., 1992; Kimura et al., 1994). At the mammalian neuromuscular junction, under normal conditions, transmitterrelease is resistant to DHP and to ω-CgTx GVIA, indicating that neither L nor N-type VDCC are mediating transmitter release. However, in cut muscle fibres it was reported that L-type channels antagonists diminish quantal content, when release is previously stimulatedby the L-type channel agonist BayK 8644 (Atchinson, 1987). It was also reported that ω-CgTx GVIA prevents the facilitatory effects of noradrenaline on the evoked release of [³H] Acetylcholine from mammalian motor nerve terminals (Wessler et al., 1990).

Descripción: Durante la última década, distintos eventos de maíz transgénico resistente a insectos (maíz Bt) han sido cultivados extensamente en la Argentina. La principal plaga blanco de los primeros eventos de maíz Bt en Argentina ha sido el barrenador del tallo, Diatraea saccharalis (F.) (Crambidae). La eficacia de estos eventos puede verse limitada por la capacidad de los insectos blanco de desarrollar resistencia. La evolución de la resistencia de los insectos a los cultivos Bt depende de muchos factores biológicos, ambientales y genéticos, como la estructura genética espacial de las poblaciones de los insectos blanco, y el flujo génico entre las poblaciones. En Argentina, la CONABIA propicia un plan de manejo de la resistencia de insectos al maíz Bt, el cual es cumplimentado por las compañías semilleras por medio de programas de monitoreo. Hasta el momento, en Argentina, no se ha documentado la aparición de resistencia en poblaciones de campo de D. saccharalis. Aún no se ha investigado la genética las poblaciones del barrenador a fin de entender la estructura genética espacial de esta especie. La estructura genética del insecto blanco del cultivo Bt puede ser una información útil a la hora de determinar las unidades de monitoreo. En este contexto, el principal objeto de la investigación aquí presentada fue el estudio de la estructura genética espacial y temporal de las poblaciones de Diatraea saccharalis para aportar conocimiento sobre esta especie en un contexto de ecología molecular. Se colectaron muestras de poblaciones de D. saccharalis de varias localidades de nuestro país, incluyendo regiones con diferente perfil agroproductivo y relieve geográfico, desde el Noroeste argentino hasta el sur de la provincia de Buenos Aires, incluyendo varias localidades de la región maicera central. También se estudió la posibilidad de existencia de razas asociadas a los diferentes cultivos hospedadores en simpatría y la evolución de los parámetros genético-poblacionales durante un continuo de ocho generaciones a lo largo de dos campañas agrícolas en una misma localidad. Debido a la falta de estudios genéticos previos sobre esta especie, se utilizaron marcadores moleculares RAPD, AFLP y secuencias mitocondriales (COI) en un contexto de genética del paisaje y análisis filogeográfico. El estudio filogeográfico se realizó con el objetivo de discernir si la baja diferenciación genética detectada entre las poblaciones en un rango geográfico tan grande se podría deber a causas pasadas o presentes. Finalmente se analizó la variación en la estructura genética de las poblaciones entre el año 2005 y el 2009 en función de los cambios en la diversidad y en la diferenciación de cada localidad en dicho período de tiempo. Los resultados sugieren que el nivel de estructura genética es bajo con los marcadores nucleares utilizados y la mayor parte de la diversidad genética se encuentra al nivel individual dentro de las poblaciones. A nivel nuclear también se detectó un buen ajuste al modelo genético espacial de aislamiento por distancia en el rango geografico estudiado. No se detectó diferenciación genética entre los grupos de insectos que se desarrollaron simpátricamente sobre hospedadores diferentes. En el contexto de la evolución de la resistencia al maíz Bt, la falta de diferenciación entre hospedadores sugeriría que no habría restricciones para el apareamiento aleatorio entre individuos provenientes de diferentes cultivos hospedadores, pudiendo estar funcionando en el campo estos cultivos no Bt como refugios no estructurales. La variación temporal de la estructura genética a nivel generacional durante dos campañas agrícolas mostró un patrón relacionado a la densidad poblacional, con valores máximos en la última generación estival y mínimos luego del invierno. El análisis filogeográfico detectó una posible expansión demográfica reciente y que las poblaciones estudiadas compartirían el mismo tiempo al ancestro común más reciente, y con una alta migración desde la región núcleo hacia el sur de Buenos Aires. Por lo tanto, los altos niveles de conectividad entre las poblaciones podrían ser el resultado mayoritariamente de la expansión poblacional reciente, y en menor escala del flujo génico actual dado por la vagilidad de la especie y por posibles migraciones pasivas asociadas a la actividad agrícola. En el período comprendido entre el año 2005 y 2009, no se detectaron cambios biológicamente significativos en la estructura genética de la especie a nivel país, acorde a la evolución de los parámetros de diversidad y diferenciación genética.

Descripción: El estudio de los procesos fotofísicos primarios de colorantes en medios heterogéneos tiene gran importancia en el desarrollo de materiales fotoactivos de utilidad en diversos campos de aplicación. El creciente interés en este tipo de sistemas, en particular aquellos compuestos por colorantes incorporados a soportes sólidos, fue acompañado por el desarrollo de métodos y técnicas específicos para su caracterización. Sin embargo, debido a dificultades experimentales, no existen métodos confiables para la determinación de rendimientos cuánticos de formación de estados triplete en medios sólidos dispersores de luz. En este trabajo de Tesis se presenta un método para la determinación de dichos rendimientos basado en la aplicación de la espectroscopia optoacústica inducida por láser (LIOAS). El estudio incluye la aplicación de técnicas resueltas en el tiempo que complementan la caracterización de los estados excitados. De esta manera, la Tesis avanza sobre el conocimiento de los procesos fotofísicos primarios de colorantes adsorbidos sobre celulosa, en particular las propiedades del estado triplete de colorantes xanténicos como la Eritrosina B y el Rosa de Bengala. Los resultados obtenidos se interpretan en términos de las interacciones entre las moléculas de colorante y entre éstas y la matriz sólida.

Descripción: Se informan las caracteristicas espectrosoópicas en la regrón UV-visible e IR cercano de los siguientes derivados de ftalocianinas: - Tetracarboxiftalocianinato de cobre (II) (CuTCPc). - Tetrakis(pentiloxicarbonil)ftalocianinato de cobre (II) o ésteramílico de CuTCPc (ECuTCPc). - Tricarboximonoamida ftalocianinato de hidroxoaluminio (III) (AITCPc). - Dicarboxidiamida ftalocianinato de cobalto (II) (Co(II)TCPc. - Dicarboxidiamida ftalocianinato de diciano cobalto (III) Co(III)(CN)2TCPc. Se estudiaron equilibrios de agregacrón de los colorantes a fin decontar con información que permitiera evaluar diferencias decomportamiento entre monómeros y agregados en experiencias fotoquímicasde transferencia de energía. CuTCPc dimeriza en mezclas DMSO-agua, aumentando el grado deagregación con el contenido de agua (Kd = 3.0 .10^(4) M^(-1) (DMSO-agua 95% P/P) y 1.3 .10^(5) M^(-1)(DMSO-agua 91% P/P). Los valores de Kd y losespectros obtenidos para el monómero y dímero en mezclas DMSO-agua, secompararon con los publicados en DMSO(Kd = 9.8 .10^(3) M^(-1); Gaspard, S. etal. (1979)). ECuTCPc dimeriza en tolueno (Kd = 1.1 .10^(5) M^(-1) ). Se obtuvo también eneste caso, el espectro del monómero y del dimero. De los espectros del monómero y del dímero de CuTCPc y de ECuTCPcpuede inferirse un acercamiento cofacial de las unidades monoméricas enel agregado. AlTCPc no presenta indicios de agregación en DMSO en un rango deconcentraciones de 1 a 120 uM. Se determinaron valores de Φ△M y Φ△D para los colorantes por fotólisisestacionaria usando DPBF como monitor de ^(1)O2. Se encontró en todos loscasos que los dímeros u otros agregados superiores son ineficientes en lafotosensibilización al ser irradiados en la banda Q. En cuanto a losmonómeros, su capacidad como sensibilizadores sigue el orden * : A1TCPc> (CuTCPc = ECuTCPc>> CoTCPc, ( Φ△M ALTCPC = 0.35 (DMSO); Φ△M ALTCPC = 0.18 (DMSO puro), 0.13 (95% DMSO-agua), 0.10 (91% DMSO-agua); Φ△M ECuTCPc 0.36 (tolueno); Φ△M CoTCPc = 0 (DMSO). De los compuestos estudiados AlTCPc es el único que fluoresce con unrendimiento del 42% determinado por el método de lente térmicaestacionaria . El valor de ɽ°, estimado por Strickler y Berg, resultó serde 20 ns y el de ɽf de 8ns. Co(II)TCPc, por su lado, presenta menor estabilidad química que losotros, tal como lo muestra su degradación térmica en presencia deendoperóxidos. Es también fácilmente oxidado a Co(III)TCPc en DMSOcuando el ion Co se coordina a ligandos tales como CN, NH3, N02, SCN y CI.

Descripción: Dada una familia de conjuntos no vacíos S= {Si}, se define el grafo de intersección de la familia S como el grafo obtenido al representar con un vértice a cada conjunto Si de forma tal que dos vértices son adyacentes sí y sólo si los conjuntos correspondientes tienen intersección no vacía. Un grafo se dice círculo si existe una familia de cuerdas L= {Cv} veG [fórmula aproximada, revisar la misma en el original] en un círculo de modo que dos vértices son adyacentes si las cuerdas correspondientes se intersecan. Es decir, es el grafo de intersección de la familia de cuerdas L. Existen diversas caracterizaciones de los mismos mediante operaciones como complementación local o descomposición split. Sin embargo, no se conocen aún caracterizaciones estructurales de los grafos círculo por subgrafos inducidos minimales prohibidos. En esta tesis, damos una caracterización de los grafos círculo por subgrafos inducidos prohibidos, restringido a que el grafo original sea split. Una matriz de0’s y1’s tiene la propiedad de los unos consecutivos (C1P) para sus filas si existe una permutación de sus columnas de forma tal que para cada fila, todos sus1’s se ubiquen de manera consecutiva. En esta tesis desarrollamos caracterizaciones por submatrices prohibidas de matrices de0’s y 1’s con la C1P para sus filas que además son2-coloreables bajo una cierta relación de adyacencia, y caracterizamos estructuralmente algunas subclases de grafos círculo auxiliares que se desprenden de estas matrices. Dada una clase de grafos [letra griega pi], una [letra griega pi] -completación de un grafo G= (V;E)es un grafo H= (V;E[F) [fórmula aproximada, revisar la misma en el original] tal que H pertenezca a [letra griega pi]. Una [letra griega pi] -completación H de G es minimal si H0=(V;E[F0) [fórmula aproximada, revisar la misma en el original] no pertenece a [letra griega pi] para todo F0 subconjunto propio de F. Una [letra griega pi] -completación H de G es mínima si para toda [letra griega pi] -completaciónH0= (V;E[F0) de G [fórmula aproximada, revisar la misma en el original], se tiene que el tamaño de F es inferior o igual al tamaño de F0. En esta tesis estudiamos el problema de completar de forma minimal a un grafo de intervalos propios, cuando el grafo de inputes de intervalos. Hallamos condiciones necesarias que caracterizan una completación minimal en este caso, y dejamos algunas conjeturas para considerar en el futuro.

Descripción: Prosopis alba, P. chilensis y P. flexuosa "algarrobos", características enlas regiones fitogeográficas del Chaco y Monte, Argentina, constituyen unrecurso natural con innumerables aplicaciones. Si bien el progresivo avance dela desertización ha puesto en riesgo a estas comunidades vegetales, esindudable que en la actualidad constituyen una fuente inagotable de productosy subproductos. A partir del estudio de los caracteres estructurales (micro, ultra, nano),propiedades funcionales y color de los frutos y harinas de P. alba, P. chilensis y P flexuosa, se desarrolló un proceso de secado, molienda y mezcla. Se analizaron y discutieron las observaciones con microscopio óptico (MO), microscopio electrónico de barrido ambiental (MEBA) y con campo deemisión (FESEM), microscopio electrónico de transmisión (MET) y microscopiode fuerza atómica (MFA). Se caracterizaron las harinas de las distintasespecies en función de la granulometría, la capacidad de absorción de agua, lacapacidad de absorción de aceite, la solubilidad y el color. La investigación permitió optimizar el proceso, elaborar harinaenriquecida con proteínas a partir de P. chilensis y proponer una mezcla defácil formulación. El estudio constituye un aval para lograr la incorporación de P. chilensisal Código Alimentario Argentino.

Descripción: El ácido γ-aminobutírico (GABA) es el principal neurotransmisor inhibitorio del sistema nervioso central devertebrados y hasta el momento se han caracterizado tres tipos de receptores de GABA, según sus propiedadesfarmacológicas: GABAa, GABAb y GABAc. Los receptores de GABAa (GABAaR) y GABAc (GABAcR) compartenademás su mecanismo de señalización, ambos son receptores ionotrópicos con una alta permeabilidad a iones cloruro. Los receptores de GABAb son metabotrópicos, generalmente acopladas a proteínas G. En esta tesis se presenta una extensa caracterización de las propiedades farmacológicas y biofísicas de los receptoresde GABA, con especial énfasis en los GABAcR Este subtipo de receptores de GABA fue el último en ser identificadoy se caracteriza por su insensibilidad al antagonista clásico GABAérgico, bicuculina y por el lento curso temporal desus respuestas. Este trabajo se realizó expresando los receptores en ovocitos de Xenopus laevis y estudiando suspropiedades con dos diferentes técnicas electrofisiológicas: fijación de voltaje con dos electrodos (FVDE) y patchclampen la configuración outside out. Los receptores ionotrópicos de GABA (GABA-R) son modulables por una diversidad de compuestos de diferentenaturaleza química. Entre ellos se encuentran los flavonoides (F), una familia de compuestos aislados de plantasvasculares que presentan una gran variedad de acciones neurofarmacológicas. Algunos son ansiolíticos y sedantes, y seha propuesto que su mecanismo de acción sería a través de los GABAaR. En este trabajo, evaluamos la acción de ungrupo de F sobre las respuestas mediadas por GABA-R. Los F utilizados en este trabajo fueron: quercetina, crísina,apígenina, morina, flavona y α-naftoflavona. Contra lo esperado, los F evaludados tuvieron un efecto inhibitoriogeneral tanto sobre los GABAaR como los GABAcR. Quercetina fue el más potente para ambos receptores con un IC50de aproximadamente 4 µM en cada caso. También se evaluó la acción de quercetina en otros receptores ionotrópicos deneurotransmisores, como los colinérgicos nicotínicos, serotonina y kainato. En todos ellos se observaron efectosinhibitorios con distinta potencia. Tanto los GABAaR como los GABAcR son sensibles al alcaloide picrotoxina. Se han propuesto distintosmecanismos para su acción sobre los GABAaR incluyendo efectos no-competitivos y mixtos. Sin embargo, aún no seha esclarecido suficientemente el mecanismo de acción en los GABAcR. Picrotoxina produjo una inhibición reversiblecon un IC50 = 0.6 ǂ 0.1 µM. La curva dosis-respuesta (D-R) para GABA en presencia del antagonista (1, 10 y 100 µM)sufrió un desplazamiento hacia la derecha y para las concentraciones más altas de esta toxina, una reducción en larespuesta máxima. Este resultado sugeriría un mecanismo de acción de tipo no-competitivo. No obstante, al igual quelos antagonistas competitivos, las respuestas a concentraciones bajas de GABA fueron más sensibles a picrotoxina quelas más altas. La inhibición por esta toxina fue también dependiente del uso, es decir, requirió la activación de losreceptores para ejercer su efecto. La recuperación de la inhibición también fue facilitada por la acción de GABA. Además, picrotoxina produjo un aumento en la velocidad de de-activación de las respuestas al GABA, sugiriendo unmecanismo de tipo no-competitivo. En resumen, la inhibición de los GABAcR por picrotoxina tendría un mecanismode acción no-competitivo o mixto, y dependiente del uso aunque menos que los GABAaR. Los GABAcR son sensibles a la modulación por iones trivalentes de la serie de los lantánidos (L) que producen unincremento en las respuestas a GABA. En un estudio previo se caracterizó la acción de uno de los elementospertenecientes a los L, lantano (La³+); mientras que en este trabajo se analizaron los efectos de otro, lutecio (Lu³+). Yaen experimentos preliminares, se observó que la acción de Lu³+ sería más compleja ya que produjo un aumento rápidode la corriente, seguido de una atenuación durante la aplicación del ión sobre la respuesta a GABA. Lu³+ provocó unaaumento en la afinidad aparente por GABA (0.4 ǂ 0.1 µM) y un incremento en la respuesta máxima a concentracionessaturantes de agonista. También se evaluó cómo afectaba la presencia de Lu³+ a la acción de ciertos antagonistas, comoparámetro de la función de los GABAcR. El antagonista competitivo, TPMPA, inhibió las respuestas evocadas por GABA en presencia de Lu³+ con una potencia semejante a lo observado en ausencia de este ión. No obstante, no tuvoun efecto protector de la atenuación de la respuesta mediada por Lu³+, sugiriendo que este proceso sería operado poreste ión independientemente de GABA. Las respuestas evocadas en presencia de Lu³+ también fueron sensibles apicrotoxina pero con caracteristicas diferentes a lo ya descripto. Se elaboró, además, un modelo de gating de los GABAcR y de la acción de Lu³+, donde se propone la existencia de dos estados abiertos, revelado por la presencia deeste ión, que además mediaría un proceso de desensibilización independiente de GABA. Los estudios existentes sobre la cinética de los GABAcR fueron hechos con técnicas de pobre resolución temporal, ypor esto decidimos realizar esta serie de experimentos en parches de membrana con la técnica de patch-clamp en laconfiguración outside out. Las respuestas al GABA obtenidas con esta metodología presentaron un curso temporalcaracterístico de los GABAcR: activación y de-activación lentas, de varios segundos de duración, con escasadesensibilización. La afinidad aparente por GABA calculada fue 4.0 ǂ 0.8 µM con un n de Hill = l.7 ǂ 0.5. La relacióncorriente-voltaje fue lineal, y el canal mostró una permeabilidad alta a cloruro. Se evaluó la sensiblidad de los GABAcR en parches de membrana a una serie de agonistas (TACA, β-alanina, glicina), antagonistas (TPMPA,picrotoxina, quercetina, zinc) y moduladores (La³+ y Lu³+) conocidos. Todos estos produjeron efectos similares aldescripto previamente. Un estudio más profundo de la cinética de de-activación de las respuestas mostró que aconcentraciones altas de agonista, la relajación era mejor descripta por ecuación de decaimiento exponencial desegundo orden; mientras a dosis cercanas al EC50,de primer orden. Esto sugeriría un modelo de gating con dos estadosabiertos con distinta cantidad de moléculas de agonista unido, que fue evaluado realizando simulaciones numéricas dela actividad del receptor.

Descripción: En este trabajo se presenta una extensa caracterización del receptor colinérgico nicotínico α9, utilizando elsistema de expresión heteróloga de ovocitos de Xenopus laevis. Durante la mayor parte del desarrollo delmismo se tuvo como hipótesis de trabajo que α9 sería la única subunidad integrante del receptorcolinérgico nativo de las células ciliadas externas de la cóclea y de las células tipo II del aparato vestibular. Este receptor es responsable de la inhibición de la actividad de dichas células, mediada por la inervacióncolinérgica eferente coclear y vestibular. En 2001 se identificó y clonó una nueva subunidad de receptoresnicotínicos, α1O. Esto condujo a modificar la hipótesis de trabajo, para incluir la posibilidad de un receptorheteromérico α9αl0 en las células ciliadas, pero sin excluir la posible existencia del receptor homoméricoα9 en otros tipos celulares. La caracterización del receptor homomérico recombinante α9 incluyó el estudio de las propiedadesfarmacológicas del mismo. En particular, se demostró que a pesar que α9 es un miembro de la familia degenes de subunidades de receptores nicotínicos, el receptor no puede ser clasificado farmacologicamentecomo nicotínico o muscarínico y presenta un perfil farmacológico mixto, en coincidencia con lo reportadopara el receptor nativo de las células ciliadas. Se mostró que tanto agonistas colinérgicos no específicoscomo la acetilcolina y el carbacol, agonistas nicotínicos como el metilcarbacol, la suberildicolina y el DMPP y agonistas muscarínicos como la oxotremorina - M, el metilfurtretonio y el McN-A-343 soncapaces de activar al receptor α9. También la colina, un producto de degradación y precursor en la síntesisde la acetilcolina, activó al receptor α9. Notablemente, agonistas nicotínicos clásicos como la epibatidina,la nicotina y la citisina bloquearon al receptor α9 (IC50 : 1.6±0.l, 31.5±l.0 y 43.1±3.5 µM,respectivamente). Se estudió la sensibilidad de α9 a diversos antagonistas nicotínicos. En particular lametillicaconitina, un antagonista selectivo de receptores nicotínicos neuronales sensibles a la α-bungarotoxina,inhibió las respuestas de α9 a la acetilcolina en forma competitiva (IC50 : l.l±0.2 nM),siendo este el antagonista más potente de α9 hasta ahora reportado. Se demostró también que el receptor α9es bloqueado tanto por agonistas como por antagonistas muscarínicos con el siguiente orden de potencia:atropina (IC50: l.0±0.1µM, ) ~ galamina (IC50: 1.5±0.2 µM) > pilocarpina (IC50: 76±9 µM) ~ muscarina (IC50: 84±6 µM) ~ betanecol (IC50: 105±14 µM), un rango de concentraciones comparable con las requeridas para el bloqueo producido por compuestos nicotínicos. Por otra parte, se demostró la inhibición de la respuesta a acetilcolina de los receptores α9 y α9α10 pormorfina y péptidos opioides. Estos péptidos estarían presentes en la inervación eferente a las célulasciliadas del aparato vestibular y modularían su actividad a través de su acción sobre α9αl0. Se demostró también que el receptor homomérico α9 es bloqueado por Ca++ extracelular (IC50: 100±10 µM a -70 mV), en forma dependiente del potencial de membrana. Este resultado es relevante para lafisiología de las células ciliadas. Mediante la construcción de una subunidad quimérica entre α9 y el receptor de serotonina de tipo 3A, seaportó evidencia de que el dominio aminoterminal de α9 es el determinante estructural de la interacción deα9 con agonistas y antagonistas. También se construyó una subunidad quimérica mediante el empalme deporciones de las subunidades α7 y α9. Los resultados obtenidos con las dos quimeras mencionadas, indicanque los determinantes estructurales de la particular relación corriente - potencial de α9 (relacionada con lapresencia de Ca++ extracelular), estarían confinados a la región que se extiende desde el comienzo delsegundo segmento hidrófobo, supuestamente transmembranal, hasta el extremo carboxiterminal. Seidentificó un residuo en el segmento hidrófobo M2 (Q261) involucrado en la rectificación de la corriente yen el bloqueo por el Ca++. En suma, el presente trabajo demuestra que el receptor α9 presenta una farmacología mixta nicotínica - muscarínicacoincidente con la del receptor colinérgico de las células ciliadas. Esta coincidencia incluyetambién la sensibilidad de los receptores que contienen la subunidad α9 a péptidos opioides y a cationesdivalentes. Por otro lado aporta evidencia de la importancia clave del dominio aminoterminal en determinarcaracterísticas farmacológicas de α9 y del segundo segmento hidrófobo en las propiedades del canal de losreceptores α9 y α9α10.

Descripción: El Ca²+ juega un papel preponderante en la regulación de numerosos procesos celularestales como el acoplamiento excitatorio-contráctil, la secreción hormonal, la expresión degenes y la proliferación celular. Además, en la neuronas, el Ca²+ que entra a través de los canales de Ca²+ voltaje-dependientes (CCVD) participa en la transmisión sináptica como una señal intracelular quedispara el proceso de liberación de neurotransmisor en respuesta a la despolarización de lamembrana. Así, entre todos los procesos celulares en los que participa el Ca²+ en el sistemanervioso, el papel que cumple en la exocitosis es, sin lugar a dudas, uno de los másprominentes. Los canales de Ca²+ voltaje-dependientes (CCVD) conforman una de las familias decanales iónicos más heterogéneas. Muy probablemente, esta característica refleja la grandiversidad de procesos celulares en los que participan. De acuerdo a sus propiedades de activación, los CCVD han sido divididos en dos clases:los canales que se activan por pequeñas despolarizaciones (low voltage activated, LVA) ylos canales que requieren grandes despolarizaciones para su activación (high voltageactivated, HVA). Entre los HVA, han sido descriptos al menos tres tipos de canales de Ca²+: los CCVD detipo L, los de tipo N y los canales de tipo P/Q, distinguidos por su sensibilidad abloqueantes. Los CCVD de tipo L son sensibles a las dihidropiridinas, compuestos quepueden actuar como antagonistas o agonistas; los de tipo N son canales bloqueados por latoxina w-CgTx GVIA, y los de tipo P/Q son inhibidos por las toxinas w-AgaIVA y FTX. Uno de los objetivos de este trabajo es la caracterización farmacológica de los CCVD enlos terminales sinápticos del cerebro de dos especies de vertebrados, el pollo y la rata. En elprimer capítulo se determina la sensibilidad a los distintos bloqueantes que presenta el influjode Ca²+ voltaje-dependiente en sinaptosomas de cerebro anterior de pollo y corteza frontalde rata. En los terminales sinápticos de corteza frontal de rata, los CCVD que median la entradade Ca²+ inducida por despolarización ([K]c= 40 mM) son de alto umbral de activación ysensibles a w-AgaIVA, FTX y altas concentraciones de w-CgTx MVIID, características delos CCVD de tipo P/Q. Contrariamente, el influjo de Ca²+ voltaje-dependiente en los terminales nerviosos delcerebro anterior del pollo es mediado por CCVD de alto umbral de activación sensibles a w-CgTx GVIA. Sin embargo, este proceso también es bloqueado, aunque parcialmente, por FTX, w-AgaIVA y w-CgTx MVIID. Estos resultados presentan evidencias de la existencia,en los terminales sinápticos del cerebro anterior del pollo, de un canal de Ca²+ concaracterísticas farmacológicas no descriptas anteriormente. Por otro lado, los CCVD son componentes de membrana altamente regulados y, comoconsecuencia de la modulación de su actividad, los procesos que dependen de la entrada de Ca²+ a través de los mismos puede ser ajustados de manera muy precisa. Otro objetivo deeste trabajo es el estudio de la modulación de la actividad de los CCVD de los terminalessinápticos. En el capítulo 2 se determinan los posibles cambios en las propiedades del influjo de Ca²+a través de los CCVD en los terminales nerviosos aislados a partir de corteza frontal de rata,producidos como consecuencia del tratamiento de los animales con el ácido 3-mercaptopropiónico (MP), una droga convulsivante que provoca una generalizadahiperactividad neuronal. Los animales fueron sometidos a dos tratamientos distintos con MP: tratamiento agudo (1 dosis MP 150 mg/kg) y tratamiento crónico (1 dosis MP 35 mg/kg cada 24 horas,durante 3 días) y estudiados en los periodos de convulsión o postconvulsión. Las propiedades farmacológicas de los CCVD que participan del influjo de Ca²+ a losterminales sinápticos no son modificadas como consecuencia del tratamiento agudo ni deltratamiento crónico con MP. Más aún, tampoco es afectada significativamente ladependencia de la captación de Ca²+ con la concentración extracelular de KCl en losanimales tratados con MP, lo que podría sugerir que las características de activación de los CCVD tampoco son alteradas por el tratamiento. En el estudio desarrollado en el capítulo 3, se determina el efecto modulador del péptidoatrial natriurético (ANP) sobre la actividad de los CCVD de los terminales sinápticos dehipotálamo de rata. ANP, además ser liberado por los miocitos atriales en respuesta alestiramiento de la pared del atrio, es sintetizado y liberado en el sistema nervioso central, enparticular, en el hipotálamo. En este trabajo se analiza el efecto del ANP sobre la entrada de Ca²+ a los terminalesnerviosos aislados de hipotálamo de rata. ANP inhibe potentemente y de maneradependiente de la concentración la entrada de Ca²+ voltaje-dependiente (IC50= 2 nM). Esteproceso es también bloqueado por la toxina w-Aga IVA, indicando que los CCVDinvolucrados en el influjo de Ca²+ a los terminales de hipotálamo podrían pertenecer a lostipo P/Q. Por otro lado, otro péptido de la familia de los factores natriuréticos, el péptidonatriurético tipo C, no afecta el influjo de Ca²+ en esta preparación, lo que sugiere laespecificidad de la acción de ANP. En este trabajo tesis se identifican las propiedades farmacológicas de los CCVD determinales sinápticos del SNC del pollo y la rata, y de esta manera, los resultados aportan ala comprensión de los componentes involucrados en la transmisión sináptica en el SNC devertebrados. Por otro lado, este estudio proveen evidencias del papel modulador del péptido atrialnatriurético sobre la actividad de los CCVD de los terminales sinápticos de hipotálamo derata. Estos resultados podrían facilitar la comprensión de los efectos fisiológicos de ANPsobre el sistema nerviosos central y de los mecanismos involucrados en el control de lavolemia y la presión arterial.

Descripción: Aspergillus flavus es uno de los principales productores de aflatoxinas, carcinógenode grado 1. La Argentina es un país agrícola donde el cultivo de maní (Arachis hypogaea)es uno de los más rentables, pero también uno de los más susceptibles de ser atacados por Aspergillus. El origen del maní cultivado proviene de Argentina y Bolivia, donde seencuentran distribuidas las especies nativas del género y sobre las cuales no existenestudios sobre los hongos productores de micotoxinas asociados. Por primera vez se realizó un relevamiento de especies nativas de Arachis y seaislaron Aspergillus de la sección Flavi, comparando la diversidad fúngica de las especiesnativas y cultivadas. Se estudió la estructura poblacional de A. flavus de semillas de maní en base a latécnica de compatibilidad vegetativa, potencial toxigénico y producción de esclerocios detipo S o L. Se llevó a cabo una revisión de la sección Flavi utilizando característicasmorfológicas, filogenia molecular y perfil de producción de extrolitos. Los resultaron mostraron que existen diferencias en la proporción y especies de lasección Flavi asociados a las especies de Arachis. Mas del 90% de A. flavus produjeronaflatoxinas y cerca del 100%, ácido ciclopiazónico. Las cepas S produjeron aflatoxinas tipo B y G. El porcentaje de las cepas L es mas alto que el de las cepas S. La presencia de unalto numero de VCGs con un solo aislamiento y el bajo número de grupos decompatibilidad vegetativa que incluyeron aislamientos de diferentes zonas agroecológicasdemostraron la alta diversidad poblacional de A. flavus en nuestro país. Cepas tipo L y S de A. flavus actúan de diferente manera, presentan diferencias morfológicas, perfil deproducción de extrolitos y quedan agrupadas en diferentes clados. Las especies nativas de Arachis podrían actuar como reservorios de Aspergillussección Flavi. El alto potencial toxigénico de las especies de Aspergillus y la altadiversidad genética de A. flavus son factores importantes cuando se debe elegir y formularmedidas de control a aplicar en el campo. La heterogeneidad en las poblaciones derivadasde las semillas de maní sugiere que las poblaciones de A. flavus se encuentran bajocontinuos cambios temporales y espaciales. La sección Flavi se caracteriza por la superposición de caracteres entre losmiembros del grupo por lo cual el estudio taxonómico requiere de la utilización dediferentes disciplinas. Del análisis filogenético se concluye que la habilidad de produciraflatoxinas fue perdida (o ganada) varias veces en la evolución de los integrantes de lasección. Se describen 2 nuevas especies.

Descripción: Se desarrollaron películas comestibles antimicrobianas a partir de almidón nativo o modificado de mandioca e hidroxipropil metilcelulosa (HPMC), plastificadas con glicerol y adicionadas con los preservadores sorbato de potasio (KS) y carvacrol (Carv). Para la caracterización de las películas, elaboradas por la técnica de casteo, se realizaron ensayos mecánicos (tracción), se determinaron el color, la solubilidad en agua, la permeabilidad al vapor de agua; se llevaron a cabo estudios de microscopía electrónica, estudios de estabilidad termoquímica y reología (DMA) y, se analizaron los espectros FTIR. Para la evaluación de la actividad antimicrobiana, se realizó el ensayo de difusión de los antimicrobianos a un medio semi-sólido inoculado y se determinó la capacidad de las películas para actuar como barrera a la contaminación externa. En ambos casos se emplearon como microorganismos de prueba Zygosaccharomyces bailii, Lactobacillus plantarum y Pseudomonas fluorescens. De manera general, los resultados mostraron que las películas elaboradas con almidón acetilado fueron más opacas, más resistentes a la tracción y con una tendencia a una mayor solubilidad. Los análisis microestructurales y de DMA mostraron que las películas constituyeron matrices mezcla de biopolímeros con presencia de fases separadas. A su vez, se pudo demostrar la capacidad antimicrobiana de los preservadores frente a los microorganismos testeados con ambos tipos de películas, resaltando que las películas elaboradas con almidón nativo mostraron una mayor eficiencia en la acción inhibitoria frente a las bacterias y a la levadura evaluadas.

Descripción: Fil: Ruzal, Sandra Mónica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Cassanello Fernández, Miryan Celeste. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Los receptores nucleares (RN) son factores de transcripción activados por la unión de pequeñas moléculas lipofílicas que juegan un papel importante en la regulación de diversos procesos biológicos, tales como el metabolismo, el desarrollo y la reproducción. El nematodo de vida libre Caenorhabitis elegans es capaz de ajustar su ciclo de vida basado en su entorno. En condiciones favorables, este nematodo sufre un rápido desarrollo a través de cuatro etapas larvales (L1 a L4), mientras que frente a condiciones adversas, puede tomar la decisión de entrar en un ciclo de vida alternativo (dauer).Este ciclo de vida está regulado por un sistema endrócrino en el cual participa el DAF-12y cuyos ligandos son compuestos esteroidales denominados ácidos dafacrónicos (AD).Si bien este sistema fue descripto inicialmente en C. elegans, se demostró posteriormente que el mismo es funcional en gusanos parásitos. Estudios anteriores demostraron que algunos esteroides sintéticos son capaces de regular el ciclo de vida de C. elegans presentando actividad agonista en gusanos mutantes capaces de abandonar el estadio dauer y retomar el ciclo reproductivo mediante la unión selectiva al DAF-12, y por otro lado presentaron actividad antagonista retrasando el desarrollo en gusanos salvajes. Por lo tanto, es posible pensar que otros compuestos análogos pueden servir para interrumpir el ciclo de vida de los parásitos debido a que poseen una etapa equivalente al estadio dauer que constituye la etapa infecciosa. En esta tesis se estudió la actividad de una serie de compuestos sintéticos esteroidales análogos a los AD con actividad antagonista derivados de los estudiados anteriormente a los cuales se les agregaron cadenas laterales difluorometilo modificadas para modular selectivamente la unión al receptor, y compuestos con actividad agonista mediante otra estrategia simple y rápida que permitió la generación de una pequeña biblioteca de esteroides que tienen α-aminoacilamidas estructuralmente diversas como cadenas laterales. Se caracterizaron funcionalmente a estos ligandos sintéticos mediante ensayos de genes reporteros en células e in vivo en C. elegans. Basados en la idea de que los parásitos tenían el mismo sistema de regulación, se pensó en analizar el efecto de estos compuestos en el tratamiento de parásitos de plantas, en particular del parásito emergente Meloidogyne incognita. Se buscaron genes ortólogos de CeDAF-12 en el proteoma de M. incognita, mediante estudios bioinformáticos. Una vez confirmada la existencia de estos genes por homología, probamos los compuestos agonistas y antagonistas que fueron caracterizados en C. elegans, como blancos del DAF-12 de M. incognita que controlen el ciclo de vida infectivo de este fitonematodo, obteniendo un control efectivo con un compuesto antagonista en plantas de Tomate platense.

Descripción: La envoltura bacteriana de Lactobacillus acidophilus ATCC 4356 tiene las características de una bacteria Gram positiva, pero además posee proteínas de superficie o Surface layers (S-layers), las cuales se asocian con roles de protección contra enzimas hidrolíticas, cambios de pH y estrés, la captación de moléculas y iones, y ayudan a mantener la forma y rigidez de la célula. Además, varios reportes sugieren que en los lactobacilos la S-layer tendría un rol en las propiedades probióticas de las cepas que la poseen, sin embargo las funciones y los mecanismos involucrados están poco descriptos. El objetivo general de esta Tesis doctoral fue caracterizar funcional y estructuralmente la S-layer de Lactobacillus acidophilus ATCC 4356. Los resultados obtenidos permitieron confirmar que la S-layer presenta un comportamiento homólogo a las lectinas, capaz de interactuar con eritrocitos de carnero, células bacterianas, levaduras, virus y células eucariotas. Respecto a los posibles carbohidratos con los cuales interactúa, se observó un comportamiento mixto asemejándose tanto a las lectinas que reconocen quitina/N-acetilglucosamina como a las de reconocimiento de ácido siálico/manosa. Mediante diferentes ensayos, como el clonado y expresión de proteínas o partes de la proteína conjugadas con la proteína verde fluorescente GFP, se logró identificar los dos dominios de reconocimiento a carbohidratos (CRD) ubicados en la porción carboxilo-terminal y predichos del análisis in silico de la proteína. La actividad de lectina depende de la presencia de estos CRD. También quedó demostrado que el ácido lipoteicoico sirve como un ancla para la proteína SlpA. Además, fue posible determinar cómo se modifica la expresión de los tres genes que codifican para S-layer en esta cepa: slpA, slpB y slpX, en respuesta a cambios ambientales como la alta concentración salina. Se observaron cambios en la expresión génica de los ARNm slpA y la slpX pero no slpB. En consecuencia, la cantidad de las proteínas SlpA y SlpX se modifican no sólo por la condición de alta sal (NaCl 0,6 M) sino también por la fase de crecimiento. Por otro lado, en los últimos años se han desarrollado o sugerido diversas aplicaciones biológicas para las proteínas S-layers de Lactobacillus, en este trabajo se pudo establecer que la proteína S-layer disminuye la adherencia y la formación de biopelículas de Pseudomonas aeruginosa en superficies bióticas y abióticas, respectivamente. Además fue capaz de modular la infección de diferentes virus, con una notable actividad pro-viral, facilitando las etapas tempranas del ciclo de infección de tres virus empleados como vectores oncolíticos: el herpes virus simplex tipo 1 (HSV-1), el virus de la estomatitis vesicular y el adenovirus 5. La proteína S-layer también fue capaz de proteger al virus HSV-1 de la inactivación térmica por calor. En conjunto estos resultados aportan a comprender las características estructurales y funcionales de la S-layer, y permiten proponer futuras aplicaciones biológicas.

Descripción: La proteína epididimaria de rata DE es el primer miembro descripto de la familia de proteínas ricas en cisteínas (CRISP) y, por ende, también conocida como CRISP-1. DE se asocia a la región dorsal de la cabeza del espermatozoide durante la maduración epididimaria, migra al segmento ecuatorial bajo condiciones capacitantes, y participa en el proceso de fusión de gametas a través de sitios complementarios presentes en la superficie del ovocito. El primer objetivo de este trabajo fue estudiar la influencia del bicarbonato, ión indispensable para la capacitación, sobre la migración de la proteína DE. En paralelo, se evaluó el efecto sobre otros dos parámetros espermáticos asociados a la capacitación, tales como la fosforilación de proteínas en tirosina y la expresión de la capacidad fusogénica. Los resultados indicaron que si bien los tres parámetros evaluados fueron bicarbonatodependientes, la migración de DE al segmento ecuatorial ocurriría a través de vías alternativas a la clásica cAMP/PKA, involucrada en la fosforilación en tirosina y la capacidad fusogénica del espermatozoide. El segundo objetivo de este trabajo consistió en estudiar los mecanismos moleculares por los cuales DE interactúa con sus sitios en el ovocito. El empleo de fragmentos recombinantes y péptidos sintéticos indicó que el sitio activo de DE residiría en una región de sólo 12 aminoácidos altamente conservada en todos los miembros de la familia CRISP. Finalmente, la relevancia de DE/CRISP-1 para la fertilidad fue estudiada a través de la generación de ratones “knock out” para dicha proteína. El análisis del fenotipo de los mismos indicó que si bien la fertilidad de los animales no se vio afectada, los espermatozoides presentaban una capacidad fusogéncia significativamente disminuida, sugiriendo que otras proteínas con características y/o función similares estarían compensando el efecto observado. En conjunto, estos resultados proveen importante información sobre los mecanismos moleculares involucrados en la interacción de gametas y apoyan la existencia de mecanismos compensatorios con el fin de asegurar el éxito de la fertilización.

Descripción: Las proteínas CRISP (Cysteine-Rich Secretory Proteins) se expresan principalmente en el tracto reproductor masculino de mamíferos y actúan como mediadores del proceso de fertilización. Dos de los cuatro miembros descriptos de la familia, CRISP1 y CRISP4, se expresan en el epidídimo y se asocian al espermatozoide durante la maduración epididimaria. Dado que los ratones knockout (KO) para cada una estas proteínas resultaron fértiles sugiriendo la existencia de mecanismos de compensación, el objetivo de esta Tesis Doctoral ha sido estudiar la relevancia de las proteínas CRISP para la fertilidad a través del empleo de animales deficientes en las dos proteínas epididimarias simultáneamente. Contando con una colonia de animales KO para CRISP1, en primer lugar, se generó y caracterizó una colonia deficiente en CRISP4 no disponible en el laboratorio. Los resultados mostraron que, si bien los machos KO no mostraban defectos en su fertilidad ni en los niveles de fertilización in vivo, exhibían claras deficiencias en su capacidad de fertilizar al ovocito in vitro. Asimismo, los espermatozoides KO presentaron alteraciones en su potencial de membrana, en los niveles de calcio y en distintos parámetros asociados a la capacitación espermática, apoyando la importancia de CRISP4 para el correcto funcionamiento del espermatozoide. Una vez establecida y caracterizada la colonia KO para CRISP4, se generaron animales doble KO (DKO) para CRISP1 y CRISP4 por apareo entre las colonias KO individuales. Nuestras observaciones mostraron que la falta simultánea de las dos proteínas epididimarias produjo claros defectos en la fertilidad masculina, confirmando la relevancia de las proteínas CRISP para la fertilidad del individuo como así también la existencia de una compensación funcional entre proteínas de la familia. Los espermatozoides de animales DKO mostraron un mayor número de defectos respecto a los animales simple KO tanto a nivel de su maduración epididimaria como de su habilidad para capacitarse e interactuar con el ovocito. Mientras que la mayoría de los animales DKO exhibieron solo defectos específicos en la capacidad fertilizante de sus espermatozoides, un tercio de los mismos mostró un inesperado fenotipo de epidídimo-orquitis, con niveles alterados de moléculas inflamatorias y espermatozoides no viables en el epidídimo. Diferentes estudios realizados con el fin de esclarecer el origen de los fenotipos observados mostraron que los ratones DKO exhibían claros defectos en la diferenciación del epitelio epididimario y acidificación luminar que resultaron más severos en los animales con fenotipo inflamatorio, apoyando a estos defectos como posibles responsables de los diferentes fenotipos observados. Experimentos realizados con células en cultivo demostraron que CRISP1 es capaz de modular vías de señalización en las células principales, sugiriendo que este sea el mecanismo por el cual las CRISP actúan sobre el epitelio. En conjunto, estas observaciones indican la relevancia de las proteínas CRISP para el funcionamiento del epidídimo y fertilidad masculina, contribuyendo a una mejor comprensión de los mecanismos involucrados tanto en la maduración espermática como en la característica inmunotolerancia del epidídimo, con claras implicancias para la fisiología y patología epididimaria humana.

Descripción: La reproducción sexual en plantas incluye procesos en donde el movimiento de agua y solutos se encuentra finamente regulado, lo cual sugiere la participación de acuaporinas. La existencia de acuaporinas, facilitando estos flujos, provee una base molecular sólida para la regulación del transporte de agua y solutos a través de las membranas y de esta forma establecen conexiones entre dicho transporte, el desarrollo de las plantas y sus respuestas adaptativas a las condiciones a las que se encuentran expuestas tanto a nivel organismo, como tejido e incluso a nivel intracelular. Este trabajo de tesis se centró principalmente en la identificación y caracterización de las acuaporinas potencialmente involucradas en la reproducción desde los órganos reproductivos masculinos en Arabidopsis thaliana. Primeramente identificamos las tres acuaporinas específicas de granos de polen de Arabidopsis, AtTIP5;1, AtTIP1;3 y AtNIP4;1. En base a experimentos funcionales, utilizando ovocitos de Xenopus laevis como sistema heterólogo, pudimos determinar que AtTIP5;1, AtTIP1;3 y AtNIP4;1 son transportadores de agua. AtTIP5;1 y AtTIP1;3 son también transportadores de urea y solamente AtTIP5;1 se encuentra regulado por pH externo. Estudios de localización subcelular evidenciaron que AtTIP5;1 se expresa en mitocondrias de polen. Por otro lado, AtTIP1;3 se encuentra en estructuras intracelulares no vacuolares del tipo vesículares, pero que no participan de mecanismos de endocitosis ni exocitosis. Finalmente, los experimentos fisiológicos in vitro sugirieron un papel de AtTIP5;1 en germinación del grano de polen actuando como regulador negativo. AtTIP5;1, AtTIP1;3 y AtNIP4;1 se vincularon de forma directa o indirecta con el proceso de elongación del tubo polínico, destacándose los efectos más drásticos para AtTIP1;3. En cuanto a los experimentos fisiológicos in planta, encontramos que solamente AtNIP4;1 tiene afectados los parámetros de fertilidad con una reducción significativa en el número de semillas. En el marco de esta tesis doctoral hemos realizado una revisión de la información disponible de acuaporinas de plantas, evaluando los perfiles de expresión de las mismas en los diversos tejidos. Hemos discutido la nomenclatura utilizada para clasificar esta familia proteica y analizado la posibilidad de establecer relaciones filogenéticas y funcionales entre los distintos subgrupos: PIPs, TIPs, NIPs y SIPs. El conjunto de resultados desarrollados en esta tesis, en concordancia con los trabajos publicados en estos últimos años, nos ha permitido aventurar posibles roles en relación con la actividad de transporte de agua y/o solutos de las acuaporinas de polen; que van desde la migración celular hasta el control del daño y prevención de apoptosis. También nos ha permitido generar un modelo sobre el mecanismo de acción de las acuaporinas en el polen relativo a la actividad como transportadores de urea. Este modelo vincula la actividad de AtTIP5;1 y AtTIP1;3 con el reciclado del nitrógeno descripto en polen.

Descripción: La formación de partículas lentivirales resulta de la multimerización de lapoliproteína Gag, la cual contiene toda la información necesaria paraautoensamblarse y brotar al medio extracelular a través de la membranaplasmática. Durante la maduración de los viriones, la proteína cápside (CA), quecorresponde al dominio central de Gag, se condensa generando el core viral quepreserva la integridad del complejo ribonucleoproteico requerido para iniciar unnuevo ciclo de replicación viral. Los virus de la inmunodeficiencia de simios (SIV) y de felinos (FIV) son doslentivirus evolutivamente distantes cuyas proteínas CA no han sido aúnestudiadas. Con el objeto de establecer la relación funcional entre los dominios CA de SIV y de FIV, construimos SIV quiméricos en los cuales la regióncodificante para la CA fue parcial o totalmente reemplazada por su equivalente dela CA de FIV. La caracterización fenotípica de las quimeras nos permitióagruparlas en tres categorías: un grupo formado por virus quiméricos capaces deensamblarse en viriones, pero cuya maduración causa la inestabilidad de la CAde FIV; un segundo grupo representado únicamente por el SIV quimérico llevandoel dominio N-terminal (NTD) de la CA de FIV y que exhibe un fenotipo deensamblado defectivo; y un tercer grupo formado por los virus quiméricos que seensamblan en viriones exhibiendo una CA de FIV madura estable, que incorporanla glicoproteína de envoltura, y que contienen niveles salvajes del ARN genómicoviral y de la transcriptasa reversa. Sin embargo, este último grupo de SIVquiméricos resultó ser no infeccioso debido a defectos en alguna etapa posterior ala entrada viral. Por otra parte, demostramos que el dominio C-terminal (CTD) dela CA de FIV presenta la capacidad intrínseca de dimerizar in vitro y de formaroligómeros de alto peso molecular. Esto, junto con nuestros resultados quemuestran que el CTD de la CA de FIV es suficiente para el ensamblado de lapoliproteína quimérica Gag de SIV, provee evidencia de que el CTD de la CAexhibe mayor plasticidad funcional que el NTD. En su conjunto, nuestrosresultados aportan información relevante sobre la homología funcional entre losdominios CA de las poliproteínas Gag de los lentivirus de primates y de noprimates y contribuyen a nuestro conocimiento sobre cómo han evolucionado losrequerimientos para el ensamblado de viriones infecciosos en los retrovirus.

Descripción: La sumoilación, un sistema de modificación post-traduccional reversible similar a la ubiquitinación, consiste en una cascada enzimática que lleva a la conjugación de SUMO a proteínas blanco. Esta modificación regula procesos como el tráfico intracelular, degradación de proteínas, estructura y replicación cromosómica y regulación de la transcripción. En este trabajo se caracteriza a R-SUME (por “RWDcontaining SUMoylation Enhancer), un nuevo gen con un dominio RWD, clonado de una línea celular hipofisaria sobre-expresora de gp130 con un potencial tumorigénico y angiogénico aumentado. En células en cultivo, R-SUME se localiza tanto en núcleo como en citoplasma e inhibe la actividad transcripcional de Stat3, lo cual podría funcionar como un mecanismo de feedback negativo sobre gp130. Dada la similitud estructural entre el dominio RWD y la conjugasa de SUMO Ubc9, se estudiaron los efectos de R-SUME sobre la cascada de sumoilación. Se observa por Western blot que R-SUME aumenta la conjugación de proteínas por SUMO-1, -2 y –3, efecto que depende de Ubc9. En experimentos de pull-down, R-SUME interactúa con una proteína de fusión GST-Ubc9 aún en ausencia de SUMO, sugiriendo una interacción directa. Esto concuerda con la colocalización de R-SUME con Ubc9 en el núcleo observada por microscopía de fluorescencia. R-SUME estimula la sumoilación de IκB, un blanco de SUMO conocido, in vivo e in vitro, lo cual lleva a una inhibición de la actividad transcripcional de NF-κB. En conjunto, estos resultados indican que R-SUME cumple un rol importante en la regulación de la sumoilación de proteínas, lo cual puede tener un efecto significativo en numerosos procesos celulares.

Descripción: Los túbulos colectores corticales (CCD) del riñón de mamífero juegan un papelcentral en la regulación del transporte de agua-solutos y en el equilibrio ácido-base delorganismo. Si bien muchos estudios han sido realizados para tratar de entender losmecanismos implicados en estos procesos, los mismos no han sido completamenteaclarados. En la presente tesis hemos utilizado a la línea celular RCCD1 (modelo de CCD) para intentar clarificar los mecanismos por los cuales se produce el movimientode agua y la regulación del pHi en este segmento del nefrón. En lo referente al movimiento de agua observamos que la línea celular desarrollaimportantes flujos en ausencia de fuerzas impulsoras osmóticas e hidrostáticas. Demostramos, además, que los mismos ocurrirían por un mecanismo de cotransporteagua-soluto ya que la línea no expresa acuaporinas. Basalmente predominaría un flujosecretor asociado al movimiento de Cl-, HCO3- y K+. La hormona AVP estimularía, a “corto plazo”, una absorción de fluido acoplada a la de Na+ y, a “largo plazo”, un flujosecretor acoplado al Cl- probablemente mediado por el canal CFTR. En cuanto a la regulación del pHi demostramos funcional y molecularmente que lalinea expresa, basolateralmente, las isoformas NHE-1 y NHE-2 del intercambiadores Na+/H+. La NHE-1 sería la encargada de la regulación del pHi ante una carga ácida y la NHE-2 mantendría el pHi basal. En lo que respecta a los intercambiadores Cl-/HCO3-demostramos que la línea celular RCCD1 expresa las isoforrnas AE2, AE3 y AE4. Lasdos primeras se localizarían en la membrana basolateral y la AE4 estaría en lamembrana apical. Funcionalmente AE3 y AE4 se encargarían de mantener el pHi basalmientras que la AE2 se activaría ante cargas alcalinas. Además proponemos que lascélulas RCCD1 tendrían plasticidad en la expresión de sus intercambiadores Cl-/HCO3-. Finalmente mostramos que la AVP es capaz de modular tanto a los intercambiadores Na+/H+ como a los Cl-/HCO3-. Interesantemente hallamos que esta hormona,tradicionalmente asociada a las células principales, podría también regular a lostransportadores Cl-/HCO3- presentes en las células intercalares.

Descripción: La respuesta de las bacterias al estrés osmótico es actualmente de gran interés debido alos aspectos importantes de su aplicación. La mayoría de los estudios realizados enprocariotas se han focalizado sobre la regulación genética y sobre aspectos fisiológicos de laadaptación a la alta osmolaridad. El comportamiento de las envolturas no ha sidoprácticamente estudiado, sin embargo, existen diversas evidencias que sugieren que lacomposición de las envolturas celulares posee un rol importante durante el mecanismo deosmosensado. El objetivo de este trabajo fire el de estudiar el efecto del estrés osmótico sobrela estructura y composición bioquímica y biofisica de las membranas de Bacillus subtilis YB886 utilizando diferentes enfoques como la bioquímica, espectroscopía de fluorescencia ybiología molecular. En esta tesis demostramos que se producen importantes variaciones en la composiciónde lípidos polares y de ácidos grasos (AG) durante la adaptación de B. subtilis. Entre losprincipales fosfolípidos presentes en la membrana de esta especie, se observó que cuando labacteria es crecida en medios hipersalinos se produce una disminución en el contenido defosfatidilglicerol de 40 a 31% y un aumento en el de cardiolipina de 24 a 46%. Además delas variaciones observadas a nivel del grupo polar de los lípidos, se determinó un cambiosignificativo en la composición de AG entre las diferentes condiciones de cultivo. Lascélulas crecidas en el medio hipersalino presentan una marcada disminución en el contenidode AG saturados ramificados y un aumento en el de los saturados lineales. Asimismo, seobservó un aumento en el contenido de los AG monoinsaturados, los cuales representan un 6% bajo condiciones normales de crecimiento y alcanzan un 18% en estrés osmótico. Con el objetivo de caracterizar la estructura y dinámica de la membrana, se utilizarondiferentes técnicas espectroscópicas. Se determinó que en respuesta al estrés osmótico seproduce un aumento en el empaquetamiento de los lípidos de las membranas, hecho que fueevidenciado por medio de las tres sondas fluorescentes utilizadas. No obstante, esta variaciónno se observó en los liposomas preparados con los lípidos extraídos a partir de las células,indicando que el aumento en el empaquetamiento de los lípidos depende de la presencia delas proteínas de membrana. En este trabajo también se determinó que en las membranas de B.subtilis otras propiedades fisicas de la membrana, como la hidratación de la interfaz, cambiaen fimción de la osmolaridad del medio exterior. Además, se construyeron diversas cepas mutantes para la biosíntesis de fosfolípidos. Los resultados obtenidos demostraron la importancia de los lípidos aniónicos (cardiolipina yfosfatidilglicerol específicamente) en la adaptación al estrés osmótico en esta especie. Nuestros resultados indican que la interrupción del gen cls2 provoca una deficiencia total enla síntesis de cardiolipina, sugieriendo que el producto del gen cls2 es la principalcardiolipina síntasa en esta especie. En esta tesis se demostró por primera vez los cambios biofisícos y bioquímicos que seproducen en la membrana de B. subtilis en respuesta al estrés osmótico. Estos cambios serianindispensables para contrarrestar el desbalance osmótico presente entre las células y el medioexterno.

Descripción: Fil: Prélat, Daniel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Se caracterizo el potencial el potencial genotóxico de los agentes fungicidas Tebuconazol, Iprodione y Nanopartículas de plata biosintetizadas, analizando la relación entre la concentración-efecto sobre las variables índice mitótico, anomalías de la mitosis y aberraciones cromosómicas por medio del test de Allium cepa como sistema in vivo. La evaluación de la exposición de las raíces a Iprodione mostraron un patrón de respuesta que indica afectación del sistema segregacional con impacto en el IM a las 30 hs para las concentraciones más elevadas. El análisis estadístico indica que difiere significativamente el índice de metafase y la relación anafase/metafase. Este resultado es compatible con el patrón descriptivo y con la presencia de anormalidades de tipo C- metafase y desordenes en anafase. La exposición a tebuconazol sugiere que existen interacciones durante la interfase, además de las que ocurren durante la mitosis. Estos resultados se corresponden con los valores de índice de metafase y relación anafase metafase que no se ven afectados por la presencia del TCZ en las células expuestas a 4hs, aunque para el tiempo de 30 hs se muestra los valores muestran un patrón inestable en función de las concentraciones. La frecuencia de anomalías de la mitosis se incrementa con las concentraciones siendo la diferencia entre los valores estadísticamente significativa para las 2 concentraciones más elevadas (15 y 30 μg/ml). Los resultados obtenidos para la exposición a Ag NPs indican que las que provienen de Aspergillus niger son capaces de inducir genotoxicidad en términos de anomalías de la mitosis con una prevalencia de anormalidades de tipo C-metafases y desórdenes en anafase. Los patrones de respuesta para el índice de metafase y la relación anafase/metafase se ven afectados respecto al control negativo para la exposición a 30 hs, y este resultado es compatible con disturbios en la segregación.

Descripción: El maíz, Zea mays ssp. mays, se cultiva en todo el mundo y ocupa el tercerlugar entre los destinados al consumo alimentario. La Argentina es el segundoexportador mundial, precedida por los Estados Unidos. Esto coloca a la producciónde maíz como una de las actividades económicas más rentables para nuestro país. En el norte de la Argentina habitan comunidades aborígenes que cultivan razasnativas de maíz. La caracterización genética del germoplasma autóctono de lasrazas de la región noreste de la Argentina (NEA) ha sido prácticamente nula hasta laconcreción de esta Tesis. Con el fin de aportar al conocimiento de la diversidadgenética y la estructura poblacional de las razas nativas del NEA, contribuir a suconservación y evaluar su potencial como reservorio de nuevos alelos, se evaluaron 15 loci microsatélites nucleares en 572 individuos. Los resultados del presenteestudio permiten concluir que: 1) las razas de Misiones se encuentran constituidaspor acervos génicos diferentes, que concuerdan con el tipo de grano que poseen (harinosos y córneo-harinosos vs. reventadores), éstos deberían ser consideradoscomo unidades de conservación diferentes; 2) las razas nativas del NEA constituyenuna reserva de diversidad significativa, con potencial para ampliar la base genéticade los programas de fitomejoramiento; 3) las razas de Misiones no parecen habersufrido un proceso de erosión genética severo en tiempos recientes, ya que losejemplares actuales conservan gran parte de la diversidad detectada en lascolecciones del NEA de los años 1977 y 1978; 4) la comparación entre las razas del NEA y del NOA apoyan la existencia de dos centros de diversidad diferentes en Sudamérica; la comparación con otras razas del Continente Americano avala lahipótesis de ocurrencia de una via de introducción del germoplasma nativo del NEAa través del este de Sudamérica; 5) la ausencia de cromosomas B en las razas del NEA coincide con la constitución cromosómica esperada para el grupo de las razasde regiones bajas.

Descripción: Esta tesis se ha focalizado en resolver el problema taxonómico referido al llamado “complejo fraterculus” del género Anastrepha. Anastrepha fraterculus es la moscasudamericana de la fruta, principal plaga después de la invasora C. capitata, mosca del Mediterráneo. Previo a esta tesis, cerca de 38 especies han sido adscriptas o sonsinonimías de A. fraterculus. Nuestros estudios se han realizado tanto con moscassalvajes como con stocks de laboratorio, aislados por primera vez. El énfasis de la tesisse ha centrado en el estudio detallado dc las características cromosómicas por ser este elcarácter que más confusión ha creado entre distintos autores. A tal fin se analizaroncitológicamente más de 2500 individuos procedentes dc 24 hábitats (frutos/localidad)utilizando un conjunto de técnicas citológicas específicas. Los diferentes estudiosconvergentes (citológicos, bioquímicos y moleculares) sobre el mismo material genéticoy las técnicas de hibridización in situ con fluorescencia posibilitaron el riguroso análisiscariotípico molecular de los stocks y poblaciones. Los principales resultados son los siguientes: - se demostró que —contrariamente a lo que propusieron varios investigadores del área- lospolimorfismos cromosómicos en Anastrepha fraterculus descriptos y analizadosen ésta tesis no son un impedimento para el intercruzamiento (en la naturaleza y enlaboratorio) y representan una sóla especie. - se amplió el conocimiento básico de la variabilidad cromosómica en la especie endistintas poblaciones del Cono Sur: Argentina, Brasil y Uruguay. - por primera vez sc localizó el cluster de ADN ribosomal y se describieron eidentificaron los autosomas de la especie. - Se describieron por primera vez en poblaciones naturales dc Anastrepha mosaicoscitológicos con diferentes niveles de ploidía, atribuyéndoles un rol en la regulación dela expresión génica diferencial durante el desarrollo del insecto. - Hasta donde sabemos, esta es la primera vez que se describieron cromosomas doblediminutos en poblaciones naturales de un invertebrado, atribuyéndoles un rolfisiológico adaptativo. - se determinó que las diferentes variantes cromosómicas no están asociadas a frutoshospederos particulares o a localidades geográficas. - se comprobó que la heterogeneidad de hábitats mantiene la coexistencia de diferentescariotipos y reordenamientos como polimorfismos que se presentan con diferentesfrecuencias en cada población. - se determinó que no existe concordancia entre los datos obtenidos a partir detrampeos y los obtenidos a través de muestreos de frutos parasitados, corroborándoseque el sistema de apareamiento de Anastrepha fraterculus no está basado en losrecursos larvales. Esto es de enorme relevancia para que la determinación dehospederos se realice inevitablemente sobre la base de muestreos de frutosinfestados. El estatus de plaga debe depender del registro de hospederos.

Descripción: Anastrepha fraterculus es una plaga de frutales de importancia económica en varios países de Sudamérica. Es actualmente reconocida como un complejo de especies crípticas y, particularmente en nuestro país, se ha descrito la presencia de un solo morfotipo (sp. 1) hasta el momento. Estudios citogenéticos previos en esta especie describieron variación de tamaño y patrones de tinción en sus cromosomas sexuales. Esta tesis tiene como objetivo general realizar un análisis exhaustivo del cariotipo mitótico y el complemento politénico de A.fraterculus sp. 1. Los ensayos planificados incluyeron el estudio de la composición y distribución de la heterocromatina, el mapeo de los genes ribosomales y el análisis comparativo de las variantes de cromosomas sexuales encontradas. Asimismo, se desarrolló un análisis poblacional de las variantes cromosómicas (cariomorfos) de A. fraterculus sp. 1, en cinco poblaciones silvestres de las principales áreas frutícolas de Argentina. Este estudio proporcionó información actualizada sobre la frecuencia y distribución geográfica de los cariomorfos descritos hasta el momento y posibilitó su comparación con cuatro líneas de laboratorio. A partir de estos resultados se postularon diferentes hipótesis sobre el origen de los polimorfismos hallados, destacando la importancia del uso de la citogenética para comprender posibles rutas de invasión y dispersión de esta plaga en Argentina. Las deducciones realizadas también permitieron interpretar el efecto de las fuerzas evolutivas que pudieron impulsar los cambios estructurales reflejados en la heterocromatina y en las frecuencias cromosómicas. En conjunto, los resultados obtenidos en esta Tesis Doctoral brindan información relevante sobre la biología y la genética del morfotipo A. fraterculus sp. 1 en nuestro país. Específicamente se aportan herramientas citológicas para la caracterización y selección de líneas de insectos para contribuir con la implementación de técnicas de control sustentables contra esta plaga.

Descripción: En las Angiospermas, la reproducción incluye procesos en los cuales el transporte de agua estáespacial y temporalmente regulado. Durante la microgametogénesis del polen, el contenido deagua del grano de polen comienza a aumentar de manera significativa desde el estadio tempranode la microespora y continúa haciéndolo hasta la deshidratación parcial. El volumen de polen, aligual que el contenido de agua, disminuye durante la deshidratación de las anteras y el polen, seadapta a las condiciones ambientales durante la dispersión y aumenta durante la rehidratación enel estigma. En plantas con estigmas secos, la regulación de la rehidratación del polenproporciona una barrera temprana y eficaz para las polinizaciones incompatibles. El agua, losnutrientes y otras moléculas pequeñas son transportados rápidamente desde las papilasestigmáticas al grano de polen para promover su germinación por mecanismos que aún no seconocen completamente. Luego durante la elongación del tubo polínico, la entrada adicional deagua a través de la membrana plasmática permite el ajuste citosólico de iones (Ca2+, K+, H+ y Cl–) y de la presión de turgencia. Se ha propuesto que las acuaporinas estarían involucradas enel transporte de agua y/o solutos durante la germinación del polen y el crecimiento del tubopolínico. En Arabidopsis thaliana sólo 4 genes (de un total de 35 loci) se expresan específicamente en losgranos de polen maduros y/o tubos polínicos: AtTIP5;1, AtTIP1;3, AtNIP4;1 y AtNIP4;2. Eneste trabajo de tesis se demuestra la participación de AtNIP4;1 y AtNIP4;2 en los procesosasociados a la reproducción. Los genes AtNIP4;1 y AtNIP4;2 presentan alta identidad desecuencia nucleotídica, estructura génica similar (5 exones, 4 intrones) y están dispuestos entándem. A nivel de proteínas, tienen un 84% de identidad aminoacídica, y comparten losmismos dos motivos NPA y el filtro de constricción ar/R (W, V, A, R), involucrados en laselectividad del transporte. Sin embargo, AtNIP4;1 y AtNIP4;2 muestran diferentes patrones deexpresión. Ensayos de PCR en tiempo real demostraron que AtNIP4;1 tiene niveles relativos deexpresión bajos en polen maduro y que AtNIP4;2 presenta un pico de expresión durante laelongación del tubo polínico. Además, flores transgénicas promotorNIP4;1::GUS mostraronuna fuerte actividad de GUS en los granos de polen maduros y persistente en los tubospolínicos, mientras que las flores promotorNIP4;2::GUS mostraron una fuerte actividad de GUS solamente en el tubo polínico. Por lo tanto, nuestra hipótesis es que AtNIP4;1 y AtNIP4;2podrían tener redundancia funcional durante la reproducción, pero desempeñar roles diferentesy específicos en el desarrollo del polen, la polinización y/o fertilización. Con el objetivo de llevar a cabo experimentos fisiológicos in vitro e in planta, se obtuvieronplantas mutantes simples de inserción de ADN-T y se generaron líneas amiARN dobleknockdown. Las plantas simple mutante y doble knockdown mostraron parámetros de fertilidadafectados: reducción del número de semillas por silicua y segregación distorsionada asociadasolamente al gametofito masculino. Además, las plantas doble knockdown mostraron reducciónde la viabilidad y del diámetro de los granos de polen maduros, aumento del número de granosde polen inmaduros (granos de polen uni y bi-celulares), defectos en la rehidratación de polen,reducción de la tasa de germinación y de la longitud del tubo polínico (especialmente encondiciones limitantes de ácido bórico), y aumento del porcentaje de las flores no polinizadas. También se generaron líneas de complementación que expresan las proteínas de fusión eGFPAtNIP4; 1 y eGFP-AtNIP4;2 bajo sus promotores endógenos en el background de susrespectivas líneas simple mutantes. Los análisis de segregación demostraron que estas líneas decomplementación rescatan el fenotipo mutante. Además, mediante microscopía confocal seobservó que la proteínas de fusión eGFP-AtNIP4;1 y eGFP-AtNIP4;2 están localizadas en lamembrana plasmática y en vesículas intracelulares de los granos (AtNIP4;1) y tubos polínicos (AtNIP4;1 y AtNIP4;2). Ensayos de expresión heteróloga de eGFP-AtNIP4;1 y eGFP-AtNIP4;2en ovocitos de Xenopus laevis confirmaron que ambas acuaporinas presentan una bajapermeabilidad al agua y un significativo transporte de glicerol. Ensayos de actividad quinasa invitro demostraron que los dominios C-terminales de AtNIP4;1 y AtNIP4;2 son fosforiladosespecíficamente en Ser267 por AtCPK34, una proteína quinasa dependiente de calcio expresadaen polen, sugiriendo que la fosforilación puede regular su actividad de transporte in planta. Enresumen las evidencias obtenidas en esta tesis doctoral permiten sugerir que AtNIP4;1 estaríainvolucrada principalmente en las etapas del desarrollo del polen, polinización y germinación, y AtNIP4;2 tendría un rol preponderante en la elongación del tubo polínico. Palabras claves: acuaporinas de polen, transporte de agua, reproducción

Descripción: Fil: Salani, Flavia María. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Durante la maduración de los frutos, procesos como la división celular, la expansióncelular y la pérdida de turgencia requieren un control estricto de los flujos de agua. Estos flujos tienen lugar a través del sistema vascular en coordinación con losmovimientos de agua celulares, dando como resultado un fenómeno hidráulicocomplejo. Si bien son pocos los estudios sobre procesos hidráulicos en frutos, se pudocomprobar que en etapas tardías de la maduración se pierde relación con el estadohídrico del resto de la planta. Este fenómeno se asocia a menudo con una alteración opérdida de la función del xilema que en consecuencia determina un descenso en laconductancia hidráulica. Y si bien es sabido que los canales de agua (acuaporinas)expresados en las membranas celulares pueden jugar un rol importante en estosprocesos, su participación específica resta ser elucidada. El trabajo de tesis aquí presentado se centró fundamentalmente en llevar a cabo unestudio integral de la frutilla contemplando aspectos anatómicos, fisiológicos ymoleculares, que nos permitió entender el proceso general del movimiento de agua deeste fruto compuesto en diferentes estadios madurativos. En base a los datos anatómicos y fisiológicos aquí presentados pudimos determinarque no existe en frutilla interrupción de la continuidad física de los vasos del xilema opérdida de funcionalidad de los mismos. El conjunto de resultados aquí expuestos, enconsonancia con los trabajos publicados acerca de la maduración de la frutas, nos hapermitido además exponer y discutir que los cambios en las fuerzas impulsoras seríanresponsables de la disminución de la entrada de agua vía xilema en las frutas maduras. Nuestros resultados también indican que las acuaporinas PIP1 y PIP2 presentan unpatrón de expresión asociado a diferentes etapas de la maduración y que ambossubtipos se encuentran localizados en la misma membrana plasmática. En cuanto a lasposibilidades de modulación del flujo de agua a través de la membrana plasmáticadetectamos la capacidad de regularlo mediante la co-expresión e inhibición por pHcitosólico. En resumen, estos hallazgos integran la dinámica hidráulica en el proceso demaduración como un aspecto que debería ser considerado en el análisis de esteproceso, no solamente para comprender la fisiología del fruto sino también paraaumentar las herramientas que permitan introducir mejoras en el manejo comercial delas frutas.

Descripción: Se caracterizó la musculatura natatoria de nototénidos subantárticos mediante técnicashistoquímicas, determinándose la presencia de cuatro tipos de fibras: SDF, rojas,intermedias y blancas. Se demostró la utilidad de la técnica de la mATPasa para diferenciardistintos tipos musculares. El proceso de hiperplasia muscular cesó al 40 - 70 % de la tallamáxima de cada especie, encontrándose tres patrones distintos de incorporación de fibrasdirectamente relacionados con las tallas finales de las mismas. Las fibras musculares de E.maclovinus y P. tessellata mostraron la misma tasa de crecimiento. Todos los nototénidossubantárticos estudiados presentan valores de flotabilidad propios de especies de hábitatbentónico. El rendimiento natatorio de E. maclovinus fue superior a 10°C que a 4°C. Lavelocidad, aceleración y potencia inercial de los arranques rápidos de E. maclovinus a 2 °Cfueron superiores a los de una especie antártica (N. rosii), y el grado de curvatura delcuerpo y de estiramiento de las fibras blancas similares a los de especies de aguastempladas y tropicales. Los valores energéticos de distintos órganos y tejidos de lasespecies que se separaron antes del tronco ancestral de los nototénidos mostraron valoressignificativamente mayores que los del resto de las especies.

Descripción: Los trabajos científicos que se basan en "hechos" experimentales ydescriptivos tienen un marco teórico dado por una serie de publicaciones previasrelacionadas entre sí, las cuales en su mayoria han sido "juzgadas y aceptadas" porla comunidad científica especializada. En algunas áreas el surgimiento de ideasoriginales y la aplicación de nuevas técnicas han conducido a la producción de unaamplia variedad de publicaciones que a su vez sirven como punto de partida paranuevos estudios. En cambio, en otras áreas, el material previo es escaso y losdesarrollos nuevos deben sustentarse en estudios que son menos específicos, aunquepermiten hacer comparaciones dentro de ciertos límites. Un ejemplo de esto último esel caso de los reptiles, que entre los vertebrados es un grupo poco estudiado, a pesarde que algunas especies llegan a tener gran valor comercial y otras, como lasculebras, puedan servir como modelos biológicos. En este trabajo se tomará como modelo a la culebra Waglerophis merremii, sedescribirá la morfología e histología de la glándula adrenal poniendo un interésprincipal en el tejido cromafin. Dicho nombre deriva de la reacción positiva que seobserva en estas células cuando se emplean sales de cromo (Henle, 1865), las cualesreaccionan con las catecolaminas que se sintetizan y almacenan en los gránulossecretorios. El tejido cromafin está formado por dos tipos de células, unas quesintetizan adrenalina y otras noradrenalina (Hillarp y Hökfelt, 1953; Eränkö, l955a, b). En la mayoría de los vertebrados (anfibios, aves y mamíferos) ambos tiposcelulares se encuentran mezclados en la glándula adrenal, en cambio en los reptilesposeen una ubicación diferencial. La glándula adrenal de la W. merremii tiene formacilíndrica y alargada, está compuesta por dos regiones relativamente separadas, unapequeña dorsal y otra ventral que constituye el cuerpo principal de la glándula. Laregión dorsal es un delgado cordón longitudinal compuesto por célulasnoradrenérgicas. El cuerpo principal de la glándula se conforma por dos tipos detejidos, el adrenérgico y el interrenal (que equivale al cortical de mamíferos). En un principio analizaremos el desarrollo de las células que dan origen altejido cromafin y se comparará su evolución en los distintos grupos de vertebrados. Luego se estudiarán las relaciones que posee con el resto de los elementos quecomponen la glándula adrenal y su posible rol a partir de la descripcióninmunocitoquímica de los componentes celulares, nerviosos y vasculares. En anfibios, reptiles, aves y mamíferos, el tejido cromafin forma la glándulaadrenal y en menor medida se distribuye en acúmulos celulares en distintos tramosdel sistema vascular y del sistema nervioso. En cambio en los vertebrados inferiores (ciclóstomos y peces) el tejido cromafín se distribuye en distintas regiones delcuerpo, principalmente en los grandes vasos y en el sistema simpático, no se observaaún la organización de un órgano secretor aunque hay una incipiente polarizaciónhacia la región renal.

Descripción: La manzana (Malus domestica) es una de las frutas más consumidas a nivel global. En Argentina la principal zona de producción está localizada en el Alto Valle de Río Negro, seguida por Neuquén y Mendoza, mientras que en España se centra en Cataluña, Aragón y Galicia. En ambos países es una de las principales frutas de exportación e industrialización. El control de calidad de las manzanas, fundamentalmente en la postcosecha, es crítico, ya que es donde comúnmente se produce la enfermedad del “moho azul” causada por Penicillium expansum. Esta enfermedad causa grandes pérdidas económicas debido al deterioro de la fruta y la producción de patulina, que es una micotoxina. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la existencia de diferencias morfológicas entre aislamientos de Penicillium expansum de diferente origen geográfico y evaluar la utilidad de diferentes marcadores moleculares para caracterizar su diversidad genética. Se estudiaron, 59 aislamientos de Argentina y 55 de España, que fueron caracterizados morfológicamente y molecularmente mediante el análisis filogenético de secuencias del gen ITS (rRNA 16S y 23S) y dos regiones del gen β-tubulina (Bt2a-Bt2b y Bt-T2m-Up - Bt-LEV-Lo1). La caracterización morfológica no mostró diferencias entre los aislamientos españoles y argentinos. Las secuencias de los genes ITS y beta tubulina (Bt2a x Bt2b) no presentaron variabilidad entre los aislamientos de Argentina y España. Las secuencias obtenidas con los primers Bt-T2m-Up y Bt-LEV-Lo1 de 31 aislamientos españoles y 36 argentinos mostraron diferencias entre los mismos, y los polimorfismos revelaron 30 haplotipos. Los aislamientos de Argentina se diferenciaron en 14 haplotipos mientras que los aislamientos españoles se separaron en 16 haplotipos. Algunos haplotipos presentaron una amplia distribución mundial (Argentina, España y Canadá) con variaciones en su abundancia relativa mientras que otros solo se detectaron en Argentina o en España. El análisis de los haplotipos permitió identificar la forma en que se distribuye esta diversidad. Los índices de diversidad de Shannon (H´=2,142; H´=2,402) y Simpson (SiD=0,859; SiD=0,895) para aislamientos argentinos y españoles respectivamente, indican que la diversidad de Penicillium expansum en España es mayor que en Argentina. Esta distribución podría explicarse tanto por la existencia de intercambio de haplotipos entre distintos países, así como por la existencia de haplotipos adaptados a las condiciones ambientales o a los genotipos de las manzanas cultivadas en cada región u orígenes geográficos.

Descripción: Polipéptidos relacionados con la interacción hospedante-patógeno en el sistema trigo-roya de la hoja Un problema central de la fitopatologia es esclarecer losmecanismos de defensa a las enfermedades. Se reconoció lapresencia de genes específicos que interactúan determinando eltipo de interacción. Los mecanismosmoleculares que determinansi una interacción es compatible o incompatible no han sido aúnsuficientemente dilucidados. Se postula que los mRNAs yproteinas especificos codificados por estos genes, seinducirían en una etapa temprana en el reconocimiento de ambosorganismos. El sistema trigo-roya de la hoja fue elegido como modelopara el estudio de relaciones hospedante-patógeno altamenteespecíficas. Se utilizaron dos lineas isogénicas de trigo (Triticum aestivum) y tres clones genéticamente relacionadosdel patógeno (Puccinia recondita tritici). Este material confondo genético común permite la identificación de polipéptidosy de mRNAs específicos inducidos a causa de la infección con elpatógeno. En primer lugar se caracterizaron los cambiospolipeptidicos inducidos a lo largo del proceso de infección através del marcado “in vivo“ con 35S-Metionina de proteínassintetizadas "de novo“. En segundo lugar se caracterizaron losmRNAs inducidos en las distintas interaccioneshospedante-patógeno a través de la síntesis "in vitro” depolipéptidos en un sistema libre de células. Se analizaron lospatrones electroforéticos de estos polipéptidos en gelesdesnaturalizantes de poliacrilamida y posterior fluorografia. Curvas de tiempo mostraron que los primeros cambiospolipeptidicos tanto "in vivo“ como “in vitro” se detectaronhacia el tercer día del proceso de infección. La comparación deseis interacciones caracterizadas y sus respectivos controlessin inocular permitió asignar la inducción o disminución dedeterminadas bandas polipeptidicas a interacciones entregenes/alelos del hospedante y genes del patógeno. En estecontexto se detectó: a) inducción específica tanto a nivel de RNA como deproteinas en interacciones compatibles (bandas de 85, 15 y 24kDa) e incompatibles (bandas de 39 y 21,5 kDa). b) disminución específica de polipéptidos "in vivo” (52 y 37 kDa) e “in vitro" (34 kDa). c) dos mRNAs (20,5 y 32,5 kDa) inducidos especificamente enlas interacciones que involucran a la raza F01independientemente del hospedante. Se concluye la existencia de asociaciones entre mRNAs yproteinas inducidas con interacciones compatibles comoincompatibles por lo que el reconocimiento específico para elsistema trigo-roya de la hoja podría estar determinado por unasu otras (o ambas) según los genes interactuantes. Se aislaronclones de cDNA diferenciales correspondientes a RNA mensajerosinducidos en el sistema compatible Gamma 1R-F01 hacia el dia 5del proceso de infección que codificarían para polipéptidosespecíficos de interacción o específicos de raza. Estos clonespodrán ser utilizados para llegar a aislar los genes queintervienen en el reconocimiento de hospedante y patógeno. Simultáneamente se identificó un marcador génicocorrespondiente a una secuencia codificante de una proteina dereserva (gliadina) que está ligada a alguno de los genes dereacción a roya de la hoja y que podría utilizarse como víaalternativa para aislar los genes de interés.

Descripción: La exocitosis de gránulos corticales (EGC) es un tipo de secreción regulada por Calcio que involucra un proceso de fusión de membranas esencial para la fecundación. Luego de la fusión del espermatozoide, los gránulos corticales son exocitados y liberan su contenido al espacio perivitelino. Esta secreción difunde hacia la zona pelúcida, y la transforma en una barrera física, evitando así la poliespermia, y asegurando un desarrollo embrionario normal. El mecanismo molecular que media la fusión de membranas durante la EGC se encuentra escasamente caracterizado y se cree que es mediado por la vía de las SNARE (SNAP receptors). El objetivo principal de este trabajo fue investigar si las SNAP (soluble NSF attachment proteins) y NSF (N-ethilmaleimide sensitive factor), proteínas clave en la vía de las SNARE, median la EGC en ovocito. El análisis de la expresión génica mostró que α SNAP, γ SNAP y NSF se expresan en ovocitos de ratón. Ensayos de Western blot mostraron que la expresión de estas proteínas se mantiene en niveles similares durante la maduración y activación temprana del ovocito. Su localización fue observada principalmente en la región cortical, enriquecida en GC. Para evaluar la función de estas proteínas en la EGC, se perturbó a las SNAP y NSF endógenas previo a la activación de ovocitos en metafase II. La microinyección de α SNAP salvaje y de la mutante dominante negativa L294A de α SNAP inhibió la EGC estimulada por Estroncio. NEM, un inhibidor irreversible de NSF y la microinyección de la mutante dominante negativa D1EQ de NSF inhibieron la EGC. La microinyección de los anticuerpos anti-α SNAP y anti-NSF fueron capaces de inhibir la EGC. Para comprender el rol de α SNAP en la fertilidad femenina, utilizamos la cepa de ratones hyh (hydrocephalus with hop gait), portadora de una mutación puntual (M105I) en el gen de α SNAP. Debido a que el ratón knockout para α SNAP es letal embrionario, los ratones hyh proveen un modelo único para el estudio de su función in vivo. Los resultados obtenidos indicaron que las hembras hyh presentan una severa reducción en su fertilidad debido a una combinación de defectos producidos por la proteína mutada. Nuestros resultados revelan que α SNAP, γ SNAP y NSF son expresados en ovocitos de ratón, que α SNAP y NSF son requeridos para la EGC y que la mutación M105I en α SNAP conduce a defectos multifactoriales en la fertilidad de las hembras hyh. Estos datos demuestran por primera vez que α SNAP y NSF juegan un rol importante en la reproducción femenina.

Descripción: La fracción flagelar de epimastigotes de Trypanosoma cruzi, enriquecida en flagelos y elementos de membrana, ha mostrado en modelos experimentales murinos las mejores propiedades inmunogénicas, protectivas y no agresivas contra el desafío con el T. cruzi Quizás sólo un pequeño número de los componentes de esta fracción están involucrados en esta inmunidad protectiva en el huésped, en tanto que el resto de ellos podrían actuar en otros procesos esenciales para el parásito. Las señales de calcio juegan un papel preponderante en diversos mecanismos de transducción de señales en parásitos, tanto en relación a la invasión a la célula hospedadora como en los cambios morfo-fisiológicos del mismo a lo largo de su ciclo de vida. Asimismo, la alta conservación de las proteínas moduladoras de calcio en distintos tripanosomátidos, ha sugerido su posible implicancia en dichos procesos de transducción. En este trabajo se describe la caracterización a nivel molecular del gen que codifica para una proteína flagelar ligadora de calcio en T. cruzi, y su versión homóloga en Trypanosoma rangeli. Varios clones de ADN recombinante fueron detectados en una genoteca de expresión construida a partir del ADN total de la forma epimastigote de T. cruzi (clon Miranda/76), en el vector de expresión λgt11 , utilizando suero de conejo anti-fracción flagelar. Dos de esos clones recombinantes fueron seleccionados para la caracterización de sus productos de expresión. La expresión de estos clones recombinantes en bacterias produjo proteínas fusionadas a la enzima g-galactosidasa, las que mostraron poseer epitopes reconocidos por anticuerpos dirigidos contra la fracción flagelar del parásito. La adsorción del suero anti-fracción flagelar por las proteínas expresadas, permitió obtener anticuerpos que identificaron por "inmunoblotting" moléculas de 29 kDa en ambos casos, en homogeneizado total de epimastigotes y fracción flagelar, mientras no reaccionaron con antígenos de Leishmania brasiliensis. Posteriormente, el análisis de la secuencia de bases de ambos fragrnentos confirmaron que los insertos provenientes de ambos clones codifican para una misma proteína de 29 kDa. en T. cruzi. La presencia de este antígeno F29 en la superficie del parásito fue comprobada por inmunofluorescencia. La expresión del gen completo que codifica para la proteína flagelar F29 en el vector pMAL-p2 permitió obtener una proteína recombinante fusionada a proteína de unión a maltosa, que mostró ser ligadora de calcio. Cuando se ensayó la inmunogenicidad del antígeno recombinante F29-MBP, utilizando Bordetella pertussiscomo adyuvante, se observó que esta proteína es capaz de generar una respuesta inmune humoral contra el T. cruzi, demostrada por anticuerpos dirigidos contra la proteína pura y el homogenato total del parásito. Los epitopes generadores de respuesta en F29-MBP fueron reconocidos en un gran número de otras proteínas en el parásito, a igual que se mostraron altamente representados en el T. rangeli. El gen que codifica para la proteína flagelar ligadora de Ca++ F29 mostró encontrarse organizado en al menos 20 copias, altamente conservadas entre cepas pertenecientes a distintos zimodemas, adyacentes una a la otra con una disposición cabeza-cola en el genoma del parásito. Dicho gen se expresa en epimastigotes de T. cruzi transcribiendose a un mensajero policistrónico, el cual podría sufrir un procesamiento post-transcripcional de clivaje y poliadenilación, también observado para otros genes del parásito. El perfil encontrado para diferentes clones y cepas de T. cruzi estudiados por hibridización a cromosomas enteros fraccionados por electroforesis en campo pulsado reveló que el gen que codifica para la proteina flagelar F29 se halla ampliamente representado en T cruzi, mostrando una conservación intraspecífica en las cepas y clones evaluados. Asimismo, estos patrones de hibridización mostraron una alta correlación con la clasificación isoenzimática de las distintas cepas y clones analizadas de acuerdo a su perfil isoenzimático basado en 2, 12, 13 y 19 loci. A su vez, la existencia de al menos dos arreglos de repeticiones de genes, ubicados en un par de cromosomas homólogos fue observada al enfrentar la misma sonda a productos de digestión provenientes de la digestión de cromosomas enteros de distintas cepas, con enzimas sin sitios de corte dentro del inserto. La amplificación por reacción en cadena de la polimerasa sobre ADN genómico total de T. rangeli (aislado LDG) usando como iniciadores de la síntesis oligonucleótidos diseñados a partir de la secuencia completa del gen que codifica en T cruzi para la proteína flagelar ligadora de calcio F29, permitió la obtención de un fragmento de ADN que codifica para una proteína de 23 kDa con alta homología con proteínas flagelares responsables de la unión a Ca2+ en otros tripanosomátidos. La hibridación a ARN de T. rangeli reveló que esta proteína se expresa como un transcripto poliadenilado de 1.6 kb, a raiz, al igual que en T. cruzi, de un procesamiento post-transcripcional. El gen que codifica para TrCaBP en T. rangeli tambien se encontró organizado en al menos 20 copias por célula, en dos cromosomas de gran tamaño en ciertos aislados del T. rangeli, y a dos pequeños en otros aislados. Los resultados presentados demuestran que la información genética que codifica para la proteína flagelar ligadora de Ca2+ F29 del T. cruzi se encuentra altamente conservada en el genoma de otros tripanosomátidos, sin encontrarse presente en el género Leishmania.

Descripción: El Mal de Rio Cuarto es la principal enfermedad del maíz en la Argentina. Es causado porel Mal de Río Cuarto virus (MRCV) y transmitido por una chicharrita de la especie Delphacodes kuscheli. El MRCV pertenece a la familia Reoviridae, género Fijivirus, ytiene la propiedad de multiplicar tanto en plantas de maíz como en el insecto vector. Lasparticulas virales consisten en una cápside icosahédrica formada por una doble capa deproteínas y contiene en su interior lO segmentos genómicos de RNA de doble cadena (dsRNA) llamados Sl a SlO, siendo el tamaño del genoma de aproximadamente 29 kbp. En los últimos años, y en muchos casos en paralelo con el desarrollo de éste trabajo, sehan reportado las secuencias de algunos segmentos de virus relacionados: el MRDV (Maize rough dwarf virus), el FDV (Fiji disease virus), el ODSV (Oat sterile dwarf virus),el genoma completo del RBSDV (Rice black streaked dwarf virus) y del NLRV (Nilaparvata lugens reovirus). En este trabajo se clonaron, secuenciaron y analizaron los segmentos genómicos Sl, S2, S3, S4, S5, S6, S8 y SlO completos del MRCV. Se determinó que todos los segmentosgenómicos analizados poseen secuencias 5’ y 3’ terminales conservadas y característicasdel serogrupo al cual pertenece el MRCV: 5’AAGUUUUU3’ (extremo 5’) y 5’CAGCUnnnGUC3’ (extremo 3’). Adyacente a los extremos conservados se encuentranrepeticiones de 7 a 12 nucleótidos invertidas e imperfectas que son segmento específicas. La predicción de la estructura secundaria de las cadenas codificantes de todos lossegmentos estudiados, muestra que las regiones terminales son capaces de formarestructuras secundarias determinadas y estables que fueron propuestas como señales dereplicación y empaquetamiento en virus del género Rotavirus. Se compararon las secuencias de nucleótidos obtenidas y las secuencias de aminoácidosdeducidas con las secuencias de otros reovirus depositadas en las bases de datos, y seidentificó la presencia de motivos característicos, a menudo indicativos de función. Sedeterminó que el MRCV Sl codifica para una proteína básica de 168,4 kDa que contienemotivos conservados en las RNA polimerasas dependientes de RNA y es homóloga a las RNA polimerasas codificadas por los virus RBSDV, FDV y NLRV, asi como a lascodificadas por miembros de otros géneros de la familia Reoviridae. El MRCV S2codifica para una proteína de 134,4 kDa y posee homología con las proteínas codificadaspor el RBSDV S4, el FDV S2 y NLRV S2. En este trabajo presentamos evidencias de quela proteína codificada en éste segmento es no estructural. El MRCV S3 codifica para unaproteína de 141,7 kDa, y hemos demostrado que es la proteína mayoritaria de la cápsideinterna o “core” viral y posee una alta homología con las proteínas correspondientescodificadas por el RBSDV S2 y FDV S3. El MRCV S4 codifica para una proteina de 131,7 kDa y su función se desconoce. Presenta una relativamente alta homología conmiembros del género Fijivirus como así también con otros miembros de la familia Reoviridae. El MRCV S5 codifica para una proteína de 106,9 kDa cuya función sedesconoce. Esta proteína presenta homología con las proteínas codificadas por lossegmentos S5 del RBSDV y del FDV. El MRCV S6 codifica para una proteína de 90 kDacuya función se desconoce. Esta proteína presenta una llamativa baja homología con lasproteínas codificadas por los segmentos S6 del RBSDV y del FDV. El MRCV S8 codificapara una proteína de 68,3 kDa que contiene un motivo de unión de ATP/GTP que escaracterístico de helicasa. Además la proteína es homóloga con las proteínas codificadaspor el RBSDV S8, el MRDV S7, el OSDV S9 y el NLRV S7, todas con probable funciónde helicasa. El MRCV SlO codifica para una proteína de 63,5 kDa y su probable funciónsería la de proteína de cápside externa. Esta proteína presenta una alta homología con lasproteínas correspondientes codificadas por los segmentos SlO de los virus RBSDV, MRDV y FDV. El análisis de los valores de homología encontrados entre los distintossegmentos del MRCV y los segmentos de virus relacionados, apoyaría la idea de evoluciónindependiente de cada segmento viral. El análisis filogenético realizado con las secuencias obtenidas del MRCV permitióproponer que a pesar de que el MRCV está relacionado con el MRDV y el RBSDV, debeser considerado una especie diferente del género Fijivirus (Distéfano y col., 2002) y no unaraza geográfica del MRDV, como había sido inicialmente propuesto. El análisisfilogenético realizado con las secuencias de aminoácidos de polimerasas representativas detodos los géneros de la familia Reoviridae mostró la existencia de dos grupos evolutivosseparados: uno agrupa a los Orthoreovirus, Aquareovirus, Orbivirus y Rotavirus, y otroagrupa a los Fijivirus, Cypovirus, Olyzavirus y Coltivirus. Se expresaron algunos de los segmentos virales en estudio en bacterias obteniéndoseproteínas de fusión con un péptido rico en histidinas que facilita su posterior purificación. Se obtuvieron antisueros policlonales contra las proteínas codificadas por los segmentos S2, S3, S4 y S6. El antisuero obtenido contra la proteína codificada por el MRCV S3 fuecapaz de reconocer específicamente una de las proteína estructurales presentes enpartículas virales purificadas del MRCV en un ensayo de “Western blot”. Esta proteinacorrespondería a la proteína mayoritaria de la cápside interna o “core” viral. En unexperimento complementario, un antisuero obtenido contra las proteínas de la partículaviral fue capaz de reconocer a la proteína del MRCV S3 expresada en bacterias. Asimismoel antisuero obtenido contra la proteína codificada por el MRCV S3 reconoce una proteínade tamaño similar al esperado en extractos de plantas enfermas. Mediante experimentos deinmunomicroscopía electrónica sobre cortes de hojas de maíz infectadas el con MRCV seconfirmó que la proteína codificada por el S3 del MRCV es una proteína estructural delvirus y se demostró que forma parte del “core” viral El antisuero obtenido contra la proteína codificada por el MRCV 82, reconocióespecíficamente a una proteína de menor tamaño al esperado en extractos proteicos totalesde plantas enfermas. Mediante experimentos de inmunomicroscopía electrónica sobrecortes de hojas de maíz infectadas el con MRCV se confirmó que la proteína codificadapor el S2 del MRCV seria una proteína no estructural presente en los viroplasmas. En experimentos de “Far-Western blot” se observó que la proteína codificada por el MRCV S3 era capaz de interactuar consigo misma, con una proteína de 130 kDa quecorrespondería a la espícula viral de tipo B y con la RNA polimerasa dependiente de RNAcodificada por el MRCV Sl. En Rotavirus se demostró que las proteínas equivalentesinteraccionan entre sí. Los resultados presentados en este trabajo contribuyeron al avance en el estudio del virusque causa la enfermedad del Mal de Río Cuarto, a la clasificación taxonómica del mismo yal estudio de su origen evolutivo. Además los datos obtenidos permitieron el diseño de unaestrategia de resistencia al MRCV en plantas transgénicas de maíz basada en eldesencadenamiento del silenciamiento génico post-transcripcional (PTGS).

Descripción: En las campañas algodoneras 2009-2010 en varias regiones de la provincia de Chaco se detectó una virosis en cultivares de algodón resistentes al cotton leafroll dwarf virus (CLRDV), que producía leve enrollamiento de las hojas y desregulaba la dominancia apical sin afectar la altura de la planta. Se tomaron muestras de plantas de un cultivar resistente (aislamiento M3) y uno susceptible (aislamiento M5) al CLRDV que presentaban la nueva sintomatología y se realizaron ensayos de PCR con primers diagnósticos para tres familias virales que infectan algodón: Luteoviridae, Geminiviridae y Bromoviridae. Además, se usaron primers diagnóstico para la familia Potyviridae ya que son capaces de infectar a más de 200 especies vegetales. Las muestras resultaron positivas cuando se analizó al grupo taxonómico de los Luteoviridae, indicando que el virus desconocido pertenece a esta familia y descartando, en principio, una coinfección con virus conocidos. Se secuenció la región amplificada de 1065 pb y se observó alta identidad de secuencia, tanto en nucleótidos como en aminoácidos, con el CLRDV. En el presente trabajo se completó la secuenciación de ambos aislamientos y se analizó su organización genómica. Ambos genomas virales resultaron de una longitud de 5.866 nucleótidos, presentaron la organización típica de los Polerovirus y se identificaron siete marcos abiertos de lectura (ORFs). Se analizaron las secuencias de nucleótidos y de aminoácidos de ambos aislamientos y las diferencias encontradas entre sí fueron menores al 2%, concluyendo que corresponden a una misma cepa viral. Por otro lado, las proteínas de ambos aislamientos mostraron una identidad de secuencia que variaba entre el 88% y el 98% con respecto a las correspondientes proteínas codificadas por el CLRDV. A pesar que el International Committe on Taxomy of Viruses (ICTV) establece que diferencias mayores al 10% en cualquier producto génico son suficientes para definir una nueva especie dentro del género Polerovirus, los aislamientos M3 y M5 sólo mostraron una baja identidad en la secuencia de la proteína más variable entre las especies del género (proteína P0). Por ese motivo, consideramos que ambos aislamiento corresponden a una cepa atípica del CLRDV, CLRDV-at, que produce distinta sintomatología y es capaz de quebrar la resistencia presente en el germoplasma de algodón que se siembra localmente. Se estudió el origen evolutivo del CLRDV-at con respecto a otras especies de la familia Luteoviridae. Para ello, se construyeron árboles filogenéticos utilizando las secuencias de aminoácidos de la proteína P0, supresor de silenciamiento génico, y la proteína P3, correspondiente a la cápside viral. En ambos dendogramas, los dos aislamientos de CLRDV-at se agruparon en un mismo cluster separados de los aislamientos brasileros del CLRDV y del aislamiento argentino de CLRDV. Con el objetivo de confirmar que el CLRDV-at es transmitido por el insecto vector Aphis gossypii, se tomó una colonia de áfidos de una planta de algodón resistente a enfermedad azul y con síntomas de CLRDV-at y se transfirieron a plantas de algodón de la variedad NuOpal (resistente a CLRDV) y al cabo de 3 semanas se observaron los primeros síntomas de la enfermedad. La presencia del virus fue analizada mediante RT-PCR y posterior secuenciación, confirmando que el CLRDV-at es transmitido por el insecto vector A. gossypii. Con el objetivo de caracterizar al CLRDV-at a nivel molecular y biológico se construyó un clon infectivo de cDNA del virus. El clon infectivo permitió la inoculación del virus vía agroinfección, independizándose de la transmisión por el insecto vector. Se infectaron distintas variedades de G. hirsutum resistentes y susceptibles a CLRDV y 3 semanas postinfección, las plantas desarrollaron hojas en las yemas laterales, las nervaduras se curvaron y las hojas adquirieron una coloración verde oscura. El RNA viral fue detectado en las hojas sistémicas mediante RT-PCR y Northern blot, confirmando la funcionalidad del clon infectivo. Dado que los síntomas no se correspondían completamente con los observados en el campo y con la premisa de que la enfermedad se manifiesta al final del ciclo del cultivo, se infectaron plantas con cuatro meses de desarrollo con el clon infectivo del CLRDV-at. Los síntomas característicos de la enfermedad a campo se observaron a las 3 semanas postinfección y la infección fue confirmada por RT-PCR. En el género Polerovirus, la proteína P0 fue inicialmente descripta como un factor de patogenicidad y recientemente fue caracterizada como supresor del silenciamiento del RNA. Se ha demostrado que la actividad supresora del silenciamiento de la proteína P0 del turnip yellow virus (TuYV), en la planta modelo A. thaliana, está dada por la interacción con las proteínas ASK1 y ASK2. ASK1 y ASK2 son componentes del complejo SKP1-Cullin F-Box (SCF) y pertenecen a la familia de proteínas E3 ubiquitin ligasas. Cuando se produce la interacción del complejo SCF con P0, la proteína Argonauta 1 (AGO1) de la vía del silenciamiento de la planta es ubiquitinilada y degradada por una vía dependiente de autofagia. La interacción ocurre a través del dominio F-Box (LPXXL/IX(10-13)P) que poseen las proteínas P0, y que está presente en el P0 del CLRDV, y parcialmente en CLRDV-at, donde se encuentra mutado el aminoácido Leucina (L) por el aminoácido Valina (V), perdiendo, en parte, el dominio consenso. Para analizar si la proteína P0 del CLRDV-at (P0CLR-at) posee actividad supresora de silenciamiento génico al igual que la proteína P0 del CLRDV (P0CLR), se utilizaron dos sistemas experimentales que permitieron obtener diferente información acerca del mecanismo de supresión. En el primer sistema se evaluó la capacidad de la proteína P0 de inhibir el silenciamiento génico gatillado al agroinfiltrar una segunda copia del transgén de la proteína verde fluorescente de aguaviva (GFP) en la línea 16c de N. benthamiana (expresa la proteína GFP en forma constitutiva) y en el segundo sistema, se estudió la capacidad de la proteína P0 de suprimir el silenciamiento del RNA disparado por secuencias de RNA doble cadena (dsRNA). En ambos sistemas se observó que la proteína P0CLR-at posee actividad supresora del silenciamiento local, aunque su actividad es más suave que la observada en la proteína P0CLR y al igual que esta última, no posee actividad supresora del silenciamiento sistémico. También, se demostró que la proteína P0CLR-at es capaz de interactuar con la proteína SKP y GSK (ortólogos de ASK en N. benthamiana y G. hirsutum) y esa interacción conlleva a la desestabilización de la proteína AGO1. Se ha demostrado que la actividad supresora del silenciamiento de la proteína P0 del TuYV (P0Tu) es menor cuando se realiza el ensayo de supresión con el clon infectivo del virus, posiblemente porque P0Tu presenta niveles muy bajos de expresión durante la infección viral. Para evaluar si P0CLR-at también posee la misma actividad supresora de silenciamiento en el contexto de la infección viral, se realizaron ensayos de coinfiltración, como los mencionados anteriormente, pero utilizando en este caso el clon infectivo de cDNA del CLRDV-at. Cabe destacar que el clon infectivo mostró una mayor actividad supresora con respecto a la observada cuando se expresa P0CLR-at sola, lo que probablemente se deba a que la proteína P0CLR-at es más estable en el contexto de la infección viral, o bien a que el virus posee otra proteína con actividad supresora del silenciamiento. También se estudió la patogenicidad de la proteína P0 en el contexto de la infección de un virus heterólogo, como es el sistema de PVX. Se infectaron plantas N. benthamiana y se observó que las construcciones PVX-P0CLR y PVX-P0CLR-at producían una exacerbación de los síntomas de infección con respecto al PVX wild type pero el PVX-P0CLR-at desarrollaba síntomas más suaves de infección con respecto al PVX-P0CLR. Estos ensayos nos permitieron concluir que las proteínas P0CLR-at y P0CLR no sólo poseen diferencias en su actividad supresora del silenciamiento, sino también en la severidad de los síntomas que producen. A pesar de la alta identidad de secuencia entre CLRDV y CLRDV-at, ambos virus producen distintos síntomas y el CLRDV-at es capaz de sobrepasar la resistencia a CLRDV de las variedades de algodón. Con el objetivo de identificar la(s) proteína(s) responsable(s) del quiebre de la resistencia y del cambio de la sintomatología, se reemplazaron la proteína P4, implicada en el movimiento viral de célula-célula, y la proteína P0 del CLRDV-at en forma individual en el clon infectivo del CLRDV, que estaba disponible en el laboratorio, dando a lugar a las construcciones quiméricas: 35S/CLRDV-MPCLR-at y 35S/CLRDV-P0CLR-at, respectivamente. La construcción 35S/CLRDV-MPCLR-at no fue capaz de infectar plantas de cultivares resistentes a CLRDV, mostrando que esta proteína por sí sola no logra sobrepasar la resistencia; sin embargo, se observó una disminución en la severidad de los síntomas con respecto a las plantas inoculadas con el clon infectivo del CLRDV. La construcción 35S/CLRDV-P0CLR-at logró establecer la infección en variedades de algodón resistentes al CLRDV y los síntomas observados correspondieron a los del CLRDV-at, indicando que la proteína P0 sería la responsable de sobrepasar la resistencia y del cambio de síntomas. Los resultados del presente trabajo de tesis permitieron la caracterización de una nueva variante del virus cotton leafroll dwarf virus, CLRDV-at, que causa la enfermedad azul atípica del algodón, se identificó el insecto vector y la proteína responsable del desarrollo de síntomas y el quiebre de la resistencia. Además, se construyó un clon infectivo de cDNA, que permitirá acelerar la búsqueda de germoplasma resistente en los programas de mejoramiento de algodón.

Descripción: Las enfermedades transmitidas por vectores representan un importante problema de salud pública, la dinámica de tales enfermedades es compleja, ya que diversos factores pueden contribuir a la emergencia de brotes. En esta Tesis doctoral, inicialmente se analizó la presencia de flavivirus en poblaciones de mosquitos de distintas regiones de la Argentina. Luego, se caracterizó una cepa de Culex flavivirus (CxFV), un flavivirus específico de insectos, y se desarrollaron ensayos in vitro e in vivo para evaluar el fenómeno exclusión por superinfección entre CxFV y el virus Nhumirin (NHUV) de reciente descubrimiento, con el virus West Nile (WNV). Los resultados demostraron una alta prevalencia de CxFV en distintas especies de mosquitos del género Culex, y además, señalan la presencia de dos cepas de flavivirus nuevos, aún no descriptos, lo cual demuestra la diversidad de flavivirus que están asociados a poblaciones de mosquitos en la naturaleza. A su vez, se demostró la incapacidad de CxFV para replicar en ratón lactante y en cultivos celulares de vertebrados. Los ensayos de co-infección in vitro entre CxFV y WNV mostraron un efecto inhibitorio por parte de CxFV, sólo cuando la multiplicidad de infección fue mayor para CxFV que para WNV. Se observó, también en ensayos in vitro, un efecto inhibitorio en la replicación de dos cepas de WNV por parte de NHUV. Los ensayos in vivo en Culex pipiens y Culex quinquefasciatus, señalaron una disminución en la tasa de transmisión de WNV en ejemplares Culex quinquefasciatus previamente infectados con NHUV. Como conclusión se remarca la interacción que existe entre flavivirus y se sugiere que la misma podría interferir en la transmisión de flavivirus patógenos como WNV en la naturaleza. Este trabajo provee información básica para estudios futuros de la dinámica de algunas enfermedades transmitidas por vectores en mosquitos y para la exploración de estrategias potenciales de control.

Descripción: La coordinación de la expresión génica entre los genomas nuclear, plastídico y mitocondrial es de importancia crucial para las células vegetales. Un caso particular de la interacción núcleo-plástido está dado por los genes nucleares mutadores de cloroplasto, que inducen un dramático aumento de la tasa de mutación espontánea del plastoma. En esta tesis se estudió molecularmente el plastoma de cuatro mutantes inducidas por el mutador de cloroplastos de cebada en las que no se observaron cambios mayores, ni en el tamaño, ni en el arreglo génico del plastoma. Sin embargo, no debe descartarse en las mismas la presencia de alteraciones menores, como pequeñas deleciones, duplicaciones o sustituciones. Por otro lado, se hicieron estudios de expresión génica en la lámina de la primera hoja de una de ellas, la línea citoplásmica 2 (LC2) caracterizada por presentar retraso en la traducción plastídica durante embriogénesis, afectando el desarrollo temprano de los cloroplastos. En la base y el ápice LC2 presentó: a) incremento en los transcriptos de las ARN polimerasas plastídica (NEP) y mitocondrial; b) incremento en la acumulación de ARN mensajeros para genes transcriptos por NEP; c) menor acumulación de ARN ribosomales plastídicos; d) menor acumulación de proteínas tilacoidales. La acumulación de la ARN polimerasa plastídica (PEP) fue similar al control, al igual que los patrones de sus transcriptos. Se observó expresión diferencial de Rubisco entre células del mesófilo y de la vaina parenquimática del haz vascular en el ápice de LC2. Mediante parámetros de fluorescencia de clorofila se comprobó la alteración temprana y posterior recuperación de la fotosíntesis en LC2. Los resultados aportan nuevas evidencias sobre la relación entre la traducción plastídica y el desarrollo de los cloroplastos y muestran a LC2 como un material experimental útil para el estudio de la traducción plastídica y del efecto de ésta y de los plástidos sobre la expresión concertada de los distintos genomas de la célula vegetal.

Descripción: El objetivo de este trabajo de Tesis es el estudio de la interacción a nivel molecular entrefosfatos (fosfato inorgánico y ácidos fosfóricos y fosfónicos de cadena larga) y superficiesde óxidos dc hierro. El estudio dc la adsorción sobre óxidos de hierro de compuestos quecontienen el grupo funcional fosfato es de gran interés en varios campos de la ciencia quevan desde la química del suelo y las aguas naturales hasta la protección contra la corrosión. Como óxido de hierro modelo se emplearon superficies de hierro pasivadas en medioalcalino y magnetita (Fe3O4), tanto de origen geológico como artificial. geological andartificial. Para el estudio de la adsorción de fosfatos inorgánicos se emplearon soluciones deortofosfato de sodio (Na3PO4, Na2HPO4 y NaHgPO4). La adsorción de ácidos fosfóricos yfosfónicos dc cadena larga fue estudiada a partir de soluciones de acido dodecanfosfórico (DPA) y ácido octadecilfosfónico (OPA), respectivamente. La interacción fosfato/óxido de hierro fue estudiada mediante una variedad dc técnicas talescomo Espectroscopía de Impedancia Faradaica (ElS), Microbalanza de cristal de cuarzo (QCM), Espectroscopía infrarroja de reflexión-absorción por transformada dc Fourier (FT-IRRAS), Espectroscopía infrarroja in situ por transformada de Fourier (Substractively Nonnalized Interracial Fourier InfraRed Spectroscopy, SNIFTIRS), ángulo de contacto, y Espectroscopia electrónica para el análisis químico (ESCA o XPS). Los experimentos SNIFTIRS y QCM indican que a valores altos de pH y bajo controlpotenciostático, los fosfosfatos inorgánicos forman un complejo superficial bidentado,aunque no puede descartarse totalmente la formación de complejos monodentados. Los experimentos de FT-IRRAS y QCM muestran que los ácidos DPA y OPA forman unamonocapa de complejos superficiales bidentados al adsorberse sobre hierro pasivo ymagnetita desde soluciones etanólicas. Estos filmes presentan un nivel de ordenamientobajo, pero continúan ordenándose con el tiempo. Estos resultados son muy interesantes desde el punto de vista de la mejora de la estabilidadde los recubrimientos poliméricos sobre metales. Una parte importante del trabajo presentado aqui fue realizado bajo la dirección del Prof. Dr. Martin Stratmann at the "Institut für Werkstoffwisscnchaften, Lehrstuhl für Korrosionund Oberflächentechnik (LKO), Friedrich-Alexander-Universität Erlangen-Nürnberg", Erlangen, Alemania.

Descripción: Trabajos previos de nuestro laboratorio han permitido caracterizar unafosfoproteína novel (p43), intermediaria en la síntesis de esteroides en lazona fasciculata de la corteza adrenal de rata (Paz C. et al. (1994) Eur. J. Biochem. 224:709-716). En la presente Tesis, se describe la caracterizaciónmolecular de p43 asi como también la regulación hormonal del transcripto. Los resultados obtenidos mostraron que p43 es homóloga a una acil-CoAtioesterasa mitocondrial. La secuencia aminoacídica deducida de la proteína presentó sitios consensode fosforilación para diferentes proteínas quinasas y un motíf para serina Lipasa. Anticuerpos dirigidos contra un péptido sintético que incluye dichomotif y otro contra la región N-terminal de p43, bloquearon la actividadbiológica de la proteína. El transcripto de p43 fue detectado en ovario deratas pseudopreñadas, en zona fasciculata y glomerulosa de adrenal derata, en una línea tumoral de células de Leydig, en cerebro de ratón y enplacenta humana. El tratamiento de ratas con dexametasona (Dx) provocauna disminución en los niveles del ARNm de p43 de manera dosisdependienteen adrenales de rata. El tratamiento posterior con ACTH nosólo revierte el efecto de la Dx, sino que produce un aumento rápido (5 min)en los niveles del mensajero alcanzando un máximo a los 15 min (62%) yretornando a los valores basales a los 30 min posteriores al estímulo. Eltratamiento con actinomicina D o cicloheximida antes del estímulo con ACTHprovoca una disminución o un aumento en los niveles del ARNm de p43respectivamente. Estos resultados relacionan por primera vez que unaactividad de acil-CoA tioesterasa está involucrada en los procesosesteroidogénicos.

Descripción: La leucemia mieloide crónica (LMC) se caracteriza por la activación constitutiva de la quinasa BCR-ABL1. A partir de la introducción del tratamiento con inhibidores de tirosinaquinasa (ITK) específicos, la sobrevida global ha mejorado significativamente. Sin embargo, aún luego de muchos años de tratamiento, los pacientes muestran evidencias de enfermedad residual por la persistencia de una población de células madre leucémicas (LSC). En este trabajo nos propusimos responder dos preguntas acerca de esta población: 1) ¿Es de utilidad clínica la cuantificación de las LSC en los pacientes con LMC a lo largo del tratamiento? 2) ¿Qué características biológicas diferencian a las LSC de sus contrapartes normales, las células madre hematopoyéticas (HSC)? Respecto a la cuantificación de la población de LSC, observamos que los niveles de carga leucémica inicial eran variables entre pacientes, y disminuían en la fracción de células primitivas y progenitoras a lo largo del tratamiento con ITK. A los seis meses de tratamiento, la carga leucémica en la fracción primitiva fue menor en los pacientes clasificados como óptimos respondedores al tratamiento con ITK, vs. aquellos que presentaron signos de advertencia o falla. Esta metodología, basada en la detección del ARNm de BCR‐ABL1 en colonias provenientes de un cultivo de largo término (6 semanas), no fue lo suficientemente sensible para pacientes en RM profunda. Para resolver esta limitación, desarrollamos una metodología capaz de detectar las LSC a nivel de ADN genómico mediante la amplificación del punto de fusión paciente-específico, permitiendo la independización de los niveles de expresión de BCR‐ABL1. Este ensayo podría tener relevancia para la clínica, ya que será utilizado para evaluar la carga leucémica en el contexto del primer ensayo clínico de discontinuación del tratamiento con ITK en Argentina. Respecto a la caracterización molecular de las LSC y HSC, evaluamos la los niveles globales de microARNs en dichas fracciones provenientes de pacientes con LMC al diagnóstico, en comparación con la fracción primitiva y progenitora de dadores sanos, mediante la tecnología de secuenciación masiva. Describimos conjuntos de microARNs diferencialmente expresados, y realizamos la validación de un subgrupo de ellos mediante RT-qPCR en una nueva cohorte de pacientes y dadores sanos. Observamos que la correlación entre ambas técnicas fue baja, y discutimos las limitaciones que pudieron estar implicadas en dicho resultado. El análisis funcional in silico de los microARNs validados reveló una asociación significativa con vías relacionadas a distintos procesos metabólicos. Finalmente, realizamos una búsqueda de microARNs novel a partir de los resultados de la secuenciación masiva, detectando la presencia de un microARN de biogénesis no canónica, derivado del clivaje del ARN pequeño nucleolar SCARNA15.

Descripción: En los organismos eucariotas, la regulación de las complejas interaccionesrequeridas para la diferenciación y proliferación, está mediada en parte porlos sistemas de fosforilación de proteínas. En Trypanosoma cruzi, se hanpodido caracterizar varias vías de transducción de señales a partir de laidentificación y caracterización de sus distintos componentes comoproteínas quinasas (PKA, PKC, Cam quinasa, CDK), adeninililciclasa (AC) yproteína G, entre otros. Dentro de la familia de las serina/treonina quinasas,recientemente ha sido identificada una nueva subfamilia de quinasas Llamadas RAC o PKB, cuya principal característica radica en la similitud deidentidad que existe a nivel de su secuencia aminoacídica con PKA y PKCpor igual. Estas proteínas han sido identificadas en células de mamíferos, Drosophila melanogaster, Caenorabhditis elegans, Dyctiostelium discoideumy Entamoeba histolytica pero no han sido aún detectadas en ningúntripanosomátido. Por lo tanto, nos hemos propuesto clonar el o los genesque codifican para esta nueva proteína quinasa en T. cruzi, para suposterior caracterización molecular y bioquímica y si es posible dilucidarsu probable rol in vivo. Como resultado, hemos clonado el gen que codificapara una proteína quinasa RAC homóloga (PKTc), cuyo tamaño es de 1287pb y codifica para una proteína de 428 aminoácidos. Esta proteína mostrótener entre un 60 y un 70% de homología con otras RAC quinasas. La PKTcrecombinante es capaz de fosforilar a la histona IIAS, y de autofosforilarse,fosforilando específicamente residuos de treonina en ambos casos. Utiliza ATP como dador de fosfatos, requiere exclusivamente Mn²+ para suactividad, su valor de pH óptimo es entre 6-8 y su temperatura óptima esde 37°C. El Km aparente para el ATP resultó ser de 1.6 μM. La presencia dediferentes activadores (Ca²+/Cam) o inhibidores (PKI, H7, GF, staurosporina)no mostró tener un efecto significativo sobre su actividad. Experimentos de inmunolocalización utilizando anticuerpos contra laproteína recombinante, demostraron que la enzima se encuentra anclada enla membrana posiblemente, a través de ácido palmítico. Por otro lado, através de experimentos de Western blot pudimos establecer que la PKTcestá presente en los estadios de amastigote, epimastigote y tripomastigotemetacíclico sin mostrar un patrón de expresión diferencial, que demuestraque esta proteína sería de carácter constitutivo. Experimentos deinmunoprecipitación nos permitirán en el futuro, identificar otras proteínasque interactúan con PKTc in vivo y dilucidar así la vía de transducción deseñales en la que PKTc estaría involucrada.

Descripción: La papa cultivada se encuentra relacionada con un gran número de especiesdel género Solanum con las que frecuentemente se cruza. Por tal motivo, lasaproximadamente 200 especies silvestres que producen tuberculo, constituyenun importante reservorio de genes para distintos propósitos de mejoramiento. Las mismas se encuentran distribuidas en un amplio rango de hábitats y nichosecológicos, constituyendo el Noroeste argentino, una gran fuente degermoplasma. Es conocido que poseen gran variabilidad tanto dentro comoentre especies. La información sobre el grado de relación genética que existeentre las distintas entradas, reviste gran interés para las aplicaciones almejoramiento genético, organización de los bancos de germoplasma.identificación de cultivares, reducción del número de entradas necesarias paraque alberguen en una pequeña muestra, la mayor variabilidad genetica posible,para el mejoramiento molecular, etc. La variabilidad genetica puede medirse utilizando distintas herramientas lasque incluyen datos morfológicos, citológicos, bioquímicos y moleculares. Elobjetivo de este trabajo es evaluar la variabilidad genética de 67 entradassilvestres y cultivadas del género Solanum, coleccionadas en el Banco de Germoplasma de EEA INTA- Balcarce, aplicando metodologías citológicas ymoleculares y contrastar los resultados obtenidos con la clasificacióntaxonómica y su hipótesis evolutiva. Se analiza la utilidad de estasherramientas y la información generada mediante los polimorfismos derestricción correspondientes a los ADNs ribosomales. Se evaluó mediante microdensitometría, el contenido de ADN de individuospertenecientes a 14 especies silvestres del género Solanum con el fin dedetectar diferencias en el valor C. A pesar de que la mayoria de las especiesno mostró diferencias significativas entre ellas (dentro de los distintos gruposde ploidías), pequeñas diferencias fueron detectadas entre algunas de ellas. S.tarijense y S. kurzianum (2.3 pg) difirieron significativamente (0,1%) de S. Spegazzini, S. vernei, S. venturii y S. commersonii (1,9 pg); y S..megistacrobolum (2,2 pg) difirió de S. spegazzinii (1,9 pg) dentro de loscitotipos diploides. Entre los tetraploides el rango fue desde 3,6 pg (S.tuberosum ssp tuberosum cv. Baraka) hasta 4,7 pg (S. tuberosum sspandigena y S. gourlayi) hallándose diferencias significativas al 0,1%. En cuantoa la variabilidad de los genes que codifican para el ARN ribosomal, sedetectaron diferentes tamaños de las subunidades completas, tanto dentrocomo entre especies, y aún, dentro de una misma especie; sugiriendo una altatasa de mutaciones localizada fundamentalmente el extremo 5' del espaciadorexterno. La pérdida del sitio EcoRI del extremo 3'de dicho espaciador en todaslas entradas de S. venturii fue característica de dicha especie. El desarrollo de las nuevas metodologías ha expandido el rango de los ensayospara detectar polimorfismos de ADN con propósitos de "fingerprinting",distancias genéticas, etc. Se han desarrollado distintos marcadoresmoleculares (RFLP, AFLP, SSR etc) con el fin de estudiar las relacionesgenéticas y se evaluó su utilidad en varios cultivos, incluidos la papa cultivada, S. tuberosum ssp tuberosumm. En este trabajo, se ensayaron 4 combinacionesde "primers" de AFLP, 15 sondas genómicas de RFLP y 7 pares de "primers"para SSR; para un grupo de 67 genotipos diploides y poliploides quepertenecen al mismo grupo de especies silvestres y cultivadas. Se compararon las asociaciones generadas mediante todas las técnicas y se las comparó conla clasificación taxonómica tradicional. Se calcularon los indices de contenidopolimórfico promedios correspondiente a cada sistema (con valoresaproximados de 0,25 para RFLP, 0,32 para AFLP y 0.58 para SSR), númerode polimorfismos por ensayo y también se determinaron los alelos comunesentre las entradas diploides y poliploides, incluyendo al cultivar de papa. En términos generales, las relaciones entre las especies variaron según lametodología utilizada. Se observó una gran variabilidad dentro de especies, loque dificultó el establecimiento de las relaciones entre especies. Como seesperaba, las entradas pertenecientes a una misma especie, en general seagruparon con mayor similitud que entre especies, independientemente de latécnica utilizada. También se detectaron asociaciones de individuosconcordantes con la procedencia geográfica. Promediando todos los indices desimilitud obtenidos con los tres métodos. la especie que tuvo menor variabilidadfue S. venturii (0,681) y la de mayor variabilidad S. gourlayii(0,411). Los mejores valores de correlaciones entre los distintos sistemascorrespondieron a AFLP y SSR, en los dos grupos de ploidías, aunque loscoeficientes de correlación entre las matrices de similitud obtenidas mediantelas distintas herramientas no difirieron demasiado. Los valores de correlacionesen los citotipos diploides fueron desde 0,510 (RFLP vs SSR), 0,552 (RFLP vs AFLP), 0,640 (AFLP vs SSR). Considerando todos los citotiposindependientemente de la ploidía, los valores oscilaron desde 0,441 (RFLP vs SSR), 0,505 (RFLP vs AFLP) a 0,629 (AFLP vs SSR). Debido a los altos valores obtenidos en los coeficientes de correlacióncofenéticos (matrices de similitud vs. matrices cofenéticas, AFLP r=0.92; SSRr=0.85; RFLP r=0.78), las asociaciones entre los individuos pueden visualizarsedirectamente a partir del dendrograma. Los AFLP mostraron el mejor ajuste con la clasificación taxonómica, asociandodos especies que pertenecen a la misma serie Yungasensa (S. tarijense y S.chacoense), como así también agrupando más próximo al grupo de referenciaexterno tomate, a las entradas pertenecientes a S. commersonii, consideradacomo la especie más primitiva según la hipótesis propuesta por Hawkes, 1990. Esto quizás sea debido al gran número de bandas compartidas entre elgermoplasma y a la alta cobertura genómica. En el caso de RFLP, seobservaron algunos individuos dispersos, sugiriendo que sería necesarioevaluar un mayor número de sondas. Los SSR en general se utilizan para obtener información dentro de especies.pero no entre especies. Pudo observarse que la mayoria de los loci evaluadosprodujeron amplificaciones, indicando la conservación de las regionesflanqueantes. Sin embargo, el número de repeticiones, no fue muy conservadoentre las distintas especies, transformándolos en inapropiados para establecerrelaciones entre especies, pero si muy útiles dentro de especies. El análisis reverso de los datos, permitió la detección de bandas caracteristicasde especies y también de individuos. Casi todas las especies pudierondiscriminarse con estas bandas, y muchos de los individuos mostraron bandasúnicas. Se evaluaron asimismo el número de bandas novedosas respecto delcultivar Huinkul MAG, en especies como en individuos particulares, pudiendoidentificarse aquellas más distantes genéticamente, que serían potencialmenteinteresantes para aumentar las bases genéticas de los cultivares comerciales. También se determinó es grado de homocigosis de los distintos genotipos diploides, merced al uso de los marcadores de tipo codominantes (RFLP y SSR) mostrando un mínimo de homocigosis de 26% en S. goniocalyx megistacrolobum Oka 3787.

Descripción: Leptospira interrogans es el principal agente causal de la leptospirosis. La enfermedad constituye la zoonosis de mayor distribución mundial debido a que se contrae a través del contacto con ambientes contaminados con orina de animales infectados, donde la vía principal de transmisión es el agua. Las leptospiras patógenas se clasifican en serovares (sv) con diferente seroprevalencias de acuerdo al hospedador y la localización geográfica. A diferencia de lo que ocurre en otros países, en Argentina el serovar mayoritario en bovinos es Pomona. Esta serovariedad produce una infección severa siendo frecuente la mortalidad en terneros. Resultados previos de nuestro grupo, permitieron identificar al serovar Pomona y genotipos asociados, como mayoritarios entre aislamientos provenientes de bovinos, pero también de humanos. Estos resultados son de suma importancia epidemiológica, pero no permiten explicar los atributos patogénicos y de virulencia de este clon. El objetivo de este trabajo fue entonces, estudiar e identificar las bases moleculares y celulares de la virulencia de L. interrogans sv Pomona y establecer cómo contribuyen en su patogénesis. Para ello, se logró la atenuación de la cepa AKRFB Pasaje 1 (P1), perteneciente a dicho clon mayoritario, mediante subcultivos en medio líquido obteniéndose su contraparte atenuada en el Pasaje 19 (P19). La atenuación se confirmó inoculando hámsters (modelo de enfermedad aguda). Los animales infectados con P19 presentaron una sobrevida del 100% a los 21 días post infección (dpi), mientras que los infectados con P1 murieron entre a los 5 y 7 dpi. Los análisis histopatológicos confirmaron lo observado a nivel macroscópico, observándose infiltraciones alveolares e inflamación en tejido pulmonar de animales infectados con P1 y no así en P19. Estos resultados indican la rápida diseminación y colonización de diferentes tejidos por P1, confirmando así su virulencia y su posible transmisión luego de ser eliminada en la orina de los animales. Por otra parte, se observaron tasas diferenciales de crecimiento in vitro entre ambas cepas a favor de P1. Ésta alcanza rápidamente la fase exponencial (7-10 días) entrando en fase estacionaria pasados los 20 días de cultivo. Por el contrario, P19 entra rápidamente en fase estacionaria a los 7 días de iniciado el cultivo. Esto sugiere una mejor adaptación al crecimiento in vitro por parte de P1, en cambio las modificaciones en el genoma de P19 podrían haber impactado en el fitness de dicha cepa a las condiciones cambiantes del medio a través del tiempo. A fin de identificar dichos cambios genéticos se compararon los genomas y transcriptomas in vitro de P1 y P19 utilizando plataformas de secuenciación masiva. Si bien no se identificaron modificaciones de tipo estructural o INDELS (inserciones/deleciones), mediante el análisis de polimorfismos de nucléotido único (SNPs), se identificaron en P19 cambios no sinónimos de aminoácidos en proteínas correspondientes a superfamilias de catalasas (katE), y transportadores de lipoproteínas de membrana externa (lolA), entre otros. El análisis de expresión (RNAseq) identificó 328 transcriptos diferenciales entre P1 y P19, de los cuales 180 corresponden a P1 (54,88 %) y 148 a P19 (45,12 %). Entre los transcriptos sobreexpresados en P1 se identificaron reguladores transcripcionales, reguladores de sistemas de dos componentes, transportadores de membrana, etc. Contrariamente, la mayoría de los transcriptos sobreexpresados en P19 corresponden a genes que codifican para transposasas. Si bien la atenuación de P19 no puede atribuirse a un cambio puntual o a los genes diferencialmente expresados, el conjunto de los mismos podría ser la causa del fenotipo atenuado. Finalmente, y con el objetivo de evaluar la respuesta ante la infección con L. interrogans sv Pomona en un modelo que se aproxime al hospedador último de este patógeno, se utilizaron macrófagos bovinos derivados de monocitos (BMDMs). Las células infectadas con ambas cepas presentaron sobreexpresión de distintos inmunomoduladores, IL-1β, IL-6, IL-10 y TNFα respecto de las células sin infectar, pero cabe destacar que P1 indujo niveles de expresión de IL-10 mayores que P19, lo que estaría relacionado con la persistencia del patógeno como estrategia evasiva del sistema inmune del hospedador. Asimismo, en este trabajo se describieron por primera vez trampas extracelulares de macrófagos bovinos (bMETs) generadas por la infección de leptospiras y se observó que estas estructuras fueron inducidas de manera similar por ambas cepas. Por otro lado, P1 presentó mayor grado de internalización co-localizando con compartimentos endosomales ácidicos tardíos encomparación con P19. Esto también se observó cuando se inhibió la fagocitosis, lo que sugiere un ingreso a las células también por una vía independiente de fagocitosis. En suma, los resultados obtenidos indican una posible subversión de la respuesta inmune innata por parte de P1, y exponen la necesidad de profundizar en los mecanismos de invasión a macrófagos bovinos subrayando la importancia de estudiar al hospedador primario. Además, la identificación de mutaciones puntales y factores de virulencia diferencialmente expresados constituye un punto de partida clave para la generación de diagnósticos diferenciales y nuevas vacunas específicas contra la leptospirosis tanto bovina como humana. Este trabajo permitió entonces, profundizar en el conocimiento de la virulencia de Leptospira interrogans y su patogénesis en el modelo bovino, constituyendo el primer trabajo en su tipo realizado en nuestro país.

Descripción: El interes en el estudio de los herpesvirus bovino (BHV-1) se origina en su considerableimportancia economica, difusióny capacidad para establecer infecciones latentes. BHV-1 corresponde al grupo 1 de los 6 caracterizados en la familia Bovidae. La infección naturalde bovinos con BHV-1 ha sido asociada con afecciones respiratorias (rinotraqueitis infecciosa),genitales (IPV y balanopostitis), del sistema nervioso central (meningoencefalitis), oculares,dermicas, y entericas. A partir de 1981 varias epidemias de meningoencefalitis producidas por un herpesvims (BHV-1) seregistraron en la zona central de nuestro país. El laboratorio ha acumulado datos que indican lapresencia de variantes genómicas y antigénicas. El estudio incluye el desarrollo de un métododiagnóstico rapido y de alta especificidad y la caracterización antigénica y proteica de BHV-1circulantes utilizando ACMsya existentes y geles de poliacrilamida. El estudio de caracterización antigénica y proteica de cepas de campo de BHV-1 circulantes en Argentin,. Chile y Brasil se realizó con el propósito de obtener datos de la epidemiología molecularde BHV-1 en nuestro medio. Se examinaron aislamientos efectuados entre 1982 y 1990 de casos de meningoencefalitis einfecciones genitales y respiratorias. La reactividad de los anticuerpos monoclonales (ACMs) conestos virus se determinó por inmunoperoxidasa indirecta (IPI) utilizando células infectadas in vitrocomo sustrato antigénico, y la caracterización proteica a traves de SBS-PAGE. Los datos obtenidos indicaron que la mayoría de los aislamientos obtenidos de casos neurológicos (8/9) mostraron caracteristicas de BHV-1.3. mientras que todos los genitales poseían patrón BHV- 1.1/2 y 3 mientras que en Chile el tipo 3 no parece tmer importancia epidemiológica. Por otro lado, empleando un panel de ACMs producidos con una cepa tipo 1 de herpes bovino-1 (BHV-1.1) se determinó que, cepas aisladas de casos locales de meningoencefalitis en ternerosposeían caracteristicas antigénicas diferentes a las de cepas prototipo aisladas de cuadrosrespiratorios. Luego de desarrollada y optimizada la IPI demostro ser una tecnica rápida, (3 hs.) útil enlaboratorios sin acceso a cultivos celulares para el diagnóstico y caracterización rapida a partir demuestras de campo de BHV-1.

Descripción: En un ambiente complejo y heterogéneo, el éxito de los individuos y de su descendencia depende de la capacidad de localizar los recursos y las condiciones necesarias para susupervivencia. El encuentro de los recursos y la evaluación de las condiciones se logran a través de la percepción de estímulos o claves, y particularmente en los insectos, los estímulos químicos juegan un rol central en estos procesos. En los parasitoides, la búsqueda y localización de los hospedadores, los cuales constituyen el recurso fundamental en su vida, puede involucrar diferentes tipos de estímulos, pero en particular son las claves químicas volátiles las que están mayormente implicadas en este comportamiento. El moscardón cazador de abejas Mallophora ruficauda es un parasitoide solitario de larvas de coleópteros de la familia Scarabaeidae (gusanos blancos del suelo) y una plaga de la apicultura de la Región Pampeana Argentina. En estado adulto es depredador de insectos, en particular de abejas melíferas, y en estado larval parasita preferentemente a larvas de tercer estadio de Cyclocephala signaticollis. La localización del hospedador por M. ruficauda está compartida entre la hembra y la larva. En primer lugar, la hembra localiza el hábitat del hospedador y ovipone en sustratos altos maximizando la dispersión de su progenie por el viento. En una segunda fase, las larvas que llegan al suelo se entierran, mudan y buscan activamente a su hospedador por medio de claves químicas que se originan en el tubo digestivo del gusano blanco. Hasta el momento, existen algunos aspectos de este mecanismo de localización que se desconocen. Por tanto, en la presente Tesis se estudiaron aspectos asociados al comportamiento de localización del hospedador por parte de M. ruficauda, tales como las características morfológicas de las estructuras sensoriales de los adultos y las larvas, los aspectos fisiológicos y morfológicos de las larvas sociados al período de búsqueda, y el rol ecológico y origen de las claves químicas producidas por los hospedadores. Se encontró que las antenas de los adultos de M. ruficauda están especializadas en la captura e intercepción de estímulos químicos volátiles, posiblemente involucrados en los comportamientos de apareamiento y oviposición. Las larvas de primer y segundo estadio del parasitoide poseen una clara diferencia morfológica en sus estructuras cefálicas, lo que podría estar vinculado al comportamiento diferencial observado entre estos estadios durante el proceso de búsqueda del hospedador. Además el estudio del tamaño corporal de las larvas de primer estadio que nacen a lo largo de la temporada reproductiva sugiere que habría una asignación diferencial de recursos energéticos por parte de las hembras, pero no se ha encontrado un patrón claro al respecto. Por último, se determinó que tanto las larvas de estadio II de M. ruficauda como las de estadio III de C. signaticollis se orientan positivamente hacia extractos de la cámara de fermentación de las larvas de estadio III de C. signaticollis. Estos resultados sugieren que las larvas de M. ruficauda podrían estar explotando el sistema de comunicación química de su hospedador durante la búsqueda y localización. Se determinó indirectamente el origen de estas claves, observándose la presencia de microorganismos asociados al hospedador en esta región del tubo digestivo. Mediante experimentos comportamentales se demostró que los productos metabólicos de estos microorganismos serían las claves que orientan a las larvas del parasitoide durante la localización del hospedador. Sin embargo, no se determinó la función de estas sustancias químicas en las interacciones intraespecíficas de C. signaticollis. En conclusión, M. ruficauda presenta estructuras sensoriales especializadas vinculadas a la percepción de estímulos químicos volátiles, aspectos fisiológicos que permiten la sobrevida de las larvas hasta el encuentro con el hospedador, y el uso de claves altamente confiables y específicas durante la búsqueda, las cuales contribuyen a la eficiencia en la localización de recursos por larvas y hembras de M. ruficauda. Esta Tesis es una contribución al conocimiento de la historia de vida de M. ruficauda y un aporte al entendimiento de otras especies de parasitoides con características y estrategias de vida similares.

Descripción: La visión de movimiento provee claves esenciales para guiar comportamientos críticos como la detección de presas, predadores y coespecíficos. En los decápodos crustáceos e insectos pterigotas, la codificación de la información visual de movimiento está asociado con el procesamiento visual en el tercer ganglio óptico, la lóbula. Allí, las neuronas tangenciales gigantes (LG) integran información visual de delgadas neuronas columnares y la envían al cerebro medio guiando las respuestas comportamentales correspondientes. A pesar de la importancia de estas neuronas columnares en la codificación visual, estas no habían podido ser estudiadas electrofisiológicamente dado su delgado calibre. En esta tesis, desarrollamos una aproximación experimental para realizar registros poblacionales in vivo de estas pequeñas neuronas con técnicas de imágenes funcionales de fluorescencia sensible a calcio. En primer lugar, estudiamos la citoarquitectura de la lóbula y caracterizamos cuatro estratos donde arborizan las neuronas columnares de entrada de la lóbula. Luego nos centramos en estudiar cómo distintos parámetros de un estímulo de movimiento afectan la actividad de las neuronas columnares. Las respuestas más intensas las obtuvimos al enfrentar al animal a estímulos oscuros que a frente estímulos claros, y frente a estímulos rápidos que a estímulos lentos. Además, estudiamos la respuesta comportamental de evitación de los cangrejos frente a las mismas características visuales con las que fueron estudiadas las neuronas transmedulares. Encontramos que la actividad en las neuronas transmedulares correlaciona fuertemente con la intensidad de la respuesta de escape evocada por dichos estímulos. Por otra parte, cuando un animal es confrontado a una repetición de estímulos de movimiento que resultan ser inocuos, la mayoría de los animales aprenden a ignorar el estímulo. A pesar de que muchos artrópodos se habitúan a la presentación reiterada de objetos en movimiento, los sitios y mecanismos neuronales que subyacen a éste fenómeno aún no han sido identificados. Encontramos aquí que las neuronas columnares que transmiten la información al segundo ganglio óptico persisten en responder frente a la estimulación reiterada de estímulos de movimiento. Sin embargo, las neuronas columnares que transmiten la información visual del segundo ganglio óptico al tercero, la lóbula, suprimen su actividad frente a la misma estimulación. Esta rápida reducción en la actividad de las neuronas aferentes a la lóbula, que es de corta duración y restringida únicamente al área entrenada de la retina, concuerda con los cambios comportamentales observados frente al mismo entrenamiento visual. Por último, nos propusimos estudiar si la adaptación en columnas visuales entrenadas a ciertos atributos se generaliza a objetos en movimiento novedosos. Entrenamos a los animales a un atributo visual y evaluamos la generalización a un nuevo atributo presentado en el mismo área de estimulación. Obtuvimos una recuperación parcial de la respuesta de calcio de neuronas adaptadas tanto a la dirección de movimiento como al contraste cuando fueron evaluadas con el atributo visual novedoso. La presentación de dos atributos visuales a la hora de la evaluación no mostró diferencias significativas respecto al cambio de un único atributo. Los resultados obtenidos en esta tesis son consistentes con la participación del tercer ganglio óptico en la codificación de estímulos de movimiento en artrópodos. Más aún, dado que las neuronas columnares se originan en el segundo ganglio óptico, la información visual de movimiento comenzaría a codificarse en el segundo neuropilo óptico. Nuestros resultados muestran que los comportamientos guiados por la visión de movimiento quedan determinados, en gran medida, por las propiedades de codificación de las neuronas columnares que comunican la médula con la lóbula.

Descripción: Los crustáceos anostracos del género Artemía se encuentran globalmente distribuidosen todos los continentes excepto la Antártica. A pesar de la amplia distribución del género, loshábitats que puede ocupar se encuentran restringidos a salinas y lagos o lagunas salados,donde la salinidad puede variar ampliamente entre 30 y 300 g l^-1. Estos crustáceos anostracos,son utilizados habitualmente en Acuicultura, como presa viva en la cría de peces y crustáceosmarinos y/o de agua dulce de interés comercial. El género Artemia muestra una notable flexibilidad reproductiva que le permiteadecuarse a las más diversas presiones de selección del medio; variando el tipo dedescendencia que es liberada al medio en forma de quistes o larvas vivas, (reproducción ovíparau ovovivipara), y distribuyendo temporalmente la descendencia durante el período reproductivo. La reproducción es generalmente bisexual, aunque en Artemia puede presentarse tambiénpartenogénesis; en este último caso ambas modalidades son excluyentes. Esta variedad deestrategias reproductivas, sumada al potencial económico de este recurso natural, resalta lanecesidad de profundizar el conocimiento de la biología de la reproducción de cada población. Esta tesis analiza en detalle la biología reproductiva de Artemía, realizando lacaracterización morfológica, morfométrica y reproductiva de una población Argentina localizadaen la provincia de La Pampa. Los resultados obtenidos nos permiten confirmar la ubicacióntaxonómica de la población de Anemia de la laguna Colorada Chica dentro de la especie A.persimilis mediante el uso de caracteres morfológicos simples y morfometría. Se caracterizaronlos 5 estadios que forman parte del ciclo reproductivo de las hembras y se determinaron lasfases que forman parte del ciclo de puesta, como resultado de la superposición de ciclosreproductivos sucesivos. El ciclo reproductivo tiene una duración aproximada de 6 días ypresenta dos períodos principales, uno que transcurre en los ovarios (aproximadamente 3 días) yotro que transcurre en los oviductos y el útero. Mediante el análisis del comportamientoreproductivo de las hembras mantenidas en estado virginal (aisladas de machos) se descartó lapresencia de partenogénesis como una modalidad reproductiva de esta población. El estudio delas variables reproductivas reveló la presencia de un mayor porcentaje de ovíparismo queovoviviparismo, encontrándose hembras que fueron capaces de presentar estas dosmodalidades reproductivas en camadas sucesivas. Las hembras criadas en diferentescondiciones de salinidad presentaron un mayor rendimiento reproductivo en la salinidad de 90 gl^-1, medido en función del número total de descendientes producidos por una hembra y al númerototal de puestas. Finalmente, un estudio a nivel microscópico, realizado en hembras y machos delas especies A. persimilis y A. franciscana, permite describir la morfología de Ia zona involucradaen el abrazo copulatorio.

Descripción: Los comportamientos que se realizan en ambientes visualmente complejos requieren que los artrópodos, como los vertebrados, extraigan información de la escena visual. Experimentos comportamentales sugieren que principios similares a los que operan en mamíferos subyacen al análisis de patrones visuales en artrópodos (Mizunami et al., 1998; Srinivasan et al., 1993). Registros electrofisiológicos revelan la existencia de neuronas de artrópodos funcionalmente similares a las de la corteza visual de mamíferos (Glantz, 1998; O'Carroll, 1993). Insectos y crustáceos han demostrado su extraordinaria capacidad visual para categorizar y memorizar objetos. No obstante, la identificación de neuronas involucradas en esas capacidades es casi desconocida. En el cangrejo Chasmagnathus, se ha identificado un grupo de neuronas sensibles al movimiento que participa en la detección visual de objetos y en memorias de largo término. Sin embargo, tempranamente se reconoció que el grupo estaba constituído por varias clases distintas de neuronas cuya identificación estaba pendiente. En el transcurso de esta tesis, registramos, en el animal intacto y no anestesiado, respuestas de neuronas LG a un amplio rango de estímulos visuales presentados en distintas partes del campo visual del animal. Esta caracterización fisiológica fue seguida por marcación intracelular, lo que permitió la comparación de los rasgos anatómicos y funcionales de cada célula. Todas las LG presentan extensas arborizaciones en la lóbula y poseen axones que proyectan hacia el cerebro medio. Funcionalmente, las LG demostraron ser más sensibles al movimiento de objetos que a desplazamientos de todo el panorama. No obstante estas similitudes, claras diferencias morfológicas y fisiológicas nos permitieron identificar cuatro tipos distintos de LG. Asimismo determinamos que muchas de ellas se hayan acopladas eléctricamente a otros tipos de LG y avanzamos en la determinación de sus áreas de proyección. El conjunto de los datos nos permite proponer una función para cada tipo de LG así como establecer las bases anatómico-fisiológicas que permitirán analizar el rol de cada tipo de LG en la ejecución de comportamientos guiados por la visión en el cangrejo.

Descripción: Se realizó una caracterización morfotectónica multiescalar de las Lomadas de Otumpa, ubicadas en el Gran Chaco Argentino, vinculada con un análisis dinámico del diseño y evolución de la red de drenaje. La caracterización morfotectónica profunda se llevó a cabo mediante un relevamiento magnetotelúrico en una transecta dispuesta sublatitudinalmente a los 27° Latitud Sur, que permitió detectar la estructura eléctrica a escala de corteza-manto y a escala somera, identificándose las cuencas sedimentarias. Asimismo, se realizó un análisis de la sismicidad profunda (500-600 kilómetros) de la región, para complementar los rasgos profundos. La caracterización morfotectónica intermedia se apoyó en sísmica de reflexión, anomalías gravimétricas residuales, registros litológicos de perforaciones petroleras y datos mundiales del campo de esfuerzos, con los que se esbozó un modelo estructural. La caracterización morfotectónica somera llevada a cabo a partir de dos perfiles de audiomagnetotelúrica (600 metros) y de un perfil geoeléctrico, permitió identificar horizontes eléctricos que fueron correlacionados a unidades litológicas reconocidas en perforaciones. La caracterización morfotectónica de superficie, basada en la identificación de unidades geomorfológicas y en el cálculo de parámetros geomorfométricos, evidencian anomalías del relieve y del drenaje, manifiestas principalmente sobre la planicie aluvial y paleocauces del río Saldo del Norte. Además, se estudiaron los afloramientos rocosos de la zona oriental de las Lomadas de Otumpa que, finalmente fueron correlacionados a los depósitos eólicos del Jurásico superior-Cretácico inferior o Formación Misiones. Sobre estas eolianitas se evidencian importantes y posteriores eventos de silicificación y meteorización. Las Lomadas de Otumpa constituyen una morfoestructura relíctica gondwánica con reactivaciones mesozoicas y cenozoicas influyentes en el desarrollo de los patrones de la paleored y actual red de drenaje. Es importante en la determinación del posible límite occidental del Sistema Acuífero Guaraní y en el aporte de materiales pétreos aplicados para la construcción.

Descripción: El plutón granítico de Chita (12km x 4km) constituye unaintrusión póstuma dentro de la secuencia del batolito de Colangüil. Se originó como consecuencia de la cristalización deuna cámara maqmática esencialmente cerrada, emplazada en nivelespoco profundos de alrededor de 1,3km, hacia los 247 ± 4 Ma (fasemagmática San Rafael). Los parámetros físico-químicos (temperatura, densidad,viscosidad, etc.) indican que luego de su emplazamiento, lacristalización se produjo en forma convectiva termicamente yturbulenta hasta muy cerca del 60% de cristalización, cuandohabria cesado todo movimiento de magma. Este comportamientoreológico explica la homogeneidad composicional (mineralógica yquímica) y estructural encontrada a través de sus km² deafloramiento y 1200m de exposición vertical. El magma, inicialmente subsaturado en agua (0,65% en peso),alcanzó su saturación (3,6% en peso) hacia los estadios finalesde la cristalización, dando lugar a una etapa de cristalizacióntransicional (coexistencia magma-fase acuosa supercrítica) ehidrotermal, originando mineralizaciones de greisen. El fluido supercrítico separado ascendió intersticialmente,alterando la fase previamente cristalizada y acumulandose en lossectores apicales. Allí el aumento de la presión de vapor superóla presión litostática imperante, y produjo un aumento de volumenen el plutón, con el consiguiente domamiento del techo. Químicamente, el magma que originó el plutón granítico de Chita representa el extremo diferenciado de una asociacióncalcoalcalina. La presencia del F fue importante para acentuar elcarácterperaluminoso en la última etapa de la cristalización ypara concentrar metales tales como Mo, W, Sn y U en la fasevolátil. La cristalización de la muscovita en esta etapa produjoenriquecimiento en Rb y Nb y empobrecimiento en Sr. Si bien el plutón de Chita forma parte de un arco magmáticoestablecido en el Neopaleozóico, los contenidos de los elementosmayoritarios y trazas lo asemejan con los granitos anorogénicosno peralcalinos (riolitas topácicas) y lo discriminan comogranito de intraplaca. Este comportamiento reflejaría la tectónica local anteriorde fuerte compresión debida a la fase orogénica San Rafael (Pérmico inferior), que produjo engrosamiento y rigidificación decorteza, seguida de extensión cortical que permitió elemplazamiento del complejo plutónico de Colangüil.

Descripción: Se llevó a cabo el estudio del tejido de calabacita (Cucurbita moschata Duchesne ex Poiret) que permitió ver las características de este tejido tanto desde el punto de vista reológico, como así también químico (importante composición en pectinas solubles, ausencia de grupos fenólicos) como matriz para el desarrollo de productos funcionales. Se desarrolló un alimento funcional rico en fibra y fortificado con Fe, a partir de Cucurbita moschata Duchesne ex Poiret, listo para consumir. El producto presentó buena estabilidad microbiológica, como así también organoléptica (textura, color y sabor). La incorporación de Fe, aún en dosis altas no presentó diferencias significativas desde el punto de vista microbiológico y organoléptico, en las condiciones ensayadas, con un producto análogo pero sin fortificar con hierro. Se observó una biodisponibilidad 100 % del hierro incorporado. De la cáscara (exocarpio) y recortes de la pulpa (mesocarpio) habitualmente remanentes del procesamiento de la calabacita se obtuvieron fracciones enriquecidas en fibra por deshidratación (S) o por tratamiento con alcohol de la pulpa (AIR) o cáscara (C). Estas fracciones de fibra aisladas presentaron buenas propiedades de hidratación e interesantes propiedades hipoglucémicas que las hacen adecuadas en relación a su aplicación como ingrediente en la formulación de alimentos funcionales. Se utilizaron estas fracciones ricas en fibra como aditivo de masas farináceas. Todas ellas aumentaron la tenacidad de las masas al ser incorporadas a un nivel de 0,5% (p/p), pero sin reducir el trabajo de deformación significativamente lo que mostraría que no afectan profundamente la matriz gluten-almidón. En cuanto a la calidad del pan obtenido, se observó que las fracciones S y C mejoraron la terneza de la miga y colaboraron a su mantenimiento durante el almacenamiento.

Descripción: Los residuos agroindustriales del alcaucil (Cynara cardunculus var. scolymus) tales como brácteas externas, tallos y hojas, constituyen un 80% de la planta. El objetivo general de esta investigación fue la recuperación de parte de la biomasa residual de estos residuos, agregándole valor al convertirlos en productos de interés industrial mediante tecnologías amigables con el medio ambiente. De este modo, se evaluó el aislamiento de fracciones enriquecidas en fibra dietaria soluble a partir de brácteas y tallos del alcaucil utilizando dos métodos de calentamiento (convectivo o con microondas) en la obtención del residuo insoluble en alcohol (AIR). Se utilizó un diseño experimental en el cual se trabajó con una solución de buffer citrato de sodio con y sin presencia de las enzimas proteasa y/o hemicelulasa para la producción de las fracciones a partir del AIR. Una vez que dichas fracciones fueron aisladas, se caracterizó su composición química, peso molecular y comportamiento reológico. Su funcionalidad como antioxidante y la identificación de los compuestos polifenólicos también fue abordada. Se realizaron análisis microbiológicos para determinar la actividad prebiótica de las fracciones y se estudió su actividad antiviral. Se concluye que las fracciones poseen potencialidad como ingredientes y/o aditivos para la industria de alimentos debido a su contenido de fibras solubles, antioxidantes, comportamiento reológico, capacidad antiviral y actividad prebiótica.

Descripción: Dos han sido los objetivos principales de este estudio, uno de carácternetamente estratigráfico y otro sedimentológico, vinculado con procesosdiagenéticos en carbonatos continentales. En el primer caso y mediante el analisis detallado de depósitos sedimentariosdesde el punto de vista facial, se pretende brindar un panoramamásclaro de la estcatigrafía del Cretácico superior y del Terciario, fundamentalmente enla provincia de Entre Ríos, sin olvidar depósitos equivalentesde Corrientes y del Uruguay. En el esquema estratigráfico al que se arriba, se han tratado de respetarlos nombres formacionales antiguamente propuestos y se pretende relacionarestas Formaciones con los megaambientes sedimentarios a travésde los procesos asociados. Ha sido posible constatar que las rocas elásticas de la Formación Puerto Yeruá, compuestas fundamentalmente por depósitos psefíticos y psamítioos,con estratificación horizontal y entrecruzada fueron, sin duda, originadaspor corrientes unidireccionales tractivas, de energía variable dealta a moderada, desde lechos planos y megaóndulas a fase de óndulas. Lascorrientes fueron erosivas en una primera etapa, labrando los bancos pelicosinferiores e incorporando parte de este material. La pelitas que coronan algunas de las secuencias fueron depositadas porcorrientes de baja energía y a partir de procesos de suspensión. Las estructuras mecánicas, la geometría de los cuerpos (de tipo predominantemente lenticular)y, la variabilidad granulométrica, indican que estossedimentos fueron depositados por ríos de moderada a baja sinuosidad,con migración de barras de canal. El tamaño de grano de los depósitos que raramente alcanza el tamaño gravamediana, puede atribuirse a la falta de disponibilidad de elementos mayores; así se forman barras de material fino, las que suelen desarrollarseen ríos con gran descarga estacional y carga sedimentaria, pero con escasapendiente. Estas epiclastitas sufrieron varios procesos de calcretización, desarrollándoseperfiles típicos, en los cuales el carbonato comienza a aparecercomo parches aislados, para luego formar cubiertas contínuas alrededor delos clastos de la roca hospedadora, determinando fábrica-K; son comuneslos nódulos, el carbonato masivo, pisolítico o laminar y así las rocas pasan de areniscas y conglomerados a verdaderas calizas. Esto es característico del ambiente diagenético vadoso, donde se produceuna rápida variación entre condiciones de cementación, fracturación notectónica y sedimentación interna, especialmente en la parte cercana a lasuperficie. Estos microprocesos son los responsables de la distribución vertical mencionada. Las sedimentitas de la Formación Arroyo Avalos, apoyan discordantementesobre las anteriores o sobre basaltos y areniscas de la Formación Curuzú Cuatiá. Materiales de diverso origen, desde rocas basálticas y areniscas hastasuelos, fueron afectados por procesos de calcretización, lo que originóperfiles compuestos, donde son comunes las estructuras y texturas diagonaticas,tales como laminación, nódulos, pellets, pisolitas, grumos, cristalarias, brechamiento "in situ", etcétera. Petrográficamente las rocas carbonáticas se clasifican como "wackestone"limo-arenosas y, en forma subordinada, "mudstone" limo-arenosas. Entre lasclásticas predominan los depósitos de loess, constituídos por limolitascon areniscas y arcilitas subordinadas; sin estratificación o con estratificacióngrosera horizontal o subhorizontal. Son comunes los restos vegetales,los niveles edáficos y piroclasticos; en ocasiones pueden observarsedelgados depósitos de conglomerados intraformacionales. No obstante, en la zona de Curuzú-Cuatiá predominan los fragmentos de rocasbasálticas, que alcanzan tamaño de bloques. Aqui el carbonato se ha introducidoen regolitos basálticos y aún en el basalto mismo, produciendobrechamiento "in situ". Sin embargo, estas sedimentitas presentan características estructuralesy texturales semejantes, ya que son parte de un mismo proceso y afloran, aunqueesporádicamente, en el cruce de la ruta 123 con el rio Corriente hastael sur de Concepción del Uruguay en Entre Rios. La descripción detallada de las estructuras sedimentarias, la observaciónpetrográfica minuciosa y la presencia de ciertas arcillas como palygorskitay sepiolita, propias de la diagénesis vadosa en la formación decalcretes, permitieron reinterpretar que las sedimentitas de la zona de Mercedes corresponden también a la Formación Arroyo Avalos y que no presentanrasgos que permitan asimilarlas a las rocas carbonáticas que afloran enel Parque Nacional "El Palmar" (Entre Rios), las que a su vez forman partede la Formación Puerto Yeruá.

Descripción: Fil: Stadler, Teodoro. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Se propone la caracterización geológico - tectónica y metalogénica de losdepósitos de estaño conocidos en la República Argentina. Se analizaron los controlesespecíficos individuales de los depósitos, su potencialidad geológico - económico, losambientes geológico - tectónicos donde se presentan, la distribución espacial de lasregiones estanníferas, y su correlación con la distribución temporal y la vinculación entrelos procesos metalogénicos y geotectónicos actuantes. Mina Pirquitas, en la provincia de Jujuy, representa el principal distrito,destacándose por su mineralización hidrotermal polimetálica en un depósito stockwork diseminadocuyo potencial se estima en cientos de millones de toneladas de mena con O,2-0,4 % Sn; 50-180 g/t Ag; 0,7-0,8 % Zn; 0,1-0,4 % Pb; asociado a un sistema devetas con 1,5 millones de toneladas con 1,25 % Sn; 440 g/t Ag; y Zn, As, Ga, Cd, In yotros. Movimientos tectónicos intraminerales influyeron notablemente en las condicionesde localización, estructuras y composición de los cuerpos minerales. Asimismo, laestructura y litología de la roca de caja ejercieron un control en la distribución espacialde la fracturación y en la mineralización. Se distinguen dos provincias estanníferas con diferente caracteristicas, una en la Puna Jujeña que forma parte del Cinturón Estannífero Boliviano (CEB), y otra que sepropone denominarla Provincia Estannífera de las Sierras Pampeanas Noroccidentales (PESPN) en las provincias de Catamarca y La Rioja. El CEB, representa el 99 % de losrecursos conocidos del país; Se encuadra dentro del tipo orogénico subvolcánico con eltipo volcánico subordinado, con predominio de la mineralización de edad miocénica, desulfuros polimetálicos en varios estadios de depositación, en vetas, stockwork ydiseminada. Por otro lado, la PESPN se encuadra dentro del tipo oroge'nico epizonal conel tipo orogénjco batolitico subordinado, de edad Devónico-Carbónico, con estaño envetas de cuarzo, fajas de greisen, vetas - stockwork de magnetita - fluorita, o en greisenmasivo, regionalmente asociados a depósitos de W, Pb-Zn y U, generalmentedistribuidos en secuencias de zonación.

Descripción: La caracterización y análisis evolutivo en subsuelo de los sistemas petroleros representadospor las unidades cretácicas comprendidas entre los 46° y 47° latitud Sur y 67° y 69° longitud Oeste, Flanco Sur de la Cuenca Golfo San Jorge se realizó a partir de contar con 4.900 km2de sísmica 3D, 88 pozos con registros eléctricos, reportes sedimentológicos, petrográficos,diagenéticos, mineralógicos, petrofísicos, geoquímicos, de microscopía electrónica debarrido, datos de producción e informes de terminación. Este volumen de información secompletó con viajes de campo para observar las características de las unidadesequivalentes en superficie y, de esta manera, realizar una analogía con la información desubsuelo. Este trabajo permitió conocer las características geológicas del área de estudiofocalizando la atención en los elementos y procesos del sistema petrolero presente en el Flanco Sur de la Cuenca Golfo San Jorge, cuenca responsable del 49% de la producción depetróleo y del 12% de gas en el país. Así es que se realizó la descripción en detalle delbasamento representado por el Gupo Bahía Laura, de las Formaciones Pozo Anticlinal Aguada Bandera y Pozo Cerro Guadal (rocas generadoras y potenciales reservorios noconvencionales), de la Formación Pozo D-129 y Formación Matasiete (principal rocageneradora y reservorio no convencional), de la Formación Mina del Carmen y Formación Castillo (rocas reservorio), de la Formación Bajo Barreal, Miembro Inferior; Formación Cañadón Seco, Miembros Caleta Olivia, Pozo O-12 y Cañadón Seco-1; Formación Bajo Barreal, Miembro Superior y Formación Meseta Espinosa (principales rocas reservorio de lacuenca) y de la sucesión terciaria que completan la secuencia. Además se describieron losdistintos estilos estructurales, las características depositacionales y paleoambientales decada unidad. Consecuentemente, se describieron la generación, migración,entrampamiento, preservación y paleobiodegradación de los hidrocarburos, con especialénfasis en caracterizar los reservorios desde la óptica petrofísica, incluyendo a lospotenciales reservorios no convencionales de tipo shale y tight. Asimismo, se analizaron lasdistintas reservas y declinaciones por yacimiento. Finalmente, se presentó un modelotectonoestratigráfico para explicar la evolución del sistema petrolero en conjunto con la Cuenca Golfo San Jorge.

Descripción: El objetivo de la presente tesis fue obtener oligonucleótidos sin motivos CpG con actividad inmunoestimulante y caracterizar su aplicación en humanos. Luego del análisis minucioso in vitro de cientos de oligonucleótidos, llegamos a identificar un nuevo grupo de moléculas inmunoestimulantes sin motivos CpG en humanos que responden al motivo Py N (T/A) (T) (T) (T/G), donde Py es una C o T y N es una A, T, C o G. El oligonucleótido ODN 504 (ODN 504), prototipo de los oligonucleótidos de la serie PyNTTTTGT, demostró ser efectivo, en primera instancia, como adyuvante junto a antígenos o vacunas comerciales. Sin embargo, luego de los resultados obtenidos en nuestro modelo experimental de sepsis/shock séptico en ratas y en sangre periférica de individuos politraumatizados, podemos además citar una actividad inmunomoduladora del ODN 504. En la actualidad, teniendo en cuenta las diferentes y/o múltiples actividades estudiadas y desarrolladas en nuestro laboratorio, algunas de ellas descriptas en detalle en esta tesis, nosotros suponemos que los ODN’s PyNTTTTGT simulan a una sub-familia de moléculas endógenas de ADN, es decir son moléculas DAMP’s (patrones moleculares asociados al daño) las cuales se liberan durante una infección o daño y son reconocidas por el sistema inmune, el cual permanentemente está monitoreando el estado integral del mismo y acciona los mecanismos apropiados que posibilitan la restauración de la homeostasis. En la presente tesis se exponen los resultados que llevaron al descubrimiento y reporte de algunas de las actividades de los oligonucleótidos PyNTTTTGT, que cuestionan la idea que los oligonucleótidos inmunoestimulantes en el sistema inmune de los vertebrados provienen exclusivamente de las moléculas PAMP’s (patrones moleculares asociados a los patógenos), o sus análogos artificiales.

Descripción: Los tumores están compuestos de una masa heterogénea de células tumorales que incluyen células estromales asociadas que pueden convertirse en una barrera para la lograr una terapia exitosa contra la enfermedad. En los últimos años, los Adenovirus Replicativos Condicionales (CRAds) regulados por promotores recombinantes surgieron como una nueva modalidad de terapia para el cáncer. SPARC se encuentra expresada en forma muy elevada tanto en células tumorales como en endotelio y en los fibroblastos activados de tumores. A partir de estos datos, decidimos utilizar al promotor de SPARC para dirigir la replicación de los virus tanto en las células tumorales como en las células que forman parte del tumor. Logramos clonar un promotor que demostró mayor actividad en las células que expresan SPARC (F512) que se utilizó para dirigir la replicación de un CRAd (Ad-F512). Ad-F512 tiene efecto oncolítico en diferentes líneas celulares de melanoma y en ensayos in vivo se observó la eliminación de tumores SB2. Por el contrario, los tumores de melanoma A375N, Mel J y el tumor SB2/WI-38, que combina células de melanoma con fibroblastos, su efecto oncolítico es muy reducido. Para aumentar su eficacia adicionamos secuencias de ADN conteniendo elementos de respuesta a diferentes condiciones pato‐fisiológicas que caracterizan al tejido tumoral para aumentar la replicación. A partir de los resultados obtenidos, seleccionamos el promotor kBF512HRE conteniendo elementos de respuesta a hipoxia (HRE) y elementos de respuesta a NFkB (kB). Construimos el CRAd Ad-kBF512HRE que eliminó el tumor SB2/WI-38 en todos los ratones pero no se observa el mismo efecto sobre tumores Mel-Les y A375N. A partir de estos resultados se cambió la fibra adenoviral involucrada en el pegado al receptor celular y el virus resultante, Ad-5/3-kBF512HRE tiene efecto anti-tumoral sobre los tumores Mel-Les. Estos resultados indican que la adición de elementos de respuesta a condiciones que caracterizan al tejido tumoral y el cambio de la proteína involucrada en la unión al receptor celular aumentan el efecto terapéutico de un CRAd en las líneas celulares resistentes y, además, pueden sobrepasar la restricción en la replicación que implica la presencia de células estromales.

Descripción: La soja es una especie autopolinizante de escasa variabilidadgenética. Esta variabilidad se ve aún más reducida en variedadescultivadas de soja (Glycine max (L.) Merr.) debido a que en losprogramas de mejoramiento, usualmente se utilizan los mismosancestros. Debido a esta escasa variabilidad genética es que resultadifícil la identificación y diferenciación de nuevos cultivares. El objetivo de este trabajo fue testear la capacidad que tienen losdiferentes marcadores moleculares tales como, RAPD (amplificaciónazarosa de ADN polimórfico), AFLP (Polimorfismo de longitud defragmentos amplificados) y Microsatélites o SSR (secuenciasrepetitivas simples), para caracterizar y diferenciar un conjunto de 100variedades de soja registradas en el Registro Nacional de Cultivaresdel Instituto Nacional de Semillas (INASE), perteneciente a la Secretaría de Agricultura, Ganadería, Pesca y Alimentación. Fueronutilizadas 16 características morfológicas, fisiológicas y fenológicaspara comparar la relación genética obtenida con los marcadoresmoleculares. Se analizaron 424 loci genómicos polimórficos entre marcadoresmoleculares y morfológicos mostrando un porcentaje global depolimorfismo del 25.7% confirmando la baja variabilidad genéticarelativa de la soja comparada con otros cultivos y explicada por laestrecha base genética con que se maneja el mejoramiento de estaplanta La variabilidad evidenciada por cada uno de los sistemas demarcadores fue diferente. Las variedades fueron agrupadas por elsistema de “cluster analysis” y los resultados comparados con losdatos genealógicos de las variedades registradas, concluyéndose quelos microsatélites son los marcadores que mejor reflejan la evolucióngenómica de las variedades y mejor se correlacionan con ladiferenciación morfológica. Los AFLP mostraron un alto rango demultiplex, pero bajo polimorfismo, en cambio los RAPD mostraron unvalor intermedio de polimorfismo y bajo rango de multiplex. Se logró establecer una “huella digital genética” para cadavariedad y realizar un estudio de variabilidad genética, estimando ladistancia mínima a considerar para la obtención de la propiedad.

Descripción: Las reacciones de pardeamiento no enzimático (reacción de Maillard) y enzimático (polimerización de polifenoles oxidados) generan productos fluorescentes y pigmentos pardos que contribuyen a las características físico-químicas de materiales orgánicos (biomoléculas, alimentos, fármacos). El objetivo de esta tesis fue analizar las características cromáticas y de fluorescencia y la fotoestabilidad de los compuestos generados por la reacción de Maillard y de pigmentos polifenólicos, para dilucidar mecanismos de deterioro y control. Se estudiaron sistemas modelo susceptibles de desarrollar productos pardos: pigmentos de Maillard (aminoácidos ó proteínas con azúcares) y polifenólicos (extraídos de té) y semillas sometidas a envejecimiento acelerado. Los distintos tipos de pigmentos pardos tienen similares características cromáticas y fluorescentes. La observación más notable es la elevada fotoestabilidad de compuestos fluorescentes y pigmentos generados en la reacción de Maillard comparada con los polifenólicos. La irradiación en presencia del sensibilizante rosa de bengala produjo degradación tanto del colorante como de los pigmentos y permitió establecer diferencias en el mecanismo de fotodegradación de ambos tipos de pigmentos. El agregado de MgCl2 afectó la cinética de desarrollo de pigmentos de Maillard pero no tuvo efecto sobre sus características espectroscópicas ni sobre su fotoestabilidad. El conocimiento del efecto de la luz y de la interacción de los pigmentos con distintos agentes es relevante para controlar y predecir la estabilidad de diferentes materiales orgánicos y ofrecer alternativas para modular la cinética de su generación.

Descripción: En este trabajo se estudiaron las propiedades y las funciones de las corrientesactivadas por hiperpolarización en neuronas piramidales de la lámina V de la cortezaprefrontal utilizando la técnica de "patch-clamp" en configuración célula entera enrebanadas agudas de cerebro. La corriente catiónica activada por la hiperpolarización (Ih) ha sido involucradaen varios roles a nivel celular como el control de la actividad rítmica en célulasmarcapaso cardíacas y neuronas del sistema nervioso central, el mantenimiento del potencial de reposo cerca del umbral de disparo, participación de las propiedades de disparo de potenciales de acción en neuronas sin actividad rítmica, la regulación de la integración sináptica en neuronas piramidales e intervención en algunos tipos de plasticidad sináptica. Las neuronas piramidalesde la lámina V de la corteza cerebral reciben gran cantidad de sinapsis y sonla principal vía de salida de la información hacia regiones subcorticales,por lo que están en una posición privilegiada para ejercer el controlde la información procesada en la corteza cerebral. La corteza prefrontales una región asociada a funciones cognitivas complejas y al control de comportamientos voluntarios motivados. Se cree que está involucrada en enfermedadesneuropsiquiátricas como la esquizofrenia, el déficit de atención con desordenhiperactivo (ADHD), el mal de Parkinson y la adicción a drogas. Se encontró que estas neuronas expresan dos corrientes activadas por hiperpolarización,una lenta (Ih) y una rápida (Ikir, inward rectifier K+ current). Para aislarcada una de estas componentes se utilizó BaCl2, un bloqueante de Ikir, y ZD7288, un bloqueantede Ih. El BaCl2 inhibió Ikir en forma dosis dependiente sin efectosobre Ih hasta 200 uM, con un EC50 de 113,3 +- 2,3 uM. El ZD7288 bloqueó Ihen forma dosis dependiente con un EC50 de 1,65 uM +- 0,6. El estudio de las propiedadesbiofísicas de Ih mostró que cerca del V50 su amplitud fue de 219 +- 16pA y su activacióntuvo dos constantes de tiempo, 169 +- 28 ms y 1306 +- 89 ms. El potencialde reversión y el V50 de Ih fueron -83,6 +- 2,4 mV y -17,6 +- 2,4 mV, respectivamente. Se encontró que Ih en estas neuronas tiene baja sensibilidad a los nucleótidoscíclicos ya que la aplicación de 8Br-cAMP intracelular corrió el V50 de -83,6 +- 2,3 mV a -77,3 +- 3 mV (p = 0,0024). Sin embargo ni dopamina ni serotonina tuvieron efecto sobre Ih en nuestras condiciones. En su conjuntolas características de Ih en neuronas piramidales de la lámina V de corteza prefrontal son similares a las encontradas en hipocampo y corteza somatosensorial deroedores. Estas regiones tienen una alta expresión de la subunidad HCN1 cuyascaracterísticas son similares a las descriptas. En la segunda parte de este trabajo, para entender el rol de Ih en estas neuronas, se estudió el efecto del ZD7288 sobre la excitabilidad y la propagación de potenciales de acción por las dendritas. La aplicación de ZD7288 20 uM produceuna hiperpolarización de 6,9 mV indicando la contribución de Ih al mantenimientodel potencial de reposo. El bloqueo Ih redujo la amplitud de la hiperpolarización post-potencial (AHP) producida luego del disparo en ráfagas en forma dependientedel potencial de reposo. El ZD7288 reduce el AHP a -70mV y -80mV mientras que no tieneefecto a -60mV. Inversamente el AHP a -60mV es inhibido por bloqueantes de la entrada de Ca2+ mientras que a -80 el Ca2+ no contribuye al AHP, indicando que está mediado por Ih. Se estudió si la alta densidad de canales HCN reportada en las dendritas de estas neuronas afecta la propagación de potenciales por la dendrita apical usando un colorante sensible a Ca2+. Se evocaron potenciales de acción somáticos y al mismo tiempo se midió el transitorio de Ca2+ provocado por la apertura de canales de Ca2+ voltaje dependiente en el soma y la región proximal de la dendrita apical. La propagación de potenciales de acción hacia las dendritas provocó un mayor aumento de la entrada de Ca2+ intracelular cuando Ih fue bloqueada con ZD7288 o CsCl en aproximadamente un 20%. Este efecto no fue detectado en el soma. Estos resultados sugieren que Ih participa activamente en el control de la excitabiliad de las neuronas piramidales regulando el patrón de disparo y la propagación retrógrada de potenciales de acción.

Descripción: El proceso de reciclado de las vesículas sinápticas es una característica integral de la función presináptica y determina su habilidad para mantener la liberación del neurotransmisor durante una actividad repetitiva. En esta tesis, caracterizamos el reciclado de las vesículas sinápticas en el terminal neuromuscular de ratón y estudiamos su regulación por los canales de calcio dependiente de voltaje (CCDV), específicamente el canal de calcio tipo L, y por el neuromodulador adenosina. Para desarrollar este trabajo, utilizamos indicadores fluorescentes tipo FM para marcar la membrana de las vesículas sinápticas y técnicas electrofisiológicas para cuantificar la liberación de las vesículas sinápticas. En el terminal neuromuscular de ratón, determinamos que el reciclado vesicular es regulado por el nivel de actividad neuronal. La estimulación a alta frecuencia produce la movilización de dos pooles funcionales de vesículas sinápticas que difieren en su disponibilidad de liberación. En base a esta característica, definimos estos pooles como pooles vesiculares de liberación rápida o lenta. Por otro lado, evidenciamos que la duración de la estimulación a alta frecuencia determina un reciclado vesicular selectivo y secuencial hacia estos pooles vesiculares funcionales. El influjo de calcio a través de los CCDV tiene un papel clave en la señalización neuronal durante el proceso de la neurotransmisión, coordinando el reciclado de las vesículas sinápticas. En este trabajo presentamos evidencias directas que vinculan al CCDV tipo L con la regulación del reciclado vesicular. Hemos confirmado la funcionalidad de CCDV tipo L durante estadios plásticos del terminal neuromuscular. Es decir, observamos la participación de estos canales únicamente durante períodos de actividad neuronal sostenida e intensa. Se demostró que el influjo de calcio a través del CCDV tipo L promueve la endocitosis y la recuperación de las vesículas sinápticas hacia el pool vesicular de liberación rápida, regulando la eficiencia sináptica durante la actividad neuronal intensa. La adenosina es un neuromodulador bien establecido en la unión neuromuscular de ratón. En ausencia del efecto de la adenosina endógena sobre los receptores A1, evidenciamos un incremento en la exocitosis vesicular y en el tamaño del pool de reciclado vesicular, y un direccionamiento de reciclado vesicular hacia el pool de liberación rápida. Debido a que la adenosina y el bloqueo del CCDV tipo L presentaron un efecto similar sobre el reciclado vesicular, una hipótesis plausible fue que la adenosina a través de un efecto inhibitorio sobre el CCDV tipo L afectaría el reciclado vesicular. A través de evidencias experimentales esta hipótesis fue rechazada. En base a las similitudes observadas en el reciclado vesicular, es factible suponer que tanto la adenosina como el bloqueante del CCDV tipo L inhiben un mecanismo común.

Descripción: Fil: Andrei, Graciela Mónica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Las propiedades estáticas y dinámicas de las redes de vórtices (RV) en superconductores de tipo II conforman un campo activo de estudio tanto desde el punto de vista de aplicaciones tecnológicas como del estudio de la física básica. La estructura de la RV condensa en una diversidad de fases debido a la competencia entre las energías de interacción de los vórtices entre sí, de éstos con el desorden del material superconductor y las fluctuaciones térmicas. En los compuestos superconductores de alta temperatura crítica el efecto del dopaje, es decir de la alteración del número de portadores disponibles, es de interés ya que estos materiales presentan una rica variedad de fases con comportamientos magnéticos diferentes. En la fase superconductora la modificación de los niveles de portadores mediante cambios en el contenido de oxígeno permite estudiar la interacción de la materia de vórtices con los defectos generados por la propia desoxigenación, pudiéndose estudiar la relevancia de los distintos mecanismos de anclaje a diferentes temperaturas y campos magnéticos. En particular es de interés el estudio de la dinámica de los vórtices cuando la excitación es de carácter oscilatorio. El objetivo de esta tesis fue el de medir la respuesta del flujo magnético en monocristales de YBCO con maclas, con distinto contenido de oxigeno, para estudiar el efecto de la desoxigenación en las interacciones entre vórtices en los diversos mecanismos de anclaje. En esta tesis se han empleando las técnicas de susceptibilidad ac, magnetización dc y magnetización remanente con un método ac no convencional. Estas técnicas involucran tiempos característicos de medición diferentes (desde algunas centésimas de milisegundo a algunos minutos) por lo que permiten explorar si hay aumento o disminución de anclaje del flujo magnético con el grado de desoxigenación en diferentes ventanas temporales. Además se estudió como cambia la dinámica de la RV en función de la historia termomagnética de la muestra, en particular se estudió el efecto de aplicar a la red de vórtices oscilaciones de campos alternos de gran amplitud para estudiar el orden y la movilidad de la misma. Las mediciones dinámicas de susceptibilidad ac fueron descriptas en el marco de un modelo fenomenológico que incluye el efecto de los centros de anclaje y de los procesos de relajación por activación térmica. Se obtuvieron los parámetros del modelo como la densidad de corriente crítica a T = 0, la escala típica de los potenciales de anclaje y la velocidad de propagación media del vórtice, y se determinó el régimen de anclaje para muestras oxigenadas y desoxigenadas. Las mediciones dinámicas de magnetización remanente, realizadas mediante una técnica no convencional, fueron descriptas en el marco de un modelo de estado crítico que incluyen relajación por activación, para determinar las corrientes críticas efectivas. Mediante mediciones de magnetización dc se estudiaron los mecanismos de anclaje a distintos campos y temperaturas midiéndolos en una escala temporal mucho mayor que la empleada en las técnicas anteriores. Hemos observado que en todos los casos, las muestras desoxigenadas presentan menor anclaje en volumen que las muestras bien oxigenadas y que en los cristales con bajo contenido de oxígeno se hace más relevante la presencia de barreras de superficie para la penetración de flujo magnético en un rango amplio de temperaturas. El anclaje es mayor en las muestras oxigenadas posiblemente porque éstas se encuentran en un régimen de anclaje de vórtice individual en un amplio rango de temperaturas y campos, mientras que la desoxigenación hace predominante el régimen de anclaje colectivo, tal vez debido a que crece el rango efectivo de interacción vórtice - vórtice. A temperaturas cercanas a la de transición, las barreras superficiales se hacen más efectivas independientemente del contenido de O. En los cristales oxigenados hemos observado que la aplicación de campos alternos de gran amplitud no puede ordenar una red previamente desordenada y que a su vez desordena una red previamente ordenada. Los efectos de memoria observados en cristales oxigenados están ausentes en los cristales desoxigenados para el mismo rango de campos y temperaturas.

Descripción: En la presente investigación se desarrolla una caracterización hidrogeológica demedios discontinuos y una metodología para cuantificar la vulnerabilidad en acuíferosfisurados. El subsuelo está constituido por rocas metamórficas con zonas de altadensidad de fracturas portadoras de agua, entre las que se destacan las de dirección N 40 - 50 E y conjugadas. Los caudales más frecuentes de los pozos se encuentran entre 1 y 5 m3/h, conun caudal específico medio de 0,5 m3/h.m. El volumen almacenado por el acuífero enla zona donde se emplazan las fracturas (11.475 ha), se estima en 22,9 hm3. Las aguas subterráneas son de composición bicarbonatada sódica dominante yclorurada cálcica subordinada, con una salinidad media de 480 mg/l. En lo referente asu utilidad, el agua es apta para uso humano y para riego, calificándose como durapara procesos de enfriamiento en la industria. Presentan anomalías en nitratos convalores mayores a 30 ppm, producidas por prácticas agrícolas y falta de saneamiento. Respecto a la vulnerabilidad de contaminantes, se definieron amortiguadoresedafológicos y geológicos en la zona no saturada. La amortiguación edafológica (química) se estimó en función de los valores de capacidad de intercambio catiónico (CIC) y la física, a partir del tiempo de transferencia. Este último parámetro también seutilizó para medir la amortiguación geológica. Se identificaron zonas de baja vulnerabilidad constituidas por suelos brunosoleso planosoles, sobreyaciendo a las formaciones Libertad y Fray Bentos (54% de lasuperficie total de la cuenca), y de alta vulnerabilidad para el basamento cristalinoaflorante o cubierto por arenosoles.

Descripción: Las reconstrucciones paleoclimáticas efectuadas a través del análisis de evidencias indirectas de cambios en parámetros climáticos, han sido de vital importancia para la comprensión de procesos del sistema climático que operan a escalas de cientos o miles de años. Para estos estudio se han utilizado, entre otros indicadores, los ensambles de organismos acuáticos ya que se modifican en respuesta a las condiciones ambientales cambiantes y al recuperarlos del registro sedimentológico contenido en los cuerpos de agua donde vivieron, su análisis permite reconstruir algunas condiciones ambientales del pasado. En particular, las diatomeas son consideradas como excelentes indicadores paleolimnológicos ya que sus valvas silíceas son generalmente abundantes y se preservan bien en los sedimentos. El objetivo general de este trabajo fue conocer los cambios ambientales ocurridos durante el Holoceno en la cuenca del Rio Barrancas (Jujuy, Argentina) y profundizar los conocimientos existentes sobre la biodiversidad y ecología de diatomeas mediante el análisis de muestras de tres perfiles y un testigo sedimentario. A lo largo de este estudio se identificaron más de 200 especies y se han descrito dos nuevas especies para la ciencia, Luticola juliae y Luticola punae. Los ensambles de diatomeas dominantes en cada una de las secuencias analizadas permitieron caracterizar los ambientes en los cuales proliferaron y se pudo determinar que si bien Barrancas se encontraba en una zona que se fue tornando más árida a lo largo de todo el Holoceno, este sitio tuvo un comportamiento distinto permitiendo el desarrollo de pequeños humedales durante los momento regionales más secos.

Descripción: En esta tesis proponemos la hipótesis que incluir información de acciones relacionadas a la acción a predecir mejora la calidad de dicha predicción. Estas acciones relacionadas pueden obtenerse mediante distintos métodos de agrupamiento sobre información de precios, rendimientos y ratios derivados de los balances trimestrales. En la figura 1.1 se representa el proceso completo. Nuestro conjunto de datos se basó en las acciones de las empresas de que cotizan en los mercados de valores de los Estados Unidos, dentro de las 3000 empresas con mayor capitalización bursátil, listadas en el índice Russell 3000. Dentro de dichas empresas, se han impuesto dos condiciones: (i) que hayan cotizado y (ii) que haya presentado balances en el período de enero de 2017 a junio de 2022, representando un total de 2359 acciones para trabajar. Utilizamos los balances trimestrales para generar 10 ratios financieros y los convertimos en series temporales. También utilizamos las series habituales de precios de cierre y rendimientos diarios. Con estos conjuntos de series temporales agrupamos las acciones representadas con estas características utilizando K-Means o K-Medoids con distancias basadas en Dynamic Time Warping, Extended Frobenius Norm y en la distancia euclidiana de los coeficientes generados por transformadas rápidas de Fourier. La información derivada de estos agrupamientos permitió seleccionar las características a proporcionar a modelos de ARIMA y Redes Neuronales, utilizando no solo los datos de la acción a predecir, sino la correspondiente al conjunto de acciones presentes en el grupo al cual pertenece la acción, para cada tipo de agrupamiento. El objetivo de este proceso es mejorar la predicción de precios o rendimientos y generar a partir de ello recomendaciones de inversión. Para validar la estrategia propuesta, comparamos el efecto de los diferentes modelos de agrupamiento y predicción sobre los rendimientos generados por una estrategia de inversión. Comparamos asimismo estos resultados con los obtenidos a través de métodos tradicionales de inversión en los mercados de valores. Nuestros resultados muestran una ventaja en el uso de la información adicional proporcionada por los métodos de agrupación. Además, los métodos basados en Redes Neuronales resultan en una mayor tasa de rendimiento que aquellos basados en métodos tradicionales como ARIMA. Las principales contribuciones de esta tesis fueron introducir las series temporales derivadas de los balances financieros para realizar agrupamientos de datos y usar los resultados de estas agrupaciones para seleccionar así la información más útil para los modelos de ARIMA y Redes Neuronales.

Descripción: Fil: Maldonado, Ana Cecilia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Conocer los parámetros de historia de vida de las diferentes especies de condrictios es uno de los principales requisitos para evaluar el estado de sus poblaciones y su vulnerabilidad a la explotación pesquera. En este trabajo se estudiaron las características de historia de vida en cuanto a edad, crecimiento, madurez, longevidad y mortalidad de tres especies de condrictios pertenecientes a diferentes grupos taxonómicos y capturadas frecuentemente en el Golfo San Matías: el pez gallo Callorhinchus callorynchus (Holocephali), el tiburón gatuzo Mustelus schmitti (Selachii) y la raya ojona Atlantoraja cyclophora (Batoidea). Los ejemplares analizados de cada una de las especies se obtuvieron de diferentes fuentes: campañas de investigación pesquera anuales realizadas entre los años 2004-2007, muestreos de desembarques de la flota comercial y a bordo durante los periodos 2005-2009 y 2011-2012. La edad y crecimiento fueron calculadas a partir de la lectura de secciones vertebrales para el caso del gatuzo y la raya ojona evaluando cinco modelos de crecimiento. En cambio, para el pez gallo se evaluaron dos metodologías: la interpretación de marcas de crecimiento en la espina de la primer aleta dorsal y el análisis de estructura de tallas. En el caso del pez gallo (Holocephali: C. callorynchus), el rango de tallas obtenidos a partir de los muestreos de desembarques de las capturas comerciales estuvo entre 22 y 58 cm de largo al comienzo del lóbulo superior de la aleta caudal (LCLS) (n = 2126) para los machos y para las hembras entre 25 y 76 cm de LCLS (n = 1571) y el obtenido a partir de tres campañas de investigación fue entre 8-13 a 59 cm LCLS para los machos (n = 1005) y entre 14 a 69 cm de LCLS para las hembras (n = 1132). En cuanto a la metodología de lectura de edades en la espina dorsal utilizada en este estudio, se concluye que la técnica no fue eficaz para estudiar la edad y crecimiento, ya que existe incertidumbre y poca precisión en cuanto a que las lecturas observadas representan el número máximo de anillos presentes en la espina. A partir del análisis de estructura de tallas (método Mix-ACOH) se identificaron 12 clases de edad para los machos y 16 para las hembras. Considerando el criterio biológico el modelo de Gompertz con L0fijo (GGFL0 fijo) fue seleccionado como el más adecuado para ambos sexos. Los parámetros de crecimiento obtenidos con esta metodología indican que las hembras tienen un crecimiento de tipo moderado (K = 0,17 años-1; L∞ = 70,75 cm; L0 = 10 cm) mientras que en los machos es de tipo rápido (K = 0,257 años-1; L∞ = 53,11cm; L0 = 10 cm). La longevidad teórica estimada fue de 13 y 21 años de edad en machos y hembras respectivamente. Se observó que existen diferencias entre sexos en la madurez del pez gallo estimándose en el caso de las hembras un LCLS50%= 47,48 cm y una edad de madurez (E50%)= 9,34 años y para los machos un LCLS50%= 43,39 cm y una E50%= 5,7 años. El LCLS50% de las hembras representó un 62% de la talla máxima, mientras que la E50% representa el 44% de su longevidad. En los machos, el LCLS50% representó un 70% de la talla máxima, mientras que la E50% representó el 42% de su longevidad. La de mortalidad natural (M) obtenida fue entre 0,28 y 0,41 año-1 para los machos y 0,15 y 0,30 año-1 para las hembras, siendo la Mpromedio de 0,35 año-1 y 0,23 año-1 para machos y hembras respectivamente. En conclusión, se observaron diferencias entre sexos en las características de historia de vida del pez gallo en el GSM: la talla máxima, la talla y edad de madurez y la longevidad en el caso de las hembras fueron mayores a la de los machos, mientras que la tasa de crecimiento y mortalidad natural fueron menores. Futuros estudios de análisis demográficos y de evaluación de stock deberían realizarse para evaluar la productividad y capacidad de resiliencia de la especie. En el caso del gatuzo (Selachii: M. schmitti), el rango de tallas obtenido a partir de los muestreos de desembarques comerciales estuvo entre 37 y 89 cm de largo total (LT) para los machos (n = 624) y para las hembras entre 39 y 106 cm de LT (n = 612). Las edades observadas variaron entre 1 y 15 años en los machos y entre 1 y 21 años en las hembras. No se encontraron diferencias significativas en las curvas de crecimiento de los modelos evaluados. El modelo de VonBertalanfy de 2 fases (VBGF-2 fases) para ambos sexos juntos fue seleccionado como el más adecuado por el ajuste estadístico y el criterio biológico (parámetros estimados: K = 0,12 años-1; L∞ = 103,12 cm; t0 = -3,56 años; th = 4,4 años; h = 0,11). El parámetro K, indica que el gatuzo tiene un crecimiento moderado. La longevidad teórica estimada fue de 21,42 años. No se encontraron diferencias significativas en la talla de madurez entre sexos, estimándose un LT50% = 66,9 cm que corresponde a una E50% = 5,6 años (27% de su longevidad) para ambos sexos. El LT50% de las hembras representó un 71% de la talla máxima y en los machos un 63%. El rango de M obtenido en este estudio fue entre 0,19 y 0,29 año-1, siendo la Mpromedio = 0,23 año-1. En conclusión, se observó que existieron diferencias entre sexos en las características de historia de vida del gatuzo: la talla promedio y máxima y la edad máxima observada fueron mayores para las hembras, mientras que la mortalidad natural fue menor a la de los machos. Las estimaciones realizadas en este estudio en el GSM indican que el tiburón gatuzo M. schmiti tiene un crecimiento moderado, es una de las especies más longevas dentro del género Mustelus y tiene una edad de madurez relativamente temprana. Para la raya ojona (Batoidea: A. cyclophora) la estructura de tallas obtenida de los muestreos de desembarques comerciales estuvo entre 32 y 68 cm de LT en los machos y entre 32 y 66 cm en las hembras. Las edades observadas en machos variaron entre 0+ y 8 años (n =124) y para las hembras variaron entre 1 y 10 años (n = 167). Se encontraron diferencias significativas entre sexos en las curvas de crecimiento. En los machos el modelo de von Bertalanffy con 3 parámetros fue seleccionado como el más adecuado según el ajuste estadístico y el criterio biológico. Con este modelo se estimaron los siguientes parámetros: la talla de nacimiento L0 = 18,7 cm; talla asintótica L∞ = 64,3 cm; y coeficiente de crecimiento K = 0,25 años-1. En cambio para las hembras el modelo de Gompertz de 3 parámetros fue seleccionado como el más adecuado según el ajuste estadístico y el criterio biológico. Para este modelo se estimaron los siguientes parámetros: la talla de nacimiento L0 = 23,7 cm; talla asintótica L∞ = 68,36 cm, y coeficiente de crecimiento K = 0,24 años-1 . La longevidad teórica fue estimada en 12,6 y 10 años para hembras y machos, respectivamente. La talla de madurez (LT50%) se estimó con el modelo logístico obteniéndose para los machos un LT50% = 54,13 cm y para las hembras un LT50%= 56,72 cm, correspondiendo a edades de madurez de 6 y 7,2 años para machos y hembras, respectivamente. Los resultados obtenidos indican que existen diferencias entre sexos, siendo las hembras las que maduran a edad y tallas mayores y son más longevas. El coeficiente de crecimiento K indica que A. cyclophora tiene un crecimiento relativamente rápido (K ˃ 0,2 año-1) por encima de la media en la familia Rajidae y sería la especie de crecimiento más rápido en el género Atlantoraja. A su vez es la especie de menor longevidad dentro del género Atlantoraja y tiene una edad de madurez tardía. Este estudio contribuye al conocimiento de las características de historia de vida de tres especies de condrictios del Mar Argentino. Las diferencias observadas en las especies estudiadas en el GSM demuestran que si bien puede existir un patrón/relación común en las características de historia de vida de los condrictios al comparar con otros grupos taxonómicos mayores (por ej. a nivel de clase), cuando los parámetros se analizan a nivel de especie, familia e incluso orden o subclases, existe una amplia gama de estrategias de historia de vida y diferentes relaciones entre parámetros. Por lo tanto es importante estudiar los parámetros de historia de vida a nivel especifico e incluso regionalmente cuando se realizan evaluaciones poblacionales de las especies de condrictios y se analiza su vulnerabilidad a la explotación.

Descripción: Sympterygia bonapartii se distribuye desde Río de Janeiro (23º S), Brasil hasta Santa Cruz (51º S), Argentina. El objetivo de este estudio fue estimar los parámetros de historia de vida y caracterizar los desembarques comerciales de la especie en la pesquería de arrastre de fondo del Golfo San Matías (GSM). Los ejemplares se colectaron en el GSM durante los años 2004-2010. Los mismos provinieron de las campañas de evaluación de recursos demersales realizadas por el Instituto de Biología Marina y Pesquera ―Alte. Storni‖; del programa de observadores a bordo de las embarcaciones pesqueras de la Provincia de Río Negro y de los muestreos mensuales de desembarques de la flota de arrastre local. Las mayores concentraciones de individuos se registraron entre los 80 y 100 m de profundidad en el sector este del golfo. La talla de madurez sexual para los machos y las hembras se estimó en 545 y 594 mm, respectivamente. La especie presentó un ciclo reproductivo estacional. La época de apareamiento ocurriría de julio a diciembre y la de puesta de septiembre- octubre a febrero. De acuerdo al análisis de la dieta, la especie se consideró como consumidora secundaria, de hábitos bentónicos. La dieta se describió como carcinófaga y presentó variaciones de acuerdo al sexo, talla y período del año. En la pesquería de arrastre local, S. bonapartii fue la raya con mayor cantidad de individuos desembarcados y la segunda por su contribución en peso. Los desembarques de la especie se caracterizaron por un predominio de ejemplares maduros y de hembras. Esto sugiere la presencia de segregación sexual y de una selección de tallas a bordo de las embarcaciones por parte de la tripulación.

Descripción: Las precipitaciones sobre las montañas son en gran parte originadas o incrementadas cuando el flujo horizontal de aire húmedo es forzado a ascender por la topografía. Esta situación se produce mayormente en el invierno sobre los Andes Centrales (30º -37ºS), cuando el flujo del oeste intenso de un ciclón extratropical llega hasta latitudes subtropicales. Debido a la escasa información disponible en la cordillera, las variaciones de la precipitación son documentadas en una escala transversal a la misma que no tiene en cuenta variaciones entre valles y picos. A partir de 7 años (1970-1976) de datos de precipitación de invierno (Abr-Sep) disponible, la máxima cantidad de precipitación se observó sobre zonas pendiente arriba de la cordillera antes de alcanzar la cresta, siendo aproximadamente el doble de la cantidad de precipitación observada en zonas bajas a barlovento. Inmediatamente a sotavento de los picos más altos, la cantidad de precita- ción cae drásticamente generando un notorio gradiente transversal a la cordillera, con precipitaciones largamente disminuidas en zonas bajas a sotavento. Esta disminución fue mayor en zonas bajas del norte de Mendoza (31.5º-34.5ºS) que del sur (35º -36.5ºS), probablemente debido a la mayor actividad baroclinica y un decaimiento de la altura de la cordillera hacia el sur, permitiendo que una mayor cantidad de precipitación logre atravesar la cordillera. El efecto de bloqueo de los Andes es tan marcado que altera los regimenes de precipitación de las zonas bajas aledañas, siendo de invierno a barlovento y de verano a sotavento al norte de 35º. Las series de precipitaciones diarias revelaron, además, que las tres cuartas partes de la precipitación acumulada en el invierno sobre la cordillera, representativa a su vez de la total anual, es producto de solo 4 o 5 eventos significativos en promedio durante el invierno. Las condiciones sinópticas típicas de los eventos significativos exhibieron un ciclón extratropical intenso sobre las costas sudamericanas del océano Pacifico, con un fuerte flujo concentrado de humedad paralelo al frente frío, el cual ha sido denominado “río atmosférico” en estudios previos en las costas norteamericanas del Pacifico. Dicho flujo de humedad dispuesto mayormente perpendicular a la cordillera impacta y descarga grandes cantidades de vapor de agua en forma de precipitación sobre los Andes Centrales. A barlovento de los Andes, una corriente en chorro paralela a la cordillera es frecuentemente observada en niveles bajos, consistentemente con el predominio de condiciones de estabilidad que favorecerían un bloqueo orográfico y un desvío del flujo hacia el polo; mientras que a sotavento de los Andes, un flujo descendente intenso usualmente alcanza la superficie produciendo tormentas de viento Zonda. Simulaciones numéricas con alta resolución (i.e., ≤ 15 km) confirmaron durante dos casos de estudio que el flujo del oeste es bloqueado y desviado hacia el polo en ni- veles bajos, originando una corriente en chorro paralela a la cordillera. Por otro lado, el flujo de humedad que logró atravesar el sector de los Andes más altos (33º-34ºS) des- cargó el 49% de su contenido de vapor de agua de la atmósfera en forma de precipita- ción a través de mecanismos de ascenso orográfico, mientras que el flujo que atravesó los Andes más bajos (35º - 36ºS) descargó el 25% de su contenido de vapor. Este resulta- do explicaría la mayor precipitación observada en el sur que en el norte de Mendoza, a sotavento de la cordillera. Las observaciones y simulaciones numéricas indican que rol de la topografía de los Andes Centrales es dominante sobre las precipitaciones de invierno en la cordillera misma y en las regiones bajas adyacentes. En las simulaciones sin topografía, la precipi- tación queda limitada exclusivamente al forzante sinóptico, y por lo tanto la cantidad de precipitación cae abruptamente al desaparecer el patrón de precipitación orográfico do- minante. Además, las simulaciones sin la cordillera de los Andes sugieren, por un lado, que las zonas bajas de Cuyo recibirían una mayor cantidad de precipitación y las condi- ciones atmosféricas serían más húmedas a la real durante el invierno. Y por otro lado, cantidades mucho menores de vapor de agua serían removidas de la atmósfera en forma de precipitación, sin la acción de mecanismos de ascensos orográficos adicionales al sinóptico, lo cual implicaría una disponibilidad de agua dulce bastante menor para las regiones de Chile y Cuyo en un escenario sin cordillera de los Andes.

Descripción: En zonas montañosas se observa ocasionalmente un viento fuerte que desciende desde la cresta al valle o al llano. Recibe distintasdenominaciones segun las zonas donde sopla: chinook en Estados Unidos y Canadá; fohn en los Alpes Europeos; Canterbury - northwester en Nueva Zelandia; bers wind en Sud Africa; Zonda en Argentina. El objetivo principal de este trabajo de tesis es determinar laestructura del Viento Zonda y las causas de su aparicion para obtener undiagnóstico de su comportamiento y métodos de pronóstico de alto grado devalidación. Los objetivos parciales o secundarios son: establecer el régimenclimatológico de la ocurrencia del Zonda y los Parámetros meteorológicosque lo acompañan en estaciones de ubicación geográfica y altura diferentes;analizar la estructura tridimensional del fenómeno; investigar sobre losprocesos físicos involucrados en su aparición; establecer reglas depronóstico objetivo en base a parámetros termodinámicos, sinópticos yclimáticos. Existen algunos antecedentes sobre el tema en nuestro país entrabajos específicos y en otros donde si bien el tópico central no es el Zonda, el fenómeno aparece mencionado. En el extranjero existe una bibliografía mucho más abundante referidaal fenómeno, especialmente en Canadá, Estados Unidos y Suiza, Alemania y Austria. Una caracterización geográfica mediante fotos satelitarias permitevisualizar los distintos accidentes orográficos y las laderas montañosasprincipales. Se realizó una climatología del llano, a partir de la selecciónsubjetiva para las estaciones de los días de Viento Zonda con datos diariosde libretas meteorológicas. Este método se desarrolló considerando un conjunto de variables ocombinación de las mismas consideradas relevantes "a Priori" paraidentificar la ocurrencia de Viento Zonda, resultando sersatisfactoriamente eficaz ya que permite hallar casi todos los eventos deuna serie prolongada. Para corroborar la eficiencia de esta forma de identificación decasos, se aplicó el método estadístico del Análisis Discriminante Escalonado que permitió, además, establecer una jerarquia de las variablesrespecto a su mayor o menor incidencia en la discriminación de "días de Viento Zonda" con los de ausencia del mismo. Se aplicó solamente a lasciudades de Mendoza y San Juan clasificando mejor los casos de esta últimapor la mayor frecuencia y mejor definición del fenómeno en esa localidad. Las variaciones hisrotérmicas y el viento máximo alcanzado son loselementos que identifican mejor al día de Viento Zonda. La ausencia de nubes bajas, la nubosidad lenticular y la de "pared ofranja" del Zonda desempeñan un papel importante en El Plumerillo (Aeropuerto de la ciudad de Mendoza). En invierno el calentamiento es lo que mejor discrimina y durante elresto del año la disminución de humedad es el factor mas relevante. En el llano el Viento Zonda es un fenómeno poco frecuente, siendobastante menor la ocurrencia de eventos severos o muy severos. Con respecto a la marcha anual, es entre Mayo a Noviembre que ocurrela mayoria de casos a más de la mitad se registra entre Mayo a Agosto. La menor frecuencia está condicionada a la altura sobre el nivel delmar a la distancia de la estación a la Cordillera o Precordillera. El Viento Zonda tiende a Soplar con mayor frecuencia de tarde, a lahora de la temperatura máxima y con menor frecuencia de madrugada, con unminimo a la hora de la salida del sol. El calentamiento diurno influyesobre el aire frío de capas bajas a disminuye su contraste térmico,permitiendo la irrupción del viento en el llano. Con los datos horarios de termohigrógrafos se realizó una climatologíade Vallecitos (una estación de montaña a 2220 metros sobre el nivel delmar). Se desarrollaron dos métodos indirectos de detección del fenómeno, unoel de Zonda térmico a otro el de Zonda higrico. El método tiene comoobjetivo determinar el incremento de temperatura que es necesario obteneren un intervalo de tiempo fijado para poder decir que se esta en presenciade Zonda termico, teniendo en cuenta la onda climática diaria. El segundo, es semejante al anterior, teniendo como objetivodeterminar la variación de humedad relativa que es necesario obtener a unintervalo de tiempo fijados para decir que se está frente a un caso de Zonda higrico a ver en oue medida coinciden con los de Zonda térmico y losde Viento Zonda real. Los resultados indican que el hígrico identifica mejor que el térmicoa los casos de Zonda real. La mayor frecuencia de horas con Zonda térmico y/o hígrico correspondeal invierno. Inversamente a lo que sucede en el llano las horas de mayorfrecuencia en esta estación de montaña corresponden a las inmediatasposteriores a la salida del sol. Esto podría ser consecuencia del efectode brisa montaña-valle. El Viento Zonda en la montaña presenta períodos contínuos o pulsantesdebido a la masor rafagosidad observada a esas alturas. Existen muchos casos de Viento Zonda en alta montaña, que no aparecenen el llano, que se denominan en este trabajo "Zonda de altura". La estructura tridimensional del fenómeno fue analizada seleccionandoun caso típico de moderada intensidad ocurrido en la Provincia de San Juany norte de la de Mendoza, que llegó a las ciudades capitales de ambasprovincias en la tarde del 23 de Agosto de 1983. La situación sinóptica se caracterizó por una vaguada entrante desdeel oeste a una cuña en el este del país; un frente caliente en el extremonoreste; la Depresión del Noroeste Argentino trasladada más al sur; unflujo moderado del norte en el centro del País y una depresión migratoriaentrando al norte de la Patagonia con un frente frío acercándose a la Cordillera desde el oeste-sudoeste. Se concluye que el Viento Zonda se produjo por el ascenso y posteriormayor descenso orográfico de una masa de aire prefrontal fuertementebaroclínica y que en la cúspide de la Cordillera apareció como un vientofrío que se fue calentando adiabáticamente al descender. El enfriamiento progresivo en las cumbres de la Cordillera se debió alacercamiento de una vaguada. El pasaje frontal fue posterior. El flujo de aire se produjo al estilo de un "chorro descendente" aalguna distancia y a alguna altura del perfil del terreno en la faldaoriental de la cordillera provocando un rotor en ese espacio y la formaciónde lagunas de aire húmedo en las pendientes orientales de la Cordillera Frontal o Cordón del Plata. Se establecieron las similitudes y diferencias entre el caso de Zondamoderado y los eventos severos. En estos el aire no desciende dejandolagunas protegidas sino que lo hace en forma de cascada siguiendo elrelieve y su aparición en el llano esta precedida de un Zonda contínuo yprolongado en estaciones de montaña desde varias horas antes. Con los datos de presión atmosférica reducida al nivel medio del mar,se analizaron los campos medios de presión (el campo medio total, el dedías con Zonda, el del día anterior, el de dos días antes, el dia posteriory los días con Zonda en altura). Hay una alteración significativa en los días con Viento Zonda respectodel desarrollo climatológico de la situación sinóptica en superficie alobservarse: el cinturón de bajas polares desplazado hacia latitudesmenores; un sistema ciclónico sobre la Isla Chiloe y el oeste de Chubut;intensificación notable de la vaguada climatológica al oeste del pais;existencia de un frente frío a una distancia media de 500 km al sudoeste dela ciudad de Mendoza. A ambos lados de la cordillera se observa due la componente zonal delviento es significativamente mayor a la altura de la cresta de lacordillera. La tropósfera media presenta mayor cortante vertical delviento y por ende mayor baroclinicidad indicando estas condiciones elacercamiento de un sistema frontal. Finalmente, de los resultados obtenidos al diagnosticar el Viento Zonda se obtienen reglas y metodos de Pronóstico, algunos de ellos con unalto grado de verificación. Se consideraron procedimientos sencillos como el metodo observacionalempírico a partir de la forma, densidad y ubicación de las nubes quepermiten inferir los desarrollos futuros posibles del fenómeno. Se tuvieron en cuenta también elementos sinópticos y aerológicos depredicción. Mediante la aplicacion del Análisis Discriminante Escalonado a unconjunto de variables, se seleccionaron algunas que fueron asumidas comopredictores. Entre ellas se destacan: la diferencia de presion entre San Juan y La Serena (Chile); la presion atmosférica de Puerto Montt; ladepresión de punto de rocío de 850 hPa en El Plumerillo a la componentemeridional del viento a 250 hPa en Quintero. Todos estos datoscorresponden a las 12 UTC. Se confeccionaron cuatro programas distintos: uno que trabaja con ungradiente espacial meridonal y un gradiente espacial cuasi zonal; otro queutiliza los valores de presión atmosférica a 12 UTC de ciertas estacionesselecciondas; un tercer programa predictor que usa parametros derivadosdel radiosondeo de El Plumerillo y por último, otro pograma predictorrealizado con variables derivadas del radiosondeo de Quintero. La evaluación de estos progranas predictores implementados se realizóconsiderando pronósticos determinísticos y probabilísticos, resultandoaltamente satisfactoria. Los programas tienden a sobreestimar laprobabilidad de ocurrencia de Zonda en el llano. Los casos de falsasalarmas superaron ampliamente a los de sorpresas. Dada la eficacia a sencillez de los programas, éstos pueden serimplementados en forma operativa en cualquier oficina de pronósticos

Descripción: Las bajas temperaturas y las sequías representan dos de los principales factores limitantes delcrecimiento y distribución de los árboles. El efecto del estrés sobre las plantas depende, entreotros factores, de los mecanismos de resistencia que posean. Las hojas son consideradas el “cuello de botella” en el continuo del transporte de agua suelo-planta-atmósfera, dado quepequeñas variaciones en el sistema vascular foliar podrían tener importantes consecuencias enel transporte hídrico a nivel de planta y limitar fuertemente la productividad y el éxitocompetitivo de las plantas. El objetivo de esta tesis fue caracterizar eco-fisiológicamenteespecies arbóreas típicas del dosel del Bosque Atlántico semideciduo (BAs) en términos de suresistencia al déficit hídrico y a las bajas temperaturas. Para esto se establecieron relacionesfuncionales entre la fenología de las especies, sus propiedades hidráulicas y morfo-anatómicasfoliares, sus tasas de crecimiento y economía de agua y carbono en diez especies del BAs en laprovincia de Misiones. Los resultados de este trabajo mostraron que existen relaciones decompromiso entre los rasgos funcionales de las especies. Estas relaciones se ven reflejadas enlas estrategias ecológicas de utilización de recursos y en la capacidad de resistir eventos deestrés generados por las bajas temperaturas o por los déficits hídricos. Las especies deciduasfueron capaces de tolerar en mayor grado los eventos de a sequía, disminuyendo su capacidadde resistencia a las bajas temperaturas. Las especies siempreverdes, en cambio, presentaronmecanismos que les permitieron tolerar las temperaturas congelantes, pero no así los déficitshídricos.

Descripción: Se han estudiado las características estadísticas de campos de radiación acústica de 1,0 KHz y 1,5 KHz dispersados por superficies aleatoriamente rugosas. Las cantidades investigadas son: coherencia, intensidad total, coeficiente de dispersión, correlaciones espaciales y fluctuaciones de fase para la dirección especular y fuera de esta. Esto fue realizado mediante simulación numérica y por lo tanto técnicas para simular superficies rugosas con espectro direccional de potencia específico y la dispersión de ondas por las mismas fueran desarrolladas. La superficie fue generada usando una extensión a dos dimensiones de la teoría de filtros (sistemas lineales). Debido a que posee una estadística relativamente bien definida, la superficie del mar con un espectro direccional de Neumann correspondiente a una velocidad de viento de 5 m/seg fue modelada en este trabajo. La superficie fue verificada mediante la función de autocovarianza y la varianza. Su comportamiento coincide con el esperado. La dispersión fue simulada formando facetas en la superficie, aplicando las leyes de la reflexión en cada faceta, y acumulando rayos con la debida consideración a las fases y geometría del frente de onda, en un arreglo de receptores que simulan sesenta y tres transductores omnidireccionales. Se trabajó en las aproximaciones de Kirchhoff y Fresnel, [Este trabajo ha sido presentado en el 82° reunión de la Acoustical Society of America, realizada en Denver, Colorado,en Octubre de 1971.]y se ignoraron reflexiones múltiples. Los valores expresadosde las cantidades deseadas fueron calculados como promedios sobre ensambles de treinta muestras. Se da en este trabajo una definición del grado de coherencia de una onda acústica dispersada por una superficie rugosa aleatoriamente variable como un caso especial de la definición normal [M. Born y E. Wolf, Principles of Optics (Pergamon, London, 1959), p. 498]. Esto se consigue correlacionando la señal en el punto campo dispersada por la superficie rugosa y la señal que estaría presente si la superficie fuerasuave. Esto lleva a una interpretación de la coherencia intrínsecamenteasociada con la superficie. La coherencia así definida fue medida para las dos frecuencias, el máximo grado de coherencia fue encontrado para la dirección especular, 0,73 para 1,0 KHz y 0,61 para 1,5 KHz. Se encontró un máximo de intensidad total en la dirección especular. El coeficiente de dispersión, calculado en primera aproximación, presenta un máximo en la dirección especular, -3,32 db (1,0 KHz) y —4,59 db (1,5 KHz), decreciendo hacia los bordes del cuadro receptor. Se midieron las correlaciones espaciales vertical y horizontal respecto al receptor especular; para el caso vertical se observaron longitudes de correlación de 19 m (1,0 KHz) y 14 m (1,5 KHz) y en el caso horizontal la longitud de correlación excede las dimensiones del cuadro receptor para ambas frecuencias. Se calcularon además las fluctuaciones defase; los resultados muestran un mínimo en la dirección especular, 59 % (1,0 KHz) y 98 % (1,5 KHz). Dichos valores coinciden con los obtenidos en trabajos previos. Como estudio complementario se realizó un análisis del campo dispersado incoherente obtenido cuando se ilumina la superficie con ondas planas de alta frecuencia, en direcciones distintas a la del viento. Se encontró una definida relación entre la distribución angular de la dispersión y el ángulo de iluminación.

Descripción: En el presente trabajo se ha dado comienzo a estudiosquímicos de composiciónde aceites de gérmen de sorgos argentinos. Estegrano cuyo cultivo se incrementa paulatinamente en el país, es motivo de explotaciónindustrial en los Estados Unidos y en otros países, derivando de talesprocesos una gama de productos similares a los que se obtienen del grano de maiz. En la primera parte se presenta una información someraacerca del cultivo, cosecha y variedades adaptadas en el país. Asimismosereseña la utilización de este grano en la alimentación de ganado proporcionandoinformación bibliográfica reciente sobre su composición química, contenido vitamínicoy composición en aminoácidos de sus proteinas. También se hace un comentario,basado en estudios sistemáticos actuales tomados de la literatura, acercade la utilización del grano de sorgo en la fabricación de cerveza. Las partes II y III se refieren concretamente al trabajoexperimental realizado: estudio de las características y composición químicade los aceites de sorgos argentinos. En ese sentido se ha operado sobre partidasde sorgo de las principales variedades cultivadas en el país, procediéndose a ladeterminación por vía húmeda, a la extracción de los aceites del germen con hexanotécnico y al estudio de sus principales características físico-químicas y composicionesacídicas. Como complementose presentan análisis someros de composicióndel germen agotado por hexano. Se han considerado sorgos de las siguientes variedades,localidades y provincias de cultivo (cosecha l959-60):"Martin", "Plainsman", "Early Kalo" y "Combine Kafir 60" de Manfredi (Córdoba); "Feterita Pergamino", "Feterita Selección Pergamino", "Plainsman" y "Martin Milo" de Pergamino (Buenos Aires); "Milo Doble Enano" y "Westland" de Anguil (La Pampa); "Napalpí"de R.S. Peña (Chaco) y "Azucarado Leoti", "Early Kalo" y "Martin Milo" de Constitución, Rosario, San Lorenzo (Santa Fé). En orden sucesivo de experimentaciónse operó así: l).- Degerminación por vía húmedade partidas de aproximadamentelO Kg de grano de cada variedad. Se observaron rendimientos engérmen seco a1 aire, entre 2,9 y 4,2% de grano entero. Se pudo establecer quees menester estudiar cuidadosamente la degerminación de este grano con vistas a1campo industrial, a fin de lograr degerminaciones cuantitativas en la obtenciónde gérmen libre de otras partes del grano. 2).- Molienda del germen de cada variedad, agotamientocon hexano técnico y aislamiento de los aceites brutos de extracción. Se obtuvieroncomo tales aceites de color amarillo intenso y variable, que enturbian porenfriamiento a 15-20°C. Los rendimientos observados oscilaron entre 18,5 y 30,8 %de gérmen seco al aire, (0,60 - 1,29% de grano entero). Estas cifras son muy inferioresa las mencionadas en 1a literatura ( 2,41 - 3,16% sobre grano entero parasorgos norteamericanos), logradas por extracción del grano sin degerminación ypreviamente liberado del material céreo exterior. Los sorgos argentinos rinden,sin embargo, 1,95 —2,93% de aceite por extracción directa del grano molido, previamenteliberado del material céreo. Los rendimientos en cera (extracción delgrano entero con hexano hirviente) oscilaron entre 0,20 y 0,35% de grano entero. Se concluye que los contenidos en aceite y en cera de los sorgos argentinos sonsimilares a los de los sorgos norteamericanos. Asimismo, que los bajos redimientoscalculados en base a1 aceite extraído del gérmen se deben a las deficienciasnatadas en el proceso de degerminación, que resultó distante de ser cuantitativo. 3).- Determinaciónde las principales caracteristicasfísico-Químicas de los aceites brutos de extracción. Se determinan en cada caso,habiendo registrado los siguientes valores extremos: p.e. 25/4°C 0,9128-0,9159;índice de refracción a 25°C l,47lO-1,4730; índice de saponificación 187,4—l91,5;índice de iodo (Hanus) 116,9-125,5; n° de acidez (mg KOH/g)5,5-32,3; insaponificabletotal 2,29-3,37; índice de iodo del insaponificable 76,7-107,6. 4).- Determinación de los contenidos en tocoferolestotales. Desde que no se registran antecedentes bibliográficos sobre este punto,se determinaron tales contenidos operando sobre aceites y sobre los respectivosinsaponificables. Los contenidos extremos (expresados en mg α-tocoferol/100 g deaceite) fueron: 40,3-87,4 y 31,2-105,2 en determinaciones sobre aceites e insaponificablesrespectivamente. Estas cifras señalan en general, valores ligeramentesuperiores para las determinaciones sobre insaponificables, circunstancia quellama la atención desde que se afirma que en el reino vegetal no existirían tocoferolesen forma de ésteres. Se concluye que los aceites de gérmen de sorgos estudiadoscontienen tocoferoles dentro de los valores extremos registrados en aceitesde gérmen de maíz argentinos (41,9-167,0 mg/lOOg). 5).- Determinación de las composiciones acídicas. Operandopor aplicación de la técnica espectrofotométrica en el Ú.V. y luego deisomerización alcalina, se determinaron tales composicionesen los 14 aceites,registrandolos siguientes valores extremos (% de ácidos totales): ácidos saturadostotales 14,7 - 23,2; oleico 13,8 - 37,3; linoleico 46,2 - 59,5; linolénico 0,8 3,0;dienos y trienos conjugados preexistentes 0,3 - 1,3. Por tanto, son componentesmayores los ácidos oleico y linoleico. En los aceites de sorgos argentinosse registran mayores contenidos en ácidos saturados totales, menores en oleico ymayores en linoleico que en los aceites de sorgos norteamericanos. La representacióngráfica de todos los valores de composición encontrados en función de los indicesde iodo de los aceites, indica que a mayores valores de estos últimos correspondenmayores contenidos en ácido linoleico y en saturados totales y menorescontenidos en ácido oleico. En dos casos se determinaron las composiciones acídicaspor destilación fraccionada de los ésteres metílicos de los ácidos "sólidos"y "líquidos", estableciendo las composiciones en ácidos particulares de losácidos Saturados totales, demostrando que el principal componenteen este grupoes el ácido palmítico. Se presenta una discusión acerca de los valores de composiciónhallados por ambas técnicas. 6).- Reconocimiento de componentes ácidos no saturados. Fueron indudablemente reconocidos los ácidos oleico, linoleico y linolénico. El primero a través de su transformación en el ácido 9-10 dihidroxiesteárico; elsegundo por su transformación en el ácido 9-10, 12-13 tetrabromoesteárico y eltercero por su conversión en el ácido 9-10, 12-13, 15-16 hexabromoesteárico. Elreconocimiento del ácido linolénico es señalado por vez primera en aceites degérmende sorgos. 7).- Determinación de la composición Química del gérmen agotadopor hexano. Todas las harinas residuales de la extracción de los aceitesse analizan, registrando los siguientes valores extremos: humedad(100 105°C) %9,1-12,2; cenizas (500-550°C) % 1,9-13,5; proteínas(N x 5,7) % 17,0-25,1;fibra cruda % 4,3-7,7; almidón % 23,0-42,3 y pentosanos % 9,8-16,3. Se observancomo "no dosado" % cifras extremas de 4,5-ll,8.

Descripción: El objetivo de esta investigación, que se propone como tesisdoctoral, es presentar la caracterización petrológica ygeoquímica de un sector del basamento metamórfico de lasubprovincia geológica Puna austral que permanecía practicamentedesconocido cuando se programó e inició este estudio, en 1984. Con el transcurso del tiempo varios autores, entre ellos Ramos (1986, 1988), Dammet et al. (1988), Koukharsky et al. (1988),han publicado trabajos que presentan modelos geotectónicos deevolución continental para la Puna que han demostrado laimportancia de contar con información lo mas detallada posibleacerca de 1a litología, estructura y edad de las unidadesorogénicas que componen los esquemas propuestos. La falta deprecisión de algunos datos que suelen manejarse hace que dichosmodelos comiencen a perder validez. De modo tal, la importanciade la presente investigación desarrollada radica en el hecho deque se propone aportar la mayor cantidad de datos petrograficos,petrológicos y geoquímicos posibles para dilucidar los procesosque dieron origen a las metamorfitas que marginan por el orienteel salar del Hombre Muerto y precisar sus relaciones con lasrocas que integran la denominada Faja Eruptiva de la Puna Oriental, en el limite entre las provincias de Catamarca y de Salta. Este estudio incluye una detallada descripción petrográficade la heterogénea secuencia litológica que constituye elbasamento metamórfico con el objeto de realizar la propuesta deun nombre formal para el mismo: Metamorfitas de Hombre Muerto. Secuenta, ademas, con numerosos datos sobre la composición químicaque se han analizado estadísticamente con la finalidad depresentar una caracterización geoquimica de las metamorfitas lomas rigurosa posible. Cabe destacar que existen pocosantecedentes de este tipo de análisis para datos geoquímicos enel pais y es original para rocas de este tipo pertenecientes a la Puna, en especial en lo que respecta a la separación desubpoblaciones y a su comparación mediante las mediaspoblacionales y los estadísticos de contraste. Tambien se hacenecesario destacar que se ofrecen datos inéditos acerca de loscontenidos de oligoelementos, particularmente de las tierrasraras para rocas metamorficas y de los modelos normalizados delas mismascon respecto a diferentes materiales de referencia. Este tipo de analisis ha permitido comprobar el origensedimentario para la mayoria de los grupos litológicos quecomponen las Metamorfitas de Hombre Muerto, como asi tambien elorigen volcánico para otros miembros de la misma unidadformacional. Hipótesis similares tambien fueron comprobadas parala unidad denominada Filitas de Laguna Verde. Se plantea, además, la existencia de afinidades químicas entre algunos gruposlitológicos de las metamorfitas y los granitoides que forman la F. Oire. El análisis complexivo de los protolitos metamórficos,anatécticos e ígneos ha permitido sumar elementos de juicio parauna hipótesis de evolucion petrológica y estructural relacionadacon un ambiente tectónico extensional para el lapso comprendidoentre el limite Precámbrico-Cámbrico y el Ordovícico medio,cuando la orogenia oclóyica revierte el proceso hacia un ambientenetamente compresivo.

Descripción: El propósito de este trabajo experimental ha sido contribuir al conocimiento de la composición química y características físicas y aromáticasde los aceites esenciales de plantas autóctonas. En este caso particular nos hemos ocupado separadamente de los aceitesde hojas y ramas de un arbolillo que crece indígena en la zona del Parque Nacional Nahuel Huapi. Su clasificación botánica es la siguiente: Familia: ANACARDIACEAE TRIBU: RHOIDEAE Género: SCHINUS. Especie: SCHINUS CRENATUS. Se le conoce vulgarmente con el nombre de "laura". Después de hacer un comentario general sobre los aceites esenciales, susaplicaciones, compleja composición, métodos de extracción y la importanciay desarrollo que van adquiriendo en nuestro país, pasamos a reseñarlas normas o directivas que conviene seguir en la investigación deestas sustancias, mencionando los métodos clásicos de separación así comolos más modernos, y los medios de lograr la identificación de componantes. Carecemos de antecedentes bibliográficos sobre nuestras esencias, noobstante hemos encontrado trabajos sobre otras plantas de la misma familia. El material usado se recolectó durante el mes de Febrero de 1960, se dejósecar al aire y fué enviado por la dirección del Parque Nacional Nahuel Huapí en la cantidad de 20 Kg. Hojas y ramas se trataron separadamentepara obtener sus aceites esenciales. Las primeras, una vez trituradasa mano, se destilaron con vapor de agua a presión. Sobre el destiladose efectuaron varios extractos etéreos. Estos extractos reunidos,se concentraron obteniéndose un producto con bastante resina. Se procedióa su purificación sometiéndolo a destilación con vapor de agua enequipo a reflujo y trampa graduada del tipo adoptado por la A.O.A.C. de E.E.U.U. obteniéndose 8,4 ml de esencia de hojas. Rendimiento: 0,18 ml de esencia % g de hojas. Las ramas, molidas mecánicamente, fueronluego arrastradas con vapor de agua recogiéndose 4,7 ml de esenciaen trampa tipo A.0.A.C. de E.E.U.U.— Rendimiento: 0,26 ml % g.

Descripción: Se presenta un estudio sobre las características y composición de los aceites esenciales de las plantas identificadas como Senecio Neaei de Candolle, Haplopappus pectinatus Philippi y Senecio bracteolatus Hooker et Arnott, en el que se empleó la cromatografía en fase gaseosa, la espectrofotometría infrarroja y ultravioleta y el aislamiento de componentes por vía química. Los aceites esenciales se obtuvieron por arrastre con vapor de agua de las ramas, hojas y flores secadas al aire. A.- Senecio Neaei de Candolle. Rendimiento de aceite esencial: 1,97%. Aspecto: Producto oleoso. Color: Ambar rojizo. Olor: Intenso, aromático, con nota al mizclado. Peso específico: 1.0129. Indice de refracción ɳD 22°C: 1.5140. Desviación polarimetrica: αD 22°C -22,60°. Indice de acidez: 80. Indice de éster: 33. Indice de carbonilo (Método de Bryant-Smith)1,85%. Contenido en ácidos libres: 11,2% De los ácidos libres se obtuvo por arrastre con vapor de agua una fracción insoluble que produjo con 2-4 dinitro fenil hidrazina una hidrazona de punto de fusión 85°C. Se aislaron fenoles en la proporción de 1,38% y a partir de ellos un 3-5 dinitro benzoato de punto de fusión 103,5°C-104,5°C que correspondería a chavicol. Con el reactivo de Girard T se aisló una cetona cuya 2-4 dinitro fenil hidrazona fundió a 222°C y cuya semicarbazona lo hizo a 195-197°C y un aldehido cuyo complejo con Girard T e ioduro mercúrico fundió a 124°C. Se aisló también un componente soluble en alcali cuyo derivado bromado funde a 99°Cy que posiblemente sea una lactona. Se prepararon columnas cromatográficas usando como soporte tierra de diatomeas y como fases fijas diacetato hexaisobutirato de sacarosa (SAIB), aceite de silicona, fosfato de tricesilo y sebacato de dioctilo, completándose los ensayos con las columnas de Perkin-Elmer: R (U con Poliglicol LB 550 X), Q (grasa de Apiezon L), A (Ftalato de diisodecilo) y succinato de glicol. Con el objeto de detectar del mayor número de componentes se emplearon las mencionadas columnas variando la temperatura y caudal de gas eluyente que en todos los casos fue N2. Los mejores resultados se lograron con las columnas más polares de succinato deglicol y SAIB. Después de una serie de ensayos se comprobó la presencia de una fracción poco volátil, por lo cual se destiló el aceite esencial al vacío, obteniéndose con ello una fracción incolora de olor penetrante, volátil y un residuo oleoso no volátil. La primer fracción que reveló estar constituida por los ácidos responsables del elevado índice de acidez del aceite fué metilada y cromatografiada. De ella se aislaron 10 fracciones cuyos espectros de infrarrojo indican la presencia de oxidrilo y dos clases de carbonilos. Este resultado induce a suponer la presencia de ácido dicarboxílicos uno de cuyos carboxilos se metiló y el otro no, con lo que los dos tipos de carbonilo corresponderían uno a carboxilo y otro a éster. Además se detectó en los ácidos la presencia de carbonilo precipitado con 2-4 dinitro fenil hidrazina. De todo ello se concluye que la serie de compuestos aislados puede tratarse de ácidos dicarboxílicos cetónicos. La fracción oleosa está constituída esencialmente por una cetona, cuyos derivados ya se mencionaron, y cuyo carbonilo está conjugado con una doble ligadura según se observa en su espectro infrarrojo. Tienen un contenido de -CO de 10,4% que indicaría un peso molecular mínimo de 270, valor del orden de los compuestos diterpénicos, y su índice de refracción es αD 20°C 1.5170. B.-Haplopappus pectinatus Philippi. Rendimiento de aceite esencial por 100 gr de material seco: 0,66 ml. Aspecto: oleoso. Color: amarillo. Olor: Aromático, agradable. Indice de refracción ɳD 22°C: 1.4970. Indice de éster: 52.4. Desviación polarimétrica αD 21°C: -0.48°. Con NaOH 0,5% se separó 1.85 gr de fenoles por 100 ml. de aceite. El producto extraído presenta 6 manchas en la cromatografía en placa. Se aisló con el reactivo de Girard T una cetona cuya 2-4 dinitro fenil hidrazona tiene un punto de fusión de 123-127°C y cuya semicarbazona funde a 170°C. Estos valores corresponden con los de la α-ionona. Con el mismo reactivo se obtuvo un complejo de aldehido e ioduro mercúrico que fundió a 153°C. La 2-4 dinitro fenil hidrazona del aldehido no fundió a la temperatura de 220°C. Estas características corresponden a productos de nucleo bencénico con cadenas laterales y a furfural. De los ésteres del aceite se aisló por saponificacipon un alcohol del que se obtuvo un 3-5 dinitro benzoato de punto de fusión 94°C. Se corresponde este dato según tablas a alcohol isopropílico bencílico o cumínico. Se aisló otro compuesto de olor agradable cuyo picrato fundió a 54°C. De ensayos efectuados en el cromatógrafo de fase gaseosa a 150 y 170°C con la columna con SAIB se verificó por los espectros obtenidos, que la temperatura superior producía descomposición del aceite. Por cromatografía en fase gaseosa se aislaron dos compuestos cuyos espectros infrarrojos revelaron ser de α-pineno y d-limoneno. El espectro infrarrojo de la esencia entera muestra la presencia de compuestos carbonílicos y una débil absorción de oxidrilo. C.- Senecio bracteolatus Hooker et Arnott. Rendimiento de aceite esencial por 100 gr de material seco 1,23 ml. Aspecto: Oleoso, separa espontáneamente cristales blancos. Color: Amarillo Claro. Indice de refracción ɳD 22°C: 1.4910. Desviación polarimétrica αD 22,5°C: -9,40 Se extrajo con NaOH 0,5% 1,624 gr de fenoles por 100 ml de aceite. La cromatografiía en placa del producto extraído revela la presencia de por lo menos 5 componentes. Con el reactivo de Girard T se aisló una cetona cuya 2-4 dinitro fenil hidrazona funde a 170°C y cuya semicarbazona lo hace a 130°C. Un complejo de aldehido, Girard T e ioduro mercúrico obtenido presentó un punto de fusión de 162°C,característico de compuestos bencénicos con cadenas laterales. Por saponificación de los ésteres contenidos en el aceite 102°C, que correspondería d-necisomentol o d-1-neocarvomentol. Espontáneamente se separa del aceite un compuesto cristalino insoluble en álcalis y poco soluble en solventes que funde a 120°C. Por cromatografía en fase gaseosa se aislan varios componentes de los que se identifican por espectrofotometría infrarroja al α- pineno y β-felandreno. El espectro infrarrojo del aceite esencial entero revela la presencia de compuestos con grupos carbonilo y una pequeña absorción de oxidrilo. El espectro infrarrojo del componente sólido cristalino presenta una banda intensa en 1.099 cm^-1 (9,1 μ) que indicaría la presencia de función éter. Se incluyen 51 de los gráficos obtenidos en las experiencias, consituídos por cromatogramas, espectros de infrarrojo y ultravioleta.

Descripción: Fil: Pattin, Miguel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: La reacción entre compuestos orgánicos metalados y monóxido de carbono fue objeto en los últimos años de numerosos estudios. Los productos de carbonilación obtenidos tienen gran interés sintético, y las reacciones que les dan origen constituyenun área importante de la química orgánica moderna, básica y aplicada. Dentro del amplio espectro de carbonilaciones de compuestos organometálicos investigadas, las reacciones entre CO yaminas secundarias litiadas había recibido, una atención muy escasa,prácticamente nula, cuando, se comenzó la presente tesis. Durante el curso de este trabajo han aparecido algunos estudios relacionados, pero, aún así, dada la complejidad de la reacción enestudio, se han explorado sólo aspectos muy parciales del problema. Frente a ésto, nuestro objetivo fue investigar la carbonilación de aminas secundarias litiadas tan completamente comofuera posible (dentro de los límites de un trabajo como el presente), y, partiendo casi desde cero, llegar a una descripción de lareacción tomando en cuenta diversos aspectos que pudieran tenerinterés en química orgánica, tanto sintética como mecanística. El trabajo fue entonces, necesariamente, multifacético,y abarcó desde problemas ligados íntimamente con lo experimental, e.g. la puesta a punto de reacciones para preparar standards, eldesarrollo de métodos de valoración de reactivos y de técnicasadecuadas para la preparación y el manejo de estos últimos en lasreacciones de carbonilación; hasta cuestiones esencialmente teóricas, como por ejemplo los cálculos mediante métodos mecanocuánticos de los intermediarios de reacción propuestos. Un problema importante a resolver, una vez elegida la reacción entre dibutilamiduro de litio y monóxido de carbono como objetivo principal del estudio, consistió en la determinación de la composición de la mezcla de productos de reacción. Sibien se encontraron, en principio, varios compuestos, cuya identificación se realizó, se pudo establecer finalmente que sólo cuatro productos deben provenir directamente de la reacción entre el amiduro y CO seguida de hidrólisis, tres de ellos en cantidadesimportantes (N,N-dibutilformamida (40), N,N-dibutilglioxilamida hemihidrato (41) y bis(N,N-dibutil)hidroximalonamida (42)) y elcuarto (bis(N,N-dibutil)cetohidroxisuccinamida (57)) en muy pequeña proporción y sólo en ciertas condiciones de reacción. Respectode los otros compuestos obtenidos (entre otros, N,N-dibutilhidroxiacetamida (43), tetrabutilurea (44), bis(N,N-dibutil)oxalamida (45) y bis(N,N-dibutil)cetomalonamida (47)), se verificó que provienen de reacciones laterales, con trazas de impurezas, fundamentalmente oxígeno, introducidas durante la hidrólisis, y quepueden ser evitadas si ésta es especialmente cuidadosa. En relación con la elucidación de las estructuras, (quefueron además verificadas, en practicamente todos los casos, porcomparación con testigos preparados de manera independiente), lasmayores dificultades se presentaron con la glioxilamida, uno delos productos más interesantes de la reacción, y que puede resultar, en condiciones escogidas, el producto principal. Aquellas seoriginaron, principalmente, en un comportamiento espectroscópicobastante particular de ese compuesto, que puede inducir a error. Finalmente, el problema se aclaró mediante el estudio por difracción de rayos X de otra glioxilamida (N,N-diciclohexilglioxilamida, sólida), y la estructura fue confirmada, como ya se mencionó, mediante síntesis independiente. Los estudios espectroscópicos (especialmente 1H y 13C­RMN) relativamente más detallados llevados a cabo sobre la diciclohexilglioxilamida permitieron llegar a conclusiones interesantes relativas a la conformación preferida de la parte alquílica delas N,N-dialquilamidas con fuerte impedimento estérico. A diferencia de las di-isopropilamidas (que existen como confórmeros donde el plano determinado por los átomos de carbono, nitrógeno y oxígeno amídicos es un plano de simetría de los grupos isopropilo), las diciclohexilamidas y, probablemente, las ciclohexilisopropilamidas, prefieren una conformación asimétrica, con pérdida de la equivalencia entre átomos de carbono. Apoyan esta conclusión losdatos espectroscópicos y los de difracción de rayos X. Los cálculos mecanocuánticos efectuados, si bien no son definitorios per se, son consistentes con los anteriores y parecen confirmarlos. La segunda cuestión encarada, una vez identificados losproductos de reacción, fue conocer el comportamiento de la reacción en estudio frente a la variación de los distintos factores que pudieran afectarla (temperatura, solvente, agregado de cosolventes y de posibles impurezas, intensidad de la agitación (la reacción es heterogénea) y agregado de posibles atrapantes de losintermediarios). Interesó también examinar la extensión y generalidad de los resultados, obtenidos con dibutilamiduro de litio,frente al cambio de reactivo. Respecto de este último punto, los estudios bastante amplios realizados en reacciones de carbonilación de diciclohexilamiduro de litio; y otros, provenientes de la carbonilación deciclohexilisopropil, morfolil y dipentilamiduro de litio, examinados en las condiciones de reacción más representativas, muestran los mismos productos de reacción en todos los casos, así como lasmismas tendencias en cuanto a la prevalencia de uno u otro producto al variar las condiciones de reacción. Tomando en cuentaque las aminas estudiadas son bastante diferentes entre sí, la homogeneidad de resultados indica un alcance amplio de las conclusiones obtenidas con el dibutilamiduro de litio. Los datos de reacciones de dibutilamiduro de litio y CO en distintos solventes, temperaturas, etc., proporcionan uncuadro general del comportamiento de la misma frente a las distintas variables que pueden afectarla. El mismo tiene específicamente interés en relación con el uso en síntesis de la reacción en estudio, y permite, dentro de ciertos límites, predecir su comportamiento en otras condiciones. A partir de los resultados que estamos comentando se encontraron también condiciones que optimizan el rendimiento de cadauno de los productos de reacción, en particular el de la glioxilamida, que como ya se mencionó, es uno de los más interesantes,y respecto del cual las ventajas de este método de preparación enrelación con otros posibles son más notorias. Así se puede obtenereste compuesto, en menos de diez minutos de reacción, con un 85%de rendimiento. Las condiciones pueden adaptarse también para lapreparación de formamida (ca. 80%) o de hidroximalonamida (ca. 85%). Además, otro aspecto, quizás de mayor potencial sintético aún queel precedente, es la obtención de intermediarios carbaniónicos,que pueden resultar útiles en su reacción con electrófilos adecuados. Además de proporcionar un conocimiento general de la reacción en estudio, las pruebas llevadas a cabo en distintas condiciones se emplearon también para la elucidación del mecanismo de reacción. La propuesta, fundamentación y verificación del mismoes, precisamente, el tercer aspecto tratado en la presente tesis. En resumen, se propone el esquema de reacción que figura en la página siguiente, y que justifica la aparición de todos los productos encontrados. El primer paso es la formación del carbamoílo (50), apartir de amiduro de litio y monóxido de carbono. El carbamoílo puede, a su vez, adicionar más amiduroy formar el intermediario 51, adicionar más CO y formar el intermediario 53, o reaccionar con intermediario 53 ya formado y producir el intermediario 54. Según predomine una u otra vía se obtendrán preponderantemente los distintos productos después dela hidrólisis: formamida a partir de 51, glioxilamida a partir de 53 e hidroximalonamida a partir de 54. La glioxilamida puede provenir también de la hidrólisisdel intermediario 55, producido por adición de amiduro a 53 o pordimerización de 50. Si bien en muchos casos la concentración finalde 55 es despreciable, en otros contribuye, con un porcentaje detectable, a la formación de la glioxilamida. El intermediario 53 puede también dimerizarse y producir el intermediario 58, que por hidrólisis produce la cetohidroxisuccinamida. Esta reacción, debido a la relativa estabilidad de 53, es apenas detectable. El mecanismo de reacción propuesto se fundamenta principalmente a partir de los resultados de las reacciones de carbonilación de dibutilamiduro de litio en distintas condiciones de reacción, a partir de los productos obtenidos al tratar oxidativamente distintas mezclas de reacción antes de la hidrólisis y también a partir de las reacciones de algunos intermediarios preparados independientemente. Finalmente, el mecanismo de reacción fue objeto de unestudio mediante métodos semiempíricos de cálculo de orbitalesmoleculares (INDO, MINDO, MNDO), que mostraron la factibilidaddel esquema propuesto. Simultáneamente, las optimizaciones degeometrías efectuadas al hacer los cálculos sugieren estructurasprobables para cada uno de los intermediarios involucrados. Además de las propiedades fácilmente deducibles de lasestructuras de los compuestos aquí discutidos, cabe mencionar quealgunas de estas amidas han demostrado tener actividad como insecticidas, el Nat. Cancer Inst. de N. I. H. (Maryland, USA) nos hasolicitado muestras de algunos de los productos de reacción discutidos en esta tesis para examinar su posible actividad contrala leucemia linfocítica, y la reacción, que ya hemos parcialmentepublicado, ha sido recientemente usada para preparar dialquilformamidas marcadas con 11C en el carbonilo amídico.88 Consulte el resumen completo en el documento.

Descripción: El término carbonilación se utiliza usualmente de una manerainespecifica para denotar una reacción en la cual el CO seintroduce en una molécula orgánica. Son de gran interés losderivados acilo de Li, Mg, Zn, Al, es decir, aquellos metalescuyos alquilos y arilos son potentes nucleófilos. La importanciapotencial de la acilación nucleofilica es la de proveer una rutadirecta para la obtención de aldehidos, cetonas, amidas, α-hidroxicetonas,etc. En particular, quiza los compuestos organometálicos másútiles y versátiles sinteticamente sean los alquil- y aril-litios. La estructura de los compuestos organoliticos en estadosólido ha sido revisada recientemente. Los estudios de rayos Xdemuestran que cuando no hay impedimento estérico apreciable,los compuestos organoliticos forman agregados (oligómeros):observan frecuentemente tetrámeros y hexámeros. Existenevidencias que demuestran que también en solución se encuentrancomo agregados. Los alquil-litios. generalmente hexaméricos ensolventes hidrocarbonados, cambian a la forma tetramerica alpasar a una solución eterea, quedando algunas moléculas de éterasociadas a los oligómeros. Los aril-litios se encuentran comotetrámeros en solventes hidrocarbonados, y como dimeros ensoluciones etéreas. La utilidad sintética de los alquil-litios ha sido estudiadaprincipalmente por Seyferth y col. Asi, su grupo ha desarrolladouna metodologia para la acilación nucleofilica directa dealdehidos, ésteres, y lactonas con buenos rendimientos, pormedio de la carbonilación lenta del alquil-litio a muy bajatemperatura, y atrapamiento inmediato “in situ" del acil-litiocon un electrófilo colocado en el medio de reacción. La utilidad sintética de los aril-litios ha sido estudiadaprincipalmente en nuestro laboratorio. Así, la reacción defenil-litio (sólido) con CO a 110°C produce α-α-difenil-acetofenona, 2, con rendimiento cuantitativo: la carbonilaciónde 1-naftil-litio y xilil-litio en solución (THF, 25°C) producedicetonas (ArC(O)C(O)Ar) en muy altos rendimientos (83% y 98%respectivamente). La hidrólisis de la mezcla de reacción con Ac2O produce el cis-dienolacetato con 100% de estereoespecificidad. En la presente tesis se ha estudiado la carbonilación demesitil-litio, obteniéndose la dicetona correspondiente con muybuen rendimiento (93%), y por un método más accesible que laúnica sintesis que informa un rendimiento similar, la cualutiliza compuestos organovanádicos, mucho más costosos que losaril-litios. La carbonilación de fenil-litio en presencia de haluros dealquilo produce diarilalquilcarbinoles con buen rendimientocuando se utilizan haluros primarios (62-80%). Con halurossecundarios y terciarios los rendimientos son de moderados abuenos (20-71%). En la presente tesis se ha extendido el alcancede la reacción, utilizando dibromoalcanos (trabajo publicado en J. Organomet. Chem.); los cuales dan lugar a bromoalquildifenil-carbinoles con buen rendimiento (50-80%). En los casos en que eldibromuro de alquilo tiene 3 ó 4 átomos de carbono, elcalentamiento de la mezcla de reacción antes de la hidrólisisproduce éteres ciclicos de 5 y 6 miembros, con rendimientos de 50% y 80% respectivamente. El método permite obtener eteresciclicos en un único paso, y con rendimientos mayores que losdescriptos en la literatura. La importancia sintética de la carbonilación de aril-litiosnos indujo a revisar el mecanismode la reacción, estudiado en 1973 por Whitesides y col., y revisado posteriormente por Nudelman y col. Hasta el momento de comenzar la presente tesis,la evidencia experimental permitia proponer el mecanismo que seexpone en el esquema R.1. Puede observarse en el esquema R.1 que el mecanismopropuesto es polar: el único radical que se postula es el cetilo 1, que no es un intermediario real de reacción sino unproducto. Sin embargo, últimamente se ha demostrado que muchasde las reacciones de los compuestos organometálicos como losreactivos de Grignard e incluso los compuestos organoliticos,ocurren por transferencia electrónica (TE). (ver esquema R.1) Los antecedentes de TE encontrados en la literatura, juntocon observaciones previas realizadas en nuestro laboratorio.sugirieron la posibilidad de que el mecanismo de carbonilaciónde los aril-litios ocurra por TE, y que podrian haber por tantocompuestos paramagnéticos en el medio de reacción. Paraconfirmar esto último, se desarrolló un método de RMN l3C quepermite determinar la concentración aproximada de radicales encondiciones preparativas. Este se basa en el ensanchamiento delas señales de los Cα de THF producido por la presencia deradicales. Para realizar el estudio se utilizó el anión radicalde la benzofenona apareado con litio (1): se observó que elensanchamiento producido por 1 en las señales de los carbonosde THF es lineal en el rango O.2-1.2 M; la pendiente de la rectaes 30.6 Hz/M. Tambien se observó que el agregado de solventes nopolares como hexano o benceno aumenta el ancho de las señales,lo cual acrecienta la sensibilidad del método. Se completó elestudio con la determinación de los corrimientos producidos por 1 en las señales de los carbonos de THF, y la influencia de lapresencia de 1 en los tiempos de relajación spin-red de éstos. Todo esto permitió calcular el número de moléculas de THFque se encuentran afectadas por cada molécula de 1 (aprox. 12); esta podria ser la zona "cibotáctica" alrededor de 1 (trabajo publicado en Mag. Res. Chem.). Una vez desarrollado el método descripto, se procedió amedir el ensanchamiento de las señales de los carbonos de THF,producidos por las mezclas de reacción aril-litiosCO. Losresultados indican para todos los aril-litios (fenil-. 1-naftil-, y mesitil-litio), que la concentración de radicales alfinalizar la reacción (antes de hidrolizar) es del orden de laconcentración inicial de reactivo (tabla 2.4), lo cual demuestraclaramente que los compuestos paramagnéticos constituyen unafraccion muy importante de los productos de reaccion (trabajopublicado en Tetr. Lett.). La identificación de algunas de las especies paramagnéticaspresentes en la mezcla de reacción, se realizo por resonanciaparamagnetica electrónica (RPE). La RPE es una rama de laespectroscopia que se aplica especificamente a moléculas queposeen electrones desapareados; los espectros obtenidos poseenuna estructura hiperfina que depende del spin de los núcleos dela molécula, de la cantidad de núcleos activos, y de lasconstantes de acoplamiento hiperfino (hfsc) correspondientes acu de los núcleos intervinientes. La reacción 1-naftil-litioCO (THF, 25°C) dió lugar aseñales intensas pero no resueltas, probablemente debido a lagran cantidad de lineas que producen los 7 hidrógenos diferentesen los productos de reaccion. Lo mismo ocurrio para la mezcla dereaccion PhLi (sólido)CO. Sin embargo, se obtuvo un espectrobien resuelto para las mezclas PhLiCO en Et2O y THF. En amboscasos el espectro obtenido es el mismo. Por medio de un programacomputacional pudieron obtenerse sus hfsc, las cuales fueronadjudicadas al anión radical de la benzofenona, pero probablementeapareado con un catión que no es Li+ tal cual (posiblementese trata de Li+ coordinado con CO). Esto fue deducidopor comparación con las hfsc existentes en la literatura. Recientemente, se ha detectado la especie (PhCOLi)-Li+ en elmedio de reacción PhLiCO (THF, 25°C, exceso de PhLi) (trabajo apresentar en el XIX Congreso Latinoamericano de Quimica). Elespectro obtenido corresponde a una partición de 3 H con hfsc = 3.40 G. El cálculo de la molécula PhCO(9 electrones pi) por elmetodo de Hückel da lugar a constantes muy similares, queproducen un espectro simulado muy similar al experimental. Tambien se realizaron estudios cinéticos: el 1-naftil-litio, 11, en solución de THF, reacciona lentamente con el solvente,dando lugar luego de 1-2 hs. a una señal de RPE: también seobserva un máximo de absorbancia en espectroscopia UV-visible. El seguimiento de la reacción a través de este máximo permitióobtener la constante de reacción, la cual es pequeña, alrededorde 10-4. La reacción 11CO (THFhexano = 20:80, 25°C)también se estudió por espectroscopia UV-visible. En este casola reacción es muy rápida, y debieron superarse numerosasdificultades: el coeficiente de extinción de los productos esmuy elevado: la presencia de un gas (CO) como reactivo dificultael mezclado: debió determinarse la solubilidad del CO en lamezcla de reacción para asi conocer [CO] inicial. Por otraparte, la reacción no da lugar a un único producto (30% de Naf2CO y 70% de (NafCO)2). Se realizó un tratamientomatemático que permitió corregir la ecuación cinética,considerando el efecto que produce lo antedicho sobre lasabsorbancias medidas. Los resultados obtenidos son lossiguientes: órdenes de reacción unitarios para cada uno de losreactivos (11 y CO), y una constante de velocidad igual a 6.63 M-1s-1, lo cual indica que el primer paso es el determinantede la velocidad de reacción (trabajo en preparación apresentarse en J. Org. Chem.). Se investigaron otros aspectos mecanisticos: la reacciónantedicha produce naftaleno, que no proviene de reacción delreactivo organolitico con trazas de humedad introducidas durantela manipulación. El agregado de Cl2CO a la mezcla de reacciónproduce rápidamente 1,1'-binaftilo; si luego de la reacción seagrega benzofenona se obtiene bencidrol, lo cual indica lareducción de la cetona a (Ph2CO)- o Ph2C(Li)OLi. También seprobó el efecto de inhibidores de radicales libres sobre lamezcla de reacción 11 Consulte el resumen completo en el documento.

Descripción: La reacción de carbonilación de compuestos organometalicoses, en la actualidad, un area de investigación muy activa ya quelos productos que se obtienen resultan ser potenciales agentes deacilación nucleofilica y proveen una ruta de acceso rapida y sencillapara la sintesis de numerosos compuestos carbonilicos y carboxilicos. Estudios previos acerca de la inserción de CO en la unión N-Li de aminas secundarias litiadas, dejaron ciertos interrogantesrespecto del mecanismo verdadero por el cual transcurre dicha reaccióny su potencialidad sintética. Por otro lado, a la vista de losresultados satisfactorios obtenidos en la C-carbonilación de compuestoshomociclicos aromáticos litiados, era de interés examinarsu posible extensión a la obtención de compuestos heteroclclicossustituidos para los cuales existen escasos metodos de sintesis. Los objetivos que se han propuesto alcanzar con el presentetrabajo estan relacionados, por un lado, con el estudio de todaslas variables que entran en juego en la obtención de los productosde carbonilación de amiduros de litio, conociendo de esta formasu/s mecanismo/s, con ellos explorar su aprovechamiento en la sintesisde compuestos diversos y hacer extensiva su aplicación a unamplio espectro de aminas secundarias. Por otra parte, los resultados obtenidos por reacción de furanoy tiofeno con CO han servido para examinar la utilidad sintéticade la reacción de carbonilación de compuestos heteroaromáticoslitiados en comparación con los ya conocidos homoaromaticos. Las aminas secundarias estudiadas en el presente trabajo fueron:morfolina, 51, piperidina, 50, dibutilamina, 41, diciclohexilamina, 47, y ciclohexilisopropilamina, 48. Por carbonilacion delos correspondientes amiduros de litio se obtuvieron tres compuestosprincipales: dialquilformamidas, 28, dialquilglioxalamidas, 54,y tetraalquiltartronamidas, 55, para 41, 47 y 48, mientras quesolo se obtuvo 28 cuando se partio de 50 y 51. Es importante hacer notar que junto a los productos de reaccionse obtienen cantidades de la amina inicial, variables segúnsea su naturaleza y las condiciones de reacción. Este resultadofue uno de los puntos claves para la elucidación mecanistica. Fue necesario conocer el contenido de amina libre presente enel amiduro de partida para descartarlo de la eventual formaciondurante la reaccion. Para ello, con los amiduros mas estables sehicieron determinaciones clasicas (reactividad diferencial amina-amiduro con IMe); este es el caso de los amiduros correspondientesa 41 (31), a 47 (52), y a 48 (53). En cambio, la alta reactividadde morfolina y piperidina exigió el desarrollo de métodos espectroscópicospara determinar el contenido inicial de estas aminasen los correspondientes amiduros (58 y 60 respectivamente). Determinar la proporcion existente de amina en los amidurosde litio es muy importante, ademas, porque esta estrechamente relacionadacon el estado de agregación de dichos compuestos. Esbien conocido, y de hecho es uno de los temas mas estudiados enlos últimos años, que la reactividad, regio y estereoselectividadde los reactivos organo-litiados dependende la estructura y delgrado de solvatacion de los mismos. Existen varios métodos quepermiten determinar el estado de agregación de amiduros de litio. Utilizando técnicas espectroscópicas, se propusieron, en estetrabajo, las estructuras de algunos de los compuestos estudiados,las cuales sirvieron para explicar detalles mecanísticos (publicacionenviada al J. Org. Chem.). Pudo comprobarse también que la cantidad de amina presentedurante el avance de la reacción está relacionada con la naturalezay el rendimiento de los productos de la misma. Asi, en lareaccion con morfolil y piperidilamiduro de litio, impide la formaciónde productos dicarbonilados, mientras que con dibutil, diciclohexily ciclohexilisopropilamiduro de litio, un contenido altode amina lleva a un mayor porcentaje de 54 y altos rendimientosde 55 se alcanzan cuando la cantidad inicial de amina es baja. Para confirmar estos resultados se han hecho numerosos estudiosentre los que se incluyen: utilización de aminas deuteradas,hidrólisis con D2O, agregado de electrófilos, de cosolventes, estudiosespectroscopicos, seguimiento de la reacción en el tiempo. Sin embargo, los datos mas relevantes se obtuvieron al estudiarlas propiedades ácido-base en THF de las aminas utilizadas. Para determinar la escala de "acidez relativa" (referida a la pérdidadel proton aminico para dar amiduro) se realizaron medicionesde desplazamiento quimico del Cα al N en RMN de 13C en equilibriosamina-amiduro entre pares de las aminas en cuestion. Para conocerla escala de "basicidad relativa" en THF (referida a la gananciade un proton para formar un ión amonio) se utilizó la formacion deun par iónico con 2,4-dinitrofenol (publicacion en prensa en el J. Chem. Soc., Perkin Trans 2) Araiz de estos resultados se pudo plantear una serie de equilibriosacido-base entre amina, amiduro, productos e intermediariosde reacción que permitieron explicar ciertos aspectos oscurosdel mecanismo involucrado. Por oxidación de las mezclas carboniladas previamente a lahidrólisis, se obtuvieron ureas y cetomalonamidas. Optimizando lascondiciones de reacción a fin de hacerla sintéticamente útil (publicaciónen prensa en Synthesis), también se lograron grandesavances a nivel mecanistico. Los compuestos obtenidos, la mayoriano conocidos o preparados por metodos laboriosos, fueron comprobadospor síntesis independientes. Con base en todos los trabajos realizados, se pudo explicarlos diferentes comportamientos frente a la carbonilación quepresentaron las distintas aminas utilizadas. Una visión generaldel mecanismo se presenta en la pagina siguiente. Cuando los amiduros carbonilados son 31, 52 y 53, el primerintermediario formado, 29, tiene la posibilidad de reaccionar conmas amiduro para dar formamida, 28, y amina a traves del intermediario 86, o con CO para formar el intermediario 84. Este, intercambia H por Li dando glioxalamida, 54, cuando el contenido deamina es alto; mientras que cuando la cantidad presente de aminaes baja, reacciona con 29 formando el intermediario 87, el cualpor hidrólisis rinde tartronamida, 55. El intermediario 87 puedeformarse también por reaccion de 54 con 29 siendo esta ruta la viade obtención de 55 cuando se esta en presencia de alto porcentajede amina. Cuandose trabaja con 58, la alta acidez relativa de la amina,posibilita la coordinación con el amiduro formando un complejo (morfolina.morfolillitio)2, el cual esta, además, favorecido porla presencia del O, que da lugar a la formación de una union hidrógenointermolecular. La inserción de CO en estos complejos lle-va a la obtención de un par iónico interno, por intercambio H-Lientre la amina y el carbamoillitio, el que por hidrólisis produceformamida, producto que se obtiene cualesquiera sean las modificacionesposteriores que se realicen en las condiciones de reacción. En cuanto a la piperidina, dado que tiene caracteristicasacido-base intermedias, la reacción de formación de piperidilformamidatranscurre por ambos caminos, y no se observan productos demayor grado de carbonilación. Por otro lado, la carbonilación de 2-furillitio presenta unaserie de dificultades derivadas de la alta inestabilidad que presentael anillo furánico. Este es propenso a la oxidación, a ciclizacionestipo Diels-Alder, a reacciones de apertura del anillo,a fotólisis y a polimerizaciones. Se logró obtener el reactivo con el maximo grado de pureza (publicación en Anales Asoc. Quim. Arg.) y se carboniló en las masvariadas condiciones. Luego de muchos ensayos infructuosos en losque sólo se obtuvieron polímeros gomosos, se consiguieron condicionesen las que fue posible detectar, aunque con bajos rendimientos,los productos de la reacción, a saber: 2,2’—bifurano; 2,2'—difurilcetonay furilo. En la carbonilación de arillitios, se obtienenfuncionalizaciones semejantes, habiéndose demostrado en nuestrolaboratorio, que se forman a traves de mecanismos que involucrantransferencia electrónica: postulamos mecanismos del mismo tipopara la reacción del 2-furi11itio. Los intentos de carbonilar 2-tienillitio, obtenido en excelentescondiciones, fueron insatisfactorios. Se pudo comprobar unagran estabilidad de este reactivo frente a la absorción de Co ennumerosas condiciones experimentales.

Descripción: Se ha estudiado la obtención a partir de la levadura depanaderia (Saccharomyces cerevisiae) de la enzima responsablede la fijación de anhídrido carbónico por dicho microorganismoy cuyas propiedades permiten clasificarla, de acuerdo a la nomenclaturaadoptada por Utter, como una carboxiquinasa fosfoenolpirúvicaque cataliza la carboxilación reversible del fosfoenolpiruvatode acuerdo a la ecuación: *Ver ecuación en tesis* Se ha desarrollado un método de obtención y purificaciónde la enzima a partir de polvo acetónico de levadura que comprendelas siguientes etapas: A) Extracción de la enzima con buffer borato 0.05 M B) Adsorción negativa con gel de fosfato preparado "in Situ". C) Precipitación con sulfato de amonio entre 42 y 55% desaturación final. Diálisis alcalina. para eliminar elsulfato de amonioy la cocarboxilasa. D) Eliminación de nucleatos por precipitación con sulfatode protamina. E) Fraccionamiento alcohólico en presencia de iones Ca^++recogiendo la fracción que cae entre 8.5 y 17% de concentraciónalcohólica (v/v). P) Precipitación con sulfato de amonio. Diálisis. G) Fraccionamiento alcohólico en presencia de iones Zn^++. H) Precipitación con sulfato de amonio. Diálisis. I) Cromatografía en columna de dietil amino etil celulosa (DEAE)(O alternativamente en columna de hidroxilapatita) J) Electroforesis de zona en columna de celulosa. La preparación final se comporta en los experimentos deelectroforesis libre y ultracentrifugación analítica como un sistemaaparentemente homogeneo. La enzima cataliza el intercambio de C^14 O2 con el carboxiloβ del oxalacetato a un pH óptimo cercano a 6.1 siendo lareacción dependiente de la presencia de ATP e iones Mn^++. En esascondiciones se pudo aislar oxalacetato radioactivo como 2-4 dinitrofenilhidrazona,la cual se identificó por cromatografía enpapel y radioautografía. La acción activadora que el ADP y elfosfoenolpiruvato ejercían sobre la reacción de intercambio sugirióque ambos compuestos podrian estar involucrados en lareacción de fijación, pero los primeros ensayos de carboxilacióndirecta del fosfoenolpiruvato realizados con extractos poco purificadosy en diversas condiciones experimentales fueron negativos. Ello recién fué posible llevando a cabo la reacción decarboxilación en presencia de la transaminasa aspártico-glutámicay glutamato o de la málico dehidrogenass y DPNH. En el primercaso utilizando C^14 O2 se pudo aislar y caracterizar por cromatografíaen papel y radioautografia, aspartato radioactivo yen el segundo caso se pudo seguir espectrofotometricamente elcurso de la reacción de oxidación del DPNH. La reacción de carboxilación del fosfoenolpiruvato requiere ADPe iones Mn^++ y tiene lugar a un pH óptimo de 5.4. El piruvatomas ATP no pueden reemplazar al fosfoenolpiruvato y ADP. La formación de ATP durante dicha reacción y la estequiometriade la mismase estudiaron utilizando un fosfoenolpiruvato marcadocon P^32 en el grupo fosfato y llevando a cabo la reacción enpresencia de C^14 O2. La determinación de las radioactividadescorrespondientes al ATP y oxalacetato formadas en esas condicionespermitió comprobar una estricta relación estequiométrica entreambas. La reacción es especifica para los polifosfatos de la adenosina,siendo la enzima inactiva con derivados de la guanosina,inosina, citidina y uridina ya sea en la fijación directa o enla de intercambio, en cambio los deoxiderivados de la adenosinaresultaron parcialmente activos. Si bien los extractos impuros presentan una parcial actividaden ausencia de cationes divalentes, los extractos altamentepurificados son sumamente dependientes de los mismos. El ion Mn^++ es el más activo de todos los cationes divalentes ensayados,siguiendole en importancia, el Zn^++, el Co^++, el Mg^++ y el Cd^++. Se estudió la influencia de la concentración de bicarbonatoen la reacción de carboxilación pudiéndose determinar la Km(C02) = 9.9 x 10^-3 M y la Km(CO3H^-) = 5 x 10^-3 M. Los reactivos de tioles ejercen acción inhibidora sobrela enzima. El p-cloromercuribenzoato fue el más efectivo puesen concentración 10^-4 M tuvouna acción inhibidora de casi el 100%.En esas condiciones la enzima puede ser reactivada parcialmentepor el glutation reducido, dependiendo el grado dereactivación de la duración del período previo de incubación dela enzima con el inhibidor. El melarsen fué menos efectivo (20%de inhibición con una concentración 0.66 x 10^-3 M). El iodosobenzoatoy la N-etilmaleimida en concentraciones 7 x 10^-4 y 5 x 10^-4 M respectivamente fueron inactivos. De los inhibidores de la asimilación de anhídrido carbónicopor la célula entera, que se ensayaron; 2-4 dinitrofenol,fluoruro y azida sódica, tan solo el último fue capaz de inhibiren forma significativa a la enzima. La enzima ejerce una marcada acción decarboxilante especificamentesobre el oxalacetato, siendo la reacción dependientede 1a presencia de concentraciones cataliticas de ATP, reemplazablepor ADP ó AMP y sus deoxi-derivados. Los otros nucleósidotrifosfatos ensayados carecen de acción activadora sobrela misma. Cuando la reacción se realiza en presencia de ATP, losproductos de la reacción son piruvato y fosfoenolpiruvato. Esteúltimo compuesto se identificó utilizando ATP marcado con P^32 en los grupos fosfatos ɣ y β y aislando un fosfoenolpiruvatoradicactivo. En los trabajos de rutina el fosfoenolpiruvatose determinó por el ortofosfato liberable por nitrato mercúrico. Con ADP ó AMP el fosfoenolpiruvato no se forma durante la reacciónde decarboxilación. Se debe descartar 1a posibilidad de que el ATP actúe enconcentraciones catalitica en 1a reacción. debido a su regeneracióncontinua a traves del sistema de la quinasa pirúvica, porquesi bien se determinó la presencia en los extractos utilizadosde esta última enzima, la misma requiere estrictamente lapresencia de Mg^++ ó Mn^++, en contraste con lo que ocurre con laactividad oxalacético decarboxilante de la enzima de levadura.que es inhibida por cationes divalentes (Mn^++; Zn^++; Cd+^+; Co^++y Mg^++). También los agentes complejantes de metales tienen accióninhibidora sobre la mencionada actividad decarboxilante. Así elverseno y la o-fenantrolina en concentraciones 6.7 x 10^-6 y 5 x 10-5 M ejercieron una inhibición cercana al 100%.La 8-hidroxiquinolinay el dietilditiocarbamato de amonio presentanuna acción inhibidora comparativamente menor. La acción inhibidoradel verseno puede ser suprimida por el agregado de unconcentración adecuada de iones Mn^++, pero en ese caso se observala acción inhibitoria propia del Mn^++. A1 igual que la reacción de fijación, la reacción de decarboxilaciónes inhibida por los reactivos de tioles, siendoel más efectivo el p-cloromercuribenzoato, siguiéndole en importanciael melarsen, N-etilmaleimida, iodosobenzoato y el iodoacetato. Se discute la posibilidad de que ambas actividades (fijaciónde anhídrido carbónico y decarboxilación del oxalacetato)correspondan a una misma enzima o bién estén relacionadascon entidades proteicas independientes. Además se describen una serie de experimentos realizadoscon P^32-fosfoenolpiruvato y C^14 02 que pueden interpretarse como unindicio de la formación de un complejo intermediario enzima-sustratosobre el que se llevaria a cabo la reacción decarboxilación. Finalmente se discuten los posibles mecanismos enzimáticosinvolucrados en la reacción, en relación a los resultadosobtenidos con la enzima de levadura de panaderia y otrasenzimas similares.

Descripción: En el presente trabajo se identificaron con diferentes técnicas los carburos estables en aleaciones de metales de transición de gran interés tecnológico: un conjunto de tres aceros de alta aleación tipo M2 de diferente composición en los que el tungsteno y/o molibdeno han sido total o parcialmente reemplazados por niobio, y una aleación Zr-2.5 % peso Nb. El acero M2 es un acero rápido para herramientas de uso universal y el Zr-2.5 % peso Nb es el material base de los tubos de presión de las centrales nucleares tipo CANDU. La estabilidad de los carburos se estudió en el marco de la teoría de Goldschmidt de aleaciones intersticiales. En los aceros la identificación de carburos estables se hizo mediante la determinación de la composición metálica de los mismos con un analizador dispersivo en energía adosado al microscopio electrónico de barrido. Se identificaron los carburos MC y M6C, típicos del acero M2. Se estudió además la distribución en tamaño y la distribución espacial de los carburos luego de distintos tratamientos térmicos, y se hizo la correlación de la microestructura con la dureza y la presencia o no del fenómeno de endurecimiento secundario. En Zr-Nb se hizo un estudio de las fases alfa y beta presentes luego de distintos tratamientos térmicos con ténicas metalográficas de microscopía óptica y electrónica de barrido y con la guía del diagrama de equilibrio de Abriata y Bolcich. Las interfases alfa-beta de Zr-2.5 % Nb fueron caracetrizadas como caminos rápidos de difusión, con técnicas de difusión de radiotrazadores aplicando el modelo Fisher-Bondy-Martin. Se promovió la precipitación de carburos mediante tratamientos térmicos de difusión de carbono a alta temperatura y precipitación a temperatura menor. Los carburos fueron posteriormente identificados como (Zr, Nb)C1-I con técnicas de microscopía electrónica de barrido, microsonda electrónica y difracción de rayos X.

Descripción: En este trabajo de tesis presentamos un modelo experimental de carcinogénesis mamariapor MNU y MPA en el ratón BALB/c. En nuestro laboratorio ya se había desarrollado un modelode inducción de adenocarcinomas mamarios por MPA, en el cual los tumores, que aparecen conuna latencia mayor al año, son en su mayoria ductales, hormono-dependientes y expresan en sumayoría altos niveles de RE y RP. En este trabajo hemos desarrollado la caracterización de lostumores inducidos por MNU + MPA en cuanto a su morfología y hormono-dependencia. Ademáscaracterizamos el rol de MPA como promotor tumoral y los efectosde la ovariectomía y de lasialoadenectomía en la inducción de tumores. Hemos desarrollado las condiciones de dosis necesarias como para poder estudiar alcarcinógeno MNU como un agente exclusivamente iniciador en el proceso de carcinogénesismamaria y pudimos definir la acción de promotor tumoral del progestágeno MPA. A partir de los experimentos aquí presentados, definimos también una acción especificadel MPA que es previa a la iniciación, favoreciendo ya sea por modificación o por incrementoen el número celular, la transformación neoplásica. A este efecto lo denominamos "permisividad". Las experiencias realizadas en los animales ovariectomizados, demostraron la importanciade las hormonas ováricas. La ovx generó un patrón de atrofia mamaria evidenciable por la técnicade montaje total de las mamas y en este caso, la acción de MNU fue casi nula, lo que sugiereque éste ejerce su acción sobre una celula o grupo de células presente en una glándula sometidaa estímulos hormonales. El MPA pudo suplir la ausencia de los ovarios debido quizá a su acciónprogestacional, elevando los valores de incidencia tumoral a niveles del control positivo. Se obtuvieron resultados interesantes en el análisis del rol de las glándulas salivares enanimales pretratados con MPA y MNU en la inducción tumoral. Registramos una significativadisminución en los valores de incidencia tumoral en aquellos animales tratados con MPA ysialo, frente a los controles intactos. Considerando que el MPA provoca un aumento de EGFsérico proveniente de las glándulas salivares y basándonos en datos previos de este efecto en elmodelo de carcinogénesis mamaria por MPA, confirmamos también que el EGF también juegaun importante rol en el modelo de cocarcinogénesis MNU+MPA, probablemente afectando la fasede promoción. Los tumores de mama surgidos en estos experimentos fueron clasificados comoadenocarcinomas con distintos grados de metaplasia pavimentosa. Las diferencias histológicastan marcadas entre los tumores inducidos por MNU y MPA y la mayoría de los tumoresinducidos exclusivamente por MPA nos indujeron a definir estos fenómenos como tiposdiferentes de carcinogénesis. La metaplasia pavimentosa fue un atributo exclusivo del MNU,siendo más evidente en los grupos expuestos a un mayor número de dosis de MNU. También fueevidente el la mayor incidencia de fenómenos metaplásicos en animales inoculados con MNUa los dos meses de MPA que a la semana. Todo lo analizado más datos previos nos inducen apensar que existe una fuerte correlación entre la histología y el agente iniciador (en nuestromodelo MNU). Estudios de montajes de glándulas mamarias revelaron que la metaplasiapavirnentosa precede al desarrollo de la lesión invasora. Los estudios de parámetros biológicos confirman los resultados anteriores demostrandouna diferencia muy notable entre ambos modelos experimentales. Como ya se mencionóanteriormente, si bien la mayoría de los inducidos por MPA son hormono-dependientes, todoslos inducidos en estos experimentos salvo alguna excepción fueron tumores autónomos. Nuevamente estos resultados nos llevaron a teorizar sobre posibles mecanismos de acciónde las hormonas y el carcinógeno en los distintos grupos experimentales discutiendo laprobabilidad de que ambos compuestos actúen sobre poblaciones celulares diferentes o siactuarían sobre la misma población de células madre induciendo diferentes cambios genéticos quelas llevan a diferenciar en forma diferencial. Por otra parte comprobamos que en este modelo de inducción tumoral, el MPA actúacomo un verdadero promotor tumoral, eliminando la posibilidad que esta hormona favorezca laaparición de las neoplasias mamarias, por un mecanismo inmunosupresor hipotético, ya que elestado inmunológico de los animales tratados con ambas sustancias estaba en valores normalese inclusive superiores a los normales. Curiosamente hemos demostrado que el MPA produce unamuy fuerte inmunoestimulación, confirmando a su vez que este efecto es netamente hormonaly no un mero efecto adyuvante inespecífico ya que fue revertido por un antiprogestágeno. Por último hemos demostrado también por primera vez que el MPA y el MNU actúancomo co-carcinógenos en el útero. Si bien el MPA y el MNU ambos inducen HGQ, losdeciduomas sólo fueron inducidos en animales tratados con MPA en presencia o ausencia de MNU, pero en distintos protocolos en los cuales los animales han sido tratados por un tiempocon MPA se han observado algunos carcinomas de endometrio e hiperplasias epiteliales severas,no detectadas cuando los animales tuvieron un inóculo de MNU muy cercano al de MPA. También hemos demostrado que MNU induce un alto porcentaje de leucemias cuya incidenciafue mucho menor en los grupos pretratados con MPA. En resumen, este modelo experimental si bien es interesante para dilucidar las funcionesdel MPA en el proceso de carcinogénesis no resulta un buen modelo de cáncer de mama humanoya que las características biológicas y morfológicas de los tumores son bastante diferentes a lamayoría de lo tumores humanos.

Descripción: ESTUDIOS DE LA REGULACIÓN DEL CRECIMIENTO TUMORAL En nuestro laboratorio se demostró que el tratamiento con MPA induce adenocarcinomasde mama en hembras vírgenes BALB/c. A partir de estos tumores se originaron distintaslíneas tumorales in vivo, la mayoria de las cuales dependían del MPA para su crecimientoen los animales transplantados. Respecto a la capacidad regulatoria del MPA sobre el crecimiento tumoral, los resultadosobtenidos muestran que: a. En las líneas dependientes de MPA (MPA-D), esta hormona fue capaz de estimularel crecimiento tumoral, aún mucho tiempo después de que los tumores habían sidotransplantados. b. La remoción de la hormona provocó la regresión de tumores ya palpables que, sinembargo, retomaron su crecimiento algunas semanas más tarde. En los pasajes subsiguientesla mayoría de estos tumores retuvieron sus receptores hormonales y su comportamiento MPA-D. c. La ovariectomía retardó, aún en presencia del MPA, el crecimiento de los tumores MPA-D, pero no afectó el crecimiento de los tumores autónomos. d. En las líneas MPA-D la P tuvo una actividad estímulatoria similar a la del MPA. e. En los animales sialoadenectomizados el MPA no perdió la capacidad de estimularel crecimiento tumoral. f. El MPA disminuyó los niveles de RP y aumentó los niveles de RE en las lineas MPA-D. A continuación se estudió la capacidad inhibitoria de los estrógenos sobre tumores MPA-D y autónomos RE+: a. Todas las dosis utilizadas de BE y de E2 inhibieron el crecimiento y produjeron laregresión de los adenocarcinomas inducidos por MPA, de los tumores primarios yde sus metástasis, aún en presencia de MPA o P. b. Las dosis más altas de BE no inhibieron el crecimiento de adenocarcinomas de mamaespontáneos RE-. c. Entre un 20 y un 50 % de los tumores MPA-D se hicieron resistentes al tratamientoestrogénico. En los pasajes subsiguientes estos tumores permanecieron resistentes aestrógenos y la mayoría conservó el patrón MPA-D. ESTUDIOS DE INDUCCIÓN TUMORAL En este trabajo también se llevaron a cabo experimentos en los cuales se investigósi la ovariectomía o la sialoadenectomía afectaban la capacidad tumorigénica del MPA ysi la P también era capaz de inducir tumores de mama. Los resultados mostraron que: a. El tratamiento con MPA aumenta la incidencia de tumores de mama en una cepaportadora de MMTV como C3H. b. Tanto la ovariectomía como la sialoadenectomía redujeron significativamente la capacidadtumorigénica del MPA. c. El tratamiento con P indujo tumores de mama en hembras vírgenes BALB/c. Lostumores inducidos por P fueron diferentes a los inducidos por MPA, mientras queéstos fueron mayoritariamente de histología ductal y HD, los inducidos por progesteronafueron de morfología lobulillar y HI. d. Tanto en los tumores inducidos por MPA como por P se encontró que la morfologíaductal se asociaba a un crecimiento HD, mientras que la morfología lobulillar estabaasociada a un patrón de crecimiento autónomo. A partir de estos resultados se puede concluir que los progestágenos sintéticos y naturalesinducen, en la cepa BALB/c, adenocarcinomas de mama ductales y lobulillares quedifieren entre sí en su sensibilidad hormonal. Mientras que la mayoría de los tumores ducta-les son muy sensibles a la presencia de hormonas y factores estimulatorios e inhibitorios,los tumores lobulillares presentan un crecimiento autónomo. Dado que en las mujeres aparecentumores mamarios con ambas morfologías, este modelo brinda la posibilidad de estudiarlos eventos que determinan y regulan el crecimiento de los dos tipos de neoplasias.

Descripción: Generalidades: Existen en la Republica Argentina inmensas superficies semiáridas cubiertaspor bosques y matorrales xerófilos.- En estas regiones secas prosperan naturalmente ciertos arbustos adaptados asoportar períodos de sequia muy intensos y prolongados.- El "Cardón moro" (Cereus Coryne) es un arbusto que se desarrolla en forma abundante en ciertas regiones de nuestro País.- El objeto de nuestro trabajoes el aprovechamiento con fines industriales del tejido leñoso que presenta el arbusto una vez desecado.- El "Cardón moro" es una especie perenne, arbores, que alcanza hasta 8 metrosde altura en los bosques de quebrachales.- Carece de hojas y cumple el tallosus funciones de fotosíntesis.- El tallo principal tiene un metro de altura,y se encuentra generalmente lignificado.- Las flores son hermafroditas.- Elfruto es una baya globosa de 6 cm de largo por 4,5 cm de ancho y no es comestible.- Florece en primavera y fructifica en el verano.- Las semillas son negras, abundantes de 3 mm de largo.- La reproducción se hace por semillas y por via agámica.- En su constitución entra el agua en un 91% aproximadamente. Fitografia.- El "Cardon moro" es una especie típica de la provincia botánica chaqueña,sólo raras veces se aventura a subir los niveles inferiores de las sierras pampeanas.- Se la puede ver desde el norte de Córdoba por Santiago del Estero,los llanos de la Rioja (Olta, Icaño), Catamarca (Chumbicha, Pomancillos, Albigasta), Chaca paraguayo, este de Santa Fé etc.- La zona de mayor "habitat" donde existen asociaciones casi puras de "Cardón moro",son las que se encuentran vegetando entre las cotas de 500 - 800 metros sobre el nivel del mar, siendo éstas concideradas como, las que económicamente son más aptas con un posible destino industrial.- Las asociaciones casi puras se encuentran en la provincia de Catamarca, en la zona en que se extiende la formación del monte de transición, abarcando zonaslimítrofes de La Rioja y Santiago del Estero.- Existen establecidas cuatro áreas de asociaciones casi puras de "Cardón moro"a saber: 1) En el valle de Catamarca. a) Estribaciones occidentales de las sierras de Alto y ancasti: franja de 1 á 5 Km de ancho por 30 Km de longitud.- Existencia aproximada 50 plantas de "Cardón moro" por hectarea.-bEstribaciones orientales de las sierrtas de Ambato: Franja de 1 á 5 Km de anchopor 50 Km de longitud.- Existencia aproximada de 30 plantas por hectareas.- 2) Estribaciones orientales de las Sierras de Ancasti: superficie de 7km de largopor 6 Km de ancho.- Existencia promedio aproximada 40 plantas por hectarea.- 3) Estribarciones occidentales de la sierra de Ambato, existen aquí algunos manchonesmuy densis de "Cardón moro", y se puede calcular que en promedio existen 50 plantaspor hectarea.- Análisis del tejida leñoso.- En vista de la abundancia y facilidad de reproducción que presenta en extensas zonasel "Cardón moro", se ha pensado en la aplicación industrial de su tejido leñoso.- Paraello hemos comenzado por efectuar los análisis, aplicando en general, y con resultados satisfactorios las técnicas de la "Tecnical Association of the Pulp and paper Industry official Standard" a muestras provenientes de las zonas de mayor "habitat".- Los datos que ha continuación se detallan son el porcentaje medio de muestras de distintoorigen.- Las cantidades expresadas son porcentajes sobre tejido seco.- Alcaloide del "Cardón Moro".- El "Cardón moro" según fué estudiado, posee un alcaloide que fúe llamado Coryneína.- Es este derivado de la oxitiramina, presentando un átomo de nitrógeno cuaternarioel cual torna a la molécula del alcaloide insoluble en solventes orgánicos.- El alcaloide posee acción fisiológica curarizante.- *Ver molécula en tesis* Análisis de muestras de "Cardón moro" provenientes de diversos cardonales de nuestro país. Celulosa.........29,44 Lignina..........18,40 Pentosanos.......18,40 Extractivos con agua....18,00 ´´ ´´ soda....26,00 ´´ ´´ solventes....3,10 Cenizas..........14,29 Metoxilos........3,41 Nitrógeno........6,47 Humedad..........12,00 Análisis de las cenizas. Silice......32,95 Oxido Férrico.....3,35 ´´ Aluminio....13,58 ´´ Celcio......39,75 ´´ Magnesio....6,93 Anhidrido fosfórico...1,88 Dióxido de titanio....0,13 Bario.................Trazas Manganeso............. ´´ Sodio.................Contiene Potasio............... ´´ Prácticamente el alcaloide del "Cardón moro" no fué posible aislarlo debido a como fueron preparadas las muestras, la molécula sufrió una degradación.- Aplicaciones practicas.- Con conglomerados de "Cardón moro" convenientemente desecado, se armaron probetas de dimensiones óptimas para adaptarlas a aparatos que nos registraran algunas propiedades de utilidad práctica del tejido leñoso del "Cardón moro".- 1) Se determinó el coeficiente de absorción normal del ruido comprobándose que nuestro material compita con materiales antisorosos tales como fibras de vidrio, lana mineral, acústico celotex y vermiculita, todos ellos en iguales espesores que nuestro material en estudio.- 2) Se determinó el coeficiente de conductibilidad térmica por el método de placa caliente protegida, según la norma A.S.T.M. C 177 - 45.- se obtuvo un valor promedio de K= 0,0452 Kcal.m /hora.°C.m^2 Para las distintas muestras.- El dato resulta interesante y competitivo con el corcho K= 0,0321 Kcal.m/hora.°C.m^2 utilizando en refrigeración industrial, el cual es importado.- Además en este uso, los conglomerados de "Cardón moro" tienen buen comportamiento frente a las vibraciones, es resistente a la compresión y no es atacado por los roedores.- 3- El "Cardón moro" desecado es un buen material de relleno en la fabricación de chapas dondese usan como aglomerantes resinas sintéticas.- Ello lo hemos comprobado fabricando chapas 3, 5y 8 mm de espesor, las cuales tienen dureza y rigidez comparables a sus similares del mercado.- 4- La cantidad de pentosanos que presenta el "Cardoón moro" lo hacen un buen material en la obtención industrial del furfural.- Con rendimientos comparables a los proporciones por la cáscara de la avena.-

Descripción: Esta tesis constituye un reporte de trabajos que se pueden enmarcar dentro de la gran corriente de investigación que conlleva la construcción de una teoría gravitatoria consistente con las demás interacciones básicas de la naturaleza; o sea, una teoría gravitatoria que contemple los preceptos cuánticos. El punto de partida de esta construcción aquí, y en una gran parte de las investigaciones actuales, es la teoría de la relatividad general, encarnada en la acción de Einstein-Hilbert, suplementada con correcciones de mayor orden en derivadas, lo cual posibilita construir modelos para explorar ciertos aspectos de la teoría cuántica a la que se aspira. Dentro de esa gran corriente una avenida importante per se es aquella asociada a la Conjetura de Maldacena (Correspondencia Anti-de Sitter/Conformal Field Theory), que vincula gravedad en D+1 dimensiones con una teoría cuántica, que posee simetría conforme, en D dimensiones. Esta conexión holográfica ha potenciado el estudio de teorías en D = 3 dimensiones con diversas correcciones (que aparecen como términos suplementarios) las cuales resultan en general masivas, o sea que prescriben un gravitón con masa, pero que pese a tal patología aún permiten investigar muchas otras características puramente cuánticas. Los primeros capítulos de esta tesis se vinculan con tres trabajos englobados dentro de lo que se podría llamar “gravedad masiva 3D”. Los dos primeros se ocupan de la determinación de cargas conservadas para dos espaciotiempos que son solución, entre otras, de la teoría conocida como New Massive Gravity (NMG), consolidada desde su aparición en 2009 como un promisorio toy-model de gravedad cuántica. Estos espaciotiempos, Warped Anti-de Sitter y Lifshitz, son ejemplos conspicuos de la llamada holografía no-AdS, que involucra espacios que no son asintóticamente Anti-deSitter, lo que genera un interés extra en razón de que ensancha el espectro de aplicaciones en la física de altas energías de sistemas cuánticos provistos de otras simetrías. Luego, continuando en las teorías masivas 3D, se analizan los puntos críticos de la llamada Exotic Massive Gravity (EMG), la cual generaliza Topologically Massive Gravity (TMG), que fuera la primer teoría masiva aparecida. Estos puntos críticos ocurren en valores especiales de los parámetros y son importantes debido a que en dichos valores la teoría cuántica asociada presenta características que la hacen aplicable a sistemas como los de materia condensada fuertemente acoplada. Finalmente, la tesis se cierra con la presentación de un estudio concerniente a una teoría gravitatoria para dimensión D ≥ 4 basada en una generalización del tensor de Einstein que se apoya en el concepto de la Q-curvatura, un invariante conforme que se ha estudiado en los últimos años en varios contextos dentro de la física y la matemática.