Descripción: Desde 1966, se realizan sistemáticamente mediciones de los flujos en los centros de las líneas de Ca II H y K (a 3968 y 3934 Å) en 2200 estrellas de tipo dF a dK, lo que constituye la base de datos más extensa para el estudio de actividad estelar disponible hasta el momento. Dado que las líneas ultravioletas de Mg II h y k (a 2803 y 2796 Å) se forman de manera similar a las líneas de Ca II, son también buenos indicadores de la actividad magnética, y son especialmente útiles para estudiar los procesos que ocurren en la alta fotosfera y en la cromosfera, ya que tienen la ventaja de ser más sensibles a la actividad cromosférica que las líneas de Ca II. El satélite International Ultraviolet Explorer (IUE) provee una extensa base de espectros en alta y baja dispersión tomados en el rango de longitud de onda de 1150 a 3350 A entre 1978 y 1995. Uno de los objetivos principales de esta tesis es incorporar las observaciones IUE al análisis de actividad magnética de estrellas dF a dM y combinar los registros de actividad derivados de estos espectros con los tomados en el rango visible. Con este fin, medimos los flujos en los centros de las líneas de Mg II y el continuo UV cercano a estas líneas sobre todos los espectros IUE de alta resolución correspondientes a estrellas dF a dK, lo que equivale a un total de 1623 espectros de 259 estrellas. A partir de estos datos, obtuvimos una relación logarítmica entre el continuo UV promedio y el color B - V de la estrella. Por otra parte, obtuvimos una calibración entre el índice de Mount Wilson S y el flujo en los centros de las líneas de Mg II medidos sobre espectros IUE de alta y baja resolución que depende del color B - V de la estrella. Como aplicación de las calibraciones obtenidas, combinamos los índices de Mount Wilson derivados de espectros IUE con los obtenidos de espectros tomados en CASLEO y en CTIO. Con estos datos analizamos el nivel de actividad a lo largo de décadas y las variaciones de corto plazo de 8 estrellas de tipo solar (HD 1835, β Hydri, τ Ceti, є Eri, HD 115383, α Cen A y B, ξ Boo A), de 3 estrellas dM (AD Leo, EV Lac y HD 119850) y de 2 estrellas binarias interactuantes de tipo RS CVn (HD 22468 y HD 210334). Confirmamos los ciclos de actividad de β Hydri (HD 2151), є Eri (HD 22049) y HD 210334 y encontramos un ciclo magnético en α CenB (HD 128621). Además, obtuvimos una estructura de dos ciclos cromosféricos en HD 22468, cuyos periodos coinciden con los derivados de observaciones fotométricas. Por otra parte, la radiación UV cumplió un rol primordial en el origen de la vida en la Tierra. Se presume que fue una de las principales fuentes de energía en los procesos de biogénesis y que, por otro lado, su carácter dañino pudo haber sido un factor de selección importante en la evolución de los sistemas biológicos. Dado que la radiación UV puede inhibir la fotosíntesis y dañar el material genético, puede también restringir el origen de la vida en otros planetas. En la segunda parte de la tesis se utilizaron los espectros IUE para analizar el impacto biológico de la radiación UV en planetas extrasolares. Basándonos en el principio de mediocridad, definimos una zona de habitabilidad UV que restringe la zona de habitabilidad tradicional, donde se requiere que el agua se encuentre en estado líquido. Aplicamos el criterio de habitabilidad UV a las estrellas de tipo solar que albergan planetas y que fueron observadas por el satélite IUE. En el caso de las estrellas tardías la radiación UV es insuficiente para generar el proceso de biogénesis, mientras que en las estrellas dF pueden existir regiones dentro de la zona de habitabilidad de agua líquida donde la radiación UV sea tan alta que dañe el ADN. Finalmente, analizamos la zona de de habitabilidad UV alrededor de estrellas dM y el rol biológico de sus fulguraciones. Obtuvimos que, en general, planetas alrededor de estrellas dM en estado quiescente recibirán una cantidad de radiación UV insuficiente para iniciar la síntesis de moléculas complejas. Por otra parte, si bien las fulguraciones son eventos esporádicos y de corta duración, obtuvimos que una fulguración moderada emitida por una estrella dMe podrá entregar la energía necesaria para generar la vida en planetas de tipo terrestre ubicados en la zona de habitabilidad de agua líquida.

Descripción: La Captura Neutrónica en Boro (BNCT) combina la irradiación externa con neutrones y la administración de compuestos borados que se acumulan selectivamente en el tumor. La reacción de captura 10B(n,α)⌃7Li que ocurre entre los neutrones térmicos y el átomo de Boro 10 genera partículas pesadas letales y de corto alcance se producirá mayormente en las células tumorales. Esta modalidad terapéutica permitiría dañar los tejidos tumorales sin producir daño significativo al tejido normal. Se estudió la biología y radiobiología del BNCT en el modelo de cáncer bucal en la bolsa de la mejilla del hámster. Estudiamos la biodistribución de boro en sangre, tumor y tejidos normales empleando nuevos protocolos de administración de compuestos borados estándar y compuestos borados nuevos, administrados solos o en combinación (BPA y/o GB-10 [Na2⌃10B10H10]) y demostramos su potencial terapéutico en el modelo de cáncer oral en hámster. Una vez demostrado el potencial terapéutico de estos protocolos de administración de compuestos borados, hicimos estudios de BNCT in vivo, empleando el haz epitérmico termalizado del Reactor Nuclear RA-6, sito en el Centro Atómico Bariloche. Demostramos la eficacia terapéutica, sin radiotoxicidad del tejido normal, de bajas y altas dosis de BNCT mediado por GB-10 y (GB-10 + BPA), y demostramos un nuevo paradigma en BNCT basado en el efecto selectivo sobre tumor de la terapia mediada por un compuesto borado que no se incorpora selectivamente al tumor. Habiendo demostrado que el BNCT-BPA induce control tumoral en Carcinoma de Células Escamosas (CCE) experimental en la bolsa de la mejilla del hámster sin daño al tejido normal, en un escenario preclínico, demostramos la eficacia terapéutica de BNCT para el tratamiento de CCE espontáneos en felinos domésticos.

Descripción: La base fundamental del presente trabajo es la realización del estudio radiofarmacológico de N-derivados del ácido iminodiacetico los cuales unidos al tecnecio (99m Tc) poseen afinidad por el sistema hepatobiliar. Desde que Harvey, Burke y Halko publicaron sus primeros estudios con imágenes de hígado y de las vias biliares empleando el Rosa de Bengala marcado con iodo radiactivo (131 I), el arsenal diagnóstico de las afecciones hepatovesiculares se ha visto enriquecido, ya que al aporte que durante años brindó la radiología contrastada con sustancias iodadas, se le sumó otro método que no sólo daba información funcional. La incorporación, en 1a última década, del ultrasonido y la tomografía axial computarizada por transmisión significó otro importante adelanto, mejorando la información anatómica y morfológica ya evidenciada por la radiología convencional. El reemplazo del 131 I por compuestos marcados con 99m Tc, como los N-derivados del ácido iminodiacético, permitió obtener imágenes, con cámara gamma,de la vía biliar con muy buena definición. Así pudieron visualizarse los conductos principales en su recorrido intra y extrahepático ya que el comportamiento biológico fué similar al Rosa de Bengala y a la Bromosulftaleína. Mediante la elección de un modelo biológico anatomofisiológico adecuado y trabajando en condiciones apropiadas se logró extrapolar los valores experimentales a seres humanos obteniéndose una total concordancia. En base a los resultados obtenidos se sintetizó un N-derivado inédito; éste fue estudiado en idénticas condiciones que los anteriores y en seres humanos, utilizando para ello, como elemento de comparación el ácido N-(2,6 diisopropilfenilcarbamoilmetil) iminodiacético.

Descripción: En el presente trabajo se ha desarrollado un estudioteórico-experimental de los efectos hiperconjugativosde los grupos alquilo y flúoralquilo así como de las accionesde la polaridad del solvente en estas reacciones. El plan de trabajo comprendió varias etapas biendiferenciadas. Primeramente se efectuaron las síntesis y purificaciónde los compuestos a utilizar en las experienciascinéticas posteriores. Estos fueron: 4-cloro-3-nitrotolueno; 3-cloro-4-nitrotolueno; 4-cloro-3-nitro-terbutilbenceno; 3-cloro-4-nitro-terbutilbenceno; 4-cloro-3-nitro-α,α,α-triflúortolueno; 3-cloro-4—nitro-α,α,α-triflúortolueno y o-cloro-nitrobenceno,así como la de sus numerosos intermediarios. El únicocompuesto no estudiado cinéticamente en trabajos previos fuéel 3-cloro-4-nitro-α,α,α-triflúortolueno, razón por la cualse controló por análisis el producto de su reacción con lapiperidina. A continuación se desarrolló el estudio cinéticode las reacciones de los 4-R y 5-R-2-nitro-clorobencenos conpiperidina en benceno (R=H, CH3, C(CH3)3 y CF3) empleando diversasconcentraciones iniciales de nucleófilo con el fin de establecerla influencia de esta variable sobre la velocidad de reacción. También se efectuaron mediciones de la reactividaddel o-cloro-nitrobenceno con piperidina en metanol a variasconcentraciones iniciales de piperidina y con el propósitode estudiar la acción de una base no-nucleofílica en estareacción, se mantuvo constante la concentración de piperidinay varió la concentración inicial de la otra base agregada,la piridina. Finalmente, el análisis de los resultados se ha divididoen tres partes y en un apéndice para su mejor interpretación. En la primera parte se analizan los efectos de lapolaridad del solvente sobre la reactividad de nitro-halógenobencenoscon aminas. Para evitar las acciones perturbadorasde las aminas en estas reacciones se consideraron los datoscinéticos a concentración constante del nucleófilo, desarrollándoseuna teoría general de la acción del solvente sobrelas reacciones de sustitución nucleofílica aromática de nitrohalógenobencenos con aminas la cual es consistente conlos resultados previamente publicados y los obtenidos en estetrabajo. Para las reacciones de sustitución por aminas primariasy secundarias con halógenos aromáticos que presentanun grupo nitro en posición orto, se postula que el estado detransición del sistema de reactivos permanece autosolvatadoy que en consecuencia el único sitio donde pueden prevalecerlas acciones del solvente es en el estado inicial, lo que setraduciría en un aumento de la entalpía de activación y en consecuencia,en una disminución de la velocidad de reacción con el aumento de la polaridad del medio. Este resultado, contrario a la regla de Hughes-Ingold, fué observado experimentalmente en las reacciones del o-cloro-nitrobenceno; 2,4- y 2,6-dinitro-clorobenceno y del 2,4-dicloro-nitrobenceno con piperidina. Los argumentos en favor de la solvatación del estadoinicial respecto al de transición son los siguientes: lassolubilidades de varias aminas en distintos solventes que sonrepresentativas de las entidades solvatables en el estado inicial;la correlación lineal con pendiente positiva entre el logaritmode la constante de velocidad de reacción en funciónde la inversa de la constante dieléctrica del medio y la relaciónlineal entre la entalpía de activación ΔH* y la entropíade activación ΔS* para estas reacciones. En el caso del p-cloro-nitrobenceno se cumple en generalla regla de Hughes-Ingold con la sóla excepción de lasreacciones en solventes no-polares. En este estudio se dan argumentos experimentales en favor de que la diferente reactividad asociada con factores entrópicos sería causada por la formación de pares iónicos. En la segunda parte de la discusión se analizan losresultados cinéticos experimentales obtenidos para la reacciónde alquil y flúoralquil-halógeno-nitrobencenos con aminas en función de la concentración inicial de éstas. Se demuestraque los resultados no son compatibles ni con una acción generalni específica del solvente y que sólo son consistentescon una catálisis básica de la amina producida en la segundaetapa del siguiente mecanismo: (ver mecanismo en la tesis), que cumple la ecuación (I): (ver ecuación en la tesis), que debería dar rectas si k-1»k2 + k3[B] y tender al valor límite k1 cuando k-1«k2 + k3[B]. El crecimiento lineal de la velocidad de reacciónen función de la concentración de amina a bajas concentracionesde la misma y el posterior achatamiento de las curvas obtenidaspara las reacciones del o-cloro-nitrobenceno a 100°y para sus homólogos estructurales con los grupos 4- y 5-triflúormetiloa 35° así como la reconstrucción de las curvas "teóricas" correspondientes obtenidas postulando catálisis básicageneral se indican como fuertes argumentos de la existenciaefectiva de esta acción catalítica. En la discusiónposterior se muestra que en las reacciones objeto de este estudiola etapa cinéticamente determinante es la de descomposicióndel complejo intermedio (k-1»k2 + k3[B]). Se incluyen datos sobre los efectos del sustituyenteen la catálisis básica mostrándose que los grupos dadoresde electrones disminuyen su acción, mientras que los aecptoresla incrementan. También la acción de la temperatura ha recibidoatención. Se ha podido demostrar que, como es dable esperardebido a que la etapa cinéticamente determinante es la segunda,la acción catalítica lineal a bajas temperaturas (k-1>k2 + k3[B]) se transforma dando curvas achatadas de kT en función de la concentración de nucleófilo a mayores temperaturas (k-1 ~ k2 ~ k3). Se señala como excepción al p-cloronitrobenceno en el cual la acción catalítica sigue siendo lineal a altas temperaturas. Este resultado es consistente conla posible formación de pares iónicos postulada en la primeraparte de la tesis. Simultaneamente se efectuaron algunosestudios de los efectos del solvente y de la naturaleza delnucleófilo sobre el efecto catalítico. En la tercera parte se estudiaron los resultados cinéticos extrapolados a concentración cero de nucleófilo parapoder analizar los efectos polares de los alquilos libres de otras influencias cinéticas. El orden cualitativo de reactividad obtenido es el esperable por la acción de los efectos hiperconjugativos de estos sustituyentes. Se efectuó el tratamiento propuesto por Taft delos datos correspondientes a estas reacciones. Para ello serealizó primero sobre los resultados experimentales de estudiosprevios con un gran número de sustituyentes tabulándoseuna nueva serie de parámetros sigma. Estos demostraronbuena correlación con los resultados obtenidos a concentracióncero de nucleófilo con la excepción de los sustituyentesm-metilo y m-triflúormetilo. Estos resultados anómalosson explicados postulando la acción hiperconjugativa de estosgrupos desde la posición meta al centro de reacción enel estado de transición. Los resultados obtenidos fueron corroboradoscon el cálculo de las energías de activación. Finalmente, con el fin de valorar la posible validezteórica de las fórmulas postuladas se efectuó un cálculo L.C.A.O. que es consistente con los argumentos propuestos.

Descripción: En este trabajo se estudia la noción de rango asociado a una curva C ⊂ Pn no degenerada y no singular. En el caso en que C ⊂ Pd es la curva de Veronese de grado d, la definición de rango se relaciona con el rango de formas binarias. Se caracterizan todos los conjuntos de puntos formas de rango constante y se da un algoritmo para calcular el rango de una forma. Para C una curva de género g ≥ 1, inmersa en Pn por el sistema lineal completo asociado a un fibrado lineal no especial, se caracterizan algunos de los conjuntos de puntos de rango constante y se dan cotas óptimas para el rango (que dependen del grado del fibrado lineal). En el caso en que C es una curva elíptica (esto es g = 1) se relacionan los resultados obtenidos con la “Plane Secant Formula” y una variante de esta, que son fórmulas enumerativas de planos multisecantes y multitangentes de curvas.

Descripción: Fil: Quartino, Bernabé J.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Los rayos cósmicos llegan a la Tierra con un espectro de energía quecubre varios órdenes de magnitud. Su flujo sigue una ley de potencias,yendo de unos cientos de impactos por m2 por segundo a bajas energías (E ~ 10^9 eV) a unos pocos por km2 por siglo a las energías más extremas (E ~ 60 EeV). Si bien a partir de E ~ 10^11 eV el flujo decae con un índice espectralcercano a -3, a altas energías el espectro tiene zonas características dondese han medido variaciones respecto de este comportamiento: la “rodilla” (~ 4 x 10^15 eV), la aún imprecisa “segunda rodilla” (0,05 < E < 0,5 EeV), el “tobillo” (~ 3 EeV) y el “corte GZK” (~ 40 EeV). Se supone que hasta energías del orden de 10^15 eV, las fuentes de rayoscósmicos son de origen galáctico. Los aceleradores galácticos teóricamentese tornan ineficientes entre 10^15 y 10^18 eV. Se cree que las fuentes extragalácticascomienzan a contribuir al flujo en esta zona del espectro y su aportepodría producir cambios en el mismo. Estudios de composición en el rangode la segunda rodilla y del tobillo son de vital importancia para entenderla transición de fuentes galácticas a extragalácticas. Los parámetros físicosmás relevantes para estudios de composición, son los perfiles longitudinalesy el número de muones presentes en los chubascos cósmicos. El Observatorio Pierre Auger fue originariamente diseñado para observarrayos cósmicos por encima de 10^18 eV, cuenta con la capacidad deregistrar datos en forma híbrida, utilizando detectores de superficie y defluorescencia a la vez. Terminada su construcción en 2008, se inició unasegunda fase con la puesta en funcionamiento de HEAT (High Elevation Auger Telescopes), y con la construcción de AMIGA (Auger Muons and Infill for the Ground Array), entre otros. Estos desarrollos apuntan tantoa mejorar la calidad de las observaciones, como a extender el rango dedetección en energía para incluir la región del tobillo y de la segunda rodilla. El diseño de AMIGA está integrado por pares de detectores formadospor un detector de superficie, como los instalados en el Observatorio Auger,más un contador de muones de 30m2 enterrado en sus cercanías a 2,25mde profundidad. Contará con un total de 85 pares de detección distribuidosen dos redes triangulares, separados por 433 y 750 m. Este trabajo se centra en el Detector de Muones de AMIGA. Su objetivoprincipal es aportar información sobre el contenido muónica de las cascadasde partículas secundarias que se generan tras el impacto de la partículaprimaria en la atmósfera. Se presentará un estudio detallado del diseño del Detector, así comosu caracterización experimental. Se analizarán los primeros datos de losdetectores instalados en el Observatorio, y de las primeras lluvias de rayoscósmicos registradas en conjunto por los sistemas de fluorescencia, desuperficie y de muones. Se presentará un modelo fenomenológico que posibilitala completa simulación del Detector de Muones. Se desarrollarány analizarán las estrategias de conteo que habilitan el empleo del Detectorcomo Contador de Muones.

Descripción: Esta tesis tiene como objeto contribuir al estudio de algunos problemas de análisis geométrico asintótico relativos a aproximaciones volumétricas de un cuerpo convexo mediante imágenes afines de otro. Dado un cuerpo convexo K ⊂ R^n con baricentro en el origen, mostramos que existe un símplice S ⊂ K que tiene también baricentro en el origen tal que (|S|/|K|)^ ̄1/n ≥ c/√n , donde c > 0 es una constante absoluta y |·| denota la medida de Lebesgue. Conseguimos esto usando técnicas de geometría estocástica. Más precisamente, si K está en posición isotrópica, presentamos un método para encontrar símplices centrados verificando la cota antes mencionada que funciona con probabilidad extremadamente alta. Por dualidad, dado un cuerpo convexo K ⊂ R^n mostramos que existe un símplice S que contiene a K con el mismo baricentro tal que (|S|/|K|)^1/n ≤ d√n , para alguna constante absoluta d > 0. Salvo por la constante la estimación no puede ser mejorada. Defimos la máxima razón de volumen de un cuerpo convexo K ⊂ R^n como lvr(K) : = supL⊂R^n vr(K, L) , donde el supremo se toma sobre todos los cuerpos convexos L. Probamos la siguiente cota que resulta ajustada en general: c√n ≤ lvr(K), para todo cuerpo K (donde c > 0 es una constante absoluta). Este resultado mejora la cota anteriormente conocida que es del [ver formula en el original]. Estudiamos el comportamiento asintótico exacto para algunas clases naturales de cuerpos convexos. En particular, si K es la bola unitaria de una norma unitariamente invariante en R^dxd (e.g., la bola unidad de la clase p-Schatten para 1 ≤ p ≤ ∞), la bola unidad de una norma tensorial en el producto de espacios lp o K un cuerpo incondicional, probamos que lvr(K) se comporta como la raíz cuadrada de la dimensión del espacio ambiente También analizamos el problema de estimar la razón de volumen entre proyecciones de dos cuerpos convexos en R^n en subespacios de dimensión proporcional a n. [fórmulas aproximadas, revisar las mismas en el original].

Descripción: Fil: Maestripieri, Alejandra Laura. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Caram, José Alberto. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Ferrero, Armando M. J.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: En el presente trabajo se han sintetizado trece compuestos de la serie 4-R-2-nitroclorobenceno, donde R es un sustituyente variable, a saber: ciano, fenilo, fenilazo, carbometoxilo, iodo, cloro, bromo, flúor, ter-butilo, metilo, metoxilo, amino; varios de ellos a través de los diversos intermediarios que se indican en la parte preparativa. Se han medido las velocidades de reacción con tiofenato de sodio en metanol anhidro de los compuestos anteriormente citados, junto con otros tres compuestos de la misma serie, que no fueron sintetizados, pues se trata de productos accesibles en el comercio; en este caso los R son: nitro, hidrógeno y triflúormetilo. Las mediciones cinéticas se han efectuado a tres temperaturas distintas, (Algunas de ellas por duplicado) y se han calculado los parámetros termodinámicos: energía, entropía y energía libre de activación. Las técnicas empleadas, según la reactividad del sustrato, fueron: a) espectrofotometría ultravioleta y b) titulación aci-alcalimétrica del tiofenato de sodio residual y titulación potenciométrica del cloruro liberado. Se ha encontrado buena coincidencia entre ambos métodos y con los valores publicados en literatura para algunos de los compuestos estudiados. Se ha puesto de manifiesto una vez más la alta reactividad nucleofílica del tiofenato. Se encontró que la influencia polar de los sustituyentes está en el orden decreciente: nitro, ciano, fenilazo, carbometoxilo, carboetoxilo, triflúormetilo, iodo, bromo, cloro, fenilo, flúor, hidrógeno, ter-butilo, metoxilo, metilo y amino. Es notable el poco efecto desactivante, en la reacción estudiada, de grupos dadores de electrones, comparada con el efecto polar de estos mismos sustituyentes frente a otros nucleófilos; esta situación es atribuíble a la alta polarizabilidad del tiofenato. En base a resultados obtenidos por el Licenciado Alfredo J.Castro para el cálculo de valores de rhó (constante de la ecuación Ρ σ de Hammett) en las reacciones de una serie de 5-R-2-nitro-clorobencenos con los siguientes nucleófilos y solventes: tiofenato de sodio en metanol, y piperidina en benceno y metanol, se calcularon para los distintos sustratos de la serie 4-R-2-nitroclorobenceno los valores de los sigmas correspondientes para las reacciones con los nucleófilos ya mencionados. Se encontró así que el sigma para un sustituyente dado tenía el mismo valor si se lo calculaba en base a las reacciones con piperidina en benceno o metanol, pero que difería del sigma calculado en base a la reacción con tiofenato de sodio en metanol. Se obtuvieron así dos juegos de parámetros sigmas cuyas características son las siguientes: grupos con efectos -M(-T) tienensigmas menores y grupos con efecto +M(+T) tienen sigmas mayores frente a tiofenato que frente a piperidina. El hecho de encontrar que los datos experimentales se correlacionan mejor con dos juegos de sigmas para una misma serie de sustratos en sus reacciones con dos nucleófilos distintos, está de acuerdo con las ideas aceptadas de que el efecto de resonancia de un sustituyente depende de la reacción de que se trate, pero no había podido ser demostrado claramente en la sustitución nucleofílica aromática por carencia de datos suficientes. La ecuación de Hammett ha sido aplicada por diversos investigadores a la sustitución nucleofílica aromática y es conocido que los sigmas que se emplean no son los originalmente indicados por Hammett, sino que para grupos con efecto -M(-T) utilizan sigmas derivados de disociaciones de anilinas y fenoles, más de acuerdo con la estructura del estado de transición postulado para este tipo de reacciones. En cuanto a los grupos desactivantes, no se han introducido modificaciones, y son éstos los que frecuentemente se desvían del cumplimiento de dicha ecuación. Con los dos juegos de sigmas obtenidos en el presente trabajo se intentó extender su aplicación a otras series de reacciones de sustitución nucleofílica aromática estudiadas por otros investigadores. Este intento ha tenido éxito, pues eligiendo el juego de sigmas adecuado al par nucleófilo-solvente empleado, se ha podido correlacionar la reactividad de todas las series descriptas en la literatura (cinco en total). El tratamiento estadístico es en todos los casos satisfactorio como lo demuestran los valores del coeficiente de correlación, desviaciónstandard y error standard de los sigmas. Los valores de rhó de dichas reacciones calculados mediante estos juegos de sigmas están de acuerdo con las reactividades de los nucleófilos empleados y dado el número de trabajos analizados desde este punto de vista, es de esperar que uno u otro de estos juegos de sigmas sea aplicable a otras reacciones del mismo tipo aún no estudiadas cuantitativamente. En la correlación anterior se encontró que el metilato de sodio se correlaciona mejor con el juego de sigmas basado en reacciones de piperidinas y no con el derivado en base a reacciones del tiofenato de sodio. Esta conclusión es en cierta manera sorprendente, pues sería de esperar una relación entre el tiofenato y el metilato de sodio en vista de que ambos nucleófilos son aniónicos. Este comportamiento diferencial del tiofenato comparado con el metilato, podría explicarse tal vez, suponiendo que con el tiofenato la ruptura de la unión carbono-halógeno ha hecho algún progreso en el estado de transición determinante de la cinética. Como parte de este trabajo se han sintetizado catorce de los sulfuros esperados como productos de la reacción; algunos de ellos no habían sido descriptos previamente y fueron analizados para confirmar su composición; se trata de los sulfuros con los siguientes sustituyentes: ciano, carboetoxilo, carbometoxilo, fenilazo, terbutilo, bromo, flúor, metoxilo. Se han medido los espectros de absorción ultravioleta de estos sulfuros en metanol anhidro y en ciclohexano como solventes. La forma general de estos espectros es la siguiente: una banda de alta absorción en la zona de 230-260 mμ (Según el sustituyente), una zona de inflexión entre 260-290 mμ y una banda ancha, de menor intensidad entre 330 y 430 mμ. Esta última banda ha sido atribuída por diversos autores, en compuestos estructuralmente relacionados, a la conjugación entre el azufre (dador de electrones) y el nitro en posición orto, a través del anillo bencénico, con formación de un cromóforo de diez electrones. La influencia del solvente se manifiesta unicamente en esta última banda; el metanol (más polar) produce corrimientos batocrómicos con respecto al ciclohexano, lo que se asocia a una mayor contribución de estructuras polares excitadas. Para esta banda se han encontrado una relación entre la posición del máxima y la influencia polar del sustituyente. Grupos con efecto +M producen corrimientos batocrómicos (con respecto al hidrógeno) y grupos con efecto -M producen corrimientos hipsocrómicos. Finalmente, se trató de ver si existía alguna correlación entre los valores de lambda máximo, para esa banda, y alguno de los juegos de sigmas descriptos en la literatura. Dicha correlación se encontró usando los valores de σ^+ - σI donde σ^+ son los sigmnas de aplicación a la sustitución electrofílica y σI son los sigmas inductivos de los sustituyentes.

Descripción: Fil: Jeroncic, Lucio Orlando. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Du Mortier Podestá, Cecile Marie. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Sznaidman, Marcos Luis. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: En la presente tesis se describe el estudio de la reacción de compuestos aril-litio con monóxido de carbono en estado gaseoso. El objetivo de la reacción es la inserción directa de los elementos de la molécula de monóxido de carbono en la unión C-Li de compuestos aromáticos litiados. Nuestras experiencias preliminares (J.Am.Chem.Soc.95, 8118 (1973)) parecían indicar que el fenil-litio estaba actuando en forma de dímero, ya que siempre se integraban al menos dos grupos fenilos en los productos finales de reacción. De los datos de literatura resumidos en el capítulo 1 se apreciaba la variabilidad del grado de asociación y el notable efecto de los solventes y "bases donoras" sobre la estructura real del compuesto organolítico. Por esta razón lo primero que se estudio fué el aspecto de la "agregación" desde los enfoques: métodos de preparación; análisis del efecto del solvente y modificación de la estructura del reactivo. Para tener más información sobrela misma se realizaron cálculos teóricos de la molécula de fenil-litio tanto de la forma monomérica como del dímero, se utilizó para el cálculo el método INDO adecuadamente modificado. Se mantuvieron invariables las uniones del grupo bencénico con excepción de la unión C-Li cuya optimización dió como resultado una longitud de 2,243 Å. De los datos obtenidos se deduce que la estructura del dímero está favorecida con respecto al monómero y se observa que en ambos el átomo de carbono que está unido al litio lleva carga negativa. De los autovectores se advierte una contribución positiva de los orbitales 2 p no ocupados en el átomo de litio. El momento dipolar obtenido para el monómero es de 6,30 D. Estos datos se comparan muy satisfactoriamente con los encontrados en un estudio "ab initio" realizado en el más alto nivel en un trabajo conjunto de las Universidades de Harvard y Texas en 1980 parael metil-litio. Otro aspecto que se analizó detalladamente es el métodode preparación del reactivo, por la influencia que este pudiera tener en la estructura real del producto obtenido. Se resume en el capítulo 2 los distintos métodos analizados y en la parte experimental se describe la técnica desarrollada para obtener cada aril-litio en alto grado de pureza y con la estabilidad necesaria para llevar a cabo los estudios propuestos. Con respectoal monóxido de carbono éste no se fabrica en el país y se diseñó un aparato para su generación y medición en condiciones aptas para su uso y seguridad en el laboratorio. Paralelamente a los estudios de métodos de preparación se analizaron los antecedentes bibliográficos de otros compuestos organometálicos relacionados. Como puede apreciarse en el capítulo 3 si bien las mismas, por su importancia, suscitaron interés desde largo tiempo atrás, son todavía poco útiles en síntesis debido a la variedad de productos a los que da origen y a los mecanismos poco claros de su formación. Análogo comentario es naturalmente válido para la reacción de compuestos organolíticos con monóxido de carbono y el objetivo de la presente tesis es contribuir al esclarecimiento dela misma. Nuestros esfuerzos se concentraron en el estudio de aril-litio, especialmente o-anisil y fenil-litio. Como se describe en la primera parte del capítulo 4, la reacción de o-anisil-litio es muy sensible a las condiciones de reacción, pero se logró adecuarlas para obtener solamente dos productos: o,o'-dimetoxi-benzofenona y o,o'-dianisil-carbinol en proporciones comparables. Este resultado puede interpretarse como proveniente de un intermediario único de reacción: la sal de litio del dianión de la o,o'-dimetoxibenzonenona que, hemos comprobado, sufre parcial oxidación en atmósfera de monóxido de carbono durante la hidrólisis, produciendo eldianisil-carbinol y la o,o'-dimetoxi-benzofenona. En la reacción de fenil-litio, descripta en la segunda parte del capítulo 4, se analizaron numerosas variables. La reacción en presencia de haluros de alquilo fue estudiada con detalle por sus implicancias mecanísticas y sintéticas porlo que se le dedica un capítulo aparte. Sintéticamente los resultados obtenidos en la reacción de fenil-litio (en THF, a menos que se indique lo contrario) pueden resumirse en los siguientes puntos: 1) La velocidad de reacción es cinco veces mayor que la del o-anisil-litio. 2) Los productos obtenidos son: benzofenona; α,α-difenil-α-hidroxi-acetofenona;benzoína; α,α-difenilacetofenona; α-hidroxi-acetofenona; 1,1,2-trifenil-etilen-glicol y benzhidrol. 3) Los productos principales de la reacción a -78° son los tres primeros. 4) No se produce trifenil-carbinol. 5) El hidruro de litio no modifica la composición de la mezcla de reacción. 6) El benzhidrol aparece en muy baja proporción. 7) Al aumentar la dilución del reactivo, aumenta la proporción debenzoína. 9) Cuanto menos polar es el solvente menor es la formación de benzoínay la de α,α-difenil-α-hidroxi-acetofenona, y aumenta la proporciónde α,α-difenil-acetofenona. 10) En ausencia de solvente, al aumentar la temperatura, aumentala proporción de α,α-difenil-acetofenona, hasta transformarseprácticamente en un único producto de reacción a 110°. 11) No se observa variación en la proporción relativa de los productosa distintos tiempos de reacción. 12) Análogo comentario vale para el calentamiento de la mezcla de reacción en ausencia de monóxido de carbono, una vez concluída la absorción de éste. 13) El tratamiento de la mezcla de reacción con anhídrido acético produce el diacetato del enol de la benzoína, exclusivamente en la forma cis. 14) El agregado de bases donoras al solvente de reacción retarda cinco veces la velocidad de la misma. 15) La reacción realizada en presencia de bromuro de n-butilo no produce benzofenona. 16) Los únicos productos de reacción en esas condiciones son 1,1-difenil-pentanol y benzoína. 17) El dianión de la benzofenona no produce 1,1-difenil-pentanol en las condiciones de los resultados 15 y 16. 18) Los cloruros de alquilo no tienen influencia apreciable en la reacción. 19) La reacción en presencia de haluros de alquilo secundarios y terciarios tiene menor velocidad que en presencia de los primarios. 20) En esos casos disminuye la proporción del alcohol correspondiente,aumenta la benzoína y se forman éteres diaril-alquilicos. La diversidad de productos obtenidos en la reacción de carbonilación, la extrema sensibilidad de la misma a diversos factores, y los escasos y poco claros datos de la literatura, sugieren la formación de más de un intermediario y posibles reacciones competitivas entre éstos con el reactivo. También las reacciones de inserción con catalizadores metálicos policarbonílicos son de química poco clásica. La primera incógnita de la reacción es, en primer lugar, cuál es el primer intermediario que se forma. Los cálculos teóricos, como así también los resultados experimentales de la presente tesis proponen evidencias de que el fenil-litio, en su estructuracarbaniónica es el más reactivo en la reacción en solución. La primera etapa implicaría una coordinación del átomo de litio con el oxígeno carbonílico, dando un estado de transición de cuatro centros como se indica en el esquema 17. Si bien éste no había sido propuesto antes para esta reacción, es conocida la habilidad de los compuestos organolíticos para formar estados de transición de este tipo. Una posterior reorganización del mismo conduciría al primer intermediario de la reacción, el acil-litio, del cual no se ha intentado su aislación, pero se presentan evidencias de su existencia. Uno de los intermediarios siguientes se comprueba por la obtención del diacetato del enol de la benzoína con absoluta estereoespecificidad. El otro, formado por la reacción entre el acil-litio y fenil-litio, es la sal de litio del dianión de la benzofenona, único intermediario que ya había sido demostrado con anterioridad. Los efectos de solvente y de temperatura son compatibles con las diferentes velocidades involucradas en el esquema 17. Análogo comentario puede hacerse con respecto a los efectos de los sustituyentes para el caso de los grupos ubicados en la posición "para" al centro de reacción. El o-anisil-litio muestra un comportamiento especial que sugiere un efecto de coordinación de los electrones no apareados del átomo de oxígeno con el átomo de litio deficiente de electrones, tanto en la molécula de reactivo como en el intermediario de reacción. Los resultados de interés sintético de estas experiencias pueden resumirse en que, por ejemplo, la reacción realizada en ausencia de solvente, con fenil-litio en estado cristalino y a 110° permite la obtención en un solo paso de α,α-difenil-acetofenona con un 94% de rendimiento; la reacción realizada en THF,a -78° y tratada posteriormente con anhídrido acético produce el diacetato del enol de la benzoína exclusivamente en su forma cis además de otros productos minoritarios; la reacción realizada en presencia de agentes electrofílicos permite la obtención de derivados de compuestos aril-carbonílicos con muy buenos rendimientos. En particular si la reacción se realiza en presencia de bromuros de alquilo que contienen además cloro en la cadena alquílica, seobtienen diaril-alquil-carbinoles funcionalizados convenientemente, con los que pueden prepararse sustancias de conocida acción anestésica, espasmolítica, analgésica o antiarrítmica, dependiendo del agente con que se lo haga reaccionar posteriormente. También permite la obtención sencilla de tetrahidrofuranos sustituídos; así por ejemplo por simple destilación a 60° del solvente de la mezcla de reacción de fenil-litio en presencia de 1-bro Consulte el resumen completo en el documento.

Descripción: Las semillas de las especies de sauce toleran la deshidratación a contenidos de agua similares a los de una semilla ortodoxa, pero pierden la viabilidad en unas pocas semanas a temperatura ambiente. Otra característica atípica es que los cloroplastos de los tejidos embrionarios de las semillas maduras conservan el sistema de endomembranas (tilacoides) aparentemente intacto y retienen la clorofila. En el marco de las investigaciones que se realizaron en el transcurso de esta tesis surgieron, junto a los resultados mencionados, otros que muestran los mecanismos que podrían estar involucrados en el deterioro y su reparación: 1. La luz, a través de la clorofila induce un intenso daño fotooxidativo mediados por radicales libres que se evaluó por el daño a ácidos grasos, proteínas, pigmentos lo que produjo principalmente la destrucción de las membranas tilacoides. 2. Se postula que dichas membranas que contienen clorofila, proteínas y pigmentos sería el lugar en el que se inicia el ataque fotooxidativo, el que se propagaría a otras estructuras, lo que se comprobó por evaluación de alteraciones en la permeabilidad de la membrana plasmática. 3. Si bien el ataque fotooxidativo es importante este queda mayormente restringido a los tejidos superficiales de la semilla, sin afectar sensiblemente la yema apical. 4. El daño a los tejidos superficiales determina que en las pruebas de germinación, el porcentaje de plántulas anormales sea inusitadamente elevado (disminución de la germinación normal), mientras que el porcentaje de plántulas vivas resultó sólo ligeramente menor que el que ocurre en oscuridad. 5. Las semillas que originan plantas anormales como consecuencia del ataque fotooxidativo muestran una notable recuperación de la germinación normal y de los daños metabólicos y estructurales antes mencionados, cuando se someten a humidificación. 6. Descartada la presencia de clorofila como causa importante de la mortalidad, quedan sólo dos reacciones a las que se consideran principales responsables del decaimiento de las semillas secas como son las reacciones de Maillard y de autooxidación. La primera no acompañó el descenso de la germinación total, pero si la segunda, por lo que quedaría la autooxidación como causa del rápido deterioro. 7. El ítem 6 lleva a considerar que la autooxidación en estas semillas debe ser mas activa que en otras que como estas, toleran la desecación, pero son mucho más longevas. 8. Ello podría deberse a que el estado del contenido celular presentó una mayor movilidad molecular y sea más poroso, lo que facilitaría la difusión del oxígeno, uno de los reactantes de la autooxidación. La mayor porosidad al facilitar la difusión del oxígeno y una mayor superficie lipídica atacable por ese agente debido a la desdiferenciación incompleta de las membranas, serían las causas iniciales del rápido deterioro de estas semillas.

Descripción: Fil: Sala, Luis Federico. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fundamento: Las técnicas de precipitación en gel, consisten en provocar, en el seno de un gel, como medio de difusión, la reacción del antígeno con su correspondiente anticuerpo. Es un procedimiento que presta al ensayo de precipitinas y anticuerpos de floculación, un alcance que amplifica sus ya extraordinarias condiciones analíticas. Al provocarse la reacción en el seno de un gel, el aspecto de la reacción estará influenciado por lo menos por tres factores: la velocidad de difusión del antígeno, la del anticuerpo y la poca solubilidad del complejo formado. Esto tiene como consecuencia que la parte visible de la reacción se produzca en distintas formas, según las condiciones y de manera muy nítida. Así, cuando se enfrenta un antígeno simple con su correspondiente anticuerpo, se producirá una sola zona de precipitación, que puede ser en forma de línea fina. Tratándose de reactivos que son complejos, naturalmente o por mezcla, cuyos componentes o los resultados de sus reacciones, difieren en sus propiedades físico-químicas (velocidad de difusión de los elementos reaccionantes, solubilidad del precipitado formado), habrá distintas zonas de reacción, que se pondrán en evidencia ya sea por anillos o líneas más o menos diferenciados. Esta característica que presta el gel a las reacciones de precipitación, es justamente lo que permite obtener un análisis más completo, dilucidando el número de sistemas reactivos en juego y con técnicas más desarrolladas, la comparación entre dos o más reaccionantes ejecutadas en la misma forma (simultaneamente). Antecedentes: Teniendo en cuenta las amplias perspectivas ofrecidas por el método señalado, se comenzó el trabajo con una reseña bibliográfica que pasa revista a las técnicas conocidas para estudiar la reacción antígeno-anticuerpo en soportes gelificados. Seguidamente, se describieron los antecedentes considerados para la parte experimental. Trabajo experimental: De acuerdo con los antecedentes considerados las experiencias se orientaron en dos líneas: series de ensayos en tubos y cubetas y otras en placas de Petri, con diversas variantes. Se describió la preparación de los reactivos y medios de difusión, antígenos e inmunosueros; la técnica fotográfica utilizada y por último, las condiciones elegidas para efectuar el mecanismo de las reacciones. Se estudiaron tres sistemas: diftérico, tetánico y estafilocóccico. El método en tubo consistió en colocar en el fondo el suero mezclado con gel, luego una columna central, también gelificada, sobre la que se vertió el antígeno. Se introdujo una modificación ventajosa, consistente en gelificar la capa antigénica, con lo cual se uniformó la difusión de los reactivos. Si bien esta técnica ofreció mayor sensibilidad en el desarrollo de las líneas de precipitado formadas en la columna central, su interpretación fué dificultosa, por lo cual se adoptó definitivamente el método en placa. En éste, las sustancias reaccionantes se colocaron en pequeños cilindros de vidrio dispuestos en forma triangular entre dos placas de gel superpuestas. Cabe destacar que el agregado de gelatina al medio de difusión de agar constituyó una variante de interés, pues produjo mayor transparencia del medio y en algunos casos aceleró la formación de líneas. La disposición triangular señalada permitió la comparación simultánea de distintos antígenos y sueros. Los sistemas diftérico y tetánico analizados permitieron observar dos líneas principales. Finalmente, se realizaron experiencias que demostraron la posibilidad de crear espectros artificiales, mediante variaciones de técnica, tales como el recargado de las sustancias reaccionantes, que son un llamado a la prudencia en la interpretación de los resultados. Por otro lado, la técnica de precipitación en gel desarrollada, ha permitido demostrar la sutileza del método para observar diferencias de estructura en los reactivos estudiados.

Descripción: Fil: Goldberg de Waisbaum, Raquel Nora. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Zalts, Anita. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: 1) La sintesis de ZnTCPc realizada por un método ya utilizado eneste laboratorio condujo, al contrario de lo que sucede en esecaso, a un producto con funciones amida sin hidrolizar. La realizaciónde varias sintesis que dieron productos con análisiselementales similares y la posterior titulación ácido-base delos —COOH presentes, permitieron la caracterización de ZnTCPc. 2) Se encontró que la incorporación de ftalocianinas tetracarboxiladasa micelas varia según la molécula. En el caso de A1 y Cu, no se halló evidencia de incorporación, mientras que Zn y Cose asociaron a las micelas iónicas dando una alta concentraciónde monómero. Teniendo en cuenta que CoTCPc no fluoresce y nogenera 1O2 se eligió estudiar el comportamiento fotoquimico de ZnTCPc. 3) El estudio de dimerización de ZnTCPc mostró que esta Pc,asociada a las micelas, está sujeta a un equilibriomonómero-dimero, ya que aún en medio micelar la constante dedimerización es apreciable. Se determinaron los espectros deabsorción del monómero y del dimero en micelas, donde elmonómero tiene un espectro similar al obtenido en solventeorgánico. 4) El estudio de la capacidad de fotogeneración de 102 por ZnTCPc en CTAB permitió determinar los rendimientos cuánticosindividuales de monómero y dimero. Los resultados muestran quelos dimeros de ZnTCPc son prácticamente inactivos en la generaciónde 102. En una etapa posterior, un análisis realizado teniendo encuenta el carácter microheterogéneo del medio mostró la validezde los resultados obtenidos con un tratamiento global. 5) A través de mediciones de fluorescencia estacionaria seestudió el reparto de quinonas entre agua y micelas de CTAC con ZnTCPc incorporada. Las constantes de reparto resultaronlógicamente mayores a mayor hidrofobicidad de la quinona. Estasmismas experiencias, permitieron hallar las constantes de desactivacióndel singulete de ZnTCPc por quinonas, utilizando unmodelo apropiado. Los resultados obtenidos son compatibles conuna desactivación por transferencia de electrones, con predominiode la vuelta al estado fundamental. 6) Contando exclusivamente con técnicas estacionarias, paraestudiar la desactivación del triplete se realizaron medidas defosforescencia de 102, con un equipo de detección estacionariamontado a tal fin en este laboratorio. Se trabajó en CTAC/D20,donde el 102 tiene una constante de desactivación radiativacomparativamente baja, lo que planteó dificultades experimentalespor la baja relación señal/ruido. Sin embargo, los datosobtenidos responden muy bien al modelo propuesto. 7) Se verificó que las quinonas empleadas no desactivan al 1O2en el ámbito de concentraciones usadas, mediante medidas defosforescencia de 1O2 resueltas en tiempo (realizadas en ellaboratorio láser de CITEFA). Para el caso de benzoquinona,existen en bibliografia valores muydistintos de la constante dedesactivación de 102: 3,4 10^7M-1s-1(Koka y Song, 1978) y 2900 M-1s-1 (Gassmannet al., 1983). En este trabado se determinó quela constante de desactivación de 1O2 por benzoquinona es < 1.10^5 M-1s-1 8) A fin de interpretar los resultados de 6), se generalizó elmodelo de desactivación de moléculas excitadas en micelas, parael caso de desactivación conjunta de singulete y triplete. Sederivaron las ecuaciones que describen el comportamiento temporaldel triplete y la concentración de tripletes en condiciones deirradiación estacionaria. Esta última ecuación permitió el ajustede datos experimentales, a partir del cual se obtuvieron lasconstantes de desactivación del triplete (krt). La variación dekrt con el potencial redox de las quinonas sugiere que la desactivacióndel triplete de ZnTCPc ocurre a través de un mecanismo detransferencia de electrones a la quinona, sin fotorreacción neta.

Descripción: El objeto del presente trabajo es el estudio de la transferencia de carga y masaen reacciones con iones pesados a energías próximas a la barrera coulombiana. Semidieron distribuciones angulares para las secciones eficaces diferenciales de transferenciaen los sistemas 32S + 144,154 Sm a diferentes energías levemente superioresa las respectivas barreras coulombianas. De dichas distribuciones se obtuvieron lasprobabilidades de transferencia y se las comparó con un modelo semiclásico parael calculo de probabilidades basado en la penetración dc una barrera de potencial. Asimismo, se cotejaron los resultados con mediciones semejantes realizadas en lossistemas 36S + 144,l54 Sm.

Descripción: Fil: Binstok, Guillermo Francisco. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: En esta tesis se describe el comportamiento fotoquímico de alcoholes de distinta naturaleza. La primera serie estudiada estaba constituídapor alcoholes alifáticos de los cuales se obtuvo, por irradiación con luz ultravioleta, α-glicoles acompañados por pequeñas cantidades de los correspondientes compuestos carbonílicos. Esta reacción (ver reacción en la tesis) que resultó ser bastante generalfue aplicada a un número discreto de alcoholes alifáticos. Dado que para formar un α-glicol deben unirse dos hidroxi-alquil-radicales (RR'C-OH), se pueden generar dos centros asimétricos y obtenerse dos α-glicoles diastereoisómeros. Esto fue efectivamente observado y en la mayoríade los casos dichos isómeros fueron separados mediante una destilación cuidadosa. A fin de establecer las configuraciones de los α-glicoles isómeros hemos correlacionado los datos de r.m.n. (resonancia magnética nuclear protónica) de los mismos basándonos para ello en los valores de los protones metínicos, que junto con la información obtenida del resto de las señales nos resultaba muy útil para esa finalidad. En el Capítulo 2 se trata esta aplicación con detalle, donde como puede verse se obtuvo una información adicional acerca de la o las conformaciones presentes en cadaisómero. Los resultados obtenidos mediante la espectroscopía r.m.n. se complementan muy bien con los datos de la cromatografía gas-líquido de las mismas sustancias. En la mayor parte de los ejemplos se observó un predominio del meso-α-glicol sobre su isómero dl, mientras que en uno se formó exclusivamente el primero. Teniendo en cuenta que la formación de α-glicoles transcurre mediante un mecanismo radical (Capítulo 3), elresultado anterior puede explicarse considerando que, los alcoholesforman puentes de hidrógeno entre sí originando radicales solvatados. Es precisamente el volumen del grupo hidroxilo solvatado el que determina las formas de aproximación que originan a los distintos isómeros. Como se describe en el Capítulo 4, esto puede explicar muy bien la formación preferencial del isómero meso. Esta misma teoría nos da una explicación razonable de las variaciones obtenidas en la relación dl/meso a lo largo de la serie de alcoholes estudiados. También muestra una buena vinculación con aquellos datos obtenidos del espectro r.m.n. acerca de la conformación de los glicoles. Los otros productos obtenidos de estas reacciones (compuestos carbonílicos) provienen de los radicales alcóxidos (RR'CH-O•), cuya participación quedó demostrada en nuestras experiencias con n-butil hidroperóxido (Capítulo 3). En otra serie de ejemplos hemos irradiado mezclasde dos alcoholes alifáticos. Considerando el carácter radical de la reacciónse pueden obtener tres glicoles diferentes, dos simétricos provenientes de cada uno de los alcoholes y un α-glicol mixto derivado de la mezcla ds ambos. La obtención simultánea de los glicoles mixtos y simétricos nos permitió estudiar el aspecto cuantitativo de esta reacción (cromatografía gas-líquido). Así, variando la proporción de los alcoholes en la mezcla a irradiar se modificaba la relación de los α-glicoles. En los casos en que se formaban mezclas de glicoles mixtos diastereoisómeros, observamos que seguía siendo válido el modo de unión de los radicales solvatados que nosotros hemos propuesto para los glicoles simétricos. También, por espectroscopía de resonancia magnética nuclear protónica se podía establecer la configuración y/o conformación de estas sustancias. El carácter mixto de estos α-glicoles se confirmó por espectroscopía de masas ya que el espectro del producto mixto era la suma de los fragmentos presentes en los espectros de los correspondientes glicoles simétricos (Capítulo 1, Fig. 12). Por irradiación del ciclohexanol, único alcoholalicíclico estudiado, se obtuvo ácido caproico, su éster de ciclohexilo y pequeñas cantidades de ciclohexanona, en lugar del correspondiente α-glicol. Este comportamiento, aparentemente muy distinto del observado en la serie alifática, responde en realidad a un mecanismo análogo al que genera los α-glicoles. Como se indica en el Capítulo 3, en el ciclohexanol se produce la ruptura alfa de la unión C-C en lugar de la ruptura alfa de la unión C-H, que en la serie alifática lleva a la formación de los glicoles. Los resultados obtenidos para el ciclohexanol (Capítulo 3) muestran que existe una buena correlación entre su comportamiento fotoquímico y su fragmentación en el espectrómetro de masas. Al irradiar los alcoholes aromáticos se observó un comportamiento más complejo, pues además de los α-glicoles y compuestos carbonílicos se obtuvieron éteres de tipo bencílico y en algunos casos 2,3,5,6-tetra-aril-1,4-dioxanos. (ver reacción en la tesis.) Los α-glicoles, que eran los productos principales en la serie alifática pasaron a ser productos secundarios, ya sea porque no se formaban o porque una vez formados se transformaron en dioxanos. También en esta serie se observó un marcado predominio del α-glicol meso sobre el dl. A fin de comparar la formación fotoquímica de α-glicoles a partir de alcoholes, con la fotodimerización reductiva de compuestos carbonílicos, hemos irradiado aldehídos y cetonas determinando cuantitativamente el valor de la relaciónde los glicoles dl/meso. En este caso se observó que ambos diastereoisómeros se formaban en proporciones parecidas (Capítulo 4). Tales resultados nos permiten afirmar que la estereoquímica de formación de glicoles aromáticos es diferente según la reacción fotoquímica que los origina, la cual está vinculada a la solvatación o no del hidroxi-aril-metil radical (ArH•C-OH). En el caso de los alcoholes bencílico y 2-cloro-bencílico obtuvimos como productos principales de la reacción dos 2,3,5,6-tetra-aril-1,4-dioxanos, en cada caso. Estassustancias se generaban, como nosotros lo demostramos (Capítulo 1), por una deshidratación térmica del correspondiente meso-glicol. Cada dioxano diastereoisómero, cuya estructura se confirmó por espectrometría de masas, resultó ser mezcla de dos confórmeros, los cuales se ponían de manifiesto en los correspondientes espectros de resonancia magnética nuclear protónica. En el Capítulo 1 se correlacionó el mecanismo de formación de dioxanos con los equilibrios conformacionales presentes en las mismas sustancias (Esquemas 3 y 4). La formación de éteres bencílicos por irradiaciónde alcoholes aromáticos fue un resultado inesperado ya que compuestos análogos no se habían obtenido al irradiar alcoholes alifáticos. Este tipo de sustancia, que en el alcohol bencílico se forma con baja eficiencia, pasa a ser en otros alcoholes aromáticos el producto principal. Una vez descartada experimentalmente la posibilidad que los éteres se formaran por una simple deshidratación térmica de los alcoholes, nos abocamos al estudio del mecanismo de formación de los mismos. Con tal finalidad empleamos alquil-hidroperóxidos ya que estas sustancias son usadas como fuente de radicales alcóxidos, que serían los responsables de la fonmación de los éteres. Del conjunto de resultados obtenidos al estudiar la estabilidad térmica y fotoquímica de los hidroperóxidos en distintos medios, pudimos concluir que los radicales alcóxidos reaccionan con moléculas del alcohol e inician un mecanismo en cadena que conduce a la formación de los éteres.

Descripción: La irradiación de los cuatro 2,3-dimetilnitroindolesisómeros en solución de ácido acético con luz ultravioletacondujo a la formación de indolaldehidos como productos dela fototransformación R-CH3 ---> R-CHO. A fin de establecer cuál de los dos grupos metiloera el que sufría la oxidación, se irradió el 2,3-dimetilindolobteniéndose 3-metilindol-2-carboxaldehido, sustancia previamente descripta en la literatura. La nitración de este aldehidopermitió obtener los cuatro 3-metilnitroindol-2-carboxaldehidos,sustancias que fueron identificadas con las obtenidasmediante el proceso fotoquímico. Estos resultados indicaban claramente que, en loscasos anteriores, donde competían grupos metilo en las posiciones 2 y 3 del indol, sólo se oxidaba el primero. Esta oxidaciónpreferencial también se manifestó en otros di- y trimetilindoles,obteniéndose en todos los casos los correspondientes 2-formilindoles (Tabla I, Capitulo III). La foto-oxidación de un grupo 3-CH3 sólo se logróen aquellos casos en que la posición 2 estaba sustituída por ungrupo fenilo. Mediante este procedimiento se prepararon diversos 2-fenil-3-carboxaldehidos que se describen en la Tabla IIdel Capítulo III. Sin embargo, en estos últimos casos la reacciónresultó ser más compleja que en los ejemplos iniciales,obteniéndose, simultáneamente con los aldehidos, otros productosde oxidación tales como o-benzamidoacetofenonas y en uncaso particular una benzoxazinona. La irradiación de N-acetilmetilindoles dió unresultado diferente, ya que en lugar de los indolaldehidos,se obtuvieron acetofenonas y benzaldehidos como productos dela fotoruptura oxidativa de la unión C2-C3 del indol. La dependencia de la fotoreacción del solventeutilizado, se puso de manifiesto cuando se irradiaron 2,3-dimetil-, 2-metil-3-fenil- y 2-fenil-3-metilindoles en etanol. Entodos los casos estudiados se obtuvieron o-acilaminofenilcetonas,en lugar de los aldehidos que se formaban empleandoácido acético (Tabla III, Capítulo III). La posible vinculación de los procesos de foto-oxidaciónobservados en este trabajo con la auto-oxidación deindoles descripta por numerosos investigadores, llevó a estudiarla descomposición fotoquímica y térmica de algunos indolenilhidroperóxidos, ya que estas sustancias podían actuar comointermediarios en la formación de aldehidos. Los resultadosobtenidos (Tabla VII, Capítulo III) indicaron que estos compuestos noparticipaban en esos procesos. Por otra parte, la inhibición de ambas reaccionesde foto-oxidación mediante el agregado de fenoles permitiócomprobar la naturaleza radical de las mismas, y con el conjuntode datos disponibles se postularon sus probables mecanismos. Con el objeto de investigar la posibilidad deoxidar grupos metilo unidos al anillo bencénico del indol seirradió el 2,3-difenil-5-metilindol. En estas experiencias,en lugar de productos similares a los anteriores, se obtuvo el 12-metil-9H-dibenzo[a,c]carbazol (Tabla VIII, Capítulo IV) queresultaba de una fotociclación tipo estilbénica. Esta reacción se hizo extensiva a diversos difenilindoles,entre ellos varios difenilnitroindoles. Empleandoestos últimos compuestos se observó, como única reacción fotoquímica,la ruptura de la unión C2-C3 con formación de o-benzamido-benzofenonas (Tabla IX, Capítulo IV). Esta ruptura oxidativa también se produjo cuandose irradiaron difenilindoles N-sustituídos, de los que se obtuvieron,conjuntamente con las o-benzamido-benzofenonas, loscorrespondientes dibenzocarbazoles. La irradiación del 2,3-difenilindol empleando unalámpara de tungsteno y azul de metileno como sensibilizadorcondujo a la obtención de o-benzamido-benzofenona. Este hechoresultó ser interesante dado que la o-benzamido-benzofenona nose formaba cuando el 2,3-difenilindol se irradiaba con luzultravioleta. También se llevaron a cabo irradiaciones con sensibilizadorempleando 1,2,3-trifenilindol y 2,3-difenil-5-nitro-6-metilindol. Los resultados de estas experiencias permitieronpostular que la fotoruptura procedería a partir del primer estadoexcitado con configuración electrónica triplete (Tl), compitiendocon la fotociclación que tendría lugar a través delprimer estado excitado singulete (Sl).

Descripción: Los fluidos supercríticos (FSC) se usan actualmente en varios procesos tecnológicos. Una de las propiedades más interesantes de los FSC como solventes es su alta compresibilidad: muchas propiedades de equilibrio y transporte escalan con la densidad y pueden ajustarse cerca del punto crítico por cambios modestos en la presión y/o la temperatura. La alta compresibilidad de los FSC cerca del punto crítico y las interacciones atractivas solvente-soluto, causan un realzamiento local de la densidad del solvente alrededor de solutos poco volátiles, fenómeno conocido como clustering (aglutinamiento) crítico. Existe un debate acerca de las características de la esfera de solvatación en la región cuasi-crítica, en particular acerca de su fuerza y persistencia frente a la ruptura. Varios estudios indican que, cerca del punto crítico, los productos de reacción muestran una característica distintiva de la materia condensada: un efecto de caja debido al aumento local de la densidad. En este trabajo examinamos el efecto de caja en FSC al medir la probabilidad de escape de los radicales 1-bifenil-4-il-1-metil-etilo (BME·), generados a partir de la fotólisis de (1-bifenil-4-il-1-metil- etil)-tert-butil diazeno. El compuesto es un sólido relativamente volátil, estable térmicamente hasta 343 K, y soluble en FSC a densidades menores a la del valor crítico, permitiendo realizar experimentos a menos de 2 K por sobre la Tc (para CO2). Se sintetizó un compuesto de referencia para los radicales a generar: una cetona simétrica precursora de dos radicales BME· por fotólisis. Para llegar a las conclusiones de este trabajo fue necesario realizar un exhaustivo estudio de la fotofísica del diazeno, como así también de la cetona de referencia y evaluar la distribución de productos en la fotólisis de ambos compuestos. Para esto se realizaron experiencias de fotólisis resueltas en el tiempo, tanto en el régimen del picosegundo como del microsegundo, en las cuales se identificaron el estado excitado singlete π,π*, el triplete centrado en el bifenilo y el radical BME·. También se determinaron las constantes cinéticas de los procesos que ocurren en los diferentes estados excitados del diazeno (se acotaron las correspondientes a la cetona), y se determinaron rendimientos cuánticos de disociación, de transferencia de energía intramolecular, de formación del estado triplete, de conversión interna, de desaparición del diazeno y de formación de radicales libres BME·. Se realizaron medidas de fotólisis estacionaria de ambos compuestos, en las cuales se evaluó la distribución de productos que contienen la funcionalidad bifenilo. En solución de ciclohexano esto permitió la determinación del efecto de caja de solvente y de la selectividad en la formación de productos de combinación y de desproporción. A partir de la medida de la mencionada distribución de productos, se determinó el valor del factor de caja de solvente y el coeficiente de absorción molar del radical BME·. En la fase sólida cristalina, se determinó también la selectividad en la formación de productos y la exclusividad de reacción dentro de la caja rígida del cristal. Los resultados en CO2, Xe y Kr mostraron que la probabilidad de escape, que es claramente una función de la densidad del solvente, no varía en forma significativa con una temperatura T en la región cercana a la crítica (T entre 1,005×Tc y 1,08×Tc). Estos resultados no respaldan la existencia de un efecto de caja realzado debido a las fluctuaciones críticas.

Descripción: Fil: Ripa, Pedro M.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Azcoaga, Fernando. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: A partir de la disponibilidad de instalaciones capaces de producir haces radiactivos, gran parte de las actividades dentro del marco de la física nuclear experimental y teórica han sido orientadas al estudio de reacciones con núcleos en zonas alejadas del denominado valle de estabilidad. Al mismo tiempo, la existencia de ciertos núcleos estables pero débilmente ligados, con muchas características similares (como ser por ejemplo el bajo umbral de energía de separación), brinda la posibilidad de estudiar este tipo de mecanismos con la ventaja adicional de poder ser producidos en forma más sencilla y con flujos de mayor intensidad. Entre los distintos mecanismos que pueden tener lugar en las interacciones con núcleos inestables o débilmente ligados, el proceso de quiebre o breakup resulta de particular interés por diversos motivos. Dentro del área de astrofísica nuclear, se ha propuesto que el estudio del mecanismo de breakup de núcleos livianos permitiría la determinación de secciones eficaces de captura radiativa a través del proceso inverso. Por otro lado, en el contexto de la física de reacciones en general, el interés está puesto en entender, no solo los mecanismos que dan lugar a este tipo de procesos por la comprensión del fenómeno en sí mismo, sino que también se halla abierta una discusión acerca de la influencia que el canal de breakup posee sobre la probabilidad de ocurrencia de otros canales de reacción, como por ejemplo los mecanismos de fusión. En la actualidad existe escasa información experimental directa sobre secciones eficaces de breakup obtenida en forma exclusiva, es decir, a través de la detección en coincidencia de las partículas producto de la reacción; gran parte de los resultados que se encuentran disponibles parten de extrapolaciones realizadas en base a resultados obtenidos sobre otros mecanismos de reacción. En este sentido, la medición directa del canal de breakup en distintos sistemas y la interpretación de los resultados en forma conjunta con la de otros procesos es de la mayor importancia y actualidad dentro de la física de reacciones nucleares. En el presente trabajo se describe el desarrollo de un conjunto de procedimientos, tanto a nivel de dispositivos de detección como de programas y procesos de análisis de datos, aptos para la determinación de secciones eficaces absolutas de reacciones de breakup a través de mediciones exclusivas. Los proyectiles estudiados en este caso consistieron en los núcleos débilmente ligados de litio 6 y 7 sobre blancos de samario 144. Se describe el desarrollo de las técnicas experimentales de detección en coincidencia y los procesos de reducción de datos necesarios para la selección de eventos de breakup y se detalla el desarrollo de un programa de simulación de reacciones de quiebre, necesario para el análisis de la eficiencia de los sistemas de detección y el cálculo de secciones eficaces absolutas. Para el caso de proyectiles de litio 6 se obtuvieron secciones eficaces absolutas para el proceso de quiebre resonante (a través del primer estado excitado del proyectil) y directo. Para el primero de estos mecanismos, los resultados fueron comparados con las predicciones obtenidas a través de un modelo clásico dinámico de simulación hallándose una buena coincidencia entre ambos. Se observó que la sección eficaz de reacción disminuye con la energía de bombardeo al atravesar el valor de la barrera de repulsion coulombiana. Para los resultados del proceso directo se propuso el uso del código de simulación como herramienta adicional del análisis de datos, que permitió estimar un umbral superior de energías relativas medidas de 300 keV. Se encontró evidencia de una fuerte presencia para ambos sistemas de un proceso de dos etapas, en particular, la transferencia de un neutrón seguida de breakup para el cual fueron calculadas secciones eficaces absolutas de reacción. Se encuentra actualmente en estudio la adaptación de los códigos de simulación para este tipo de procesos y su comparación con predicciones teóricas. Para el caso de proyectiles de litio 7, la tasa de producción encontrada para el caso de quiebre directo (en tritios y partículas α) resultó insuficiente para determinar su probabilidad de ocurrencia.

Descripción: Esta tesis presenta un estudio de reacciones de transferencia de nucleones entre iones pesados a energías subcoulombianas. Con este propósito se midieron distribuciones angulares de las reacciones de stripping de una y dos cargas en los sistemas 12C + 197Au y 16O + 197Au. Además se obtuvo información complementaria de la transferencia de nucleones mediante mediciones de coincidencia gama partícula y de rayos gama retardados emitidos durante el decaimiento de los isótopos poblados en dichas reacciones. A partir de las secciones eficaces diferenciales y las distancias de interacción, suponiendo que los núcleos se mueven sobre trayectorias de Rutherford, se obtuvieron probabilidades de transferencia. El amplio rango de energías de proyectil, permitió analizar la dependencia de la pendiente de la probabilidad de transferencia como función de la energía incidente. Esta pendiente presentó un comportamiento anómalo que pudo ser comprendido considerando la influencia del potencial nuclear sobre las trayectorias semiclásicas. Ello fue analizado mediante un modelo semiclásico en donde la probabilidad de transferencia está regida por procesos de penetración de barrera y de absorción.

Descripción: Teniendo en cuenta las escasas referencias cuantitativas existentes en la bibliografía acerca de las reacciones nucleofílicas del 3,4-dinitroclorobenceno, y considerando que enesta molécula hay una marcada diferencia en la reactividad de los grupos desplazables (el 3-nitro grupo es considerablemente más móvil que el cloro), se estudiaron las condiciones experimentales para obtener monosustitución ó disustitución con nucleófilos de tipo aminas. Con ciclohexilamina, piperidina y bencilamina la sustitución sigue un curso unilateral (Sólo se reemplaza el 3-nitro grupo) si la reacción se realiza en presencia de un solvente, aún cuando la concentración de las aminas empleadas superer la relación estequiométrica que corresponde a una monosustituición.- Por esta razón fue posible determinar con técnicas espectrofotométricas la velocidad de sustitución del 3-nitro grupo con los nucleófilos mencionados, en los solventes benceno y metanol, se controló por cromatografía y espectro ultravioleta que el producto final de reacción es único, correspondiendo a una estructura general 1-amino-2-nitro-5-clorobenceno. Los datos cuantitativos experimentales de la sustitución del 3-nitro grupo fueron correlacionados con la estructura de las aminas y la polaridad de los solventes empleados.- En esta serie de reacciones que involucran un mismo sustrato con nucleófilo y solvente variables, existe una variación correlacionada de la entalpía de activación y la entropía de activación, y la compensación entre ambas magnitudes se refleja en el estrecho rango de variación de la energía libre de activación.- La reacción de distribución fue estudiada desde un punto de vista cualitativo; el reemplazo del cloro y del 3-nitro grupo se verifica tan sólo en condiciones de solvólisis, procediendo con bajos rendimientos. Debe exceptuarse el caso de la dietilamina, la cual da mezclas de productos de sustitución aún en presencia de solventes.- La bencilamina se comporta excepcionalmente en las reacciones de solvólisis. El producto que se obtiene por calentamiento prolongado a la temperatura de ebullición de la amina, no corresponde al compuesto esperado: 2,4-dibencilamín-1-nitrobenceno. La sustancia aislada no contiene oxígeno y su estructura podría corresponder a una dihidroquinoxalina.- La reactividad del producto estructuralmente relacionado con el 3,4.dinitroclorobenceno, el orto-dinitrobenceno, fue estudiada con piperidina en los solventes benceno y metanol, y en mezclas benceno-metanol. Como en el caso 3,4-dinitroclorobenceno, se correlacionaron los parámetros termodinámicos con los factores estructurales del complejo de transición del sistema orto-dinitro.- Teniendo en cuenta que el flúor resulta habitualmente más móvil que el cloro en las reacciones de sustitución nucleofílica con aminas, a fin de determinar si el cambio del halógeno (flúor en lugar de cloro) introducía variantes significativas en la reactividad diferencial manifestada entre halógenoy nitro grupo.- Se halló que el 3,4-dinitroflúorobenceno desaparece la movilidad netamente distinta entre halógeno y nitro grupo que se manifiesta en el 3,4-dinitroclorobenceno.- En el 3,4-dinitroflúorobenceno, el flúor y el 3-nitro grupo tienen reactividad comparable; en condiciones experimentales adecuadas surge la posibilidad de obtener reacciones de monosustitución del halógeno con algunos nucleófilos.- En base a los estudios realizados con aminas y nucleófilos aniónicos puede decirse, en términos generales, que el 3,4-dinitroflúorobenceno el grupo desplazado en una monosustitución depende en alto grado de la estructura del nucleófilo.-

Descripción: El objetivo fue investigar la influencia de las propiedades físicas de las matrices (grado decompactación, transición vítrea, cristalinidad), con cambios a nivel molecular, evaluados a travésde la determinación del grado de avance de reacciones químicas: pardeo no enzimático (PNE),actividad enzimática, resistencia térmica enzimática y su relación con la composición, los cambiosde pH y la humedad. Los sistemas empleados consistieron en matrices de baja humedad con componentes desuero lácteos. Tanto el PNE como la inactivación enzimática tuvieron lugar en muestras en estadovítreo. La velocidad a la que ocurrieron las reacciones químicas (PNE, actividad enzimática,resistencia térmica enzimática) en matrices amorfas estuvo afectada por modificaciones en lasmatrices que no se manifestaron en cambios en el valor de la temperatura de transición vítrea delos sistemas. En sistemas vítreos, las muestras comprimidas desarrollaron mayor velocidad de PNE que las muestras en polvo, para todas las composiciones estudiadas. La cristalización (parcialo total) de las matrices provoca un incremento de la velocidad de reacciones químicas debido a laconcentración de reactivos en las regiones amorfas excluidas del cristal. Estas observaciones llevan a distinguir entre fenómenos que ocurren a un nivelsupramolecular, e involucra aspectos cooperativos entre las moléculas (como lo es la transiciónvítrea) de fenómenos que ocurren a un nivel molecular, como las reacciones de PNE,actividadenzimática o resistencia térmica enzimática. Es importante notar que ambos tipos de fenómenosse desarrollan en diferentes escalas de espacio y tiempo, y esto lleva a que las reaccionesquímicas puedan no estar gobernadas por las propiedades macroscópicas del medio.

Descripción: El objetivo de este trabajo fue evaluar el uso de un ensayo de reacción acrosomal (RA) en respuesta afluido folicular humano (hFF) como indicador de funcionalidad espermática. Se establecieron lascondiciones óptimas de ensayo utilizando espermatozoides de donantes fértiles. Se evaluó la influenciade la composición del medio de capacitación sobre hFF-RA: la naturaleza del suplemento proteico, perono así la composición iónica, afectó considerablemente los resultados del ensayo. Se estudió hFF-RA en 58 hombres fértiles y 232 pacientes infértiles. El %RA (diferencia entre losporcentajes de espermatozoides reaccionados en presencia y ausencia de hFF) en la población normalpresentó una distribución Gaussiana, con una media de (17±1)%. El intervalo de confianza (IC) del 95%para %RA indicó que valores inferiores al 5% se encontraban fuera del rango normal. El %RA fue mayorque 9% en 83% de los individuos normales y sólo el 2% de los mismos tuvo un %RA anormal (<5%). Secalculó la variabilidad intraindivíduousando múltiples muestras de cada donante, obteniéndose un IC del 95% de ±4 unidades de RA con respecto ala media individual. El %RA en la población infértil no presentóuna distribución Gaussiana, y el valor de su mediana fue 3%. El 60% de los pacientes presentó un %RAfuera del rango normal (<5%) y sólo el 26% de los mismos tuvo un %RA mayor de 9%. Como lospacientes ingresaron al estudio en forma secuencial, sin importar la etiología de su infertilidad, lapoblación estudiada fue muy heterogénea e incluyó individuos con un amplio espectro de caracteristicasseminales. Se observó un aumento progresivo en el número de pacientes con %RA < 5% (RA-) a medidaque se deterioró la calidad del semen. Sin embargo, 20% de los pacientes con buen semen fueroninesperadamente RA-, mientras que 29% de los pacientes con semen deficiente fueron RA+ (%RA > 5%). Así, a pesar de que hubo correlación significativa entre %RA y otros parametros seminales, %RA nofue predecible a partir de los datos de un espermograma tradicional. Se analizó la capacidad de %RA para predecir el éxito en FIV mediante un estudio prospectivo. Lamediana del % de ovocitos fertilizados aumentó con %RA: los pacientes RA- fertilizaron solamente 12%ovocitos, mientras que los pacientes con %RA > 9% fertilizaron 50% de los ovocitos. La sensibilidad delensayo fue 0,75, su especificidad 0,55 y su razón de probabilidades 2,9; asi, la posibilidad de fertilizar unovocito fue 2,9 veces mayor para los pacientes RA+ que para los RA-. Cuando los pacientes sedividieron en cuatro grupos de acuerdo con sus parametros seminales, el % de ovocitos fertilizadosdisminuyó al deteriorarse las caracteristicas del semen. Sin embargo, dentro de cada subgrupo, lamediana del % de ovocitos fertilizados fue 3 a 4 veces mayor en pacientes RA+ que en RA-, indicandoque la RA tuvo un efecto mayor sobre el exito en FIV que los parámetros tradicionales del semen. Se trató de construir un modelo predictivo del éxito en FIV, considerando una serie de parámetros defertilidad, tanto en el hombre como en la mujer. Los resultados obtenidos en las fases de Construcción y Validación del modelo mostraron que %RA tenia la mayor correlación con el éxito en FIV y que lainclusiónde cualquiera de los otros parámetros evaluados, no añadía poder estadístico al modelo. Los datos aqui presentados indican que %RA es una medida estable de la función espermática y tiene unvalor predictivo mayor para el exito en FIV que el espermograma tradicional, incluyendo la morfología concriterios estrictos. Si bien la capacidad fertilizante no puede predecirse adecuadamente a través de unúnico parámetro del espermatozoide, la determinación de hFF-RA parecería ser una herramienta útilenla evaluación de la posibilidad de exito de un paciente en FIV.

Descripción: Esta Tesis tuvo por objeto el estudio de la reacción de compuestos organolíticos con lactonas saturadas y con otros derivados de ácido. En ella se describen: 1) Antecedentes del trabajo efectuado a)La constitución de los compuestos organolíticos y sus métodos de preparación. b) Reacciones de compuestos organolíticos con aldehídos, cetonas, disulfuro de carbono, ditioésteres, ácidos carboxílicos y derivados de ácido, haciéndo especial hincapié en los antecedentes existentes en sus reacciones con lactonas. Debido a la similitud que existe entre las reacciones de los compuestos organolíticos y las de los reactivos de Grignard también se incluye, en forma breve, un comentario sobre las reacciones de estos últimos con los sustratos nombrados anteriormente, en especial con lactonas y enol lactonas. c) Se presenta un resumen de los métodos de síntesis de las 1,4- y 1,5-dicetonas. 2) Trabajo efectuado En primer lugar, tomando como modelo la reacción de ɣ-valerolactona con n-butil-litio, se determinaron las condiciones experimentales óptimas para la obtención de la correspondiente hidroxicetona con excelentes rendimientos, encontrándose además que, en condiciones similares, el reactivo de Grignard no da resultados satisfactorios, ya que o no se produce reacción o se obtienen mezclas de la hidroxicetona y del diol correspondiente, con lo cual se descarta su uso como reacción de interés sintético. Una vez determinadas las condiciones experimentales más adecuadas para la obtención de la hidroxicetona, se estudió el rango de aplicación de la misma, comprobándose que se obtienen muy buenos rendimientos con compuestos alquil y aril líticos y con lactonas de naturaleza diversa en lo que respecta al tamaño del ciclo y a la naturaleza primaria, secuandaria o terciaria del átomo de carbono unido al átomo de oxígeno. Utilizando las mismas condiciones experimentales que en las reacciones anteriores, se estudió la reacción de N-butil-ε-caprolactama con n-butil y fenil-litio, obteniéndose en ambos casos muy buenos rendimientos de las correspondientes cetoaminas. En cambio, el anhídrido glutárico reacciona con n-butil-litio obteniéndose un rendimiento muy bajo del correspondiente cetácido. Por reacción de disulfuro de carbono con fenil-litio en presencia de un halogenuro de alquilo, se obtienen los detioésteres correspondientes, los cuales reaccionan con los compuestos organolíticos para dar productos análogos a los que, según la literatura, se obtienen por reacción con los reactivos de Grignard. Utilizando la reacción de compuestos organolíticos con lactonas saturadas se diseñó una secuencia que permite la síntesis de cetoácidos, de lactonas saturadas sustituídas, de 1,4- y 1,5-dicetonas. Como ejemplo de su aplicación, se describen síntesis de un producto natural como la cis-jasmona, su derivado la dihidrojasmona y un isómero del 4-ipomeanol, todos obtenidos mediante secuencias muy breves y alto rendimiento total. Las propiedades espectroscópicas de los productos obtenidos se discuten en forma breve en cada uno de los casos. 3) Parte experimental En ella se detallan las técnicas empleadas para la síntesis, aislamiento y caracterización de todas las sustancias obtenidas, así como de varios de los intermediarios.

Descripción: l.-Se ha realizado la amonolisis de laα-octaacetilcelobiosa con amoniaco metanólico al 16 % obteniéndosela N,N'-diacetil-celobiosilidendiamina con un rendimientodel 3,7 %. A partir de esta sustancia se obtuvo laocta-O-acetil-N. N‘-diacetil-celobiosilidendiamina. Este acetatofué similar al obtenido por Zechmeister y Toth (L. Zechmeistery G. Toth, Ann. 525, 14 (1936)) quienes lo obtuvieronpor tratamiento de octa-acetilcelobiosa con amoniacoliquidoen tubo cerrado a 50°. Además se aisló la hepta-O-acetil- N-acetil-α-celobiosilamina por cromatografía en columnade Talco: Celite 503. Esta sustancia se considera anómerala aislada por Zechmeister y Toth (loc. cit.) en la reacciónantes mencionada. La amonolisis de la β—octaacetilcelobiosatambién condujo al aislamiento de la N,N'-diacetil-celobiosilidendiaminacon un rendimiento del 9,4%.En esta experienciano se obtuvo ningún N-acetilcelobiosilamina derivado. Se hace una discusión acerca de la influenciaque el disolvente tiene en esta reacción comparando nuestrasexperiencias con las de Zechmeister y Toth (loc. cit.) ycon las de Fritz Micheel y colaboradores (F. Michael, R. Frier, E. Plate y A. Hiller, Chem. Ber., 85, 1092 (1952)). En base a estudios cinéticos de Betts y Hammett( R.L. Betts y L.P. Hammett, J.Am. Chen. Soc. 59, 1568 (1937)) seconsidera que la presencia de metanol favorece la amonolisistotal de los acilos y su ausencia favorece la formación dealdosa amidas. La presencia de NH4+ favorece la formaciónde aldosa-amidas y su ausencia favorece la reacción de amonolisis total. 2.- Se llevó a cabo la amonolisis de la β-octaacetil-lactosa, obteniéndose la N,N´-diacetil-lactosiliden-diamina con un rendimiento del 4,7%. A partir de ellase obtuvola octa-O-acetil-N,N0-diacetil-lactosilidendiaminacristalina. Tambiénse aislo por cromatografía en columnade carbón la N-acetil-β-lactosilamina. Esta sustanciase considera anómera de la obtenida por Richard Kuhn y G. Kruger (R. Kuhn y Gerd Kruger. Chem. Ber. 87, 1544: (1954))por acción de la cetona sobre la lactosil-amina. La acetilaciónde esta sustancia dió la hepta-O-acetil-N-acetil-α-lactosilamina. Este acetato también se obtuvo por cromatografíaen columna, luego de seguir una técnica de acetilaciónde las aguas madres de la obtención de N,N'—diacetil-lactosilidendiamina. 3.- La reacción del amoniaco metanólico conβ-octaaacetilmaltosa condujo al aislamiento de la octa-o-acetil-N,N´-diacetil-maltosilidendiamina, en una cantidadque corresponde a un rendimiento de N,N'-diacetilmaltosilidendiaminadel 0.80% La reacción de la β-octaacetilmaltosa conamoniaco acuoso permitió obtener la octa-O-acetil-N,N'-diacetil-maltosilidendiamina en una cantidad que corresponde aun rendimiento de N,N´-diacetilmaltosilidendiamina del 22,5 %. Por amonolisis de este producto se obtuvo la N,N´-diacetilmaltosilidendiamina cristalina. Se pone de manifiesto que la imposibilidad decristalizar directamente esta sustancia se podria deber al hechode encontrarse asociada con maltosa. Al realizar una amonolisis comparativa en mediometanólico y en medio acuoso se confirman las conclusiones aque arribara al discutir la influencia del disolvente, que seresumen en l. 4.- Se describe el empleo de tres reactivoscromatográficos. El reactivo de nitrato de plata -metóxido desodio es una modificación del reactivo conocido empleando nitratode plata e hidróxido de sodio en medio acuoso o acetónico. Presentó utilidad en la detección de azúcares reductoresy no reductores en frio y puede ser útil en la cromatografíade ésteres de hidratos de carbono sobre papel con fase invertida (excepto para el caso de papel-formamida). El reactivo de ácido pícrico-metóxido de sodiodetecta solamente azúcares reductores y presenta la ventajade ser empleado en medio alcalino, con lo que se evita laposibilidad de hidrólisis de grupos sensibles a los reactivosácidos. El reactivo de ácido pícrico-metaperyodato desodio es útil en la detección de algunas sustancias nitrogenadas,del grupo de los hidratos de carbono, aminóacidos ycompuestos heterociclicos.

Descripción: a) Parte teórica: Se definen los Acidos Hexurónicos como productosde oxidación del grupo primario de las hexosas y no establece su nomenclaturay la de sus derivados. Se citan las fuentes naturales yse hace una breve reseña histórica de los mismos. En particular se tratan los ácidos glucurónicosgalacturónico y manurónico respecto de la estructura de las formas D y L y de las antípodas alfa y beta; se citan sus propiedades físicasy químicas y los procedimientos de obtención. Sobre los glucurónidos se detallan propiedades yse mencionan las teorías enunciados sobre el origen de los mismosen el organismo, el sitio de la conjugación y el mecanismo de la misma. Respecto del metabolismo del ácido glucurónico seacepta el esquema de Fishman y sus colaboradores, se comenta la influencia de la dieta en la excreción y se citan los usos terapeuticos dedicho ácido. Los métodos de valoración de los Acidos Hexurónicosse agrupan en cinco clases: I)los basados en la producción defurfural; II)idem en la producción de CO2; III)idem en las propiedadescromógenas; IV)idem en las propiedades reductoras; V)idem en laactividad óptica (polarimetria). Se discuten cada uno de esos métodos y en especial el que utiliza elnaftoresorcinol como reactivo. Sobre éste se mencionan sus propiedadeslos medios de obtención y las distintas técnicas en que se emplea. b) Parte experimental: Se detalla la técnica de Dische para el ácidoglucurónico. Se dan indicaciones sobre los reactivos y en especialsobre el carbazol. Trabajando con glucurona se estudió la reaccióndel carbazol y se ratifican los resultados obtenidos por Dische. Se estudia el desarrollo del color en el tiempo,se selecciona el filtro en el Pulfrich (S53)y se establece la curvade absorción con el espectrofotómetro de Beckman. Se fijaron lascondiciones experimentales (tiempo de calentamiento, influencia de latemperatura, adición y concentración de los reactivos, idem de la temperaturade reacción). Se determinó el Eo de la reacción en el fotómetrode Pulfrich y sobre los ensayos de proporcionalidad se realizóun estudio estadístico que se completa con el trazado de la recta deextinción vs concentración por el método de los cuadrados mínimos. Se realizó un estudio similar y paralelo sobrela reacción del carbazol con la glucosa y con dos glucurónidos (bornil y mentil) que se obtuvieron en el laboratorio por vía biológica. Se introdujeron variantes en la técnica y seestudió la influencia de las mismas llegando a establecer la necesidadde trabajar a temperatura constante . Se establece definitivamente la siguientetécnica: A 1 ml de solución de ensayo (conteniendo de 5 a 60 microgramospor ml) se le agregan 6 ml de H2SO4 concentrado Merck, se calienteal baño maria (100°c) durante 20 minutos y se enfría luego a 20°C, se agregan 0,2 ml de solución alcohólica de carbazol al 0,10%y se deja reaccionar a 20°C durante dos horas. Se lee en el Pulfrichla extinción contra un blanco análogo pero con agua destilada en vezde la solución de ensayo. Filtro S53 (530 milimicrones); cubas de l cm EO = 7,503. Al estudiar la aplicación de dicha técnica a lavaloración de hexurónidos en el suero humano se estudió previamentela influencia de los desproteinizantes (tungstico,(OH)2Zn,(OH)2Cd,acido metafosfórico, alcohol.acetona y ácido tricloroacético). Se prefiereel ácido tricloroacético y con su empleo se realizan ensayosde recuperación de glucurona sobre soluciones de ovoalbúmina y desuero sanguíneo. Se discuten los resultados obtenidos comparándoloscon los publicados anteriormente y se citan valores normales. Se estudió la aplicación de la reacción del carbazola la valoración de los hexurónidos en la orina, trantando de eliminarpreviamente las interferencias que producen color de carbonización. Se intentó la eliminación de urea, el tratamiento con adsorbentes (Norita, tierra Fuller, ceolin, silicato de aluminio Lloyd), consolventes (cloroformo, eter, alcohol amílico), la defecación por precipitación de (OH)2Cu, (OH)2Zn, por acetato de plomo neutro y básico. Ningunode estos procedimientos es eficaz por lo que se optó por realizarla valoración con orina diluida 1/20 y un blanco para la lecturafotométrica que lleva todos los reactivos, incluso orina, pero no llevacarbazol. Los ensayos de recuperación de glucurónidos y deglucurona con orina resultaron satisfactorios y sobre muestras de orinade 2h horas, en 24 sujetos normales adultos, se determinó la tasade excreción normal de ácido glucurónico total.

Descripción: El hecho de que la reacción de Wohl aplicada enmedio acuoso a los nitrilos acetilados de los ácidos aldónicosderivados de los monosacáridos daba las N,N'-diacetil-aldosilidendiaminas con rendimientos considerablementemayores que cuando se hacia en medio metanólico yla circunstancia de que Zemplén hubiera obtenido jarabesnitrogenados por amonolisis del octa-O-acetil-celobiononitrilo,nos hizo pensar en la conveniencia de estudiarla aplicación del método de Wohl para degradar los nitrilosacetilados de los ácidos aldobiónicos derivados delos disacáridos con unión glicosídica 1-4 tales comola celobiosa, lactosa y maltosa. La degradación de estosnitrilos era de interés ya que por un lado permitía observarel efecto estérico que en la reacción podia tenerel resto glucopiranosilo ó galactopiranosilo voluminosounido al carbono-4 del disacárido y por otro lado, desdeel punto de vista preparativo permitía obtener las N,N'diacetil-aldobiosilidendiaminas y N-acetil-aldobiosilaminascon un átomo de carbono menos que el nitrilo del cualse partió, poseyendo estructuras poco frecuentes de hexosa-pentosa. Además presentaba interés ver si en la degradaciónde los nitrilos acilados según Wohlse producíael azúcar reductor de un átomo de carbono menos que eldisacárido de origen. Nosotros estudiamos la reacción de Wohl en medioacuoso aplicada al octa-O-acetil-celobiononitrilo, octa— O-acetil-lactobiononitrilo y octa-O-acetil-maltobiononitrilo. Por amonolisis en mddio acuoso al 25% del octa- O-acetil-celobiononitrilo se obtuvo un jarabe del cual,después de dos cromatografías en carbón Darco G-60: celite 535 (5:1) y usando como eluyente soluciones con concentracionescrecientes de etanol en agua, se aislaronlas siguientes sustancias: a) 24,2%de rendimiento de N,N'-diaceti1-3-O-β—D-glucopiranosil-D-arabinosiliden-diamina de punto de fusión 214-215° (desc.) [α]D^20 +25,2°(agua); b) 4,2% de rendimiento de N-acetil-3-O-β-D-glucopiranosil-D-arabionosilamina de punto de fusión 130-131°, [α]D^23 +72,78° (agua) y c)0,32% de rendimiento de una 3-O-β-D-glucopiranosil-D-arabinosa de punt de fusión 143-145°, [α]D^20 +37,4°(agua). Además se prepararon los siguientes derivados acetilados:hepta-O-acetil-N,N´-diacetil-3-O-β-D-glucopiranosil- D-arabinosildendiamina de punto de fusión 74-75° (abland.60°), [α]D^17 +55,3° (cloroformo) y hexa-O-acetil-N-acetil-3-O-β-D-glucopiranosil -D-arabinosilamina de punto de fusión 124-125° y [α]D^20 -3,95° (cloroformo). Por amonolisis del octa-Oacetil-lactobiononitrilo con amoníaco acuoso al 25% y después de una columna de cromatografía en carbón Darco G-60: celite 535 (5:1), se aislaron las siguientes sustancias:a) 1,3% de rendimiento de una 3-O-β-D-galactopiranosil-D-arabinosa de punto de fusión 155-156°, [α]D^23 +72°→+5,33° (agua); b)9,7% de rendimiento la N,N´diacetil-3-O-β- D-galactopiranosil-D-arabinosilidendiamina de punto de fusión 184-185° (desc.), [α]D^21 +49,74° (agua) y c) 3,58% de rendimiento la N-acetil-3-O-β-D-galactopiranosil-D-arabinosilamina de punto de fusión 174-175°(desc.), [α]D^27 +26° (agua). Se preparó la hepta-O-acetil-N,N´-diacetil-3-O-β-D-galactopiranosil- D-arabinosilidendiamina de punto de fusión 70-71°, [α]D^27 +42,98° (cloroformo). Finalmente, aplicando al octa-O-acetil-maltobiononitrilo, el que sólo se lo obtuvo con una pureza del 65%, la reacción de degradación de Wohl en medio acuoso al 25%, por cromatografía del jarabe resultante de la amonolisis en tres columnas de carbón Darco G-60: celite 535 (5:1) se aislaron las siguientes sustancias: a) una 3-O-α-D-glucopiranosil-D-arabinosa de punto de fusión 207-210° (desc), [α]D^ 28 +16°→25° (agua); otra 3-O-α-D-glucopiranosil-D-arabinosa de punto de fusión 109-110°, [α]D^26 -50° (agua); c) N-acetil-3-O-α-D-glucopiranosil-D-arabinosilamina de punto de fusión 60-61°, [α]D^25 +57,6° (Agua) y d) maltosa. El aislamiento de esta última sustancia que fue identificada como tal por su punto de fusión, poder rotatorio, y por las constantes físicas de la β-octa- O-acetil-maltosa preparada por acetilación hace pensar que la impureza que contenía el octa-O-acetil-maltobiononitrilo era la octa-O-acetil-maltosa proveniente de no haber reaccionado totalmente la maltosa con hidroxilamina durante la síntesis de la maltosa oxima a partir de la cual se preparó el octa-O-acetil-maltobiononitrilo.

Descripción: Fil: Fiorini-von Niederhäusern, Antonia Leonor. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: La oxidación de compuestos celulares que contienen tioles, como el glutatión (GSH) o cisteínas (Cys) proteicas por especies reactivas del oxígeno, juega un papel importante en una amplia variedad de procesos biológicos incluyendo la transducción de señales, la regulación de enzimas, canales proteicos, factores de transcripción y respuestas antioxidantes. Diversos peróxidos como el peróxido de hidrógeno (H2O2) o el ácido peroxinitroso (ONOOH) se producen en muchos tipos de células como respuesta a una variedad de estımulos y podrıan funcionar como mensajeros intracelulares ubicuos. La oxidación de tioles por hidroperóxidos (R’OOH), da lugar a la forma sulfénico (RSOH), que a su vez,puede reaccionar con otro tiol para dar lugar a un disulfuro (RSSR). Si la reacción se da en cambio con sulfuro de hidrógeno (H2S) como nucleófilo, el producto es la especie persulfuro (RSSH). Los persulfuros presentan una química con un amplio abanico de posibilidades. Además de exhibir electrofilicidad gracias a su azufre interno, los persulfuros pueden reaccionar como nucleófilos de forma análoga a los tioles, en la que el átomo de azufre del extremo ataca un electrófilo, como podrıa ser un hidroperóxido. Se ha propuesto que los persulfuros son nucleófilos y ácidos más fuertes que los tioles,y que son los responsables de los efectos biológicos inicialmente adjudicados al H2S. Por otro lado, dependiendo de las condiciones, la especie RSOH puede reaccionar con otro equivalente de hidroperóxido para formar la especie ácido sulfínico (RSO2H). De las reacciones mencionadas, la primera de ellas fue ampliamente estudiada tanto por el grupo de trabajo como por la comunidad científica en general, desde el punto de vista teórico y experimental. El resto, desde la reacción de la forma sulfénico con H2S para dar persulfuros, la reactividad de los persulfuros, y la eventual sobre oxidación de la forma sulfénico para dar lugar a la forma sulf ́ınico, son campos de estudio aún en crecimiento, siendo esta tesis un aporte a los mismos. Esta tesis tiene como objetivo aportar información termodinámica y cinética referente a la reactividad de las especies tiol (RSH,ácido sulfénico (RSOH) y persulfuro (RSSH). Para tal fin se empleó una combinación de técnicas de simulaciones computacionales clásicas, cuánticas e híbridas cuántico-clásicas, en combinación con estudios experimentales para la determinación de constantes cinéticas y/o energías libres de activación. Esta tesis está organizada de la siguiente manera: Comenzaremos presentando el estudio de la formación de especie sulfínico, es decir, la sobre oxidación del tiol. Esta reacción representa una alternativa a la formación de la especie persulfuro, que podría tener lugar o no dependiendo de las condiciones. Aquí empleamos un conjunto de herramientas computacionales para estudiar el mecanismo de la reacción del reactivo aislado, en solución acuosa y en particular en el ambiente proteico del sitio activo de la alquil hidroperóxido reductasa E de Mycobacterium tuberculosis (MtAhpE), una peroxidasa dependiente de tioles de la familia de las peroxirredoxinas. Finalmente, también se llevó a cabo la determinación experimental de la energía libre de activación de la reacción en MtAhpE, estudiando la variación de su constante de velocidad con la temperatura. El siguiente capítulo centra su atención en la especie persulfuro y se basa en el estudio de su reactividad nuclefılica frente a distintos electrófilos. Este capıtulo incluye el desarrollo de un método de cuantificación de persulfuro de glutation en una mezcla con otras especies de azufre, la determinación de su pKa y la de las constantes de velocidad de su reacción con H2O2, ONOOH y el alquilante monobromo bimano. En cada caso, las simulaciones dan soporte a los resultados experimentales y viceversa, permitiendo obtener una interpretación microscópica, racionalizando los resultados en términos de bases moleculares. Finalmente, teniendo como motivación la necesidad de simular el complejo mecanismo de la formación de persulfuros, en el que las moléculas de agua del solvente intervienen quımicamente, presentamos en el último capıtulo un desarrollo metodológico: la implementación en un código propio para la determinación de caminos de mınima energıa libre sin la necesidad de seleccionar a priori una coordenada de reacción. Este capítulo comienza con un estudio de sistemas modelo, y culmina con la aplicación del método a la reacción de formación de persulfuros. Como un todo, esta tesis aporta conocimiento a un conjunto de reacciones que especies de bajo peso molecular y proteicas que contiene azufre experimentan, empleando una combinación de simulaciones computacionales y experimentos.

Descripción: Los reactores de lecho mojado, conocidos como reactores “trickle bed” (RTB), se emplean ampliamente en diversas industrias, petroquímica, química, bioquímica y para tratamiento de efluentes, siendo particularmente recomendados para la oxidación catalítica de contaminantes orgánicos, en particular de fenol, dada la baja relación de volumen de líquido a volumen de sólido que minimiza reacciones secundarias en fase homogénea. Dichos reactores, tradicionalmente, se operan en estado estacionario en condiciones en las cuales las resistencias externas al transporte de materia suelen ser significativas. La operación periódica constituye una alternativa para mejorar la performance del reactor sin necesidad de cambios de diseño significativos. El sistema opera continuamente en estado no estacionario incrementando la velocidad de transporte de materia hacia la superficie externa del catalizador. La modulación de flujo líquido afecta los fenómenos fluidodinámicos y de transporte y su interacción con la reacción química y genera acumulación en el interior de la partícula. A pesar de los numerosos resultados alentadores reportados, esta tecnología no se emplea aún a nivel industrial esencialmente por la falta de una metodología rigurosa de diseño. En este contexto, el presente trabajo aborda un estudio sistemático de la influencia de emplear modulación del caudal de líquido sobre una reacción catalítica en un RTB, a partir de: i) la formulación y resolución de un modelo exhaustivo a escala de pastilla catalítica, que provea los elementos necesarios para comprender la compleja interacción entre la dinámica de la reacción química y la transferencia de materia intrapartícula, y como la misma se ve afectada por la modulación del líquido que circula alrededor; ii) la determinación de la influencia de la modulación del flujo de líquido sobre los perfiles axiales y temporales de retención o “holdup” de líquido en una columna rellena con circulación de gas y líquido en cocorriente descendente (maqueta fría de un RTB). Se desarrolla una herramienta matemática para predecir condiciones de operación óptimas cuando el flujo de líquido es modulado, logrando establecer argumentos sólidos para decidir a priori si una estrategia de operación periódica mejorará o no la performance de un RTB. Asimismo, se obtiene información fluidodinámica relevante para describir el comportamiento del RTB bajo modulación de caudal de líquido, que resulta imprescindible para definir parámetros claves de diseño, los cuales se requieren para el modelo desarrollado a escala de pastilla catalítica.

Descripción: La hipótesis que se evaluó en el presente trabajo es que el receptor colinérgico que media la sinapsis entre las fibras eferentes olivococleares mediales y las células ciliadas internas de la cóclea de mamíferos está compuesto por las subunidades nicotínicas α9 y α10. En la primera parte, estudiamos las propiedades biofísicas y farmacológicas del receptor colinérgico nicotínico (nAChR) nativo presente en las células ciliadas internas (CCIs) de la cóclea antes del comienzo de la audición. Para ello, realizamos registros de patch-clamp en la configuración whole-cell en una preparación aguda del órgano de Corti de ratas de 9 a 11 días postnatal (P9-P11). La caracterización del nAChR nativo de las CCIs fue realizada aislándolo del canal SK2, para poder luego comparar sus propiedades con aquellas obtenidas para los receptores recombinantes α9 y α9α10 expresados en oocitos de Xenopus laevis. El perfil farmacológico y la permeabilidad al calcio del receptor nativo fueron idénticos a los descriptos para los receptores recombinantes tanto α9 como α9α10. Sin embargo, cuando se compararon otras características biofísicas se observó que el receptor nativo de las CCIs es similar al nAChR recombinante heteromérico α9α10. Los resultados obtenidos en este apartado sugieren que el receptor de las CCIs es un heterómero compuesto por las subunidades α9 y α10 y no un homómero compuesto sólo por la subunidad α9. La subunidad nicotínica α9 se expresa en las CCIs de la cóclea desde estadios embrionarios hasta la adultez. En cambio, la subunidad α10 deja de expresarse en estas células luego del comienzo de la audición. En la segunda parte, analizamos la ontogenia de las respuestas colinérgicas en las CCIs desde la llegada de las fibras olivococleares mediales (P1-P3) hasta el comienzo de la audición (P12-P13) y en días posteriores al mismo (P14-P22), para analizar si existía una correlación directa entre la expresión de la subunidad α10 y la sensibilidad colinérgica de las CCIs. Los registros electrofisiológicos mostraron que la sinapsis entre las fibras eferentes olivococleares y las CCIs es funcional a partir de P3 y continúa transmitiendo señales hasta P13-P14. Luego de P14, las CCIs no responden a la acetilcolina liberada de los terminales pre-sinápticos ni a la aplicada de manera exógena. Nuestros resultados muestran que luego del comienzo de la audición, las CCIs carecen de nAChR funcionales y que esto se correlaciona con la disminución en la expresión de la subunidad α10. El estudio de las respuestas electrofisiológicas de las células ciliadas externas (CCEs) de la cóclea resulta dificultoso por la presencia de una corriente de potasio (IK,n) que impide fijar el voltaje de estas células a potenciales hiperpolarizados. Esta corriente es bloqueada por la linopiridina y se ha utilizado esta droga para estudiar las respuestas colinérgicas de las CCEs. En la tercer parte, reportamos el efecto de la linopiridina sobre el nAChR nativo de las células ciliadas y sobre el receptor recombinante α9α10 expresado en oocitos de Xenopus laevis. Demostramos que la linopiridina bloquea a los nAChRs de las células ciliadas y al receptor recombinante α9α10 con la misma potencia. Estos resultados, además de contribuir a la caracterización farmacológica del receptor, indican que la linopiridina tiene un efecto directo sobre el nAChR α9α10 y que por lo tanto no debería utilizarse para estudiar las respuestas colinérgicas de las CCEs.

Descripción: El objetivo del presente trabajo de tesis es estudiar el rol del receptor de aril hidrocarburos (AHR) en la función de las células ováricas. En particular, la investigación se centró en evaluar la acción de la activación del AHR sobre la proliferación de células de la granulosa y establecer a su vez la regulación de la expresión del propio receptor. El modelo utilizado consistió en células de la granulosa inmaduras de rata cultivadas en condiciones definidas. Se pudo establecer que distintos ligandos del AHR son capaces de regular la proliferación de células de la granulosa a través de modulaciones en las acciones de las hormonas clásicas. Se determinó la existencia de un novedoso sinergismo entre el AHR y el receptor de estrógenos activados por sus agonistas, el cual impacta sobre la respuesta proliferativa de las células de la granulosa pero no se verifica a nivel de la transcripción inducida por ninguno de los receptores. Por otro lado, se estableció que FSH y estradiol son importantes moduladores de la expresión del AHR en células de la granulosa, obteniéndose evidencia de que podrían ser factores endógenos claves asociados al ciclo reproductivo que regulan la expresión del receptor in vivo. Además, mientras los ligandos del AHR inducen rápidamente degradación proteasomal del receptor, atenuando la señal, promueven a la vez un aumento en sus transcriptos a tiempos prolongados de exposición. Los resultados tomados en conjunto indican que el AHR jugaría un papel clave en la regulación del crecimiento de las células ováricas y que su expresión es modulada por hormonas clásicas y por sus propios ligandos, lo cual constituye una forma de regular su función.

Descripción: La alta incidencia de la obesidad, y las patologías asociadas, la diabetes y las enfermedades cardiovasculares, ha producido la necesidad de profundizar nuestro conocimiento del funcionamiento de la adipogénesis. Los fibroblastos pre-determinados del tejido adiposo sufren, en presencia de glucosa y otros factores hormonales, el proceso adipogénico, el cual los convierte en células adiposas o adipocitos. El adipocito no es sólo un reservorio de energía extra sino además y principalmente un centro de regulación metabólica. Cuando el tejido adiposo no puede acomodar este exceso lipídico, la grasa se deposita anormalmente en otros tejidos, condición conocida como obesidad. Por este motivo el estudio de los mecanismos involucrados en la proliferación y en la diferenciación de estas células puede contribuir al tratamiento de las patologías antes mencionadas. Con este objetivo, la participación en este proceso de distintos factores de crecimiento, como la insulina, el IGF-1 y el EGF, se ha estudiado profundamente tanto en experimentos in vivo como in vitro. En el presente estudio se demostró que la modulación de erbB2 durante la proliferación e inducción adipogénica de preadipocitos tiene un papel fundamental en el proceso adipogénico. Se utilizó como modelo la línea celular murina Swiss 3T3-L1, la cual espontáneamente o por inducción hormonal diferencia a adipocitos. Se estudiaron los receptores con actividad de tirosina quinasa tipo I, erbB1/EGFR, erbB2, erbB3 y erbB4 y ligandos, heregulina y EGF, en cuanto a expresión, activación y modulación durante el proceso adipogénico. Se demostró por primera vez en las células 3T3-L1 expresión de los ARNm para erbB2, EGFR y erbB3. A nivel proteico, la expresión de erbB2 y EGFR aumentó durante la etapa proliferativa, disminuyendo significativamente en respuesta a la inducción adipogénica post-arresto celular (por tratamiento con MIX y dexametasona en presencia de suero fetal bovino), demostrando un patrón de regulación similar. El avance hacia el estado diferenciado se acompañó de un aumento en la expresión de heregulina en su forma madura. Esta misma expresión endógena de heregulina posiblemente impidiera la activación de erbB2 en respuesta a la misma, mientras que tanto erbB2 como EGFR sí se fosforilaron en tirosina en respuesta a EGF, formando además un heterodímero entre ellos. Este resultado demostró que la interacción de estos receptores es posible en estas células. La participación funcional de erbB2 en este modelo quedó demostrada por experimentos de inhibición farmacológica del receptor. Con la utilización de las tirfostinas AG 825 y AG 879 durante la proliferación de las células 3T3-L1 se observó una inhibición de la proliferación de las mismas, demostrando la participación de erbB2 en dicho proceso. La inhibición del receptor durante la inducción adipogénica potenció el efecto de los inductores aunque no es capaz de reemplazarlos, aportando más evidencias de que la disminución de la expresión y/o activación de erbB2 favorecería el proceso adipogénico. La inducción adipogénica también activó tres vías diferentes de señalización: MAPK, JNK y p38. La expresión de erbB2 se vió aún más inhibida por el tratamiento con inhibidores de MAPK (PD98059) y JNK (SP600124). La activación de estas quinasas en respuesta a la inducción posiblemente retrasaría la disminución de erbB2, o alternativamente, otras vías de señalización no estudiadas en el presente trabajo estarían involucradas en dicho proceso. Estos resultados aportan la primera evidencia del papel de erbB2 en la diferenciación adipocítica.

Descripción: La alta incidencia de cáncer de mama ha creado la necesidad de comprender elfuncionamiento de las vias regulatorias de la glándula mamaria. Las alteraciones en laexpresión y vias de señalización de los factores de crecimiento parecen críticas en eldesarrollo y progresión de las neoplasias de mama. El conocimiento de los circuitosregulatorios del crecimiento celular en la glándula mamaria es de suma importancia parala prevención, diagnóstico y tratamiento del cáncer de mama. Con este objetivo, se haprestado significativa atención a los miembros de la familia de ligandos de los erbBs y susreceptores con actividad de tirosina-quinasa en células mamarias tanto normales comotransformadas. En el presente estudio se demostró la existencia de interacciones entre lasvías de señalización de los progestágenos y las vias de la heregulina (HRG) y los erBs entumores mamarios. Se utilizó un modelo de carcinogénesis hormonal, en el cual elprogestágeno sintético acetato de medroxiprogesterona (MPA) indujo la aparición deadenocarcinomas mamarios en hembras vírgenes de la cepa Balb/c. Los estudios de losreceptores con actividad de tirosina quinasa tipo I (erbB-2, erbB-3 y erbB-4 ) y de suligando, HRG, fueron realizados utilizando tres tipos de tumores del modelo decarcinogenesis inducida por MPA: tumores ductales progestágeno- dependientes (HD) conaltos niveles de receptores para estrógenos (RE) y progesterona (RP), las variantestumorales progestágeno - independientes (HI) de los anteriores, que si bien conservan los RE y RP proliferan de manera MPA- independiente y tumores hormono- independientesde origen lobulillar que carecen de RE y RP. Se encontró sobreexpresión de erbB-2 yerbB-3 y bajos niveles de expresión de erbB-4 en todos los tumores estudiados. En todoslos tumores lobulillares y en uno de los ductales la sobreexpresión del erbB-4 se debió aamplificación génica. Los mismos patrones de expresión se mantuvieron en los cultivosprimarios de células epiteliales provenientes de estos tumores. El MPA indujo unaregulación positiva de la expresión de ARNm de HRG, erbB-2 y erbB-3 en las líneastumorales HD. La progresión hacia un fenotipo progestágeno independiente (HI) seacompañó de una mayor expresión constitutiva de HRG, erbB-2 y erbB-3. La expresiónde HRG se detectó en las células tumorales epiteliales, indicando que la HRG actuaría através de un mecanismo autocrino en cancer de mama. Al tratar células epiteliales malignas con oligodeoxinucleótidos antisentido (ASODN-1)al ARNm del erbB-2, se encontró una inhibición del crecimiento inducido por MPA enlas líneas tumorales HD y del crecimiento autónomo de las líneas tumorales HI. Losmismos niveles de inhibición se obtuvieron usando ASODN-2 dirigidos a la secuenciaconsenso de tirosina- quinasa. El hecho de no haber encontrado efectos sinérgicos al tratarcon una combinación de ambos ASODNs y MPA, otorgaria al oncogen erbB-2 unaparticipación crítica en la proliferación mediada por MPA y el crecimiento autónomo decélulas HI. La HRG indujo un potente efecto proliferativo en en cultivos primarios decélulas HD y potenció el efecto mitogénico del MPA. En las células HI, que exhibieronfosforilación constitutiva del receptor erbB-2 , el tratamiento con HRG no tuvo efectoalguno sobre la proliferación, aportando evidencias de que la sobreexpresión del erbB-2 ysu activación constitutiva conferida a estas células una ventaja proliferativa. El bloqueo dela síntesis endógena de HRG con ASODNs al ARNm de HRG en células HD inhibió elcrecimiento inducido por MPA. El tratamiento de estas células tanto con HRG como con MPA resultó en la fosforilación en tirosina del erbB-2 y el erbB-3. Estos resultadosindican que la HRG actuaría como mediador del efecto proliferativo del MPA. Seencontraron los mismos resultados in vivo, en tumores proveniente de ratones tratadoscon MPA. Además, los efectos proliferativos tanto del MPA como de HRG, fueronabolidos cuando las células se trataron con ASODNs al ARNm del erbB-2, otorgando alerbB-2 una participación fundamental en el crecimiento inducido por HRG. Finalmente, elbloqueo de la expresión del receptor tipo l de IGF (IGF-R I) con ASODNs especificosresultó en la completa inhibición de los efectos proliferativos de HRG, demostrando que lapresencia de un IGF-R I funcional es esencial para la actividad mitogénica de HRG. Estosresultados aportan la primera evidencia de interacciones entre las vias de transducción deprogestágenosy de HRG/erbBs en cáncer de mama y la primera demostración de que losefectos proliferativos de HRG requieren de IGF- R I.

Descripción: El objetivo de esta tesis fue el estudio de los receptores GABAb en la pituitaria anterior y el hipotálamo de ratas hembras y machos durante el desarrollo y en la adultez. Observamos un patrón de expresión ontogénico, con una disminución de la expresión de ambas subunidades del receptor GABAb (RGABAb) a lo largo del desarrollo, encontrándose sus niveles más bajos en la adultez. En la hipófisis anterior determinamos, además, una clara expresión secualmente dimórfica, siendo los niveles del receptor significativamente más abundantes en ratas hembras que en machos en edades tempranas del desarrollo. Esta diferencia sexual depende del nivel de andrógenos presente durante etapas críticas de diferenciación sexual, ya que la supresión de los dos picos androgénicos en el macho lleva a una expresión alta, tipo hembra, mientras que la administración neonatal de testosterona a las hembras disminute la expresión del RGABAb1 a niveles de macho. Los niveles hipotalámicos de GABA siguen el mismo patrón que la expresión de los RGABAb1 hipofisiarios y este neurotransmisor es capaz de inducir la expresión de RGABAb1 exclusivamente en células adenohipofisiarias de hembras. Los andrógenos, por su parte, inducen la expresión de la subunidad RGABAb2 en ambos sexos, marcando así una regulación diferencial para cada subunidad del RGABAb. Los RGABAb hipofisiarios están acoplados a proteínas G i/o, y su activación disminuye los niveles de AMPc y lleva al cierre de los canales de calcio, de calcio dependientes del voltaje, modulando así la secresión hormonal. Los RGABAb en el hipotálamo muestran patrones ontogénicos similares a los hipofisiarios, sin evidenciarse diferencias sexuales en su expresión en edades tempranas del desarrollo.

Descripción: En el presente trabajo se intenta establecer el papel de ciertos subtipos de receptores colinérgicos muscarínicos, con especial atención respecto al receptor M4, en algunas funciones cerebrales que van desde la modulación de reacciones enzimáticas hasta efectos sobre la retención de la memoria en determinados ensayos de comportamiento. Debido a la falta de agentes farmacológicos selectivos por RAChM, un objetivo complementario fue el de ampliar la caracterización de algunas de las toxinas muscarínicas, péptidos extraídos del veneno de serpientes Mamba, de forma de poder emplearlas en el estudio discriminado de los receptores muscarínicos. Los receptores muscarínicos pertenecen a la familia de receptores metabotrópicos con siete segmentos de transmembrana, cuya participación en la señalización intracelular está mediada por las proteinas G. Han sido identificados cinco subtipos, todos presentes en el sistema nervioso central: los receptores M2 y M4 principalmente promueven la inhibición de la adenilato ciclasa por intermedio de Gi, en tanto que los subtipos M1, M3 y M5 estimulan la fosfolipasa C a través de Gq. La acción de los receptores muscarínicos también puede ser mediada por otros tipos de proteína G, que tienen efecto sobre canales iónicos, y así pueden alterar el potencial de membrana neuronal. Se ha demostrado la participación de los receptores muscarínicos en diferentes modelos de plasticidad sináptica y en varias formas de aprendizaje y memoria, aunque el rol de cada subtipo no se distingue claramente. Los resultados obtenidos en el presente trabajo demuestran que, en ensayos de actividad enzimática, los receptores M4 son responsables exclusivos de la inhibición muscarínica de la síntesis de AMPc en estriado y en hipocampo, mientras que en amígdala no pareciera haber participación muscarínica detectable en la señalización de este segundo mensajero. También se estimó la proporción de subtipos de receptores muscarínicos en estas tres estructuras mediante experimentos de inhibición de la fijación específica por las toxinas muscarínicas. En experimentos de electrofisiología se puso de manifiesto un rol excitatorio de M1 y M4 en neuronas piramidales de CA1, como también se evidenció la participación de M4 en un modelo de plasticidad sináptica. En ensayos de comportamiento se comprobó un rol positivo de M4 en la consolidación, mientras que el mismo receptor tuvo un efecto opuesto en la evocación: se bloqueó selectivamente al M4 inmediatamente después del entrenamiento en una tarea de evitación inhibitoria y justo antes de la sesión de prueba, alternativamente. En el primer caso se produjo amnesia, mientras que en el segundo, se observó un efecto facilitatorio.

Descripción: Este trabajo se centró en estudiar la participación del receptor NMDA del hipocampo dorsal en la formación de memorias de larga duración en la rata. Para ello se intentó modificar la expresión de la subunidad esencial NR1 del receptor NMDA, construyendo vectores amplicón portadores de la secuencia NR1, en dirección sentido o antisentido. Los vectores fueron competentes, tanto in vitro como in vivo, para transducir y expresar los transgenes. La inyección de vectores portadores del transgén NR1 antisentido en hipocampo dorsal de ratas adultas, produjo disminución de la proteína NR1 y déficits en aprendizaje/memoria en dos paradigmas comportamentales: habituación a un ambiente y evitación inhibitoria. Se caracterizó tipo y número de células infectadas por los vectores en el cerebro. La disminución de NR1 en neuronas piramidales de CA1, con la consecuente disminución del receptor, sería responsable del déficit comportamental. Se concluye que la subunidad NR1 del hipocampo dorsal estaría implicada directamente en el registro de eventos necesarios para ambas tareas y que la alteración del receptor NMDA en una pequeña fracción de neuronas piramidales de CA1, sería suficiente para producir las alteraciones cognitivas observadas. Podría ser que las neuronas implicadas en plasticidad sináptica fuesen más susceptibles a la disminución del receptor, o que no existiera el alto nivel de redundancia postulado para los circuitos hipocampales; entonces, se requeriría cierto nivel de expresión/disponibilidad de NR1 en la mayoría de las neuronas de CA1, para formar memorias duraderas. En relación con la técnica de RT-PCR, se encontró un fenómeno de síntesis basal de ADNc en la reacción de RT, a partir del ARNm de un gen, y que no requiere del agregado de primers.

Descripción: Los resultados obtenidos a lo largo de este trabajo permiten realizar las siguientes observaciones: 1. La inmunización in vivo por vía i.p. con un antígeno con vencional, glóbulos rojos de conejo (GRCo)indujo cambios en los niveles alorreactivos T esplénicos. El cambio en los niveles alorreactivos fue dependiente de la dosis y del CMH extraño hacia el que se midió la alorreactividad. Los aumentos de alorreactividad T registrados operarían sólo hacia antígenos mayores de histocompatibilidad. No se registraron modificaciones de los niveles T hacia ninguno de los numerosos antígenos menores de histocompatibilidad examinados. 2. La inmunización in vivo con otro antígeno convencional, glóbulos rojos de carnero (GRC) por vía i.p. fue capaz de inducir también cambios en los niveles de alorreactividad T medidos como desequilibrios en el pasaje transplacentario de estos linfocitos T alorreactivos de la madre al feto. También en este caso los desequilibrios alorreactivos T fueron dependientes de la dosis para cada uno de los H-2 extraños examinados. En estos experimentos -al igual que en los anteriores no se registraron modificaciones en los niveles de respuesta T hacia los antígenos menores de histocompatibilidad examinados. 3. El útero, en condiciones de pseudopreñez, resultaría un lugar privilegiado para el desencadenamiento de desniveles alorreactivos T inducidos por inmunización con un antígeno convencional. Este mecanismo de interacción entre la inmunización con antígenos convencionales y la modificación de los niveles alorreactivos T produciría un efecto similaral que ocurre naturalmente en los primeros días de preñeces singeneicas y alogeneicas, cuando la madre se ve confrontada por vía uterina con antígenos fetales de tipo convencional y modifica también sus niveles de alorreactividad T hacia diferentes antígenos CMH extraños. Este mecanismo podría jugar un papel importante en la regulación de la respuesta inmune durante la relación maternofetal. 4. Los desniveles -aumentos en nuestro caso- alorreactivos T registrados por inmunización con el antígeno convencional tendieron a regularse, volviéndose a los niveles alorreactivos normales. 5. Cuando la inmunización con un antígeno convencional indujo aumentos en los niveles T alorreactivos, dichos aumentos pudieron reducirse en forma significativa por pretratamientode las células con un suero con actividad antiidiotípica anti- dicho antígeno convencional. 6. La inmunización con antígenos convencionales indujo (como ya hemos señalado) aumentos en los niveles de alorreactividad T. Al continuar la inmunización-haciéndose casi crónica se registraron desórdenes autoinmunes. Los desórdenes autoinmunes incluyeron reactividad hacia IgG autóloga normal y reacciones T hacia antígenos de histocompatibilidad propios. 7. La inmunización crónica con los dos antígenos convencionales utilizados indujo aumentos significativos en la incodencia de leucemias espontáneas. El conjunto de los resultados obtenidos a lo largo de este trabajo muestra una relación funcional entre las células T reactivas a antígenos convencionales vistos en el contexto de los antígenos mayores de histocompatibilidad propios y las células T que reaccionan hacia antígenos CMH extraños. Dicha relación funcional sería consecuencia de una relación física entre ambos tipos de células T: los experimentos realizados con suero con actividad anti-idiotípica contra el antígeno convencional sugieren fuertemente que la célula T que reacciona hacia antígenos convencionales, poseería también receptores dirigidos contra antígenos CMH extraños. La superposición existente entre ambas poblaciones podría jugar un rol importante en los mecanismos que operan en la regulación del sistema inmune.

Descripción: Las Biomoléculas pueden clasificarse en informacionales y no informacionales. En este último grupo se encuentran los azúcares y las grasas mientras que las moléculas informacionales son: las proteínas, los ácidos nucléicos y las hormonas esteroideas implica que un cambio tan sutil como la introducción o carencia de un oxígeno o un hidrógeno modifique sustancialmente su actividad biológica. En el caso de los estrógenos su elaboración por los ovarios es compleja y su carácter fenólico los distingue claramente del resto de las hormonas. Por este motivo son moléculas capaces de modificar la actividad genética (son conductores de información) en cantidades circulantes extremadamente pequeñas, del orden de picogramos, mientras que otros esteroides tales como corticoides o progestágenos necesitan concentraciones 10 a 100 veces mayores para inducir cambios a nivel de sus células efectoras. Estas características posiblemente se relacionen con algunas peculiaridades de los receptores estrogénicos que en el curso evolutivo han sido sometidos a variaciones cíclicas: diurnas, estrales, menstruales o aún más prolongadas. De allí el carácter altamente regulatorio de 10s receptores estrogénicos que sirvión de base a los trabajos aquí presentados, y que utilizamos como hipótesis para explorar la modulación de los receptores en diversas situaciones experimentales.

Descripción: Los receptores β-adrenérgicos (β-RA) median la respuesta al estrés a través de su unión a las catecolaminas endógenas. Se ha descripto a los β-RA como reguladores de numerosos procesos asociados a la progresión tumoral. En el presente trabajo de Tesis se demostró que no solo la activación sino también los niveles de expresión de los β2-RA determinan el comportamiento benigno de las células mamarias, lo cual explica el comportamiento diferencial entre las células tumorales y no tumorales ante la catecolamina endógena, epinefrina. Se demostró que la estimulación β-adrenérgica regula el desarrollo normal de la glándula mamaria, conduciendo a un fenotipo diferenciado. Se estudiaron mecanismos dependientes del receptor de estradiol e independientes del mismo, y se describieron posibles mediadores moleculares. Además, el efecto diferenciante observado en la glándula mamaria normal resultó ser trasladable a modelos tumorales. Se demostró que el antagonista propranolol se comporta como agonista, regulando procesos celulares como los de adhesión y proliferación. Se profundizó en las vías de señalización que regulan la adhesión celular inducida por el isoproterenol (agonista) y el propranolol (antagonista). Los resultados obtenidos en el presente trabajo aportan nuevas perspectivas en el estudio del estrés y el cáncer de mama. Comprender cómo los β-RA inciden sobre el desarrollo de la glándula mamaria es prometedor y relevante en la investigación del cáncer.

Descripción: La activación del receptor nicotínico colinérgico α9α10 presente en los contactossinápticos entre las fibras colinérgicas eferentes olivococleares y las células ciliadas delórgano de Corti puede prevenir el trauma acústico. En consecuencia, incrementar suactivación mediante el uso de potenciadores farmacológicos, conocer las condiciones enlas cuales este receptor alcanza una activación óptima o estudiar su mecanismo deactivación, podría tener un potencial valor terapéutico para la prevención de la pérdidade audición causada por exposición a intensidades altas de sonido. Por lo tanto, losobjetivos de este trabajo fueron: caracterizar nuevos moduladores positivos para elreceptor α9α10, estudiar las condiciones en las que alcanza una activación óptima ydescribir los requerimientos estructurales para su activación. En relación a la búsqueda de potenciadores farmacológicos, en este trabajocaracterizamos al ácido ascórbico (ASC) como modulador positivo de receptoresrecombinantes α9α10 expresados en oocitos de Xenopus laevis, mediante fijado devoltaje con dos electrodos. Evidenciamos que la potenciación por ASC de α9α10 noafecta la afinidad aparente por acetilcolina (ACh) ni la sensibilidad al voltaje delreceptor, pero si incrementa significativamente las amplitudes máximas de corrienteevocada. Este efecto es estereoespecífico de la forma L y reducida de ASC. Nuestrosresultados sugieren que el mecanismo de potenciación involucraría una interacciónalostérica estereoespecífica. Para caracterizar las condiciones en las cuales el receptor α9α10 alcanza unaactivación óptima, estudiamos la influencia del Ca2+ extracelular en la activación delreceptor recombinante α9α10. Este receptor es potenciado a concentraciones sub-mMde Ca2+ y es bloqueado a concentraciones superiores. La incorporación de la subunidadα10 al pentámero es responsable de la potenciación a concentraciones sub-mM de Ca2+. Mediante mutagénesis dirigida y generación de receptores quiméricos, evidenciamosque las interfaces entre los dominios extracelulares de una subunidad α9 y otra α10adyacente son clave en este proceso. Finalmente, estudiamos el proceso de activación de receptores recombinantesα9α10, caracterizando la importancia de cada subunidad en la formación de sitios de unión a ACh funcionales. Evidenciamos que los componentes principales del sitio deunión a ACh de tanto las subunidades α9 como de las α10 son necesarios para laactivación del receptor α9α10 y que los componentes complementarios de α9 sonindispensables para este proceso.

Descripción: El objetivo del presente trabajo fue estudiar elreceptor nicotínico del órgano eléctrico de Discopyqe tschudii ysus propiedades funcionales en membranas reconstituídas. En tal sentido se comprobó la existencia de sitios quefijan α-bungarotoxina y de influjo de Rb+ estimulado porcarbamilcolina en preparaciones de membranas del órgano eléctricode D. tschudii. La respuesta fue bloqueada por curare y seinactivó por incubación previa de las membranas con el agonista (desensibilización). El material fue extraido con colato de sodio y sepurificó por cromatografía de afinidad utilizandobromoacetilcolina comoligando. La actividad específica delmaterial purificado fue, en promedio, de 4,7 nmoles deα-bungarotoxina/mg proteína. El análisis de dicho material porelectroforesis en geles de poliacrilamida en presencia de SDS dedicho material reveló la presencia de cuatro bandas de PM 41.200, 49.500, 60.000 y 66.300. El receptor purificado fue incorporado a liposomas delecitina de soja (asolectina). Las propiedades funcionales delreceptor se preservaron en las muestras reconstituldas. Esto es:capacidad de fijación de ligandos, influjo de cationes estimuladopor carbamilcolina, la desensibilización de la respuesta y lastransiciones de afinidad para agonistas que se correlacionan coneste último fenómeno. Se demostró además, como habia sido observado pormétodos electrofisiológicos en preparaciones neuromusculares y pormétodos bioquímicos en fragmentos de membranas de órganoelectrico, que el Ca2+ acelera la velocidad de inactivación (desensibilización) del receptor reconstituido en liposomas. Estas observaciones sugieren la presencia de un receptorcolinergico de tipo nicotínico en el órgano electrico de D.tschudii, con características bioquímicas y funcionales similaresal receptor de las especies del género Torpedo. Esto permiteconsiderar al órgano electrico de D. tschudii como una fuente parael estudio de este receptor. El receptor nicotínico purificado y reconstituído enlíposomas fue el sistema elegido para estudiar el mecanismo deacción de la droga amantadina. Esta droga, utilizada para eltratamiento de la enfermedad de Parkinson y para prevenir ciertasinfecciones virales, produce, ademas, un bloqueo de la transmisiónneuromuscular uniéndose al receptor nicotínico en un sitiodistinto del sitio de unión de la acetilcolina. En el presentetrabajo se confirmó que la amantadina es un bloqueante nocompetitivo del receptor nicotínico ya que no afecto la fijaciónde α-bungarotoxina en equilibrio pero si produjo un bloqueo delinflujo de cationes estimulado por carbamilcolina. A través de ladeterminación del influjo de Rb+ a membranas expuestas acarbamilcolina por distintos tiempos se observo que la amantadinaaceleró la velocidad de inactivación de la respuesta (desensibilización) inducida por el agonista. La amantadina noindujo dicho fenómeno por si misma. La aceleración de la velocidaddel proceso de desensibilización seria entónces uno de losmecanismos por los cuales la amantadina ejerce el bloqueo de latransmisión colinérgica. Otro de los objetivos del presente trabajo fue estudiarla aplicación de una nueva tecnica para la reconstitución delreceptor nicotinico y comparar el funcionamiento del receptor enliposomas preparados bajo distintas condiciones experimentales. Latécnica empleada fue la de precipitación con polietilenglicol, queha sido utilizada en la reconstitución del receptor muscarinicodel corazón y el receptor α2-adrenérgico del cerebro de mamíferos. Se observó que el receptor nicotínico se incorporó a los liposomasy que un 80 % de las moleculas se orientaron correctamente en lamembrana. La fijación en equilibrio de α-bungarotoxina reveló quese produjo una perdida de 50-55% de los sitios durante elprocedimiento de reconstitución. Los valores de la constante develocidad de fijación de α-bungarotoxina de segundo orden (kt) yde la constante de baja afinidad para carbamilcolina (K1) fueroncomparables a los observados para el receptor reconstituido por elmétodo de diálisis. Sin embargo, el receptor reconstituldo por elmétodo de precipitación con PEG exhibió un minimo inílujo de Rb+estimulado por carbamilcolina y no manifestó transiciones deafinidad. Cuando la preparación de PEG se purificó, mediante elempleo de éter etílico, para eliminar las impurezas presentes enlas muestras comerciales de PEG, el receptor reconstituido exhibiótransiciones de afinidad e influjo de cationes estimulado porcarbamilcolina. El análisis de los lípidos presentes en lasmuestras reconstituldas reveló que los proteoliposomas preparadospor precipitación con PEG presentaron un contenido mayor de ácidosgrasos libres que los preparados por el método de diálisis. Losresultados sugieren que los efectos observados pueden deberse aalguna de las impurezas presentes en las preparaciones de PES y/oa la presencia de ácidos grasos libres provenientes,probablemente, de la hidrólisis de la asolectina. Con el objeto de profundizar en el estudio del fenómenode la desensibilización del receptor nicotínico, se estudió elefecto de un pentapeptido, denominado timopentina, sobre laspropiedades funcionales del receptor nicotínico reconstituído enliposomas. Se piensa que dicho pentapeptido corresponde al sitioactivo de la hormonatimica timopoyetina. La timopoyetina y latímopentinas ademas de sus efectos inmunológicos, producen unbloqueo de la transmisión neuromuscular. En el presente trabajo semuestra que la timopentina no modificó la fijación en equilibriode α-bungarotoxina pero produjo un bloqueo de la respuesta delreceptor en un rango de 10-10M a 10-4M. Más aún se observó que latimopentina aumento la velocidad de desensibilización del receptory que dicho fenómeno se incrementó en presencia de Ca2+. Estasobservaciones corroboran el efecto que sobre la transmisiónneuromuscular tiene la timopoyetina y sugieren que la timopentinao péptidos relacionados podrian modular dicha transmision.

Descripción: This thesis focused on the biotic factors that influence the abundance and spatial distribution of herbaceous plant populations in the central Monte desert, particularly grasses, including the spatial heterogeneity typical of the system: microsite and habitat scales. The spatial association between established grasses and tall shrubs, a two-phase mosaic structure of high- and low-cover patches characteristic of many other arid zones, was described for the first time in the typical habitats of the central Monte desert: algarrobales, open forests of Prosopis flexuosa trees in a shrub matrix dominated by Larrea divaricata, and jarillales, shrublands of Larrea cuneifolia. The heterogeneous spatial distribution of the soil seed bank, determined by abiotic factors acting on their primary and secondary dispersal, was identified as the main cause of the spatial pattern of adult herbs in the algarrobal. Survival of seedlings and young plants were not different enough among microsites to cause or revert that spatial pattern. Seed abundance limited the recruitment of new seedlings under benign environmental conditions. Postdispersal granivorous vertebrates removing seeds in autumn–winter limited the recruitment of the species they consume. Vertebrate herbivores reduced seedling survival rates and production of spikes in adult grasses. Domestic cattle altered some of these patterns and mechanisms. Cover of most grass species was lower in grazed areas even under extensive management with moderate stocking rates; some changes in species composition were also noted. Lower grass recruitment in the grazed area associated with diminished emergence rates, probably as direct consequence of trampling or as an the indirect effect through the lower plant cover in the habitat. Spike production decreased after tissue removal was lower in the grazed area, though a corresponding reduction in seed bank size was not detected. Jarillales, the most extensive habitat in the Monte but less frequent in the study area, showed less contrast between the two phases of its mosaic structure. Shrub patches were larger and bare patches smaller. Under the shrubs, forb recruitment was lower than in algarrobal despite their bigger seed bank, probably as the negative consequence of more abundant litter. Overall, these results provide evidence of the magnitude of vertebrate consumers’ effects limiting herbaceous plants recruitment in protected and grazed areas in the region. Domestic herbivores and postdispersal granivores consume mostly grasses, affecting their life cycle at different steps, altering their spatial patterns and diminishing their potential abundance. Still, these biotic interactions are subject to strong abiotic constraints, especially water availability in the soil as determined by frequency and magnitude of rain pulses during the growing season. This spatially and temporally variable interaction among biotic and abiotic factors ultimately determine the structure and preservation of herbaceous plant populations in the central Monte desert

Descripción: La hormiga argentina, Linepithema humile, es una de las especies más estudiadas entodo el mundo por haber invadido todos los continentes generando perjuicio y desequilibrios enlas faunas locales. Esta hormiga se encuentra también en ambientes antropizados dentro de surango nativo, como la Ciudad de Buenos Aires. En esta tesis se evaluó el comportamiento derecolección de cebos artificiales en la hormiga argentina. En el laboratorio se estudió elcomportamiento de ingestión de soluciones de sacarosa. Se ofrecieron soluciones de diferenteconcentración a hormigas individuales, a diferencia de otros estudios en esta especie, donde sefocalizó en el comportamiento a escala grupal. Las concentraciones intermedias fueron las másconsumidas y a mayor tasa de ingestión, mientras que las de mayor concentración demandaronextensos tiempos de ingestión llevándose la hormiga una carga de buche menor. Se estudiaronposteriormente las interacciones entre la recolectora y compañeras de colonia en función de laconcentración de la solución ingerida por la primera. Se caracterizaron y cuantificaron loscomportamientos desplegados, realización de trofalaxias (intercambio de alimento boca a boca),contactos, y caminatas con contoneo de gáster. Las concentraciones intermedias generaron unamayor proporción de trofalaxias y éstas ocurrieron con menor latencia. Por otro lado, lashormigas dadoras realizaron más contactos, sacudidas de cabeza y contoneos de gásterconforme aumentaba la concentración de la solución ingerida. Es la primera vez que secuantifican estos comportamientos, asociados al reclutamiento en hormigas, para diferentescalidades de un recurso. Finalmente, se estudió el comportamiento recolector de hormigasindividuales frente a cebos adicionados con tóxicos borados. Para ello se formularon solucionesde sacarosa de diferente concentración adicionadas con distintas concentraciones de borato desodio por un lado, y ácido bórico por el otro. La hormiga argentina aceptó e ingirió el cebo conácido bórico, mientras que el cebo con borato de sodio fue rechazado o consumido en bajosvolúmenes. La sobrevida de los individuos reveló una eficacia reducida para el borato de sodio. Se realizaron además estudios a campo para describir la estructura poblacional de la hormigaargentina dentro de la Ciudad Universitaria (CU). Mediante pruebas de agresión, se detectarondiferentes supercolonias, cuya extensión podía alcanzar un área de hasta 11 hectáreas. Se evaluóla distribución dentro de CU mediante cebos alimentarios, colectas directas y trampas de caída. La hormiga argentina ha demostrado ser numéricamente y comportamentalmente dominante enalgunos sitios, y ausente en otros. Se determinaron las especies presentes en zonas con y sinhormiga argentina. Sumadas a las especies encontradas en la CU y alrededores, mediantecolectas realizadas en otros sitios de la CABA, se ha logrado registrar las especies presentes enla ciudad, llegando a determinar un total de 60 especies. Esperamos que nuestros estudiospermitan un mayor entendimiento de la estrategia particular de una especie autóctona defundamental importancia en la actualidad y así como del comportamiento de insectos sociales. Además, esperamos que los conocimientos generados tengan un potencial campo de aplicaciónen el mejoramiento de protocolos de control químico de hormigas urbanas.

Descripción: La abeja doméstica Apis mellifera es un insecto eusocial. Esto la constituyeen un excelente modelo para estudiar el surgimiento de patrones de comportamientosocial a partir de comportamientos individuales. La regulación de la actividad dereclutamiento de abejas a fuentes de alimento con relación a la recompensa que estasfuentes ofrecen es el problema analizado en esta tesis. La hipótesis que guía el análisisexperimental presente propone que el número de abejas reclutadas hacia una fuente dealimento está directamente relacionado con la productividad de la misma. Se describe laactividad de reclutamiento a fuentes de néctar durante la recolección individual ycolectiva en Apis mellifera. Las condiciones experimentales utilizadas permitieron quecada recolectora cargara parcialmente su buche en la fuente (lo que definimos comocondiciones de flujos bajos). Cuantificamos el número de abejas que arribaron a unafuente (la respuesta de reclutamiento) estimuladas por una única recolectora empleada. El número promedio de abejas arribadas se distribuyó dependiendo principalmente de laproductividad ofrecida en términos de flujo y concentración de solución azucarada. Además, la respuesta de reclutamiento resultó independiente del número de recolectorasempleadas en la fuente de alimento, de variaciones abruptas en los niveles derecompensa y del nivel de recompensa relativo a aquello que la abeja veníarecolectando en visitas previas. Se estableció la importancia relativa de los diferentesmecanismos de transferencia de información relacionados con la actividad dereclutamiento: Algunos parámetros de la danza de contoneo, contactos trofalácticos y elnúmero de estadías en la colmena correlacionaron con el número abejas arribadas. Paralos flujos más elevados las abejas arribadas descendieron en la fuente de alimento pocodespués del descenso de la recolectora empleada, lo que correlacionó con el marcadoolfativo de la misma. Por último dado que se trabajó con una misma fuente y un mismogrupo de recolectoras a lo largo de varios días, se correlacionó la experiencia de larecolectora empleada y sus compañeras desempleadas en la colmena. El número deabejas arribadas correlacionó fuertemente con el número de recolectoras desempleadasexperimentadas disponibles en la colmena. La experiencia de la recolectora empleadano afectó la respuesta de reclutamiento pero resultó una variable clave que estructura latarea de recolección colectiva. Estos resultados en conjunto indican que la respuesta dereclutamiento en condiciones de flujos bajos estaría determinada por el nivel derecompensa ofrecido a la recolectora empleada junto con la estimulación diferencial derecolectoras desempleadas que conocían previamente la fuente de alimento.

Descripción: El presente trabajo de tesis analizó diversos aspectos de larecolección individual de néctar en la hormiga Camponotus mus. Seestudiaron en forma cuantitativa la dinámica de ingestión ydiferentes variables comportamentales, en relación con laconcentración de la solución de sacarosa ofrecida, con el tamañodel insecto, y con el estado nutricional de nido. El tamaño de lahormiga determina su capacidad de carga y la velocidad deingestión. Se discute este aspecto en un marco de eficienciaindividual y social. La carga en el buche y la tasa de ingestión, estoes, la velocidad con la cual la solución es ingerida, presentan unamodulación según la concentración de la solución y el estadonutricional de la colonia. Cuando el nido dispone de azúcar, lashormigas ingieren soluciones de baja concentración (menos de 20% p/p) en menor cantidad y a menor velocidad que cuando al nidose lo priva de azúcares. Estas variaciones en las tasas de ingestiónse producen a través de una modulación de la frecuencia en elaccionar de la bomba cibarial, lo que sugiere un control central de ladinámica de ingestión de néctar. Las decisiones que la hormigatoma en relación con el llenado de buche, con el tiempo deingestión, y con la velocidad de ingestión, permiten caracterizar laestrategia de recolección de néctar en esta especie. Un análisiscomparativo con la abeja Apis mellifera L. y el esfíngido europeo Macroglossum stellatarum (Sphingidae, Lepidoptera) sugiere que lamodulación de las tasas de ingestión encontrada en la hormiga C.mus podrían aparecer en otros grupos de insectos.

Descripción: El problema de la supresión de la recombinacióngenética en el sexo heterogamético fue investigado en la mosca del Mediterraneo Ceratitis capitata, una importante plaga de losfrutales. En esta especie unas pocas mutaciones morfológicas concasi nulos datos de ligamiento entre ellas habian sido reportados enel momento de comenzar esta investigación. En el transcurso de lamisma se logró, en primer término aumentar el surtido demarcadores genéticos disponibles incorporando las variantes paramovilidad electroforética o alozimas. Se identificaron dos alelos dela Esterasa pupal (Es) y se establecieron cepas puras para cada uno deellos. Con dichas cepas se consiguió establecer que el gen para laesterasa pupal se encuentra en el mismo grupo de ligamiento que un gendenominado niger (ng) causante de una extrema melanización cuticularen la pupa y en el adulto. Con estos materiales se aportó la primeraprueba genética de que la recombinación en el macho de estaespecie no tenia lugar, al menos con frecuencia comparable a la dela hembra. Esta parte del trabado se completó con la incorporaciónde otro gen llamado long pupa (lp) que se manifiesta fenotipicamentepor un sensible alargamiento y cambio de forma de la pupa, y que fuemapeado aproximadamente a 15 unidades de ng, estando ambos genes a suvez alejados de Es. Utilizando una cepa con una traslocación cromosómicaentre el cromosoma Y y el autosoma portador del grupo de ligamiento 1p-ng-Es, bautizada T5038, se hicieron observaciones preliminares queindicaron una gran estabilidad en cuanto al ligamiento del marcador ngcon el sexo. Una observación mas atenta de la misma puso demanifiesto que ciertas cigotas portadoras de duplicaciones parcialesque son producidas regularmente en la progenie de la cepa T5038 soncapaces, bajo ciertas circunstancias, de avanzar hasta un estadiofinal del desarrollo pupal. El estudio minucioso de estos individuosabortivos permitió concluir que la totalidad de los marcadoresprobados deben ubicarse en la porción no traslocada del autosomamencionado mas arriba. Al considerar los fenómenos que serian responsables deinestabilidad en la cepa traslocada, fue posible distinguir entre lasupervivencia tardía de cigotas aneuploides y raros eventos derecombinación en machos. Para abordar de lleno el estudio de esteultimo fenómeno se decidió usar el par de marcadores lp y dd,este último (dark dorsal abdomen) manifestado por un oscurecimientode la cuticula del adulto. Dichos marcadores fueron elegidos porestar muy separados en el mapa genético, por ser de facilobservación sin lupa, y por permitir de ese modo recuentos muchomayores que los obtenidos usando corridas electroforéticas. Conellos, y luego de revisar 49697 moscas, fue posible demostrar 55 casosgenuinos de recombinación en el macho, cada uno de ellos comprobadospor prueba de progenie. El analisis de estos datos ha revelado: 1)que este fenómenos se presenta en nuestro sistema con tasas un ordende magnitud menores que las informadas por la literatura, 2) unanotable constancia y repetibilidad del fenómeno, 3) que elfenómeno se presenta tanto en los cruzamientos directos comoreciprocos, 4) que no tiene efecto la presencia de un caso previo derecombinación en los padres, y 5) que tal vez exista algunaoscilación entre dos niveles de frecuencias del fenómeno, unmáximo de 0,13%, y un mínimo de 0,042%, medidos siempre entre losdos marcadores lp y dd. En un esfuerzo final se emprendió la búsqueda exhaustivade recombinación en la cepa traslocada TY+++/lp dd sw, en la cual seincorporó el nuevo marcador sw (slow-mazzard), caracterizado porojos de color guinda y tasa de desarrollo más baja que lo normal. Entotal, luego de revisar 10510 moscas de la cepa traslocada fue posibledemostrar 7 casos ciertos de recombinación en la misma. Cinco deellos permitieron ademas mapear el lado del cual se encuentra elpunto de ruptura de la traslocación respecto del conjunto demarcadores. Se concluyó que el mapa mas probable es: T5038-lp (49)dd (33) sw, siendo los valores entre paréntesis las distancias derecombinación entre los marcadores en la hembra. Finalmente estos resultados se evaluaron en su importanciaaplicada y teórica. Los mismos se compararon con los obtenidos porotros autores y se discutieron dentro del contexto amplio del problemade la regulación de la recombinación en general, y de su papel enla evolución de las especies, poniendo especial énfasis en elproblema de la supresión de la recombinación en uno de los dossexos. Se concluyó el trabado discutiendo los mecanismos posibles yel rol adaptativo que estos fenómenos pueden desempeñar en lasespecies.

Descripción: El problema de reconocer automáticamente una acción llevadaa cabo en un video está recibiendo mucha atención en la comunidad devisión por computadora, con aplicaciones que van desde el reconocimientode personas hasta la interacción persona-computador. Podemos pensar alcuerpo humano como un sistema de segmentos rígidos conectados por articulaciones,y al movimiento del cuerpo como una transformación continuade la configuración espacial de dichos segmentos. La llegada de cámarasde profundidad de bajo costo hizo posible el desarrollo de un algoritmo deseguimiento de personas preciso y eficiente, que obtiene la ubicación 3D devarias articulaciones del esqueleto humano en tiempo real. Esta tesis presentacontribuciones al modelado de la evolución temporal de los esqueletos. El modelado de la evolución temporal de descriptores de esqueleto planteavarios desafíos. En primer lugar, la posición 3D estimada para las articulacionessuele ser imprecisa. En segundo lugar, las acciones humanaspresentan gran variabilidad intra-clase. Esta variabilidad puede encontrarseno sólo en la configuración de los esqueletos por separado (por ejemplo, lamisma acción da lugar a diferentes configuraciones para diestros y para zurdos)sino tambión en la dinámica de la acción: diferentes personas puedenejecutar una misma acción a distintas velocidades; las acciones que involucranmovimientos periódicos (como aplaudir) pueden presentar diferentescantidades de repeticiones de esos movimientos; dos videos de la mismaacción puede estar no-alineados temporalmente; etc. Por último, accionesdiferentes pueden involucrar configuraciones de esqueleto y movimientossimilares, dando lugar a un escenario de gran similaridad inter-clase. Eneste trabajo exploramos dos enfoques para hacer frente a estas dificultades. En el primer enfoque presentamos una extensión a Edit Distance on Realsequence (EDR), una medida de similaridad entre series temporales robustay precisa. Proponemos dos mejoras clave a EDR: una función de costo suavepara el alineamiento de puntos y un algoritmo de alineamiento modificado basado en el concepto de Instancia-a-Clase (I2C, por el término en inglés: Instance-to-Class). La función de distancia resultante tiene en cuenta el ordenamientotemporal de las secuencias comparadas, no requiere aprendizajede parámetros y es altamente tolerante al ruido y al desfasaje temporal. Además, mejora los resultados de métodos no-paramótricos de clasificaciónde secuencias, sobre todo en casos de alta variabilidad intra-clase y pocosdatos de entrenamiento. En el segundo enfoque, reconocemos que la cantidad de esqueletos discriminativosen una secuencia puede ser baja. Los esqueletos restantes puedenser ruidosos, tener configuraciones comunes a varias acciones (por ejemplo,la configuración correspondiente a un esqueleto sentado e inmóvil) uocurrir en instantes de tiempo poco comunes para la acción del video. Por lotanto, el problema puede ser naturalmente encarado como uno de Aprendizaje Multi Instancia (MIL por el término en inglés Multiple Instance Learning). En MIL, las instancias de entrenamiento se organizan en conjuntos o bags. Cada bag de entrenamiento tiene asignada una etiqueta que indica la clasea la que pertenece. Un bag etiquetado con una determinada clase contieneinstancias que son características de la clase, pero puede (y generalmenteasí ocurre) también contener instancias que no lo son. Siguiendo esta idea,representamos los videos como bags de descriptores de esqueleto con marcasde tiempo, y proponemos un framework basado en MIL para el reconocimientode acciones. Nuestro enfoque resulta muy tolerante al ruido, lavariabilidad intra-clase y la similaridad inter-clase. El framework propuestoes simple y provee un mecanismo claro para regular la tolerancia al ruido, ala poca alineación temporal y a la variación en las velocidades de ejecución. Evaluamos los enfoques presentados en cuatro bases de datos públicascapturadas con cámaras de profundidad. En todos los casos, se trata debases desafiantes. Los resultados muestran una comparación favorable denuestras propuestas respecto al estado del arte.

Descripción: Previamente demostramos que el ADN bacteriano extracelular activa a los neutrófilos a través de un mecanismo diferente al canónico CpG-dependiente. El ADN extracelular es un componente central en la formación y estructura de los biofilms bacterianos, comunidades responsables de más del 60% de las infecciones ocasionadas por estos microorganismos. La presente tesis tuvo como objetivos centrales determinar el impacto del ADN de la matriz de los biofilms en la activación de los neutrófilos humanos y la identificaron del receptor involucrado en el reconocimiento de ADN. Los estudios realizados indicaron que la degradación con DNAsa I del ADN de la matriz extracelular de los biofilms de P. aeruginosa redujo marcadamente su capacidad de inducir la activación de los neutrófilos, determinada en función de su habilidad para producir citoquinas proinflamatorias, incrementar marcadores de activación fisiológicamente relevantes, de mediar la fagocitosis y de liberar trampas extracelulares de los neutrófilos (NET). La aplicación de técnicas de MALDI-TOF nos permitió identificar, en el neutrófilo, 16 proteínas con capacidad de unir ADN bacteriano. A pesar de que ninguna de ellas resultó ser el receptor de la superficie celular para ADN, es posible que dos de las proteínas encontradas constituyan sensores intracelulares de ADN, cuya relevancia queda por ser explorada. Los hallazgos realizados en la presente Tesis confirman la existencia de una proteína de la superficie del neutrófilo capaz de mediar el reconocimiento de ADN y la activación celular por esta molécula. Además, indican que el ADN de la matriz extracelular representa un componente proinflamatorio relevante de los biofilms de P. aeruginosa. Los mismos permiten especular que el reconocimiento del ADN de la matriz de biofilms podría representar un mecanismo seleccionado evolutivamente para permitir al huésped incrementar su capacidad de responder a este tipo de infecciones bacterianas persistentes

Descripción: El Reconocimiento de Patrones es el estudio de cómo las máquinas pueden observar el ambiente o entorno, aprender a distinguir patrones de interés a partir de la experiencia, y tomar decisiones razonables con respecto a las categorías a las que pertenecen dichos patrones. El mejor reconocedor de patrones conocido hasta ahora es el ser humano, no sabiéndose a ciencia cierta cuál es el proceso mediante el cual los humanos realizamos esta tarea. El Reconocimiento Optico de Caracteres (OCR) es uno de los tópicos más antiguos dentro del Reconocimiento de Patrones y una de las areas de investigación más importante y activa, que en la actualidad presenta desafío: la precisión en el reconocimiento asociada tanto a caracteres impresos en una imagen degradada o a caracteres manuscritos es aún insuficiente, existiendo errores en el reconocimiento. El Reconocimiento de Dígitos Manuscritos es un tema destacado dentro de OCR, por las aplicaciones relacionadas, como el procesamiento automático de cheques bancarios, la clasificación de correo en base a la lectura de códigos postales, la lectura automática de formularios y documentos con escritura manuscrita, dispositivos de lectura para ciegos, reconocimiento de escritura en computadoras manuales PDA, y porque constituye un problema modelo que incluye desafíos comunes con otros tópicos. Por esta razón, es tomado como referencia para la aplicación y testeo de nuevas teorías y algoritmos del area de Reconocimiento de Patrones en general. En este trabajo de tesis de doctorado se propone una nueva estrategia Bayesiana de combinación de clasificadores que permite detectar ambigüedades y resolverlas, lo que constituye la novedad y principal contribución de la tesis. Se propone, a su vez, un sistema completo de reconocimiento de patrones en dos niveles, con una arquitectura modular y paralelizable, que utiliza distintas características extraídas de los patrones de entrada según el problema a resolver junto con la estrategia Bayesiana ya mencionada que decide la respuesta del sistema. Como elementos componentes del reconocedor, en una primera capa o nivel, se utilizan clasificadores relativamente sencillos y bien posicionados para el problema a tratar. Los elementos pertenecientes a la segunda capa se utilizan para estimar cuán confiable es la respuesta de cada clasificador individual frente a un patrón de entrada, permitiendo decidir cuándo un patrón debe ser considerado bien definido o ambiguo, y en este ultimo caso con qué clases podrá confundirse. Adicionalmente, se proponen y aplican estrategias de selección de clasificadores en la etapa de construcción del reconocedor. El sistema reconocedor de patrones presentado fue aplicado al problema del reconocimiento de dígitos manuscritos off-line, como forma de testear su desempeño. En función de esto, se proponen descriptores basados en características de multirresolución a través del uso de la Transformada Wavelet CDF 9/7 y de Análisis de Componentes Principales, que permiten disminuir considerablemente el tamaño del patrón de entrada y aumentar la calidad de la representación. La experimentación se realizó sobre las bases de datos CENPARMI y MNIST, ampliamente referenciadas para este problema. Se obtuvieron altos porcentajes en el reconocimiento que alcanzaron un 97,40 y 99,32 % para las bases CENPARMI y MNIST respectivamente. Dichos valores son comparables a los resultados publicados considerados representativos.

Descripción: El reconocimento antígeno-anticuerpo se basa en identificación de estructuras químicas de agentes foráneos como no-propias. El ADN suele ser escasamente inmunogénico dada su similitud química y estructural entre los distintos organismos. Sin embargo, los anticuerpos anti-ADN son un razgo característico de enfermedades autoinmunes como el Lupus Eritematoso Sistémico. El anticuerpo monoclonal anti-ADN ED-10 fue aislado en nuestro laboratorio a partir de la inmunización de ratones normales, con un complejo formado por el domino carboxilo terminal del factor de transcripción E2 (E2c) del virus de papiloma humano cepa 16 (HPV16) unido a su oligonucleótido blanco. En este trabajo de tesis se describe el mecanismo de interacción de ED-10 con el ADN, el primer complejo entre un anticuerpo monoclonal y el ADN que lo generó, a través de una caracterización estructural, termodinámica y cinética. Se determinó que el anticuerpo monoclonal ED-10 reconoce solamente una de las hebras del ADN doble cadena utilizado en el complejo inmunogénico. Por otra parte, se cristalizó el fragmento Fab de este anticuerpo formando un complejo con ADN inmunógeno, siendo el primer complejo anticuerpo:ADN genuino descripto al detalle atómico a la fecha. Se realizó la caracterización termodinámica y cinética de la interacción de ED-10 con el ADN inmunógeno y con oligonucleótidos de poli-Timidina. Los primeros experimentos de calorimetría demostraron que la interacción ED-10-ADN esta entálpicamente dirigida, tiene una componente entrópica desfavorable y un cambio de capacidad calorífica negativo. Los estudios cinéticos demostraron que, la asociación entre ED-10 y el ADN presenta solo una fase cinética, con una constante de asociación aproximándose al límite de velocidad descripta para interacciones anticuerpo:antígeno. La presencia de una constante de disociación cinética extremadamente lenta resultó determinante en la formación de este complejo tan estable. Por último, se demostró que ED-10 posee actividad nucleasa, aparentemete no específica, degradando ADN doble cadena tanto en forma lineal como circular.

Descripción: Fil: Erhardt, Germán Juan. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: En esta Tesis se presentan métodos ópticos aplicados a procesos de reconocimiento y encriptación de imágenes, para ser implementados en un dispositivo robusto que opera a alta velocidad. Todas las técnicas han sido especialmente diseñadas para operar en una arquitectura de correlador por transformada conjunta donde la información a procesar es introducida en una pantalla de TV de cristal líquido de alta resolución y programable, operando como modulador puro de fase. En primer lugar se introduce una técnica ideada para aumentar el poder de discriminacion en un proceso de reconocimiento, basada en el método de filtrado puro de fase. Esta técnica es extendida a un proceso de reconocimiento invariante a distorsiones, ideado a partir de un método de filtrado compuesto puro de fase. En esta etapa, con el fin de obtener una arquitectura veloz y compacta, se empleó como medio de registro un cristal fotorrefractivo. Las no linealidades introducidas en el plano de entrada del sistema emulan los filtros complejos usados generalmente en correladores tipo Vander Lugt. Se presenta además un método de encriptación óptica, basado en el empleo de distribuciones de fase aleatoria, donde tanto la imagen encriptada como la llave de desencriptación son obtenidas a partir de la técnica de interferometría por corrimiento de fase. En este proceso, se empleó como medio de registro una cámara CCD con el fin de obtener un sistema que permita transmitir la información digitalmente y a alta velocidad.

Descripción: El Macá Tobiano (Podiceps gallardoi) es un ave endémica de la provincia de Santa Cruz, Patagonia, Argentina. La especie está categorizada “En Peligro Crítico” a nivel mundial, como consecuencia de una reducción poblacional del 80% en 25 años y un aumento en las amenazas. Hoy se conocen menos de 800 individuos. Grandes esfuerzos se están realizando para conservarla. Una de las estrategias potenciales de conservación a largo plazo es la re-cría de individuos a partir de huevos “ecológicamente perdidos”. En el 97,4% de los casos los macaes interrumpen la incubación del segundo huevo luego de la eclosión del primero y crían sólo un pichón por temporada. En el mundo, la cría en cautiverio crece en importancia como estrategia de conservación de poblaciones silvestres en peligro de extinción. Las experiencias de cría ex situ en macaes son anecdóticas y poco sistemáticas, por lo que la replicación resulta difícil. Para lograr un protocolo efectivo de re-cría en cautiverio es necesario ajustar los parámetros de incubación y crianza para cada especie. El objetivo general del proyecto fue generar conocimiento teórico y práctico para el desarrollo de un programa de re-cría que permita incrementar el número de juveniles que llegan al momento de la migración, mediante la recuperación de huevos ecológicamente perdidos. Este objetivo estuvo enmarcado en el plan de manejo y acciones de conservación de la especie desarrolladas a lo largo de los últimos diez años. El trabajo está dividido en tres partes: La primera describe la biología reproductiva de la especie a partir de la recopilación de información publicada desde su descubrimiento. La segunda comprende el manejo realizado desde la colecta de huevos en las lagunas hasta la eclosión y la tercera explica el tratamiento realizado en los pichones desde su nacimiento hasta el tiempo máximo de supervivencia. Durante 4 temporadas reproductivas colecté huevos de Macá Tobiano y de Macá Plateado (Podiceps occipitalis), especie cercana filogenéticamente y con hábitos de vida similares, en las lagunas de mesetas altura del oeste de Santa Cruz. Incubé los huevos de forma artificial hasta la eclosión. Para evaluar el efecto sobre la eclosión realicé comparaciones sobre la etapa de incubación a momento de colecta, la duración del trasporte, el protocolo de incubación (temperatura y humedad) y la pérdida de peso diaria de los huevos. Para evaluar efectos en la supervivencia de los pichones probé distintos protocolos de incubación (temperatura y humedad), la pérdida de peso diaria de los huevos durante la incubación, alternativas de alimentos y frecuencia de atención de los pichones (alimentación y paso por el agua). La tasa de eclosión lograda fue del 73%. La supervivencia máxima alcanzada para pichones fue de 144 horas para el Macá Tobiano y de 67 días para el Macá Plateado (edad de liberación). A lo largo del proyecto he adquirido una gran experiencia e información sobre los métodos y condiciones necesarias en las distintas etapas del proceso. Es necesario continuar con los estudios de las variables involucradas para obtener resultados concluyentes; sin embargo, la crianza y liberación de un individuo de Macá Plateado sugiere que el proceso es viable y que, mediante la realización de nuevas pruebas, podría adecuarse a las necesidades particulares del Macá Tobiano.

Descripción: En este trabajo se ha estudiado la fabricación de cables electricos con recubrimiento plástico vinilico por extrusión. Se ha esquematizado la fabricación y propiedades de las resinas de cloruro de polivinilo que se han tomado como ejemplo. Se describen las distintas partes de un extruidor y se las estudia funcionalmente. Se describe el proceso de extrusión en el interior de la máquina y se señalan las principales fuentes de defectos en la fabricación de cables y la manera de evitarlos de acuerdo a lo que la experiencia nos ha indicado. Por último se presenta una reciente teoria que explica el flujo de extrusión de materiales newtonianos y nos vincula las distintas variables del material con las del extruidor permitiendonos el cálculo de las dimensiones de las distintas partes de este y de la potencia necesaria para efectuar un determinado trabajo. En la parte práctica aparte de la manera de evitar los defectos más comunes como ya se ha indicado se ha comprobado que resultados se obtienen de extender la teoria anterior al caso de materiales no newtonianos como es el de los plasticos. Habiendose obtenido resultados altamente satisfactorios que autorizan en principio tal extensión si bien son necesarios nuevos trabajos al respecto.

Descripción: Las reacciones adversas asociadas a las transfusiones sanguíneas se atribuyen en parte a los glóbulos blancos. Esas reacciones, de tipo inmunológico o de tipo infeccioso causadas por agentes Ieucotrópicos, pueden limitarse reduciendo el número de glóbulos blancos en los componentes sanguíneos lo que se denomina Ieucorreducción (LR) o Ieucodepleción (LD). La leucorreducción de hemocomponentes es efectiva para disminuir las siguientes complicaciones transfusionales mediadas por glóbulos blancos alogeneicos: reacciones transfusionales febriles no hemolíticas (RTFNH), aloinmunización HLA y transmisión de citomegalovirus. Cuando se efectúa antes de las 72 hs de la extracción de sangre se denomina Ieucorreducción pre-almacenamiento. Esta modalidad tiene la ventaja de evitar la acumulación de citoquinas proinflamatorias sintetizadas por los glóbulos blancos durante el almacenamiento y de permitir el control de calidad de los componentes Ieucorreducidos. Este estudio se realizó en el Servicio de Hemoterapia del Hospital General de Niños Dr. Ricardo Gutiérrez de la Ciudad de Buenos Aires para evaluar la calidad de los concentrados de glóbulos rojos Ieucorreducidos en cuanto a la cantidad de leucocitos residuales. En nuestro país la Resolución 58/2005 del Ministerio de Salud y Ambiente, “Normas técnicas y administrativas de la Especialidad Hemoterapia” que complementa a la Ley N° 22990 fija un nivel máximo de 5 x 10ˆ6 leucocitos residuales en concentrados de glóbulos rojos leucorreducidos y establece la necesidad de validar el procedimiento de Ieucorreducción. Dado que los contadores automatizados no tienen la sensibilidad necesaria para el recuento de glóbulos blancos en componentes sanguíneos leucorreducidos se puso a punto una técnica de recuento de leucocitos residuales mediante citometría de flujo utilizando un reactivo cuyo componente principal, el ioduro de propidio, es un colorante específico de ácidos nucleicos. El reactivo además contiene RNasa para la digestión de ARN celular y un número definido de microesferas fluorescentes que se utilizan como referencia para calcular el recuento absoluto de glóbulos blancos. Para la validación del procedimiento de leucorreducción de concentrados de glóbulos rojos se adoptó el plan de muestreo y el análisis estadístico propuesto por la “International Society of Blood Transfusion”. Se eligieron al azar 20 unidades de concentrados de glóbulos rojos obtenidos con equipos de recolección de sangre con filtros integrados para Ieucorreducir glóbulos rojos. La filtración se realizó a temperatura ambiente entre las 2-3 horas de la extracción de sangre. La cantidad de glóbulos blancos prefiltración se determinó con contador automatizado y la cantidad de glóbulos blancos residuales se determinó mediante la técnica de recuento por citometría de flujo. La media y la desviación estándar de leucocitos residuales en los concentrados de glóbulos rojos leucorreducidos fue de 0,36 x 10 5 +/- 0,29 x 10 6 leucocitos por unidad. Los datos se analizaron según un método paramétrico al comprobarse que los logm de los recuentos de glóbulos blancos residuales se comportaron según una distribución normal. Como la media de los log10 de los datos fue menor que el máximo aceptable se pudo afirmar con un nivel de confianza del 95% que al menos el 95% de los concentrados de glóbulos rojos leucorreducidos cumple con eI requisito de tener una cantidad de leucocitos inferior a 5x10ˆ6. Esto significa que el procedimiento de Ieucorreducción aplicado en el Servicio de Hemoterapia está validado, es decir que garantiza la obtención de concentrados de glóbulos rojos consistentes con los niveles de leucocitos residuales requeridos por la legislación argentina. Lo cual es de singular beneficio a la hora de transfundir a pacientes pediátricos y neonatales considerados de riesgo.

Descripción: El método químico-alcalino a presión, de recuperación de Snde recortes de hojalata, se basa en la acción disolvente del Sn desoluciones de HONa y NO3Na a presión. Tiene grandes ventajas sobre los métodos clásicos, como el decloro, el electroquímico, o el de disolución alcalina a presiónatmosférica, pués el proceso se acelera mucho, se pueden trabajargrandes cantidades de recortes con poco consumo de mano de obra,y el hierro que se obtiene es de gran pureza. La ecuación estequiométrica de la reacción química del procesoes la siguiente: 2 sn + 3 HONa + NO3Na + 6 H20 <---> 2 [Sn(OH)6]Na2+ NH3 La innovación importante de éste método es el trabajo en solucionesalcalinas utilizando presión. Al trabajar a presiones superioresa la atmosférica se eleva la temperatura de ebullición dellíquido. Al aumentar la temperatura se aumenta mucho la velocidadde reacción, en tal forma que mientras el desestañado por disoluciónalcalina a la presión atmosférica tarda de 4 a 5 horas, trabajandoa 5 atmósferas dura de 20 a 30 minutos. Para poder llevar a cabo el método en la práctica se han hechovarias series de ensayos en un autoclave de laboratorio de 10 litrosde capacidad. Las condiciones de trabajo que se tuvo que fijar son: concentracionesde reactivos, tiempo de desestañado, presión, cantidadde hojalata a desestañar por solución, y porcentaje de Sn a disolverpor solución. La concentración de NO3Na se fijó en 8%, y la de HONa en 11%. Con respecto a la concentración de éste último reactivo hay que teneren cuenta que lo que influye en el desestañado es la concentraciónde HONa "libre" (y no el HONa que esta combinado con el Sn paraformar estannato), se comprobó que ésta concentración para obtenerbuen desestañado no debe ser inferior a 4%. Otro hecho interesante es que las curvas que representan lavariación de concentración de Sn en las soluciones de autoclave enfunción de la cantidad de hojalata tratada, tienen una inflexiónal alcanzar la solución una concentración de Sn de 6%, observándoseque disminuye la cantidad de Sn en el autoclave y aumenta proporcionalmenteen los líquidos de lavaje. En general los rendimientos de desestañado oscilan entre 1,1y 1,2 Kg. de Sn por 100 kg. de recortes tratados. Pero hay que teneren cuenta que para obtener buenos rendimientos no conviene sobrepasarlos 50 kg. de recortes por solución. Los análisis de hojalatas desestañadas con este método acusanun residuo no mayor de 0,01% de Sn. Durante el proceso se hizo un control analítico cuidadoso. Enlas lejías se determinó HONa (total y libre), NO3Na y Sn. En losrecortes se determinó Sn para lo cual se aplicó un nuevo método queconsiste en la disolución del Sn de los recortes en un pequeño autoclavede laboratorio mediante una solución de HONa y NO3Na. Ladeterminación se hace en base a la pérdida de peso de la hojalata. Se analizó además el Sn metálico obtenido, el óxido de estaño, lasmaterias primas, etc. El proceso en escala industrial es a grandes rasgos el siguiente:se cargan los recortes en canastas de hierro que se sumergenen la solución desestañadora en autoclaves de hierro. Se calientala solución a 5 atmósferas durante 20 minutos. Se sacan las canastascon los recortes desestañados y se lavan por enjuague en piletascon agua. La operación se repite hasta que el tenor de la solucióndesestañadora en Sn es de alrededor de 7%. Entonces se descargala solución, se pasa a unos tanques de hierro en donde se neutralizael HONa con CO2 o con SO4H2, para precipitar el Sn en formade SnO2, este se lava, seca y funde con carbón para obtener estañometálico de 99,8% a 99,9% de Sn. Para la instalación de la planta se calculó una producción mensualde 240 toneladas de recortes trabajando un turno diario de 8horas. Para solucionar el problema de las pérdidas de calor que ocurríanal terminar las operaciones y abrirse los autoclaves, se ideóun sistema de autoclaves que trabajaba alternadamente, con un volúmen desolución de 7.500 litros. El calentamiento de la solución desestañadora se hacía por transmisión de calor del vapor producido por una caldera de 10 atmósferasde presión, al líquido mediante un intercambiador de calor detubos verticales de 20 m2 de superficie de calentamiento.

Descripción: El estudio de los defectos puntuales es muy importante porque ellos influyen en muchas propiedades físicas de los materiales. Una manera de investigarlos es estudiando la recuperación de la resistividad eléctrica después de haberlos introducido en el material por deformación plástica. Este tipo de estudio, a la par que el de daño por radiación, es imprescindible si se desean conocer las características cinéticas de los defectos producidos por ambos procesos. En el caso de los metales B.C.C. se presentan dos dificultades serias que son: 1) la pérdida de ductilidad al bajar la temperatura, que hace que se llegue a la ruptura frágil antes de lograr la deformación necesaria para tener efectos medibles y 2) la extrema sensibilidad a las impurezas intersticiales. El presente trabajo es el resultado de un esfuerzo por superar estas dificultades y efectuar nuevos aportes al tema de defectos puntuales, habiéndose logrado por primera vez datos de recuperación en B.C.C. después de alto grado de deformación plástica a temperatura de helio líquido. El desarrollo y puesta en funcionamiento de un sistema de deformación plástica a 4,2 K ha permitido el estudio de los defectos puntuales creados por deformación en alambres policristalinos de tantalio. Las probetas fueron recocidas y purificadas en vacíos del orden de 10 (-9) a 10 (-10) Torr. hasta tener un cociente de resistividad residual r = ρ273/ρ4 variando entre 600 y 2.300. Algunas probetas también fueron dopadas con oxígeno (=3.000 ppm; r = 10). Todas fueron luego deformadas plásticamente a 4 K y posteriormente medida la recuperación de la resistividad eléctrica residual inducida por la deformación. La deformación de tipo laminación, fue medida por el porcentaje de estiramiento longitudinal Aℓ/ℓo y estuvo en el rango de 4% a 30%. Mediante recocidos isócronos se investigó el espectro de recuperación entre 4 K y 540 K, encontrándose una etapa a 275 K con características de etapa III, en la cual se recupera un 25% del incremento de resistívidad inicial. Otro 25% se recupera en forma contínua desde 4°K , quedando al final un 50% sin recuperar debido supuestamente a las dislocaciones. La etapa encontrada corresponde a la observada por Faber (1973) luego de irradiar con electrones de 3 MeV,con la diferencia de que aparece ya desplazada hacia las bajas temperaturas, no siendo posible observar corrimiento con la deformación para el rango de deformaciones investigado. En las probetas dopadas, en cambio, se observa que la etapa se desplaza hacia las bajas temperaturas y aparece una subetapa anterior a la etapa principal. En este caso el corrimiento tampoco depende de la deformación. Mediante recocidos isotórmicos se estudió la cinética del proceso de recuperación observado. El método del cambio de pendiente arrojó un valor para la energía de activación de 0,71 eV ± 0,03 eV y el número de saltos estimado fue del orden de 10(4). Se concluye entonces oue la etapa observada a 275 K se relaciona con la migración libre de largo alcance de un defecto intrínseco generado tanto por la deformación plástica como por la irradiación. En cuanto a la identificación del defecto, es sabido que las mediciones de resistividad después de la deformación o la irradiación, por sí solas, no permiten decidir cuál es el tipo de defecto responsable de la etapa y es necesario apelar a otras fuentes de información. En principio es esperable observar dos etapas correspondientes a migración libre: una debida a la configuración estable del autointersticial y otra debida a la monovacancia. Evidencias sobre movilidad de vacancias en tantalio provienen de recientes experimentos de aniquilación de positrones (que dan datos sobre energías de formación de monovacancias) y de datos de autodifusión (de los cuales se obtiene la suma de las energías de migración y formación). Vaier et al.(1977) concluyen cue sus experimentos de aniquilación de positrones no son compatibles con la migración de vacancias en la "etapa III", ya que esto debería ocurrir a temperaturas más altas (~ 700K). Sobre la base de las evidencias disponibles, se atribuye la etapa observada a la migración del autointersticial con una entalpía de migración HIM=(0,71 ± 0,03) eV. Finalmente, en la suposición de que después de la deformación quedan dos tipos de sumideros: unos saturables constituidos por las vacancias (inmóviles) y otros no saturables,como son las líneas de dislocaciones e impurezas, se hace un análisis cuantitativo de la cinética mediante un tratamiento simple desde el punto dc vista de la teoría de velocidad de reacción. Aunque el problema así planteado, no admite solución analítica en forma cerrada, se desarrolló un método de ajuste de datos nue resultó satisfactorio: dado que la dispersión de los ajustes estuvo entre el 1% y el 11% y los valores de los parámetros resultantes en dichos ajustes en relación con los demás datos de los experimentos aparecen autoconsistentes.

Descripción: En los tiempos que corren, la sociedad se ha tornado ampliamentedependiente de la energía, la cual es obtenida en gran medida a partir de laquema de combustibles fósiles. Desafortunadamente, dicha práctica contribuyede manera significativa al carnbio clirnático por lo que, en un futuro cercano,resulta inminente la transición total hacia el uso de energías renovables. Paraello, es preciso tener la capacidad tecnológica tanto de convertir como dealmacenar energías renovables intermitentes a escala masiva. Dado que hoy en día las baterías de litio - ion constituyen la tecnologíade cabecera para el almacenamiento de energía destinada principalmente aelectrónica portátil pero también a autos híbridos y eléctricos, el litio constituyeun recurso estratégico en el camino hacia un mundo más ecológico y sostenible. Por tanto, en un escenario en el que las haterías de litio ion prometen tenerun rol fundamental en el almacenamiento de energías renovables, la extracciónde litio desde fuentes natmales debe ser sostenible. Debido al alto contenido de litio presente en la salmuera de varios salaressituados en el noroeste argentino y motivados por la necesidad de contar con unmótodo alternativo de recuperación de litio más rápido, eficiente y ecológico quelos utilizados actualmente, hemos desarrollado un método electroquímico deextracción de LiCl a partir de soluciones acuosas y salmueras naturales. Estemétodo está inspirado en el principio de funcionamiento de las baterías de litio -ion, dado que es llevado a cabo en un reactor electroquímico equipado con unelectrodo de LiMn2O4 (LMO) reversible a iones Li- y otro de polipirrol, capaz deintercambiar reversiblernente iones Cl- con la solución. En la presente Tesis, se presentará el método desarrollado, delineando lasprincipales preguntas y desafíos. Se abordarán aspectos relacionados a laenergética del mótodo de recuperación de LiCl y al intercambio de iones litioentre electrodos de LMO y soluciones acuosas incluyendo salmuera natural del salar Olaroz (Jujuy, Argentina) que fueron estudiados haciendo uso de múltiplestécnicas electroquímicas tales como voltametría cíclica (CV),cronoamperometría (CA), técnica ele titulación galvanostática intermitente (GITT) y cronopotenciometría (CP), entre otras. El comportamiento Nernstianode los electrodos de LMO en contacto con soluciones acuosas conteniendo iones Li+, la descripción termodinámica de las curvas galvanostáticas de carga ydescarga de estos electrodos, la determinación de la actividad de LiCl ensalmuera natural y la extracción espontánea de LiCl desde salmuera, sonalgunos de estos aspectos. Posteriormente, se incursionará en la discusión sobre los cambiossuperficiales y estructurales que atraviesa un electrodo de LMO en contacto condistintos electrolitos acuosos conteniendo iones litio y sodio mientras ocurre laintercalación de iones litio dentro de su estructura cristalina. Estos cambiosfueron estudiados mediante espectroscopías fotoelectrónicas de rayos X y UV (XPS y UPS) y difracción de rayos X, respectivamente. Tambión se discutirán aspectos cinóticos de la intercalación de iones litioen la interfaz de electrodos ele LMO en contacto con soluciones acuosas ysalmuera natural, en base a los resultados obtenidos utilizando espectroscopía deimpedancia electroquímica (EIS). Finalmente, se presentarán resultados acercade la estabilidad de electrodos de LMO en soluciones acuosas en los extremos dela ventana de potencial utilizada, evaluando la evolución de 0 2 en el extremoanódico y la disolución del óxido que tiene lugar, principalmente, en el extremocatódico. Los estudios presentados en esta Tesis resultan de gran importancia,tanto por el sustancial aporte al estado del arte del comportamiento deelectrodos de LMO en soluciones acuosas y salmuera natural, como por lapropuesta de utilizarlos para la recuperación de litio desde fuentes naturales,contribuyendo así al desarrollo de una tecnología alternativa limpia y eficientede recuperación de litio a partir de salmuera en Argentina.

Descripción: En el presente trabajo se reseñan los resultados obtenidos en el estudio de la recuperación del cobalto y del cinc contenidos en barros de desecho provenientes del proceso de purificación de soluciones de electrolitos destinadas a la electrodeposición del cinc, y se proponen las bases de un anteproyecto para efectuar esta recuperación. En nuestro país existen fábricas que producen cinc por vía electrolítica; una de ellas está situada en la localidad de Zárate en la provincia de Buenos Aires, y la otra en la provincia de Córdoba, en la localidad de Río Tercero. Ambas fábricas emplean prácticamente el mismo procedimiento y eliminan el cobalto de la solución de electrolito destinada a electrólisis por precipitación con etilxantogenato de potasio y carbón activado, resultando un producto de desecho que denominamos barro cobaltífero. Para la finalidad de este trabajo era muy importante conocer exactamente la composición del barro cobaltífero que fué gentilmente cedido por una de las fábricas para su estudio. La simple composición analítica no era sufuciente dato, dado que no permite determinar en que estado se encuentran los elementos. Como consecuencia se ha estudiado analíticamente el problema, llegando a las siguientes conclusiones: I) El análisis cuantitativo realizado sobre una muestra representativa dió el siguiente resultado: a) Pérdida de peso a 105°C....40,80 g % b) Residuo insoluble en ácidos....1,59 g % c) Azufre total....10,70 g % d) Cobre....0,24 g % e) Manganeso....0,25 g % f) Hierro....0,27 g % g) Cinc....5,62 g % h) Cobalto....0,84 g % i) Calcio....4,54 g % j) Magnesio....0,07 g % k) Potasio....0,58 g % l) Carbono....12,45 g % m) Pérdida por calcinación a 1100°C....72,00 g % n) Azufre extraíble con HCl H2O....7,88 g % II)Por las determinaciones realizadas y por las propiedades de lassustancias se deduce que: 1)Los únicos aniones presentes son sulfato y etilxantogenato. 2)Los cationes identificados son: cinc, cobalto, cobre, calcio,magnesio, manganeso, potasio, hierro. La marcha sistemática en técnicasemimicro ha dado resultado negativo para los restantes cationescomunes de la clasificación clásica. 3)Todo el cobalto contenido en el barro cobaltífero se encuentra alestado de etilxantogenato cobáltico extraíble cuantitativamente con tricloroetileno. 4)Los ensayos de lixiviación ácida permiten establecer que loscationes cinc, calcio, magnesio, manganeso, potasio, hierro, son extraíbles cuantitativamente con solución de ácido clorhídrico 1 en 10 a 100°C. En esta lixiviación no se extraen los cationescobáltico y cuproso. 5)La lixiviación con ácido sulfúrico 1,5 M en caliente a 80°C extraecuantitativamente los cationes cinc, magnesio, manganeso, potasio, hierro y además el cuproso. No se extrae el ión cobáltico. 6)De acuerdo con las condiciones de pH de precipitación y por suspropiedades es muy poco probable que los cationes cinc, calcio,magnesio, manganeso e hierro se encuentren al estado de etilxantogenatos. 7)La determinación experimental del azufre en la solución resultante de la lixiviación con solución de ácido clorhídrico 1 en 10 a 100°C concuerdasatisfactoriamente con el azufre calculado paralos cationes cinc, calcio, magnesio, manganeso, hierro al estado desulfatos. III) De acuerdo con I) a II) se propone la siguiente composición parael barro cobaltífero, se indican además los valores extremoshallados en las distitnas partidas analizadas: (ver tabla de valores en la tesis). Los ensayos realizados en escala de laboratorio han permitido establecer que es posible recuperar en formaprácticamente cuantitativa el cinc contenido en el barro cobaltíferopor lixiviación ácida a 70°C con solución de ácido sulfúrico de 50 G/lsatisfaciendo las siguientes limitaciones: a)Obtener una solución cuyo contenido en ión cinc no sea inferiora 30 g/l, limitación impuesta por el proceso electrolítico para obtención de este metal. b)El contenido en ión cobalto de la solución no ser superior a 1 mg/ly el de ión calcio el mínimo posible. El ión cobalto presente encantidades mayores y la acumulación del ión calcio tienen efectosperjudiciales en la electrodeposición del cinc. La solución resultante de la lixiviaciónácida del barro cobaltífero se manda a la planta de cinc electrolíticoen la que se somete a los proeesos habituales de purificación y posterior electrólisis. Una vez obtenido el barro cobaltífero agotadoen cinc, se ha encontrado que es posible recuperar satisfactoriamentey en forma cuantitativa el cobalto contenido, al estado de cobaltoy/o óxido de cobalto mediante: a)Secado del barro cobaltífero agotado en cinc b)Extracción del etilxantogenato cobáltico del barro cobaltíferoseco con tricloroetileno c)Calcinación y tostación del etilxantogenato cobáltico d)Reducción del óxido de cobalto y/o disolución sulfúrica y electrólisis. Losensayos realizados han permitido llegara la conclusión de que, desde el punto de vista práctico y de sus aplincacionesindustriales, es más conveniente realizar la extracción deletilxantogenato cobáltico con tricloroetileno para, con posterior calcinacióny tostación llegar a los óxidos de cobalto, que proceder auna destrucción del etilxantogenato cobáltico con reactivos químicosen el barro agotado en cinc. Se propone en síntesis, sobre la base de lasconclusiones que anteceden un anteproyecto de una instalación paraproducir 100 Kg/mes de óxido de cobalto o bien 75 Kg/mes de cobaltometálico, y recuperar 500 Kg/mes de cinc. Los diagramas de maquinarias e instalaciones, el de operaciones y procesosunitarios (con exclusión de movimiento de materiales) y el balance total de materiales se brindan a continuación; se incluye además uncuadro demostrativo del origen de la materia prima.

Descripción: Antecedentes que sugirieron la idea del presente estudio: 1°) Se poseían referencias de estudios analíticos efectuados sobre las cenizas de referencias que indicaban la existencia de elevados porcentajes de compuestos potásicos. 2°) La información estadística demostraba el gran desarrollo de la industria del tung en el país, que en los últimos años sobrepasaba las cien mil toneladas de fruto cosechado é industrializado. Esto permitió calcular enormes cantidades de residuos, dado que las 4/5 partes del peso del fruto quedan como tal, luego de la extracción del aceite. 3°) Las estadísticas de producción y consumo de compuestos potásicos en el país, informaban que practicamente todo el potasio que se necesitaba debía ser importado. Lo que antecede, hizo pensar en la conveniencia de estudiar la posibilidad de utilizar las cenizas de tales residuos para extraer compuestos potásicos. ESTUDIO EFECTUADO: Se realizó de acuerdo al siguiente plan: 1°) Estudio analítico de las cenizas a utilizarse en las experiencias de extracción. 2°) Estudio de la operación de recuperación propiamente dicha. 3°) Estudio analítico del producto extraído y purificación del mismo. 4°) Descripción de las instalaciones mínimas para una planta de extracción. El estudio analítico de las cenizas confirmó la presencia de elevado porcentaje de potasio que expresado como K2O variaba entre 23 al 32% según el material y su procedencia. El estudio de la recuperación, se efectuó sometiendo las cenizas a sucesivos tratamientos de lixiviación con agua, empleando para tal efecto baterías de bolsas filtrantes especiales. Mediante adecuado control analítico se seguía la marcha del proceso de extracción, el cual se continuaba hasta que las cenizas no cedían más sales potásicas. Se ensayó también un método espectroscópico de control analítico semi cuantitativo del potasio, para un control rápido de la riqueza de las soluciones durante el proceso de extracción. Estas experiencias, permitieron comprobar que por kilogramo de ceniza seca, se podían extraer de 300 a 400 gramos de producto soluble, según el tipo de ceniza tratada. Los análisis demostraron que los materiales extraidos estaban constituidos fundamentalmente por CO3(2-), SO4(2-) y Cl(-), de K(-) y Na(-). La proporción de este último era muy pequeña. Los ensayos de purificación mediante cristalizaciones fraccionadas, permitieron la separación de parte del sulfato, al estado de SO4K2 principalmente. El producto purificado que quedó, tenía la composición de una "ceniza perlada americana" de primera calidad. CONCLUSIONES: Los estudios anteriores permitieron extraer las siguientes conclusiones: 1°) Que las cenizas de los residuos de la industria del aceite de tung podían servir para extraer compuestos potásicos. 2°) Que estos podían ser purificados. 3°) Que más de 600 ton. de elemento potasio expresado como K2O podrían recuperarse anualmente de tales residuos (se tomo como base para este cálculo la producción de la cosecha del año 1955). 4°)

Descripción: La irradiación con particulas energéticas es una de las técnicas mas utilizadas paraintroducir. en forma controlada, defectos, en las redes cristalinas metalicas. La presencia de defectos altera sensiblemente las propiedades fisicas de los materiales. Si se eligen obserables físicos lo suficientemente sensibles a estas estructuras de defectos, sepuede obtener información acerca del tipo, de la configuración espacial, de la concentración, yde las cineticas de reacción entre los mismos. La aplicación de tratamientos térmicos postirradiación permite proprocionar, en formagradual, las energias de activacion necesarias para lograr la recombinación de los defectos y laconsecuente recuperación de la propiedad fisica elegida. De este modo se obtienen las llamadas “Etapas de Recuperación" del observable fisico en cuestión, cuyos rasgos generales, si bienson comunes a todos los metales, identifican en forma univoca a cada uno de ellos. El tema del presente Trabajo de Tesis es: “El Recuperado Térmico (T > 450 K) delos Aglomerados de Defectos producidos por Irradiación Neutrónica a Bajas Dosis y a 77 Ken Cu de alta pureza, a través de la Tensión Critica Resuelta de Corte, medida a 77 K". El recuperado térmico mencionado corresponde a la ultima etapa de recuperación del Cu, la Etapa V, la cual ha sido muy poco estudiada. La misma se asocia generalmente a ladisociación de los aglomerados de vacancias con la aniquilación sistemática de losaglomerados de intersticiales por vacancias térmicas. Pero los detalles de este proceso no estan bien establecidos y su esclarecimiento, desdeun punto de vista basico, es de fundamental importancia para la comprensión y predicción delos fenómenos asociados a las inestabilidades estructurales que ocurren en los materialesexpuestos a severos entornos de radiación. En este trabajo, los aglomerados de defectos se introducen en las probetas de tracciónmonocristalinas de cobre, mediante la irradiación neutronica en el criostato instalado dentro delreactor RA-1 de la CNEA, a 77 K y dosis inferiores a la de saturación (4.5 x 10^6 n/cm^2). Estaelección de las condiciones experimentales asegura la no superposición de las cascadas dedesplazamientos atómicos y la estabilidad de los defectos creados a la deformación plastica (ausencia de canalización de dislocaciones). La Tensión Critica Resuelta de Corte medida a 77 K. TCRC-k, es un observablefísico ideal para el estudio de la Etapa V Los aglomerados de defectos actuan comoobstáculos al movimiento de las dislocaciones dando lugar a un enorme incremento de estapropiedad, conocido como fenomeno de endurecimiento El 75 % del daño introducidodurante la irradiaicón es recuperado en la Etapa V. medida por esta propiedad, mientras quesólo el 15% es retenido en esta Etapa cuando la recuperación se mide a traves delincremento de la resistividad electrica A partir de los recuperados isócronos e isotérmicos de la TCRC-k en el presentetrabajo, se pudo establecer, por primera vez y con esta técnica, la existencia de, al menos,tres subetapas de recuperacion ubicadas en los intervalos de temperatura: ~ 220-250 °C (Va), ~ 250-290 °C (Vb) y ~ 290-325 °C, demostrando en forma concluyente que elproceso de disolución de los aglomerados que tiene lugar en esta etapa es multiactivado.

Descripción: En esta tesis estudiamos la teoría de redes y sus aplicaciones a la neurociencia y al estudio del comportamiento humano. Está dividida en tres grandes partes. En la primera parte, desarrollamos un modelo de red de redes para explicar una aparente paradoja de estabilidad. Además de resolver este problema de interés matemático, analizamos redes cerebrales funcionales y mostramos que satisfacen las predicciones del modelo propuesto. En la segunda parte, estudiamos creencias y sesgos en la toma de decisiones económicas. Desarrollamos un nuevo juego económico que llamamos El Juego de la Corrupción," donde los participantes pueden tomar decisiones más o menos egoístas. El resultado fundamental es que, si el paradigma habilita a un conjunto de los sujetos a ser más egoístas, la probabilidad de que crean que otros son egoístas también aumenta. Finalmente, desarrollamos un modelo paramétrico de los sesgos que encontramos empíricamente y usamos este modelo para generar simulaciones de agentes que interactúan en una red estática. En las simulaciones, los agentes juegan un dilema de cooperación donde pueden decidir cooperar o ser egoístas. En función de la intensidad de los sesgos, la simulación puede terminar en un estado donde todos los agentes deciden ser egoístas o todos deciden cooperar. Encontramos que los valores empíricos de estos sesgos generan sistemas en los cuales existen transiciones de fase no continuas y esto podría explicar los variados niveles de cooperación que se observan en distintas sociedades.

Descripción: La localización, en tanto ubicación en un espacio geográfico dado, es uno de los componentes principales del contexto de las personas a partir del cual se pueden estudiar cuestiones tales como intereses individuales y sociales, comportamiento en términos espaciales y temporales así como relaciones con otros individuos. El tipo de redes sociales que se basan en la localización de sus usuarios recibe el nombre de redes sociales basadas en ubicación (LBSN). Utilizando datos registrados en Foursquare (https://foursquare.com), aplicación para dispositivos móviles que provee a sus usuarios búsquedas personalizadas y localizadas, se analizaron las actividades espacio-temporales y redes sociales que registraron los usuarios dentro de la Ciudad Autónoma de Buenos Aires entre 2009 y 2015. Entre los hallazgos más importantes, se encuentra que las personas que tienen un lazo de amistad en la plataforma sociabilizan más cerca, en términos geográficos, que aquellas personas que no son amigas en la misma. Se encuentra evidencia de que los usuarios no hispano parlantes frecuentan sectores más concentrados geográficamente de la ciudad y tienen diferentes características que los usuarios hispano parlantes.

Descripción: En esta Tesis se presentan nuevos métodos basados en la transformada waveletpara filtrar el ruido de speckle y obtener distribuciones de fase en interferometríadigital de speckle (DSPI). La performance de estos métodos se determina usandofranjas simuladas por computadora y también se muestran aplicaciones en franjasexperimentales. El método propuesto para la reducción del ruido de speckle se basaen el descarte de los coeficientes pertenecientes a las sub-bandas de la descomposiciónwavelet. La performance de este método se analiza y se compara con los resultadosobtenidos mediante otras técnicas de filtrado que utilizan el wavelet shrinkage basadaen los criterios estadísticos de hard y soft thresholding. Se muestra que el método dedescarte de sub-bandas puede reducir más eficientemente el ruido de speckle que otrastécnicas de filtrado. También se proponen dos métodos para recuperar la distribuciónde fase a partir de un único interferograma de DSPI, basados en la transformadawavelet continua y en el uso de una distribución suavizada. Ambos métodos no requierende la aplicación de un algoritmo de desenvoltura de la fase o la introducciónde franjas portadoras en el interferómetro. Estos métodos permiten obtener los gradientesde la distribución de fase a lo largo de un camino de pixels y el mapa de fasese determina por integración. Se demuestra que las franjas que cumplen con el límiteasintótico analítico pueden ser procesadas por el método de la transformada waveleten la aproximación de fase estacionaria. El uso de una distribución de Wigner-Villecon un kernel de suavizado de tipo gaussiano obtiene resultados más precisos que elmétodo de la transformada wavelet continua. Se evalúa la influencia del proceso defiltrado y se discuten las limitaciones adicionales que se presentan en sus aplicaciones.

Descripción: La operación de sustitución constituye un engranaje básico en los fundamentos de la teoría de lenguajes de programación. Juega un rol central en el lambda cálculo (por ende, en lenguajes de programación funcional), en unificación de primer orden y de orden superior (por ende, en lenguajes de programación basados en el paradigma lógico), en modalidades de pasaje de parámetros (por ende, en lenguajes de programación imperativos), etc. Recientemente, investigadores en informática se han interesado en el pasaje de la noción usual de la sustitución, atómica, y de gruesa granularidad, hacia una noción más refinada, de más fina granularidad. La noción de sustitución es transportada del metalenguaje (nuestro lenguaje de discurso) al lenguaje objeto (nuestro lenguaje de estudio). Como consecuencia de ello se obtienen los llamados cálculos de sustituciones explícitas. Estos son de sumo interés a la hora de estudiar la interpretación operacional de los formalismos en cuestión y constituyen los objetos de interés de esta tesis. Se desarrollan los siguientes tres ejes de estudio: Primero, se consideran estrategias de reescritura perpetuas en lambda cálculos con sustituciones explícitas. Estas son estrategias de reescritura que preservan la posibilidad de reducciones infinitas. Se propone una caracterización inductiva del conjunto de términos que no poseen reducciones infinitas (los llamados fuertemente normalizantes). Un lambda cálculo polimórfico con sustituciones explícitas también es analizado, incluyendo propiedades tales como subject reduction y normalización fuerte. Segundo, colocamos el ς-cálculo de M. Abadi and L. Cardelli enriquecido con sustituciones explícitas bajo el microscopio. Este cálculo se encuentra en un nivel semejante de abstracción al lambda cálculo pero se basa en objetos en lugar de funciones. Propiedades tales como simulación del lambda cálculo, confluencia y preservación de la normalización fuerte (aquellos términos que son fuertemente normalizantes en ς también lo son en ς con sustituciones explícitas) son consideradas. Finalmente, dirigimos nuestra atención a la tarea de relacionar la reescritura de orden superior con aquella de primer orden. Fijamos una variante de los ERS (apodados SERSdb) de Z. Khasidashvili como nuestro formalismo de orden superior de partida y definimos un proceso de conversión que permite codificar cualquier SERSdb como un sistema de reescritura de primer orden. En este último, cada paso de reescritura se lleva a cabo módulo una teoría ecuacional determinada por un cálculo de sustituciones explícitas. La misma se formula de manera genérica a través de una presentación de cálculos de sustituciones explícitas basada en macros y axiomas sobre estas macros, parametrizando de esta manera al procedimiento de conversión sobre cualquier cálculo de sustituciones explícitas que obedece la presentación basada en macros. El procedimiento de conversión se encarga de codificar pattern matching de orden superior y sustitución en el entorno de reescritura de primer orden. Asimismo, propiedades que relacionan la noción de reescritura en el orden superior con aquella de primer orden son analizadas en detalle. Se identifica una clase de SERSdb para los cuales el sistema de primer orden resultante de su conversión no requiere una teoría ecuacional para implementar pattern matching de orden superior, bastando para ello matching sintáctico. También se argumenta que esta clase de sistemas de orden superior es apropiada para transferir resultados del entorno de reescritura de orden superior a aquella de primer orden. A modo de ejemplo no-trivial de ello, estudiamos la transferencia del teorema de standarización (fuerte).

Descripción: Ia.PARTE. "UN MÉTODO DE LABORATORIO PARA PURIFICAR ORO." Se estudió la disolución de oro por agua regia; resultó convenienteel empleo de una mezcla constituída por 2 ml. de HNO3 y 8 ml. de HCl concentrados para el ataque de un gramo metal. Se estudió el uso de anhidrido sulfuroso, bisulfitode sodio, sulfato ferroso, oxalato de amonio como agentes precipitantesde oro. Siguiendo las técnicas elaboradas, la operación deprecipitación con estos reactivos es cuantitativa. La precipitación con SO2 y NaSO3 se hará en HCl 20%. La precipitación con oxalato de amonio se efectuaráen un medio de pH entre 3.5 y 6.5. Si el pH fuera mayor que 5,se forma "oro fulminante", cuya fórmula sería Au(NH3)2(OH)OH. Para evitar los inconvenientes causados por este compuesto, se lo calcinará con H2SO4. El sulfato férrico disuelve oro en caliente concierta rapidez. En consecuencia, la precipitación de oro con sulfatoferroso debe ser efectuada en frío, y la filtración se efectuará antesde pasados los 45 minutos. Se ha puesto a punto un método para obtener oropuro por métodos de laboratorio comunes. Este método sirve aún paramuestras de contenido pobre en oro. Se lo propone para analizar oropor vía húmeda. Técnica Resumida: Se disuelve un gramo de metal en una cápsula de porcelana conagua regia. Cesada la reacción, se evapora la solución a sequedad a bañomaría, y luego se calentará sobre tela con mechero a pequeñallama hasta no más eliminación de vapores. El residuo se lavará conamoníaco y luego con ácido nítrico. En cada caso se lavará hasta quela solución pase incolora, decantando sobre un filtro de papel. Losfiltros con los precipitados se calcinarán la cápsula donde fuéefectuado el ataque. Se redisuelve el residuo en agua regia, se eliminael exceso de HNO3 por evaporación con HCl, y se diluye aproximadamente 10 veces con agua en un vaso de precipitados. Se deja reposar, y sesepara el AgCl por filtración. En el filtrado se precipita el orocon oxalato de amonio. El precipitado se calcina con H2SO4 en una cápsulade porcelana, y se redisuelve con agua regia. Luego de eliminarel exceso de HNO3, se precipita el oro en la solución con bisulfitode sodio. El precipitado se calcinará a 1000°C en un crisolde porcelana, y puede considerarse oro 1000%. IIa.PARTE. "UNA MODIFICACIÓN AL USO DEL CLORURO ESTAÑOSO EN LA IDENTIFICACIÓN DEL ORO." Se estudió una nueva reacción para identificar oro mediante eluso de cloruro estañoso y sales de mercurio. Esta reacción pemitela identificación de 0.05 microgramos (gamas) en un ml. de solución, v.g., una Concentración Límite de 5 x 10^(-8). Sería de esta manera unade las reacciones más sensibles conocidas hasta el presente para identificaroro. Al efectuar la reacción, el cloruro estañoso desempeñaría un papel de reductor de los cationes Au+++ y Hg++; al estadode fina división en que dichos metales se encontrarían al formarse,y en un medio débilmente ácido, el segundo adsorbería fuertementeal primero para formar una amalgama. Esta sería eventualmente dela composición Hg2Au, y de color marrón. Reactivos: Cloruro estañoso N/l; solución A de HgCl2conteniendo 0.1 mg de Hg++ por ml.; solución B de HgCl2, conteniendo 1 mg. de Hg++ por ml. Técnicas para efectuar la Reacción: Ia. Forma: Blanco: En un tubo de ensayos se mezclará un ml. de la solución A, y un ml. de agua. Muestra: En un tubo de ensayos se mezclará un ml. de la solución A, y un ml. de la solución problema. Reacción: Se agregan dos o tres gotas de la solución de cloruroestañoso a ambos tubos y se agitan. La solución con la muestra mostraráun precipitado marrón. El color del precipitado en el blanco esgris claro, oscureciéndose lentamente a gris plomo. 2a. Forma: Blanco: En un tubo de ensayos se mezclará un ml. de agua y unagota de la solución B. Muestra: En un tubo de ensayos se mezclará un ml. de la soluciónproblema y una gota de la solución B. Reacción: Se efectuará la reacción y se la interpretará de la mismaforma que la indicada en la sección anterior. Esta reacción no permite el dosaje aproximado deloro presente en la solución problema, ya que el color del precipitadono guarda proporcionalidad con la concentración del oro presente. Este dosaje en cambio, es posible mediante el empleo de lastécnicas clásicas de la "púrpura de Cassius." IIIa. PARTE. "EXTRACCIÓN DEL COMPLEJO AÚRICO DE SOLUCIONES ACUOSAS MEDIANTE EL EMPLEO DE SOLVENTES NO MISCIBLES, Y SU IDENTIFICACIÓN POSTERIOR CON CLORURO ESTAÑOSO Y CLORURO MERCÚRICO." Se estudió la atracción del complejo aúrico HAuCl4 de solucionesacuosas acidificadas por medio del éter dietílico (sulfúrico) y elacetato de etilo. El medio más adecuado para la extracción es HCl 6N, y la extracción se efectuará una sola vez con un volumen de solventedoble del de la solución aúrica. Se aplicaron las técnicas así desarrolladas a la identificacióndel oro por ensayos aislados mediante cloruro estañosoen la forma clásica, y la reacción modificada con cloruro mercúrico, yavista en la segunda parte de este trabajo. Habiendo Cu++, este formael complejo 2AuCl3.CuCl2 que reduce algo la eficacia de la extracción;pero como se encuentra en pequeña concentración, molesta poco. No habiendo Ag+ en la solución, la técnica del éter arroja mejores resultadosque para la reacción directa. Esto se debe a que la Ag+ precipita Au(0H)3.4AgCl de las soluciones aúricas. Una mezcla de éter y acetato de etilo en partes igualesresulta un mejor extractor del HAuCl4 que los componentes de la mezclaempleados aisladamente. Ni el acetato de etilo, ni sus mezclascon éter resultan adecuados para los fines expresados en el párrafoanterior. Técnica de la Extracción con Éter: A un ml. de la solución problema en un tubo de ensayo se echa 1gota de HNO3 30% para evitar la descomposición del complejo aúricopor el éter, 4 gotas de HCl concentrado para tener una acidez ca. 6N,y 2 ml. de éter saturado con agua. Se tapa con un tapón de goma y seagita durante un minuto. Se deja reposar un minuto, se destapará,y separará la fase etérea (superior) mediante una pipeta fina. Estapipeta llevará una bolita de vidrio en la parte interna para evitarpérdidas. La fase etérea se pasará a otro tubo de ensayos. Técnica de la Reextracción: A la fase etérea se agrega un ml. de agua alcalina, se tapa eltubo, y se agita un minuto. Se deja reposar un minuto y se extraela fase acuosa (inferior) con una pipeta. Sobre esta solución en un nuevo tubo de ensayosse efectuarán los ensayos de detección de Au++.

Descripción: Fil: Perez, Liliana Inés. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: El bosque nativo que originalmente ocupaba las márgenes altas (albardones) de las islas del Delta Frontal del río Paraná fue sobreexplotado y eliminado casi en su totalidad. En su lugar, actualmente los albardones se encuentran cubiertos, en su mayoría, por forestaciones activas y bosques secundarios posabandono productivo. El objetivo general de la presente tesis fue analizar la regeneración de especies nativas en los bosques de albardón del Delta Frontal, dentro de la Reserva de Biosfera Delta del Paraná. Para ello, por un lado, se analizó la vegetación en pie en 20 parcelas de bosque (número de especies, abundancia, fisonomía, densidad y patrones de estructura poblacional de especies arbóreas). Por otro lado, se estudió el banco de semillas del suelo mediante las técnicas de emergencia de plántulas y de conteo directo durante las cuatro estaciones de un año (hojarasca y primeros 10 cm de suelo, 292 muestras; 1,13 m2). Por último,se ensayaron dos técnicas de restauración ecológica dentro de un bosque secundario versus un albardón sin cobertura boscosa (traslocación de suelo y plantación de árboles nativos, 36 muestras y 30 plántulas por tratamiento respectivamente). Los resultados mostraron que: Primero, aún es posible hallar bosques donde las especies nativas superan en número de especies yabundancia a las exóticas. Segundo, que estos bosques nativos corresponderían a bosque regenerado y que preservan, en poca superficie, un considerable porcentaje de la riqueza original. Tercero, que el banco de semillas presenta una densidad de semillas y un número de especies similar al de otros bosques subtropicales y que posee una diferenciación en estratos de profundidad. Cuarto, que pocas especies leñosas exóticas invasoras son de gran relevancia en tiempo y espacio en el banco de semillas, y que ésto permite comprender el comportamientosucesional posabandono de los albardones. Quinto, que los ensayos realizados indican que el bosque secundario es un ambiente propicio para la supervivencia de plántulas de árboles nativos, aunque impone limitaciones de crecimiento propias de ambientes de fisonomía boscosa. Se concluye que los bosques que cubren actualmente los albardones del Delta Frontal poseen un alto potencial de regeneración de especies nativas y, por lo tanto, un relevante valor de conservación.

Descripción: El objetivo de esta tesis fue estudiar el efecto del contenido hídrico del suelo sobre la dormición de las semillas de algunas especies de los Pastizales Pampeanos. Se demostró que los distintos niveles de disponibilidad de agua afectaron de manera distinta la dormición de las semillas de Bromus catharticus y el rango de condiciones en los cuales pueden germinar. Las semillas que posmaduraron en seco adquirieron la capacidad de germinar en oscuridad o bajo luz filtrada por la vegetación. En cambio, las semillas que permanecieron hidratadas germinaron sólo bajo luz que indica la presencia de claros en la vegetación. En esta tesis también se demostró que las inundaciones afectaron el nivel de dormición de semillas de Setaria parviflora provenientes de un pastizal inundable. En particular, la inundación les indujo dormición secundaria y les promovió requerimientos de alternancia de temperaturas para germinar. Se observaron diferencias en la respuesta germinativa a la inundación entre poblaciones de semillas de S. parviflora provenientes de diferentes hábitats. Las semillas provenientes de pastizales serranos y de pastizales originados de sucesiones postagrícolas se despertaron luego de permanecer un tiempo inundadas y no mostraron requerimientos específicos para terminar la dormición. En cambio, las semillas de los pastizales inundables, luego de haber permanecido inundadas, requieren nitratos en combinación con luz o temperaturas alternadas para germinar. Los resultados de esta tesis ayudarán a comprender y predecir el período y las condiciones en las cuales se reclutan nuevos individuos en comunidades del pastizal, en especial en relación con los dos tipos de disturbios abióticos que ocurren en los Pastizales Pampeanos: sequías en verano e inundaciones inverno-primaverales.

Descripción: Estudiamos la evolución de regiones activas solares (RA) para inferir las propiedadesde los tubos de flujo que las originan y analizar la relevancia que los movimientosdel plasma, tanto en la zona convectiva como en la fotósfera, tienen sobre su evolución. Analizamos RA cuyas polaridades principales rotan una alrededor de la otraa lo largo de varias rotaciones solares, e interpretamos este comportamiento peculiarcomo la emergencia de tubos de flujo magnético deformados. A partir de laspropiedades de las RA discutimos cuáles podrían ser los mecanismos causantes de ladeformación y, luego de descartar a la inestabilidad de kink y la acción de la fuerzade Coriolis, concluímos que el más probable es la interacción de los tubos de flujocon el plasma en la zona convectiva. A continuación analizamos la inyección de helicidadmagnética en configuraciones magnéticas sintéticas y en una RA observada. Comparamos esta inyección con la helicidad coronal calculada a partir de modelosdel campo libre de fuerzas lineal y con la helicidad expulsada por las eyeccionescoronales de masa (ECM) originadas en la RA. Nuestros resultados muestran que lahelicidad inyectada por movimientos fotosféricos de pequeña escala y por rotacióndiferencial no alcanzan para explicar, ni el contenido de helicidad coronal de la RA,ni la cantidad eyectada por las ECM. Por lo tanto, la principal fuente de helicidaden la corona es la torsión inherente al tubo de flujo que forma la RA.

Descripción: La regioselectividad de las reacciones de glicosidación habitualmente se controla utilizando aceptores de glicosilo con todos los OH protegidos, excepto aquel que va a participar de la unión glicosídica. La síntesis de estos derivados usualmente requiere varios pasos, en detrimento del rendimiento global. Una alternativa es utilizar derivados con más de un OH libre y aprovechar sus diferencias de reactividad para efectuar glicosidaciones regioselectivas. La predicción de la selectividad de estas reacciones, es entonces, un tema de particular interés para contribuir al diseño racional de estrategias de síntesis minimizando la cantidad de grupos protectores, y por ende, mejorando los rendimientos. En este trabajo de Tesis nos propusimos comparar la reactividad diferencial de los O-3 y O-4 de derivados de D-Galp, D-Glcp y D-Alop en reacciones de glicosidación, con distintos donores de glicosilo y comparar los resultados experimentales con los obtenidos por modelado molecular, con el objetivo de explicarlos y poder predecir la regioselectividad de reacciones similares. En primer lugar se realizó un estudio conformacional exhaustivo de - y -D-Galp en la conformación 4C1, tanto en vacío como simulando la presencia de agua. A partir de los 729 confórmeros posibles, se optimizó primero por mecánica molecular (MM3), y luego mediante DFT-B3LYP y DFT-M06-2X al nivel 6-311+G**, en vacío y con el agregado de dos variantes de modelos de solvente continuo (PCM y SMD). De ese modo, se obtuvieron unos 100 confórmeros distintos en vacío, con un rango de energías de 14 kcal/mol. El número de confórmeros se multiplicó por 3 o 4, mientras el rango de energía bajó a ca. 9 kcal/mol al utilizar los modelos de solvente. Se concluyó que los cálculos que mejor reproducen los resultados experimentales son los que combinan el funcional M06-2X con el modelo de solvente SMD. Para los estudios experimentales de regioselectividad se sintetizaron como aceptores de glicosilo los metil glicósidos de D-glucosa, D-galactosa y D-alosa protegidos en O-2 y O-6 con grupos bencilos y benzoilos. Se realizaron reacciones de glicosidación entre estos aceptores y diferentes donores de galactosilo. Los productos crudos de reacción se analizaron por RMN y luego se purificaron por cromatografía para aislar los regioisómeros obtenidos, caracterizarlos espectroscópicamente y cuantificar los productos en base a señales diagnósticas observadas en los espectros de RMN. Así, para cada par donor-aceptor se obtuvo una relación de productos de glicosidación regioisoméricos que responde a reactividad relativa de O-3 y O-4. Paralelamente, se modelaron análogos de los aceptores de glicosilo, en los cuales los grupos bencilo y benzoílo se reemplazaron por grupos metilo y acetilo, respectivamente, utilizando DFT con los funcionales B3LYP y/o M06-2X. Tras determinar las conformaciones más estables para cada derivado, se estudiaron tres factores que podrían ayudar a predecir la regioselectividad: a) la energía de los intermediarios catiónicos producidos por cada regioisómero al reaccionar con un catión metilo; b) la distribución de cargas en O-3 y O-4 en los distintos confórmeros de cada aceptor, ponderada según su población; y c) los índices nucleófílicos de Fukui para esas mismas dosposiciones, también teniendo en cuenta las poblaciones. Al comparar con los resultados experimentales la mejor coincidencia se observó con los índices de Fukui, aunque en algunos casos hay factores sutiles que impiden predecir totalmente el resultado experimental a partir del cálculo.

Descripción: El “Patagoniano” comprende varias unidades formacionales que afloran en gran parte de la Patagonia, acumuladas durante una gran transgresión marina ocurrida durante el Oligoceno tardío – Mioceno temprano. En el sector noroccidental de la Cuenca Austral, precisamente al sur del Lago Argentino, exhibe buenas exposiciones y es conocido como Formación Estancia 25 de Mayo. En ella se realizaron estudios de detalle, para luego compararla con otras localidades mejor conocidas de la provincia de Santa Cruz. Mediante un análisis sedimentológico se determinaron los paleoambientes de sedimentación y sus variaciones en el tiempo y el espacio, reconociéndose dos miembros en la unidad estudiada. El Mbo. Quién Sabe, inferior, yace en paraconcordancia sobre la Formación Río Leona y fue depositado en un ambiente marino de plataforma, en el cual se registran eventos de tormentas y períodos de condensación estratigráfica. El Mbo. Bandurrias, superior, registra abundantes estructuras sedimentarias producidas por corrientes de mareas en un ambiente marino somero a estuárico, que grada hacia arriba a facies continentales de la Formación Santa Cruz. Dos niveles piroclásticos intercalados revelaron la presencia de volcanismo explosivo, cuyos detritos fueron redepositados y preservados de acuerdo a la dinámica del ambiente de sedimentación. Se realizó un análisis de isótopos de C, O y Sr sobre material carbonático procedente de numerosos niveles de ostras fósiles intercalados en la sucesión. Las variaciones isotópicas fueron atribuidas a cambios de paleotemperaturas y paleosalinidades en los ambientes de sedimentación en concordancia con los paleoambientes estimados previamente. Además, se distinguió una clara correlación entre la composición isotópica y la microestructura de las ostras, causada por alteraciones selectivas durante la diagénesis. Finalmente, en base al análisis de 87Sr/86Sr en ostras, combinado con U/Pb en circones, se obtuvieron edades confiables para el inicio y fin de la invasión marina en Lago Argentino, que quedó establecida en el Burdigaliano temprano (20-18,8 Ma). Esto permitió correlacionar la secuencia local con las de otras áreas y bosquejar una reconstrucción paleogeográfica para la región durante el Mioceno temprano.

Descripción: Las relaciones de dispersión generalizadas, conocidascomo reglas de suma de momento continuo, son utilizadas paraestudiar el modelo de Reggo en la dispersión pión- nucleóny en la fotoproducción de piones. Se pone espacial énfasisen las amplitudes conspirantes, que explicarían el notableincremento hacia adelante de las secciones diferenciales defotoproducción de piones cargados. También se muestra un particularinterés en dilucidar el mecanismo por el cual lareacción π-p + π°n tiene polarización no nula. Como resultadode este estudio, se confirma la conspiración π-πc. Sin embargo,cálculos recientes muestran que las reglas de suma nopueden discriminar entre diversos mecanismos de conspiración. Muy atractiva es la idea de considerar un pión evasivo concorrecciones absortivas, que simulan el efecto de las fuerzasde más corto alcance. No sólo podría explicarse así la conspiración,sino también la aparición de ceros "dinámicos" enlas amplitudes que contribuyen hacia adelante. Estos ceroshan sido detectados en cuatro de las amplitudes analizadasen este trabajo; todos ellos en la región |t|<0.2 (GeV/c)^2. Muchas otras evidencias, descubiertas en el curso del presenteestudio, sugieren la conveniencia de investigar a fondo lacuestión de las correcciones absortivas en fotoproducción. Respecto de la polarización en π-p → π°n, las reglas de sumapredicen la existencia de una cortadura de Regge en la amplitud A'(-), cuya inclusión da correctamente el signo y la magnitudde la polarización observada. Cálculos teóricos con elmodelo absortivo habían previamente sugerido la existenciade esta cortadura; en este trabajo se la confirma fenomenológicamente. La técnica aquí expuesta mejora sustancialmente los viejosmétodos de la fenomenología de Regge, hasta el punto de quelos ajustes de alta energía más recientes están basados enella. Se presenta un ajuste de este tipo para la fotoproducciónde piones cargados, que explica todos los datos experimentalesa energías que oscilan entre 3.4 y 16.0 GeV. En los dos primeros Capítulos se introducen la notacióny las cuestiones teóricas fundamentales, como las propiedadesde unitariedad, analiticidad y cruce, las relaciones de dispersión,la representación de Handelstam y las propiedadesanalíticas en el plano del momento angular. Un tercer Capítulo,dedicado a las relaciones de dispersión generalizadas, lasanaliza con cierto detalle siguiendo su evolución histórica:de las relaciones de superconvergencia a las reglas de sumade energía finita y de momento continuo. Se discute brevementeel concepto, recientemente formulado, de dualidad. Los Capítulos IV y V constituyen el núcleo de este trabajo y, encierto modo, ya han sido comentados en el comienzo de este Resumen. El Capítulo IV está dedicado a la reacción πN → πNy el quinto, a la fotoproducción. Tres Apéndices se han incluído al final para hacer el texto autocontenido.

Descripción: Fil: Scornik, Fabiana Silvia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Las cianobacterias, las algas y las plantas superioresson capaces de captar la energía lumínica para la reducciónfotosintética de C02 a (CH20) utilizando H20 comoreductor. Este proceso se lleva a cabo en el caso de lasplantas superiores en organelas especializadas, loscloroplastos, los cuales contienen los pigmentos queabsorben la luz distribuidos en vesículas membranosas (tilacoides). Una vez captada, la energía lumínica es covertida enenergía electroquímica en la cadena fotosintética detransporte de eletrones. En este proceso se generan ATP y NADPH, los cuales son utilizados por las enzimas delciclo de Benson-Calvin (ciclo reductivo de las pentosasfosfato), localizadas en la porción soluble delcloroplasto (estroma), para la fijación del C02. Estasenzimas, a excepción de la fosforribuloquinasa y laribulosa-1,5-bisfosfato carboxilasa (la proteína másabundante en la naturaleza) están distribuídasampliamente entre los organismos vivos y actúan tanto enla síntesis como en la degradación de los hidratos decarbono en animales, plantas y microorganismos. En elcaso de los organismos fotosintéticos, dichas enzimasestán involucradas en la asimilación, acumulación ydegradación de los compuestos carbonados. A diferencia de las enzimas de organismosheterotróficos, las enzimas del estroma de cloroplasto (ycianobacterias) presentan la particularidad de ser reguladaspor la luz: las que intervienen en la asimilacióndel C02 son activas en la luz e inactivas en la oscuridad,en tanto una situación opuesta se observa con lasenzimas que intervienen en la degradación de los hidratosde carbono. Los estudios in vitro han tratado de correlacionarla activación enzimática mediada por efectores conlos cambios en sus concentraciones, que ocurren en elestroma del cloroplasto al producirse la transiciónoscuridad-luz. [ver Tesis] En esta tesis, utiiizando extractos de plantassuperiores, en particular de espinaca, se estudió la participaciónconjunta de los diferentes mecanismos moduladospor luz en la regulación de las enzimas claves delciclo de Benson-Calvin. Este ciclo inactivo en oscuridadalcanza su máxima actividad luego de varios minutos enluz. Esta fase de inducción ha sido interpretada por laacumulación gradual de metabolitos generados fotoquímicamente,así como también la conversión lenta de un estadoinactivo a uno activo durante la transiciónoscuridad-luz. Este tipo de cinética enzimática fuedescripta por Frieden y se denominó a dichas enzimas "histeréticas". De acuerdo con esta característica es quelos ensayos de las reacciones enzimáticas se llevan acabo en dos etapas: a) Fase de modificación lenta (min),en la que la enzima se preincuba con el sistema moduladorcorrespondiente y b) Fase catalítica rápida ( « segundo),que convierte en la medición de la actividad catalítica. Los resultados obtenidos señalan que: 1) La activación completa de la FBPasa purificada a homogeneidadse produce por la acción de un metal bivalente,en particular el Ca2+ y su sustrato, la FBP, apH y (Mg2+) presentes en el cloroplasto iluminado. En el proceso de activación, la tiorredoxina-f reducidaquímicamente con DTT regula la concentración dela FBP como efector, mientras que su concentracióncomo sustrato es modulada por cambios en la concentracióndel Mg2+. 2) Por otra parte se determinó que la FBPasa activada poreste sistema de modificación desarrolla una actividad SBPasa que presenta una actividad específica de unorden de magnitud menor respecto de la hidrólisis dela FBP, pero es del orden de las determinadas porotros autores para SBPasas específicas obtenidas dediferentes orígenes. Del mismo modo que la FBPasa, la SBPasa es activadapor el Ca2+ y el sustrato, cuya concentración es moduladapor el sistema de reducción. 3) La activación de la NADP-GAP deshidrogenasa depende dela de metabolitos (1, 3P2GA, NADPH, ATP, Pi), cuya concentraciónestá modulada por luz. La tiorredoxina-f enpresencia de DTT coopera en la activación concertadade la enzima. Dado que no se detectó cambio apreciable en los pesosmoleculares de estas proteínas luego de la activación, sesupone que la modificación en la actividad de estas tresenzimas se debe a una transición conformacional lentaentre un estado inactivo y uno activo. Particular atención se prestó en nuestros estudios ala modulación del Ca2+ sobre la actividad de la FBPasa y SBPasa. Este catión bivalente participa como activador enla fase de modificación de la enzima, en tanto inhibe lafase de catálisis. Ello condujo a postular que, de participar fisiológicamente en la regulación enzimática, debería existir unaseparación tempora] y/o espacial entre ambas fases dadoel efecto dual del Ca2+ sobre estas enzimas. Esta suposición se sustenta en que el Ca2+ esrequerido únicamente para la conversión de la enzima a suestado activo y no para la estabilidad de esta forma. Dado que la concentración de Ca2+ requerida para laactivación de la FBPasa es mayor que la inhibitoria, seanalizó si otros componentes participaban en este sistemade modificación. Las calmodulinas provenientes dediferentes fuentes activaron a la FBPasa sin disminuir laconcentración de Ca2+ requerida como activador. Por ellose descartó su posible participación en la modulación dela FBPasa. Por otra parte, luego del tratamiento de la FBPasa con EGTA se separa una fracción que estimula la actividadespecífica en presencia de Ca2+ y FBP. Este factor disminuyeen un orden de magnitud la constante de activaciónpara el Ca2+ en la fase de modificación; además la concentraciónde Mg2+ requerida para el desarrollo de lacatálisis es menor en comparación con la FBPasa que hasido activada en ausencia del factor. Fracciones de las membranas tilacoides de loscloroplastos de espinaca y de membranas de cianobacterias (Nostoc muscorum) contienen una actividad similar. Notablemente, su efecto es independiente del sistema dereducción, ya que requiere solamente la presencia de Ca2+ y FBP en la fase de modificación de la FBPasa. En ensayos preliminares, las preparaciones de estefactor activaron el sistema de oxidación del H20 encianobacterias. A pesar de que este factor no está aún bien caracterizado,se pudo determinar que está formado por doscomponentes: (A) con un peso molecular de 14.000-16.000 ysusceptible a la digestión por subtilisina y (B) de pesomolecular 1.500-4.000, el cual puede ser purificado porcromatografía líquida de alta presión.

Descripción: Fil: Boscoboinik, Daniel Osvaldo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Xanthomonas campestris pv. campestris (Xcc) y Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac) son los agentes causales de la pudrición negra en crucíferas y de la cancrosis de los cítricos, respectivamente. En ambas bacterias la producción de diversos factores de virulencia está regulada por un grupo de genes denominados rpf (por regulation of pathogenicity factors) a través de la síntesis y percepción de moléculas difusibles que ellas mismas producen y que se denominan DSF (diffusible signal factor). RpfF y RpfB son responsables de la biosíntesis de DSF y RpfC y RpfG están involucrados en su detección y posterior transducción de la señal al interior de la bacteria. Mutaciones en los genes rpfF y rpfC producen una reducción en la producción de enzimas y polisacáridos extracelulares, formación de biofilm y patogenicidad cuando son comparadas con las respectivas cepas silvestres, lo que involucra a estos genes en la regulación de factores involucrados en todos éstos procesos. Entre éstos, hemos detectado un nuevo factor que es secretado por Xcc, que tiene la propiedad de revertir el cierre de estomas inducido por ácido Absísico (ABA), Lipopolisacárido (LPS) o bacterias. Las mutantes rprF y rpfC no pueden revertir el cierre de estomas, demostrando que la síntesis de este factor es también regulada por el sistema rpf/DSF.

Descripción: En este trabajo de Tesis se describen y caracterizan algunasde las enzimas directamente involucradas en el metabolismodel AMPc del protozoario parásito Trypanosoma cruzi, agente etiológicode la Enfermedad de Chagas. Diversos autores han postuladoque el AMP cíclico regula la diferenciación del parásito. Si bienno se conoce su blanco de acción intracelular, se demostró quelos niveles endógenos del AMP cíclico aumentan durante la metaciclogénesis. Los resultados presentados indican la existencia deuna quinasa de proteinas dependiente de AMPc en el parásito, queprobablemente sea la mediadora de muchos de los efectos del nucleótido. Extractos citosólicos de la forma epimastigote de T. cruzicromatografiados en una columna de DEAE-celulosa mostraron dospicos con actividad de quinasa de proteínas que eluyeron a 0,15 y 0,32 M NaCl, respectivamente. El segundo pico, PKII, también presentócapacidad de unir AMPc en forma específica y se activó porconcentraciones nanomolares del nucleótido. La actividad de quinasa de proteinas dependiente de AMPC (PKII) se purificó por filtración en geles, por cromatografía deafinidad en histona-Sepharosa y en AMPc-agarosa y por cromatografíaen una columna mixta de Sephadex G-25-Carboximetil Sephadex C-50. La enzima pudo disociarse parcialmente en dos componentesdiferentes: catalítico y regulatorio. El componente catalíticopresentó un radio de Stokes (2,2 nm) menor que el de la subunidadcatalítica de corazón bovino (2,8 nm). En experimentos de reconstitución,la actividad del componente catalítico de T. cruzi seinhibió por la subunidad regulatoria de corazón. A su vez, elcomponente regulatorio fue capaz de inhibir la actividad fosfotransferasadel componente catalítico homólogo y de la subunidadcatalítica de corazón. Estas inhibiciones se revirtieron con laadición de AMPc. La preparación de holoenzima se fosforiló en ausencia deun sustrato exógeno aceptor de fosfatos y se analizó en electroforesisen condiciones disociantes. Se observó una única bandafosforilada de 56 K. La misma preparación se transfirió a nitrocelulosay se incubó con anticuerpos policlonales contra la subunidadregulatoria tipo II de eucariotes superiores (Westernblot). El antisuero reconoció una única banda de 56 K. Se puede concluir que la quinasa dependiente de AMPc delparásito es similar a una quinasa tipo II de mamíferos en base alas siguientes características: elución con alta sal de una DEAE-celulosa,tamaño de la subunidad regulatoria, capacidad de autofosforilarsede la misma y el reconocimiento por sueros policlonalesespecificos contra RII. En la segunda parte de este trabajo se estudió la fosfodiesterasade nucleótidos cíclicos (PDE) obtenida de extractos citosólicosdel parásito. La enzima soluble (80%) se purificó por DEAE-celulosa y por cromatografía de afinidad en calmodulina-Sepharosa. La PDE que eluyó en un único pico de la DEAE-celulosahidrolizó AMPc y GMPc con alta afinidad. La enzima se activó enpresencia de la calmodulina homóloga, de cerebro bovino y de N.crassa, logréndose el 50% de estimulación máxima con 0,3 μg/mldel activador. En un gráfico de dobles recíprocas, la enzima presentódos componentes cinéticos, uno de alta y otro de baja afinidadpor el sustrato AMPc (Km 2,5 y 100 μM). La calmodulinaaumentó la Vmáx de ambos componentes sin modificar la afinidad dela enzima por el sustrato. La activación requirió concentracionesmicromolares de Ca²+ y se bloqueó por EGTA y por drogas neurolépticascomo la clorpromazina, la flufenazina y el compuesto 48/80. Paralelamente se purificó la calmodulina del parásito por DEAE-celulosa, filtración en geles y cromatografía de afinidad en CAPP-Sepharosao en Phenyl-Sepharosa. En electroforesis en condicionesdisociantes, la calmodulina mostró una sola banda polipeptídicacon un peso molecular aparente de 16 K. La calmodulina purificadafue capaz de activar la PDE dependiente del activador decerebro bovino en forma similar a la homóloga. La calmodulina, probablemente regule el movimiento flagelarporque el tratamiento in vivo de epimastigotes de T. crusicon drogas fenotiazínicas detuvo el movimiento del parásito y modificósu forma. Este efecto, altamente citotóxico de las drogas,es potencialmente importante y podría utilizarse para una futuraacción terapéutica cuyo blanco sería la calmodulina o las enzimasdependientes del activador. Se puede concluir que en T. cruzi se han conservado lasenzimas implicadas en el metabolismo del AMPc que poseen característicassimilares a las de los eucariotes superiores.

Descripción: Fil: González, Claudia Beatriz. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: La regulación de la absorción de NH4+ es un proceso complejoen el que varios factores estarian involucrados. Dado que el “status” de N endógeno desempeña un rol fundamental en dichoproceso, se estudió el efecto de la provisión de diversasfuentes de N sobre la absorción neta de NH4+ y distintasvariables vinculadas a su metabolismo. Se utilizaron plantas de trigo (Triticum aestivum L., cv. Klein dorado) de 10 dias, cultivadas en hidroponia ya sea enausencia de N o con N03- y/o NH4+ como fuentes del mismo. Sesepararon lotes homogéneosde plantas por triplicado y seprocedió a la aplicación de distintos tratamientos mediante elcultivo con NO3-, NH4+y distintos aminoácidos duranteperiodos de tiempo y/o concentraciones variables, como asitambién con inhibidores enzimáticos especificos. En todos loscasos la absorción neta de NH4+ se midió por desaparición delión de la solución externa. Asimismo, parte del materialvegetal fue cosechado, pesado y procesado para ladeterminación de la concentración de N total, NH4+ libre,aminoácidostotales libres, glutamina, asparagina y/o laactividad in vitro de distintas enzimas vinculadas almetabolismo del NH4+, dependiendo del diseño experimental. Losprincipales resultados obtenidos indicarian que: - La absorción neta de NH4+ en plantas cultivadas en ausenciade N puede disminuir considerablemente como consecuenciadirecta de la exposición de las mismasa distintas fuentes de N. —Los cambios en la concentración de NH4+ libre y aminoácidostotales libres endógenos no estarian directamente involucradosen la inhibición del sistema de transporte. No obstante, unelevado aumento en la concentración de NH4+ en raiz puedeprovocar un descenso en la tasa de absorción neta del iónprobablemente a causa de un aumento de la tasa de eflujo. - Cuando se proveyeron exógenamente distintos aminoácidos yamidas en forma individual, se observó que en determinadascondiciones la glutamina y la asparagina podian inhibir en másde un 90% la absorción neta de NH4+ con respecto a la de lasplantas cultivadas sin fuentes de N u otros aminoácidos. Dichoefecto seria especifico para el NH4+ y no se deberia ni a unacompetencia directa por el sitio de transporte entre lasespecies moleculares consideradas ni seria la meraconsecuencia de una depolarización transitoria del plasmalema. Si bien con la metodologia empleada no pudo desarrollarse unmodelo que explique claramente el mecanismo de regulación dela absorción de NH4+ en trigo, el presente trabajo destaca laexistencia de un posible rol por parte de metabolitosnitrogenados especificos en dicho proceso.

Descripción: La nutricion de Zn por las plantas fanerógamas enfrentados condiciones extremas: aquella causada por la elevadadisponibilidad del metal en la solución del suelo y ladeficiencia inducida por el agregado de fertilizantesfosforados. Hasta el presente no existe un sólido cuerpo deconocimiento referido a la regulación de la absorción de Znpor las raices en ambas condiciones. En el presente trabajose ha examinado, en plantas de trigo, el efecto de laconcentraión externa de Zn y de P sobre el crecimiento ylos flujos vectoriales de Zn (Influjo y Eflujo) asi comosobre el transporte de este catibn desde la raiz al vástago. Los resultados obtenidos sugieren que en un amplio rangode suministro de Zn la adquisición de este micronutriente puedeser asimilada -desde un punto de vista estrictamentecinético- a la que exhiben los sistemas de bombeo y pérdida;aún cuando es posible que la entrada de Zn al espaciointerno radical sea pasiva y la salida activa; no existiendo -además- evidencias de un control alosterico sobre elinflujo. Este último, sin embargo, parece estar modulado porel nivel de fósforo en las raices, el que además modificaríala contribución relativa del eflujo al flujo neto. A lolargo de este trabajo, por otro lado, se ha recogidoevidencia de que el desplazamiento radial de Zn ocurririapreferentemente via simplasto. El conjunto de la información disponible conduce asospechar que en diversas especies, y en elevados niveles desuministro del metal, el eflujo de Zn actuaría como unmecanismo de detoxificación; capaz de retardar y/ó atenuarpero no de impedir la aparicion de sintomas de toxicidad;los cuales se manifiestan tanto en la disminución de laproducción de materia seca como en cambios en ladistribución de asimilados, el patrón de crecimiento de lasraices y la economía de agua de las plantas.

Descripción: Las células NK son células linfoides importantes en la defensa del huésped contra patógenos intracelulares y en la inmunovigilancia contra tumores. Ejercen su actividad biológica a través de la elaboración de citoquinas y el desarrollo de actividad citotóxica, funciones reguladas por familias de receptores activadores e inhibidores. Las células NK humanas expresan receptores de tipo Toll (TLRs) tales como TLR3, TLR7, TLR8 y TLR9, entre otros. Sin embargo poco se conoce acerca del impacto de los agonistas de los TLRs en la funcionalidad de las células NK, en particular sobre sus funciones antitumorales. En años recientes, se ha demostrado que durante las etapas tempranas de activación de la respuesta inmune, existe una importante interacción entre las células NK y las células dendríticas (CDs), lo que perfila el desarrollo de una respuesta inmune efectiva. CDs maduras (CDm) a diferencia de CDs inmaduras (CDi) promueven, ente otras cosas, la activación y secreción de IFN-γ por células NK. Sin embargo, desconocemos el efecto de las CDs tolerogénicas (como las que se generan en el ambiente tumoral) sobre las células NK. En este trabajo, utilizamos agonistas de TLR3, TL7 y TLR9 (poliI:C, loxorribina y ODNs, respectivamente) con el objeto de estimular células NK en ausencia o en presencia de dosis subóptimas de IL-12, IL-15 o IFN-α, e investigamos la secreción de IFN-γ, citotoxicidad y expresión del receptor activador NKG2D. PoliI:C y loxorribina, en combinación con IL-12 pero no con IL-15, promovieron una intensa secreción de IFN-γ, la cual requirió de la internalización de los agonistas de los TLRs y fue dependiente de las vías de señalización de MEK1/ERK, p38 MAPK, p70S6 quinasa y NF-κB pero no de calcineurina. El IFN-α indujo un efecto similar siendo menor los niveles de IFN-γ secretado por las células NK. Sin embargo, la citotoxicidad (ensayos estándares de liberación de 51Cr) contra células blanco tumorales MICA- y MICA+ no fue regulada por los agonistas así como tampoco se observaron variaciones en los niveles de expresión de NKG2D. Interesantemente, la secreción de IFN-γ aumento significativamente luego de la estimulación con poliI:C o loxorribina e IL-12, cuando se realizaron co-cultivos con células tumorales MICA+ pero no cuando los co-cultivos se realizaron con células tumorales MICA-, efecto que fue dependiente de PI3K. Por otra parte, CDt no promovieron la secreción de IFN-γ por células NK tal como lo hicieron las CDs maduras. Este hecho reviste especial importancia ya que podría ocurrir que las CDt ejercieran efectos inhibitorios sobre las capacidades anti-tumorales desarrolladas por las células NK en el microambiente durante el curso de la respuesta inmune anti-tumoral natural o en respuesta a diferentes estrategias de inmunoterapia tales como la administración de agonistas de TLRs.

Descripción: La presente tesis describe los estudios realizados sobre la actividad de la enzima 3β-hidroxiesteroide deshidrogenasa/isomerasa (3βHSD/I), así como su participación en la regulación de la espermiación inducida por hCG en testículos de Bufo arenarum. La enzima 3βHSD/I se localiza en las fracciones mitocondrial y microsomal. Ambas localizaciones muestran diferente especificidad de sustrato, dehidroepiandrosterona (DHE) es el sustrato preferido de la enzima microsomal en tanto que la mitocondrial utiliza solamente pregnenolona. Esta doble localización establecería una compartimentalización de las dos vías de síntesis de esteroides previamente descriptas en B. arenarum: la via Δ4 en las mitocondrias y la via Δ5 en los microsomas. La actividad de ambas fracciones subcelulares es mayor en el período reproductivo que en el no reproductivo. Cuando se incluye DHE en el análisis cinético de la transformación de pregnenolona, se observa una importante modificación de la Vmax, en tanto que el Km permanece constante. Estos resultados indican que DHE se comporta como un inhibidor no competitivo de la conversión de pregnenolona. Los valores de Km y Ki sugieren la presencia de dos sitios de unión. Por otra parte, cuando se utiliza pregnenolona como inhibidor de la transformación de DHE, solo se modifica ligeramente el valor de Km, en tanto que la Vmáx se mantiene constante. Esto indica que pregnenolona se comporta como un inhibidor competitivo. Los valores del coeficiente de Hill para la transformación de DHE y pregnenolona son, respectivamente, 1.04 and 1.01. Estos estudios sugieren que en esta especie la biosíntesis de andrógenos y progesterona es catalizada por sitios activos diferentes. En esta tesis también se ha utilizado un sistema de espermiación in vitro, con el objeto de identificar, en el sapo, los posibles mediadores esteroideos de la espermiación. La espemiación fue inducida con hCG, utilizándose además distintos inhibidores de la esteroidogénesis. Cianocetona, inhibidor de la síntesis de 3-oxo-4-ene esteroides, no afectó la espermiación inducida por hCG aún cuando la síntesis de aquellos esteroides y sus derivados reducidos disminuyó en más de un 95%. Aminoglutetimida, usada en una concentración que bloqueó la síntesis de esteroides, tampoco afectó la espermiación estimulada por la gonadotrofina. Resultados similares se obtuvieron con spironolactona, inhibidor de la enzima 17α-hidroxilasa/17-20 liasa. Como conclusión, puede decirse que en B. arenarum, la espermiación inducida por hCG no está mediada por la síntesis de esteroides. Cuando el ensayo de espermiación se realizó utilizando FSH Humana recombinante (FSHrh), se observó tanto inducción de la espermiación como aumento en la síntesis de esteroides. La capacidad esteroidogénica de las células de Leydig ha sido establecida desde hace tiempo, sin embargo, la potencialidad esteroidogénica de las células de Sertoli es aún controversial. En este trabajo se informa, también, la separación de dos poblaciones celulares que responden diferencialmente a las gonadotrofinas humanas. Las fracciones con una densidad de 1.05 g/ml respondieron a hCG con un aumento en la producción de testosterona (T). Sin embargo no respondieron a FSHrh con un aumento de andrógenos ni de cAMP. La formación de cAMP fue estimulada en las fracciones con una densidad de 1.038 g/ml. Estas también respondieron a FSHrh con un aumento en la síntesis de T. Cuando FSHrh se ensayó sobre fragmentos de testículo, se observó también un aumento dosis-dependiente de la secreción de T. El método utilizado permitió la separación de dos poblaciones de células con características similares a las células de Leydig y Sertoli de cerdo y trucha. Sin embargo, la fracción con una densidad semejante a las células de Sertoli, respondió a FSHrh no solo con un aumento en la formación de cAMP, sino también con un incremento en T. Se podría concluir que el testículo de B. arenarum tendría células de Sertoli con capacidad esteroidogénica, como fuera descripto para otras especies, y que la espermiación podría ser inducida por las gonadotrofinas directamente sobre las células de Sertoli.

Descripción: En S. cerevisiae, la Proteína Quinasa dependiente de cAMP (PKA) controla una muy amplia variedad de procesos. Su activación juega un papel central en el control de la glucólisis y gluconeogénesis, movilización de carbohidratos como trehalosa y glucógeno, represión de genes de resistencia al estrés y control de la proliferación celular. La PKA en mamíferos ha demostrado ser una fosfoproteína con múltiples sitios de fosforilación, que tienen influencia sobre el ensamblado de una enzima activa y/o sus propiedades cinéticas. En S. cerevisiae, la isoforma Tpk1 presenta un cambio en su estado de fosforilación dependiente del estado metabólico de la célula. Las células creciendo en fuentes de carbono no fermentables o en fase estacionaria presentan isoformas de Tpk1 con bajo grado de fosforilación. Cuando estas células reciben un estímulo de glucosa, Tpk1 aumenta su grado de fosforilación, incrementando así su afinidad por el sustrato. La fosforilación reversible de Tpk1, dependiente de la presencia de glucosa, agrega un nuevo nivel de control de la actividad quinasa, además de los clásicos como: regulación por subunidad R, dominios de cAMP y localización. El mecanismo molecular de fosforilación de Tpk1 inducido por glucosa no ha sido caracterizado, como así tampoco si ocurren cambios similares en las otras isoformas Tpk2 y Tpk3. Tampoco se han realizado análisis de los posibles residuos a ser fosforilados en estas proteínas. Con el objetivo de responder a estos interrogantes, hemos realizado experimentos que sugieren que Tpk1 sufre fosforilaciones por un mecanismo autocatalítico e intramolecular. Además, Tpk3 podría estar regulada por modificaciones similares, no sucediendo lo mismo con la isoforma Tpk2. Por último, para un primer abordaje de caracterización de los sitios de fosforilación, realizamos un análisis in silico de Tpk1. De este análisis surgieron péptidos derivados de la secuencia de dicha proteína que fueron utilizados como sustrato en ensayos quinasa que señalan que el residuo Serˆ179 es un candidato a sufrir fosforilación.

Descripción: Fil: Alperín, Daniel Mario. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Finocchiaro, Liliana María Elena. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: El trabajo experimental presentado en esta tesis se realizó con el objetivo deinvestigar la influencia de la glándula pineal sobre el sistema inmune, eligiéndose comofunción a evaluar la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (CCDA). Losexperimentos se llevaron a cabo en ratones de la cepa BALB/c de ambos sexos.

Descripción: El presente trabajo tuvo como objetivo estudiar el rol del sistema retinoide en la progresión del tumor mamario murino LM38-LP, haciendo énfasis en las interacciones celulares entre su componente luminal (LEP) y mioepitelial (MEP). Determinamos que la línea LM38-LP expresa receptores retinoides y que los mismos son funcionales. El tratamiento con retinoides induce en la línea un arresto del ciclo celular. El mismo tratamiento induce apoptosis sólo en el compartimiento LEP y senescencia en las células MEP, mientras que una pequeña población celular que mediaría la interacción entre ambos componentes continúa ciclando. Asimismo se ha podido determinar la existencia de una población con características de células stem/progenitoras parcialmente resistentes al tratamiento con retinoides. Hemos estudiado además mecanismos implicados en la diseminación metastásica de la línea LM38-LP. En este sentido hemos observado que los retinoides inhiben tanto la actividad de proteasas secretadas como la capacidad migratoria, mientras que aumentan la capacidad adhesiva a componentes de la matriz extracelular. Los retinoides inhiben la invasión sólo en la población MEP de la línea LM38-LP. Se analizó la transcripción de un panel de genes implicados en el proceso de transición epitelio-mesenquimática. Se pudo determinar que el ácido retinoico modula estos genes diferencialmente entre los compartimientos LEP y MEP conduciendo a la línea hacia un fenotipo menos agresivo. Se generaron sublíneas que presentan silenciados o sobreexpresados los distintos receptores retinoideos, lo que permitió evaluar la participación de cada uno de ellos en la progresión tumoral maligna de la línea en estudio. Este trabajo sugiere que los retinoides ejercen efectos pro-apoptóticos y citostáticos diferenciales en los diferentes compartimentos celulares de la línea LM38-LP. Asimismo los resultados sugieren la existencia de una tercera población con capacidad clonogénica y resistente a los retinoides.

Descripción: Fil: Bozzini, Carlos E. J.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Este trabajo pretende dilucidar algunos de los mecanismos regulatorios de laesteroidogénesís adrenal por Endotelina (ET) y Adrenocorticotrofina (ACTH) y el rol dela 11β-hidroxiesteroide deshidrogenasa (11β-HSD). Con este fin se obtuvieron lossiguientes aportes: Adrenales de ratas infundidas con ET presentan, además del efecto corticoidogénico yaconocido, a) un incremento de la captación del sustrato primario para laesteroidogénesís, colesterol, in vitro; este incremento es mediado por los receptores ETB. b) un incremento en la actividad del citocromo P-4505scc, mediado por los receptores ETA. La actividad de la 3β-hidroxiesteroide deshidrogenasa no se modifica por ET. La glándula adrenal de rata y vaca expresa actividad de las isoformas l y 2 de la 11β-hidroxiesteroide deshidrogenasa (11β-HSD). Ambas isoformas presentancaracterísticas bioquímicas y cinéticas similares a las halladas en otros órganos de rata yen otras especies. En ratas, el tratamiento agudo con ACTH in vivo produce una disminución de laactividad adrenal de esta enzima, mientras que el tratamiento crónico (48 hs) causa unaumento de la misma. Este último incremento es mediado por un aumento en los nivelesproteicos de la 11β-HSD-2 aunque no se modifican los niveles de su mRNA. Se proponeun modelo de regulación de la esteroidogénesís adrenal por la actividad de la 11β-HSD. El tratamiento agudo con ACTH de células dispersas de fasciculata adrenal de rataproduce una disminución de la actividad de 11β-HSD determinada en células enteras oen sus microsomas. Esta regulación sería mediada por la vía de cAMP-PKA ya que esrevertida por inhibidores de esta kinasa y simulada por db-cAMP. Además, la presenciade fosforilaciones/desfosforilaciones se comprueba con experimentos con fosfatasaalcalina. Se realizó el clonado, expresión y caracterización de la 11β-HSD-2 bovina. Seestudiaron las características bioquímicas y cinéticas de la proteína expresada en células CHOP. La comparación estructural, cinética y funcional de la 11β-HSD-2 bovinademuestra estrecha similitud con su contraparte de rata y humana.

Descripción: En los anfibios estudiados, tanto la esteroidogénesis como la espermiación pueden ser estimuladas por las distintas gonadotrofinas: la hormona luteinizante (LH), la gonadotrofina coriónica humana (hCG) y la hormona folículoestimulante (FSH). En Rhinella arenarum, la acción de hCG sobre la espermiación no requiere de la biosíntesis de esteroides aunque para la regulación de ambos procesos se requeriría la activación de la proteína quinasa A (PKA). Uno de los objetivos de esta tesis fue estudiar la participación de la PKA y de la proteína quinasa C (PKC) en la acción de las gonadotrofinas sobre la proteína StAR (Steroidogenic Acute Regulator protein), considerada en mamíferos el paso limitante y hormonalmente regulable de la esteroidogénesis, y sobre el proceso de espermiación. Para el estudio de la regulación de la esteroidogénesis, primero se llevó a cabo la caracterización molecular del ADN copia (ADNc) de StAR. Los resultados obtenidos mostraron no solo un alto porcentaje de similitud de la secuencia de StAR con la proteína de otros vertebrados sino también la conservación de los sitios consenso para la fosforilación por PKA descriptos en mamíferos. Esto último resultó consistente con el aumento de la expresión del ARN mensajero ante los estímulos de hCG o de activadores de PKA, aumentos que no se observaron en la expresión de la proteína. Además, dado que en esta especie los glucocorticoides disminuyen la síntesis de andrógenos, procedimos al análisis del efecto de los mismos sobre la proteína StAR y sobre la producción de esteroides. No se observaron variaciones en la expresión basal de la proteína ni en la estimulada por hCG, luego del tratamiento con distintas dosis de corticosterona o dexametasona. Esto permite inferir que la disminución de la síntesis de andrógenos por efecto de los glucocorticoides no está relacionada con la proteína StAR. Para el estudio de la espermiación, proceso dependiente de gonadotrofinas, se analizaron tanto la función no canónica de la bomba Na+/K+ como la activación de las vías de PKA y PKC. los resultados obtenidos refuerzan la propuesta de la participación de la forma no canónica de la bomba Na+/K+ y del rol de PKA en el proceso de espermiación pero no de PKC. Por otra parte, sólo la activación de PKA afectó significativamente la producción de testosterona, confirmando que la esteroidogénesis y la espermiación se regulan por distintos mecanismos.

Descripción: La concentración de proteínas en el grano de trigo es uno de los determinantesde la calidad panadera y por lo tanto del precio del grano. Como los aminoácidos quelas conforman provienen de los órganos vegetativos desde donde son transportados porel floema, el estudio de los factores que regulan la exportación de aminoácidos alfloema es relevante para la comprensión de la acumulación de proteínas en el grano. En el presente trabajo se estudiaron las causas fisiológicas de la disminución enla concentración de proteínas en el grano debido a la ausencia del brazo corto delcromosoma 7B de trigo (Triricum aestivum L.) en la línea ditelosómica CSDT7BL de lavariedad Chinese Spring. Se evaluó el transporte de aminoácidos desde los órganosfuente hacia el grano, que mostró estar disminuido a altas disponibilidades de N, conrespecto a las plantas euploides. Por lo tanto se emprendió el estudio de la regulación dela exportación de aminoácidos al floema en plantas jóvenes de otras variedadescultivadas en condiciones controladas mediante la técnica de exudación facilitada con EDTA. Las plantas fijeron sometidas a diferentes regímenes de nitrógeno, lumínicos, oal agregado exógeno de citocininas. Se concluyó que en condiciones estables decrecimiento los aminoácidos exportados al floema provendrían del nitrógenorecientemente reducido, mientras que en situaciones de estrés, serían los aminoácidosalmacenados previamente en las hojas o los derivados de la proteólisis los que seexportan. Por otro lado, esta exportación resultó ser independiente de la exportación deazúcares al floema, tanto como de la disponibilidad de fotoasimilados en las hojas, encambio las citocininas mostraron un efecto promotor dependiente de la disponibilidadde nitrógeno. Luego, se emprendieron ensayos con las plantas CSDT7BL en cámara de cultivoexponiendolas a las condiciones determinadas en la primera parte, capaces de generarcambios en la exportación de aminoácidos. El conjunto de los resultados obtenidossugiere que esta línea posee una deficiencia para la exportación de aminoácidos alfloema que se manifiesta en altas disponibilidades de nitrógeno, alcanzando una mesetaa una concentración externa de nitrógeno menor que en las euploides, que no parecieradepender de la forma en que éste se suministre. Esta deficiencia podria ser la causantede la disminución en la concentración de proteínas en el grano maduro, ya que seencontró una correlación positiva entre estos parámetros en las plantas cultivadas en elcampo.

Descripción: En la actualidad es sabido que los lípidos son biomoléculas que están involucradas en vías de transducción de señales, y que los desequilibrios en su metabolismo causan múltiples trastornos de alta prevalencia. Dentro de los lípidos más estudiados en la actualidad, se encuentra el ácido araquidónico (AA), debido a las funciones que cumple tanto esta molécula como sus metabolitos, los eicosanoides, en el control de la homeostasis celular. Previamente, en nuestro laboratorio se ha descripto el rol de la enzima Acil- CoA sintetasa 4 (ACSL4) en la regulación de los niveles del AA intracelular en la esteroidogénesis y en células tumorales. ACSL4 participa en la fisiopatología del cáncer de mama, y, la desregulación de los niveles de expresión de esta esta enzima se vincula con la agresividad tumoral. Recientemente, se demostró la existencia de una regulación diferencial en los mecanismos de transcripción de ACSL4, en líneas celulares de cáncer de mama humano de diferente agresividad. Sin embargo, se sabe que existen otros mecanismos regulatorios post-traduccionales, tales como la fosforilación y la ubiquitinación, que podrían estar involucrados en la regulación de la expresión de la ACSL4 y por ende, en la tumorigénesis. Por lo tanto, en esta tesis doctoral, se propone profundizar en el estudio de los mecanismos post-traduccionales que podrían afectar la expresión de ACSL4 en células de cáncer de mama de distinta agresividad. Utilizando líneas celulares de cáncer de mama de distinta agresividad, MCF7 (menos agresiva), y MDA-MB-231(más agresiva) se observó que la estabilidad de la proteína es menor en la línea menos agresiva. A través de ensayos con MG-132, reconocido inhibidor proteasomal, determinamos también que el proteasoma está involucrado en la degradación de ACSL4 y por lo tanto, en los niveles de expresión y estabilidad de la enzima. Mediante la búsqueda en bases de datos y ensayos de mutagénesis sitio dirigida, pudimos identificar a las lisinas 621 y 702 de ACSL4 como posibles blancos de ubiquitinación. Además, identificamos a la enzima E3- ligasa Parkina como una de las candidatas a realizar esta modificación post-traduccional y, demostramos que efectivamente, existe una interacción entre ACSL4 y Parkina. Por otro lado, a través de estudios in sílico, observamos que ACSL4 regula la expresión de genes relacionados con el metabolismo y la función mitocondrial, en células de cáncer de mama. Actualmente, se sabe que las mitocondrias juegan un papel clave en la oncogénesis, es por eso que, en este trabajo, decidimos profundizar sobre el rol de ACSL4 en el metabolismo mitocondrial en células tumorales mamarias de distinto nivel de agresividad. Utilizamos células MCF-7 que sobreexpresan ACSL4 de manera estable (MCF-7 tet-off/ACSL4) y células MDA-MB-231 silenciadas para la expresión de ACSL4 (shACSL4). Evaluamos si ACSL4 regula la expresión de distintos marcadores mitocondriales. Realizamos ensayos con el objetivo de medir la masa, la actividad y la bioenergética mitocondrial que nos permitieron determinar cómo la expresión y/o ausencia de ACSL4 afecta estos parámetros. Logramos determinar que ACSL4 regula positivamente la expresión de marcadores mitocondriales tales como NRF1, VDAC1 y el Complejo III de la cadena respiratoria. Además, en los estudios de bioenergética medimos la tasa de consumo de oxígeno, y en base a los resultados obtenidos, analizamos distintos parámetros respiratorios. Demostramos que la expresión de ACSL4 en células de cáncer de mama produce cambios significativos en la tasa de respiración máxima, la capacidad de reserva respiratoria y la fuga de protones. Estos resultados indican que las células que sobreexpresan ACSL4 poseen una mejor capacidad de respuesta frente a situaciones de demanda energética. Además, en células MCF-7 tet-off/ACSL4 observamos mayor actividad mitocondrial y una disminución en la masa mitocondrial con respecto al control, lo cual sugiere una compensación del genoma mitocondrial ante la disminución en su cantidad. Por otro lado, los resultados obtenidos con la línea MDA-MB- 231 shACSL4 son opuestos a lo observado en células MCF-7 tet-off/ACSL4, lo cual valida el rol de ACSL4 en células de cáncer de mama sobre diversos parámetros mitocondriales. Los resultados del siguiente trabajo contribuyen a ampliar los conocimientos sobre la regulación de ACSL4 y el rol que ejerce en el metabolismo mitocondrial, permitiendo profundizar en el conocimiento de la fisiopatología de la célula tumoral y los mecanismos moleculares involucrados.

Descripción: A lo largo de los últimos años, se ha acumulado una vasta evidencia experimentalseñalando a NF-κB como uno de los factores de transcripción (FT) más relevantes en laformación y reprocesamiento de memorias de largo término (MLT) en distintosmodelos animales y tareas de aprendizaje. Sin embargo, poco se sabe de los genes queson regulados por este FT durante procesos mnésicos. El objetivo de mi tesis fueidentificar y caracterizar algunos de los genes que son regulados por este FT durante laconsolidación de la memoria de reconocimiento de objetos en el hipocampo de ratón. Los resultados obtenidos indican que durante este proceso, NF-κB regula la expresiónde genes de respuesta temprana y tardía, en particular, del FT ZIF268 y de la proteinquinasa Ca(2+)-Calmodulina-quinasa II δ (CaMKIIδ), una sub-unidad de CaMKII cuyafunción en el sistema nervioso central se desconoce. El entrenamiento al paradigma de Reconocimiento de Objetos Novedosos, que lleva a la formación de una memoria dereconocimiento de largo término, indujo la expresión de ambos genes. ZIF268 seexpresa de manera rápida y transitoria dentro de las primeras horas postentrenamientoy su expresión es necesaria para la formación de una MLT. Por elcontrario, la expresión de CaMKIIδ se induce en forma tardía y sostenida, y persistehasta por lo menos 7 días luego del entrenamiento. Sorprendentemente, nuestrosresultados indican que CaMKIIδ no afecta la formación de la MLT, sino la formación ymantenimiento de una forma de MLT más persistente. A continuación, mostramos quela ocupación nucleosomal en ciertas regiones claves del promotor de CaMKIIδ se veafectada hasta 7 días luego del entrenamiento. Esta es la primera vez que sedemuestra que este tipo de modificaciones epigenéticas tienen lugar durante laformación y mantenimiento de la MLT. Por último, hallamos que, en neuronaspiramidales del hipocampo, CaMKIIδ se localiza principalmente en el núcleo, dendritasy terminales pre-sinapticas. Nuestros estudios funcionales, junto con los delocalización sub-celular aportan los primeros indicios respecto a los mecanismosmoleculares en los que podría intervenir CaMKIIδ en el sistema nervioso central.

Descripción: La luz es uno de los factores más importantes en el desarrollo de las plantas. Lasmismas poseen sistemas que les permiten percibir la calidad, intensidad, dirección y duraciónde la luz. Existen fotorreceptores específicos que registran la señal lumínica, la cual estraducida produciendo cambios en la expresión de los genes. Los fitocromos pertenecen algrupo de fotorreceptores que absorben predominantemente longitudes de onda del rojo (R) yrojo lejano (RL). El promotor del gen Lhcb es regulado por la luz a través del sistema de losfitocromos, ya que responde a muy bajas fluencias (VLFR) y altas irradiancias (HIR) de luzmediante el fitocromo A, y a bajas fluencias (LFR) de luz mediante el fitocromo B. El análisis del promotor Lhcb reveló un motivo necesario para la respuesta HIR perono para la respuesta VLFR. Este motivo es a su vez necesario para la unión de la proteína BEL-LIKE HOMEODOMAIN 1 (BLH1) al promotor, lo cual se pudo observar tanto enexperimentos in vitro como en experimentos de simple híbrido en levaduras. Sustituciones depromotor que aumentaron la unión de BLH1 también aumentaron la respuesta HIR. Encontraparte, plantas mutantes blh1 mostraron una disminución en la respuesta al RL continuopero mantuvieron valores normales a los pulsos de RL. Esto indica que el factor detranscripción BLH1 regula específicamente el HIR y no la VLFR del fitocromo A. De estemodo se pone de manifiesto un mecanismo central de control de la sensibilidad a la luz porlas plantas. Entre las diversas proteínas de la familia BLH se encuentran las proteínas BLH6 y BLH5, las cual es se caracterizan por presentar una alta homología estructural con la proteína BLH1. Se estudió la expresión de BLH1 y BLH6 en plantas deficientes en blh1 y blh6 ydobles mutantes blh1 blh6. Por la medida de expresión del gen β-glucuronidasa se pudodeterminar que existe una regulación mutua entre las proteínas BLH1 y BLH6. Estudiosfisiológicos sobre múltiples mutantes blh1, blh5 y blh6, indicaron una función aditiva demiembros de la familia BLH.

Descripción: Conocida inicialmente como la “hormona de la gordura” por su asociación con la saciedad y el balance energético del organismo, la leptina, una proteína de 16 kDa, también es reconocida actualmente por el papel fundamental que posee en la biología reproductiva. La expresión de la leptina y de sus receptores, descubierta originalmente en tejido adiposo, se ha evidenciado en otros tejidos tales como placenta, en donde la síntesis de leptina es altamente regulada. Los niveles de leptina aumentan tempranamente durante la gestación, aún antes de que se incremente el tejido adiposo, sugiriendo que existen otros factores que modulan su producción. Sin embargo, los mecanismos de acción de la leptina sobre la implantación y el crecimiento embrionario son aún desconocidos. El presente trabajo ha sido desarrollado con el objeto de estudiar las vías de transducción de señales activadas por leptina en placenta y para elucidar los mecanismos que median el efecto antiapoptótico de leptina. Más aún, dado que la leptina sería importante en la supervivencia celular y en el mantenimiento de la placenta, analizamos la regulación de la expresión de leptina en placenta por la hormona gonadotrofina coriónica y por AMPc. Se utilizaron como modelo las líneas celulares trofoblásticas JEG-3 y BeWo, y explantos de placenta humana a término. Demostramos que la unión de la leptina a su receptor causa la estimulación de las vías de señalización de JAK/STAT, MAPK, p38MAPK y PI3K. Asimismo, hallamos que la leptina cumple una función antiapoptótica en células trofoblásticas y que ejerce dicha función principalmente a través de la vía de MAPK. Cuando estudiamos la regulación de la expresión de leptina, los resultados mostraron que la hCG, una hormona esencial del embarazo, estimula la transcripción y la síntesis de leptina en placenta. Contrario a lo esperado, el AMPc inhibió la inducción de leptina por hCG. El efecto de hCG sobre leptina parece estar mediado por la vía de MAPK. Observamos que el AMPc estimula la expresión de leptina en placenta y que el nucleótido es capaz de activar no sólo la vía de señalización de PKA sino también la de MAPK. En este sentido, demostramos que la acción inductora del AMPc sobre leptina estaría mediada por un entrecruzamiento entre dichas vías. En síntesis, los resultados obtenidos contribuyen a esclarecer el modo de acción de la leptina en placenta así como los mecanismos de regulación de la expresión de la proteína, y sustentan la importancia de la leptina en la biología de la reproducción.

Descripción: Fil: Bernath, Viviana A.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: La levadura Saccharomyces cerevisiae es capaz de incorporar y metabolizar el ácido γ-aminobutírico (GABA) gracias a los productos de tres genes: UGA4, UGA1 y UGA2. El primero de ellos, UGA4, codifica para una permeasa específica de GABA que es capaz de incorporar este aminoácido a las células. Luego, el GABA puede ser degradado por las enzimas GABA transaminasa y succinato semialdehído deshidrogenasa, codificadas por los genes UGA1 y UGA2, respectivamente. Estos genes son inducibles por GABA y esta inducción depende de los factores de transcripción Uga3 y Uga35/Dal81. Estudios previos reportaron que la inducción del gen UGA4 se ve afectada por la presencia de aminoácidos en una forma dependiente del sensor SPS. En este trabajo demostramos no sólo que el sensor SPS interviene en la regulación por leucina del gen UGA4, sino que también los factores Stp1 y Stp2 intervienen en esta regulación. En presencia de leucina, se observó un menor reclutamiento de los factores Uga3 y Uga35/Dal81 al promotor UGA4, lo que sería la causa de la menor inducción observada en esas condiciones. Por otra parte, se demostró que esta alteración en la interacción de dichos factores con el promotor UGA4 es causada por una señal disparada por el sensor SPS. Ambos factores, Uga3 y Uga35/Dal81, actúan a través del elemento UASGABA presente en el promotor UGA4 y dependen uno del otro para poder interactuar con dicho elemento. Más aún, nuestros resultados sugieren que el factor de transcripción Uga35/Dal81 interactúa con el promotor UGA4 a través del factor Uga3. Por otra parte, se demostró que la inducción de la expresión de los otros genes miembros del regulón UGA, UGA1 y UGA2, es también inhibida por aminoácidos en una forma dependiente del sensor SPS y que esta regulación ocurre muy probablemente a través del mecanismo establecido para UGA4. Por último, demostramos que el factor de transcripción Leu3 regula negativamente la expresión de los genes UGA4 y UGA1 pero no interviene en la regulación de UGA2.

Descripción: Leptina, proteína de 16 kDa sintetizada y secretada principalmente por el tejido adiposo, parece serun regulador de la función reproductiva. En este trabajo evaluamos la acción de distintos niveles deleptina sobre la expresión de las principales isoformas de su receptor en el eje hipotálamo-hipófisis-ovario, y el efecto de NPY y 17β-estradiol sobre estos receptores en el eje hipotálamo-adenohipófisis,ambos durante el proceso ovulatorio. Utilizamos como modelo biológico ratas inmaduras estimuladascon gonadotrofinas y evaluamos mediante estudios in vivo e in vitro la expresión del mensajero (RTPCR)y de la proteína (western blot) de los receptores de leptina. Encontramos que tanto leptina comolas gonadotrofinas son capaces de regular diferencialmente la expresión del mensajero y de la proteínade ambos tipos de isoformas en el eje reproductivo, en forma dosis y tejido dependiente. Por otro lado, NPY y 17β-estradiol fueron capaces de inducir la expresión del mensajero y de la proteína de ambasisoformas en el eje hipotálamo-adenohipófisis a través del receptor de NPY tipo 1 y de los receptoresestrogénicos α y/o β, respectivamente. Como el efecto estimulatorio o inhibitorio de leptina sobre la función ovárica podría depender de laactivación diferencial de sus receptores, estudiamos las vías JAK2/STAT3 y ERK1/2, y la expresiónde SOCS3 (western blot) en el eje reproductivo durante el proceso ovulatorio. Utilizamos ratasestimuladas con gonadotrofinas las que recibieron los siguientes tratamientos: i) tratamiento agudo, lasque recibieron 5 dosis de leptina (5 μg c/u) o vehículo durante el proceso ovulatorio, o ii) tratamientodiario, las que recibieron 3 μg de leptina o vehículo por día durante 12 días a partir del destete. Observamos que el tratamiento agudo, que inhibe la función ovárica, i) disminuye la expresión de p-ERK1/2 en hipotálamo, adenohipófisis y ovario; ii) disminuye la expresión de p-STAT3 enadenohipófisis y ovario; y iii) aumenta la expresión de SOCS3 en adenohipófisis y ovario. En eltratamiento diario, que estimula la función ovárica, observamos que i) aumenta la expresión de p-STAT3 y p-ERK1/2 en hipotálamo y en ovario; ii) disminuye la expresión de SOCS3 en ovario; y iii)no hubo cambios en estas vías en adenohipófisis. Al evaluar in vitro la acción directa de leptina sobreestos caminos de señalización en ovario observamos que la presencia de leptina es capaz de aumentarla expresión de p-STAT3 a bajas y altas concentraciones, la expresión de p-ERK1/2 a bajasconcentraciones y los niveles de SOCS3 a altas concentraciones. Con estos resultados podemos concluir que las gonadotrofinas, leptina, NPY y 17β-estradiol soncapaces de regular la sensibilidad a leptina a lo largo del eje reproductivo por modular la expresión desus receptores, y que los cambios observados en las distintas vías de señalización inducidos pordiferentes niveles de leptina pueden ser, al menos en parte, responsables del efecto positivo o negativoque leptina ejerce sobre el proceso ovulatorio. Palabras claves: receptor de leptina, leptina, NPY, 17β-estradiol, hipotálamo, adenohipófisis, ovario,proceso ovulatorio, JAK2/STAT3, ERK1/2, SOCS3.

Descripción: Fil: Cosen de Binker, Laura Iris. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Radrizzani Helguera, Martín. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Ochoa, Alberto Ricardo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: El primer paso en la biosíntesis del hemo en las células animales es catalizado por laenzima mitocondrial δ-aminolevulinato sintetasa (ALA-S), que condensa glicina ysuccinil CoA para formar ácido 6-aminolevulínico y que, al menos en hígado, es lalimitante de la velocidad. En hígado esta enzima constitutiva regula la producción dehemo necesario para sintetizar las proteínas citocromos P-450. Aunque en los tejidos animales el nivel de enzima es muy bajo, la transcripción delgen de ALA-S en hígado de animales de experimentación aumenta cuando se lesadministran compuestos porfirinogénicos como el fenobarbital. Diferentes mecanismosfueron propuestos por los que el hemo puede regular la expresión de ALA-S a niveltranscripcional reprimiendo la sintesis del RNA, a nivel postranscipcional disminuyendola estabilidad del mensajero y a nivel postraduccional inhibiendo la entrada de la enzimaa la mitocondria. En el presente trabajo examinamos el mecanismo ejercido por cAMP y glucosa sobrela expresión génica de ALA-S en hepatocitos de ratas normales y con diabetesexperimental, y en cultivos de células HepG2. Se ha demostrado que el cAMP potenciala inducción mediada por fenobarbital, aumentando la cantidad del mRNA de ALA-S através de la activación de la quinasa de proteínas dependiente de cAMP. El efectoinductor ejercido por el fenobarbital es mayor en hepatocitos diabéticos que en normalesdebido probablemente al nivel de cAMP elevado que presentan. Por otro lado, se hademostrado que la glucosa inhibe la inducción de la expresión de ALA-S mediada porfenobarbital en hepatocitos normales pero no en diabéticos. Este efecto glucosa esrevertido por la presencia de dibutiril CAMP,de activadores de la adenilil ciclasa o de uninhibidor de fosfodiesterasa. Se presentan evidencias que los efectos del cAMP y laglucosa son ejercidos a nivel transcripcional. La vida media del mRNA de ALA-S no semodifica en presencia de ellos. Mas aún, los efectos de cAMP y la glucosa semanifiestan en el análisis de tranfecciones transientes de células HepG2 con un vectorque contenie la región promotora del gen ALA-S clonada en 5’ del gen de lacloramfenicol acetiltransferasa. En este tipo de experimentos hemos confirmado ademásque el efecto de cAMP requiere la activación de la proteina quinasa dependiente decAMP ya que hemos obtenido resultados similares cotransfectando con la subunidad Cde la PKA. Finalmente se demuestra que la activación de la PKC actúa negativamentesobre el mRNA de ALA-S, probablemente a nivel transcripcional, de acuerdo a lasdeterminaciones por Northern, slot blot y análisis de transfecciones transientes de células HepG2. Asimismo se observa que el efecto del éster de forbol TPA anula el efectoinductor del cAMP. Es posible que ambos caminos de transducción de señales, queinvolucran la activación de PKA y PKC, estén interconectados en la regulación de laexpresión génica de ALA-S.

Descripción: La placenta produce un amplio número de moléculas esenciales para el establecimiento y el mantenimientodel embarazo. En este contexto, la leptina presenta un papel importante en la reproducción. La leptina es una proteína de 16 kDa codificada por el gen LEP, y fue descripta originalmente como unamolécula producida por el tejido adiposo involucrada en la regulación del metabolismo a nivel central. Sinembargo, se ha sugerido que esta proteína presenta otras funciones durante la gestación, particularmente en laplacenta, donde se detectó su expresión y la de sus receptores. La síntesis de leptina en células trofoblásticas está modulada por diferentes agentes endógenos, pero aún nose comprende totalmente cómo se regula su expresión génica. En este trabajo, se analizó el efecto del 17β-estradiol (E2) sobre la expresión de leptina en la placentahumana utilizando dos modelos experimentales: la línea celular BeWo, derivada de coriocarcinoma, y explantosde placentas humanas a término. Se ha observado la estimulación de la expresión de leptina endógena en respuesta a E2, a través de ensayosde Western blot y qRT-PCR. Este efecto fue dosis y tiempo dependiente e involucraría a los receptores deestrógenos, ya que el antagonista ICI 182,780 inhibió la acción del E2. Además, experimentos de transfeccióntransitoria mostraron que el tratamiento con E2 aumentó la actividad transcripcional del promotor de leptina, yla región promotora comprendida entre -1951 pb y -1847 pb sería necesaria y suficiente para observar losefectos del E2. La acción de E2 también involucraría receptores de membrana, ya que la incubación con este esteroidepromovió la fosforilación de MEK, ERK 1/2 y AKT en explantos placentarios. Apoyando esta hipótesis, el análogo E-BSA, que no atraviesa la membrana plasmática, indujo la expresión de leptina en ambos modelosexperimentales, y activó rápidamente las vías de señalización de las MAPKs y PI3K. Los efectos del E2 y del E-BSA fueron bloqueados por inhibidores farmacológicos de las vías MAPKs y PI3K asícomo también a través de la expresión de mutantes dominantes negativas de MEK, ERK 1/2 y AKT, sugiriendoque estas cascadas de señalización estarían involucradas en la regulación de la expresión de leptina. Por otro lado, se ha demostrado la presencia del receptor de estrógenos alfa (ERα) en el núcleo y en lamembrana plasmática de las células BeWo. Esta proteína podría mediar los efectos genómicos y no genómicosdel E2. Apoyando esta idea, la sobreexpresión de ER potenció los efectos del E2, mientras que la disminuciónde los niveles de ERα a través de un ARN de interferencia específico disminuyó los efectos del E2 y del E-BSAsobre la expresión de leptina. El análisis in silico del promotor de leptina mostró posibles sitios ERE y half ERE para la unión de receptores ER, además de distintas secuencias que podrían interactuar con los factores de transcripción AP-1, CREB, NFκBy Sp1. La expresión de isoformas wild type o mutantes dominantes negativas de estas proteínas mostraron unaposible interacción entre ellas y los ERs, la cual podría estar implicada en la regulación de la expresión deleptina placentaria. En conclusión, este trabajo demuestra que el E2 induce la expresión de leptina en células trofoblásticas através de acciones genómicas y no genómicas, donde participan receptores de estrógenos de membrana ynucleares, distintos factores de transcripción y diferentes vías de transducción de señales. Estos mecanismospueden estar desregulados en distintas patologías del embarazo.

Descripción: El receptor acoplado a proteína G vGPCR es expresado por el herpesvirus asociado al sarcoma de Kaposi (KSHV). Es un receptor constitutivamente activo y oncogénico que subvierte la proliferación celular y dispara cascadas de señalización que inducen la transformación celular en el sarcoma de Kaposi (KS). La enzima Ciclooxigenasa-2 (COX-2) juega un rol importante en el proceso de inflamación y en la progresión del cáncer, y se encuentra altamente expresada en lesiones de KS. Con el objetivo de dilucidar los componentes moleculares que participan en los caminos de señalización que convergen en COX-2 encontramos varias líneas de evidencia que muestran que vGPCR regula tanto la expresión como la actividad de COX-2 a través de la señalización por MAPK. Nuestros resultados muestran que la expresión de vGPCR dispara señales que aumentan los niveles de COX-2 a través de un efecto dual entre su promotor y la región del 3’UTR que controla la estabilidad del ARN mensajero maduro. Ambos eventos se encuentran mediados a través de las kinasas ERK1/2 y p38, siendo estas intermediarias en la señalización disparada por vGPCR. Por otro lado, demostramos que la inhibición farmacológica de COX-2 en células transformadas por vGPCR afecta la expresión del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) y la angiogénesis disparada por dicho receptor. Estos resultados contribuyen a dilucidar la naturaleza de la regulación disparada por el receptor oncogénico vGPCR y muestran a COX-2 como un factor crítico en la oncogénesis y un posible target para la prevención y tratamiento de la oncogénesis disparada por el KSHV.

Descripción: Fil: Fridman, Osvaldo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Tesone, Marta. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: La GST de Triatoma infestans es susceptible a la inhibición por algunosflavonoides y colorantes del trifenilmetano. De estos compuestos laquercetina la sulfobromoflaleína y el azul de timo] resultaron ser los máspotentes. El tipo de inhibición presentado por estos compuestos fue: competitiva conrespecto al CDNB y no competitiva con respecto al GSH para la Q y el ATy no competitiva con respecto a los dos sustratos para la SBF. La GST de Triatoma infestans también es susceptible a la inhibición poraductos formados entre saligeninas cíclicas fosforadas y glutatión. Sesintetizó y purificó un aducto entre el salitión y el GSH y se identificó alinhibidor como el S-(2-hidroxi-bencil)-glutatión. El tipo de inhibición presentado por este compuesto y otro GS-bencilsustituido comercial fue: no competitiva con respecto al CDNB ycompetitiva con respecto al GSH. La toxicidad en vinchucas del fenitIotión más un inhibidor de GST, laquercetina, demostró un factor de sinergismo de dos respecto a la toxicidaddel fenitrotión sólo. También se demostró que el AT sinergiza la toxicidad del fenitrotión cuandoéste es administrado por distintas vías (tópico, oral, inyección) así comocuando se utilizan distintos estadios de Triatoma infestans. La GST de Triatoma infesrans es susceptible a la inducción de su actividadmediante la administración de diversas sustancias por diferentes vías. Loscompuestos más promisorios fueron : DDT, Salitión, Fenitrotión, Malatión, I-3-A, I-3-C y Flavona. La toxicocinética a 24 hs del 14C-Fenitrotión y 14C-Fenitrotión + Quercetinaen vinchucas demostró que: Absorción: La penetración a través de la cuticula es la primera barrera dedefensa del insecto en la intoxicación por insecticidas de contacto, ya que entre 8-11% de la dosis original se extrae por wash-off y entre 4-8% queda retenidoen la cutícula. No se encuentran diferencias significativas entre los dostratamientos (p > 0.05). Excreción: El 70% de los insectos tratados presentan una diuresis menor del 17% de la dosis aplicada. Los dos tratamientos demuestran una diferenciasignificativa del 5% (p < 0.05). El tratamiento combinado resulta en unaexcreta mayor que no sería suficiente como defensa fisiológica en laintoxicación por insecticidas organofosforados ya que presentan una mayorinhibición de la Ache y mayor mortalidad. Blotransformación: El contenido de compuestos liposolubles en los dostratamientos presenta diferencias significativas (p < 0.05). En efecto laradiactividad interna soluble en éter etílico del tratamiento combinado sugiereque la quercetina favorecería en un 4% la presencia de formas no polares,básicamente fenitrotión y fenitonón, dentro de los insectos. La radiactividad interna debida a metabolitos polares (hidrosolubles) presentauna diferencia significativa (p < 0.05) entre los dos tratamientos. La presenciade quercetina provoca un 8% menos de metabolitos polares. Esto sugiere quela acción de la quercetina inhibiría parcialmente la detoxificación. Entrada al blanco: La proporción de insecticida que penetra en el SNC medidacomo la radiactividad presente en la cabeza del insecto resultó del 1% enambos tratamientos. Toxicodinámia: (unión al receptor) Consecuencias de la entrada al blanco: Se verifica in vivo una inhibiciónsignificativamente mayor (p < 0.05) en los tratamientos combinados. Lapresencia de quercetina o azul de timol favorecerían la inhibición de la Acheen los insectos tratados. El 30% de los insectos presenta una diuresis mayor al 33% y en esos casos nose encuentran diferencias significativas en ninguna de las etapas de latoxicocinética La degradación del l4C-Fenitrotión in vitro, medida como la formación demetabolitos hidrosolubles, producidos por la GST demostró serimportante. Esto estaría asociado a una menor toxicidad del insecticida loque podría justificar el sinergismo observado al inhibir este caminodetoxificante. Cuando se estudia la degradación del 14C-Fenitrotión enpresencia de inhibidores de GST la producción de metabolitoshidrosolubles cae a los valores controles (sin GSH o sin enzima). De los metabolitos hidrosolubles, el desmetil-fenitrotión sería elmayoritario. Esto concuerda con lo hallado en mamíferos donde la GST deconejo (comercial) produce una banda con igual Rf que la GST devinchuca la cual disminuye en presencia de quercetina (inhibidor de GST). En el estudio de la degradación del 14C-Paratión no se observó diferenciascon respecto a los controles en la producción de metabolitos hidrosolublescuando se incubó con GST. Es sabido que las GST de mamíferos degradancon menor eficiencia los grupos CH3-CH2-O-P que los CH3-O-P lo queparece concordar con el caso de la GST de vinchuca. Tampoco se observó diferencias en la intensidad de las bandas encontradasen TLC. Probablemente en la degradación del l4C-Paratión participenotros sistemas enzimáticos (esterasas) que no utilizan al GSH comocofactor. La GST microsomal de vinchuca no demostró diferencias detectables en lametabolización de ninguno de los dos l4C-OP utilizados. Al igual que lo observado en el metabolismo in vitro, el metabolitoprincipal del 14C-Fenitrotión producido por las GST in vivo resultó ser eldesmetil-fenitrotión. En efecto, cuando se coadministró quercetina laintensidad de la banda obtenida sobre la placa de TLC disminuyó. Conmenor Rf que el desmetil-fenitrotión aparece otro metabolito que podríadeberse a la acción de la GST. Los restantes metabolitos, de Rf aúnmenores, se deberían a la acción de las MFO según la evidencias obtenidasusando BP. Finalmente la evidencia experimental obtenida revela que las vinchucasresultan más susceptibles a la intoxicación por fenitrotión cuando se lesinhibe la GST. El uso de inhibidores como la quercetina provoca unamenor detoxificación del fosforado y una mayor inhibición de la Achecerebral.

Descripción: La ingesta es un proceso altamente regulado. Su control es multifactorial y fundamental para el mantenimiento del equilibrio energético. El hipotálamo es el responsable de recibir señales aferentes, periféricas y centrales, orexigénicas y anorexigénicas, que reflejan el estado nutricional del animal y de integrarlas para regular el apetito y el gasto energético. Entre estas múltiples señales, la prolactina cumple un papel fundamental, aunque no totalmente dilucidado, dada la dificultad de estudiar su rol fisiológico utilizando un enfoque diferente al farmacológico. Para evaluar el efecto de la hiperprolactinemia en el control hipotalámico de la ingesta de alimentos y el metabolismo energético, utilizamos un modelo de ratón con deleción específica del receptor de dopamina D2 en los lactotropos (lacDrd2KO). En ausencia del tono inhibitorio que la dopamina ejerce sobre la síntesis y secreción de prolactina, las hembras lacDrd2KO desarrollan hiperprolactinemia crónica y evidencian niveles de ingesta aumentados desde los 3 meses de edad y, adiposidad y peso corporal aumentados desde los 5. En este trabajo se evaluó la progresión del fenotipo, y el posible papel de la prolactina, estudiando parámetros metabólicos a dos edades, 5 y 10 meses. A los 5 meses de edad, las hembras lacDrd2KO son hiperprolactinémicas. Los niveles de ingesta se encuentran significativamente aumentados, aunque, la obesidad no es evidente ya que el peso corporal aumenta solo marginalmente. A los 10 meses de edad, la hiperprolactinemia se mantiene. La señalización intracelular constantemente activada por prolactina endógena se evidencia en ratones lacDrd2KO por un aumento de la fosforilación basal de STAT5b en áreas hipotalámicas relacionadas con la ingesta de alimentos, como son el núcleo arcuato (ARC), dorsomedial (DMN) y ventromedial (VMN). Además, las hembras lacDrd2KO desarrollan hiperleptinemia y un fenotipo de obesidad mórbida, lo que sugiere una desregulación en aquellos mecanismos de control que la leptina ejerce sobre el metabolismo energético. La resistencia a leptina en hembras lacDrd2KO de 10 meses de edad se evidenció en la incapacidad de reducir la ingesta de alimentos, consistente con la respuesta alterada en la fosforilación de STAT3 en el hipotálamo medio basal (MBH, incluye el ARC y el VMN). Por ello, se estudiaron los niveles de expresión de genes orexigénicos, anorexigénicos e implicados en el control del metabolismo energético. Se observó un aumento en los niveles de expresión del receptor de prolactina (Prlr) en el ARC de hembras lacDrd2KO de 5 meses de edad y un incremento de dos genes orexigénicos, el neuropéptido Y (Npy) y el péptido relacionado con la proteína Agoutí (Agrp) y en ese mismo núcleo hipotalámico, los 10 meses. A esta edad, Npy se encontró también aumentado en el DMN lo que podría contribuir al aumento en el nivel de ingesta y a la disminución en los niveles de expresión de Ucp1, proteína desacoplante de mitocondrias, en el tejido adiposo pardo, ambos eventos favorecen el incremento de peso observado. En este contexto, desafiamos a hembras lacDrd2KO y control de 3 meses de edad, a dos meses de dieta rica en grasa con el objetivo de evidenciar cambios fenotípicos posiblemente enmascarados por mecanismos fisiológicos de control homeostático del balance energético. Hembras lacDrd2KO de 5 meses de edad que recibieron una dieta rica en grasa a edades tempranas, mostraron un mayor nivel de ingesta y mayor consumo de calorías que hembras control bajo el mismo tratamiento. Encontramos que mientras que las hembras control y lacDrd2KO que recibieron alimento regular, mantuvieron su peso constante a lo largo del protocolo. Sorprendentemente, las hembras lacDrd2KO que recibieron una dieta rica en grasa, tuvieron depósitos de tejido adiposo blanco y pardo de mayor tamaño que las hembras control bajo el mismo tipo de dieta, lo que fue acompañado por un aumento de peso significativamente mayor. Asimismo, observamos que en estas hembras la expresión de Ucp1, se encontraba significativamente disminuida en el tejido adiposo pardo interescapular, lo que indica capacidad termogénica reducida. La falla en este mecanismo compensatorio que mantiene la homeostasis energética, podría explicar, en parte, el aumento en el peso corporal. Por otra parte, el nivel de expresión del Prlr en este tejido se encontraba aumentado, lo que sugiere una posible acción directa de la prolactina sobre los adipocitos pardos. Este trabajo revela un papel importante de la prolactina en la ingesta de alimentos y la acumulación de adiposidad, que puede ser fundamental en las adaptaciones metabólicas a la preñez y la lactancia, pero que en condiciones de hiperprolactinemia patológica pueden predisponer a alteraciones metabólicas. Nuestros resultados sugieren que, niveles de prolactina patológicos impactan sobre núcleos hipotalámicos específicos donde median la alteración en los niveles de expresión de genes orexigénicos, anorexigénicos, resistencia a leptina y desregulación de circuitos hipotalámicos que controlan el balance energético del tejido adiposo.

Descripción: La catepsina-L (CTSL) es una proteasa lisosomal de expresión ubicua que presenta funciones diversas y específicas. Entre ellas, participa en la selección positiva de las células T CD4+ y en la homeostasis de las células T. Utilizando como modelo experimental ratones CTSLnkt/nkt, portadores de una deleción en el gen que codifica para la CTSL, estudiamos la influencia de la CTSL sobre la homeostasis de las células B. Observamos un incremento en el número de células B en los ganglios linfáticos (GL), el bazo y la sangre periférica (SP) de los ratones CTSLnkt/nkt. En el bazo, este incremento estuvo restringido a las células B transicionales T1 y T2 y a las células B de la zona marginal (ZM). No se detectaron alteraciones en los niveles de proliferación y apoptosis basales de las células B periféricas en los ratones CTSLnkt/nkt. La frecuencia y el número de células B en los distintos estadios de maduración de la médula ósea (MO) en los ratones CTSLnkt/nkt resultó normal. Sin embargo, experimentos in vitro e in vivo demostraron que la linfopoyesis B se encuentra incrementada en los ratones CTSLnkt/nkt. Tanto los precursores de las células B como el microambiente de la MO de los ratones CTSLnkt/nkt contribuyen a dicho incremento. Además la emigración de células B de la MO hacia el bazo se encuentra incrementada en los ratones CTSLnkt/nkt. El conjunto de estos resultados indica que la CTSL regula negativamente la producción y exportación de los linfocitos B por la MO y el número de células B periféricas.

Descripción: El primer capítulo de esta tesis se diseñó con el objetivo de estudiar si la administración local de S1P en el ovario de ratas preñadas bloquea efectivamente la luteólisis inducida por prostaglandina F2 alfa (PGF2α). Se utilizaron ratas preñadas en el día 19 de la gestación a las cuales se les administró en forma local S1P o su vehículo y dos horas después una dosis luteolítica de PGF2α. Los animales se sacrificaron a las 0, 4 y 36 hs de la PGF2α. Se midió la actividad de las caspasas que contribuyen a los eventos iniciales (caspasa -2, -8 y -9) y finales (caspasa-3) de la apoptosis en grupos de CLs de cada animal. Se evaluó también la expresión de las formas fosforiladas de AKT y ERK y los niveles del factor de necrosis tumoral alfa (TNF- α) mediante la técnica de ELISA. Además se estudió la muerte celular por la técnica de ME y TUNEL y la funcionalidad luteal midiendo como parámetro la progesterona (P4) luteal. La actividad de la caspasas -2, -3 y -8 aumentó significativamente a las 4 horas de la inyección de PGF2α, no así la actividad de caspasa -9. Además aumentó el número de células apoptóticas. De forma contraria la expresión de pAKT y TNF-α y el contenido de P4 luteal disminuyó considerablemente. El tratamiento con S1P pudo prevenir el incremento en la actividad de las caspasas -2, -8 y -3 inducido por PGF2α, redujo el número de células apoptóticas, restauró la funcionalidad luteal y aumentó la expresión de pAKT, pERK y TNF-α. El tratamiento con PGF2α incrementó el número de células luteales con signos avanzados de apoptosis, (por ejemplo: fragmentación nuclear, condensación de la cromatina y la presencia de cuerpos apoptóticos) a las 36 horas de la PGF2α. En cambio S1P pudo suprimir estos efectos y además aumentó la densidad vascular en los CL. Estos resultados demuestran, por primera vez, que la administración in vivo de S1P es capaz de bloquear la acción luteolítica de la PGF2α en ratas preñadas. El segundo capítulo de esta tesis se diseñó con el objetivo de estudiar la expresión y la localización celular de los receptores Notch1, Notch4 y el ligando Dll4 en CL de ratas durante la gestación y la luteólisis inducida por PGF2α. También estudiamos el contenido de P4 sérica y de proteínas luteales relacionadas a la apoptosis luego de la administración local de un inhibidor de esta vía llamado DAPT (N- [N-(3,5-difluorophenacetyl- L-alanyl)]-S-phenylglycine t-butyl ester). Se detectó marca específica de los receptores NOTCH1 y 4 principalmente en las células luteales grandes y pequeñas. Además la inmunomarcación fue evidente en los núcleos de las células luteales, de forma coincidente con el hecho de que el dominio intracelular de Notch (NICD) una vez activo se transloca al núcleo. Además, se detectó marca citoplasmática difusa para DLL4 en las células luteales grandes y pequeñas, coincidiendo con el hecho de que Dll4 se somete a la degradación proteolítica después de unión al receptor. La expresión del ARNm de Notch1, Notch4 y Dll4 en CL aislados en el día 19 de preñez se redujo significativamente después de la administración de PGF2α. En forma coincidente, la PGF2α disminuyó el fragmento activo de los receptores NOTCH1 y 4, por el contrario, no se detectaron cambios significativos en los niveles proteicos del ligando DLL4. La administración intraovárica de DAPT disminuyó los niveles séricos de P4, aumentó los niveles del fragmento activo de la caspasa-3 y la relación BAX: BCL2 24 horas después del tratamiento. También se demostró que la inhibición in vitro de la síntesis de P4 en CL de ratas preñadas con aminoglutetimida (inhibidor específico de la enzima P450scc) disminuyó el contenido proteico de NOTCH1, pAKT, y pERK. Sin embargo no se observaron diferencias significativas en los niveles proteicos de NOTCH4 y el factor de transcripción HES1. Estos resultados respaldan el rol luteotrópico de la vía de señalización de Notch para promover la viabilidad celular y la esteroidogénesis luteal, y sugieren que la hormona luteolítica PGF2α puede actuar, en parte, disminuyendo la expresión de algunos miembros del sistema Notch.

Descripción: El objetivo de esta tesis fue el estudio de factores regulatorios que controlan la maduración de los ovocitos. Para investigar el papel de las células de la granulosa se caracterizó la línea celular BGC-1, obtenida por inmortalización espontánea de cultivos primarios de células de la granulosa bovinas, como modelo para el mantenimiento del arresto meiótico de ovocitos bovinos in vitro. Se determinó que las células BGC-1 inhiben el reinicio de la meiosis y la expansión del cumulus de los complejos cumulus-ovocito de manera mas eficiente que cultivos primarios de células de la granulosa, y que este efecto es específico. Se estableció que las células BGC-1 producen factor/es de naturaleza soluble y lábil, que actúan a través de las células del cumulus para inhibir el reinicio espontáneo de la meiosis in vitro. Esta inhibición es completamente reversible y, bajo el efecto inhibitorio de las células BGC-1, el reinicio de la meiosis puede ser inducido por FSH. En la segunda parte de esta tesis se estudió el rol de los catecolestrógenos, metabolitos endógenos del estradiol, durante la maduración de los ovocitos. Se pudo comprobar que la presencia de 2-metoxiestradiol durante la maduración de los ovocitos afecta el subsecuente desarrollo embrionario temprano. Se estableció que el 2-metoxiestradiol interacciona con los microtúbulos induciendo alteraciones en el huso meiótico de los ovocitos que afectan la normal segregación de los cromosomas luego de la fecundación. Los desbalances cromosómicos generados llevan a la inhibición del desarrollo embrionario en el estadio de mórula. Debido a que el 2-metoxiestradiol puede incrementarse en el fluido folicular en respuesta a ligandos del AHR, concentraciones intraováricas anormalmente altas podrían estar involucradas en los síndromes de infertilidad asociados a algunos contaminantes ambientales que son conocidos activadores de AHR.

Descripción: Fil: De Robertis, E. M. F.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Se evaluó la capacidad de Saccobolus saccoboloides (Pezizales, Ascomycetes) de producir el sistema celulolítico completo en medio de cultivo líquido sintético. La caracterización de las enzimas producidas permite afirmar que este hongo coprófilo es un verdadero agente celulolítico, ya que su complejo enzimático presenta las tres actividades necesarias para la digestión del polímero (β-1,4 endoglucanasa, β-1,4 exoglucanasa y β-glucosidasa), y que estas enzimas son extracelulares, termoestables y (a diferencia de las de otros organismos) poco inhibidas por producto final. El crecimiento fue alto en glucosa y celobiosa, sin producción de enzimas, en tanto que en celulosa hubo muy buen crecimiento y actividad enzimática, evidenciándose diferencias de respuesta según el medio elegido. La nutrición nitrogenada no afecta la producción enzimática, sino el crecimiento: se investiga, por lo tanto, el control por fuente carbonada, en cultivos de reemplazo. En la inducción, cuando no pudo medirse endoglucanasa, se utilizó un método alternativo de degradación de CMC (Carboximetilcelulosa) en placa (CMCasa). La celulosa fue el mejor inductor, seguida por la lactosa. El sistema no se induce en presencia de glucosa, sorbosa, maltosa ni almidón, y se detecta una mínima actividad en xilano. La CMC es un pobre inductor, en tanto que la celobiosa tiene un efecto diferencial. Cuando se ensayó el efecto represor de los no inductores se ve que el sistema no se reprime fácilmente y que la glucosa y celobiosa tienen efecto diferencial. Finalmente la mezcla de dos inductores tiene un esperado efecto negativo. Las enzimas se producen en todos casos por síntesis de novo, las dos formas diferentes de β-glucosidasa se regulan independientemente, y existe inducción cruzada con el complejo xilanasa. Estos datos, junto al análisis de isoenzimas producidas en cada condición permite postular un novedoso modelo regulatorio que explicaría como los hongos filamentosos son estimulados a producir las hidrolasas específicas para degradar celulosa.

Descripción: El estroma uterino experimenta cambios morfológicos y funcionales que dan lugar a ladecidua, un tejido compacto cuya función es el correcto progreso de la preñez. Elreceptor de progesterona (RP) y el receptor de estradiol (RE) participan en elcrecimiento y la diferenciación de las distintas áreas deciduales del endometrio de larata. En esta tesis se estudia el papel de estos receptores, sus vías de señalización yla participación de nuevas moléculas involucradas en las etapas iniciales de ladecidualización. Caracterizamos, mediante el uso de ARN pequeño de interferenciaespecífico, el papel de una nueva proteína regulada en la decidualización, la proteínade unión a ARN CSD-C2. Encontramos que el bloqueo del RP, mediante suantagonista onapristona, produjo la reabsorción de los sitios de implantación (SIs) y ladisminución en la expresión proteica del RP, RE, PCNA, DESMINA y CCND3, en losniveles de ARNm de Prl8a2, y de Hand2 y Bmp2, y en la activación de ERK. El efectodeletéreo de onapristona fue parcialmente contrarrestado por el antagonista del REfaslodex, restituyendo los niveles de los receptores de hormonas, de los marcadoresde proliferación y diferenciación analizados, y aumentando compensatoriamente losniveles de Hand2 y Bmp2, y pERK. El tratamiento de ratas preñadas con el inhibidorde pERK, evidenció su importancia en la formación de la decidua, manteniendo lacapacidad proliferativa de las células estromales y limitando su diferenciación en lasdistintas áreas deciduales. Estos hallazgos muestran la importancia del balance deseñalización de los receptores hormonales, a la vez que describen nuevas moléculasresponsables de la decidualización endometrial durante la preñez temprana.

Descripción: La proteína quinasa Akt está involucrada en una gran variedad de procesos celularestales como supervivencia, crecimiento, proliferación, migración, angiogénesis,metabolismo, resistencia a estrés, entre otros. Durante el desarrollo de esta tesisdoctoral descubrimos una nueva modificación post-traduccional para esta quinasa, laconjugación a SUMO. Realizando mutaciones puntuales pudimos mapear los sitiosblanco de SUMOilation en esta proteína, los aminoácidos lisina 276 y 301. Una proteínadoble mutante en K276R y K301R (2KR) mostró niveles disminuídos de SUMOilación. De modo interesante, la sobre-expresión de Akt1 2KR no aumenta, y hasta inhibe, losniveles de fosforilación de un patrón global de sustratos de Akt. En este sentidodemostramos que la conjugación de SUMO a Akt es necesaria para la mayoría de losprocesos estudiados en los que esta quinasa participa, tales como activación del factorde transcripción NFkB, regulación del splicing alternativo, progresión del ciclo celular ysupervivencia celular. Sin embargo, la función inhibitoria de Akt sobre el factor detranscripción FOXO1 no depende de su SUMOilación. Por otro lado, alteraciones en losniveles de fosforilación de Akt1 no afectan los niveles de SUMOilación de esta quinasa, yviceversa. Por último observamos altos niveles de SUMOilación en una variantehiperactiva de esta quinasa (Akt E17K) encontrada en diferentes tumores humanos. Estahiperactividad de Akt E17K se ve afectada por la disminución en sus niveles de SUMOilación. Estos resultados son muy alentadores y permitirán en el futuro intentardeterminar la relación de la conjugación de SUMO a Akt con la participación de estaproteína en el desarrollo y progresión tumoral.

Descripción: Fil: Pecci, Adali. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: El Toxoplasma gondii, es un parásito protozoario que infecta al hospedador mediante laingestión oral de quistes tisulares u ooquistes induciendo una respuesta inmune en el intestinoy sistémica del tipo Thl, produciendo inmunidad contra una re-infección. La infecciónexperimental oral de diferentes cepas de ratones resulta en dos modelos interesantes deregulación de la respuesta inmune. Los ratones C57BL/6 (H-2b) desarrollan una ileitisinflamatoria aguda (IBD), caracterizada por la sobreproducción de IFN-γ y la síntesis deóxido nítrico en el intestino delgado dentro de los primeros siete días que, dependiendo de ladosis parasitaria inicial, puede producir la muerte debido al proceso inflamatorio. En cambiolos ratones C3H/HeJ y CBA/J (H-2k) muestran solo pequeños procesos inflamatorios,cursando una infección aguda normal con establecimiento de la infección crónica. En el presente estudio, se demuestra que los linfocitos intraepiteliales (IELs) primadoscon antígeno de T. gondii previenen la ileitis aguda en ratones susceptibles (C57BL/6), e invirro reducen la producción de quemoquinas inflamatorias por enterocitos infectados, eventoque estaría mediado por el TGF-β que secretan. Los IELs serían un componente esencial en lahomeostasis del intestino luego de la infección oral con este parásito. Como un primer acercamiento en el conocimiento de la respuesta que este parásitogenera en ratones que cursan una infección aguda normal, se caracterizó la respuesta de lalínea celular enterocítica MODE-K (H-2k)frente a la infección para estudiar su valor comomodelo in vitro. Estas células mostraron activarse frente a la infección con taquizoitos del T.gondii, secretando un patrón de citoquinas y quemoquinas cuya cinética resulta cepaespecífica. Los IELs derivados de los ratones CBA/J mostraron reducir la expresión dequemoquinas en los enterocitos infectados, y este efecto fue observado tanto en IELs noprimados como primados. Estos IELs de ratones naïve, a diferencia de los provenientes deratones susceptibles, producirían citoquinas anti-inflamatorias en forma endógena lo cualpodría ser un componente importante en la resistencia al desarrollo de la ileitis aguda frente ala infección. La segunda parte de esta tesis estuvo enfocada al estudio de la habilidad de antígenosespecíficos del parásito de estimular in vitro una respuesta a nivel sistémico y de mucosasluego de una infección oral de ratones susceptibles (C57BL/6) y resistentes (BALB/c [H-2d)con el fin de evaluar su posible uso en el desarrollo de vacunas. Para esto se usaron formas recombinantes de los antígenos ROP2, GRA4 y TgPI. Los antígenos rROP2 y rGRA4mostraron inducir una respuesta humoral, e in vitro estimularon una respuesta celular encélulas de nódulos mesentéricos linfáticos y de bazo del tipo Thl, que resultaron variablessegún la cepa de ratón que fue infectada. En cambio el antígeno rTgPI genera una bajarespuesta inmune durante la infección. Notablemente, la cepa de ratones C57BL/6 produjoaltos niveles de IFN-γ y una baja producción de IL-5, mientras que en BALB/c la producciónde ambas citoquinas fue menor o nula respectivamente. Estos antígenos fueron utilizados en ensayos de inmunización de ratones de las cepas C57BL/6 y C3H con el fin de estudiar su valor inmunoprotectivo frente a la infección oralcuando se los combina con hidróxido de aluminio como adyuvante. rGRA4 indujo unaprotección parcial en ambas cepas de ratones, generando una respuesta predominante del tipo Thl mientras que rROP2 confirió protección sólo en la cepa C3H, siendo ésta más importanteque rGra4. La inmunización con una mezcla de rROP2 y rGRA4, como con una proteínaquimérica rROP2-rGRA4, indujo una protección parcial similar a la obtenida con el antígenorGRA4 solo (C57BL/6) o rROP2 solo (C3H). Finalmente, el valor inmunoprotectivo derGRA4 combinado con aluminio fue comparado con el producido por un sistema de vacunasde ADN, obteniéndose valores similares de protección parcial. En otro estudio, rTgPI mostróinducir una inmunidad protectora en ratones C3H tanto a nivel de formación de quistes comoante infecciones letales, sugiriendo una inducción de inmunidad durante la etapa aguda de lainfección. Estos resultados sugieren que estos antígenos podrían considerarse buenoscandidatos para el desarrollo de una vacuna multi-antigénica basada en aluminio.

Descripción: Fil: De Titto, Ernesto Horacio. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Las plantas utilizan la luz no sólo como fuente de energía en la fotosíntesis sinotambién como fuente de información del ambiente circundante. Las señales lumínicas pueden ser percibidas por las plantas si estas poseen receptores adecuados. El fitocromo (phy) es un fotorreceptor que actúa principalmente en la región del espectro del R (rojo) y RL (rojo lejano). En Arabidopsis thaliana hay cinco fitocromas (phyA-phyE). Las señales lumínicas percibidas por los fitocromos afectan el crecimiento y desarrollo de las plantas durante todo el ciclo de vida. Una de las características distintivas de las respuestas a la luz está dada por los cambios en la sensibilidad que se producen en distintos contextos del desarrollo. El objetivo de esta tesis es identificar los mecanismos involucrados en la regulación de la sensibilidad a la luz, mediante la caracterización fisiológica y genética de mutantes de Arabidopsis thaliana para comprender las implicancias de las alteraciones en su capacidad de respuesta a la luz. En esta tesis se caracterizaron nuevos componentes genéticos de la regulación de la sensibilidad de las respuestas a la luz mediadas por el phyA, que actúa en dos vías de señalización VLFR y HIR. Algunos de los mutantes estudiados fueron encontrados por su efecto sobre la acción del phyA, pero no se sabía si afectaban el VLFR y/o HIR como el mutante spa1. Otros eran conocidos porque presentaban morfología alterada en la planta adulta o defectos en el tiempo a floración pero no habían sido vinculados al phyA como el cp3 y gi5. Finalmente el eve2 es un nuevo locus identificado en esta tesis. Los resultados de esta tesis muestran que los mutantes cp3, spa1 y eve2 presentan alta sensibilidad a la luz. El mutante cp3 presenta un VLFR aumentando sin afectar el HIR en la señalización del phyA. El mutante spa1 aumenta tanto las respuestas VLFR como las HIR pero el efecto de la mutación es mucho más pronunciado en el VLFR. El mutante eve2 aumenta las respuestas VLFR y si bien presenta HIR normal afecta la transición del VLFR al HIR; eve2 presenta un efecto más generalizado que el resto de los mutantes estudiados ya que afecta de alguna manera las señales mediadas por otros fotorreceptores. El CP3, SPA1 y EVE2 serían componentes negativos en la señalización del phyA. El mutante gi, presenta atenuadas las respuestas en el VLFR y esto sugiere que actuaría como un regulador positivo en la señalización del phyA. Debido a la participación de GI en los ritmos circadianos y en la inducción de la floración por la vía fotoperíodica, estudiamos el efecto de la mutación en el ritmo de la sensibilidad a la luz por parte del phyA. Los resultados muestran que el efecto del GI en la señalización del phyA sería independiente de su rol en el reloj. La versatilidad en las respuestas mediadas por el phyA pone de manifiesto la existencia de finos mecanismos de regulación que les permiten a las plantas responder en forma precisa a las señales del ambiente lumínico y en virtud de esa información ajustar el crecimiento y desarrollo ignorando cambios del ambiente que no constituyan verdaderas señales.

Descripción: Los AG son muy importantes para la homeostasis celular, ya que cumplen funcionestanto estructurales formando parte de los fosfolípidos de las membranas, así comoenergéticas siendo una gran fuente de enregía. Los mamíferos carecen de la maquinaria enzimática necesaria para la síntesis de ciertos AG, por lo que se losdenomina "esenciales". Estas especies requieren que estos AG sean provistos fundamentalmente por los vegetables e incorporados a través de la dieta. A partirde ellos, por reacciones de elongación y desaturación, se sintetizan nuevos AG. Estas últimas reacciones están catalizadas por enzimas denominadas desaturasas, las cuales introducen dobles ligaduras en las cadenas carbonadas de los mismos. Estas dobles ligaduras pueden ser introducidas en distintas posiciones, por lo cual las desaturasas se denominan Delta 5, Delta 6 o Delta 9 Desaturasa, segúngeneren el doble enlace a 5, 6 ó 9 carbonos de distancia desde el extremo carboxilo terminal, respectivamente. Se ha descripto que en la Diabetes Mellitus tipo I además de estar alterada la composición lipídica, también se encuentra afectada la actividad desaturante. Tanto las complicaciones vasculares, renales como neurológicas están directamente relacionadas con dichas alteraciones. Por esta razón, surge elinterés de estudiar los mecanismos involucrados en las alteraciones de lasenzimas desaturasas. El objetivo del presente trabajo fue profundizar el estudiode las modificaciones regulatorias que ocurren sobre la Delta 6 Desaturasahepética de rata a nivel de la transcripción y/o de procesos post-transcripcionalesen modelos animales de Diabetes Mellitus tipo I, mediante las técnicas de Northen blot y Transcriptional run-on-assay. Se encontraron niveles disminuidos del ARNm de la Delta 6 desaturasa comoasí también de su tasa de transcripción. El tratamiento con insulina recuperadichos niveles. En lo que refiere a los mecanismos que participan en la recuperación mediada por la insulina, se vio que se encuentran involucradosintermediarios proteicos, entre los cuales se postulan varios, siendo SREBP-1c uno de los candidatos más firmes. Es por ello que el próximo paso seriamedir los niveles de SREBP-1c en los mismos modelos de animales analizados.

Descripción: La leucemia linfática crónica de células B (LLC-B) se caracteriza por laprogresiva acumulación de linfocitos B clonales, que presentan muy baja tasaproliferativa y resistencia a morir por apoptosis. El objetivo de este trabajo de Tesis fue investigar el papel que cumplen los leucocitos no-malignos comoposibles reguladores de la apoptosis de las células leucémicas. Por otro lado,considerando que las células LLC-B expresan receptores para el fragmento Fc dela IgG (RFCγ)y que es frecuente la presencia de complejos inmunes (Cl) en elsuero de los pacientes, se analizó el papel de los RFcγ en la modulación de lasobrevida de las células leucémicas. Los resultados obtenidos demuestran que los monocitos y las células NKson capaces de prolongar la sobrevida de las células leucémicas en cultivo através de distintos factores, tanto solubles como de contacto celular. Para tratarde identificar la producción de alguno de ellos se realizaron cultivos en presenciade anticuerpos neutralizantes anti-IFNγ,anti-IL-4 y anti-IL-10, encontrándose unamarcada heterogeneidad entre los distintos pacientes evaluados. La mismavariabilidad de respuesta se obtuvo al bloquear la interacción de CD40 con suligando mediante anticuerpos anti-CD40. En conjunto, estos resultados sugierenque la capacidad de los monocitos y las células NK de favorecer la sobrevida delas células leucémicas depende de una sumatoria de señales que parecen serparticulares de cada paciente. Cuando los cultivos de células LLC-B y leucocitos accesorios se llevaron acabo en presencia de Cl fue posible no sólo inhibir la apoptosis espontánea sinotambién la inducida agentes quimioterápicos como la fludarabina, el clorambuciloy la dexametasona. Es decir, que la activación de monocitos y células NK porentrecruzamiento de sus RFCγ estaría favoreciendo la acumulación del clonleucémico. Teniendo en cuenta que las células LLC-B sobre expresan la proteína antiapoptótica Bcl-2 y que la expresión de la misma se inhibe a medida que progresala apoptosis ¡n vitro, se examinaron los niveles de Bcl-2 en las células leucémicascultivadas con o sin leucocitos accesorios. Los resultados indican que lapresencia de monocitos y células NK retarda la down-regulación de Bol-2 en lascélulas leucémicas. Por el contrario, cuando la inhibición de la apoptosis de lascélulas LLC-B se da a consecuencia de la activación de los leucocitos accesoriospor Cl , el bol-2 no parece estar involucrado. La última parte de esta Tesis comprende el estudio de la expresión yfuncionalidad de los RFcγ expresados por las leucémicas. Los datos presentadosdemuestran que las células B-CLL expresan no sólo el RFcγIIb característico delas linfocitos B normales, sino también la isoforma RFcγIIa. Debido a que portandominios ITAM en su porción citoplasmática. los RFCγIIa transducen señales deactivación. Sin embargo, ni la utilización de distintos tipos de Cl, ni elentrecruzamiento selectivo de los RFCγIIa logró inducir la activación de las células LLC-B, medida como cambios en los flujos de calcio. Tampoco fue posiblemodular la apoptosis en las Leucémicas purificadas, Lo que sugiere que estereceptor no seria funcional en LLC-B.

Descripción: Los anfibios anuros tienen variaciones estacionales en los andrógenos y glucocorticoides (GCs) plasmáticos. En Rhinella arenarum la concentración plasmática de GCs aumenta durante el período reproductivo provocando una disminución en la síntesis de andrógenos vía un receptor citosólico (GR). El objetivo de esta tesis fue evaluar las variaciones estacionales en la sensibilidad testicular a la acción de los GCs. Para ello se estudiaron los cambios en la cantidad de GR así como el efecto de los andrógenos, los GCs y la melatonina en la regulación de dichos cambios. Los estudios de la interrelación entre la glándula interrenal y el testículo indicaron que la cantidad de proteína GR testicular varía estacionalmente y que los GCs regulan de manera positiva su propio receptor mientras que melatonina disminuye la unión del GC al GR y antagoniza el efecto de los GCs. En cambio, melatonina no disminuye la síntesis de andrógenos de manera directa. En la glándula interrenal, una concentración de andrógenos alta (período prerreproductivo) disminuye la síntesis de GCs. El estudio histológico de la glándula mostró que hay dos tipos de células esteroidogénicas que podrían producir distinta cantidad de GCs y que ambas presentan una regionalización antero-posterior. Se infiere que las variaciones estacionales de andrógenos y GCs están determinadas, en parte, por la regulación recíproca entre ambas hormonas y que la sensibilidad del testículo a la acción de los GCs, cuando se considera la cantidad de GR, varía de manera estacional y está regulada por los mismos GCs y la melatonina.

Descripción: Fil: Bley, Miguel Andrés. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: La glucógeno sintetasa de levadura es activada por el glucosa-6-fosfato, activación que depende del pH. Se ha encontrado que sustancias aniónicas, como el cloruro, nitrato, maleato, etc., inhiben la actividad en ausencia del éster fosfórico, pero la adición del mismo restituye la actividad al valor original. Otros aniones como el succinato, lactato y fluoruro son inhibitorios, descartándose un efecto de fuerza iónica. Usando cloruro como inhibidor modelo, se determinó que la inhibición es mixta respecto del UDP-glucosa. Los gráficos de actividad en función de la concentración de UDP-glucosa son hiperbólicos, tanto en ausencia como en presencia de cloruro o de glucosa-6-fosfato. En cambio, cuando se estudia la actividad en función de la concentración de glucosa-6-fosfato, manteniendo constante el nivel de cloruro, se obtiene curvas sigmoides. El sistema se comporta en forma similar cuando se varía la concentración de cloruro en presencia de glucosa-6-fosfato. Mediante el tratamiento de la enzima con 2,4-dinitrofluorbenceno a pH 8 en presencia de UDP-glucosa se obtiene una pérdida irreversible de la sensibilidad a la inhibición por cloruro sin pérdida apreciable de la actividad. Se concluye, por lo tanto, que los inhibidores aniónicos se unen a un sitio diferente del sustrato. Estudiando la inhibición a distintos pH se encontró que algunas sustancias tienen mayor poder inhibitorio a pH 6, que es probablemente el pH fisiológico de la levadura, que a pH 7,5. Los inhibidores más eficaces a pH 6 son el ATP, ADP y GTP. El mecanismo de acción es similar al presentado por el cloruro. La inhibición por nucleótido es revertida por el glucosa-6-fosfato. Se ha determinado que el fenómeno de reversión es especifico para el glucosa-6-fosfato y para el glucosamina-6-6fosfato. Existen otros activadores de la enzima: 2-fosfoglicérico, trehalosa-fosfato, pero carecen de la propiedad de reactivar la inhibición por las sustancias aniónicas. En base a las teorías actuales de regulación alostéricas, se discute un modelo probable de la enzima que concuerda con sus propiedades. Se ha postulado un mecanismo de control de la síntesis de glucógeno "in vivo", de acuerdo al cual la actividad de la glucógeno sintetasa se hallaría permanentemente inhibida por la presencia de ATP y ADP. Serían los niveles de glucosa-6-6fosfato (regulados por la fosfofructoquinasa en base a las concentraciones relativas de ATP y AMP) los determinantes de la velocidad de la síntesis de glucógeno. Existiría además un mecanismo adicional mediante el cual los iones amonio -regulando la activudad de la fosfofructoquinasa-canalizarían, cuando es necesario, el carbono de la glucosa hacia la formación de compuestos nitrogenados esenciales para el crecimiento.

Descripción: Fil: Burrone, Oscar R.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Kleiman de Pisarev, Diana L.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: La endometriosis se caracteriza por la presencia de focos de tejido endometrial por fuera de la cavidad uterina confiriéndole, a las mujeres que la padecen, fuertes dolores pélvicos e infertilidad. Basándonos en trabajos previos realizados en cáncer, evaluamos la aplicación de los inhibidores de aromatasa, los inhibidores de ciclooxigenasa (COX)-2 y los agonistas de los receptores activados por proliferadores de peroxisomas (PPAR)γ como posibles alternativas terapéuticas para la endometriosis. Específicamente evaluamos los efectos del inhibidor de aromatasa, anastrozole, del inhibidor selectivo de COX-2, celecoxib y del ligando de PPARγ, rosiglitazona sobre el crecimiento de células endometriales in vitro y sobre la implantación y crecimiento de lesiones endometriósicas en un modelo murino de endometriosis. Los resultados obtenidos son promisorios ya que todos los tratamientos provocaron efectos inhibitorios del desarrollo de la endometriosis así como efectos antiproliferativos, proapoptóticos y antiangiogénicos tanto in vivo como in vitro. Por otro lado, luego de administrar anastrozole y celecoxib en forma conjunta, no pudimos demostrar una mejora del tratamiento combinado por sobre la aplicación de cada una de las terapéuticas de manera individual. Nuestros resultados avalan al inhibidor de COX-2 como una alternativa terapéutica concreta para la endometriosis y, sugieren que la combinación de celecoxib con una glitazona podría mejorar la involución de la endometriosis, aunque aún se requiere profundizar los estudios para confirmar estos últimos datos.

Descripción: A modo de resumen final detallaremos los puntosprincipales que se han desarrollado en esta tesis:a- Producción de factores estimuladores del crecimientotumoral por el bazo de ratones portadores de tumor.b- Relación entre Factores exacerbadores tumoral y eltamaño del tumor.c- Caracterización parcial de las fracciones con actividadexacerbadora.d- Poblaciones esplénicas que intervienen en el fenómeno deexacerbación tumoral.e- Neutralización de la actividad exacerbadora por suerosinmunes xenogeneicos.f- Relación de la actividad exacerbadora con factores circu-lantes como los CIC.g- Angiogénesis inducida por linfocitos, correlación con laexacerbación tumoral.

Descripción: El objetivo de esta tesis fue evaluar el efecto de la administración de un agonista de Gn-RH (Acetato de Leuprolide, LA) sobre la apoptosis y la esteroidogénesis ovárica. Seadministró dietilestilbestrol (DES) a ratas prepúberes para obtener una población defolículos antrales tempranos. Por otro lado, se utilizó un modelo de ratas inmadurassuperovuladas con gonadotrofinas (PMSG: gonadotrofina de suero de yegua preñada)con el objetivo de estimular la foliculogénesis hasta el estadío de folículospreovulatorios; parte de estos animales fueron tratados in vivo con LA tanto en formacrónica como aguda. En folículos preovulatorios, LA produce un efecto directo inhibitorio sobre el desarrollofolicular, causando una disminución del número de folículos reclutados por lasgonadotrofinas o bien llevando a la atresia a un mayor número de los mismos. Tanto elefecto in vivo como in vitro de LA produce un aumento de la apoptosis en los folículospreovulatorios provenientes de ratas tratadas con PMSG y este efecto es revertidoparcialmente in vitro por EGF. El IGF-1 y el FGF fueron capaces de inhibircompletamente el efecto estimulatorio de la apoptosis inducida por el agregado in vitrode LA. Con respecto a la familia de Bcl-2, LA disminuye la estabilidad de la isoforrnaantiapoptótica (Bcl-xL), favoreciendo la apoptosis. LA aumenta los niveles deprogesterona tisular y disminuye los niveles de estradiol sérico; no modifica los nivelesde la enzima P450 scc pero aumenta el contenido de la StAR en folículospreovulatorios. En folículos antrales tempranos, FSH suprime parcialmente la apoptosis inducida por LA. En presencia del agonista, EGF, FGF e IGF-1 no son capaces de rescatar a losfolículos de la apoptosis. Teniendo en cuenta las diferencias entre el efecto de FSH y losfactores de crecimiento, se sugiere la existencia de un mecanismo complejo detransducción de señales para FSH en la prevención de la apoptosis que utilizaría unmecanismo de sobrevivencia que incluye señales diferentes a las usadas por los factoresde crecimiento. En conclusión, GnRH-a sería un modulador atretogénico intraovárico que interfiere enel desarrollo folicular.

Descripción: El objetivo de esta tesis es el estudio de factores regulatorios, de producción yacción local, que controlan el desarrollo del folículo ovárico en mamíferos. Enparticular, se estudió el papel fisiológico de factores relacionados con el factor decrecimiento transformante-β (TGF-β).El modelo utilizado consistió en células de lagranulosa inmaduras de rata cultivadas en condiciones definidas. Se determinóque las células de la granulosa producen TGF-β bioactivo, encontrándose susecreción bajo control hormonal. El TGF-β producido ejerce acciones autocrinas,estimulando el crecimiento de células de la granulosa. La activina, otro miembrode la misma superfamilia, también es producida por las células de la granulosa yregula positivamente la proliferación de manera significativamente mayor que larealizada por el TGF-β. Factores paracrinos derivados del ovocito, probablementepertenecientes a la misma superfamilia, promueven el crecimiento de las célulassomáticas del folículo, indicando que el ovocito participa activamente en eldesarrollo folicular. Las acciones mitogénicas del TGF-β, activina o del factorderivado del ovocito sobre las células de la granulosa, son amplificadas por bajasconcentraciones de FSH, enfatizando la potencial relevancia de estos factoressobre la función ovárica. Asimismo, estos factores locales ejercieron unregulación diferencial de la producción de inhibinas A y B, llevando la relaciónentre las formas hacia la predominacia de inhibina B, de manera semejante a loencontrado in vivo en los estadios de crecimiento folicular. Estos resultados indican que factores intraováricos, relacionados con el TGF-β,juegan un papel importante en el desarrollo folicular, regulando el crecimiento y ladiferenciación de las células de la granulosa.

Descripción: El desarrollo sexual en la rata macho es un proceso complejo que involucrainteracciones entre el hipotálamo, hipófisis, testículo y órganos sexuales accesorios. Elpropósito de esta Tesis ha sido estudiar la influencia de los andrógenos sobre distintosaspectos de la regulación del eje hipotálamo-hipófiso-gonadal en la rata macho,resaltando la importancia de estos eventos durante el desarrollo sexual. Se evaluaron las posibles alteraciones en el perfil hormonal en suero en la ratamacho prepúber, originadas por el bloqueo de la acción androgénica a través de laadministración de los antiandrógenos flutamida y casodex. Se analizó también el efectode estos antiandrógenos sobre la función testicular y el trofismo epididimario. Se caracterizaron las distintas isoformas de FSH hipofisaria en la rata macho, deacuerdo a la estructura interna de los oligosacáridos unidos al polipéptído, mediante laseparación de las mismas por cromatografía en concanavalina A. Se estudió lainfluencia de la edad y del entorno androgénico sobre la heterogeneidad de FSH, entérminos de inmuno y bioactividad. Estos resultados contribuyen al conocimiento de los mecanismos de regulaciónde los andrógenos sobre el eje reproductivo en la rata macho, los cuales se manifiestan através de una amplia diversidad de efectos sobre los distintos niveles que conforman eleje.

Descripción: El factor de transcripción maestro GATA3 se encuentra involucrado en el desarrollo de laglandula mamaria y es requerido para el mantenimiento del estado diferenciado de lascélulas epiteliales luminales. El rol de GATA3 en cáncer de mama como supresortumoral ha sido establecido, a pesar de que el mecanismo de la pérdida de expresión de GATA3 es no ha sido descrito hasta el momento. En el presente trabajo, demostramosque la activación del Receptor de Progesterona (RP) promueve el co-reclutamiento de lametiltransferasa de histonas Enhancer of Zeste Homolog 2 (EZH2) río arriba del locus de GATA3, incrementando los niveles de trimetilación de la lisina 27 de la histona H3 (H3K27me3) e induciendo la compactación de la cromatina, lo cual resulta en ladisminución de los niveles del ARNm de GATA3. Esta regulación se encuentra acopladaa una disminución de la estabilidad de la proteína GATA3, mediante la fosforilacióninducida por progestágenos en el residuo serina 308 (pSer308-GATA3), seguida pordegradación vía proteasoma 26S. Ambos mecanismos moleculares convergen paralograr reducir la expresión de GATA3 en células de cáncer de mama tras la activacióndel RP. Además, demostramos que la reducción en los niveles de GATA3 es requeridapara lograr el incremento inducido por progestágenos de la ciclina A2, la cual media latransición de la fase G1 a S del ciclo celular, y se encuentra asociada a un peorpronóstico en pacientes de cáncer de mama. Finalmente, demostramos que ladisminución de los niveles de GATA3 son necesarios para la proliferación celular in vitroy el crecimiento tumoral in vivo inducidos por progestágenos.

Descripción: Las células NK son células del sistema inmune, críticas en la defensa contra células tumoralesy células infectadas, que se activan luego de sensar señales a través de receptores activadores y poracción de citoquinas secretadas por macrófagos y células dendríticas (CD), entre las cuales IL-12 esconsiderada una de las más relevantes. Recientemente se han descripto nuevos miembros de lafamilia de IL-12, entre ellos IL-23 e IL-27. IL-23 posee efectos pro-inflamatorios, pero existen datoscontradictorios en cuanto a su rol en el contexto tumoral. En cambio, IL-27 induce una potenterespuesta anti-tumoral, pero posee efectos tanto pro- como anti-inflamatorios. Debido a que elefecto de estas citoquinas sobre las células NK humanas aún no ha sido investigado, el objetivo deesta tesis doctoral fue estudiar el efecto de IL-23 e IL-27 sobre estas células. En primer lugar,demostramos que IL-23 e IL-27 secretadas por CD contribuyen a estimular la producción de IFN-γ porcélulas NK. Mediante el empleo de inhibidores farmacológicos, demostramos que la estimulación decélulas NK con las citoquinas recombinantes indujo la producción de IFN-γ a través de la activación delas vías de JNK, PI3K, MEK1/2, NF-κB y mTOR, y que IL-27 activó además a STAT-1. Observamostambién que tanto IL-23 como IL-27 generaron un efecto de priming para IL-18, exhibiendo estascitoquinas un efecto sinérgico con IL-18 para la secreción de IFN-γ. En el caso de IL-27, dicho efectoinvolucró un aumento en la expresión de T-bet y del receptor de IL-18. A su vez, ambas citoquinasindujeron un aumento en la expresión de los marcadores de activación celular CD25 y CD69, ypotenciaron la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos. IL-27, pero no IL-23, estimuló larespuesta citotóxica de las células NK de manera dependiente de NKp46 y de las vías de NF-κB ymTOR, a través de la vía secretoria y de TRAIL, pero no la de FasL. Detectamos además que IL-18potenció la actividad citotóxica inducida por IL-27 a través de la inducción de un aumento en laexpresión de ICAM-1 en las células blanco mediado por IFN-γ. En conjunto estos resultados indicanque IL-23 e IL-27 estimulan las funciones efectoras de las células NK, lo que puede ser relevantedurante situaciones tanto fisiológicas como patológicas.

Descripción: Las células NK son relevantes en la inmunovigilancia contra tumores debido a su capacidad citotóxica y la secreción de citoquinas proinflamatorias. Por otro lado, los macrófagos son células mieloides con gran plasticidad que luego de su activación pueden convertirse en macrófagos proinflamatorios (M1) o antiinflamatorios (M2). Dado que se conocen las consecuencias de la interacción entre células NK y los M1 pero su interacción con los M2 persiste poco caracterizada, el objetivo de esta Tesis de Doctorado fue investigar el resultado y los mecanismos subyacentes de dicha interacción. Utilizando un sistema de cocultivo in vitro observamos que los M2 inhibieron la producción de IFN- de células NK humanas estimuladas con citoquinas a través de la secreción de TGF-β y la citotoxicidad contra las células blanco K562 a través de la inducción de la expresión del receptor inhibitorio CD85j (ILT-2) en células NK y su interacción con el ligando HLA-G expresado en los M2. Asimismo, con el objeto de investigar la interacción entre macrófagos antiinflamatorios y células NK humanas en un contexto patológico, aislamos macrófagos asociados a tumor (TAM) de nefrectomías de carcinomas de células renales (CCR) en los cuales los TAM constituyen la población leucocitaria mayoritaria del infiltrado tumoral y su abundancia correlaciona con el mal pronóstico de la enfermedad. Observamos que estos TAM regularon negativamente la producción de IFN- por células NK y que, al igual que los M2 diferenciados in vitro, pudieron ser repolarizados hacia un estado proinflamatorio que promovió las funciones tumoricidas de las células NK. Finalmente, validamos los datos empleando un modelo murino de CCR (Renca), en el que la depleción de TAM condujo a menor tamaño tumoral, menor frecuencia de células NK con fenotipo exhausto y mayor frecuencia de células NK productoras de IFN-. En conjunto, estos resultados indican que los M2 y los TAM de CCR muestran funciones inmunosupresoras sobre las células NK que contribuyen a la progresión tumoral y abren la posibilidad de considerar la depleción o repolarización de los TAM como alternativas terapéuticas para atenuar la progresión del CCR.

Descripción: El objetivo de este trabajo de tesis consistió en estudiar el papel de la interleuquina 10 (IL-10) sobre distintos mecanismos que regulan la homeostasis de los linfocitos T CD8+ (LT CD8+) durante la infección producida por el parásito Trypanosoma cruzi (T. cruzi). Para ello, contamos con un modelo de infección experimental con T. cruzi en ratones deficientes para el gen de la IL-10 (IL-10 KO) de background Balb/c. En este modelo encontramos que, a pesar de ser la IL-10 considerada como una citoquina inmunomoduladora, en su ausencia el repertorio de LT CD8+ presentaba deficiencias en su expansión y activación funcional en respuesta a la infección con el parásito. El estudio de la cinética de los LT CD8+ en el bazo de ratones infectados reveló que el defecto en la expansión en el grupo IL-10 KO se aprecia desde la etapa aguda de la infección (21 dpi), y se correlaciona con una apoptosis temprana (7 dpi) que resultó ser específica de esta población celular y no de linfocitos T CD4+. A su vez, encontramos que la expresión de FasL, que se incrementa en los LT CD8+ activados, se encontraba disminuida en el grupo IL-10 KO a 21 dpi. Evaluamos la función efectora de LT CD8+, analizando simultáneamente su expresión de citoquinas proinflamatorias (TNF-α e IFN-γ) y potencial citotóxico (expresión de CD107a en membrana plasmática). La función efectora resultó ser significativamente menor en los LT CD8+ de ratones IL-10 KO infectados. A su vez, el análisis de polifuncionalidad no reveló diferencias en el perfil de esta población linfocitaria relacionadas con la ausencia de IL-10 durante la infección. En concordancia con esto, la capacidad citotóxica in vivo específica contra un epitope de transialidasa de T. cruzi (TSKD14) fue significativamente menor en los LT CD8+ del grupo IL-10 KO indicando que el defecto en la inducción de la función efectora de LT CD8+ totales también se trasladaba a la fracción T. cruzi específica. La menor función efectora de los LT CD8+ en ausencia de IL-10 se asoció a un aumento significativo en la expresión de los marcadores inhibitorios (PD-1, CTLA-4 y LAG-3) y una reducción significativa en la expresión del marcador de activación T-bet. Esta población exhibiría un fenotipo prematuramente agotado en respuesta al estímulo antigénico a través de TCR. Al disminuir la carga parasitaria (y en consecuencia el constante estímulo via TCR) en ratones infectados con T. cruzi tratados con la droga parasiticida Benznidazol, se redujo la expresión del marcador inhibitorio PD-1 en los LT CD8+ IL-10 KO. A su vez, el tratamiento ex vivo de esplenocitos totales de ratones infectados con IL-10 recombinante no logró rescatar los LT CD8+ del fenotipo agotado pero resultó en una reducción de la expresión de PD-1 en ratones KO y WT lo que sugiere que las vías de señalización por PD1-L e IL-10R podrían tener mecanismos compensatorios. La presencia de IL-10 en el microambiente de tejidos linfoides y periféricos también participa en eventos que conducen al “homing” de linfocitos hacia los tejidos blanco de la infección por T. cruzi. La ausencia de IL-10 produce una mayor inflamación de los tejidos sin embargo se observa una menor migración de esplenocitos totales hacia órganos blanco de daño. En ensayos de migración observamos una migración diferencial de LT CD8+ según el órgano analizado. Los linfocitos citotóxicos provenientes de ratones IL-10 KO migran en menor cuantía a corazón que los WT y lo opuesto se observa en el cuádriceps. Esto se correlaciona con un menor control de la carga parasitaria en el primer órgano que en el segundo. Cuando analizamos las quemoquinas producidas en cuádriceps y corazón de ratones infectados encontramos que CXCL9 y CXCL10 están sobreexpresadas en ambos órganos en ratones IL-10 KO lo cual se condice con la mayor inflamación de estos con respecto a los WT. Pero cuando analizamos CCL5 (cuyo receptor CCR5 se encuentra significativamente sobreexpresado en LT CD8+ esplénicos de ratones IL-10 KO) encontramos que la ausencia de IL-10 estimula su expresión en cuádriceps, respecto del WT, pero no en corazón. Esto coincide con la migración de LT CD8+ y control parasitario diferencial en los distintos órganos. De estos resultados concluimos que la migración de LT CD8+ esplénicos cumple un papel importante en el control de T. cruzi en los órganos infectados y que existe esta migración diferencial a órganos orquestada por diferencias regionales en la expresión de CCL5 y participación de IL-10. Futuros experimentos nos permitirán entender la relación de CCL5 en la migración diferencial a órganos de esta población linfocitaria. En conjunto, estos resultados demuestran que en la infección por T. cruzi, la IL-10 es indispensable para la mantención en el tiempo, para la correcta activación funcional, migración a órganos blanco de daño y para evitar el agotamiento clonal de la población celular responsable de la erradicación intracelular del parásito, los LT CD8+. Este trabajo aporta nuevos conocimientos acerca de las funciones inmunoestimulatorias de la IL-10 sobre los LT CD8+, aspectos no estudiados en la enfermedad de Chagas hasta el momento. Estos resultados podrían resultar críticos a la hora de diseñar tratamientos con drogas tripanocidas combinadas con inmunomoduladores así como también arrojar luz sobre los factores a tener en cuenta al proponer marcadores inmunológicos de progresión de la enfermedad.

Descripción: Fil: Chelala, César A.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Cigorraga, Selva Beatriz. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: El splicing alternativo juega un rol clave en la generación de la diversidad protéica. En esta tesis se estudió la coordinación en el procesamiento de dos exones alternativos distantes en un mismo gen. Se demostró que mutaciones que inhiben o estimulan la inclusión de un exón alternativo río arriba afectan profundamente el procesamiento de otro exón alternativo ubicado río abajo. Sin embargo, mutaciones similares en el exón alternativo río abajo tienen un efecto mínimo sobre el que se encuentra río arriba. Este efecto polar es específico de promotor y se encuentra aumentado cuando se inhibe la elongación transcripcional. Consistentemente, células de ratones mutantes con inclusión constitutiva o nula del exón alternativo EDA de la fibronectina muestran coordinación con otra región de splicing alternativo lejana, IIICS. Usando PCR específica de alelo, se demostró que la coordinación ocurre en cis, y es afectada, además, por la tasa de elongación transcripcional. Mediante estudios in silico se encontró que el 25% de los genes humanos contiene múltiples regiones de splicing, varios con combinaciones de isoformas que no se ajustan a distribuciones al azar, lo que sugiere la coordinación de las mismas. La coordinación en el splicing alternativo, acoplada a la transcripción de la RNA polimerasa II, supone un nuevo mecanismo de regulación de la expresión génica.

Descripción: a) Caracterizacion de los RP-BZDs: 1) Se caracterizó a los RP-BZDs de diferentes tejidos de la rata porfijación de ³H-RO 5-4864. 2) Cationes divalentes como Ca²+, Co²+ y Cd²+ modulan la fijación de ³H-RO 5-4864, sin alterar la unión de antagonistas. Esta regulaciónes temperatura dependiente. Algunos lípidos modulan al RP-BZD como el AA, el cual muestra unefecto similar al calcio. Estudios futuros podrían estudiar másdetalladamente tal interacción. 3) Productos farmacológicos o de origen natural como el etanol o losflavonoides reconocen con potencia variada a los RP-BZDs. 4) Se purificó parcialmente una fraccion capaz de desplazar lafijación de ³H-RO 5-4864 con Rf similar a algunas Pfs naturales. Se especula sobre la posible existencia de ligandos endógenosfisiológicos del RP-BZD. 5) Se estudió la localización subcelular de los RP-BZD en célulasintersticiales testiculares y se los caracterizó farmacológicamente. Los RP-BZDs resultaron estar especialmente concentrados en lasmitocondrias de este tipo celular. Regulación de los RP-BZDs: 1) Durante el stress agudo aumenta la densidad de RP-BZDs en riñón ybulbo olfatorio. 2) El tratamiento crónico con BZDs regula diferencialmente laspropiedades de los RP-BZD en distintos tejidos. 3) El tratamiento crónico con etanol modula las propiedades de los RP-BZD. Función de los RP-BZDs: 1) Se seleccionó un modelo experimental para el estudio de lafunción de los RP-BZDs: celulas testiculares de Leydig. Se propone y discute el rol de las BZDs periféricas sobre larespuesta esteroidogénica. El RO 5-4864 provoca una estimulación dela producción basal o hCG inducida de testosterona. 2) La disminución en el número de RP-BZDs resultado del tratamientocrónico con diazepam correlaciona con una reducción marcada en laestimulación de la produccion de testosterona por RO 5-4864.

Descripción: La activación del receptor GABAA durante un breve período de tiempo (5-10minutos) por GABA, en neuronas de corteza cerebral de rata, induce horas más tarde unareducción en la interacción entre los sitios de unión de GABA y benzodiacepinas, llamadadesacoplamiento, en ausencia de cambios en el número de receptores. El objetivo delpresente trabajo fue estudiar el mecanismo molecular del desacoplamiento inducido por GABA. Nuestros resultados sugieren que el desacoplamiento inducido por GABA estáasociado a una reducción en el porcentaje de receptores GABAA conteniendo la subunidadα3. Por otro lado, los resultados de nuestros experimentos indicarían que eldesacoplamiento está también mediado por un aumento en el grado de fosforilación de lasubunidad γ2 del receptor. Por lo tanto, el desacoplamiento sería el resultado de al menosdos mecanismos regulatorios que actuando en forma conjunta producen una alteraciónadaptativa en la función del receptor GABAA. Si bien no se conocen las vías deseñalización intracelulares activadas, es posible que un aumento en la internalización delreceptor GABAA inducido por GABA represente la señal que desencadenaría los procesosresponsables del desacoplamiento.

Descripción: Fil: Páez Pereda, Marcelo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Cambios en la tasa de elongación de la ARN polimerasa II (pol II) modulan los patrones de splicing alternativo, debido a que afectan el tiempo en el cual los sitios de splicing del pre- ARNm naciente son presentados a la maquinaria de splicing (un efecto conocido como acoplamiento cinético). Mostramos aquí un nuevo exón alternativo que responde a la elongación de la pol II: el exón 18 de la molécula de adhesión celular neural (NCAM), cuya inclusión es regulada durante la diferenciación y la plasticidad sináptica. Buscando estímulos que afecten al splicing alternativo a través de su acoplamiento cinético con la transcripción, encontramos que la despolarización del potencial de membrana de células neuronales provoca la exclusión del exón 18 del ARNm maduro. El efecto se observa tanto en cultivos primarios de neuronas hipocampales como en una línea de neuroblastoma murino, y es independiente de la vía de las kinasas dependientes de calcio/calmodulina (CaMKs). Un análisis de los niveles de modificaciones de histonas a lo largo del locus endógeno de Ncam revela una disminución local de marcas asociadas a transcripción activa y elongación de la pol I I, como tri-metilación de H3K36 y acetilación de histonas, en la vecindad del exón 18. El tratamiento de despolarización afecta la cromatina de este gen en forma específica, causando un incremento en acetilación de H3K9 en una región interna que incluye a este exón alternativo. Esta acetilación intragénica está asociada a mayor apertura de la cromatina, mayor procesividad de la pol II y tri-metilación de H3K36 en esta región, pero no es acompañada por cambios en el promotor del gen. En base a los resultados de la tesis presentamos un modelo donde la excitación neuronal dispara cambios en la estructura de la cromatina intragénica del gen de NCAM, que facilita la elongación de la pol II en esta región y subsecuentemente causa la exclusión del exón 18 del ARNm. Este modelo señala un rol fisiológico de la modulación de la cromatina intragénica en la biogénesis de los ARNm en las células eucariotas.

Descripción: Como organismos sésiles, las plantas superiores se caracterizan por un alto grado de plasticidad en el desarrollo en respuesta a las señales ambientales, optimizando así sus funciones de una manera que maximiza sus posibilidades de supervivencia y reproducción. Son capaces de detectar la calidad, cantidad y dirección de la luz, y utilizarla como una señal externa para optimizar su crecimiento. Por otra parte, el splicing alternativo es un mecanismo esencial para aumentar la plasticidad del transcriptoma que juega importantes roles en varios aspectos del desarrollo de los metazoos. Sin embargo, poco se conoce del proceso en plantas y de las consecuencias del mismo. Aquí demostramos que el splicing alternativo de varios genes de Arabidopsis thaliana está regulado por transiciones de luz/oscuridad. Para el caso particular de RSp31 (un gen que codifica para una proteína reguladora de splicing o SR) es la intensidad de la luz incidente la que tiene un efecto directo sobre su transcripción y procesamiento. El cloroplasto percibe la luz y genera una señal (retrógrada) capaz de viajar por la planta que provoca los cambios observados en la abundancia relativa de isoformas de RSp31. Las plastoquinonas, componentes de la cadena de transporte electrónico fotosintético, serían un lugar de integración de diferentes señales y una pieza clave en la respuesta de RSp31 a la luz. Por otra parte, demostramos que la metil‐transferasa de proteínas PRMT5 es un importante regulador del proceso de splicing alternativo en Arabidopsis thaliana y está involucrada en la generación de respuestas circadianas en esta planta. Reunimos evidencia que apunta a un efecto sobre el reconocimiento de los sitios dadores (5’ss) de splicing en el mecanismo por el cual PRMT5 ejerce su modulación sobre el proceso de splicing alternativo. Tal mecanismo estaría conservado en Drosophila melanogaster. En este organismo, al igual que en Arabidopsis, PRMT5 regula la expresión y los patrones de splicing alternativo de numerosos genes. Sin embargo, si bien controla la actividad locomotora (una respuesta mediada por el reloj), su vínculo con el oscilador central es más difuso.

Descripción: Para las plantas, la luz es la fuente de energía y el regulador más relevante del crecimiento y las adaptaciones al medio induciendo cambios en la expresión génica a varios niveles, incluido el splicing alternativo. El splicing alternativo (AS) produce múltiples transcriptos (variantes o isoformas) a partir de un único gen mediante el uso variable y regulado de diferentes sitios de splicing, modulando significativamente el transcriptoma, y en cierta medida el proteoma, durante el desarrollo y en respuesta a señales ambientales. Además de generar diferentes isoformas que pueden traducirse en distintas proteínas, este proceso también puede dar lugar a variantes sin capacidad de codificación. Algunas de ellas se degradan, lo que permite una delicada regulación de la cantidad de proteína generada. Las señales retrógradas de los cloroplastos activadas por la luz controlan el splicing alternativo en Arabidopsis thaliana. Aquí aportamos pruebas de que la luz regula la expresión de un conjunto básico de factores relacionados con el splicing en células radiculares. Las respuestas de splicing alternativo en las raíces no son causadas directamente por la luz sino desencadenadas por azúcares generados en los tejidos fotosintéticos y movilizados a través de la planta. La quinasa TARGET OF RAPAMYCIN (TOR) desempeña un papel clave en esta vía de señalización. El bloqueo de la expresión de TOR y la inhibición farmacológica de su actividad alteran las respuestas de splicing alternativo a la luz y a los azúcares exógenos en las raíces. Además, demostramos que las decisiones de splicing están mediadas por la función mitocondrial en las raíces. Esto concuerda con reportes previos que muestran que la activación de la TOR quinasa depende de las mitocondrias en las células de las raíces. El doble papel de los azúcares como nutrientes y señales, en sintonía con nuestros hallazgos, sugiere que estas moléculas derivadas de la fotosíntesis actúan como señales móviles que, junto con TOR quinasa, coordinan las respuestas de splicing alternativo a la luz en toda la planta. Por otro lado, sabemos que los transcriptos no codificantes pueden controlar el estado de la cromatina, la abundancia de otros ARNs, e incluso la traducción. Todos estos son roles regulatorios que revisten ciertas moléculas de ARN. Mediante el uso de datos de secuenciaciòn masiva de ARN (RNAseq) disponibles en repositorios públicos, analizamos las poblaciones de ARNs de A. thaliana que serían traducidos activamente (asociados a polirribosomas), aquellos que serían degradados activamente (non-sense mediated mRNA decay, NMD), y los transcriptos que son hallados en diferentes compartimientos subcelulares. Descubrimos que ciertas isoformas de splicing alternativo, sin capacidad codificante, de un conjunto de genes de interés, no se degradan a pesar de la presencia de características asociadas a NMD. En general, esto se debe a que las mismas se acumulan en el núcleo. Con estos datos de partida y a modo de validación de los mismos, analizamos la localización subcelular de las diferentes isoformas de At-RS31 y otros genes de interés (At-SR30, At-U2AF65). Consistentemente, ciertas isoformas que conservan secuencias intrónicas se mantienen en el núcleo. Haciendo uso de la tecnología de Oxford Nanopore (ONT) logramos obtener datos de secuencias largas para validar la existencia (completa) de las isoformas de interés, así como también, su distribución subcelular. Nuestra hipótesis es que estos transcritos no codificantes podrían estar cumpliendo una función nuclear, actuando como ARNs no-codificantes regulatorios (prácticamente lncRNAs -long non-coding RNAs-) generados por splicing alternativo de genes codificantes.

Descripción: El splicing alternativo amplía las posibilidades de expresión génica a partir de un número limitado de genes. El splicing está funcionalmente acoplado a la transcripción, y la velocidad de elongación de la ARN Polimerasa II (Pol II) regula algunos eventos de splicing alternativo. Se postula que una menor velocidad de elongación favorece el reconocimiento de sitios débiles por la maquinaria de splicing antes de la síntesis de sitios fuertes competidores río abajo. El exón alternativo EDI de fibronectina está río abajo de un sitio 3’ subóptimo y su inclusión aumenta en situaciones de baja elongación; esto puede deberse a que el reconocimiento del sitio débil antes de la síntesis del sitio fuerte en el intrón siguiente lleva a la escisión del intrón con el sitio débil, forzando la posterior inclusión. Aplicamos una estrategia para estudiar del orden de remoción de los intrones que rodean a un exón determinado. Estudiamos un exón con inclusión reprimida por elongación (EDI), un exón que baja su inclusión a menor elongación (CFTR9), un exón alternativo que no responde a elongación (EDII) y un exón constitutivo (E28). El orden de remoción de intrones se modifica según la línea celular, la presencia de mutaciones en cis o la abundancia diferencial de factores reguladores, pero no se modifica por cambios en la elongación asociados a cambios en la inclusión de EDI. Los resultados sugieren un nuevo mecanismo de regulación de la inclusión de CFTR9 y nos obligan a replantearnos nuestro modelo de regulación cinética de EDI. Aplicamos un método para medir la elongación de Pol II in vivo en genes particulares, y comprobamos que la camptotecina baja la velocidad de transcripción de fibronectina. Medimos el reclutamiento de U2AF65 al sitio débil de EDI y al sitio fuerte río abajo en células tratadas con camptotecina y en células control y observamos un aumento de la unión de U2AF65 al sitio débil con respecto a la unión al sitio fuerte en las células tratadas. Comprobamos así que una menor elongación favorece el reconocimiento por la maquinaria de splicing del sitio débil a expensas del sitio fuerte, y la posterior inclusión del exón independientemente de la cinética de remoción de intrones.

Descripción: La luz es un estímulo ambiental que regula varios procesos biológicos enlas plantas. A través del cloroplasto, la luz regula el splicing alternativo de unconjunto de genes. En este trabajo nos propusimos estudiar los mecanismos porlos que la luz realiza esta regulación. Tomamos como modelo el gen RS31, que codifica para un factor desplicing rico en serinas y argininas. Encontramos que los cambios que seobservan en las isoformas de RNA mensajero de RS31 por acción de la luz sedeben al proceso de splicing alternativo y no a una degradación diferencial desus isoformas. Por otro lado, encontramos que el tratamiento de plantas que seencuentran en oscuridad con tricostatina A, una droga que promueve lahiperacetilación de histonas, imita el efecto de la luz sobre el splicingalternativo. Además, demostramos que una mutante de Arabidopsis deficienteen la deacetilación de histonas HD1 muestra un menor efecto de luz a oscuridadque las plantas salvajes. El efecto de la luz sobre el splicing alternativo implicacambios en la elongación de la transcripción: el tratamiento de plantas concamptotecina, droga que inhibe la elongación, imita el efecto de la oscuridadsobre el splicing alternativo. Realizamos mediciones de la tasa de elongación yencontramos que en luz la elongación es más rápida que en oscuridad en el gende RS31. Finalmente, en plantas de Arabidopsis defectuosas en el factor deelongación TFIIS el efecto de la luz sobre el splicing alternativo de los eventosestudiados se inhibe por completo. Estos resultados muestran que el efecto de la luz sobre el splicingalternativo depende de cambios en la elongación de la transcripción.

Descripción: Fil: Judewicz, Norberto D.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: La rama gruesa ascendente del asa de Henle reabsorbe el 30% del cloruro de sodio (NaCl) filtrado por el glomérulo. Aproximadamente 60% del ión sodio (Na+) es reabsorbido a través del transporte activo transcelular. Como resultado del transporte activo de solutos, existe un voltaje luminal positivo en esta segmento, que favorece la reabsorción del Na+ restante a través de la vía paracelular. El óxido nítrico (NO) promueve natriuresis y diuresis, en parte debido a la inhibición del transporte de solutos en la rama gruesa ascendente del asa de Henle. Se sabe que el NO inhibe la reabsorción transcelular de sal, pero se desconocen sus efectos sobre la vía paracelular. Para evaluar el efecto del NO en la selectividad de esta última, comenzamos por medir los potenciales de dilución causados por la reducción de la concentración de NaCl en la solución del baño basolateral a 64/56, 32/24 ó 16/8 mM Na+/Cl- en túbulos de la rama gruesa ascendente del asa de Henle aislados y perfundidos. A partir de los diferentes potenciales de dilución calculamos el radio de permeabilidad Na+/Cl- (PNa+/PCl-). Dicho radio es una medida de permeselectividad paracelular, y encontramos que era ~2 en todos los casos. Estos datos indican que la vía paracelular en este segmento del nefrón es más selectiva para Na+ que para el ión cloro (Cl-) por un factor de 2, e indican que el transporte transcelular no se alteró de manera significativa por la dilución de NaCl en el baño basolateral. En los experimentos siguientes empleamos la solución conteniendo 32/24 mM de Na+/Cl-. Al utilizar dos dadores de NO químicamente distintos o el sustrato para la producción endógena de NO, L-arginina, se observó una disminución de PNa+/PCl-. Estos resultados demuestran que NO tiene un efecto sobre la selectividad de la vía paracelular, pero no indican específicamente cómo las permeabilidades absolutas de cada ión se ven afectadas. Para investigar el efecto del NO sobre PNa+ y PCl- individualmente, es necesario medir tanto PNa+/PCl- como la resistencia transepitelial (Rt). La Rt refleja solamente las vías de transporte conductivas y, en la rama gruesa ascendente del asa de Henle, representa mayormente la resistencia de la ruta paracelular. Bajo condiciones control, el valor de Rt hallado fue 7700 ohm-cm. Cuando se agregó L-arginina, la Rt disminuyó, y dicho efecto fue bloqueado por el inhibidor de NOS, L-NAME. Estos resultados demuestran que el NO disminuye la función de “barrera” de la ruta paracelular. A continuación medimos una vez más el efecto del NO producido de manera endógena sobre los potenciales de dilución y PNa+/PCl-. Con estos datos y los valores de Rt obtenidos, calculamos PNa+ y PCl- individualmente, hallando que el NO incrementó PNa+ un 40% y PCl- un ~100%. La mayoría de las acciones del NO en el túbulo proximal y la rama gruesa ascendente del asa de Henle están mediadas por guanosín monofosfato cíclico (GMPc). Es por esto que investigamos si este segundo mensajero está mediando los efectos del NO sobre la vía paracelular observados en nuestro modelo. El GMPc disminuyó PNa+/PCl- y Rt, provocando el aumento de PNa+ y PCl- de manera similar al NO. Estos datos sugieren que GMPc está mediando el efecto final del NO sobre las permeabilidades absolutas. El GMPc puede activar dos mediadores posteriores en la vía de señalización, la proteína quinasa dependiente de GMPc (PKG) y la fosfodiesterasa 2 (PDE2). Por lo tanto, evaluamos cuál de ellos está mediando las acciones del NO. En presencia del inhibidor de PKG, KT5823, el dador de NO no tuvo efecto significativo sobre el potencial de dilución. En contraste, cuando repetimos este experimento utilizando un inhibidor de PDE2, el dador de NO disminuyó el potencial de dilución, de manera similar a lo descripto anteriormente para aquellos experimentos donde solamente utilizamos un dador de NO. Estos datos indican que PKG, y no PDE2, es el mediador del efecto del NO sobre la ruta de transporte paracelular. La Rt y la selectividad iónica de la vía paracelular están reguladas por una familia de proteínas llamadas claudinas. La rama gruesa ascendente del asa de Henle expresa claudina-19, que ha sido anteriormente relacionada con la regulación de la permeabilidad de Na+. Además, la claudina-19 puede formar combinaciones heteroméricas y heterotípicas con las claudinas-3 y -16 en este segmento. Para evaluar si los efectos de NO sobre la vía paracelular están mediados por un poro del cual al menos la claudina-19 forma parte, medimos los potenciales de dilución en presencia o ausencia de un anticuerpo contra un dominio extracellular de la claudina-19 o contra la proteína Tamm-Horsfall (control). Cuando el anticuerpo anti-claudina-19 estaba presente, ni el dador de NO, ni el sustrato para la producción endógena de NO -L-arginina- tuvieron efecto sobre los potenciales de dilución. En presencia del anticuerpo anti-Tamm-Horsfall, el dador de NO disminuyó el potencial de dilución. Estos datos sugieren que los efectos del NO sobre la vía paracelular son mediados por un poro formado al menos por una unidad de la claudina-19. Finalmente, modelamos matemáticamente el efecto del NO sobre la concentración luminal de Na+ a lo largo de la rama gruesa ascendente del asa de Henle basándonos en nuestros resultados. Bajo condiciones control, en ausencia de NO, la concentración luminal de Na+ decae exponencialmente a 22.4 mM al final de dicho segmento. Cuando consideramos el efecto del NO sobre la vía paracelular únicamente, la concentración luminal de Na+ al final del túbulo es 33.9 mM, más alta que en control, indicando que se absorbe menos Na+. Al tener en cuenta el efecto del NO sobre la vía transcelular solamente, la concentración luminal de Na+ al final del túbulo es 46.2 mM, y al considerar su efecto sobre ambas vías combinadas, 52.5 mM. Por lo tanto, el efecto del NO sobre la ruta paracelular provoca una reducción en la reabsorción neta de Na+. La magnitud de dicha reducción es similar a aquella resultante de NO actuando sobre la ruta transcelular, pero el efecto del NO sobre ambas vías combinadas tiene una dinámica de antagonismo.

Descripción: Las proteínas MAGE (Melanoma Antigen GEnes) pertenecen a una gran familia de proteínas estrechamente relacionadas caracterizadas por un alto grado de homología de secuencia. Los miembros de la subfamilia MAGE-I tienen un patrón de expresión único: se expresan solamente en tejido germinal sano y de manera aberrante en el cáncer. En los últimos 10 años, varios estudios realizados por nuestro grupo y otros grupos se han centrado en caracterizar sus funciones. Se ha demostrado que, a pesar de sus similitudes de secuencia, hay funciones específicas en algunos de sus miembros que afectan diferentes vías de señalización celular. Entre sus acciones más significativas, se demostraron efectos antiapoptóticos, evasión de senescencia y autofagia, y aumento de la supervivencia y de la proliferación celular. Aquí comenzamos a estudiar un nuevo campo emergente: la regulación de la expresión y actividad de las proteínas MAGE. En este contexto, planteamos como hipótesis que las proteínas MAGE podrían estar reguladas por oncogenes y oncosupresores. En particular, nos centramos en el estudio de la regulación de la proteína MageC2, que se detecta en tumores de diferente origen histológico y tiene correlaciones clínicas desfavorables. Había sido determinado que MageC2 colabora con el fenotipo tumoral mediante la regulación de diferentes vías asociadas al cáncer. La asociación de MageC2 con Kap1 puede reprimir la vía supresora de tumores p53 mediante su degradación, mientras que la interacción MageC2/STAT3 activa la vía de señalización STAT oncogénica. En la primera parte de esta Tesis, demostramos que MageC2 inhibe la actividad de p53 a través de mecanismos adicionales que implican la asociación con los represores de la transcripción HDAC1 y HDAC3. Para dilucidar el papel de la proteína MageC2 endógena en la actividad de p53, generamos células de melanoma humano A375 MageC2 KO utilizando la tecnología CRISPR/CAS9. Observamos que en ausencia de MageC2 se incrementó significativamente la actividad de p53, sin afectar su estabilidad. En la segunda parte del trabajo, se realizó una búsqueda racional de posibles proteínas capaces de modular la relación MageC2/p53. Dada su relevancia en el cáncer, se seleccionaron el oncogén Ras (RasV12) y el oncosurpesor p14ARF. Es bien sabido que el oncogén H-RAS/RasV12 estimula permanentemente la proliferación en ausencia de estímulos externos. Si bien su potencial oncogénico es indiscutible, esta ruta todavía se está estudiando principalmente para caracterizar los objetivos río abajo de la activación de Ras. En el caso de p14ARF, se considera un supresor tumoral maestro que responde a la activación de oncogenes induciendo p53. Los experimentos realizados en esta Tesis demuestran que RasV12 estabiliza la proteína MageC2 y la fosforila en treonina dependiendo de la actividad de la ruta MAPK/ERK. Fundamentalmente, usando las células MageC2 KO A375, demostramos que MageC2 endógeno puede formar parte de la vía Ras/MAPK/ERK y que su función es regular negativamente p53. Es decir, que MageC2 puede actuar como un factor regulado por la vía oncogénica de Ras para inhibir la respuesta de p53 a la hiperproliferación. Por el contrario, el oncosupresor p14ARF causa degradación de MageC2 de forma proteosoma dependiente y amplía la capacidad de p14ARF para promover un aumento de la actividad de p53 mediante una vía alternativa e independiente de Mdm2. Sin embargo, la presencia de RasV12 protege fuertemente a MageC2 de la degradación de p14ARF. En conjunto, nuestras observaciones muestran que MageC2 está involucrado en una red principal de señalización oncogénica que vincula la activación de Ras con la regulación negativa de p53.

Descripción: Los neutrófilos (PMN) son células fagocíticas que constituyen la primera línea de defensa durante los procesos infecciosos bacterianos cuya función principal es la destrucción de microorganismos. Estas células son capaces de migrar en forma inidireccional e irreversible hacia los focos inflamatorios. Este desplazamiento que se opera a favor de un gradiente de concentración de moléculas, es conocida como quimiotaxis y las moléculas que lo inducen, factores quimiotácticos. Estos últimos pueden ser de naturaleza endógena como exógena. Durante los procesos infecciosos, los factores exógenos más importantes son aquellos producidos por bacterias: los péptidos formilados, cuyo representante más estudiado es el péptido prototipo formil-metionil-leucil-fenilalanina (FMLP). En el foco inflamatorio, las altas concentraciones de péptidos quimiotácticos conducen al arresto celular, a la degranulación y a la activación de los sistemas microbicidas de los PMNs. Dentro del foco, los PMNs también desempeñan diferentes funciones efectoras, debido a la activación de sus receptores para el fragmento Fc de Inmunoglobulina G (FcγRs) por parte de sus ligandos naturales, los complejos inmunes. Estas funciones involucran a la fagocitosis, la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) y la liberación de reactivos intermediarios del oxígeno. Los PMN poseen dos clases de FcγRs: FcγRII y FcγRIIIB. Estos receptores cumplen un papel fundamental dentro de los eventos inflamatorios dado que constituyen un nexo entre la inmunidad humoral y la celular, siendo determinantes en el desempeño de procesos de relevancia biológica. De estos datos se desprende que cualquier modificación, de la expresión de los FcγRs, es susceptible de provocar alteraciones biológicas de suma importancia. Debido a las múltiples y diversas acciones de péptidos formilados y los FcγRs, iniciamos estudios en neutrófilos para investigar posibles interrelaciones entre ambas moléculas en el transcurso del fenómeno inflamatorio de origen infeccioso. En este trabajo, presentamos evidencia que la preincubación de PMN con FMLP inhibe diferentes funciones celulares dependientes de los FcγRs tales como la fagocitosis, la citotoxicidad celular dependiente de radicales libres y la ADCC. Este fenómeno de inhibición funcional del PMN causada por el FMLP, podría ser explicado por una disminución de la expresión (down regulation) de ambos FcγRs en la superficie celular. Por otra parte, encontramos que este fenómeno esta asociado a eventos secretorios. En efecto, sobrenadantes de PMNs estimulados con FMLP pueden inducir la down regulation de FcγRs en PMNs vírgenes de tratamiento. Este efecto es amplificado por el uso de citochalasina B, un reconocido agente secretagogo. Ello implica que dada la activación celular, se liberan moléculas con actividad enzimática específica para FcγRIIIB y FcγRII. Estudios con inhibidores de proteasas indicaron que se trata de una proteasa(s) de serina. Al evaluar el papel del Ca2+ (intra y extracelular) en este proceso, encontramos que la down regulation de ambos FcγRs inducida por FMLP es estrictamente dependiente de Ca2+ extracelular. Por otra parte, observamos que, la preincubación de PMN con FMLP no es necesaria para la inhibición de la ADCC. Teniendo en cuenta que la down-regulation de los FcγRs inducida por FMLP no se observa hasta después de los 20- 30 min. de incubación, y que la ADCC es una función que se activa rápidamente, es muy factible que el FMLP pueda modificar dicha función a través de la modificación de eventos intracelulares que operan tempranamente. Ello fue corroborado al realizar ensayos de quimioluminiscencia donde se observaron efectos inhibitorios del FMLP a tiempos cortos de incubación (10 - 15 min.) con este péptido formilado. Así, el FMLP ejercería su acción inhibitoria: i) a nivel de los FcγRs de membrana y ii) a través de alteraciones transduccionales en el PMN. Todos estos datos, permiten concluir que la resolución de un proceso inflamatorio de origen infeccioso, estaría supeditado no sólo al número de células efectoras involucradas en el mismo, sino paradójicamente a la concentración de moléculas de reconocida acción proinflamatoria, capaz de ejercer efectos claramente antiinflamatorios.

Descripción: Fil: Fastame, Inés Gabriela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: La tuberculosis (TB) sigue siendo un problema de salud a nivel global, con aproximadamente 1.4 millones de muertes en 2019. La TB puede ser generalmente tratada, pero cada vez más aparecen cepas resistentes, por lo cual es menester desarrollar nuevas terapias anti-TB. En este sentido, la serina/treonina quinasa PknG juega un rol clave en el proceso infectivo de Mycobacterium tuberculosis (Mtb), el agente causante de TB. En la primera parte de esta Tesis se detalla el descubrimiento de un inhibidor contra PknG mediante la combinación de cribados virtuales y ensayos de actividad. Dicho compuesto fue utilizado como punto de partida para obtener derivados y comprender la relación estructura-actividad. A su vez, obtuvimos la estructura del complejo PknG-inhibidor mediante cristalografía de rayos-X. PknG es además una proteína quinasa única, ya que posee mecanismos de regulación desconocidos. Varios estudios han demostrado que existe una relación entre el dominio rubredoxina, capaz de alternar entre distintos estados redox, y la actividad de PknG, pero no han profundizado en los mecanismos involucrados. Consecuentemente, ese ha sido el objetivo de la segunda parte de esta Tesis, donde se presentan resultados de dinámicas moleculares, espectrometría UV-VIS y small angle x-ray scattering (SAXS) que sugieren que el dominio rubredoxina es una de las regiones más flexibles, y que PknG se despliega al oxidarse.

Descripción: El cáncer de próstata (PCa) es el cáncer más prevalente entre hombres y la sexta causa de muerte por cáncer en el mundo, mientras que en Argentina es el cáncer con mayor incidencia y el tercero en mortalidad. Por lo tanto, continúa siendo uno de los problemas más importantes de la salud pública. Los factores de riesgo establecidos para esta enfermedad son la edad, la raza y la historia familiar, sin embargo la dieta y el estilo de vida son factores claves en la biología del PCa y su tumorigénesis. El síndrome metabólico (SM) es un estado fisiopatológico que involucra al menos tres de los siguientes factores: obesidad abdominal, triglicéridos elevados, colesterol elevado, hipertensión y/o intolerancia a la glucosa. En los últimos años el estudio del papel del SM en la incidencia y progresión del PCa ha arrojado resultados controversiales; sin embargo, un trabajo reciente basado en un meta-análisis concluyó que el SM está asociado con un peor pronóstico de los pacientes con PCa, un aumento de la agresividad del tumor y una mayor tasa de recurrencia. Trabajos previos de nuestro grupo acerca de C-terminal binding protein 1 (CTBP1) muestran una posible explicación molecular para estas asociaciones. CTBP1 es un co-represor transcripcional de genes supresores tumorales que es activado por su unión al NAD+ o al NADH. En nuestro laboratorio utilizando un modelo animal de SM determinamos que el silenciamiento de la expresión de CTBP1 en xenotransplantes disminuyó drásticamente el crecimiento tumoral de mama y de próstata respecto a la condición control. Asimismo, a través de un microarreglo obtuvimos el perfil de expresión de mRNA de los xenotransplantes de próstata. Un análisis por GSEA de los mismos detectó que CTBP1 modula genes pertenecientes a la vía olfatoria, entre los cuales se encuentra la proteína accesoria al canal de cloro 2 (CLCA2). CLCA2 es una proteína de transmembrana de tipo I propuesta como un posible supresor tumoral en cáncer de mama y cáncer colorrectal. Asimismo Tanikawa y et al. reportaron que la expresión de CLCA2 se encontraba disminuida en cáncer de próstata, vejiga, esófago y pulmón comparado con tejido normal. El grupo de Elble, colaborador de nuestro grupo, demostró que CLCA2 se encuentra involucrada en los procesos de proliferación y transición epitelio mesenquimal (EMT) en cáncer de mama. Sin embargo el rol de CLCA2 en PCa no ha sido estudiado. Por otro lado, los microRNAs (miRNAs) son moléculas pequeñas de RNA no-codificantes que tienen un rol crucial como regulador de la expresión génica. Cada miRNA tiene como blanco múltiples mRNAs, por lo cual la modulación de un mismo miRNA puede alterar la expresión de importantes procesos. Asimismo, estas moléculas se están evaluando como posibles biomarcadores diagnósticos y pronósticos como también como blancos y/o agentes terapéuticos por lo que su estudio es de gran relevancia. En base a estos antecedentes el objetivo general de este proyecto fue conocer los mecanismos moleculares por los cuales CTBP1 media la asociación entre el SM y el desarrollo y la progresión del PCa. En este trabajo de tesis en primer lugar validamos el resultado del microarreglo de expresión y observamos que CTBP1 reprime la expresión de CLCA2 en xenotransplantes de próstata desarrollados en animales con SM. Detectamos que CTBP1 interacciona físicamente con el promotor de CLCA2 reprimiendo su transcripción en líneas de PCa. Asimismo, al utilizar un panel de plásmidos que tienen clonados distintos fragmentos del promotor de CLCA2 río arriba del gen de la luciferasa, determinamos que CTBP1 es capaz de modular la actividad del promotor de CLCA2 independientemente del largo del fragmento presente. Más aún, utilizando un panel de factores de transcripción y moduladores de la cromatina, encontramos que CTBP1 corregula en conjunto con ZEB1, EP300 y HDACs la actividad del promotor de CLCA2 en células de PCa. Estudiando la función de CLCA2 en el PCa, encontramos que esta proteína promueve la adhesión celular de líneas de PCa inhibiendo la EMT. Asimismo, la actividad de CTNNB1en el núcleo disminuyó en presencia de CLCA2 con la concomitante inducción de la expresión del marcador epitelial CDH1 y la represión de los marcadores mesenquimales SNAI2 y TWIST1. A partir de la sangre periférica de ratones con SM y xenostransplantes generados con líneas celulares control o la expresión de CLCA2 disminuida de forma estable, seleccionamos Células Tumorales Circulantes (CTCs) y realizamos un ensayo clonogénico. Encontramos que la disminución de la expresión de CLCA2 aumentó el porcentaje de ratones con focos de CTCs comparados con los ratones control. Además, realizamos un microarreglo de expresión de miRNAs de los tumores xenotransplantados de próstata generados en ratones con SM. Luego del análisis obtuvimos 21 miRNAs modulados por CTBP1 que se encuentran involucrados en los procesos de angiogénesis, organización de la matriz extracelular, biología del desarrollo; y, en vías de señalización del cáncer, adhesiones focales, uniones adherentes, entre otros. Un análisis supervisado en base a herramientas bioinformáticas y bibliografía identificó al miR-196b-5p como un miRNA que potencialmente regula a CLCA2 y podría tener un papel interesante en el PCa. Validamos los resultados del microarreglo determinando que CTBP1 induce la expresión de miR-196b-5p en condiciones de SM. Asimismo, clonamos el 3’UTR de CLCA2 en un plásmido reportero y logramos identificar a CLCA2 como un blanco directo del miR-196b-5p. Por último, determinamos que el miR-196b-5p inhibe la adhesión celular. Estos resultados nos permiten identificar un nuevo mecanismo molecular que explica la asociación del PCa y el SM basados en CTBP1. Así, esta proteína regula directamente a CLCA2 y el miR-196b-5p los cuales actuarían como factores claves en el inicio de la progresión de esta enfermedad.

Descripción: En el presente trabajo, se estudió la epigenética asociada al estrés por falta de agua en dos genes de tomate (Asr1 y Asr2), que pertenecen a una familia génica involucrada en la tolerancia a distintos estreses abióticos. Se analizó la región codificante del gen Asr1 en hojas y se detectó la presencia de metilación en todos los contextos: CG, CNG y CNN. Al someter las plantas a estrés hídrico, se observó un ligero aumento de la metilación en contexto CG y una marcada disminución en la metilación asimétrica (CNN). También se detectó, en histonas, una marca represiva de la expresión: H3K27me3, la cual disminuyó como consecuencia del estrés impuesto. Concomitantemente, se registró un marcado aumento en el nivel de transcripto de Asr1. También se analizaron las regiones regulatoria y codificante de Asr2 en raíces. En este sistema, se hallaron elevados niveles de metilación en citosinas en todos los contextos sobre la región regulatoria, registrándose una ligera disminución en la metilación asimétrica como consecuencia del estrés impuesto. En cambio, sobre la región codificante sólo se halló metilación CG, la cual no varió como consecuencia del estrés. Sólo se detectó la marca represiva H3K27me3 sobre una región ubicada 800 pb río arriba del gen, permaneciendo la misma invariable al aplicar el estrés. Estos hallazgos fueron concomitantes con una disminución generalizada de la transcripción, manteniéndose casi constantes los niveles de transcripto de Asr2.

Descripción: Las modificaciones epigenéticas son cruciales para el establecimiento y mantenimientode programas de diferenciación celular. Un posible mecanismo de regulaciónestá determinado por el efecto de la estructura de la cromatina en los patrones desplicing alternativo. Las marcas epigenéticas pueden provocar cambios en la tasa deelongación de la ARN polimerasa II, así como afectar el reclutamiento de diversosfactores y, de esta manera, modular los patrones de splicing alternativo. Aquí descubrimosel mecanismo por el cual el splicing alternativo de la molécula de adhesióncelular neural (NCAM) es regulado durante la diferenciación neuronal mediante laestructura cromatínica. Por otra parte, nos centramos en la regulación del splicingalternativo de G9a, la enzima responsable de la dimetilación en lisina 9 de histona H3 (H3K9me2) en eucromatina de mamíferos. Demostramos que G9a es necesariapara la diferenciación de la línea celular neuronal de ratón N2a y que la inclusión desu exón alternativo (E10) aumenta la localización nuclear de G9a, probablementedebido a la mayor exposición de una secuencia de localización nuclear cercana. Porúltimo, mostramos que la isoforma de G9a que incluye el E10 es necesaria para ladiferenciación neuronal y que regula el patrón de splicing alternativo de su propio ARN mensajero precursor promoviendo una mayor inclusión del E10. Nuestros resultadosindican que, mediante el control de su splicing alternativo, G9a promuevela diferenciación neuronal y gatilla un mecanismo de retroalimentación positiva quereafirma el compromiso a la diferenciación celular.

Descripción: Los RNAs pequeños interferentes (siRNAs) son conocidos por mediar el silenciamiento post-transcripcional de genes (PTGS) promoviendo la degradación de mRNAs targets. Cuando son dirigidos contra regiones promotoras, los siRNAs participan en una vía alternativa conocida como silenciamiento transcripcional de genes (TGS) que promueve la metilación de histonas, formación de heterocromatina e inhibición de la transcripción. Mostramos aquí que los siRNAs dirigidos contra secuencias ubicadas en cercanías al exón alternativo EDI del gen de la fibronectina son capaces de regular su splicing alternativo en celulas de mamíferos. El efecto necesita de dos proteínas claves de la vía de interferencia por RNA, AGO1 y AG02. Sin embargo, como sólo AGO1 es necesario para el TGS concluimos que ésta es la principal vía involucrada. Por otra parte, la importancia del estado de la cromatina ha sido resaltada al mostrar que los efectos son eliminados o reducidos por factores que favorecen una estructura cromatínica mas relajada o que aumentan la elongación de la transcripción. Más aun, el mecanismo involucra la presencia de marcas epigenéticas de heterocromatina facultativa (H3K9me2 y H3K27me3) intragénicas en la región target y la función de la proteína asociada a heterocromatina HP1alfa. Utilizando tecnología genome-wide encontramos que aproximadamente el 40% de los eventos de splicing alternativo contenidos en un panel de RT-PCR relacionado a cáncer fueron afectados tras la depleción de AGO1 o Dicer. Mediante experimentos de ChIP-seq hemos encontrado un enriquecimiento de clusters de AGO1 en promotores de genes con alta expresión y en exones ubicados en genes con baja tasa transcripcional. Adicionalmente, descubrimos un aumento del solapamiento de marcas de histonas sobre sitios target de AGO1. Finalmente, hemos detectado un evento de splicing alternativo endogeno del gen SYNE2 (exón 107) que podría estar siendo afectado fisiológicamente por AGO1.

Descripción: Fil: Glikman, Patricia Leonor. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Lüthy, Isabel Alicia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: En vista de la importancia de los andrógenos 5α-reducidos para el adecuado funcionamiento de las estructuras epididimarias involucradas en la maduración de los espermatozoides, se estudiaron las características de la enzima 5α-reductasa en el epidídimo de la rata. Se determinó su localización subcelular, con la ayuda de marcadores específicos, y los parámetros de su actividad in vitro. Se pudo demostrar la disminución de la actividad (específica y total) luego de la castración, o sea al ser removida la fuente de andrógenos endógenos. Dicha disminución fue proporcional al tiempo transcurrido entre la castración y el análisis de la actividad de la 5α-reductasa: 83, 63, 38, y 13% de la actividad específica control a los 2, 4, 8, y 14 días después de la orquidectomía. Al tratar con testosterona animales castrados 30 días antes, se observó una clara recuperación de la actividad in vitro de la 5α -reductasa; 12 días de terapia (200 ug de TP al día) devuelven la actividad nuclear en un 83%, mientras 8 días de terapia bastan para recobrar los niveles control detectados en la enzima microsomal. Demostrada la andrógeno-dependencia de la enzima 5α-reductasa en el epidídimo adulto, se pasó a estudiar el desarrollo ontogénico de esta actividad en el epidídimo de ratas de 15 a 40 días. También se determinó el de la enzimas 3-hidroxiesteroide deshidrogenasa, que metaboliza la 5α-dihidrotestosterona a 5α-androstandioles, los cuales podrían también tener actividad biológica. Mientras no se registraban mayores cambios respecto del órgano adulto en lo que concierne a localización subcelular y parámetros cinéticos, se encontró un pico en la actividad específica de las dos enzimas alrededor de los 25 días de edad. Además, la relación diol/DHT se hallaba aumentada entre 2 y 5 veces durante el período de 20-25 días. Por último, se midieron en ratas prepúberes de distintas edades algunos parámetros morfológicos y bioquímicos relacionados con la función epididimaria, con el objeto de investigar sobre eventuales correlaciones entre metabolización de testrosterona y desarrollo del órgano. Fueron medidos: los niveles tisulares de andrógenos, la incorporación de 14C Timidina, el contenido en ADN, proteínas totales, humedad, y sustancias específicas como ácido siálico, glicerilfosforilcolina, cinc, y proteínas específicas epididimarias (PEE). También se realizaron cortes histológicos para evaluar en cada edad el desarrollo del conducto epididimario. Los resultados indican que la edad prepuberal se caracteriza por una muy activa metabolización epididimaria de la testosterona a DHT y dioles, coincidente con una intensa proliferación celular. En tanto, la mayoría de las actividades diferenciativas, tales como la secreción de productos específicos (Andrógeno- dependientes en el adulto), quedan relativamente postergadas en esta etapa.

Descripción: Fil: Calvo, Juan Carlos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: En esta tesis se plantearon distintas estrategias para estudiar el papel de las isoformas del receptor de progesterona sobre la población de células madre de la glándula mamaria normal y tumoral. Para ello se utilizaron dos modelos: ratones transgénicos que sobre expresan la isoforma A (PR A) o B (PR B) del receptor de progesterona (PR), y la línea celular de cáncer de mama humano, T47D, y sus derivados T47D YA y T47D YB que expresan PR A y PR B respectivamente. Demostramos que tanto las glándulas mamarias de ratones transgénicos, como células de cáncer de mama humano T47D que sobre expresan PR B presentan mayor porcentaje de células positivas para marcadores de células madre. En los ratones, la ovariectomía llevó a una disminución en el porcentaje de células progenitoras luminales tanto en glándulas mamarias de ratones wild type como de transgénicos PR A, sin afectar a la población madre/progenitora basal. Por otra parte, ensayos con los anti estrógenos Fulvestran y Tamoxifeno demostraron que las células que sobre expresan PR B presentan resistencia a ambos tratamientos, mientras que aquellas con un incremento en la expresión de PR A son sensibles a los mismos. En el modelo tumoral la expresión de PR B se asoció a un fenotipo más maligno evaluado por la formación de mamoesferas de mayor tamaño, más irregulares, con mayor capacidad clonogénica y resistentes a terapias endocrinas. Los resultados obtenidos en este trabajo revelan que el balance adecuado en la expresión de las isoformas del PR es indispensable para mantener la homeostasis de la población de células madre mamarias, y que impacta también a esta población celular en el contexto tumoral. En particular, PR B jugaría un papel fundamental, indicando la relevancia de conocer si hay alteraciones en las cantidades relativas de PR A y PR B como factor de riesgo, o pronóstico al momento de una biopsia o decisión sobre una eventual terapia endocrina.

Descripción: Fil: Conti, Claudio Jorge. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Tasat, Débora Ruth. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: De Las Heras, Marcelo Antonio. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Las MAP quinasas fosfatasas (MKPs) son componentes regulatorios importantes en aquellos procesos fisiológicos en los cuales participan las MAPKs debido a su capacidad de inactivar específicamente a estas enzimas. En este trabajo se analizó el rol funcional y la regulación transcripcional y post-traduccional de MKP-1 en células esteroidogénicas. Demostramos que hCG y AMPc incrementan los niveles de MKP-1 por mecanismos transcripcionales y post-traduccionales. Los resultados obtenidos indican que hCG/AMPc promueven la fosforilación de MKP-1 por acción de PKA y ERK1/2 y que esta modificación promueve su estabilización. También demostramos que esta fosfatasa se localiza tanto en núcleo como en mitocondrias. En lo que respecta al papel funcional de MKP-1, se comprobó que la expresión de MKP-1 inhibe la producción de esteroides por su capacidad de interferir con la inducción de StAR, una proteína clave para la esteroidogénesis. En conclusión, en este trabajo demostramos que LH/ACTH, además de promover la activación de enzimas necesarias para la síntesis de esteroides como ERK1/2, también dispara la activación de mecanismos que contribuyen a la inactivacion de esta enzima. Se concluye que el aumento en la expresión de MKP-1 y la estabilización de la proteína por acción de hCG/AMPc es un mecanismo clave para el cierre de la acción hormonal sobre la esteoidogénesis.

Descripción: La propuesta originalmente planteada era comprender unpoco más algunos de los complejos mecanismos que regulan elmantenimiento de la espermatogénesis. Tal objetivo fuealcanzado mediante el estudio de un parámetro funcional dela celula de Sertoli, comoes la τ-glutamil transpeptidasa. Los estudios se iniciaron utilizando modelosexperimentales "in vivo", en los que se modificaba elestado hormonal del animal. En estos trabajos, se observóque la τ-GTP disminuía en condiciones en que el testículoera deprivado de los estímulos de FSH y andrógenos. Pudoluego observarse que la actividad de esta enzima podíareponerse por administración exógena de las hormonasmencionadas. Cuando se estudió la regulación hormonal de la τ-GTP "in vitro", se observó que sólo la FSH era capaz deestimular esta enzima, la que se ha postulado queinterviene en el transporte activo de aminoácidos alinterior de la célula. La testosterona sola o encombinación con un amplio rango de concentraciones de FSH,no es capaz de inducir cambios en la τ-GTP. Dado que en los modelos "in vivo" los cambios en latestosterona intratesticular estaban siempre asociados concambios en el desarrollo del epitelio germinal, se evaluóla posibilidad que esta enzima estuviera sujeta a unfenómeno de regulación paracrina por células germinales. Tal hipótesis fue confirmada demostrándose que tanto losespermatocitos paquiténicos como las espermátidas,estimulan esta actividad enzimática. El mecanismo por el cual las células germinalesregulan la actividad parecería involucrar la regulación dela secreción de IGF-l. Postulamos que esta estimulación puede estarrelacionada con la biosíntesis de determinadas proteínasesenciales para el normal desarrollo espermatogénico. Utilizando modelos "in vivo" e "in vitro", puede asídemostrarse que la regulación funcional de la célula de Sertoli y por lo tanto la preservación de laespermatogénesis, es un fenómeno complejo donde coexistenmecanismos de regulación hormonal y paracrina/autocrina. La dilucidación de estos fenómenos a los que seencuentran sometidos los parámetros funcionales, y laintegración final de estos conocimientos, permitirá tal vezdentro de algunas décadas, comprender el complejo procesode la espermatogénesis.

Descripción: El presente estudio muestra adaptaciones morfológicas y bioquímicas de lasbranquias del cangrejo Chasmagnathus granulatus aclimatado a distintas salinidades (10, 30 y 45 %o). En las tres salinidades, el epitelio que tapiza la branquia 6 está formado porcélulas en pilar, con función de soporte estructural y por ionocítos, con extensodesarrollo de membrana plasmática basolateral y apical, y gran densidad mitocondrial. Los pliegues de membrana apical delimitan espacios subcuticulares que aumentan entamaño al incrementar la salinidad externa. Las uniones septadas extensas yramificadas en las branquias de cangrejos aclimatados a 10 %o, se acortan y sesimplifican en 30 y 45 %o, indicando un aumento en la permeabilidad paracelular ensituaciones de excreción iónica. La fosfatasa alcalina sensible a levamisol (másconcentrada en la fracción de membrana) se induce a 45 %o, lo que sugiere suparticipación en hipo-regulación y modularía de forma positiva a la Na+/K+-ATPasa (NKA). La actividad de anhidrasa carbónica (AC) y de NKA de branquias posterioresse induce a 10 %o, indicando su participación en la captación activa de iones. En mediosoligohalinos (<5 %o), existe una inducción aún mayor de AC y la absorción iónicadirigida por NKA se complementa con un mecanismo de captación activa yelectrogénica que involucra a la AC, V-H+-ATPasa y al intercambiador apical Cl-/ HCO3-. La branquia 5, además de células en pilar y células involucradas en elintercambio gaseoso, posee un tipo celular similar a las células que secretan H+, congran densidad mitocondrial, desarrollo de membrana apical y numerosas vesículas. Aunque aún no determinado, se presume que este tipo celular participa de procesos detransporte transepitelial, como por ejemplo excreción de amonio o equilibrio ácidobase. La actividad de NKA esta regulada por vías intracelulares antagónicas queinvolucran a las protein quinasas A y C (PKA, PKC) y proteín fosfatasas (PP). Laactivación de PKA determina una estimulación en NKA, obteniéndose lo contrario con PKC. La dopamina ejerce una función moduladora sobre la NKA, a través de la via de PKA y no de PKC. En condiciones basales, en las cuales no se hallaba activada la PKA,la unión dopamina-receptor provoca la activación de adenilato ciclasa vía proteina G, yse incrementan las concentraciones de AMPc. Éste, a su vez, activa la PKA, quefosforila (y activa) moléculas de NKA. Luego se produce la inactivación de la adenilatociclasa. Probablemente, la PKA fosforile al receptor y lo inactive (o le cambie suacoplamiento a una proteína G inhibitoria de la adenilato ciclasa), para dar lugar a otroreceptor de dopamina de menor afinidad y acoplado a una proteína Gi. La disminuciónen las concentraciones de AMPc, ocasiona una reducción en la actividad de PKA. Estopermitiría la liberación de la inhibición de PP, que mediante la remoción de fosfatos,devuelven a la NKA a las condiciones iniciales. Cuando la vía de PKA se hallapreviamente activada, la dopamina actúa como un modulador negativo, ya quedispara en forma directa la inhibición de la adenilato ciclasa, obteniéndose unareducción en la actividad de NKA.

Descripción: La enseñanza y el aprendizaje de la biología evolutiva presentan diversas dificultades, entre ellas los obstáculos epistemológicos, tales como la teleología o el esencialismo, que subyacen a las concepciones de los estudiantes. Trabajar didácticamente sobre estos obstáculos en la escuela implica desarrollar en los estudiantes una vigilancia metacognitiva sobre los mismos, a la hora de construir o utilizar los modelos científicos. En este trabajo, se analizaron las regulaciones metacognitivas sobre los obstáculos epistemológicos elaboradas por los estudiantes durante una secuencia didáctica basada en la modelización escolar. Para alcanzar los objetivos se implementaron métodos de investigación cuantitativos y cualitativos, predominando este último enfoque. Se trabajó con una población de estudiantes de nivel medio, donde se puso en práctica una secuencia didáctica y entrevistas para la recolección de datos. Del trabajo podemos concluir que los estudiantes construyeron un conocimiento metacognitivo sobre los obstáculos epistemológicos que influyó en los modos en que se llevó adelante la regulación. Se identificaron distintos tipos de regulaciones metacognitivas: individuales y sociales, simples y complejas, implícitas y explícitas. En muchos casos, estas regulaciones estuvieron apoyadas por soportes semióticos que se utilizaron durante la secuencia didáctica. Se pudo determinar que los estudiantes regulaban ciertos supuestos o expresiones típicas de los obstáculos epistemológicos que, a su vez, estaban relacionadas con ciertos tipos de explicaciones evolutivas. Hacia el final de la secuencia didáctica, se identificó una producción de mejores explicaciones (en el sentido de poseer más elementos teóricos y regulaciones metacognitivas), lo que asociamos, al menos parcialmente, al trabajo realizado en el aula con el objetivo de fomentar la metacognición.Esto constituye un aporte significativo a la comprensión de los procesos metacognitivos que se pueden llevar adelante en una clase de ciencias.

Descripción: Los factores neurotróficos son proteínas solubles principalmente conocidas por suparticipación en el mantenimiento, sobrevida, diferenciación y maduración sináptica dediferentes subpoblaciones neuronales. Distintas familias de factores neurotróficos hansido identificadas en el sistema nervioso de mamíferos, entre las que se destacan elgrupo de las neurotrofinas (NGF, BDNF, NT3, NT4) y la familia del factor neurotróficoderivado de la glia (GDNF, NRTN, ARTN, PSPN). Las señales inducidas por estosligandos involucran la activación de receptores conteniendo una actividad tirosina kinasaintrínseca, un evento de señalización clave para controlar la fisiología celular y orquestarel desarrollo del sistema nervioso. Un fuerte control y regulación de la actividad de losreceptores tirosina kinasa (RTK) es crucial para garantizar la homeostasis celular y unapropiado desarrollo neuronal, ya que tanto alteraciones funcionales de estos receptorespor mutaciones en los correspondientes genes como fallas en los mecanismos querestringen su activación, podrían contribuir a la patogénesis de ciertos tipos de cáncer yde enfermedades neurológicas. De esta manera, para evitar errores de señalización quefinalmente lleven a comportamientos celulares aberrantes y patologías, los mecanismoscelulares han evolucionado para permitir que apropiados niveles de activación de estosreceptores sean alcanzados y mantenidos por un período de tiempo compatible con lainducción de una respuesta fisiológica. El objetivo de la presente tesis consistió en identificar y caracterizar nuevosmecanismos que restringen la activación de receptores para factores neurotróficosen neuronas en desarrollo, como una vía para entender la patogénesis de diferentesenfermedades neurológicas, y así contribuir al desarrollo de nuevas terapiasregenerativas. Inicialmente, identificamos y caracterizamos a la proteína Sprouty4 como uninhibidor endógeno de la señalización y el crecimiento axonal inducidos por NGF y sureceptor TrkA en neuronas sensoriales de los ganglios de la raíz dorsal (DRG). Por otro lado, nosotros también analizamos el rol de los miembros de la familia deproteínas Lrig – Lrig1, Lrig2 y Lrig3 – como moduladores endógenos del estado deactivación de receptores para factores neurotróficos. Las proteínas Lrig pertenecen a unaemergente superfamilia de proteínas transmembrana enriquecidas en sistema nerviosoque contienen dominios inmunoglobulina (Ig) y repeticiones ricas en leucina (LRR - Leucine-rich repeats). En este sentido, identificamos a Lrig1 como un regulador negativode la señalización y los efectos biológicos inducidos por BDNF y su receptor TrkB enneuronas hipocampales. Notablemente, hemos determinado que los ratones transgénicosdeficientes para Lrig1 poseen una mayor arborización dendrítica en las neuronaspiramidales del hipocampo que correlaciona con defectos en su comportamiento deinteracción social, aportando nuevas evidencias de su relevancia fisiológica. Por último, realizamos experimentos que demuestran que los tres miembros de lafamilia Lrig, cooperarían para inhibir el crecimiento neurítico inducido por GDNF,controlando el estado de activación de su receptor tirosina kinasa Ret en célulasneuronales. De esta manera, en este trabajo de tesis doctoral hemos identificado nuevosdeterminantes moleculares relevantes para el control de la conectividad y el armado delos circuitos neuronales, a través de la regulación de procesos de crecimiento axonal ydendríticos inducidos por factores neurotróficos en el sistema nervioso central y periférico. Palabras clave: RTK, factores neurotróficos, Lrig, Sprouty4, NGF, BDNF, GDNF, Ret, TrkA, TrkB, hipocampo, ganglios de la raíz dorsal (DRG).

Descripción: Fil: Barañao, José Lino S.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Salceda, Susana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: El splicing alternativo del precursor del RNA mensajero es una fuente extraordinaria de diversidad proteica y la regulación de este proceso es crucial para diversas funciones celulares tanto en situaciones fisiológicas como patológicas. Sin embargo, poco se sabe acerca de las señales y vías que regulan el splicing alternativo. Un modelo relevante de este proceso es provisto por la fibronectina, que contiene tres regiones de splicing alternativo conocidas como EDI, EDII y IIICS. Encontramos que diferentes factores de crecimiento estimulan la inclusión de EDI y de IIICS pero no la de EDII en el RNA maduro de la fibronectina en diferentes líneas celulares, favoreciendo isoformas de fibronectina asociadas con la proliferación, migración y remodelado de tejidos. Caracterizamos a la vía de supervivencia Ras-fosfatidilinositol 3-quinasa-AKT/Proteína quinasa B como la principal responsable de esta regulación. Mostramos que los factores de crecimiento gatillan la fosforilación de proteínas ricas en serina/arginina tales como SF2/ASF y 9G8, las cuales son importantes reguladores del splicing y probamos que AKT/Proteína quinasa B funciona como una proteína quinasa de proteínas ricas en serina/arginina. Asimismo, mostramos que los factores de crecimiento no sólo modifican el patrón de splicing alternativo de la fibronectina sino que también alteran la traducción de RNAs reporteros conteniendo una secuencia de EDI responsable de la unión de proteínas ricas en serina/arginina, sugiriendo dos niveles co-regulados de amplificación específica de isoforma. Tanto la regulación del splicing como la de la traducción en respuesta a factores de crecimiento son inhibidas por RNAs pequeños de interferencia contra SF2/ASF y 9G8. Finalmente, mostramos que SF2/ASF es capaz de regular la diversidad proteómica alterando el balance entre diferentes mecanismos de iniciación de la traducción, expandiendo aún más su ya descripto potencial para aumentar el repertorio proteico.

Descripción: Fil: Méndez, Beatriz Silvia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Trypanosoma cruzí es un parásito protozoario causante de Ia enfermedad de Chagas, cuya regulación de la expresión génica se da casi exclusivamente a nivel post-transcripcional. Los objetivos de la presente tesis fueron estudiar las regiones intergénicas y la influencia del elemento repetido SIRE en las mismas. Se determinó la presencia del elemento SIRE en regiones no codificantes del genoma del parásito . Se estableció que SIRE se asocia a una amplia variedad de genes implicados en distintos procesos metabólicos. Másaún, se determinó la relevancia que esta asociación tiene en la regulación de la expresión génica del parásito, dado que SIRE pude disminuir la estabilidad y la traductibilidad del ARNm al estar en regiones 3’ UTR, o bien aumentar la traductibilidad del ARNm al incluirse los últimos nucleótidos de SIRE en regiones 5' UTR. A su vez se estudió en profundidad las secuencias requeridas en el transsplicing y se definió la existencia de elementos reguladores del mencionado proceso y al mismo tiempo de la traductibilidad del ARNm correspondiente. Por último los resultados determinan la falta de consensos estrictos para las señales reconocidas en los primeros pasos del trans-splicing.

Descripción: La levadura Saccharomyces cerevisiae puede usar una amplia variedad de fuentes de nitrógeno. En la naturaleza las células utilizan preferencialmente fuentes ricas de nitrógeno que permiten una mayor tasa de crecimiento, limitando la síntesis de enzimas y permeasas necesarias para el catabolismo de fuentes pobres. Este mecanismo se conoce como represión catabólica por nitrógeno (NCR) y en él intervienen los factores de transcripción GATA: Gln3 y Gat1, dos activadores, y Uga43 y Gzf3, dos represores. Sin embargo, en ausencia de fuentes ricas, las células pueden utilizar otras fuentes mediante caminos metabólicos que requieren la síntesis de novo de proteínas necesarias para su catabolismo; esto ocurre en presencia de un inductor, generalmente un sustrato de la vía. Así, para el catabolismo de fuentes pobres de nitrógeno, como GABA, alantoína y leucina, son necesarios el factor de transcripción pleiotrópico Dal81 y otro factor específico de cada fuente (Uga3, Dal82 y Stp1/Stp2) para que se produzca la activación transcripcional de los genes que codifican para permeasas tales como Uga4, Dur3, Agp1, Bap2 y Bap3. El objetivo general de este trabajo fue estudiar los mecanismos moleculares involucrados en la regulación transcripcional de estos genes que están regulados por al menos dos mecanismos complementarios: uno dependiente de la calidad de la fuente de nitrógeno y el otro dependiente de inductor. En este trabajo demostramos que los factores GATA regulan de manera diferente a cada uno de los genes estudiados. Encontramos que Uga43 y Gzf3 pueden tener un efecto positivo sobre la expresión de ciertos genes sensibles a nitrógeno. Además demostramos que Uga43 requiere de Leu3 para interaccionar con sus secuencias blanco y este mecanismo es responsable de la expresión basal de UGA4. En cambio, Uga43 y Gln3 no son necesarios para la interacción de Uga3 y Dal81 con los promotores UGA. Por otra parte mostramos que tanto Stp1 como Dal81 son reclutados al promotor AGP1 de manera dependiente de inductor y que ambos factores de transcripción se necesitan mutuamente para cumplir su función. También Stp1, Stp2 y Dal81 actúan de manera concertada en la regulación de BAP2 y BAP3. Finalmente, encontramos que Leu3 actúa como un activador de la expresión de BAP2, mientras que no tiene efecto sobre la expresión de AGP1 y de BAP3. Por último, demostramos también que existe una jerarquía en el uso de fuentes pobres de nitrógeno. Cuando se encuentran presentes en el medio de cultivo, las células consumen primero leucina, luego alantoína y finalmente GABA a través de la expresión de AGP1, luego DUR3 y DAL7 y finalmente UGA4. Además, se demostró que Dal81 es el regulador central responsable de esta jerarquía. La complejidad en la regulación de cada una de las permeasas estudiadas sin duda refleja la alta capacidad que tienen las células de levadura a adaptarse a diversas y cambiantes condiciones del entorno, activando determinadas vías metabólicas.

Descripción: Las células deben mantener un específico y delicado balance de su fisiologíainterna para el crecimiento y funcionamiento óptimos. El mantenimiento de este balanceinterno es crítico y variaciones del ambiente pueden resultar en una variedad deperturbaciones celulares que pueden romper el equilibrio interno celular, provocando deesta forma una interrupción de flujos metabólicos, desestabilización de estructurascelulares y perturbación de gradientes químicos, entre otros, que conducen a unainestabilidad general. Las células deben ser capaces de proteger y mantener lahomeostasis interna frente a la variabilidad de las condiciones externas. La levadura Saccharomyces cerevisiae, ha evolucionado sistemas de sensado y redes de señalizacióncomplejas para responder eficientemente a las variaciones repentinas y frecuentes en elambiente externo, como son fluctuaciones de temperatura, osmolaridad, acidez delambiente, presencia de tóxicos, y largos períodos de hambreado nutricional. Dichosmecanismos, le permiten controlar la expresión de numerosos genes que estáninvolucrados en la división celular, caminos metabólicos, resistencia a estrés ydiferenciación celular. En Saccharomyces cerevisiae una gran variedad de los procesos celulares escontrolada por la vía de la proteína kinasa A dependiente de cAMP (PKA), la que consisteen un heterotetrámero formado por dos subunidades catalíticas (C) codificadas por losgenes TPK1, TPK2 y TPK3, y por dos subunidades regulatorias (R) codificadas por un únicogen BCY1. Entre los estímulos mejor descriptos frente a los que la PKA se activa seencuentra la presencia de fuentes de carbono fermentables en el medio. Por el contrario,tanto para el cambio a metabolismo respiratorio que permite el consumo de fuentes decarbono no fermentables, como para dar una respuesta que permita la adaptación asituaciones de estrés térmico y osmótico, es necesario que la PKA se inactive. Laespecificidad de la respuesta frente a distintos estímulos es determinada por variosfactores como son la concentración local de cAMP, los niveles de expresión de la quinasa ydel sustrato, la presencia o ausencia de proteínas de anclaje que limitan la interacción dela quinasa con su sustrato y la secuencia alrededor del sitio de fosforilación de éste. Laregulación de los niveles de expresión génica de las subunidades de PKA en Saccharomyces cerevisiae ha sido poco estudiada hasta el momento. En este trabajo sebuscó caracterizar la actividad transcripcional de los promotores de los genes de lassubunidades de PKA en distintas condiciones de crecimiento, así como identificarglobalmente vías metabólicas y específicamente proteínas de importancia en laregulación. En primer lugar, mediante la técnica de genes reporteros y la medición de losniveles de mRNA, se determinó que los niveles de actividad de los promotores de losgenes de PKA son diferentes a lo largo del crecimiento, ordenándose de mayor a menorde la siguiente forma: TPK1, TPK2, TPK3 y BCY1. Empleando mutantes que exhiben unaactividad de PKA desregulada o nula, se describió el comportamiento autorregulatorionegativo isoforma-dependiente de la enzima sobre los niveles de expresión de sus propiosgenes. En condiciones de estrés térmico y salino, sólo el promotor TPK1 es activado, ymediante el empleo de cepas mutantes de deleción de proteínas involucradas en la vía derespuesta al estrés térmico, se determinó que la quinasa Rim15, y no la quinasa Yak1,interviene en su regulación. Más aún, Msn2/4, Gis1 y Sok2, factores de transcripción ríoabajo de ambas quinasas, participan en la activación del promotor TPK1, y sureclutamiento fue confirmado por experimentos de ChIP. Por otra parte, el estudio de larespuesta de los promotores al crecimiento en glicerol (metabolismo oxidativo), indicó unmarcado incremento de la actividad, respecto al crecimiento en glucosa (metabolismofermentativo). El uso de mutantes de deleción de genes que codifican para proteínas queparticipan en la transducción de la señal de fuente de carbono permitió identificar alfactor de transcripción Mig1 como represor de los promotores TPK1 y TPK2; a Mig2 comorepresor de los promotores de TPK2 y BCY1, y a Mig3 como represor del promotor de BCY1. Se corroboró la presencia de Mig1 en el promotor TPK1 transcripcionalmente activomediante ensayos de ChIP. La quinasa Snf1y sus efectores río abajo, los factores detranscripción Cat8 y Sip4, que cumplen un rol importante en la respuesta al hambreado deglucosa, regulan la actividad de los cuatro promotores en presencia de esta fuente decarbono. Teniendo en cuenta que la PKA está implicada en numerosas vías de transducciónde señales, y habiendo corroborado que las vías de respuesta a estrés y a fuente decarbono regulan la actividad de los promotores de los genes de sus subunidades, serealizó un estudio a nivel genómico a través del empleo de tecnología robótica (técnica Reporter-Synthetic Genetic Array), con el objetivo de identificar de forma global nuevosreguladores de la transcripción. Este estudio se llevó a cabo con células crecidas en fuentede carbono fermentable. Este análisis masivo permitió identificar distintas vías queregulan diferencialmente la actividad de los cuatro promotores de las subunidades de PKA. Los reguladores identificados fueron clasificados según la base Gene Ontology paradeterminar el enriquecimiento en distintas categorías. Distintos genes asociados a lascategorías de transcripción, función mitocondrial, función vacuolar y metabolismo defosfato afectan la actividad de los cuatro promotores. A su vez se identificaron tambiéngenes pertenecientes a distintas categorías regulatorias que no son compartidas por lospromotores, como metabolismo de lípidos, que afecta la transcripción de TPK1, TPK2 y TPK3. Fue llamativo además, que dentro de una misma categoría que surgió comoreguladora de los cuatro promotores, los genes identificados son diferentes para cadasubunidad de PKA. Del análisis surgieron también los metabolitos inositol, polifosfatos deinositol, colina y fosfato como señales que regulan la transcripción de los genes de lassubunidades de PKA. De este trabajo se desprende que muchos de los blancos defosforilación conocidos de PKA que forman parte de estas rutas metabólicas, juegan a suvez un rol en la regulación transcripcional de sus subunidades, sugiriendo la posibilidad deuna regulación recíproca en la que PKA coordinaría diferentes vías de señalización y estosprocesos a su vez regularían la expresión de la quinasa. Este concepto está además enrelación con los resultados de la primera parte del trabajo, que muestran una regulacióninhibitoria de los promotores de PKA por la propia actividad de la quinasa. Como conclusión general se puede afirmar que la regulación diferencial de laexpresión de las subunidades que conforman la quinasa dependiente de cAMP juega unrol importante en la determinación de la especificidad de la respuesta en el camino deseñalización cAMP-PKA.

Descripción: En el presente trabajo de tesis investigamos aspectosrelacionados con el acoplamiento entre la transcripción yel splicing alternativo. Utilizando como modelo al exónalternativo EDI de la fibronectina humana, encontramos quela elongación transcripcional es un importante moduladordel splicing alternativo. El Ag T de SV40 activa lareplicación del DNA 2 veces, la transcripción entre 12 y 20veces, y es capaz de provocar un incremento de 25 veces enla inclusión del exón EDI. El efecto del Ag T es específicode exón, ocurre en cis y depende de la replicación del DNAy no de la transformación celular. VP16, un activador de lainiciación y elongación transcripcionales tiene un efectosimilar en la transcripción pero opuesto sobre el splicing:inhibe la inclusión de EDI 35 veces. Es más, esta proteínaviral es capaz de revertir el efecto del Ag T sobre elsplicing de EDI. Consistentemente se determinó que lareplicación es capaz de modificar la estructura cromatínicadel molde y de ese modo alterar la capacidad elongadora dela RNA pol II. Por otro lado, el enhancer transcripcionaldel SV4O (una secuencia capaz de aumentar la capacidadelongadora de la RNA pol II) favorece la exclusión del exón EDI en forma independiente de los niveles de RNA. De estemodo, la modulación de la capacidad elongadora de la RNApol II aparece como una nueva forma de regular el splicingalternativo. Independientemente se determinaron dos hechosde importancia: ni el sitio intranuclear de transcripción,ni el reclutamiento de proteínas de splicing por lamaquinaria transcripcional parecen tener una influenciaimportante sobre la decisión de inclusión del exón EDI enel transcripto maduro.

Descripción: Delta-like 1 (Dll1) es el gen que codifica para DELTA1, el ligando canónico del receptor Notch componente principal de la vía de transducción de señales de célula a célula, que participa ampliamente en la neurogénesis embrionaria y que determina en gran medida las características del sistema nervioso en la adultez. Entender la regulación transcripcional de Dll1 durante el desarrollo y sus variaciones a largo de la evolución es fundamental para entender las bases genéticas de la diversidad existente entre los cerebros de las distintas especies, particularmente en nuestro linaje evolutivo. El objetivo de esta tesis consiste en ampliar el conocimiento sobre la regulación transcripcional de Dll1 y analizar los cambios evolutivos sobre la misma que ocurrieron en el linaje de los primates antropoides que podrían haber modificado el proceso de neurogénesis para dar un cerebro con gran tamaño, alto número de neuronas corticales y distintivas capacidades cognitivas y de aprendizaje, que caracterizan a nuestro linaje evolutivo. Para ello, se estudiaron los elementos genéticos no codificantes que presentan alto grado de conservación entre vertebrados y que se encuentran comprendidos entre 4.3 kilobases (Kb) y 7.4 Kb desde el sitio de inicio de la transcripción Dll1 en el genoma de ratón. Para evaluar la capacidad de estos elementos de funcionar como activadores transcripcionales (enhancers), se generaron ratones transgénicos portadores de proteínas reporteras bajo el control de los elementos a estudiar. El patrón de expresión de las proteínas fue caracterizado tanto espacial como temporalmente. De manera complementaria, para evaluar el rol de estos enhancers durante el desarrollo in vivo, se realizaron ensayos de pérdida de función al generar y caracterizar ratones mutantes (knock-out) portadores de deleciones en dichos elementos. Además se identificó uno de los elementos no codificantes conservados, al que denominamos DAANC (por Dll1 Anthropoid Accelerated Non Coding), que presenta signos de evolución acelerada en el linaje de los antropoides y es capaz de dirigir la expresión de proteínas reporteras al sistema nervioso central y en particular a la corteza en estadíos del desarrollo coincidentes con la neurogénesis. Para estudiar el potencial efecto de estos cambios evolutivos sobre la transcripción de Dll1 y sobre el proceso de neurogénesis, se generaron ratones transgénicos reporteros portadores de las versiones ancestral y antropoide de DAANC y también se evaluaron in vivo mediante la generación de un ratón mutante (knock-in) portador de las mutaciones antropoideespecíficas.

Descripción: Existen varios niveles de control que interactúan en forma dinámica y coordinada para mantener la especificidad de la señalización: la secuencia blanco alrededor del sitio de fosforilación, la presencia o ausencia de proteínas que permiten el anclaje de la quinasa a través de la subunidad regulatoria y que regulan de esta manera la interacción quinasa–sustrato, la localización subcelular diferencial de las subunidades catalíticas frente a distintos estímulos y los niveles de expresión del sustrato y la quinasa. La PKA de S.cerevisiae es una holoenzima compuesta por un dímero de subunidad regulatoria, Bcy1, y dos subunidades catalíticas, Tpk1, Tpk2 y Tpk3. Las distintas subunidades se expresan diferencialmente en condiciones como el estrés térmico y salino o disponibilidad y tipo de fuente de carbono. La regulación de la expresión de cada subunidad de la holoenzima es uno de los niveles de control que determinan la especificidad de la respuesta cAMP-PKA. El objetivo general de este trabajo fue contribuir a dilucidar los mecanismos moleculares que controlan la especificidad en la vía de señalización de cAMP-PKA en S.cerevisiae. En esta tesis estudiamos el mecanismo a través del cual la vía cAMP-PKA media su respuesta especifica al estrés térmico y a la adaptación térmica en la levadura. Demostramos que frente al estrés térmico a 37°C se inducen los niveles del mRNA de TPK1. Este incremento resulta de un aumento tanto en la actividad del promotor de TPK1 como de la vida media del transcripto. Sin embargo, no se detecta ningún cambio en los niveles de proteína Tpk1. Durante el estrés térmico el mRNA de TPK1 se ensambla en gránulos citoplasmáticos. Los gránulos resultan resistentes al tratamiento con cicloheximida y en un perfil de polisomas el transcripto de TPK1 se encuentra en mayor proporción en las fracciones que contienen monosomas o RNA libre, indicando que su traducción se encuentra inhibida. La regulación de la expresión de TPK1 se evaluó también durante condiciones de estrés térmico que promueven la termotolerancia. Una levadura que se expone de manera abrupta a un estrés térmico responderá de una forma menos eficiente que si, antes de exponerla a la temperatura elevada, se la somete por un período corto de tiempo a una temperatura no letal por encima de la óptima. En este caso la levadura adquiere una mayor capacidad de sobrevivir al estrés térmico. Este fenómeno se conoce como inducción de termotolerancia. En estas condiciones, realizando dos incubaciones a 37°C separadas por períodos de recuperación a 25°C, se observó que los gránulos que contienen mRNA de TPK1 son dinámicos, ensamblándose y desarmándose durante los cambios de temperatura. Mientras los niveles de mRNA aumentan en los períodos de incubación a 37°C, los niveles de proteína Tpk1 están significativamente aumentados en el periodo final de recuperación a 25°C. Entre los caminos que se activan en respuesta al estrés térmico en S. cerevisiae, se encuentra la vía CWI (Integridad de la pared celular). Para profundizar en el conocimiento de los mecanismos moleculares que regulan la expresión de TPK1, se analizó el entrecruzamiento entre las vías CWI y cAMP-PKA. Demostramos que el sensor Wsc3 es necesario para la regulación de la expresión de TPK1 durante el estrés térmico. De la cascada MAPK, que forma parte de la vía CWI y rio abajo del sensor, sólo la quinasa Mkk1 y el factor de transcripción Swi4 poseen un rol en la expresión de TPK1, en respuesta a este tipo de estrés. El ensamblado de los focos en el estrés térmico depende del sensor Wsc3. La expresión de proteína Tpk1 durante la termotolerancia es menor en una cepa mutante wsc3Δ que en la cepa WT. Se correlacionaron los cambios de expresión con la actividad PKA in vivo y consecuentemente al aumento de Tpk1 en la termotolerancia, se determinó que la actividad PKA en las células mutantes wsc3Δ resulta más baja. Todos estos resultados evidencian la participación de la vía CWI en la expresión de TPK1 durante el estrés térmico y aportan un antecedente más al entrecruzamiento de la vía CWI y PKA. Finalmente, realizamos experimentos para demostrar que la regulación de la expresión de la subunidad TPK1 en respuesta al estrés térmico, redunda en un cambio en la proporción de las isoformas que conforman la holoenzima. Demostramos que la cantidad de la isoforma Tpk1 en la holoenzima es significantemente mayor durante el segundo período de recuperación a 25°C, comparando con cualquiera de las otras condiciones testeadas. Los resultados en su conjunto indican la existencia de un mecanismo que regula la expresión de la subunidad Tpk1 frente a un determinado estímulo como es el estrés térmico. El incremento en la actividad de PKA dependiente de Tpk1 durante la adaptación celular al estrés por calor podría contribuir a la aptitud celular general cuando se restablecen condiciones ambientales más favorables. Los resultados indican la existencia de un mecanismo de regulación de la expresión de TPK1 que permite ajustar la especificidad de cAMP-PKA para que la célula logre la mejor respuesta a un determinado estímulo.

Descripción: Las células madre pueden dividirse preservando su identidad y diferenciarse a distintos tipos celulares. En particular, las células madre embrionarias (CME) derivan del macizo celular interno del blastocisto y son pluripotentes, lo que significa que pueden dar origen a células derivadas de las tres capas germinales. Los factores de transcripción (FT) Oct4, Sox2 y Nanog son esenciales para mantener las propiedades fundamentales de células madre pluripotentes (CMP) dado que inducen genes necesarios para preservar el estado indiferenciado y reprimen otros involucrados en procesos de diferenciación. Las CMP poseen un conjunto de mecanismos que aseguran su estabilidad genómica, evitando la propagación de daños genéticos, crítico en CME, ya que son las células que en el embrión dan lugar al individuo, incluyendo la línea germinal. Parte fundamental de estos mecanismos de protección es el sistema de defensa frente al estrés oxidativo, cuya actividad está exacerbada en CMP y disminuye a lo largo de la diferenciación. Si bien su función y composición están muy estudiadas, aún no se conoce en profundidad la regulación de los genes involucrados en este sistema en CMP. En base a la hipótesis de que la expresión de algunos componentes de este sistema es regulada por los FT de pluripotencia, nos propusimos estudiar la expresión y regulación de ciertos genes clave. A partir de un primer screening detectamos algunos genes cuya transcripción resultó modulada en la diferenciación, tanto en líneas de CME como en CMP inducidas (CMPi), otro modelo de CMP. En esta tesis nos enfocamos en el gen de Sod1, perteneciente la familia de las Sod, primera línea de defensa frente a las especies reactivas de oxígeno; el gen de la Glutatión reductasa (Gsr), que cataliza la formación de glutatión reducido, crítico para la resistencia al estrés oxidativo y el mantenimiento de un ambiente reductor; y el gen de Hemo oxigenasa 1 (HO-1), responsable del catabolismo del grupo hemo y con un posible rol en la diferenciación de CMP y la generación de CMPi, además de su conocido efecto citoprotector. Para estudiar la regulación de estos genes por los FT de CMP utilizamos diferentes abordajes complementarios: analizamos su expresión en CME indiferenciadas y sometidas a diferenciación; mediante análisis bioinformáticos estudiamos la existencia de sitios de unión para estos FT y su interacción en regiones regulatorias de estos genes en CMP; evaluamos el efecto del silenciamiento de los FT mediante short hairpin RNA, sobre los niveles de ARNm y finalmente, analizamos el efecto de la expresión de dichos FT en sistemas heterólogos, tanto mediante ensayos de trans-activación sobre construcciones reporteras, como sobre el gen endógeno en una línea celular que expresa de manera inducible el FT Oct4. Encontramos que el gen de Sod1 es inducido por Oct4, Sox2 y Nanog, el de Gsr regulado negativamente por estos tres FT y el de HO-1, reprimido por Oct4. Por otro lado, se especula que además de su función enzimática clásica, HO-1 podría tener una función nuclear. Dado que detectamos HO-1 en el núcleo de CME y en base a su propuesto rol durante la diferenciación, hipotetizamos que está involucrada en la regulación génica que impacta en la diferenciación. En la última parte de este trabajo comenzamos a explorar este posible rol de HO-1 mediante análisis de su efecto sobre los FT de pluripotencia y sobre la organización dinámica de la cromatina en CME. Nuestros resultados preliminares sugieren que HO-1 podría tener un efecto sobre la distribución subnuclear de la proteína asociada a heterocromatina HP1. Finalmente, comenzamos a generar mediante CRISPR/Cas9, una línea de CME knockout para HO-1 que será una valiosa herramienta para dilucidar su función en el contexto de las CM. En síntesis, en esta tesis encontramos que los FT de pluripotencia regulan la expresión de importantes componentes del sistema de defensa frente al estrés oxidativo, resaltando una conexión entre la homeostasis redox y la identidad celular. Notablemente, esta relación no pareciera ser consecuencia de un mecanismo general, dado que detectamos genes de este sistema que se inducen y otros que se reprimen por los FT de CMP. Por otra parte, comenzamos a explorar el rol de HO-1 en CME y a generar una herramienta que será valiosa para este estudio. La posibilidad de disponer en el futuro de terapias basadas en este tipo de células depende en gran medida de su habilidad para mantener un genoma intacto y de la calidad de las células diferenciadas que derivan de éstas. A través del estudio aquí planteado, esperamos poder realizar un aporte a este promisorio campo.

Descripción: Fil: Rossi, Susana Graciela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: La obesidad y otras disfunciones asociadas al síndrome metabólico tienen unaprevalencia creciente en la actualidad. El aumento de tejido adiposo resulta principalmentede una combinación del aumento del número de adipocitos y el tamaño de los mismos. Enconsecuencia, comprender los mecanismos moleculares que regulan la formación del tejidoadiposo resulta de gran utilidad para detener el avance de dichas patologías. La adipogénesis es el proceso durante el cual un fibroblasto comprometido, o preadipocito,se diferencia a adipocito maduro. En este trabajo nos propusimos estudiar elpapel que cumple el receptor de insulina (IR) en esta diferenciación. Tomamos como modelo la línea celular 3T3-L1, formada por preadipocitos que, enlas condiciones adecuadas y bajo el estímulo hormonal correcto, son capaces de diferenciara adipocitos. Demostramos que la correcta modulación de las isoformas de IR (IR-A e IR-B)resulta clave para el desarrollo exitoso de este proceso. Realizamos ensayos de silenciamiento y sobre-expresión de las distintas isoformasde IR. Utilizando la técnica de CRISPR/Cas9, generamos líneas estables deletéreas para IR,las cuales perdieron su capacidad de diferenciar terminalmente. Encontramos que la reexpresióndel receptor en este contexto permite recuperar algunas características clavesque poseen las células diferenciadas. Por otro lado, efectuamos diversos ensayos de manipulación génica con el fin deestudiar la regulación de la localización subcelular de IR. Demostramos que IR puede serdetectado en la fracción nuclear, tanto de células indiferenciadas como terminalmentediferenciadas. Estos resultados refuerzan la importancia de IR en el proceso de diferenciaciónadipocitario y contribuyen a la comprensión de los procesos que llevan a trastornosmetabólicos relacionados con la falla de la acción de dicho receptor.

Descripción: La manipulación de reguladores globales es una de las estrategias utilizadas para la construcción de cepas bacterianas adecuadas para la síntesis de bioproductos, debido a que este tipo de reguladores controlan, de forma conjunta, los flujos de carbono y poder reductor. Sin embargo, los efectos pleiotrópicos de estos reguladores pueden variar en diferentes condiciones y a menudo dependen de la cepa de trabajo. En este estudio se analizaron los efectos de ArcA, CreC, Cra y Rob usando mutantes de deleción única de la cepa BW25113 de Escherichia coli (E. coli), la cual está bien caracterizada y completamente secuenciada. La comparación de los efectos de cada regulador sobre la síntesis de los principales metabolitos extracelulares, la tolerancia a varios compuestos y la síntesis de bioproductos nativos y no nativos en diferentes condiciones de crecimiento permitió la discriminación de los fenotipos particulares que se pueden atribuir a las mutantes individuales, y destacó a las mutantes Δcra y ΔarcA, en las que se observaron los efectos más importantes sobre el metabolismo bacteriano. A partir de estos datos, en una prueba de concepto para analizar si sus contextos metabólicos eran adecuados para la síntesis de los biocompuestos reducidos, se utilizaron estas cepas como plataformas para la síntesis de succinato y 1,3-propanodiol (PDO). La mutante Δcra se modificó adicionalmente para potenciar la síntesis de succinato mediante la adición de enzimas que aumentan la disponibilidad de NADH y CO2, logrando un aumento del 80% en comparación con la cepa salvaje. La producción de PDO en la mutante ΔarcA se optimizó mediante la sobreexpresión de la proteína PhaP, que permitió un aumento del 230% en la síntesis del diol en comparación con la cepa salvaje. En un medio semidefinido, usando glicerol como fuente de carbono, los cultivos en biorreactor de esta cepa alcanzaron 24 g.L-1 de PDO después de 48 h, con una productividad volumétrica de 0,5 gL-1h-1.

Descripción: Se efectuó la determinación experimental de las variaciones de pH de una suspensión de carbonato de calcio en función del agregado de solución de cloruro férrico, y a la inversa, agregando la suspensión de carbonato de calcio sobre la solución de cloruro férrico. Mientras hubo exeso de carbonato de calcio, se obtuvo en el primer caso, una meseta descendente entre pH 7,25 y 6,50 aproximadamente. Procediendo a la inversa, se estabilizó el pH en 7,25, mientras que si la suspensión era agregada sobre agua destilada,sealcanzaba un pH de 7,50, en cambio la suspensión misma de carbonato de calcio tenía como valor medio pH 8,36. Para explicar estas discrepancias, se estudiaron teóricamente los factores que podian determinar el pH de esos sistemas, encontrandose la fórmula siguiente, válida para los sistemas en equilibrio: (ver fórmula en la tesis)en la cual K tiene un valor calculado igual a 6,67, pf Cl2Ca es igual a - log f Cl2Ca, siendo fCl2Ca el coeficiente de actividad media del cloruro de calcio, y pCa = -log [Ca++]. Esta fórmula se comprobó experimentalmente con suficiente aproximación, encontrándose para K el valor 6,24 , concordante con el calculado. Por lo demás, los valores observados correspondientes a la suma de los dos últimos terminos de la ecuación se encuentran sobre una recta con pendiente de 45° , como era de esperarse. La aplicación de esta ecuación a los casos considerados primeramente, permitió determinar que los mismos no se encontraban en equilibrio, incluyendo la suspensión pura de carbonato de calcio, la cual por estar preparada con agua hervida, daba un pH de 8,36, siendo su valor para el estado de equilibrio con el aire igual a 7,85 calculado y 7,80 observado. En todos los otros casos los valores de pH son interiores a los correspondientes al equilibrio, por retener las soluciones cierta cantidad de anhidrido carbónico, que solo ee elimine lentamente. Las consideraciones hechas sobre la teoria del poder regulador, nos llevaron a aceptar que el poder amortiguador β, viene dado por la suma de un poder regulador verdadero ρ producido por mecanismos quimicos, y de un valor β0 que depende del pH de la solución unicamente, oseaβ=ρ+β0por lo tanto β nunca se anula, pues cuando ρ se hace 0,β=β0. Se demostró una fórmula general para la ecuac16n de Henderson, cuya segunda derivada se anula en el punto de máximo poder buffer, y de la cual pueden deducirce las ecuaciones aproximadas ya conocidas para el pH de los ácidos y bases débiles en soluciones puras,y en cualquier grado de neutralización parcial hasta llegar a las sales puras en solución inclusive. Se demostró que el criterio de Prelat en su definición de poder buffer no es aceptable por cuanto su derivada no se anula en el punto de máxima capacidad reguladora. Respecto del poder regulador de la suspensión de carbonato de calcio, se dedujo una ecuación que demuestra que al contrario de lo que ocurre en los sistema homogéneos, en éste caso el poder regulador aumenta constantemente sin pasar por ningún maximo. Esto se comprobó además en forma experimental.

Descripción: En este trabajo de Tesis se estudian los conceptos de temperatura local y tempe- ratura efectiva en sistemas mesoscópicos fuera del equilibrio. Para definir y estudiar estos conceptos se se eligió como ámbito el estudio del transporte cuántico en sistemas mesoscópicos llevados fuera del equilibrio mediante la aplicación de potenciales externos que presentan una dependencia armónica en el tiempo. En el Capítulo 1 se introducen los sistemas mesoscópicos. Se describe el área de la física denominada transporte cuántico y se mencionan las magnitudes físicas relevantes, las escalas de longitud y energía características y se describen algunos de los métodos de fabricación de este tipo de dispositivos. Además se presenta el dispositivo que se estudiará en este trabajo. En el Capítulo 2 se introduce el formalismo utilizado para el tratamiento de un problema general de transporte cuántico. El mismo se basa en el denominado formalismo de Keldysh de funciones de Green de no-equilibrio. Se hace una formulación Hamiltoniana del problema general de transporte cuántico y se encuentran expresiones para las corrientes de carga y de calor. En el Capítulo 3 se presenta la definición de temperatura local (TlP ) mediante la inclusión de una punta de prueba que actúa como termómetro. Se encuentran expresiones analíticas para esta temperatura en el régimen en el que la frecuencia 0 de los potenciales externos es mucho más pequeña que la temperatura T de los reservorios ( Ω0 ≪ T). También se muestran expresiones explícitas para el caso opuesto (Ω 0 ≫ T). Se estudia su comportamiento a lo largo del sistema y su relación con el flujo de calor. Además se estudia la validez de la ley de Wiedemann-Franz, que relaciona la conductancia eléctrica con la térmica, para este sistema fuera del equilibrio. En el Capítulo 4 se estudia la posibilidad de definir una temperatura efectiva (Teff ) a través de una relación de fluctuación-disipación (RFD) local para funciones de Green de una partícula. Se encuentra una expresión analítica en el límite de bajas frecuencias (Ω 0 ≪ T) que coincide exactamente con la obtenida para la temperatura local. En el Capítulo 5 se estudia la posibilidad de definir otra temperatura efectiva (Teff∗) a través de una RFD para funciones de correlación corriente-corriente. Para ello, en primer lugar se calculan dichas funciones de correlación dentro del formalismo de Keldysh. Las expresiones obtenidas son comparadas con las correspondientes al formalismo de matriz de dispersión y se muestra analíticamente que coinciden. Una vez calculadas las funciones de correlación se estudia el comportamiento de la temperatura efectiva y se la compara con la temperatura local TlP . Se muestra que coinciden en el régimen de bajas frecuencias (Ω 0 ≪ T), en el cual además TlP coincide con la temperatura efectiva Teff definida a partir de una RFD para funciones de Green de una partícula. Es decir que en este régimen todas las definiciones estudiadas de temperatura coinciden. El Capítulo 6 está destinado a los últimos comentarios, discusión de los resultados y conclusiones. En los Apéndices A y B se encuentran los detalles de algunos de los cálculos realizados a lo largo de este trabajo.

Descripción: En el presente trabajo de Tesis, se encara el estudio de lascaracterísticas salientes de los suelos y las geoformas presentesen un sector de las Sas. Australes y su piedemonte, particularmenteen su vertiente norte y zonas intermontanas adyacentes. Laestratigrafía del Cenozoico superior, se encuentra caracterizadapor la alternacia e interdigitación de depósitos aluvialespedemontanos y eólicos loéssicos. Las geoformas identificadas sedeben al accionar de diversos procesos geomórficos erosivos yagradacionales, particularmente la acción fluvial, la remoción enmasa y la acción eólica. También han sido reconocidas probablessuperficies de planación de tipo regional ("peneplanicie") ypedimentos. En función de estas características fuerondiferenciadas tres Asociaciones Geomórficas, divididas a su vez, ennueve Unidades Geomórficas. El material originario de la mayoría de los suelos de laregión son los depósitos loéssicos "postpampeanos". Tanto desde elpunto de vista mineralógico, como granulométrico y químico, elmismo presenta una gran variabilidad. Predominan los loessarenosos, los componentes de origen volcánico (trizas, líticosvolcánicos y cristaloclastos de plagioclasas) y poseé unacomposición global mesosilícea. Los suelos predominantes son los Hapludoles y los Argiudolescon diferentes Subgrupos representados: típicos, petrocálcicos,líticos, énticos, tapto árgicos y tapto nátricos, para los primerosy típicos, petrocálcicos y líticos para los segundos. En menormedida, se encuentran representados los Entisoles, Alfisoles (Natracualfes típicos) y otros Molisoles (entre otros, Natracuolestípicos). Se analizan la influencia de los diferentes factores deformación en la génesis y distribución de los principales tipos desuelos, según Unidades Geomórficas; así como el accionar de losdistintos procesos pedogenéticos y su relación con la morfogénesis. Los procesos actuantes principales, son para la región, lahumificación, la melanización, la ilimerización, ladescarbonatación y formación de horizontes cálcicos y elhidromorfismo. Del accionar de tales procesos han resultado, comocaracteres diagnósticos, los horizontes mólicos, argílicos,cálcicos y nátricos. Finalmente se realiza una propuesta deevolución genética para los suelos de la región y para la evoluciónen el Cenozoico superior, del sistema suelo-paisaje.

Descripción: El autor examina las vinculaciones de algunos factores del suelo (materia orgánica, nitrógeno, potasio, calcio, fósforo y pH actual)con el contenido proteico del grano de tres variedades de trigo a pruebaen la Red de Ensayos Territoriales: Buck Sarmiento, Bahiense y Olaete Don Agustín. El material de trabajo proveniente de dos épocas de siembrarealizadas en el año 1948, en camposexperimentales de siete localidadescomprendidas en aquella red y ubicadas en las subregiones ecológicas I, II Norte y II Sud de la región triguera argentina, fué estudiado en loslaboratorios del Instituto de suelos y Agrotecnia. Del examen estadístico de los resultados analíticos logrados,el autor infiere nueve conclusiones, de las cuales una trata las localidadescomofuente de variación del contenido proteico, otra la relación deeste último con la cantidad de lluvia caida en el subperiodo espigazón madurez;las siete restantes estudian la vinculación de los factores delsuelo, nombrados más arriba, con la cantidad de proteina en el grano.

Descripción: Fil: Panarello, Héctor Osvaldo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: La glucógeno sintetasa (GS) de Escherichia coli es una glicosiltransferasa que transfiereglucosas desde la ADP-glucosa (ADP-Glc) hacia el extremo no reductor del glucógeno,reteniendo la configuración anomérica. En el presente trabajo, se identificó mediante técnicasde modificación química y mutagénesis sitio-dirigida una zona conservada entre las GSbacterianas y almidón sintetasas involucrada en catálisis y unión de sustratos. Posteriormente,se generó un modelo de homología de la GS de E. coli basándose en la estructura deotras tres glicosiltransferasas con un mismo tipo de fold GT-B. La comparación entre las estructurasde las glicosiltransferasas cristalizadas y el modelo de homología llevó a la identificaciónde un grupo de residuos conservados compartiendo una misma topología. Las mutaciones E377A, D137A, R3OOA,K305A y H161A disminuyeron la actividad específica 10000, 8100, 2600, 1200 y 710 veces, respectivamente. Ninguna de las mutaciones aumentóel S0.5; para el glucógeno, y sólo H161A y R300A mostraron S0.5; aumentados para la ADP-Glc en ll y 8 veces, respectivamente. Estos residuos resultaron esenciales para lacatálisis enzimática, validando el modelo que muestra una importante similitud en el sitioactivo de GS de E. coli y otras glicosiltransferasas con un fold GT-B cristalizadas hasta lafecha. Asimismo, se identificaron con técnicas de modelado y se estudiaron otros residuosconservados que tienen una participación potencial en la unión de la ADP-Glc y elglucógeno. Esta es la primera vez que se estudia detalladamente el sitio activo de una GSbacteriana.

Descripción: Fil: Quirós, Rolando. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Los cestodes Trypanorhyncha son parásitos con ciclos de vida complejos en los que intervienen varios hospedadores. Las larvas infectan invertebrados y peces teleósteos (hospedadores intermediarios y/o paraténicos) y los adultos se desarrollan en elasmobranquios (hospedador definitivo). La transmisión de los tripanorrincos se produce entre los hospedadores, a través de la red trófica. Dado que estos cestodes presentan ciertas características morfológicas y ecológicas tienen el potencial de ser utilizados como marcadores biológicos de sus hospedadores. El objetivo principal fue realizar la revisión taxonómica de cestodes tripanorrincos en el Mar Argentino y evaluar su potencialidad como marcadores biológicos a partir de la (1) la estimación de la diversidad de tripanorrincos en el área de estudio mediante la descripción de nuevos taxa y la verificación de la identidad de las epecies de tripanorrincos previamente registradas en el área, (2) la caracterización de los ciclos de vida de los especímenes coleccionados y el rol que desempeñan los peces en su transmisión, (3) la evaluación del grado de especificidad de los estadios de cestodes, (4) la reconstrucción de las tramas tróficas de los peces involucrados en los ciclos de vida, y (5) la evaluación de los tripanorrincos como marcadores biológicos en el área de estudio. Se examinaron 1332 peces (897 teleósteos y 435 elasmobranquios) capturados a lo largo del Mar Argentino. Los tripanorrincos obtenidos fueron preparados adecuadamiente según distintas técnicas (histología, microscopía óptica y electrónica de barrido). Se identificaron 10 especies de tripanorrincos (4 familias), de las cuales 5 fueron registradas previamente en el área y 4 resultaron nuevas especies (Grillotia patagonica Heteronybelinia mattisi, Heteronybelinia n. sp. 1 y Parachristianella n. sp. 1). Además se registró por primera vez a Dollfusiella cf. aculeata en el Atlántico sudoccidental, se amplió el rango de hospedadores para G. (C.) carvajalregorum (16 nuevos registros) y para C. gracilis (1 hospedador nuevo). La mayoría de los teleósteos parasitados con tripanorrincos pertenecen a las familias Sciaenidae, Carangidae y Nototheniidae, mientras los hospedadores definitivos en su mayoria, parasitan rayas Arhynchobatidae. De las especies de tripanorrincos registradas previamente, 4 registros se consideran dudosos en el área, ya que no fueron obtenidos de peces indicados como sus hospedadores. En muchos casos se identificaron otras especies de tripanorrincos de características similares a aquellas, lo que estaría demostrando casos de identificaciones erróneas. Hepatoxylon trichiuri, Dasyrhynchus pacificus y Callitetrarhynchus gracilis se obtuvieron en estadio larval, mientras que D. cf. aculeata, Dollfusiella vooremi y Parachristianella n. sp. 1 como adultos. Grillotia (C.) carvajalregorum, G. patagonica, H. mattisi y Heteronybelinia n sp. 1 fueron identificadas como adultos y larvas, lo que permitió estimar sus ciclos de vida parciales. Tanto Heteronybelinia n. sp. 1 como D. pacificus podrían resultar buenos marcadores tróficos en el área debido a su estricta especificidad por sus respectivos hospedadores intermediarios. La presencia de G. (C.) carvajalregorum, G. patagonica y H. mattisi en algunos hospedadores, podría indicar relaciones tróficas que hasta el momento no han sido documentadas en base al contenido estomacal.

Descripción: Fil: Cepeda, Marcela C.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Este trabajo se contextualiza en la problemática de deforestación de la Región Chaqueña. Teniendo a las comunidades campesinas como pares frente al propósito de hacer un uso sustentable del ambiente, el objetivo general del trabajo es estudiar la diversidad vegetal y las actividades que median los procesos de apropiación de la naturaleza de los socio ecosistemas campesinos del departamento Guasayán, Santiago del Estero (ecorregión Chaco Seco).Dado el carácter descriptivo se trabaja bajo un paradigma de investigación interpretativo con herramientas de análisis mixtos: cuali y cuantitativas. El Capítulo 1 es una introducción general a la cuestión ambiental y los desafíos epistemológicos de su abordaje desde la investigación. Se describen distintos marcos conceptuales sobre los que se sustenta esta tesis. Luego se presenta el caso de estudio y la problemática. Se presentan antecedentes del estudio de socio ecosistemas campesinos. Finalmente se presenta el área y las comunidades con las que se trabajó, el marco metodológico general y esquema de trabajo de la tesis. El Capítulo 2 desarrolla la caracterización estructural y florísticamente la vegetación leñosa y su relación con la apropiación humana en una comunidad campesina centrando el análisis en herramientas cuantitativas. En el Capítulo 3 se usa el concepto de Servicios Ecosistémicos, herramientas etnográficas y análisis cualitativos para identificar distintos procesos de apropiación humana de la naturaleza de las comunidades campesinas y se los relaciona con los elementos ecosistémicos, haciendo hincapié en la vegetación descripta en el Capítulo 2. En el Capítulo 4 se presentan discusiones de políticas de conservación en el territorio de comunidades campesinas y un análisis de las transformaciones territoriales en el entorno de una de las comunidades. Finalmente se presentan las conclusiones generales retomando los objetivos y lo realizado a lo largo del trabajo.

Descripción: La exposición aguda o crónica de mamíferos (incluyendo humanos) a los plaguicidas modernos puede causar neurotoxicidad. Los piretroides (PIRs) son insecticidas sintéticos cuyo uso en el control de plagas a nivel agrícola y peri-domiciliario se ha incrementado en los últimos años. Se propone que la mayoría de los PIRs comparten el mismo modo primario de acción (MdA) en las plagas (insectos) y en los mamíferos. Para cada PIR administrado de manera individual los estudios previos realizados en ratas adultas reportanque la toxicidad difiere de un compuesto a otro hasta 103veces, ya sea evaluando efectos adversos subletales o letalidad. Si bien existen estudios medioambientales que confirman la exposición simultánea a dosis bajas de múltiples PIRs, se dispone de poca información toxicológica que permita fundamentar empíricamente los rangos de dosis que pueden considerarse inocuos en humanos luego de exposición a combinaciones de PIRs, que es lo que puede ocurrir en la realidad. En este trabajo se expusieron ratas Wistar adultas machos a dosis orales agudas bajas (0,1-12 mg/kg) de PIRs Tipo I (Bifentrina y Teflutrina) y Tipo II (α-Cipermetrina y Deltametrina) a fin de evaluar las curvas dosis-efecto de cada PIR. La variación de temperatura subcutánea (Tsc) se usó como medida de efecto neurotóxico. La Tsc se registró cada 30 minutos durante 5 h, y ~1 h después de finalizar el monitoreo de Tsc se sacrificaron los animales, se extrajeron muestras de sangre, hígado y cerebelo,y se determinó la concentración de cada PIR en los tejidos mediante cromatografía gaseosa con detector de captura de electrones (GC-ECD). Como hipótesis se consideró que la acción combinada de dosis bajas de estos PIRs debía seguir los postulados del “modelo de dosis aditiva” (dose addition) teniendo en cuenta que estos insecticidas tienen un mismo MdAen ratas. Los resultados mostraron que al administrar cada PIR en forma individual o combinada huborelación directa entre la dosis administrada, la concentración en tejidos, y la magnitud del efecto sobre la Tsc. Además, la relación dosis-efecto obtenida, las concentraciones absolutas de los 4 PIRs y sus proporciones (respecto a la carga total de PIRs) en los tejidos examinados luego de la administración de la mezcla sugieren la ausencia de interacción sinérgica y la confirmación de la hipótesis (modelo de dosis aditiva). Este trabajo permite ejemplificar una aproximación metodológica exploratoria para evaluar hipótesis relevantes en los procesos de evaluación de riesgo, especialmente en el caso de escenarios realistas de exposición humana (ambiental, ocupacional o alimentaria) a mezclas de estos plaguicidas.

Descripción: Estudiamos el canal iónico CFTR y el canal de sodio ENaC en ovocitos de Xenopuslaevis. Las corrientes iónicas se estudiaron con la técnica de voltage clamp y la expresiónde las proteínas analizada con técnicas corrientes de biología molecular. Los cuatroobjetivos fueron: 1) evaluar la expresión y funcionalidad heteróloga del canal de cloruro CFTR, 2) analizar el efecto de la inhibición de xShroom1 sobre el canal CFTR, 3) investigarlos mecanismos por los cuales xShroom1 se relaciona con CFTR, 4) estudiar la relaciónentre CFTR, ENaC y xShroom1. Los principales resultados fueron: El canal CFTR seexpresa y es funcional en los ovocitos de Xenopus laevis inyectados con su ARNc. Lasupresión de la proteína xShroom1 resultó en un incremento marcado en las corrientes de CFTR al promover un aumento en la vida media del canal en la membrana plasmática. Estosería debido a una reducción en la vía degradativa, aunque no descartamos un cambio enla probabilidad de apertura de CFTR. Tanto el CFTR como la supresión de xShroom1produjeron una reducción en las corrientes de sodio sensibles al amiloride. La inhibición de ENaC por CFTR es mayor cuando xShroom1 es suprimido, debido al aumento en lacorriente de CFTR. En conclusión, logramos conocer la relación y mecanismos involucradosdel CFTR con la proteína Shroom en ovocitos de Xenopus laevis.

Descripción: Fil: Garda, Horacio Alberto. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: El objetivo del trabajo es profundizar el conocimiento de la relación entre la microestructura y elcomportamiento macroscópico de los materiales durante procesos de deformación plástica. Enparticular se estudia la evolución de texturas cristalográficas en materiales de estructura hexagonalcompacta (aleaciones de base Circonio). Se pone especial énfasis en el análisis de: - El efecto de la temperatura de deformación sobre la activación de diferentes modos dedeformación y sus tensiones críticas asociadas. - Los mecanismos de endurecimiento de los distintos modos de deformación actuantes (deslizamiento prismático, deslizamiento basal, deslizamiento piramidal y maclado entensión y compresión). Este análisis se realiza a partir de la modelización de la evolución de texturas cristalográficasdurante procesos de deformación plástica: laminación (chapas y tubos) y torsión en aleacionesde base Circonio. Los cálculos se realizan utilizando dos modelos para describir elcomportamiento mecánico del material: el Modelo de Taylor y el Modelo Autoconsistente, loscuales relacionan los estados de tensión y deformación en los granos que componen el policristalcon el estado de tensión y deformación macroscópico. Los resultados obtenidos sonrepresentados por medio de figuras de polos y comparados con resultados experimentales propiosy existentes en la literatura. Los principales resultados del trabajo permiten poner de manifiesto que: - En todos los casos, el Modelo Autoconsistente es el que mejor reproduce las texturasexperimentales, lo que demostraría que la interacción intergranular es importantes a altas y bajastemperaturas. - La necesidad de existencia del deslizamiento piramidal como modo de deformación, aaltas temperaturas y temperatura ambiente, aunque en ambos casos, la actividad de dicho mododebe ser pequeña en relación al modo prismático . Esto influye sobre el valor de la tensióncritica resuelta asociada al modo piramidal . - El maclado (en tensión y compresión) debe necesariamente actuar durante todo el proceso delaminación a temperatura ambiente. - La descripción del endurecimiento propuesta permite en muchos de los casos analizadosreproducir las texturas experimentales. Sin embargo, una descripción adecuada de los resultadosexperimentales requiere fundamentalmente que las tensiones críticas resueltas para los modos dedeformación se encuentren dentro de una determinada región del espacio topológico de lastensiones. - Torsión a altas temperaturas y a temperatura ambiente: A altas temperaturas, el deslizamientobasaljunto con el piramidal son los responsables de las formación de las componentes detextura caracteristicas. A temperatura ambiente el modo de deformación responsable de laformación de la principal componente de textura es el maclado en tensión.

Descripción: El objetivo general del presente trabajo fue analizar la relación existente entre la composición florísticay las principales especies exóticas y nativas de los neoecosistemas de albardón y la heterogeneidadambiental que caracteriza al Bajo Delta del Río Paraná. A su vez, se analizarán distintos patrones en la tendencia sucesional y las proyecciones de lacomposición futura de los últimos estadios sucesionales o neoecosistemas con alto período deabandono. En las tres unidades en que se divide el área de estudio (A, B y C) se seleccionaron áreas modales enlas cuales se realizaron censos de cobertura y densidad de las especies vegetales y se tomaron muestrasde suelo. En la unidad B, además, se tomaron muestras de suelo para determinar el banco de semillas. Mediante técnicas de clasificación y ordenamiento se identificaron grupos de censos y especiesanalizando su distribución a lo largo de la unidad. También se calcularon índices que permitieronanalizar el grado de invasión de especies exóticas y al grado de recuperación de especies nativas anivel de cada unidad y a nivel regional. Los resultados indican que el patrón de distribución de lasespecies y las composición de los neoecosistemas de albardón se relacionaron con el gradiente fluvial-marealque se observa a nivel regional. Dicho gradiente diferencia a los neoecosistemas de la unidad Ade aquellos pertenecientes a las unidades B y C. Del análisis de las tendencias sucesionales se observaque estas dos últimas unidades presentaron procesos sucesionales convergentes, presentando unarespuesta similar a nivel de fisonomías, formas de vida y especies que se desarrollan a lo largo del ejetemporal. Dicha convergencia se debió principalmente al elevado grado de invasión de siete especiesexóticas. Sólo en el estadío tardío se observa la recuperación de individuos juveniles de especiesarbóreas nativas. La tendencia sucesional observada en la unidad A, responde principalmente a lascondiciones de mayor fluvialidad presentes en la misma, independientemente del tiempo de abandonode los neoecosistemas. La composición futura estos últimos seguirá siendo dominada por una matrizde especies herbáceas nativas con la presencia de individuos aislados de especies arbóreas nativas. Adiferencia de ello, los neoecosistemas de las unidades B y C seguirán conformados por un bosquesecundario en los cuales las especies exóticas invasoras dominarán cada uno de los estratos arbóreosdel mismo. El análisis del banco de semillas confirma esta tendencia. El bosque nativo no regenera a escala regional relacionado a las condicionantes ambientales que sedesarrollan en la unidad A y por el éxito invasivo de las especies exóticas a lo largo de un eje espacialy temporal en las unidades B y C. El análisis del banco de semillas refirerza esta predicción. Se genera un modelo conceptual a través de cual se plantea un nuevo paradigma en el sentido decomprender el funcionamiento ecológico de los neoecosistemas de albardón a una escala espacial ytemporal.

Descripción: En este trabajo se analiza la relación entre la variabilidad interanual de la lluvia en el sudeste de Sudamérica (SESA), la región al este de los Andes entre 20ºS y 40ºS, y la variabilidad interanual de la temperatura de la superficie del mar (TSM) y la circulación atmosférica asociada durante la primavera austral. La relación entre la precipitación en SESA y la TSM es estudiada usando un análisis de Correlación Canónica. Los dos primeros modos muestran el bien conocido patrón caliente-húmedo/frío-seco entre la TSM del océano Pacífico ecuatorial y la precipitación sobre gran parte de SESA. Sin embargo, la TSM de las regiones ecuatoriales no modula la variabilidad de la lluvia entre años El Niño (EN) y entre años La Niña (LN). Esto indica que la respuesta de la lluvia en SESA a la TSM del Pacífico ecuatorial es no lineal, resultando independiente de ella en los extremos del registro. En contraste, entre eventos EN, la TSM en el océano Pacífico sur subtropical (PSS) modula la precipitación estacional sobre gran parte de SESA. Además, cuando se considera el período completo, la TSM del PSS está correlacionada con la precipitación en una magnitud similar a la correspondiente a la TSM del Pacífico ecuatorial. Consistente con esto, el campo de circulación presenta un aumento de la advección ciclónica (anticiclónica) sobre la parte subtropical de SESA cuando la TSM en el PSS es más fría (caliente). La TSM del Pacífico ecuatorial está correlacionada negativamente con la del PSS pero esta correlación es prácticamente cero cuando se consideran sólo los casos EN o sólo los casos neutros y es muy pequeña en los casos LN. Esto permite realizar un análisis de composición de casos de acuerdo a diferente TSM en las regiones del Pacifico ecuatorial pero con TSM casi constante en el PSS y también se puede hacer una composición de casos con diferente TSM en el PSS pero con TSM casi constante en el Pacífico ecuatorial. Los eventos EN asociados con condiciones más frías en el PSS exhiben un patrón de onda de Rossby bien definido en el este del Pacífico sur, patrón que se observa menos intenso y más al oeste en los casos EN con mayor TSM en el PSS. La variabilidad de la circulación del Hemisferio Sur (HS) entre eventos LN también muestra una influencia de las condiciones de la TSM del PSS. Los eventos LN con mayor TSM en el PSS tienen mejor definido un patrón de onda entre latitudes ecuatoriales y altas del HS. La posibilidad de que las características de la TSM en el PSS puedan ser consideradas como un índice para discriminar entre eventos EN y LN de diferentes características no implica que esta TSM sea la causa de esas diferencias. Si las anomalías de TSM del Pacífico subtropical son inducidas por teleconexiones atmosféricas asociadas con el ENSO o si resultan de procesos oceánicos independientes del ENSO son cuestiones que escapan a los objetivos de este trabajo.

Descripción: El objetivo de esta tesis doctoral es evaluar el papel de la estructura de la vegetación como factor próximo que guía a las aves en la selección del hábitat a tres escalas espaciales y como factor último por su asociación con la obtención de alimento por las aves. El análisis regional sugiere que la riqueza de especies de aves passeriformes responde a la disponibilidad de estratos de vegetación, es decir que la estructura de la vegetación es más importante que el clima en la determinación de los patrones de distribución geográfica de las aves. A escala local, tanto la estructura de la vegetación como la composición florística del "stand" influyen en el uso del hábitat. Los gremios de insectívoros y frugívoro-insectívoros son ejemplos de la importancia de estas dos características de la vegetación. Las aves insectívoras responden a las diferencias en estructura de la vegetación, siendo menos abundantes en los bosques con una menor disponibilidad de follaje en altura, mientras que las frugívoro-insectívoras responden a la composición florística del bosque, siendo menos abundantes en los sitios que presentan una menor abundancia y riqueza de especies arbóreas productoras de frutos. Cuando se analiza el uso de microhábitat de alimentación, los patrones de selección antes mencionados pueden ser mejor comprendidos. De las tres aves insectívoras estudiadas, dos son recolectoras de presas en el follaje (Parula pitiayumi y Polioptila dumicola), mientras que la otra se alimenta mediante el revoloteo (Serpophaga subcristata). Las dos primeras usan preferentemente el estrato superior del bosque para forrajear y en consecuencia una disminución en la altura del bosque resulta en una menor densidad de estas aves. Por otro lado, S. subcristata captura sus presas en todos los estratos del bosque y las modificaciones de la estructura de la vegetación no afectan su abundancia en los talares. Finalmente, Elaenia parvirostris (una especie frugívoro-insectívora) se alimenta principalmente mediante la caza por revoloteo, tanto de insectos como de frutos. Esta especie forrajea en todos los estratos, pero a diferencia de S. subcristata, está afectada por la degradación del bosque. Esto se debe a la notable reducción en la abundancia y riqueza de especies arbóreas productoras de frutos en dicho bosque. El análisis detallado del uso de microhábitat de forrajeo por las cuatro especies estudiadas, indicaría que la estructura y composición de la vegetación están asociadas a los factores últimos del hábitat, por su relación con la adquisición de los recursos alimenticios para las aves, y que junto con los condicionamientos comportamentales y/o morfológicos de las aves producen los patrones observados a escala local. A esta escala, la estructura de la vegetación y la composición florística surgen como los dos factores próximos que guían la selección del hábitat por las aves, así como ocurre a escala regional con la disponibilidad de estratos de vegetación y la riqueza de aves passeriformes. De esta manera, se puede concluir que en las tres escalas los factores que actúan en la selección del hábitat por las aves son similares. Esto se debería a que la estructura y composición de la vegetación imponen restricciones a los comportamientos de forrajeo de las aves y tales restricciones permanecen validas a las escalas de microhábitat, local y regional.

Descripción: Fil: Paredes, Sergio Raúl. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Se estudio la distribución de hierro y de metales traza, como: Cu, Cr, Pb o Zn, en los sedimentosdel lago ácido Caviahue, y se encontró que esta es distinta de la hallada para ambientes neutros oalcalinos, siendo los ácidos húmicos la fase más rica, seguidos de la pirita. Además se modeló laconcentración de hierro en la columna de agua. El modelo reflejó precisamente la concentración dellago excepto en los períodos en que la carga de este metal estuvo por encima del promedio anual, encuyo caso, las predicciones fueron superiores. Entendiendo que si el modelo es estrictamente físico,el exceso de hierro debería verse reflejado en la concentración. A partir de este dato, se propuso queel exceso de hierro precipita y que existe un sistema buffer. Luego se estudiaron los ácidos húmicossedimentarios. Se determinó su origen exclusivamente fitoplanctónico, siendo la única característicadistintiva, un aumento en el contenido de azufre. Además se estimaron las constantes decomplejación del ácido húmico por hierro y los metales estudiados previamente. Se encontró que laafinidad por los trivalentes es mayor que por los divalentes. Además se estudió la tolerancia del algaacidófila del lago a los metales mayoritarios, Fe, Mn y Al con distintas fuentes orgánicas. Elaluminio resulta tóxico en presencia de cualquier fuente orgánica mientras que el hierro es letal enpresencia de ácidos fúlvicos. Además, el manganeso estimula el crecimiento. Luego, se estudió lacomposición de la pared celular. Se encontraron diferencias entre la composición de la pared amorfay fibrilar, presentando cada una, los monosacáridos característicos. Finalmente se estudió laadsorción de estos metales y fósforo. Solo este último y el hierro presentaron adsorcionessignificativas a la pared. Palabras clave: Distribución de hierro, modelado de hierro, complejos metal-húmicos,tolerancia de algas a metales y adsorción de metales a paredes celulares.

Descripción: Fil: Motta, Alicia Beatriz. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: El modelo de la bolsa de la mejilla del hámster muy aceptado y utilizado, reproduce lacancerización de la boca humana y una fibrosis subepitelial semejante a la fibrosis dela submucosa. En el se han analizado extensamente las características de los tumoresque produce, pero se ha prestado menos atención al estudio de las etapas previas a laaparición de tumores. Las neoplasias que se observan en el modelo se dan en formafocal, precedidas por lesiones pre-malignas muitifocales, en una clara manifestaciónde la instalación de un campo cancerizado al igual que en la boca humana. Dado queel carcinoma de la mucosa bucal ha mantenido su incidencia y sus bajos índices desobrevida durante los últimos 20 años parece importante disponer de un modeloexperimental bien caracterizado para su estudio. Aproximadamente el 90% de loscánceres humanos son carcinomas, por lo cual resulta de interés que el abordaje delestudio de la biología de los carcinomas sea desde la perspectiva de la interacciónepitelio-mesénquima. En base a estas observaciones, el objetivo de esta tesis doctoralfue el de estudiar los cambios que subyacen a la transformación maligna del epitelio, através del análisis de ploidía y la desregulación de la interacción epitelio-conectivo,caracterizándola por medio del estudio de los cuadros fibrosos subyacentes al epiteliotransformado. Tratando de aportar datos que pudieran ser trasladados a la biología delas lesiones pre-malignas humanas y a la búsqueda de marcadores de cancerizaciónde campo. Para ello describimos las áreas NUMF(epitelios histológicamente normalespero cancerizados) que configuran los cuadros propios de la cancerización de campo. Como primer paso en el estudio de la interacción epitelio-conectivo evaluamos através del análisis de ploidía las alteraciones epiteliales, cuantificamos las áreas NUMF, pre-neoplásicas y neoplásicas, encontrando que las zonas NUMF presentanun mayor contenido de ADN respecto de la mucosa normal a las 16 semanas detratamiento. Para analizar las alteraciones en el tejido conectivo caracterizamos loscuadros desmoplásicos a través de la cuantificación de las áreas de fibrosis. Encontramos que la fibrohilalinosis aparece muy precozmente, antes que seevidencien cambios morfológicos en el epitelio transformado (a las 7 semanas detratamiento, subyacente a las áreas NUMF) se presentan volúmenes de fibrosisaumentados significativamente respecto de la mucosa normal. Luego analizamos laexpresión del FGF-2 durante el proceso, tratando de relacionado con los cuadrosfibrosos. Encontramos que las variaciones en la expresión del FGF-2 en el tejidoepitelial coinciden con la evolución de la fibrosis subepitelial en las etapas tempranas yque los carcinomas expresan en muy baja cantidad el factor o no lo expresan (seobservó una regulación a través de la isoforma de 18 kd del factor). Encontramosexpresión de los receptores 2 y 3 del FGF en el tejido epitelial y conectivo en laslesiones pre-malignas y expresión irregular de los mismos en los tumores. Finalmenteanalizamos si existía expresión de VEGF en el modelo. El VEGF presentó un cambiode su patrón de expresión en el epitelio en relación a los cuadros fibrosos durante lasetapas pre-neoplásicas. También estudiamos si existia actividad proteolítica,encontrando un patrón de actividad correspondiente al de las MMP-2 y 9 en lasetapas tempranas. El análisis conjunto de los resultados expuestos en esta tesis noslleva a considerar que ni el b-FGF ni el VEGF tendrían un rol preponderante en elproceso angiogénico general de este modelo, ni en los tumores, pero el b-FGF tendríanun rol importante en la producción de fibrosis, de gran magnitud en las etapastempranas. Tanto el factor como los cuadros desmoplásicos disminuyen desde lasetapas intermedias en adelante, revelando su influencia en la disrupción temprana dela interacción epitelio-conectivo. Por lo tanto, la fibrosis junto a la ploidía de las áreaspre-neoplásicas son una manifestación temprana de la cancerización de campo.

Descripción: La glicoproteína epididimaria de rata "DE" se asocia al espermatozoide durantela maduración, y participa en el proceso de fusión de gametas a través desitios complementarios presentes en la superficie del ovocito. Con el fin decomprender los mecanismos involucrados en la participación de DE en dichoproceso, se estudió la importancia de la estructura de DE para la actividad dela proteína. El clonado del ADNc de DE permitió obtener la secuencia de los 227 aminoácidos (aa) de la proteína. El análisis de dicha secuencia indicó que DE pertenece a la familia CRISP (cystein rich secretory proteins), y lapresencia de 16 cisteínas en la molécula. El ADNc fue utilizado luego paraexpresar la proteína recombinante en bacterias (recDE). El estudio de recDE yde la proteína nativa deglicosilada, indicó que la actividad biológica residiría enla porción peptídica de la molécula. Por otro lado, el análisis del estado deoxidación de las cisteínas indicó que la mayoría de ellas formaría puentesdisulfuro, y que la ruptura de los mismos afectaría la actividad de la proteína. La expresión de distintos fragmentos recombinantes de DE y su empleo enensayos biológicos, reveló que la actividad de la proteína residiria en la regióncomprendida entre los aa 62-158. Resultados previos de nuestro laboratorio indican que la inmunización de ratascon proteína DE produce una respuesta inmune y una inhibición significativade la fertilidad. El presente trabajo indica que los mecanismos responsables dedicha inhibición involucrarían la entrada de anticuerpos anti-DE al tractoreproductivo, su interacción con los espermatozoides, y la disminución de lacapacidad fertilizante de los mismos, abriendo la posibilidad del potencial usode DE para el desarrollo de un método inmunológico de regulación de lafertilidad. Dado que para ello es necesario poder disponer del antígeno engrandes cantidades, la proteína recombinante fue utilizada en ensayos deinmunización, que indicaron que recDE, al igual que la proteína nativa, escapaz de producir una respuesta inmune y una reducción de la fertilidad. Conel fin de investigar la posible aplicación de este método inmunológico en elhombre, la capacidad inmunogénica de la proteína humana homóloga a DE,proteína ARP, fue estudiada en un modelo de primates no humanos,observándose la inducción de una elevada respuesta inmune en los animalesinmunizados. En conjunto, los resultados obtenidos en este trabajo contribuyen alesclarecimiento de los mecanismos involucrados en la participación de DE enel proceso de fusión de gametas, y apoyan el potencial uso de esta proteína ysus homólogos para el desarrollo de un método inmunológicode regulación dela fertilidad tanto en animales como en el hombre.

Descripción: La proteína ARTISt (Arachidonic acid-Related Thioesterase Involved in Steroidogenesis) es miembro de una nueva familia de acil-CoA tioesterasas recientementecaracterizadas que catalizan la liberación de ácidos grasos de cadena larga utilizandocomosustrato acil-CoAs. Se ha comprobado que esta proteína interviene en la liberación de ácidoaraquidónico por estimulación hormonal en tejidos esteroidogénicos, siendo éste un pasoobligatorio en el control de la esteroidogénesis. La proteína ARTISt fue detectada tanto en tejidos esteroidogénicos, como noesteroidogénicos. Dado que se encontró una alta expresión de la proteína en corazón y elácido araquidónico cumple un rol esencial en la función cardíaca, el objetivo del presentetrabajo de Tesis fue investigar si ARTISt es activa en tejido cardíaco y si la activación yexpresión de la misma pueden ser regulados por agonistas β-adrenérgicos. Los resultados muestran que ARTISt es activa en tejido cardíaco y su bioactividadpuede ser regulada por agonistas β-adrenérgicos a través de la estimulación de los sistemasde transducción AMPc-dependientes. Los agonistas β-adrenérgicos regulan también los niveles del ARN mensajero de ARTISt. Se ha demostrado que los aumentos en la abundancia del ARNm de ARTISt son almenos, debidos a un aumento en la transcripción. Por otra parte, la abundancia del ARNmensajero de ARTISt aumentó cuando las ratas fueron sometidas a ayuno. Estos resultados sugieren la existencia de un nuevo camino de liberación de ácidoaraquidónico en tejido cardíaco regulado por agonistas β-adrenérgicos. Este sistema puederepresentar un camino alternativo o paralelo al de la fosfolipasa A2 para la regulaciónhormonal de los niveles intracelulares de ácido araquidónico.

Descripción: Las mediciones de anelasticidad han sido ampliamente utilizadas para estudiar fenómenosde reordenamiento en soluciones sólidas sustitucionales. Estos procesos de ordenamiento están caracterizados, entre otras cosas, por su intensidadde relajación ΔM, definida para un modo de deformación con módulo M por ΔM = (Mnr —MR)/MR donde Mnr es el módulo no relajado y MR es el módulo relajado. El estudio de la dependencia de este parámetro con la concentración de soluto, conla orientación y con la temperatura, provee información acerca de los potenciales interatómicosy de las energias de ordenamiento de las diferntes soluciones sólidas sustitucionales. Una variedad de modelos para explicar la relajación anelástica por fenómenos de orden —desorden observado en aleaciones binarias sustitucionales, Relajación Zener, fueronpropuestos por varios autores. El primero de ellos, desarrollado por Zener, interpreta la relajación como debido a lareorientación, inducida por tensión, de pares de soluto presentes en la solución sólida, enuna configuración de primeros vecinos. Esta teoría no comtempla relajaciones inducidaspor presiones hidrostáticas puras. La principal debilidad de la misma, es que debido a quelos pares de átomos de soluto son causantes de la relajación, se requieren relativamentealtas concentraciones de soluto para lograr un efecto apreciable. Una segunda teoría alternativa al modelo de reorientación de pares, fue propuestopor Le Claire y Lomer. Ellos sugirieron que el efecto Zener sería mejor descripto comoconsecuencia de los cambios inducidos por la tensión en el estado de orden de corto alcance,para lo cual utilizaron una descripción cuasi-química del grado de orden, proveyendo unrazonable mecanismo para la explicación de la intensidad de relajación del módulo de cortepara varias aleaciones sustitucionalcs. Recientemente, Van Baal, basado en el modelo de Ising para una aleación sustitucional, desarrolló una teoría para interpretar la intensidadde relajación Zener. Esta sin embargo, no predice la intensidad de relajación volumétrica ΔSH. Tanto Van Baal como Le Claire y Lomer reconocen que deben tenerse en cuentainteracciones de vecinos más distantes que los primeros. El único modelo que hasta ahora, tiene en cuenta interacciones de más vecinos fuepresentado por Welch y Le Claire. Esta teoría toma en cuenta tanto primeros comosegundos vecinos y parámetros de orden hasta ocho vecinos, habiendo sido desarrolladasólo para el módulo de corte de soluciones sólidas sustitucionalcs con red c.c.c.. En unareciente revisión sobre el Fenómeno de Relajación Zener, Povolo y Hillairet expresanla necesidad de extender la teoría de Welch y Le Claire a tensiones uniaxiales. Estoúltimo permitirá una mayor comparación cualitativa y cuantitativa con los resultadosexperimentales. El objetivo del presente trabajo fue realizar la extensión anteriormente citada (ver Capítulo V) para tensiones uniaxiales aplicadas a sistemas binarios c.c.c. y c.c., para suposterior confrontación con los datos anelásticos conocidos de las aleaciones AgZn(c.c.c.)y LiMg(c.c.) y obtener información acerca de los parámetros de ordenamiento de estasaleaciones y poder obtener una mejor interpretación de los mecanismos de orden - desordeninvolucrados en la relajación anelástica(ver Capítulo VI).

Descripción: Actualmente, los dispositivos basados en materiales semiconductores están presentes en varias aplicaciones de comunicación y procesamiento de información. En estos dispositivos, las distintas operaciones involucradas implican el desplazamiento controlado de cargas. Para el almacenamiento de información, arreglos de múltiples capas formadas por metales magnéticos, así como materiales aislantes, son ampliamente utilizados. En este último caso, la información es registrada y recuperada al reorientar dominios magnéticos. La posibilidad de construir dispositivos que uliticen otra propiedad de las partículas, el llamado espín, da lugar al campo de la Espintrónica, a diferencia de la electrónica tradicional basada en la carga eléctrica de las partículas. Más aún, la Espintrónica con materiales semiconductores busca el desarrollo de dispositivos híbridos en los cuales las tres operaciones básicas (lógica, comunicación y almacenamiento) puedan estar integradas en un mismo material. A pesar de los grandes progresos y avances en esta dirección, son varias las preguntas y dificultades técnicas que quedan por resolver. El desafío, entre otros, es entonces entender cómo el espín se comporta e interacciona en un material sólido. El espín, al ser una propiedad cuántica de cualquier partícula elemental, está representada por un estado, susceptible de ser afectado por alguna dada interacción. El espín de un electrón, por ejemplo, puede no sólo interaccionar con un campo magnético externo, sino también acoplarse a otro grado de libertad del electrón. La interacción de espín-órbita, precisamente, se refiere al acoplamiento entre el espín y el estado orbital del mismo electrón. En la primera parte de esta tesis consideramos este último efecto, y en particular, nos ocupamos de un semiconductor bulk de GaAs dopado, y estudiamos la relajación de espín debido a la interacción de espín-órbita. Las densidades de dopantes de nuestro interés están en un rango cercano a la densidad crítica correspondiente a la transición metal-aislante. Por debajo de esta densidad, la propiedades electrónicas del sistema son las de un material aislante, mientras que para densidades mayores, aparece un comportamiento de tipo metálico y en consecuencia, la conductividad a temperatura nula adquiere un valor finito. En esta tesis estudiamos la relajación de espín del lado metálico de la transición debido a dos clases diferentes de interacción espín-órbita. La primera de ellas está asociada a la presencia de impurezas, mientras que la otra aparece como consecuencia de la asimetría de inversión causada por la presencia de dos tipos diferentes de átomos en una celda unidad. Es decir, esta última es una propiedad inherente de la estructura cristalina del material y es también conocida como la interacción de Dresselhaus o BIA, por sus siglas en inglés (bulk inversion asymmetry). Para atacar el problema de la dinámica de espín, desarrollamos una formulación analítica basada en la difusión de espín de un electrón en el régimen metálico de conducción en la banda de impurezas. A través de esta derivación logramos una expresión para el tiempo de relajación de espín, dependiente de la densidad de dopantes y de la intensidad de la interacción de espín-órbita. Notablemente, dicha expresión está exenta de parámetros ajustables. Complementamos este esquema y respaldamos los resultados obtenidos analíticamente con el cálculo numérico del tiempo de vida del espín. Para ello, llevamos a cabo la evolución temporal de un estado inicial con un espín definido. De esta manera, el valor medio del operador de espín evoluciona bajo la influencia del Hamiltoniano completo, que comprende la interacción de espín-órbita y el Hamiltoniano del modelo de Matsubara- Toyozawa. Este último describe la banda de impurezas pero no toma en cuenta el espín. El estado inicialmente polarizado, al no ser un autoestado del operador Hamiltoniano completo, experimenta un decaimiento temporal siguiendo un dado comportamiento, del cual extraemos el tiempo de relajación de espín. En la segunda parte de esta tesis consideramos un sistema cuántico de dimensión cero (punto cuántico o quantum dot) y estudiamos el efecto de la interacción de espín- órbita sobre los autoestados. El quantum dot está alojado entre dos heteroestructuras implantadas en un nanohilo de material InAs. Este material presenta la particularidad que, al ser crecido de manera unidimensional, adquiere una estructura de tipo wurtzita, a diferencia de la estructura zinc blenda que tiene en su fase bulk. Aquí desarrollamos una solución analítica para el quantum dot, considerando la interacción de espín-órbita propia de este tipo de estructuras. Más precisamente, tomamos la interacción de Dresselhaus de la banda de conducción de un material wurtzita que, además de un término cúbico en k -aunque de diferente forma que el de zinc blenda- presenta uno lineal, propio de la wurtzita. El efecto de un campo magnético débil es introducido a través del acoplamiento de tipo Zeeman. Entre los resultados se incluyen además la estructura de espín en el quantum-dot y el cálculo del factor g efectivo en función de las dimensiones del dot. Por último, estudiamos y calculamos la relajación de espín debido a fonones acústicos, teniendo en cuenta para ello los potenciales de fonón correspondientes a la estructura wurtzita.

Descripción: Fil: Chiapparini, Marcelo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Los materiales lignocelulósicos dan origen a múltiples industrias, siendo la fabricación depulpa y papel una actividad económica de importancia global. Estudios previosdemostraron que las enzimas de hongos ligninolíticos podrían resultar útiles en distintasetapas del procesamiento de la madera, así como en la biorremediación de los efluentes. El presente trabajo se centró en el relevamiento y la caracterización enzimática de 35cepas de hongos causantes de pudrición blanca de la República Argentina y en su posibleutilización en tres etapas específicas de la producción de pulpa y papel: biopulpado,bioblanqueo y degradación del licor negro. Los resultados de esta investigaciónpermitieron identificar una cepa con potencial para el biopulpado de madera de Pinustaeda. Pycnoporus sanguineus no sólo fue capaz de reducir el contenido de lignina un 11% en 14 días de tratamiento, sino que también produjo cambios estructurales notablesen la lignina y la hemicelulosa, incrementando la porosidad 15%. Además de lamodificación química causada por delignificación selectiva, los cambios físicosproducidos, como el aumento del tamaño de poro, afectan directamente la penetración deproductos químicos de cocción, reduciendo el consumo de energía en el proceso. Enreferencia al bioblanqueo, se lograron resultados promisorios mediante una secuenciasencilla, totalmente libre de cloro, que involucró sobrenadantes de cultivo de Trametestrogii y Coriolus antarcticus, y posterior blanqueo con peróxido de hidrógeno. La mismafuncionó aun en condiciones moderadas (28°C) lo que permite minimizar el consumo deenergía y la pérdida de pulpa. La utilización de crudos enzimáticos evita el costo elevadode la purificación enzimática y el uso de mediadores adicionales. Entre las cepasinvestigadas para su posible uso en el tratamiento del licor negro, Lenzites elegans fuecapaz de lograr buenos porcentajes de decoloración, y sólo requirió para ello de ladisminución del pH del efluente con el agregado de ácido cítrico. Irpex lacteus tambiénresultó capaz de decolorarlo, pero fue necesario un dializado previo. Como resultado deesta investigación, se identificaron nuevas cepas de hongos ligninolíticos con potencial enbiopulpado, bioblanqueo y decoloración del licor negro y se analizaron condiciones a sertenidas en cuenta a la hora de utilizar a estos organismos o sus enzimas en dichosprocesos.

Descripción: Fil: Reca, Alfredo Roberto. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: La pluripotencia y autorrenovación, propiedades fundamentales de las células madre embrionarias (CME), son mantenidas por factores de transcripción (FT) específicos, siendo los más importantes Oct4, Sox2 y Nanog. Estos factores ocupan al mismo tiempo las regiones promotoras de diversos genes a lo largo de todo el genoma, actuando como el núcleo de una red regulatoria que modula la expresión de genes de pluripotencia y de diferenciación celular. Esta regulación de la transcripción está relacionada con cambios en la estructura de la cromatina, generados por distintas proteínas remodeladoras que modifican las colas de las histonas o el DNA, mediante metilación, acetilación, fosforilación, ubiquitinación, etc. Estas enzimas mantienen la cromatina del estado pluripotente y realizan las modificaciones epigenéticas necesarias para comenzar la diferenciación de células madre pluripotentes (CMP). Se ha reportado que la acetiltransferasa de histonas Myst4 posee en su región promotora un elemento regulatorio altamente ocupado por estos FT en CME de ratón. Nuestra hipótesis postula que FT clave de células madre regulan la expresión de Myst4, y que esta expresión es necesaria para el mantenimiento de las propiedades fundamentales de CME. Para estudiarla, nos propusimos como primer objetivo analizar la unión de los FT en la región promotora de Myst4 mediante estudios de inmunoprecipitación de la cromatina (ChIP-seq) disponibles en bases de datos. Luego, analizamos el patrón de expresión de Myst4 en CME de ratón indiferenciadas y en diferentes etapas de distintos protocolos de diferenciación, tanto en ensayos generados en nuestro laboratorio como en datos de diferenciaciones disponibles de forma abierta. Posteriormente, estudiamos la regulación de Myst4 por los FT esenciales mediante un abordaje de silenciamiento de estos factores en CME. En este trabajo de tesis, observamos que Myst4 se expresa en CME de ratón y que es reprimido durante la diferenciación hacia cualquier tipo celular. Además, nuestros resultados sugieren que su expresión podría estar regulada por Nanog y Oct4, tanto por su posicionamiento en la región regulatoria de Myst4 como por su represión cuando cualquiera de estos dos factores es silenciado. Para estudiar la relevancia de Myst4 sobre el mantenimiento de las propiedades de células madre, utilizamos en primer lugar la estrategia de silenciamiento por shRNA. Sin embargo, ninguno de los tres shRNA ensayados logró un silenciamiento consistente en la expresión de este remodelador. Posteriormente, decidimos utilizar la estrategia de CRISPR/Cas9 para generar líneas celulares de CME knockout para Myst4 (W4 M4-/-). Esta línea no presentó diferencias significativas con respecto a la línea wild type en los niveles de marcadores de pluripotencia y diferenciación temprana. Sin embargo, observamos un cambio en la morfología de las colonias formadas por las células en estado indiferenciado, siendo las mutantes menos refringentes y más planas que las wild type. Por otro lado, las células W4 M4-/- mostraron un mayor número de células cuando se diferenciaron hacia progenitores neurales. Además, este aumento se vió acompañado por una disminución del marcador de progenitor neural Sox1 y el aumento del marcador de mesodermo Brachyury. Estos resultados sugieren que la línea con ausencia de Myst4 presenta una disminución en la eficiencia de diferenciación neural. Los resultados encontrados en este trabajo de tesis sugieren que Myst4 cumple una función en la diferenciación de CME. Nos encontramos analizando la relevancia de Myst4 en la proliferación y la apoptosis de CME en la diferenciación hacia progenitores neurales y neuronas. Consideramos que entender los procesos involucrados en la regulación de la estructura de la cromatina en CME es fundamental para su futura aplicación.

Descripción: La estabilidad de los ARN mensajeros (ARNm) está controlada por proteínas que se unen a secuencias enriquecidas en adenina y uracilo (ARE) en sus regiones 3' no traducidas (3'UTR) denominadas colectivamente proteínas de unión a AU (AUBP). Esta Tesis se centra en el análisis del papel biológico en la glándula mamaria de una AUBP en particular llamada Tristetraprolina (TTP). TTP modifica decaimiento de sus transcriptos blanco, muchos de las cuales codifican para citoquinas proinflamatorias (TNFα, IL-6, LIF, CSF2, IL-10), pero también para oncoproteínas, como c-Myc, Ciclina D1, VEGF y metaloproteinasas, entre otras. De acuerdo con ello, los niveles de TTP están reducidos en diferentes tipos de tumores, incluido el cáncer de mama, respecto al tejido normal. Comprender la función fisiológica de TTP en la glándula mamaria adulta nos ayudaría a determinar cómo la reducción en su expresión podría facilitar el crecimiento tumoral. En este sentido, nuestro grupo ha demostrado que, en la glándula mamaria, la expresión de TTP está aumentada en ratones hembra durante la lactancia y este efecto puede ser imitado por el tratamiento con prolactina en cultivo celular. En ratones TTP knockout condicionales (MG-TTP KO) obtenidos cruzando ratones TTPfl/fl con animales transgénicos WAP-Cre, hemos determinado que la pérdida de TTP en la glándula mamaria durante la lactancia afecta la alimentación de las crías e induce una involución precoz. Para explorar los resultados de la deficiencia de TTP en etapas tempranas del desarrollo, trasplantamos tejido de glándula mamaria de ratones TTP-KO vírgenes en almohadillas de grasa depletadas de su propio epitelio correspondientes a hembras receptoras wild type (WT). Después de 10 semanas, las hembras trasplantadas con epitelio mamario TTP-KO mostraron una morfogénesis deficiente en comparación con los implantes mamarios control. Estos datos sugirieron un impacto de TTP en las células indiferenciadas que impulsan el desarrollo de la glándula mamaria. En esta Tesis probamos la hipótesis mencionada anteriormente en primer lugar a través de la generación y análisis de una línea celular con menor expresión de TTP (TTP-KD) producida por transfección estable de células epiteliales mamarias HC11 con shRNA específicos para el ARN de TTP. Elegimos esta línea celular porque poseen propiedades stem, similares a las células progenitoras mamarias in vivo. Curiosamente, las células TTP-KD mostraron una reducción en sus tasas de supervivencia, aumento de la apoptosis y niveles incrementados de proteínas pro-apoptóticas como la caspasa 3 clivada (CC3) y BAX. Fenotípicamente, las células TTP-KD revelaron una capacidad disminuida para formar mamosferas en cultivo 3D y repoblar las almohadillas de grasa clareadas de ratones hembra BALB/c vírgenes a 10 semanas post implantación. Estos resultados indican que la muerte celular observada podría haber tenido un impacto significativo en el compartimento de células progenitoras mamarias. Hemos encontrado que las células TTP-KD mostraron una elevada expresión de los mensajeros Il-6 y Tnfα, dos blancos conocidos de TTP que codifican para citoquinas inflamatorias. De forma acorde, estas células presentaron niveles aumentados de fosfo-STAT3 y fosfo-p65 o subunidad RelA de NF-κB, proteínas cuyas vías correspondientes son activadas por IL-6 y TNFα, respectivamente. Ambas vías de señalización están implicadas en la apoptosis y la respuesta inflamatoria en la glándula mamaria. Como se ha reportado previamente, TTP es fosforilada y consecuentemente inactivada por MK2, una proteína río abajo en la vía de p38, la cual es inducida en microambientes estresantes y activada por TNFα. Hemos detectado fosfo-p38 aumentada en células TTP-KD, lo cual además se correlaciona con una actividad de TTP significativamente reducida, medida a través de la transfección transitoria de una construcción que contiene el ADNc de luciferasa río arriba del 3'UTR de Tnfα. Además de la regulación positiva de fosfo-p38, tanto fosfo-ERK1/2 como fosfo-JNK1/2 están disminuidas en las células TTP-KD. Curiosamente, la inhibición farmacológica de p38 mediante el tratamiento de células TTP-KD con SB203580 redujo los niveles de CC3 y fosfo-p65. Además, el tratamiento de células TTP-KD con SB203580 también restaura la actividad de TTP y la autorrenovación en cultivo 3D. Se lograron efectos similares al agregar Etanercept, un receptor de TNFα soluble que se utiliza para tratar enfermedades inflamatorias. Para abordar cómo la deleción de TTP afecta el potencial de diferenciación de la glándula mamaria durante preñeces sucesivas, aprovechamos nuestros ratones bi-transgénicos WAP- Cre/TTPfl/fl. Se ha demostrado que el promotor WAP no solo es activo en el epitelio mamario durante la lactancia, sino también en las células progenitoras "inducidas por la preñez" (PI-MEC), que participan en el desarrollo ductal y alveolar durante la preñez y la lactancia. Después de dos preñeces, las hembras que carecen de TTP en las células WAP+ mostraron alvéolos dramáticamente subdesarrollados en comparación con las ratonas control, lo que destaca la relevancia de la TTP en la preservación de las células progenitoras mamarias. Además, las glándulas lactantes de WAP-Cre/TTPfl/fl multíparas mostraron niveles incrementados de CC3 y fosfo-p38 en comparación con las ratonas control, lo que presenta semejanza con la línea celular TTP-KD. En resumen, nuestros resultados indican que la expresión de TTP es necesaria para la supervivencia de las células progenitoras mamarias al prevenir eventos proinflamatorios espontáneos y asociados al estrés, que pueden inducir la muerte normal de las células madre mamarias. En las células tumorales mamarias, los mismos efectos, impulsados por la pérdida de TTP, pueden promover la progresión del cáncer de mama y un mal pronóstico para la paciente. Por lo tanto, encontrar estrategias para mantener TTP en niveles de expresión elevados en la glándula mamaria protegería el compartimento progenitor sano y, simultáneamente, evitaría la progresión de las células cancerosas transformadas (fórmula aproximada, revisar la misma en el original).

Descripción: Han pasado casi 30 años de la detección de los primeros casos de VIH-1 y aún no se ha conseguido desarrollar una vacuna efectiva y segura. La epidemia de VIH en Argentina está caracterizada por una alta prevalencia de infecciones causadas por virus pertenecientes al subtipo B y formas recombinantes circulantes BF (CRF12_BF). A pesar de la amplia gama de trabajos dedicados a la caracterización de la respuesta inmune y al desarrollo de vacunas frente a VIH, no queda claro cuál es el impacto de la variabilidad en la elección del antígeno. Nef es una de las proteínas virales elegida como antígeno en los ensayos clínicos y pre- clínicos para vacunas. En este trabajo de Tesis, Nef fue usada como una herramienta para evaluar la importancia de las variantes recombinantes BF de VIH en el diseño de futuras vacunas. Vectores de ADN, MVA y VV que expresan NefBF y NefB fueron generados y caracterizados. Luego de la inmunización en ratones Balb/c con una dosis simple de ADN seguida por otra de MVA, se encontró que NefBF generó una respuesta altamente específica sin detectarse reactividad cruzada frente a Nef del subtipo B. Sin embargo, luego de aplicar un esquema de inmunización más extenso (tres dosis de ADN más una dosis de MVA) se indujo una respuesta específica mayor, acompañada con el aumento de la reactividad cruzada frente a B, aunque de menor magnitud que frente al antígeno homólogo NefBF. Por otro lado, al aplicar el vector VVnefBF se obtuvo una respuesta específica cerca de tres veces mayor que con MVA, pero con el mismo grado de reactividad cruzada; mientras que la inmunización con VVnefB generó una respuesta de menor magnitud, pero con mayor grado de reactividad cruzada contra NefBF. La aplicación de IL-12 y GM-CSF desde vectores de ADN (como moléculas adyuvantes) aumentó la respuesta hasta seis veces, al aplicarse por separado, y 14 veces al aplicarse juntas. Este nivel de respuesta permitió caracterizar los epítopes de mayor inmunogenicidad. Estos resultados son de crucial importancia para el desarrollo de una futura vacuna para nuestra región, indicando que antígenos de estas variantes virales BF deberían ser considerados en el diseño de las mismas.

Descripción: Las proteínas CRISP1-4 (Cysteine-Rich Secretory Proteins) se expresan en el tracto reproductor masculino de mamíferos y participan en el proceso de fertilización. El objetivo general de esta Tesis Doctoral ha sido estudiar la relevancia de las mismas para la fertilidad. En primer lugar, sabiendo que la proteína espermática CRISP2 participa en el proceso de fusión de gametas, nos propusimos estudiar su relevancia para la fertilidad a través del empleo de animales knockout (KO). Si bien los machos KO resultaron fértiles, los mismos exhibían deficiencias en la fertilización in vivo. Asimismo, estudios de fertilización in vitro revelaron que los espermatozoides KO presentaban defectos en su capacidad para penetrar las envolturas del ovocito y fusionarse con el mismo. Consistentemente, estos espermatozoides mostraban menores niveles de hiperactividad así como un aumento exacerbado de los niveles de Ca2+ intracelular durante la capacitación. En conjunto, estos resultados apoyan la relevancia de CRISP2 no solo para la fertilización sino también para la fertilidad de un individuo. Por otro lado, teniendo en cuenta que se han encontrado menores niveles de CRISP2 en pacientes infértiles con problemas en la motilidad espermática, el segundo objetivo consistió en estudiar si dichos defectos en la motilidad están asociados a una desregulación del Ca2+. Apoyando los resultados correspondientes al primer objetivo, observamos una asociación negativa entre la expresión de CRISP2 y el aumento de Ca2+ intracelular que ocurre durante la capacitación, indicando que CRISP2 cumpliría un rol en la regulación de Ca2+ en el espermatozoide humano. Asimismo, observamos que la entrada de Ca2+ que ocurre a través de CatSper podía prevenirse inhibiendo la fosforilación de proteínas en tirosina que se observa durante la capacitación, sugiriendo que la modulación de esta vía podría utilizarse como estrategia terapéutica en espermatozoides con niveles alterados de Ca2+. Finalmente, teniendo en cuenta la alta similitud de secuencia y la redundancia funcional entre las proteínas CRISP, como tercer objetivo evaluamos el fenotipo reproductivo de animales deficientes en más de una proteína CRISP simultáneamente. Si bien la fertilidad de los animales doble KO para Crisp2 y Crisp4 fue normal, los ratones deficientes en tres o en las cuatro proteínas CRISP presentaron severos defectos de fertilidad asociados a fallas en la fertilización observadas tanto in vivo como in vitro, confirmando no solo la relevancia de estas proteínas para la fertilidad sino también la existencia de mecanismos de cooperación funcional entre miembros de la familia. En conjunto, estos estudios contribuirán a una mejor comprensión de los mecanismos involucrados en el proceso de fertilización contribuyendo al desarrollo de mejores métodos de diagnóstico y tratamiento de la infertilidad así como de regulación de la fertilidad.

Descripción: Las proteínas APOBEC3 son citidina deaminasas que pueden determinar cambios G→A en la secuencia codificante de HIV-1, propiedad que les confiere una capacidad antiviral. Esta actividad puede ser contrarrestada por el virus al expresar la proteína Vif, la cual recluta un complejo ubiquitina ligasa basado en Culina5 que desestabiliza a las moléculas APOBEC3. La variabilidad genética tanto del virus como del hospedador puede afectar la eficiencia con la que se desarrollan estos procesos. Una elevada edición G→A puede resultar en la restricción de HIV-1 (fenómeno de mutagénesis letal denominado hipermutación), aunque cambios en niveles subletales podrían favorecer a la diversificación viral. El objetivo del presente trabajo fue estudiar la variabilidad del sistema Vif-APOBEC3 en niños perinatalmente infectados por HIV-1, determinando su relevancia para el desarrollo de SIDA infantil. Los polimorfismos APOBEC3G H186R, APOBEC3G C40693T y CUL5 SNP6 no parecieron modificar el curso clínicos de la infección. En cambio, mutaciones en Vif (inserción de un aminoácido en posición 61 y las sustituciones V13I, V55T, A62D/N/S, L81M y Q136P) sí se relacionaron con diferencias en los tiempos de progresión a SIDA. Se hallaron además evidencias de que ciertos alelos de APOBEC3G/CUL5 seleccionarían variantes particulares de Vif. Se determinó una baja frecuencia de casos con una población proviral constituida mayoritariamente por formas de HIV-1 hipermutadas. El grado de edición en niveles subletales exhibió diferencias entre variantes de CUL5 y Vif. En conclusión, la variabilidad del sistema Vif-APOBEC3 afectaría los tiempos de desarrollo de SIDA pediátrico y también los niveles de edición sufridos por HIV-1.

Descripción: Las células madre embrionarias (CME) son células derivadas del macizo celular interno del blastocisto de mamíferos. Poseen la capacidad de auto-renovarse indefinidamente en cultivo mientras que, ante estímulos adecuados, pueden dar origen a todos los tipos celulares del organismo adulto, propiedad conocida como pluripotencia. En esta tesis, estudiamos la relación de las propiedades fundamentales de CME de ratón con diversos aspectos del ciclo celular. En primer lugar, caracterizamos en detalle la dinámica poblacional de proliferación celular, tanto en estado indiferenciado naïve como durante la salida del mismo. Demostramos que la duración de la fase G1 del ciclo celular está pre-determinada en gran medida por la célula parental. Asimismo, determinamos que durante la salida del estado indiferenciado naïve la duración total del ciclo celular, de la fase G1 y de las fases S/G2/M disminuye, en contraposición con lo que ocurre en tipos celulares más diferenciados. Por otra parte, estudiamos la relación entre los cambios transcripcionales que ocurren durante la diferenciación celular con dos procesos en los que ocurre una reconfiguración de la estructura epigenética: la replicación del ADN y la división celular. Mediante la generación de cultivos sincrónicos y un protocolo de diferenciación dirigida, mostramos que las células comienzan a modificar sus patrones de expresión génica en la misma generación que recibe la señal de diferenciación, demostrando que la división celular no es un proceso indispensable para el inicio de los cambios transcripcionales requeridos para la salida del estado indiferenciado naïve. Por otra parte, determinamos que la inhibición de la replicación del ADN reprime severamente el cambio transcripcional durante la diferenciación. Dicho bloqueo en el cambio del perfil de expresión génica fue independiente de la activación de las vías de daño al ADN, evaluado mediante la generación de una línea knock out para p53 con la tecnología de CRISPR/Cas9. Nuestros resultados sugieren que la replicación del ADN podría ser necesaria para que ocurra el cambio en los programas transcripcionales durante la salida del estado indiferenciado, indicando que la síntesis de ADN podría estar acoplada a la modificación de los patrones epigenéticos durante la diferenciación celular. Este resultado podría contribuir a una explicación mecanística para la reciente observación de que las CME sólo responden a señales de diferenciación durante la fase G1 del ciclo celular, es decir, antes de la replicación del ADN. Creemos que los resultados de este trabajo pueden contribuir al entendimiento de los procesos moleculares que controlan las propiedades fundamentales de CME, lo cual no sólo es importante dentro del área de la biología del desarrollo, sino además para su futura aplicación en el área de terapias regenerativas.

Descripción: El síndrome urémico hemolítico (SUH) se caracteriza por anemia hemolítica, trombocitopenia y disfunción renal. La forma típica de SUH se asocia a infecciones por bacterias Gram negativas enterohemorrágicas del género Shigella y Escherichia productoras de toxina shiga (Stx). La disfunción endotelial inducida por la Stx es central, pero lipopolisacáridos bacterianos (LPS) y neutrófilos (PMN) contribuyen con la patofisiología. La falla renal es característica del SUH, aunque en casos severos, ocurren complicaciones neurológicas usualmente asociadas a casos fatales. Es clara la alteración de la barrera hemato-encefálica (BHE) asociado al daño de las células endoteliales (CEs) que la componen. Los astrocitos (ASTs) son células inflamatorias del cerebro y determinan el funcionamiento de la BHE. Los ASTs están en contacto con CEs, por lo que el estudio de los efectos de Stx y LPS sobre los ASTs, así como la influencia de esta respuesta sobre las ECs es fundamental. Stx1 y LPS indujeron la activación de ASTs y la liberación de TNF-α, óxido nítrico y quimioquinas atractantes de PMN. Factores liberados por ASTs estimulados con LPS y Stx1 disminuyeron la permeabilidad endotelial e indujeron la activación de CEs favoreciendo la adhesión de plaquetas y PMN. Los efectos evaluados fueron dependientes del TNF-α astrocitario. La respuesta de ASTs frente a Stx1 y LPS podría contribuir con la disfunción de la BHE y el desarrollo de la neuropatología observada en SUH.

Descripción: Los estudios anteriores sobre el pingüino de Magallanes sugerianque la causa principal de pérdida de huevos era la deserciónde nidos debida a la asincronia en los relevos durante laincubación (Scolaro 1984a, 1986). Contrariamente a lo obtenidoen dichos estudios, este estudio muestra que la tasa de desercióndel pingüino de Magallanes en Punta Tombo es relativamente baja,que la asincronia en los relevos no es la causa principal de ladeserción de nidos, y que la deserción causada por este factor noes la determinante principal de una disminución en el éxito deeclosión. La deserción en el pingüino de Magallanes parece estar determinadapor varios factores, tanto internos como externos, y enmuchos casos dichos factores pueden interactuar entre si para determinarla decisión del ave de abandonar sus huevos. Entre losfactores principales causantes de la deserción de nidos se encuentrala condición física del ave reproductora, sugiriendo laimportancia de los costos fisiológicos en la determinación de ladeserción. Los resultados también sugieren que la disponibilidadde alimento puede determinar la tasa de deserción afectando tantola condición fisica de las aves como la asincronia en losrelevos. La asincronia en el último relevo durante la incubación tampocotuvo un efecto importante sobre el éxito reproductivo. Elretraso en regresar del viaje de alimentación no afectó la tasade deserción de nidos, aunque fue un factor determinante de mortalidadtemprana de pichones por falta de alimento. Sin embargo,la causa principal de los retrasos en la alimentación de los pichonesrecientemente eclosionados no fue la aincronia en losrelevos, sino la deserción o muerte del individuo que se encontrabaforrajeando. A pesar de no ser la causa principal de pérdida de huevos, ladeserción puede en algunas temporadas reproductivas tener unefecto importante sobre el éxito de eclosión. Además la deser-ción temporaria parece ser un factor importante en la determinaciónde la depredación de huevos, la cual fue la causa principalde pérdida de huevos en todos los años del estudio. Siendolos pingüinos aves de gran tamaño y picos relativamentepoderosos, la depredación de huevos sobre nidos donde los adultosse hallan presentes debiera ser riesgosa. Por lo tanto, es deesperarse que los depredadores oportunistas aprovechen los nidosexpuestos y tomen los huevos cuando éstos se encuentran sin protección. Por lo tanto, la deserción de nidos puede afectar lapérdida de huevos debido tanto a la terminación del intento reproductivoen curso por uno o ambos padres, o por un incrementoen las probabilidades de depredación debido a la deserción temporalde los huevos. Contrariamente a lo esperado, los pingüinos de Magallanesraramente abandonaron sus nidos durante la incubación frente a laperturbación humana. Ningún pingüino abandonó sus nidos duranteel transcurso de las experiencias realizadas en el período de incubación,y durante los siete años de visitas diarias al área deestudio solamente unos pocos pingüinos abandonaron los huevos alser revisados sus nidos. Tanto el tamaño corporal como la faltade historia evolutiva con depredadores o la explotación humanapodrían contribuir a explicar la baja respuesta del pingüino de Magallanes a la perturbación humana. Estas caracteristicasprobablemente influyen sobre los costos ecológicos de la reproducción,disminuyendo las probabilidades de deserción debido alos riesgos de la depredación. Los pingüinos podrian disminuiraún mas esta respuesta a la gente a traves de procesos do habituacióno aprendizaje, como lo sugieren los resultados que muestranque los pingüinos que anidan en áreas frecuentemente visitadaspor el turismo son mas tolerantes a la perturbación humanaque los pingüinos de áreas que nunca son visitadas por la gente.

Descripción: El arsénico es un elemento tóxico para las plantas, los animales y los humanos,que puede ser hallado en diferentes proporciones en la atmósfera, los suelos, las rocas, las aguas naturales, y hasta en organismos. Se moviliza en el ambiente por medio de una combinación de procesos naturales como meteorización,emisiones volcánicas y actividad biológica y también por una amplia variedadde acciones antropogénicas. Entre estas últimas, han tenido notable impactola minería y otras actividades industriales, la quema de combustibles fósiles,y el empleo de pesticidas y herbicidas arsenicales; algunas formulaciones del área de la agricultura han devenido obsoletas, pero el empleo de sales arsenicales en la preservación de la madera sigue siendo común en la actualidad. De todas las fuentes del arsénico en el ambiente, la que sin duda representa unamás clara amenaza para la salud de la humanidad representa su presencia en el aguade bebida, dada la cantidad de regiones del globo terráqueo y el número de habitantes que sufren esta clase de contaminación, en tanto que la exposición porvía atmosférica se limita al ámbito ocupacional y a áreas considerablemente másrestringidas. Entre los diversos métodos que se emplean para reducir la contaminación con arsénico que afecta las aguas de bebida de origen subterráneo, se encuentra la oxidación del elemento a su estado de valencia superior (V) que, además de ser menos tóxico que su estado inferior (III), presenta ventajas al intentar su eliminación del agua. En el presente trabajo se encara la oxidación del arsénicomediante la acción de la luz, por efecto catalítico del dióxido de titanio, sustancia semiconductora de amplia utilización como pigmento blanco, que en la actualidad está experimentando un empleo creciente en muy diversas aplicacionespor sus propiedades casi únicas entre los compuestos de naturaleza similar: además de su importante utilidad como agente descontaminante, particularmentede efluentes líquidos, sirve para la descontaminación de medios gaseosos y parala fabricación de superficies con efectos desinfectantes, autolimpiantes yantiempañantes. Por su modo de acción, la fotocatálisis heterogénea con semiconductores se inscribe dentro de lo que se ha dado en llamar "tecnologías avanzadas de oxidación",denominación que se refiere a un grupo de procesos químicos que involucran la generación de especies oxidativas y reductivas muy activas, entre las cuales elradical hidroxilo, HO, es la especie principal y más fuerte generada en estosprocesos. La forma en que juegan las distintas variables posibles, como la masa del óxido,el pH y la adición de otros oxidantes como el agua oxigenada y el ión férrico,este último con propiedades adsorbentes del arsénico en su estado de hidróxidoprecipitado, son estudiados en el presente trabajo, a nivel laboratorio. El fin último de este conocimiento es su aplicación al desarrollo de un método eficaz y barato, capaz de ser implementado en comunidades rurales que no tienen acceso al agua tratada por plantas de escala industrial, ni aúnpor otras alternativas más modestas, por lo caras o sostificadas, y cuyos antecedentesinmediatos son el método SORAS y el método SODIS (este último sólo para lacontaminación biológica).El estudio que aquí se encara pretende la descontaminación del arsénico, presente en el agua subterránea de consumo, mediantesu exposición al sol en botellas de politereftalato de etileno(PET) recubiertasinternamente por dióxido de titanio mediante un procedimiento sencillo, y su posterior remoción por el hierro al estado de hidróxido precipitado mediante un elemento filtrante apropiado. Este elemento es un componente corriente de esta clase de aguas, por lo que puede ser necesaria, o no,su adición externa, y la luz solar es un insumo abundante y gratis en muchas regionesdel planeta, como el noroeste de la Argentina, particularmente afectado por lasproblemáticas sanitarias derivadas de la contaminación arsenical del agua de beber. El trabajo concluye con experimentos tipo campo, con aguas reales de la Provinciade Santiago del Estero y de la Provincia de Buenos Aires expuestas al solen botellas de productos comerciales corrientes, recubiertas con dióxido detitanio en su superficie interna, en las que mediante el agregado de iones férricos y posterior decantación y/o filtrado, se obtuvieron nivelesde descontaminación que las hacen aptas para el consumo humano.

Descripción: El giro dentado del hipocampo posee un intenso remodelado, producto de la neurogénesis adulta. Esta región está controlada por un alto tono inhibitorio que mantiene silenciada la capa granular. Sin embargo, la neurogénesis adulta altera estos niveles adicionando de forma continua células granulares nuevas (CGs) que presentan elevada excitabilidad durante su desarrollo e integración con el circuito preexistente. Esto le confiere a las CGs nuevas la capacidad de procesar estímulos novedosos que involucran procesos de memoria y aprendizaje. Para entender los mecanismos fisiológicos por los cuales las CGs nuevas reclutan circuitos de inhibición, sería preciso caracterizar las poblaciones de interneuronas y su rol en la integración de nuevas CGs. Conocer en detalle la conectividad entre CGs nuevas y los microcircuitos inhibitorios proveerá una base sólida sobre la cual poder estudiar el procesamiento de información de la red. Utilizamos la técnica de electrofisiología combinada con optogenética para estudiar la conectividad aferente y eferente entre CGs y dos grupos principales de interneuronas GABAérgicas: parvalbúmina (PV-INs) y somatostatina (SOM-INs). Nuestros resultados muestran que las CGs reciben inhibición perisomática provenientes de PV-INs a través contactos que se mantuvieron inmaduros hasta su crecimiento abrupto en la semana 6 de desarrollo. Esta transición se vio acelerada por exposición a un ambiente enriquecido (AE). Los contactos provenientes de las SOM-INs son principalmente dendríticos y se desarrollan lentamente hasta alcanzar la maduración en la semana 8. Por otra parte, las eferencias de las CGs reclutan eficientemente a las PV-INs pero en menor medida a las SOM-INs que tienen un desarrollo sináptico demorado. Por último, se evaluó el rol de cada población de interneurona en la actividad global del giro dentado maduro. Las PV-INs ejercen un fuerte control de los circuitos inhibitorios de tipo feedback y feedforward, mientras que las SOM-INs participan principalmente en el circuito de feedback. Los resultados obtenidos muestran que la formación de sinapsis inhibitorias es un proceso lento que prolonga la dinámica de desarrollo de las CGs nuevas. Esta transición de largo plazo mantiene a las CGs nuevas débilmente acopladas a la red inhibitoria lo que contribuye a generar niveles de plasticidad aumentados en la red local del giro dentado.