Descripción: Fil: Gil, Mirta Alicia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Ratto, Jorge Oscar. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: La metagenómica basada en tecnología de secuenciación de alto rendimiento revolucionóen los últimos años el campo de la microbiología. Esta metodología permite estudiar a lascomunidades de microorganismos ambientales, tanto cultivables como no cultivables, apartir de su información genética. Para poder realizar este tipo de estudios fue necesarioinstalar, por primera vez en nuestro país, una plataforma de genómica y bioinformáticaque contara con el equipamiento necesario para la secuenciación masiva de ADN y elanálisis posterior de los datos. Los estudios metagenómicos realizados en este trabajo seenfocaron en dos ambientes contrastantes: Las lagunas de altura de la Puna Andina (LAPA) y los suelos de los agroecosistemas de la pampa húmeda (SAPH). Los microbiomasde LAPA en ambientes prístinos presentaron una biodiversidad relativamente baja y nocaracterizada previamente. Esto sirvió como modelo de análisis Taxonómico-funcionalpara describir los primeros estromatolitos vivos de altura en el mundo y biofilmscompuestos por haloarqueas encontrados por primera vez en la naturaleza. Los SAPH, porotro lado, son ambientes altamente biodiversos y con alto impacto antropogénicosirviendo como modelo de estudio del impacto ecológico sobre el microbioma en dichascondiciones. Específicamente para este fin, se generó el set de datos PAMPA de casi 8000millones de bases de ADN que ha sido posteriormente abierto públicamente para elanálisis comunitario. Esta investigación es pionera en nuestro país en el emergente campode la metagenómica ambiental por secuenciación masiva y es a su vez la más detalladacaracterización de microbiomas hecha hasta el momento en Argentina.

Descripción: Este trabajo consiste en el análisis y en la interpretación de los resultados obtenidos de la revisación de placas nucleares marca "Ilford G-5", expuestas a la radiación cósmica a diversas alturas en los "Nevados del Aconquija" (Prov. de Tucumán), a -21° latitud geomagnética. Se trata de la primera exposición de tal índole realizada a una latitud tan baja, y, por lo tanto, del primer análisis sistemático de la componente nucleónica en un lugar cercano al ecuador geomagnético. Tal análisis es de sumo interés para el mejor conocimiento de la radiación cósmica -en particular, de su componente nucleónica-, puesto que a tal latitud todas las partículas primarias inciden sobre la atmósfera terrestre con energías superiores a 11 billones electrón-volt (11.10^9 eV). Como primer resultado importante se obtuvo la curva de absorción en atmósfera de la componente nucleónica, representada por el número de desintegraciones nucleares ("estrellas") registrado en la emulsión fotográfica, que se produce a diferentes alturas, por día de exposición y por cm3 de emulsión. Comparando la curva con otra obtenida por otros autores a 48° de latitud, se verificó por primera vez el hecho -ya sospechado por diversos autores- de que la longitud de absorción es mayor en el punto de menor latitud. Esto permitió la determinación del efecto "integral" de latitud como función de la altura sobre el nivel del mar. Para poder llegar a obtener espectros de energía a partir de la estadística de "estrellas" de desintegración, se propone una fórmula empírica que relaciona el número de mesones creados ("multiplicidad") y el número de nucleones evaporados por un núcleo desintegrado, con la energía media del nucleón incidente, causante de tal desintegración. Esta fórmula da buenos resultados para energías bajas y medianas, y así fué posible el trazado de espectros integrales de la componente protónica y neutrónica de la radiación cósmica. Con estos aspectos fué posible determinar el efecto de latitud, ahora en función de la energía de la componente. Los espectros de neutrones son los primeros obtenidos en tal rango de energías, comprobándose que a bajas latitudes los neutrones se absorben menos en la parte menos energética del espectro. Además se determinó que el espectro neutrónico "cae" más rápidamente en puntos de mayor latitud, descubriéndose así la principal causa del efecto "integral" de latitud. Para altas multiplicidades (creación de muchos mesones) la fórmula propuesta no es válida, pero ha sido posible dar un método para corregirla. Se comprobó así que la correcta relación energía-multiplicidad obtenida experimentalmente es del tipo aproximadamente exponencial, tal como lo prevee la teoría (Heisenberg-Fermi). Con la relación energía-multiplicidad obtenida, se puede estudiar la absorción de la componente nucleónica, ahora en sus diferentes intervalos de energía. Se obtienen valores de la longitud de absorción de la componente protónica y neutrónica como función de la energía. Otro dato importante es la curva de absorción de los mesones "lentos", que parece correr paralelamente a la de los neutrones poco energéticos - tal como es de esperar por razones técnicas. Por último, se da la correcta interpretación -desde el punto de vista de la teoría de las cascadas nucleónicas- de los diversos hechos encontrados experimentalmente.

Descripción: Fil: Mazzolli de Mathov, Estrella A.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: El trabajo se divide en dos partes. En la primera parte se establece por vía experimental el exponente del número adimensional de Schmidt en la correlación de transferencia de materia. Surge de un estudio previo que dicho exponente define al mismo tiempo la relación que existe entre el coeficiente de transferencia de materia, fijada en una expresión de tipo cinético, con la difusividad del molecular. Este estudio se hace para un sistema controlado exclusivamente por la película qíquida o sea donde la etapa controladora reside exclusivamente en la fase líquida. Un suscinto examen de los distintos modelos teóricos para este tipo de transferencia indica un completo desacuerdo en el valor del exponente según las suposiciones que implican cada uno de ellos. Se busca un desarrollo teórico que se adecúe al modelo experimental en que se va a trabajar y este desarrollo con las condiciones de contorno respectivas lleva a un exponente de 0,5. Posteriormente se examinan los distintos valores exponente del número de Schmidt que surgen de determinaciones experimentales. Se observa que todos los valores carecen de un mínimo de rigurosidad que permita asegurar con certeza el valor que indica. Generalmente en los trabajos experimentales debido a lo engorroso del procedimiento se toma como exponente del número de Schmidt el valor teórico más afín al modelo teórico preconizado en la ocasión. Se hace un estudio previo del sistema más conveniente para el trabajo y se elige el sistema triple de agua, glicerina y carbonato. La influencia de la reacción química sobre la transferencia es despreciable en el sistema. Se hacen 43 corridas donde el número de Schmidt varía entre 590 y 3800 y se representa en un gráfico doble logarítmico en función del cociente entre el número de Sherwood y el número de Reynolds elevado este último a la potencia de 0,45. Este exponente surge de un trabajo anterior realizado en el mismo equipo por el Dr. Julio Krasuk. La relación de los puntos así representados indica un exponente de 0,50-0,03. Este exponente coincide con las predicciones de la teoría de la penetración. En la segunda parte de este trabajo aprovechando la correlación de transferencia de materia completada en la primera parte del trabajo se intenta determinar un coeficiente de efectividad para área de transferencia o valores de lo que en la literatura se conoce como área efectiva en una torre de rellen, para el caso de una absorción de un gas acompañada por una reacción química lenta o moderada rápida. Se intenta utilizar el gráfico de Van Krevelen modificado en la oportunidad. A tal efecto se define un nuevo grupo adimensional a partir del DaII al que se lo multiplica por el cociente entre aw/a, área irrigada y área efectiva para una absorciónfísica. Se observa que el cociente K´La/KLa se desvía en función de DaIIaw/a de la curva original de Van Krevelen en función del número de Reynolds observándose una coincidencia plena con la curva original a altos valores del número de Reynolds. La desviación se hace mayor a medida que bajan los valores de dicho número adimensional. Finalmente se verifica una fórmula propuesta por Yoshida. Durante esta parte del trabajo se determinan siguiendo un método de observación, valores de área irrigada y área efectiva para el caso de absorción física siguiendo modelos enunciados para este tipo de relleno por W. Norman y J. Mullin. Las conclusiones del trabajo en su totalidad son: Determinación del exponente del número adimensional de Schmidt. El valor obtenido es 0,50. Si bien no se llega a obtener el coeficiente de efectividad del relleno se demuestra la dependencia de la efectividad del área en función del número de Reynolds que posteriormente permitiría el enunciado de otros modelos. El estudio del problema de áreas efectivo debe tender hacia un estudio de problemas de mezclado y homogeneidad hidrodinámica en la columna que debe dar mejores soluciones al problema.

Descripción: Fil: Catán, María Angélica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: El objetivo de la presente tesis fue el estudio de la regulación de losflujos de P y el consumo de lujo en plantas de trigo cultivadas en suministros de P no limitantes para el crecimiento. Este aspecto de la nutrición mineral ha sidoobjeto de poca atención por los investigadores a nivel mundial a pesar de suimplicancia en los aspectos económicos relacionados con la fertilización delcultivo y la sustentabilidad de los sistemas. El acercamiento a los objetivos propuestos se realizó mediante lacomparación de genotipos de trigo contrastantes en su eficiencia nutricional de P cultivados bajo condiciones controladas (cámara climática e hidroponia). Seemplearon soluciones de cultivo ya que, además del control estricto del nivel desuministro, permite la valoración de los flujos unidireccionales de P de lasraíces (influjo y eflujo de P). Los pasos seguidos fueron: 1) seleccionar desde un conjunto de seisgenotipos de trigo dos que fueran contrastantes en su economía del P y, 2)estudiar en ellos, con más detalle, el crecimiento, la tasa de absorción neta (SARP), flujos bidireccionales (influjo y eflujo de P) y la relación biomasaseca/contenido de P (cociente de utilización de P, CUP), como posiblesindicadores de la eficiencia nutricional. Se presentan los resultados obtenidosen 0.05 y 5 mol.mˉ³ de P, suministros que mostraron no ser limitantes para elcrecimiento. Los genotipos seleccionados fueron Buck candisur y Chaqueño INTA. El primero presentó un crecimiento, una SARP y un CUP mayor que Chaqueño INTA. Estos dos últimos parámetros fueron afectados por elsuministro de P en forma diferente para cada genotipo. No se presentarondiferencias significativas entre genotipos ni en el influjo ni en el eflujo de P. Posteriormente se realizaron dos ensayos con estos dos genotipos de trigo,uno en cámara climática y otro en invernáculo, cultivados en un suelo deficientede P fertilizado con altas dosis de PO4H2, con el fin de comprobar si lasdiferencias observadas en la SARP y CUP en hidroponia se mantienen en elcultivo con suelo. Los resultados mostraron las mismas diferencias genotípicasen la SARP y CUP que las encontradas en hidroponia. Se realizaron dos experiencias en hidroponia a fin de constatar quéflujos de P se relacionan con la concentración de P en las plantas. La obtenciónde plantas con distintas concentraciones internas de P se realizó mediante dosmétodos: cambios de suministro de P (entre concentraciones no limitantes parael crecimiento) y privación total de P. Como resultado se observó que la SARP,la tasa de acumulación de P en las raíces (TAPr)y la tasa de transporte de P alvástago (TTPv) fueron los flujos que variaron junto con la concentración internade P en las plantas, mientras que el eflujo e influjo de P presentaron escasasdiferencias entre las plantas transferidas y las plantas control. Estos resultadosapoyan la hipótesis de que la absorción de P en suministros no limitantes parael crecimiento está más vinculada con los flujos internos de P (TAPr y TTPv),que con los flujos unidireccionales de entrada (influjo)y salida (eflujo) de estenutriente hacia y desde las raíces. Es de destacar las limitaciones metodológicas en la determinación de losflujos de P (en especial las relacionadas con diferentes tiempos de medición) yla alta variabilidad en los parámetros medidos (relacionados con diferenciasentre unidades experimentales, ciclos de luz-oscuridad, etc.) que dificultan suutilización para comparar genotipos. Otro factor que podría haber comprometido las estimaciones de los flujosde P es su expresión por unidad de biomasa seca de raíces en vez deexpresarla por unidad de área. Las posibles diferencias entre genotipos y/oentre suministros de P en la relación superficie:biomasa seca de raíces podríanenmascarar o aun arrojar diferencias espúreas en los flujos de P. Afortunadamente estas diferencias no fueron encontradas ni entre genotipos nientre suministros, por lo que las estimaciones de los flujos realizadas con lospesos secos de raíces pueden asimilarse a las calculadas con la superficie delas mismas. Finalmente se analizó el conjunto de ensayos bajo otra perspectiva enlos que se incluyó, además, datos de otro genotipo de trigo (Las Rosas INTA). Este enfoque se basa en el uso de las correlaciones entre las biomasas y elcontenido de P que posibilitan identificar los cambios pasajeros en laaclimatación de las plántulas a los suministros de P, y eventualmentedescartarlos en el análisis, permitiendo comparar el comportamiento general delos genotipos a más largo plazo. La pendiente de la relación entre el contenidode P y la biomasa seca por planta permitió establecer el valor de laconcentración interna de P alcanzada a largo plazo (“concentración detendencia”), como así también, la capacidad de cada genotipo de conservarlaen diferentes suministros de P (0.05; 0.1 y 5 mol.mˉ³ de P). La diferencia de laconcentración de P de tendencia entre los suministros indica el consumo delujo de P entre suministros. Esta diferencia, entre 0.05 y 5 mol P.mˉ³, mostróque Chaqueño INTA presentó un menor consumo de lujo de P, Buck candisurel mayor, siendo el de Las Rosas INTA intermedio. La tasa de absorción neta (SARP) se redefinió mediante la regresión de la biomasa seca de plantas en eltiempo y con las correlaciones biomasa seca de plantas-biomasa seca deraíces y biomasa seca de planta-contenido de P de planta. El límite de lafunción obtenida para la SARP se interpretó como la “SARP de tendencia",quedando definida por dos componentes: 1) la concentración de P de tendenciay 2) producción-distribución de la biomasa. Ambos factores caracterizan a cadagenotipo pero, mientras que el primero puede variar entre suministros de P, elúltimo es constante para cada genotipo. Las diferencias entre genotiposmuestran que Chaqueño INTA y Buck candisur difieren sólo en el primercomponente, mientras que Las Rosas INTA difiere de estos dos genotipos porsu menor producción-distribución de biomasa. Este análisis muestra que Las Rosas INTA posee la menor SARP, Chaqueño INTA intermedia y Buckcandisur la mayor. La diferencia en el ordenamiento de genotipos segúnconcentración interna de P o SARP pone en duda el valor de este últimoparámetro como estimador de la eficiencia de uso de P cuando su suministroes no limitante para el crecimiento. Otro elemento para dudar de la SARP (cuando se la estima en períodos cortos de tiempo, ej: horas) como estimadorde la eficiencia nutricional es su variabilidad durante el ciclo de luz-oscuridaden estos suministros. Por último el influjode P (flujo que es sólo posible medirloen lapsos de 20') es el parámetro de mayor variabilidad. Varía notoriamenteentre unidades experimentales, durante el ciclo de luz-oscuridad, con la edadde las plantas y es además afectado por el suministro de P. En este conjuntode factores la variabilidad genotípica, aportada por los seis genotiposestudiados, fue prácticamente nula. No se encontraron correlaciones entre elinflujo de P ni con la SARP ni con la concentración interna de P, sin embargose pudo observar que disminuye en 5 y 0.1 mol P.mˉ³ y que aumenta en 0.05mol.mˉ³ de P con el aumento de la biomasa. Los resultados muestran comopoco adecuado el empleo de mediciones en tiempos cortos de los flujos de Pcomo estimadores de su eficiencia nutricional cuando la disponibilidad de esteelemento es alta.

Descripción: La melatonina, hormona secretada por la glándula pineal, regula la función testicular a través del eje hipotálamo-hipofisario y mediante acciones directas ejercidas en las células somáticas del testículo. En este trabajo de Tesis Doctoral hemos evaluado biopsias testiculares humanas con y sin alteraciones histológicas evidentes. En comparación con testículos sin cambios morfológicos significativos, las gónadas con alteraciones en la espermatogénesis presentaron un aumento en el número de macrófagos, en los niveles de marcadores inflamatorios, en el grado de peroxidación lipídica y en la expresión de enzimas anti-oxidantes, una mayor desorganización y densidad de las fibras de colágeno de la pared tubular y una menor concentración de melatonina. Al evaluar el impacto de la suplementación oral diaria con 3 mg de melatonina se observó un aumento en los niveles testiculares de esta indolamina, una disminución en la incidencia de procesos inflamatorios y de estrés oxidativo a nivel gonadal, y una mejora en el aspecto de la pared tubular. Se realizaron también estudios funcionales a fin de establecer los efectos de la melatonina sobre las células peritubulares de la pared de los túbulos seminíferos. Para ello, se aislaron y caracterizaron cultivos primarios de células peritubulares provenientes de testículos de hámsteres dorados inmaduros. En dichos cultivos, la melatonina disminuyó la expresión de marcadores inflamatorios y aumentó la expresión del factor neurotrófico derivado de la glía (GDNF), de la enzima ciclooxigenasa 2 (COX2), de componentes de la matriz extracelular y mejoró su capacidad contráctil. En resumen, la melatonina ejercería acciones beneficiosas sobre el estado inflamatorio y oxidativo testicular a través, entre otros, de la modulación de la actividad de las células peritubulares.

Descripción: El objetivo de la presente investigación consistió en evaluar los efectos in vivo e in vitro de la inhibina A recombinante humana durante distintos estadios del desarrollo folicular. En particular se evaluó el efecto de esta glicoproteína sobre la proliferación de células de la granulosa en cultivo, sobre la apoptosis y la expresión de proteínas pro y anti apoptóticas y sobre la esteroidogénesis ovárica en ratas prepúeberes tratadas con DES o con PMSG. Los resultados indican que la inhibina A es producida in vitro por las células de la granulosa en cultivo obtenidas de ovarios de ratas estimuladas con DES y que su producción es estingulada por FSH, TGFβ y estradiol. También se observa que concentraciones fisiológicas de inhibina A disminuyen la proliferación celular inducida por estos tres factores. Además del efecto antiproliferatívo se observa, en este mismo modelo experimental, que la administración de inhibina A in vivo produce un retraso en el desarrollo folicular y un aumento de la apoptosis. Estos hallazgos fueron confirmados por ensayos in vitro donde se observa un aumento significativo de a fragmentación del ADN en folículos antrales tempranos incubados con inhibina A. Con respecto a la expresión de proteínas pro y anti apoptóticas la inhibina A produce tanto in vivo como in vitro un aumento en los niveles de Bax, mientras que los niveles de Bcl-2 permanecen constantes. Por otra parte la inhibina no tiene ningún efecto en la esteroidogénesis. En cuanto a los ensayos realizados con ovarios de ratas estimuladas con PMSG se observó que la inhibina A no tiene efecto alguno sobre la proliferación de células de la granulosa en cultivo. Tampoco se advirtió ningún efecto de esta glicoproteina sobre la fragmentación del ADN en cultivos de folículos preovulatorios. Por otra parte la administración in vivo de inhibina en estas ratas produce un retraso en el desarrollo folicular de folículos inmaduros, pero no tiene ningún efecto en el crecimiento de folículos preovulatorios. Asimismo, en todos los tipos foliculares estudiados se observa una disminución de la apoptosis. Como conclusión, estos resultados sugieren que la inhibina A posee una acción local en el ovario, siendo uno de los factores de acción autocrina o paracrina que regula el crecimiento folicular.

Descripción: La conservación de la carne refrigeradaha experimentado importantes avances con la introducción de métodos de envasado, materiales envolventes adecuados y la utilización de preservadores químicos para retardar el crecimiento bacteriano. En el presente trabajo se han analizado los efectos de la permeabilidad gaseosa de la película de envase y la temperatura de almacenamiento (0ºC y 4ºC) en la composición y desarrollo de la flora microbiana de carne bovina, determinándose los recuentos aeróbicos totales, anaeróbicos, Pseudomonas sp., Brochothrix thermosphacta, Lactobacillus sp., Enterobacteriaceae y levaduras. A través de dichas mediciones se calcularon los parámetros de crecimiento (velocidad y fase de latencia) , para cada uno de los microorganismos en las distintas condiciones de envase-temperatura seleccionadas. El desarrollo microbiano fue modelado por medio de ecuaciones matemáticas que permiten estimar la contaminación en función de los parámetros mencionados, bajo condiciones de almacenamiento que son muy comunes en la industria cárnica. Las modificaciones de la atmósfera gaseosa del interior de los envases al vacío se interpretaron a través de balances de materia planteados para cada uno de los gases en estudio (02, C02 y N2). Los resultadoso obtenidos, a través de los mismos, fueron comparados con las medidas experimentales por cromatografía gaseosa, hallándose una satisfactoria coincidencia entre ambos valores. El empleo de soluciones de sorbato de potasio permitió incrementar el tiempo de vida útil de la carne refrigerada. La acción inhibidora del preservador se manifestó por medio de la extensión de la fase de latencia y la disminución de la velocidad de crecimiento de los distintos microorganismos. La efectividad del sorbato se vio acentuada al descender la temperatura de almacenamiento y el pH de la carne. Así mismo, la coloración superficial de las muestras estuvo favorecida por el aumento de la concentración de la solución preservadora. El modo de acción del ácido sórbico fue interpretado a través de dos modelos, encontrándose que, para el caso de carne bovina, el aporte de la forma disociada del ácido, es despreciable. El crecimiento microbiano en carnes conservadas con sorbato de potasio y envasadas en películas de baja permeabilidad, también fue modelado por medio de ecuacicnes matemáticas similares a las descriptas en músculos no tratados. Los parámetros de crecimiento fueron descriptos a través de funciones lineales del ácido no disociado. Se realizaron medidas de los residuos de ácido producidos por las distintas soluciones empleadas, evaluándose, además, la incidencia del costo del sorbato sobre el precio de venta de la carne.

Descripción: Fil: Witt, Enrique Roberto. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Las micotoxinas son metabolitos secundarios producidos por hongos que afectan las cosechas impactando en las economías agrícolas mundiales así como la salud humana y animal. El objetivo es buscar productos naturales que puedan inhibir el crecimiento de hongos toxicogénicos y /o la acumulación de micotoxinas con el fin de reemplazar sustancias sintéticas, en el almacenamiento de cereales y oleaginosas y durante la elaboración de alimentos. En particular, este trabajo se centra en el uso de cierto tipo de flavonoides, flavanonas, que se han obtenido como subproductos de la industria citrícola con bajo costo y que presentarían actividad antifúngica y antitóxica. Los estudios realizados sobre distintas cepas de hongos pertenecientes a los géneros Aspergillus, Fusarium y Penicillium mostraron que estos compuestos presentaron actividad antifúngica, dependiendo la intensidad de la misma del tipo de hongo y del compuesto utilizado. La capacidad de inhibir la producción de las micotoxinas patulina, zearalenona, deoxinivalenol, aflatoxinas y fumonisinas también fue evaluada in vitro y en matrices alimenticias, llegando a inhibición completa de la acumulación de estas micotoxinas para ciertas concentraciones de flavanonas y sus mezclas. Esta posibilidad de utilizar residuos citrícolas de la industria podría mejorar la ecuación económica de la cadena de cítricos hacia el diseño de un producto innovador y mostraría un beneficio adicional ya que el impacto de los efluentes generados por las industrias cítricas podría verse disminuido.

Descripción: La incidencia de cáncer de mama está aumentando a nivel mundial y la exposición a disruptores endocrinos ha cobrado importancia, como un potencial factor de riesgo. El Hexaclorobenceno (HCB) fue utilizado como fungicida y, a pesar de estar prohibido, sigue liberándose al ambiente como un subproducto de la manufactura de compuestos organoclorados. Actúa como un disruptor endócrino y ha sido clasificado como probable carcinógeno humano. Previamente observamos que genera lesiones mamarias preneoplásicas y promoción de tumores mamarios en ratas. Asimismo, induce migración e invasión en células de carcinoma mamario humano MDA-MB-231, así como metástasis en diferentes modelos animales de cáncer de mama. El HCB se une débilmente al receptor de hidrocarburos aromáticos (AhR) y ejerce parte de sus acciones a través del mismo. Existe una interacción entre las vías de señalización del AhR y del factor de crecimiento transformante-β1 (TGF-β1), teniendo blancos moleculares comunes y mecanismos de regulación recíproca. El TGF-β1 participa en diferentes etapas de la morfogénesis mamaria y del desarrollo del cáncer de mama. El objetivo de este trabajo fue evaluar si las vías de señalización del TGF-β1 y del AhR están involucradas en el mecanismo de acción del HCB, tanto en carcinogénesis mamaria como en la glándula mamaria normal. En primer lugar, estudiamos si la migración e invasión inducidas por el HCB, en las células MDA-MB-231, dependen de la interrelación TGF-β1/AhR. Observamos que el tóxico modula la interacción entre ambas vías: la unión del HCB al AhR resulta en un incremento de los niveles de ARNm del TGF-β1, mientras que la activación de la vía del TGF-β1 por el tóxico reduce el contenido de ARNm del AhR. Además, estimula las vías de señalización del TGF-β1 canónicas (Smad3) y no canónicas (p38 y JNK). Finalmente, la inducción de estas vías de señalización del TGF-β1 son requeridas para que el HCB incremente la migración y la invasión. Por otro lado, se evaluó el efecto del HCB sobre el ciclo celular, la migración y las vías de señalización del AhR y del TGF-β1, empleando células epiteliales (NMuMG) y fibroblastos (FGM AhR+/+ y AhR-/-) de glándula mamaria de ratón. La exposición a una dosis baja de HCB (0,05 μM) induce la migración de las células NMuMG, y activa el camino AhR/c-Src y las vías del TGF-β1. Sin embargo, a dosis alta (5 μM), el HCB reduce la migración, promueve el arresto del ciclo celular y estimula el camino nuclear del AhR. Los fibroblastos AhR+/+ expuestos al HCB (5 μM) adquirieron un fenotipo semejante al de los fibroblastos asociados a cáncer, ya que expresan α-SMA y exhiben una reducción en los niveles del receptor del TGF-β1 de tipo II. Adicionalmente, el medio condicionado de estos fibroblastos incrementa la migración de las células NMuMG. Finalmente, analizamos si el HCB produce alteraciones en la glándula mamaria de ratones (C57BL/6N) AhR+/+ y AhR-/-. Los resultados sugieren que el tóxico enlentece el desarrollo mamario de los ratones AhR+/+, generando la prevalencia de estructuras indiferenciadas como las yemas terminales. Asimismo, induce hiperplasia ductal, y aumenta la proliferación y los niveles del receptor de estrógenos-α en las células epiteliales. Los ratones AhR-/- exhibieron hiperplasia ductal y un incremento en el crecimiento mamario en ausencia del tratamiento con HCB, revelando la importancia del AhR en el desarrollo mamario. En conclusión, nuestros hallazgos demuestran que concentraciones ambientales de HCB modulan las vías de señalización del AhR y del TGF-β1. Esto podría contribuir a las alteraciones observadas en la morfogénesis mamaria normal y a exacerbar un fenotipo promigratorio, tanto en las células epiteliales normales como en las células neoplásicas, generando un mayor grado de malignidad. Asimismo, nuestros resultados apoyan la hipótesis de que la presencia y bioacumulación de disruptores endocrinos como el HCB en tejidos con alto contenido graso y en períodos críticos, hacen de este compuesto un factor de riesgo para el desarrollo tumoral mamario.

Descripción: Fil: Taira, María Cristina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Puricelli, Lydia Inés. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Se estudió el efecto de los mastocitos (MC), la heparina y heparinas sin actividadanticoagulante sobre el desarrollo tumoral. Empleando el fluorocromo tris (2,2’-bipiridina)rutenio (II), que se une a los grupos sulfatos de la heparina, se realizó la identificacióncitoquímica de MC de cavidad peritoneal y se cuantificó comparativamente el contenido deheparina de los gránulos de MC de ratones portadores de tumor (MCP) y de ratones normales (MCN) mediante análisis de imagen. Los MCN que poseen el doble de heparina que los MCPinhibieron la proliferación in vitro y la incidencia tumoral in vivo de un adenocarcinomamamario murino de moderada capacidad metastásica en pulmón (M3). Observamos que las células M3 poseen receptores para heparina de alta afinidad, a los quepueden también unirse una heparina parcialmente N-desulfatada N-Acetilada (N-des N-Ac). Ambas heparinas inhibieron la proliferación de las células tumorales in vitro e incrementaron laadhesión celular mientras que otras heparinas modificadas (parcialmente O-desulfatada (Odes), N-desulfatada (N-des), O/N-desulfatada N-Acetilada (O/N-des N-Ac)) no se unen a losreceptores y no tuvieron efecto sobre la proliferación y la adhesión. Estos resultados muestranque la unión de la heparina a los receptores se correlaciona con el efecto antiproliferativo y elaumento de la adhesión celular. Solamente la heparina inhibió la formación de metástasisexperimentales en pulmón, siendo el efecto revertido por un inhibidor selectivo del activadorde plasminógeno de tipo uroquinasa (uPA) (el compuesto B623). Para determinar elmecanismo por el cual la heparina posee efecto antimetastásico se estudió: a) el efectofibrinolítico de las heparinas mediado por uPA; b) la actividad procoagulante de ratonesportadores de tumor y el efecto de las heparinas en la coagulación y c) la producción deactividad heparinasa por parte de las células tumorales M3 y la susceptibilidad de las heparinasa ser degradadas por esta enzima. El análisis global de los resultados sugiere que el efectoantimetastásico se asocia a la actividad anticoagulante.

Descripción: Fil: Viggiano, Juan Marcelo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Numerosos estudios epidemiológicos han postulado que concentraciones plasmáticas elevadasde homocisteína (Hcy) constituyen un factor de riesgo independiente para la enfermedadvascular oclusiva, a nivel arterial y venoso. Aún no están esclarecidos los mecanismosfisiopatológicos involucrados en esta asociación. Los objetivos principales de esta tesis fueron: - Evaluar los niveles plasmáticos de Hcy en diversos grupos poblacionales, con unmétodo analítico accesible y confiable. - Analizar determinantes genéticos y adquiridos de la homocisteinemia. - Determinar los valores de corte para homocisteinemia. - Estudiar la asociación de la variante termolábil de la MTHFR con la trombosis. - Evaluar la relación entre hiperhomocisteinemia y componentes del sistema hemostático. - Postular mecanismos responsables de la acción trombogénica de la Hcy. Para la determinación de la homocisteinemia en los estudios epidemiológicos realizados, seutilizó una técnica de ELISA, cuya validación arrojó resultados precisos y equivalentes a los delmétodo de referencia (HPLC). Las muestras más apropiadas para ser analizadas fueron losplasmas en EDTA o los sueros obtenidos con gel separador, comprobándose que loscongelamientos y descongelamientos sucesivos no afectan los resultados. Los valores dehomocisteinemia de la población de Buenos Aires resultaron comprendidos entre 5,0-19,2 μM (3a 59 años de edad); 1,2-11,6 μM (neonatos) y 6,0-30 μM (>65 años). Estos resultados no debenconsiderarse como valores de referencia; por el contrario, en el análisis de valores de corte sedeterminó que el nivel plasmático óptimo de Hcy debe ser S«12 μM. Se observó una prevalencia elevada de hiperhomocisteinemia (HHcy), sugiriendo queaproximadamente el 50 % de nuestra población estaría expuesta a un mayor riesgo deenfermedad vascular. Los niveles de Hcy se incrementaron con la edad de los individuos yresultaron mayores en los hombres que en las mujeres. Se demostró que existe una estrecharelación entre la homocisteinemia y los niveles de ácido fólico, vitamina B12 y creatinina. Enparticular, se observó que la restricción dietaria de folatos aumenta significativamente los nivelesde Hcy, mientras que una dieta que aporte 400 μg/día de ácido fólico disminuye notablemente lahomocisteinemia. Entre los factores genéticos que podrían afectar la concentración de Hcy se estudió elpolimorfismo C677T de la metilentetrahidrofolato reductasa (MTHFR). Se observó que sólo lacondición de homocigosis de la mutación se asociaría a niveles aumentados de Hcy. La HHcy resultó factor de riesgo independiente para la trombosis venosa, mientras que lapresencia T677T/MTHFR no se asociaría a esta patología. En individuos hiperhomocisteinémicos mayores de 65 años se detectaron nivelessignificativamente aumentados de factor von Willebrand y de dermatán sulfato, probablementeasociados a una disfunción endotelial. Componentes del sistema hemostático tales como las plaquetas, los factores del sistema decoagulación y la fibrinolisis no mostraron alteraciones en presencia de altas concentraciones de Hcy, cuando fueron evaluados mediante pruebas del laboratorio de hemostasia. Sin embargo, enlas experiencias de fibrinoformación se evidenciaron efectos importantes de la Hcy sobre laestructura de la red de fibrina. Se obtuvieron redes compactas, gruesas y muy ramificadas, quegenerarían coágulos más resistentes a la fibrinolisis. En estos resultados estaría involucrado elgrupo tiol de la Hcy y uno de los componentes afectados en la fibrinoformación sería el factor XIII. Los hallazgos enunciados constituyen un nuevo aporte para el esclarecimiento de losmecanismos implicados en el efecto trombogénico de la hiperhomocisteinemia.

Descripción: Fil: Vladusic, Esteban Arturo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Stein, Paula. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Ladenheim, Ruth Graciela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Como los disacáridos acetilados empleados por Deferrari y Cadenas tenian unión glicosídica l-4, lo cual determinaba que enla mitad reductora que experimentaba la reacción de migración deacetilos se eliminase la posibilidad de la formación de una N-acetilaldobiosilamina con ciclo furanósico y además, la carenciadel acetilo del carbono 4 eliminaba una participación que podíapensarse era importante en base a las experiencias realizadas por Gros, Ondetti, Sproviero, Deulofeu y Deferrari con la l,2,3,4,6-penta- O-benzoil-D-glucosa y la 2,3,4,6-tetra-0-benzoil-D-glucosamarcadas con benzoilos carbonilo C^14 en distintas posiciones, yen las cuales se establecía en 0,8l+-0,02 la participación delbenzoílo del carbono 4 en la formación de N,N'-dibenzoil-D-glucosilidéndiamina,hemos considerado interesante extender el estudiode la reacción del amoniaco a los derivados acetilados con uniónglicosídica 1-6, tales como la melibiosa y la genciobiosa. El interés del estudio de la reacción del amoniaco sobre losdisacáridos acetilados con unión glicosídica 1-6 residía en quese podía determinar el efecto que en el curso de la misma teníala presencia de un acetilo en el carbono 4 de la mitad reductoradel disacárido que experimentaba la reacción de migración de acetilos,el cual por extensión de los establecido por Deulofeu ycolaboradores podria tener la misma participación en la formaciónde N-acetil aldosilaminas que el benzoílo en el carbono 4 en elcaso de la N,N'-dibenzoil glucosilidéndiamina. Además,el hecho de que por eliminación del acetilo del carbono 4 quedara libre un hidroxilo en esa posición, posibilitaría laformación de N-acetil aldobiosilaminas con un ciclo furanósico asemejanza de lo que ocurría con la penta-O-acetil-al-D-glucosa,la penta-O-acetil-β-D-glucosa y el hexa-O-acetil-D-glicero-D-guloheptononitrilo, los cuales tratados con amoníaco producían la N-acetil glucofuranosilamina. También podia esperarse un aumento en el rendimiento de la N,N'-diacetil aldobiosilaminas por el hecho de sustituirse la pequeñaparticipación del acetilo del carbono 6 por la importanteparticipación del acetilo del carbono 4, teniendo en cuenta queen la formación de N,N'-dibenzoil-D-glucosilidéndiamina la contribucióndel grupo 6-0-benzoilo es 0,3 moles mientras que 1a del 4-O-benzoilo es de 0,8 moles. Asimismo se podía conocer la influenciaque en el curso de la reacción tendría un grupo voluminosocomo es el resto no reductor unido al carbono 6 de la parte reductoradel disacárido. Desde el punto de vista preparativo se podia pensar en obtenerlas N,N'-diacetil aldobiosilidéndiaminas y las N-acetil aldobiosilaminasde los disacáridos con unión glicosídica 1-6. La preparación de la octa-O-acetil melibiosa necesaria paraestos experimentos se hizo por acetilación del azúcar libre siguiendola técnica de Scheibler y Mittelmeier. La reacción de la octa-O-acetil melibiosa con amoníaco la efectuamosen distintos medios, aunque en las mismas condiciones operativas. De 1a reacción de la octa-O-acetil melibiosa con amoníacoacuoso al 25% obtuvimos un jarabe del que separamos porcromatografía en columna de carbón y con rendimiento de 7,7%la forma α de la melibiosa, análoga a la descripta por Fletchery Diehl, y N-acetil melibiosilamina con rendimiento de 22,5%. La amonólisis de la octa-O-acetil melibiosa con amoníacoacuoso al 33% dio un jarabe del cual por acetilación con anhídridoacético y piridina aislamos octa-O-acetil melibiosa idénticaa la descripta anteriormente con un rendimiento de 1,6% yun jarabe que cromatografiado en columna de talco celite dio con 5,8 % de rendimiento la octa-O-acetil-N,N'-diacetil melibiosi-lidéndiamina. Del jarabe obtenido en la reacción de la octa-O-acetil melibiosacon amoníaco metanólico 16% obtuvimos por acetilación 13,3%de octa-O-acetil melibiosa y 5% de octa-O-acetil-N,N'-diacetilmelibiosilidéndiamina y por cromatografía en columna de celulosaaislamos con 4,5% de rendimiento la forma α de 1a melibiosay N-acetil melibosilamina con un rendimiento de 0,27%. La acetilación de la N-acetil melibiosilamina con anhídridoacético y piridina dio la hepta-O-acetil-N,acetil melibiosilamina. La octa-O-acetil genciobiosa la preparamos condensando deacuerdo a la técnica de Reynolds y Evans la 1-α-bromo-2,3,4,6-tetra- O-acetil-D-glucopiranosa con la l,2,3,4-tetra-0-acetil-D-glucosa. La amonólisis de la octa-O-acetil genciobiosa con amoníacoacuoso al 25% dio un jarabe del cual pudimos aislar por cromatografía en carbón 1a N,N'-diacetil genciobiosilidéndiaminacon un rendimiento del 8,5% y por cromatografía en celulosa 29% de la N-acetil genciobiosilamina en forma de un productoamorfo e higroscópico. La acetilación de la N,N'-diacetil genciobiosilidéndiaminacon anhídrido acético y piridina dio la octa-O-acetil-N,N'diacetilgenciobiosilidéndiamina. Los resultados obtenidos en la reacción del amoníaco con losdisacáridos acetilados de unión glicosídica 1-6 estudiados pornosotros están estrechamente vinculados al análisis del comportamientode la penta-O-acetil-β-D-glucosa con dicho reactivo,por cuanto la melibiosa y la genciobiosa son 6-O-glicopiranosil-D-glucopiranosas, es decir, que la parte que experimenta la reacciónde migración de acetilos en dichos octa-O-acetil disacáridoses una l,2,3,4-tetra-O-acetil-glucosa sustituída en el carbono 6por un resto 2,3,4,6-tetra-O-acetil glucopiranosilo. Cabe destacar que en los casos estudiados, la N,N'-diacetilaldobiosilidándiamina se produce con un rendimiento menor queen el de la amonólisis en medio acuoso de la octa-O-acetil maltosa;que las N-acetil aldobiosilaminas se producen con un rendimientomucho mayor que el obtenido con los disacáridos acetiladosde unión glicosidica l—4, y que el rendimiento de azúcareslibres fue menor que en el caso de los acetatos de maltosa,lactosa y celobiosa. La formación de N,N'-diacetil melibiosilidéndiamina en cantidadde 5%en medio metanólico es del mismo orden que en elcaso de los disacáridos con unión glicosidica l-4 y podria considerarsecomo un resultado similar al obtenido con la penta-O-acetil-β-D-glucosa que por tratamiento con amoniaco metanólicoda N,N'-diacetil glucosilidéndiamina con solo 8% de rendimientoademás de 12% de la N-acetil-D-glucopiranosilamina. En la amonólisis en medio acuoso los rendimientos de N,N'-diacetilmelibiosilidéndiamina(5,8%)y N,N'-diacetil genciobiosilidéndiamina (8,5%) son del mismo orden entre si, pero muchomenores que el obtenido en el caso de la octa-O-acetil maltosaque en esas condiciones produjo 27% de N,N‘-diacetil maltosilidéndiamina. El rendimiento de 22,5% de N-acetil melibiosilamina y de 29%de N-acetil genciobiosilamina obtendios en nuestras experienciascon amoníaco acuoso comparado con el obtendio en la reaccióndel amoníaco acuoso con la penta-O-acetil-β-D-glucosa que da 41% de N-acetil glucofuranosilamina podría explicarse si se consideraque en la penta-O-acetil-β-D-glucosa los 4 acetilosubicados en los carbonos 2,3,4 y 6 tienen posibilidades de migrar,mientras que en la octavo-acetil melibiosa y en la octa-O-acetil genciobiosa solamente los 3 acetilos ubicados en loscarbonos 2, 3 y 4 podrian migrar al carbono 1. Es decir, que enrelación a 1a penta-O-acetil glucosa faltaria solo la contribucióndel acetilo del carbono 6, la cual podria ser poco importantesi se postula que éste contribuiria en una forma similara la del benzoilo ubicado en la misma posición en el caso de lapenta-O-benzoil-β-D-glucopiranosa.Ello hace pensar que no podríaser ésta la única razón por la cual en la amonólisis dela octa-O-acetil melibiosa y la octa-O-acetil genciobiosa elrendimiento de N-acetil aldobiosilamina es prácticamente la mitaddel obtenido con la β-penta-0-acetil glucosa; esta diferenciadeberia ser atribuida entonces al factor estérico debido ala presencia del grupo voluminoso 2,3,4 ,6-tetra-0-acetil-D-glucopiranosilounido al carbono 6 de la parte reductora de estosdisacáridos. Por otra parte el hecho que se haya obtenido unrendimiento elevado de N-acetil melibiosilamina y de N-acetilgenciobiosilamina en relación a las N,N'-diacetil aldobiosilidéndimainasseria explicable considerando que el resto reductorque sufre la reacción de transposición de acilos es una unidadde glucosa que presenta la posibilidad de formar un ciclo l-4,que como ya hemos señalado es de fácil formación, lo que haríafactible que la reacción pudiera producirse en ese sentido. A pesar que aún no hemos podido demostrar la estructura delciclo de la N-acetil melibiosilamina y la N-acetil genciobiosilamina,la formación de un ciclo piranósico, aunque posible, nosparece menos probable, en razón del comportamiento de la penta-0-acetil-β-D-glucosa, la cual da N-acetil glucofuranosilamina yde los bajos rendimientos(menos del 1%) de N-acetil aldobiosilaminascon ciclos piranósicos obtenidos en la amonólisis de losdisacáridos acetilados con unión glicosídica l-4, en los cualessólo podía formarse al ciclo piranósico por estar la posición 4comprometida en la unión glicosídica. En función de que los rendimientos de N,N'-diacetil aldobiosilidéndiaminas y N-acetil aldobiosilaminas son cercanos a losque podian esperarse si solamente contribuyera la mitad reductora,nos parece que fundamentalemte el mecanismo de migraciónde acetilos deberia verificarse en dicha mitad, pero no podemosdescartar la posibilidad de una contribución de los acetilos ubicadosen la otra parte de la molécula. El estudio de un modelo molecular del producto de adicióndel amoníacoa la octa-O-acetil-genciobiosa Consulte el resumen completo en el documento.

Descripción: Se extendió el estudio de 1a acción del amoníaco a losdisacáridoe benzoilados, para compararlos resultados obtenidoscon los de las amonólisis de los monosacáridosacilados y los disacáridos acetilados. Se ha hecho una revisión del estado actual de las reaccionesy métodos de benzoilación de los monosacáridos ydisacáridos. Se hizo una revisión de la reacción de amonólisis delos derivados acilados de los monosacáridos y disacáridosque conduce a 1a formación de las N,N'-diacil-aldosilidendiaminasy a las N-acil-aldosilaminas. Se estudió la reacción de benzoilación de la celobiosa,lactosa y maltosa y se efectuó 1a amonólisis de la octa-O-benzoíl-celobiosa, octa-O-benzoíl-lactosa y hepta-O-benzoílmaltosa. Se encontró que la reacción de amonólisis era de caráctergeneral también para los disacáridos benzoilados estudiados,obteniendose ademásde las N,N'-dibenzoíl-aldobiosilidendiaminasy N-benzoíl-aldobiosilaminas esperados,los mono-O-benzoíl-derivados. En el caso de la maltosa,en la cual se realizó 1a amonólisis de una hepta-O-belzoílmaltosa,no se obtuvieron derivados N-acilados. Las conclusiones anteriores se basan en los siguienteshechos cuyo detalle se encuentra en la parte teórica yexperimetal de este trabajo: a.) De la celobiosa se preparó la octa-O-benzoíl-celobiosay por la amonólisis de esta última se obtuvieron lossiguientes productos: Celobiosa de pf. 232-234° con 48,8%de rendimiento; mono-O-benzoíl-celobiosa de [α]D +82° (alas 24 horas, en etanol) con 6,5% de rendimiento; N-benzoíl-celobiosilamina de [α]D +33,8 (piridina) con 0,9% derendimiento; N,N'-dibenzoíl-celobiosilidendiamina de pf. 148-150° y [α]D -33,2 (agua) con 7,9% de rendimiento. Se prepararon los siguientes derivados: una octa-O-benzoíl-celobiosa isómera de la obtenida por benzoilacióndirecta de la celobiosa; la hepta-O-acetil-N-benzoíl-celobiosilamina yla octa-O-acetil-N,N'-dibenzoíl-celobiosilidendiamina. Por benzoilación de la mezcla de amonólisiscruda se obtuvo una penta-O-benzoíl-N-benzoílcelobiosilaminacuya benzoilación dió lugar a 1a hepta-O-benzoíl- N-benzoíl-celobiosilamina. b.) De la lactosa se preparó la octa-O-benzoíl-lactosa ypor amonólisis de esta se obtuvo la N,N'-dibenzoíl-lactosilidendiaminade pf. 196-198° y [α]D -20,9° (agua) con 9,6% de rendimiento; lactosa de pf. 220-222° con 28,3% derendimiento y una mono-O-benzoíl-lactosa. Se prepararonla octa-O-acetil-N,N'-dibenzoíl-lactosilidendiamina y porbenzoilación de la mezcla de amonólisis cruda y separaciónpor cromatografía en columna, se obtuvo la hepta-O-benzoíl- N-benzoíl-lactosilamina. c.) De la maltosa se prepararon la octa-O-benzoíl-maltosay una hepta-O-benzoíl-maltosa. Por amonólisie de 1a hepta-O-benzoíl-maltosa obtuvimos maltosa de pf.129-130°con 18,5% de rendimiento, mono-O-benzoíl-maltosade pf. 140-145° de [α]D +117,7 (16 horas, agua) con 44%de rendimiento y una di-O-benzoíl-maltosa de pf. 90-92°y [α]D +92,1(etanol) con 0,4 % de rendimiento. Se preparóla hepta-O-acetíl-O-benzoíl-maltosa, por acetilaciónde la mono-O-benzoíl-maltosa. La obtención de derivados O-benzoilados se atribuyea1 efecto estérico debido a la influencia mutua de lasdos mitades del disacárido y a la menor polaricazión delcarbonilo del grupo benzoilo debido al efectormesoméricoejercido por el núcleo bencénico, en comparación con ladel grupo acetilo, lo cual se traduce en una mayor estabilidaddel grupo benzoilo frente a la reacción de amonólisis. Comparativamente la amonólisis del benzoílo es máslenta que la del acetilo y la migración del pirmero alcarbono 1 podria ser mayor, lo cual se traduciria en unaumento del rendimiento de las N,N'-dibenzoíl-a1dobiosilidendiaminas. El rendimiento del azúcar libre es menor que en elcaso de los disacáridos acetilados y en su lugar obtuvimoslos derivados mono-O-benzoilados de 1a celobiosa,lactosa y maltosa.

Descripción: La reacción de Wohl, utilizada como método de degradación de monosacaridos,consiste en tratar con amoniaco los nitrilos acilados de los ácidosaldónicos. Se obtienen asi los 1,1-bis(amido)-1-deoxi-polioles conun átomo de carbono menos, que por hidrólisis ácida dan los correspondientesmonosacáridos. Los mismos 1,1-bis(amido)-l-deoxi-polioles resultan de la amonólisisde monosacáridos total o parcialmente acilados, de estructuras piranósicas,furanósicas_o aldehídicas. Así por ejemplo cuandola l,2,3,4,6-penta- O-benzoíl-D-glucosa, la 1,2,3,5,6-penta-O-benzoíl-D—glucosa o la 2,3,4,5,6-penta-O-benzoíl-D-glucosa se tratan con amoníaco en metanol,se obtiene el 1,1-bis(benzamido)-1-deoxi-D-glucitol. Para explicar la formación de los derivados bis(amido) de los monosacáridos, Isbell y Frush (J.Am.Chem.Soc., 71, 1579 (1949) propusieronun mecanismo basado en las transposiciones intramoleculares de los gruposacilos. Si bien no existen dudas acerca de la hipótesis básica de dichosautores, ya que la intramolecularidad ha sido demostrada experimentalmente, Su mecanismono aclara todos los detalles de 1a reacción. Con el objeto de disponer de una mayor información sobre el tema, Gros, Ondetti, Sproviero, Deulofeu y Deferrari (J.Org.Chem., 27, 924 (1962) determinaron en que extensión participa cada grupo benzoílo de la 1,2,3,4,6-penta-O-benzoil-D-glucosa en las transposiciones intramolecularesque tienen lugar durante su amonólisis. Encontraron que las contribucionesde los benzoilos de C-1, C-2, C-3, C-4 y C-6 a la formación del 1,1-bis(benzamido)-1-deoxi-D-glucitol son respectivamente O; 0,12; 0,76; 0,82 y 0,31 moles. Llamó la atención el pequeño valor correspondiente al grupo 2-O-benzoílo,cuya proximidad al carbono 1 hacía pensar que seria uno de losque más fácilmente podría transponerse para formar uno de los grupos benzamidosdel producto de amonólisis. Este resultado indujo a estudiar, en la primera parte de esta tesis,las contribuciones de los grupos 2-O-benzoílos de las penta-O-benzoíl-D-glucosasde estructuras furanósica y aldehídica, con el objeto de determinaren que medida influiria en la misma la modificación de la estructuracíclica hemiacetálica y la presencia de un grupo aldehido libre en elmonosacárido benzoilado. Se recurrió para este estudio al mismo método experimental utilizadopor Gros et alia, que consiste en la marcación con carbono-14 del grupobenzoílo cuya contribución se desea determinar, habiéndose sintetizadolas siguientes sustancias: a) 3,5,6-tri-O-benzoíl-(carbonilo 14C)-D-glucosa. b) 2-0-benzoíl-(carbonilo 14C)-3,5,6-tri-O-benzoíl-D-glucosa. c) 1-O-benzoíl-(carbonilo 14C)-2,3,5,6-tetra-O-benzoíl-D-glucosa. d) 2-O-benzoíl-(carbonilo 14C)-1,3,5,6,tetra-O-benzoíl-D-glucosa. e) 2-0-benzoíl-(carbonilo 14C)-3,4,5,6-tetra-O-benzoíl-D-glucosa. f) 1,2-di-O-benzoíl-(carbonilo 14C)-3,5,6-tri-O-benzoíl-D-glucosa. g) 3,5,6-tri-O-benzoíl-(carbonilo 14C)-1,2-di-O-benzoíl-D-glucosa. h) 3,4,5,6-tetrapO-benzoíl-(carbonilo 14C)—2-O-benzoíl-D—glucosa. i) 3,5,6-tri-0-benzoíl-(carbonilo 14C)—1,2-O-isopropiliden-D-glucosa. j) 3,4,5,6-tetra-O—benzoíl—(carbonilo14C)-1,1-bis(etiltio)-l-deoxi-D-glucitol. k) 2-0-benzoíl-(carbonilo 14C)-3,4,5,6-tetra-O-benzoíl-1,1-bis(etiltio)-1—deoxi-D—glucitol. l) 2-0-benzoíl-3,4,5,6-tetra-O-benzoíl-(carbonilo 14C)—1,1-bis(etiltio-1-deoxi-D-glucitol. m) 2-O-benzoíl-(carbonilo 14C)-3,4,5,6-tetra-O-benzoíl-l-sulfonatode sodio-D-glucitol. n) 2-O-benzoíl-3,4,5,6-tetra-O-benzoíl-(carbonilo 14C)-1-sulfonatode sodio-D-glucitol. Las sustancias b, c, d, e, f, g, h, m y n fueron amonolizadas conmetanol amoniacal, habiéndose aislado los 1,1-bis(benzamido)-1-deoxi-D—glucitoles radiactivos. En base a las medidas de radiactividad se calcularonlas contribuciones de los grupos l y 2-O-benzoílos de la 1,2,3,5, 6-penta-0-benzoíl-D-glucosa y de los grupos 2-O-benzoílos de la 2,3,5,6 tetra- O-benzoíl-D-glucosa, de 1a 2,3,4,5,6-penta-0-benzoíl-D—glucosa yde su derivado bisulfítico. Se encontró que el grupo 1-O-benzoílo de la primera sustancia nocontribuye a la formación del derivado 1,1-bis(benzamido), pasando totalmenteal medio. El valor de la contribución del grupo 2-O-benzoílo de la 1,2,3,5,6-penta-O-benzoíl-D—glucosa (O,lO-0,13 moles) resultó del mismo orden queel correspondiente al benzoílo de la misma posición en la l,2,3,4,6-penta -O-benzoíl-D-glucosa, encontrado por Gros et alia, indicando que noexiste una influencia debida a la naturaleza del cíclo hemiacetálico. Esta analogía en el comportamiento de los derivados benzoilados piranósico y furanósico de la D-glucosa resultó confirmada al obtenerse iguales valores para las contribuciones de los grupos 2-O-benzoilos de la 1,2,3,5,6-Penta-O-benzoíl-D-glucosa y de 1a 2,3,5,6-tetra-O—benzoíl-D—glucosa, hecho similar al encontrado en la serie de los derivados benzoiladosde la D-glucopiranosa. En el caso de los derivados benzoilados de la D-glucosa sin cíclohemiacetálico (2,3,4,5,6-penta-O-benzoíl-D-glucosa y su derivado bisulfítico),la contribución del grupo 2-O-benzoílo a la formación del l,l-bis(benzamido)-1-deoxi-D-glucitol, es del orden de 0,80 moles por mol de sustancia. Esta marcada diferencia entre los valores de las contribuciones delos grupos 2-0-benzoílos de las penta-O-benzoíl-D-glucosas de estructurasciclicas hemiacetálicas y de cadena abierta de átomos de carbono con ungrupo aldehido, sólo puede explicarse admitiendo que para ambos tiposde sustancias, las primeras etapas de la reacción son diferentes. De otraforma se llegaría a una etapa intermedia que sería independiente de laestructura del compuesto amonolizado (con un benzoílo más en posición 4o 5 en el caso de los derivados de cadena abierta). Las escasas contribuciones de los grupos 2-O-benzoílos de las penta -O-benzoíl—D-glucosas que poseen-ciclos hemiacetálicos son interpretadascomo debidas a una comparativamente menor velocidad de amonólisis de dichosgrupos. Se llega a esta conclusión comparando los rendimientos obtenidospor amonólisis de derivados parcialmente benzoilados. En efecto,la 3,5,6-tri-O-benzoíl-D-glucosa da un rendimiento en 1,1-bis(benzamido)-l-deoxi-D—glucitol (16%) sensiblemente menor al obtenido a partir de la 2,3,5,6-tetra-O-benzoíl-D-glucosa (62%). Si la baja contribución del benzoílo en carbono 2 de la última sustanciase debiera a que la mayor parte del mismo es amonolizado pasandoal medio, no se podría obtener el alto rendimiento indicado. En lo que respecta a los valores de los rendimientos de las reaccionesde amonólisis de monosacáridos benzoilados, se estudió la posible influenciade algunos subproductos y productos laterales sobre las cantidadesde 1,1-bis(benzamido)-l-deoxi-D—glucitol aisladas. Se comprobó quela presencia de amidas, D-glucosa y D-glucosilamina no influyen en la solubilidad del derivado bis(benzamido) en el medio del que se aisla. Se efectuó además la determinación del rendimiento en 1,1-bis(benzamido) -1—deoxi-D—g1ucitol obtenido por amonólisis de la l,2,3,4,6-penta-o-benzoil-D-qlucosa, por el método de dilución isotópica, habiéndose encontrado un valor (24,5-25,7%) sólo escasamente superior al obtenido poraislamiento. Cuando 1a amonólisis de los derivados benzoilados de los monosacáridosse efectúa en propanol-2 amoniacal se obtienen productos que conservanun grupo benzoílo esterificando al hidroxilo primario. (Gros, Lezerovich, Recondo, Deulofeu y Deferrari: Anal.Asoc.Quím.Arg., 50, 185 (1962). En esas condiciones, a partir de la 1,2,3,4,6-penta-O-benzoíl-D-glucosa resulta el 1,1-bis(benzamido)-l-deoxi-6-O—benzoíl-D-g1ucitol. En 1a segunda parte de esta tesis se extiende esa reacción a loscasos de la 1,2,3,5,6-penta-O-benzoíl-D-glucosa, de la 2,3,4,5,6-penta-O-benzoíl-D-glucosa y de su derivado bisulfítico, que dan también 1,1-bis (benzamido)-1-deoxi-6-O-benzoíl-D-glucitol por anonólisis en propanol-2amoniacal. La 1,2,3,4,6-penta-O-benzoíl-D—galactosa da 1,1-bis (benzamido)-1-deoxi-6-O-benzoíl-D-galactitol. Se ha realizado un estudio para comprobar si el grupo 6-O-benzoílodel 1,1-bis(benzamido)-1-deoxi-6-O-benzoíl-D-glucitol es el mismo 6-0-benzoílooriginalmente presente en la 1,2,3,4,6-penta-O—benzoí1-D-glucosa,o si proviene total o parcialmente de transposiciones de benzoílosde otras posiciones hacia el hidroxilo primario. Para esto fueron preparadasy amonolizadas en propanol-2 amoniacal las siguientes sustancias: a) 1,2,3,4-tetra-O-benzoíl-6-O-benzoíl-(carbonilo 14C)-D—g1ucosa. b) 1,2,3,6-tetra-O-benzoíl-4-O-benzoíl-(carbonilo 14C)-D-g1ucosa. c) 1,2,3-tri-O-benzoíl-(carbonilo 14C)-4,6-di-O-benzoíl-D-glucosa. Los 1,1-bis(benzamido)-1-deoxi-6-O-benzoíl-D-glucitoles radiactivos obtenidos fueron a su vez amonolizados en metanol amoniacal, resultandolos 1,1-bis(benzamido)-1-deoxi-D—glucitoles correspondientes. La comparación de las medidas de radiactividad permitió establecerque en su mayor parte (0,91 moles por mol de sustancia) el grupo 6-O-benzoílodel 1,1-bis(benzamido)-1-deoxi-6-O-benzoíl-D-glucitol provienedel 6-0-benzoílo de la 1,2,3,4,6-penta-0—benzoíl-D-glucosa. E1 restotiene su origen en la transposición parcial del grupo 4-O-benzoílo haciael hidroxilo del carbono 6; habiéndose comprobadoque no existentransposiciones de los grupos l, 2 y 3-O-benzoílos hacia dicha posición. En forma análoga se ha comprobado que se produce una transposiciónparcial (0,11 moles por mol de sustancia) del grupo 2-0-benzoílo delderivado bisulfítico de la 2,3,4,5,6-penta-O-benzoíl-D-glucosa por accióndel propanol-2 amoniacal hacia el hidroxilo del carbono 6.

Descripción: La terapia antiangiogénica se basa en estrategias moleculares que intentanbloquear la neovascularización tumoral y así detener la progresión de la masa neoplásica. Las células endoteliales suelen responder al estímulo estrogénico. La angiogénesis implica laproliferación del endotelio junto a la remodelación de la matriz extracelular, dondeparticipan, las metaloproteinasas (MMPs) y sus inhibidores (TIMPs). En el presente trabajose investigaron los posibles mecanismos antiangiogénicos del potente antiestrógenonafoxidina y el intrincado papel del TIMP-1 en la vascularización y progrésión tumoral. Seencontró que el tratamiento in vitro de células endoteliales humanas de vena umbilical (HUVEC) con dosis no citotóxicas de nafoxidina disminuye de manera dosis-dependiente laproliferación. Nafoxidina redujo también la adhesión, la capacidad de extensión sobre elsustrato y la migración de las células endoteliales, e indujo un aumento en la activación de la MMP-2 y en la secreción de TIMP-1. Además, inhibió significativamente la invasión y laformación de cordones endoteliales sobre Matrigel. La acción antiangiogénica de nafoxidinapodría asociarse a acciones indirectas, mediadas a través del aumento del TIMP-1, comotambién a efectos directos del antiestrógeno sobre las células HUVEC. Los cotratamientosin vitro con nafoxidina y el éster de forbol PMA indicaron que la acción antiangiogénicapodría estar relacionada con la inhibición de vías de señalización intracelular dependientes dela proteína quinasa C. El cotratamiento con el inhibidor de fosfodiesterasas IBMX y elderivado de CAMP dbcAMP sugirieron la participación de múltiples vías de señales en laacción antiangiogénica de nafoxidina. Otros ensayos in vitro con el inhibidor de fosfolipasa D n-butanol, el ionósforo A23187 y el bloqueante de canales de calcio verapamilo indicaronla importancia de estas vías de señales en la formación de capilares endoteliales. Finalmente,se exploraron in vivo los efectos de nafoxidina y TIMP-1, empleando un modelo singénicode carcinoma mamario en ratones BALB/c y un melanoma murino inoculado en hídridos C57BL/6j-CBA transgénicos que sobrexpresan TIMP-1 humano en hígado y lo vuelcan a lacirculación. Los datos obtenidos en animales ratifican La complejidad de los mecanismosregulatorios que operan in vivo durante la vascularización tumoral y diseminaciónmetastásica. Este trabajo aporta elementos útiles para el futuro diseño de ensayos clínicoscon nuevos agentes antiangiogénicos para el tratamiento del cáncer.

Descripción: Fil: Rembado, Alfredo Amilcar. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Chaud, Marcela Alicia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: La toxina Shiga 2 (Stx2) producida por Escherichia coli enterohemorrágica es la principalcausa de diarrea asociada a síndrome urémico hemolítico e insuficiencia renal. El 30 %de la población infantil que sufre SUH padece alteraciones en el sistema nervioso central (SNC). Nos propusimos determinar la expresión del receptor Gb3, el cual produce la entrada dela toxina en las células que lo poseen, en condiciones normales y luego de laadministración intracerebroventricular de Stx2 en cerebros de roedores. Observamos queel receptor Gb3 se expresa en neuronas y aumenta con la administración local de Stx2. La interacción Gb3-Stx2 en neuronas podría contribuir al daño producido por lasencefalopatías derivadas del SUH en niños intoxicados por ingestión de productoscontaminados por E. coli enterohemorrágica. También caracterizamos el efecto de dosissubletales de Stx2 (dsStx2) administrada vía intravenosa por ultraestructura que secorrelacionó con tests de comportamiento por primera vez. Este modelo translacional nosfue útil para determinar que dosis subletales de la toxina son capaces de generar un dañocronológico significativo de eventos en cerebros de ratones, que podría explicar laslesiones neurológicas que remiten o resultan ser permanentes en pacientes intoxicados. Un significativo edema perivascular se observó luego de 2 días de la administraciónsistémica de Stx2, daño en astrocitos a los 4 días, y en neuronas y oligodendrocitos luegode 8 días. También fue importante encontrar extravasación de mastocitos y sinapsisinterrumpidas. Finalmente el tratamiento de la Dexametasona, un antiinflamatorio, el Lactobacillus Plantarum, y/o anticuerpos anti-Stx2 logran neutralizar la acción de Stx2. Estos estudios servirán como antecedentes para desentrañar a futuro los mecanismoscelulares y moleculares involucrados en los procesos neuropatológicos durante la faseaguda de la intoxicación. En base a este conocimiento, agentes terapéuticos pueden serutilizados para neutralizar la Stx2 a nivel central.

Descripción: Fil: Raver de Fernández Poblet, Eva. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Bouso, Oscar. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Hanelo, María Olga. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: El antiguo trabajo de Clöes sobre la preparación de la Ciafenina, contemplando la posibilidad de obtener benzonitrilos a partir del benzoato de potasio y el cloruro de cianógeno, fué el punto de partida de numerosos trabajos llevados a cabo en la Cátedra de Química Orgánica a cargo del Profesor Enrique V. Zappi. Continuando con estos trabajos, nos abocamos a estudiar las reacciones similares a las experiencias de Bouse y Hanelo, pero reemplazando las sales alcalinas y alcalinotérreas por las sales de los metales plata, mercurio y plomo, con el objeto de aportar nuevos elementos de juicio en lo referente a la influencia que tiene en el rendimiento de nitrilos, el catión empleado, según surge de la experiencia acumulada en trabajos anteriores. Ya que la Teoría Moderna postula la ionización completa de las sales aún al estado sólido, puede suponerse que la reacción entre el cloruro de cianógeno y las sales metálicas sea en realidad una reacción entre el cloruro de cianógeno y el anión (radical ácido), con independencia del catión empleado. Para discriminar si el menor rendimiento observado en trabajos anteriores, para los elementos mas pesados, responde a una influencia real del catión ó a razones de estabilidad térmica de las sales que no permiten llevar la reacción a sus condiciones de temperatura óptima. A los efectos de dilucidar este punto, se determinó la estabilidad térmica de las sales de elementos mas pesados, quedando estas limitadas, por razones varias, a la de plata (P.A. 107,88), mercurio (P.A. 200,61) y plomo (P.A. 207,21). Las substancias utilizadas en la experimentación fueron, en general, preparadas y purificadas en el laboratorio. Las sales se obtuvieron por doble descomposición entre la sal sódica del ácido benzoico y los nitratos de plata, mercurio y acetato de plomo, purificándolas por cristalización y lavado. El cloruro de cianógeno fué preparado en un primer intento, por la técnica desarrollada en el Inorganic Synthesis, pero algunas dificultades presentadas, determinaron que se lo preparara por la técnica de Held, modificada por Zappi, Bouso y Cagnoni, y de acuerdo a las siguientes ecuaciones: a) 4CNK + SO4Zn.7H2O = Zn(CN)2.2CNK + SO4K2 + 7H2O b) Zn(CN)2.2CNK + 4Cl2 = 2ClCN + 2ClK + Cl2Zn En la parte experimental se dan en forma breve las técnicas de preparación y algunas propiedades de los benzoatos utilizados, como así también en lo que se refiere al cloruro de cianógeno. Se consigna una descripción completa del aparato utilizado y de la técnica de trabajo empleada para efectuar la reacción fundamental, es decir, la acción del cloruro de cianógeno sobre los benzoatos de plata, mercurio y plomo respectivamente. La reacción común a todas las experiencias es la siguiente: R-COOMe + ClCN = ClMe + CO2 + R-CN R-: radical orgánico. Me: Ag, Hg/2, Pb/2. La parte fundamental del presente trabajo consistió en un análisis riguroso de los resultados y la comparación de los mismos con los obtenidos por Bouso y Hanelo, con el fin de establecer la influencia del catión en el rendimiento del bensonitrilo, y arribar a las conclusiones finales. Se llega a constatar, a pesar de lo expuesto en trabajos anteriores, que no puede determinarse con presición de rendimiento de la reacción: R-COOMe + ClCN = R-CN + ClMe + CO2que dependa del peso atómico de los cationes. La variación de rendimiento que se observó entre los benzoatos de plata (P.A. de la plata 107,88) y de bario (P.A. del bario 137,36) por un lado, y los benzoatos de mercurio (P.A. del mercurio 200,61) y de plomo (P.A. del plomo 207,21) por el otro, no varían en la relación que lo hacen los pesos atómicos de los cationes. La temperatura influye notoriamente en los rendimientos de la reacción en cuanto al benzonitrilo bruto se refiere (benzonitrilo + ciafenina) en todas las series estudiadas. La temperatura óptima de reacción está alrededor de los 200°C, hallándose limitada la misma a la estabilidad térmica de las sales empleadas. Se confirma que la reacción entre el cloruro de cianógeno y los benzoatos metálicos tiende a ser cuantitativa, dependiendo esto de la técnica empleada y de la intimidad de contacto de las fases reaccionantes. Se ratifica que el cloro del cloruro de cianógeno queda en la parte mineral de los productos de reacción. Se constata que la ciafenina es un producto constante de la reacción, independiente de la naturaleza del catión empleado. Los resultados experimentales se reunen en varias tablas; se intercalan dos gráficos comparativos de los rendimientos del benzonitrilo bruto en función de la temperatura y de los pesos atómicos de los cationes. Se concluye el presente trabajo con una bibliografía extensa (49 citas bibliográficas) en la que se han incluido las últimas investigaciones efectuadas sobre el tema.

Descripción: El dermatán sulfato (DS) es un glicosaminoglicano endógeno, ampliamente conocido por su acción anticoagulante mediante interacción con el cofactor II de la heparina para potenciar la inhibición de trombina. Además, se ha sugerido que aumentaría la actividad fibrinolítica, aunque el mecanismo aún no ha sido dilucidado. El objetivo de esta tesis fue evaluar el efecto del dermatán sulfato de alto (DSA) y bajo peso (DSB) molecular sobre el sistema fibrinolítico. Se observó potenciación de la activación de plasminógeno en función del aumento de la concentración de DS. En particular, el efecto del DSA sobre la activación de Gluplasminógeno y Lys-plasminógeno por el activador de plasminógeno de tipo tisular (t-PA) y urinario (u-PA) resultó de similar magnitud al efecto de fibrina sobre la activación por t-PA, mientras que el efecto del DSB, a la misma concentración estudiada, fue de menor magnitud. La combinación de productos de degradación de fibrina y fibrinógeno (PDF) y DS no resultó en un efecto adicional sobre la estimulación de plasminógeno por t-PA, sugiriendo que estarían involucrados los mismos sitios de unión. Se observó que el DS no tuvo efecto apreciable sobre la actividad amidolítica de plasmina ni de u-PA y se comprobó por electroforesis (SDS-PAGE) que estaba favorecida la conversión de plasminógeno a plasmina. Los resultados obtenidos por método amidolítico, apoyan la hipótesis de que el DS tiene efecto pro-fibrinolítico mediante una acción potenciadora del proceso de activación de plasminógeno. Se estudió el efecto del dermatán sulfato sobre la formación, estructura y lisabilidad de la red de fibrina. El efecto del DS sobre la cinética de fibrinoformación se caracterizó por aumento de la fase de latencia, disminución de la velocidad de fibrinoformación, prolongación del tiempo de coagulación y disminución de la densidad óptica máxima. Estos geles resultaron más fácilmente compactables, indicando que la red estaría constituida por fibras más frágiles, separadas por compartimientos líquidos más grandes. Por microscopía electrónica se observó que las redes formadas en presencia de DS presentaron una arquitectura más abierta, con igual densidad de fibras, más largas y delgadas que las fibras control. Estas redes resultaron más rápidamente lisadas que las redes control. Por lo tanto, el DS no sólo actúa como regulador de la actividad de trombina, sino además actuaría como modulador de la estructura de la fibrina y su lisabilidad. Se observó disminución del tiempo de lisis del coágulo de sangre entera diluida y del tiempo de lisis de euglobulinas en función del aumento ex vivo de la concentración de DS. Se descartó el efecto anticoagulante del DS en el ensayo de euglobulinas, por lo tanto se concluye que el efecto pro-fibrinolítico observado se debería a un efecto sobre la activación del sistema fibrinolítico, en concordancia con los resultados obtenidos por método amidolítico. En cultivo de células endoteliales 1G11, no se observaron efectos significativos del DSA sobre los niveles intracelulares ni la liberación de t-PA y PAI-1 (inhibidor del activador del plasminógeno). Los resultados de esta tesis demuestran que el DS tiene efecto pro-fibrinolítico y contribuyen al esclarecimiento del mecanismo de acción de este glicosaminoglicano sobre el sistema plasminógeno-plasmina. Además, permiten plantear hipótesis sobre el rol fisiológico del DS.

Descripción: El estilbestrol a1 igual que las hormonas esteroides,inhibe selectivamente la cadena de transporte de electronesmitocondrial. La NADH oxidasa es mucho más sensibleque la succinato oxidasa, ubicándose inicialmente su sitiode acción en el segmento NADH-(Q,cit b). Se ensayó un fraccionamiento de la cadena, con elobjeto de eliminar sectores no involucrados, utilizándoseparticulas NADH y succinato citocromo c reductasa. En adelante se utilizaron segmentos funcionales, ya quelas modificaciones preparativas introducidas por elfraccionamiento, alteraban las respuestas al estrógeno. Se utilizó el segmento NADH-citocromo b. Con el estilbestroly análogos, se determinaron por espectrofotometríadiferencial modificaciones en los niveles de óxido-reducciónde los componentes de la región "NADH flavoproteína"en primer lugar citocromo b y en segundo lugarflavoproteínas y otros componentes que contribuyen a lasvariaciones espectrofotométricas a 465-510 nm. Se determinóque el estilbestrol produce desplazamientos delnivel de estado estacionario de óxido-reducción del citocromob hacia la oxidación en el sistema aeróbico y coincidentementeuna inhibición de la reducción directa en elsistema inhibido por cianuro. Se tituló el efecto del estrógeno y análogos sobreeste sistema NADH-citocromo b y se encontró que actúancon la misma especificidad que sobre la respiración mitocondrial,sobre la NADH oxidasa y sobre la NADH-Q reductasa,segmento funcional utilizado posteriormente. Losdimetiléteres (fisiológicamente inactivos) no inhibenla transferencia de electrones. La concentración I (50) para estos efectos fué para Stil: 2 μM. Sobre la NADH-oxidasa midiendo consumo de O2polarográficamente, se obtuvo un valor 0.75 μM. Se encontró que el ascorbato potencia significativamente lainhibición por estilbestrol. La antimicina A modifica el flujo de electroneshacia el b por acción sobre dicho componente, además delbloqueo que produce a un sitio inmediato posterior. No seobserva efecto del Stil cuando el parámetro utilizado esreducción del b en sistema anaeróbico por cianuro másantimicina A. El ascorbato es capaz de antagonizar elefecto del antibiótico y restablecer el efecto de Stil. En el sistema cerrado, con cianuro como inhibidorterminal el citocromo b se mueve libremente en presenciade Stil, en un equilibrio de óxido-reducción sumamentesensible a las variaciones del flujo de electronesdesde el NADH. Se ensayó el agregado de Q2 y fumarato. En todos los casos, la reoxidación del citocromo bresulta dependiente de la concentración del estrógeno,en función de su efecto primario: inhibición del transportea un sitio anterior a b. Por lo tanto b no es elsitio de acción del estrógeno. Queda abierta la cuestiónde una posible influencia sobre la conformación del mismo,pero no en relación con el sitio de acción fundamental. El citocromo b, según criterios cinéticos no se encontróalineado en la cadena principal, sino en posición desalto tal como ocurre en general en este tipo de preparacionesno fosforilantes. La reoxidación observada del citocromo ben el sistema cerrado por cianuro se efectuaríaa través de una vía paralela a la vía principal, insensibleal cianuro. En cuanto a las variaciones espectroscópicas a 465-510 nm (flavoproteínas), en el sistema aeróbico, Stil no modifica la reducción y sí la reoxidación. Ensistemas cerrados, inhibidos con cianuro se produceuna curva bifásica de reducción y sí el estrógeno seagrega a la flavoproteína ya reducida, se logra unpequeño aunque significativo desplazamiento hacia laoxidación. Agregando ascorbato al medio de reacción laacción de Stil se potencia, al igual que el caso observadodel citocromo b y el sector NADH-deshidrogenasa seresuelve en dos componentes de óxido-reducción, uno debajo potencial del lado sustrato y otro del lado O2del sitio sensible al Stil. El succinato resulta capazde reducir a este último, además de su correspondienteflavoproteína. Se ensayó la acción de Stil y análogos sobre elsegmento NADH-Q exógena de la cadena respiratoria conidénticos resultados que los comentados para el segmento NADH-citocromo b. Se mantiene el requerimiento de OH fenólicos libres. Las concentraciones inhibidoras 50 %(I50) son para Q2 μM 4.0 (Stil); 7.5 (Hex); 15 (Stil MME)y para Q0 (Stil) 18; (Hex) 15 y (Stil MME) 30. Los dimetiléteres no resultaron activos en ningunode los sistemas ensayados. Se determinó que la disminución de la actividadenzimática en presencia de Stil es proporcional a lacantidad de enzima presente y depende de la concentracióndel inhibidor en la mezcla de reacción. La inhibiciónse revierte por simple dilución de la mezcla enzima/inhibidor. La naturaleza reversible de la inhibiciónpermitió un tratamiento cinético en el estudio de lainhibición sobre el segmento NADH-Q. Se descarta unaprobable competencia entre Stil y quinona ya que losgráficos (Lineweaver y Burk) obtenidos dan una inhibiciónno competitiva de Stil con relación al sitio fundamentalde entrada de la quinona. Los valores de Kiobtenidos confirman la naturaleza no competitiva de lainhibición en cuanto a la reacción de quinona con lacadena al sitio fundamental de entrada. Se hace un cálculorelativo de las contribuciones respectivas a dossitios de entrada de la quinona exógena. Se analiza unasupuesta competencia que resulta de la aparición de unaactividad NADH-Qo insensible al estrógeno a altas concentracionesde quinona. Esta actividad seria la consecuencia de una interacción directa de Qo con el grupo flavina de bajo potencial de la NADH-deshidrogenasa. Como se esperaba, dicha actividad resultó competitivacon respecto al NADH. Se ensaya el efecto de Stil sobre reacciones queinvolucran directamente a dicho grupo flavina talescomo transhidrogenasa y ferricianuro reductasa. El estilbestrolno afecta estas actividades de acuerdo con loencontrado para la actividad NADH-Qo reductasa a altasconcentraciones de la quinona. Se descarta el grupoflavina como sitio de acción del inhibidor. En experimentos de preincubación de la enzima con Stil no directamente comparables se obtienen variacionesde las actividades NADH-citocromo c reductasas yferricianuro reductasa que se deberían a cambios conformacionalesde la NADH deshidrogenasa particulada funcional. En correspondencia se obtiene aumentada reactividad a mercuriales. Todos estos resultados localizan el sitio sensiblesobre el sector NADH deshidrogenasa en las proximidadesdel componente I (excluyendo al grupo flavina), dejandoun segundo componente redox del lado oxígeno. La naturalezade este segundo componente es por el momento discutibleya que se han propuesto dos esquemas diferentes. Se ha ensayado el efecto de Stil y rotenona, resultandoaditivas las inhibiciones ó dando respuestas análogascuando se ensayaron separadamente. Esto indicaríaque ambos inhibidores afectarían al mismo componenteenzimático, no necesariamente al mismo grupo ya que seencontraron diferencias en presencia de ferricianuro yascorbato. Pueden suponerse diferentes mecanismos deacción dada la diferencia de estructuras. Se ha postulado un probable mecanismo de acción enlo que respecta a la acción del estilbestrol y análogos,no comprobado, pero que responde a los hechos experimentalesobservados. El estilbestrol actuaría en este sistemapor su capacidad de producir radicales libres H.,capaces de ceder electrones a un sustrato orgánicoadecuado, grupos disulfuro u otros equivalentes. Elagregado de acido ascórbico potenciaría al sistema porregeneración del difenol a partir de la doble quinona,explicándose así la mayor actividad del sistema acidoascórbico-estilbestrol que el del estilbestrol aislado. El monometiléter tendría menor eficacia ya que daríal H. por mol en lugar de dos. El otro radical sería menosreactivo ya que puede estabilizarse por resonancia. Finalmente los dimetiléteres inactivos formarían bisradicalespero no H., cumpliéndose de esta manera laproporcionalidad del efecto con el número de OH fenólicoslibres. Los experimentos de preincubación aunqueno directamente comparables, sugieren la formación degrupos sulfhidrilos libres ya que se observa aumentadareactividad a mercuriales. El ferricianuro interferiríala reacción a nivel de la enzima compitiendo con elgrupo Prot-S, por el electrón cedido por el átomo dehidrógeno. Esta hipótesis sería válida exclusivamentepara el estilbestrol y análogos en coincidencia con losrequerimientos para su acción estrogénica, no así paralos estrógenos naturales en los cuales no se requieren OH fenólicos libres para la inhibición, como lo pruebala acción de los dimetil-derivados del 17 estradiol.

Descripción: El Hexaclorobenceno (HCB) es un pesticida organoclorado considerado como probable carcinógeno humano. A nivel regional, este contaminante fue encontrado en leche materna de puérperas y en muestras de leche vacuna para consumo humano. Es un tóxico tipo dioxina, y como tal se une al receptor de hidrocarburos aromáticos (RHA), un factor de transcripción que modula procesos tales como apoptosis, proliferación y migración celular. El RHA está presente en el citosol e interacciona con el complejo que contiene a la quinasa de tirosina c-Src. Cuando estos tóxicos se unen al RHA, se pueden desencadenar dos mecanismos: 1) que el complejo tóxico-RHA se transloque al núcleo y module la expresión de genes con elementos de respuesta a dioxinas (DREs) en sus promotores y 2) que se libere la c-Src del complejo citosólico y active receptores de factores de crecimiento, como el Receptor de Factor de Crecimiento Epidérmico (HER1). Resultados previos de nuestro laboratorio demostraron que el HCB aumenta el desarrollo y malignidad de tumores mamarios inducidos por N-Nitroso-N-metilurea en rata. En este mismo modelo se observó que el HCB activa la vía de señalización de c-Src/HER1 y disminuye la actividad del receptor de estrógenos (REα) en los tumores mamarios. Por otro lado, en estudios in vitro se demostró que el tóxico incrementa la proliferación y la actividad de c-Src en la línea celular de cáncer de mama MCF-7 (+REα). La tumorigénesis ocurre frecuentemente como resultado de la sobreexpresión de proteínas como el HER1 y la c-Src, que están involucradas en procesos celulares normales. Estas proteínas están usualmente sobreexpresadas en cáncer de mama en estadíos tardíos, y cooperan en la formación y progresión tumoral al favorecer procesos como la proliferación, migración e invasión celular, actividad de metaloproteasas y metástasis. Los objetivos de este trabajo fueron investigar en ensayos in vitro, utilizando una línea celular de cáncer de mama humano MDA-MB-231 (-REα) los efectos del tóxico en: a) la migración e invasión celular, b) la actividad y expresión de c-Src y HER1, c) la estimulación de las vías de señalización de ERK1/2, Akt2 y STAT5b, d) la actividad y expresión de metaloproteasas 2 y 9 (MMP2 y 9), y e) si los efectos observados dependen de las vías de señalización en estudio y de la unión del pesticida al RHA. Por otro lado, nos propusimos estudiar en ensayos in vivo, la acción del HCB sobre el crecimiento tumoral y la metástasis en modelos espontáneos y experimentales. Nuestros resultados muestran que el HCB estimula las vías de transducción de señales de c- Src/HER1/STAT5b y HER1/ERK1/2, la migración e invasión celular, la expresión de MMP2 y 9, así como la secreción y actividad de MMP9 en la línea celular MDA-MB-231, in vitro. Observamos que la migración e invasión celular inducida por el tóxico están mediadas por c-Src, HER1 y el RHA. A su vez, la secreción y actividad de la MMP9 estimulada por el HCB depende de HER1 y del RHA, mientras que el aumento en la expresión de MMP2 depende tanto de c-Src, HER1 como del RHA. Asimismo, en un modelo de xenotrasplante con la línea celular MDA-MB-231 en ratones atímicos, demostramos que el pesticida estimula el crecimiento tumoral (0.3 y 3 mg/kg p.c.), mientras que induce la activación de c-Src, HER1, ERK1/2 y STAT5b e incrementa los niveles proteicos de MMP2 y 9 en los tumores mamarios en todas las dosis ensayadas. Por otro lado, en estudios de metástasis espontánea con tumores C4-HI en ratones BALB-c, encontramos que el HCB (0.3 y 3 mg/kg p.c.) aumenta el crecimiento de los tumores mamarios y el número de micrometástasis en hígado y pulmón. En los estudios de metástasis experimental con la línea celular LM3 en ratones BALB-c, el pesticida (3 mg/kg p.c.) incrementa el tamaño de las metástasis en pulmón. En conclusión, en el presente trabajo demostramos por primera vez, que el HCB promueve la migración e invasión celular por las vías de c-Src/HER1/STAT5b y HER1/ERK1/2, así como la expresión de MMP2 y MMP9 de manera dependiente del RHA. A su vez, observamos que el tóxico estimula el crecimiento tumoral y metástasis en pulmón e hígado en modelos experimentales de cáncer de mama.

Descripción: Fil: Rosenblatt, Rosa. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Pasquinelli, Eduardo Augusto. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Castillo, Marta Beatriz. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: El trabajo realizado se puede resumir en tres puntos: a) Estudio del efecto de los lisados de bacterias sobre el poder infectante del fago y una mutante virulenta. Se trabajó con lisados de bacterias lisogénicas K12 (T)W 1895 y no lisogénicas K12 W 1485. Los lisados se obtuvieron sometiendo a las bacterias al efecto de una descompresión brusca. Luego se centrifugaron a 10.000 rpm. para eliminar restos de membranas y bacterias remanentes. Los ensayos de inhibición de los fagos, se efectuaron incubando el fago con el lisado a 37°C durante 30 minutos. La inhibición se determinó en base a la disminución del número de placas producidas por el fago en presencia del lisado, respecto de un control. Las bacterias utilizadas fueron las K12 W 1485 sensibles a ambos fagos. También se trabajó con lisados obtenidos a partir de protoplastos de esas mismas cepas. Los resultados indican que los lisados de las bacterias lisogénicas y no lisogénicas inhiben el fago T virulento pero no tienen acción sobre el fago temperado. Los lisados de los protoplastos, se comportan en igual forma. La inhibición del fago virulento nunca es inferior al 50%. Las variaciones obtenidas (95-50%) dependen de la concentración del poder inhibitorio de cada lisado utilizado. b) Estudio de las propiedades del lisado de bacterias lisogénicas. Resultados: 1) El lisado es estable a 0°C por lo menos durante 30 días, luego comienza a perder título. 2) A los 5 minutos de calentamiento a 56 °C, se destruye rápidamente parte de la actividad del lisado. El resto permanece inalterado por lo menos hasta 30 minutos de calentamiento. 3) El lisado se inactivo a 100 °C. 4) Se incubó lisado con DNasa y RNasa; el poder inhibitorio no se altera por efecto de estas enzimas. 5) Se inactiva incubando el lisado con 250 Ɣ de tripsina por ml. 6) El lisado dializa parcialmente a 4 °C. 7) El lisado precipita por el agregado de ácido tricloroacético al 5% en frío. El precipitado resuspendido en buffer pH 7.0 tiene más actividad que el lisado original. 8) El lisado se puede sedimentar por ultracentrifucación. 9) El caldo donde crecieron las bacterias, a partir de las que se obtuvo el lisado, no tiene actividad inhibitoria. c) Interacciones entre lisado y fago. 1) La temperatura óptima de contacto fago-lisado es de 37 °C. A 0°C también se produce la unión entre el fago y el lisado, pero en menor proporción. A 56 °C esta unión no tiene lugar. 2) La cinética de la inhibición del fago por el lisado a 37°C, indica que la reacción es de primer orden. La reacción procede rápidamente, hasta que a los 50 minutos se detiene. 3)Los experimentos realizados para determinar si el lisado se une al fago temperado, aunque no lo inhiban indican que el lisado no interacciona en ninguna forma con el fago. Hay que hacer notar que en presencia de lisado, el fago temperado produce un número mayor de placas, que cuando se plaquea sin el mismo. 4) El efecto del lisado se debe a una acción directa sobre la partícula delfago y no a una interacción con la superficie de las bacterias sensibles. Conclusiones: Se postula que los receptores bacterianos que pasan a solución al obtenerse el lisado, son los responsables de la inhibición del fago virulento. Como estos receptores no parecen actuar sobre el fago temperado, se deduce que este fago se une a receptores diferentes de los que se une el virulento.

Descripción: Fil: Zappi, Enrique V.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Las algas azules, tanto continentales como marinas, son de gran importancia ecológica porque representan un aporte continuamente renovado de materia orgánica, liberan y producen sustancias con actividad biológica y en numerosos casos fijan nitrógeno atmosférico. Las primeras referencias sobre el efecto fertilizante de las algas y su aplicación en la agricultura nos ha llegado por tradición de los países del norte de Europa y Asia, donde se incorporaban al suelo los arribazones de diversas algas marinas observándose una relación directa entre el monto de materia orgánica así agregado y la productividad de dichos suelos (Booth, 1966; Stephenson, 1968). Con miras a su aplicación en la agricultura se encaró en el presente trabajo de tesis el estudio de extractos algales y productos extracelulares de un cultivo axénico de una cianofíta (Tolypothrix tenuis) sobre plántulas de maíz. Este trabajo ha sido desarrollado de acuerdo al siguiente plan: 1) Obtención de extractos etéreos y acuosos a partir de masa algal, para imbibición de semillas. 2) Obtención de productos extracelulares a partir del medio de cultivo donde crecieron las algas para utilizarse en: -imbición de semillas, -riego de plántulas, -pulverización de plántulas, -riego y pulverización de plántulas. 3) Se evaluaron los siguientes parámetros; % de germinación de las semillas, altura, número de hojas, pèso seco y contenido proteico de las plántulas.

Descripción: Fil: Sassetti, Beatriz. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Castro, José Alberto. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: El trabajo que a continuación se detalla, tiene por objeto mostrar el efecto de varios detergentes de fácil obtención en el comercio sobre ciertas bacterias que se hallan comunmente en los productos lácteos y en el equipo de las plantas lecheras (se estudió la acción que sobre ciertos microorganismos Gram positivos y Gram negativos, comunmente hallados en el material de las usinas lecheras, tiene un grupo de detergentes conocidos como "wetting agents"). Los detergentes fueron ensayados en soluciones acuosas de varias concentraciones, como tales, y también luego del añadido de ácido glicólico ó álcalis (principalmente carbonato de calcio), por haber demostrado diversos investigadores en varias oportunidades la importancia del pH cuando se trataba de estudiar la acción de los detergentes sobre las bacterias.

Descripción: Meliacina (MA), un limonoide presente en las hojas de la planta Melia azedarach L., es capaz de inhibir in vitro la replicación de un amplio espectro de virus y actuartambién como un potencial inmunomodulador. En este trabajo de tesis se demuestra la efectividad de meliacina como antiviralcontra el patógeno HSV-2, ya sea inhibiendo la replicación del virus en cultivoscelulares o por su efecto terapéutico administrado en forma tópica en un modelo deinfección genital en ratones. Se confirma, además, su actividad comoinmunomodulador por su efecto sobre macrófagos peritoneales murinos cultivados invitro. MA aumenta la producción de citoquinas, en especial el TNF-α, cuando esadministrada sola o en combinación con distintos inductores y este aumento estárelacionado con la activación del factor de transcripción NF-kB. Por otro lado, MA inhibe la replicación del virus HSV-2 en células Verosuministrada sola o en forma aditiva en combinación con IFN-α, IFN-γ o los dos juntosindicando que aumenta la acción de ambas citoquinas. Estos resultados en conjunto sugieren que MA puede ejercer distintos efectosdependiendo del tipo celular sobre el que actúa: como antiviral en células epiteliales ycomo modulador de la producción de citoquinas en los macrófagos. A estas accionescombinadas podría deberse el efecto terapéutico ejercido en el modelo in vivo.

Descripción: Fil: Afonso, Susana Graciela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Cannoni, Angela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Hemos incoluado intravenosamente 4,700 embriones de pollo (Leghorn) a los 9-11 días de desarrollo en parte con sueron total, fracción IV, V, VI y fracción γ globulina del método N°10 de Cohn de sanqre de portadores de tumores malignos histológicamente diagnosticados, de enfermos de Hodgkin, de portadores de tumores operados, irradiados o tratados terapéuticamente. A los 4-6 días de inoculación hemos estudiado la incidencia de embriones monstruososentre los sobrevivientes observando que: 1°) Los sueros normales producen 1% de monstruos. 2°) Los sueros de tumores benignos producen 1% de monstruosidades. 3°) Los sueros de tumores operados, irradiados o tratados producen 1% de monstruosidades. 4°) La fracción IV, V, VI Met. N° 10 de Cohn de canceroso produce 1,4% de monstruos. 5°) Suero canceroso total 52% de monstruosidades. 6°) La γ globulina produce 65% de monstruos. 7°) La fracción γ globulina repite con mayor incidencia la monstruosidad delsuero total, lo que nos hace pensar que en esta fracción se encuentra algúnfactor enzimático o viral que actúa sobre el embrión de pollo; este factorconserva su actividad a -20°C y se destruye a 60°C, no es dializable y activaría la hialuronidasa. Las malformaciones observadas más frecuentes son decaracter general y se traducen en forma de edema generalizado en todo el embrión o localizado en la región occipital. A veces se observan inhibiciones. Las malformaciones de carácter local interesan al sistema óseo, (braquimelia,hemimelia, ausencia de huesos parietales, occipitales, maxilares) sistemanervioso central (excerebración, microcefalia, anencefalia) a los ojos (anoftalmia total o parcial, reabsorción del globo ocular, coloboma) o el pico, (entrecruzamiento, pico de loro, braquignatia) y repiten todas las monstruosidades producidas por agentes físicos, químicos o por virus. 8°) Por ahora no se puede establecer relación entre el tipo histológico y la respuesta del embrión. Los tumores histológicamente más indiferenciados y vírgenes de tratamientoson los que han dado mayor incidencia. 9°) No se puede establecer una relación entre grado de evolución del tumor y grado de monstruosidad. 10°) No se puede establecer relación entre ubicación de las monstruosidades y ubicación del tumor, las malformaciones del sistema óseo aparecen con más frecuencia en cáncer de pulmón y mama; anoftalmia, microcefalia y anencefalia enel cáncer de lengua, pero hay muchos factores clínicos, hormonales: evolutivos propios del portador del tumor y otros en el embrión receptor que entranen acción contemporáneamente y hacen variar las incidencias de los procesosmonstruosos. Solamente el estudio estadístico cuantitativo de las proteínas plasmáticas de muchos portadores de tumores del mismo tipo histológico, en un mismogrado de evolución, de un mismo órgano sobre embriones de cepa genéticamente puranos podrá dar una idea del valor que pueda tener en un futuro esta investigacióndesde un punto de vista diagnóstico. Estamos ahora estudiando si un suero inmunizante anticanceroso puede actuar como antagonista de la acción teratógena del suero canceroso.

Descripción: Esta Tesis estudia: 1) la influencia de la 11βhidroxilación así como de la introducción de un doble enlace Δ1en la molécula de la progesterona, en las respuestas glucocorticoides (GC); 2) la relación entreconformaciones moleculares de éstas y otras 20 moléculas derivadas, con estas respuestas. Con notorias excepciones (dexametasona (DEX), RU28362 y 5β-dihidroprogesterona), las afinidades de los 22 esteroides estudiados obedecen con una muy buena linealidad a la correlación afinidad por el receptor deglucocorticoides (GR) vs afinidad por transcortina (CBG). Existe una correlación inversa, simétrica conrespecto a la observada para propiedades MC, del ángulo A/BCD de la mayoría de los esteroides estudiadoscon su afinidad por GR (y por consiguiente, por CBG). A estos efectos los esteroides se pueden dividir encuatro grupos: I)de alta afinidad; II)grupo conformacionalmente plano, de baja afinidad; III) los Δ1esteroides, correlacionados en una paralela a sus esteroides madres, que significa menor afinidad por GR o CBG de la que se esperaría de acuerdo con su ángulo de torsión; IV)grupo de esteroides muy torsionados (con baja unión). El conjunto de correlaciones sugiere una torsión óptima para unión a dichas proteínas (entre -20 y -28 para el grupo I. Entre -20 y -36 para el conjunto de los grupos I y III). Contrariamente a loobservado por Duax et al para efecto antiinflamatorio, no se observa correlación de ángulo de torsión vsinducción de TAT (ni utili7ando A/BCD ni C3/D). Las propiedades de 11βhidroxiprogesterona (HOP) y Δ1-11βhidroxiprogesterona (ΔHOP): este par deesteroides posee propiedades glucocorticoides apreciables, a veces muy intensas y carece de otras. Entre lasprimeras se cuentan la unión a GR y/o CBG, la disociación del complejo GR-hsp90, la gran capacidad deinducción de la TAT y la inhibición de la incorporación de nucleótidos y aminoácidos a timocitos (respuestas A). Por el contrario, ninguno de los dos esteroides afecta el peso del timo, ni sensiblemente las propiedadesapoptóticas habitualmente demostradas por otros GC Tampoco indujeron sensiblemente un gen reporter enuna línea celular que expresa el receptor de GC. (respuestas B). Finalmente, a diferencia de las respuestas a todos los demás corticoides ensayados, incluyendo HOP, larespuesta inhibitoria a ΔHOP de la incorporación de nucleótidos y aminoácidos a timocitos no es bloqueadatotalmente por el inhibidor RU486. Si consideramos las respuestas B, ni la progesterona ni sus derivados Δ1 u 11βhidroxilados las expresan. Experimentos con cultivos de timocitos o hepatocitos dependen de la presencia de suero de ternero para quelos esteroides no 11βhidroxilados no expresen respuestas A. En ausencia de dicho suero no existendiferencias de estos derivados con progesterona o su Δ1 derivado: todos expresan respuestas A. Pero ¿es la diferencia observada puramente artificial o acaso encierra un trasfondo fisiológico? El experimento in vivo, que relaciona orden de potencia esteroidea para depósitos de glucógeno con unión a GR así como CBG, sugiere que las proteínas del suero homólogo ejercerían un rol fisiológico "dirigido"como uno de los factores que confieren especificidad GC a la 11β hidroxilación. Los razonamientos sobre ausencia de efectos MC y de unión a MR de moléculas muy torsionadas (grupo IV)permitieron desarrollar el primer antiglucocorticoide (competitivo por GR) específico, ya que carece deafinidad por MR o receptores a progesterona.

Descripción: Fil: Fortunato, Andrés D.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Canali, Héctor J. F.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: El presente estudio corresponde a una serie que ha sido planeada con el objetivo de establecer en productos Argentinos la composición química de aceites de oliva, siendo de especial interés establecer en que forma se manifiesta la influencia de los factores climáticos de las regiones de producción. Con este objeto y teniendo en cuenta que los resultados a que se lleguen podrán ser de valor en el contralor y legislación bromatológicos se eligen como productos de estudio muestras de indiscutible genuinidad y en especial provenientes de importantes zonas de producción actual o futura. Cabe señalar que resulta dificultoso hacer estos estudios sobre aceites provenientes de variedades puras, porque en general nuestros olivares no reunen esa característica. En el presente caso, se ha elegido un aceite obtenido por presión en frío, de olivas con carozo, cosechadas en los meses de marzo a junio del año 1943 en la zona de Montes Caseros y sus alrededores, Pcia. de Corrientes, elaborado personalmente por su productor el Dr. Párides Panza.

Descripción: Desde hace algunos años fué iniciado el estudio de la composiciónquímica en ácidos grasos de los aceites de oliva de producción nacional. Grianta (1) y Schmidt (3) estudiaron bajo este aspecto aceites obtenidoscon frutos de diferentes variedades cosechados en la regiónde Monte Caseros (provincia de Corrientes); Schiaritti (3) efectuó unanálogo estudio sobre un aceite producido en base a olivas de diferentesvariedades cosechadas en Mendoza;Hooney (4) determinó la composiciónquímica de un aceite también procedente de mezclas de diversasvariedades de frutos cosechados en la región de Ledesma (provincia de Jujuy); Brere (5) efectuó un análogo estudio sobre un aceite elaboradocon frutos cosechados en la región de Patagones (provincia de Buenos Aires); Brenner R.(6) y Brenner E.(7) analizaron aceites elaborados confrutos de las variedades “Manzanilla”, "Arbequina" y "Leccino" cosechadosen la región de Bahía Blanca (provincia de Buenos Aires); Sternberg (8) determinó la composición química del aceite obtenido confrutos de la variedad "Arbequina" cosechados en Villa Dolores (provinciade Córdoba); Paladini (9) realizó el astudio del aceite producidoen base a frutos de la variedad "Arbequina" cosechados en La Rioja (provincia de La Rioja) y Hochman (10) estableció finalmente lacomposición de un aceite obtenidos con frutos de la variedad "Frantoio",cosechados en la región de Maipú (provincia de Mendoza). En esta oportunidad se proporciona el estudia de composición deun aceite obtenido por presión en frío de frutos maduros de lavariedad "Arbequina", cosechados en la región de _Maipú (prov.de Mendoza). Como en todos loa casos anteriores no se han efectuado procesos derefinación para no introducir cambios significativos en lacomposición de ácidos grasos. Como se ve a continuación el estudio comprendela determinación de las principales constantes físico-químicas ycomposición en ácidos grasos y el estudio comparativo de los valoresasí obtenidos con los correspondientes a aceites nacionales de otraszonas de producción y extranjeros registrados en la literatura.

Descripción: Este trabajo forma parte de una serie planeadacon el objeto de establecer la composición química de aceites de olivanacionales con especial referencia s la influencia que los factoresclimáticos y suelos de cosecha puedan tener sobre la misma. Ya anteriormente Grianta (l) estudió la composición química de unaceite de oliva elaborado con frutos cosechados en la región de Monte Caseros, Pcia. de Corrientes. En nuestro caso, hemos estudiado en la mismaforma, un aceite obtenido por presión en frío de frutos con carozo,cosechado en olivares mendocinos y elaborado en la Planta Experimentalde Industrialización de la Oliva del Instituto de Olivotecniade la Universidad Nacional de Cuyo.

Descripción: Se presenta una nueva contribución al conocimientode la composición en ácidos grasos de aceites de maní argentinos. Se encara el examen de composición, en ese sentido, deun aceite obtenido por extracción en frío, con éter de petróleo,de semilla de la variedad "Blanco común, tipo erecto, cosechadoen la Sub-Estación Experimental de Coronel Moldes (Salta) y decuatro aceites obtenidos en la misma forma a partir de semillasde las variedades "Negro Tipo N°3", "LE 36 - Mf 1293", "Coloradode Córdoba", "Guaycurú rastrero”, cosechadas en la Estación Experimental Agrícola de Tucumán. Por destilación en vacío de los ésteres metílicos "sólidos" y "líquidos" del aceite de semilla salteña y porexamen del contenido total en ácidos saturados según Bertram, enlos aceites de semilla tucumana, se establecieron las composiciones % de ácidos totales). (ver tabla de valores en la tesis). La discusión de estos valores de composicióncon los correspondientes a otros aceites de maní argentinos revela: a) En todos los aceites son "componentes mayores" los ácidosoleico y linoleico y prácticamente el ácido palmítico (contenidosen proporción superior al 10% de los ácidos totales). Entre los "componentes menores" (contenidos en proporción inferioral 10% de los ácidos totales) los ácidos mirísticoy esteárico, muestran variaciones sensibles al igual que elácido palmitoleico, que en ningún caso sobrepasa contenidosdel 1%. b) Los contenidos en ácidos saturados totales oscilan entre 18,1y 24,2%, no observándose relaciones definidas entre estoscontenidos y los de ácido linoleico. Es visible una tendencia a mayores contenidos en ácido oleicopara menores en linoleico, como se observa en aquellos aceitesde la misma o de distintas variedades procedentes de semillascosechadas en el mismo suelo. Los ácidos saturados en C20, C22 y C24 (araquídico, behénicoy lignocérico) representan en conjunto 6,0 a 7,7% de losácidos totales, siendo el ácido behénico (C22) el principalcomponente de este grupo de ácidos en todos los casos. Prácticamenteel ácido lignocérico (C24) sobrepasa siempre enconcentración al ácido araquídico (C20). Del examen de los valores de composición enácidos grasos de los aceites de maní argentinos estudiados hastael presente, se deduce una relación aproximada entre latitud geográficay contenidos en linoleico para los aceites de semilla cosechadasen Misiones, Presidente Perón, Corrientes, Entre Rios, Santa Fe y Mendoza; no así con los procedentes de semilla cosechadaen Salta y Tucumán. Esto indicaría que probablemente debentenerse en consideración todos los factores climáticos delos suelos de cosecha y que el factor varietal posiblementejuega su papel sobre los valores de composición. Las sustanciales variaciones de composiciónmencionadas anteriormente no pueden ser ajenas a la resistenciade estos aceites frente a los fenómenos de rancidez oxidativo,pues a mayores contenidos en linoleico corresponden mayores contenidosen linóleo-glicerados con los que esa resistencia disminuye. Se ha continuado el estudio de la vinculaciónentre los valores de "temperaturas de enturbiamiento Belliermodificada" con los valores de composición en ácidos de losaceites, habiéndose practicado las técnicas I.R.A.M. y A.O.A.C. Pudo confirmarse que la primera (medio acético) proporciona valoressuperiores en aproximadamente 4°C a la segunda (medioclorhídrico). Aunque todo indica que son las concentracionesen ácidos saturados de C20 a C24 las que determinan los valoresde enturbiamiento, las observaciones realizadas sobre 13aceites de maní de composiciones en ácidos conocidas, muestranque los índices de iodo de los aceites influyen sobre esos valores. Cabe presumir, por lo tanto, que las relacionesoleico-linoleico y los contenidos en ácidos saturados de C20 a C24, deben ser los principales determinantes de esas temperatura.

Descripción: Se presenta nn estudio sobre la composicion química del aceitede semilla de Gevuína avellana molina, una Proteacea que desarrolla en elsuelo Argentino. Se inicia así el examen de composición, en ese sentido,de aceites de semillas de Proteaceas, familia botanica muy poco considerdahasta el presente bajo ese aspecto. La semilla libre de cáscara de Gevuína avellana Mol. cosechadaen los alrededores del Lago Puelo(Chubut), rinde por extracción con hexano 40% de aceite cuyas principales características físicoquímicas hansido determinadas (I.S:188,6 ; I.I:87,7). Por destilación fraccionada de los esteres metílicos de los ácidos "solidos" y “líquidos” del aceite se ha determinaao la composiciónde sus ácidos totales, con los resultados indicados en el Cuadro 1. Han resultado ser componentes "mayores" los ácidos oleicos hexadecenoico,linoleico y eicosenoico y practicamente el ácido docosenoico. Han sido reconocidos los ácidos oleico (como dihidroxiderivado) y elácido linoleico(como tetrabromodarivado). Por vez primera se señala que el ácido eicosenoico presente enaceites de semillas de proteaceas es el ácido 11-12 eicosenoico. Así mismose ha establecido que el ácido decosenoico presente es el ácido 13-14decosenoico. En ambos casos las estructuras han sido probadas por rupturaoxidativa de los ozonidos correspondientes e identificación de los ácidosmono y dicarboxílicos por cromatografía sobre papel, ha quedado pendientede un nuevo estudio la identificación y demostración de estructurade los ácidos hexadecenoicos presentes en este aceite. Mientras se realizaba este estudio se dispuso de valores de composiciónen ácidos grasos de los aceites de semilla de otras dos Proteaceasargentinas: Lomatia hirsuta Lam.(Diels)("Radal") y Embothrium coccineum Forst ("Notro"). *Ver cuadro en tesis* El estudio comparativo de los valores de composición en ácidos grasosde estos dos aceites y el de los aceites de Gevuína avellana mol. y Maccadamiaternifolia (este último es el único aceite de proteaceas cuya composiciónse encuentra registrada en la bibliografía)revela que estosaceites son complejos en sus composiciones y que presentan un notablecontenido en ácidos hexadecenoicos(20 a 23% de loa ácidos totales). Esto pareciera ser 1a característica diferencial mía importante de losaceites de semilla de Proteaoeae. Se presentan valores de composición general de la pepita enterey de 1a pepita agotada por hexano de Gevuína avellana Mol. Se ha probadopor cromatografía sobre papel, la presencia de sacarosa y por las mismastécnicas(despues de hidrolisis) se ha demostrado que los polisacaridospresentes en esta semilla son galactanos. Así mismo, y como componentesde los pentosanos presentes se señala la presencia de araboxiloribosanos.

Descripción: Fil: Masih, Samira Abdel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: En las aves canoras, la ontogenia del canto presenta un paralelismo con la adquisición del habla en humanos. Al igual que los humanos, el desarrollo de este comportamiento requiere en primera instancia la exposición a las vocalizaciones típicas de la especie. Luego se necesita un período sensorial motor en el que se practica el canto luego de cual la vocalización se produce de manera estereotipada. Esta última requiere el domino de las instrucciones motoras que gobiernan el aparato vocal y al sistema respiratorio. En esta tesis, se analizaron los gestos de presión de los sacos aéreos involucrados en la producción de canto de canarios adultos. A pesar de que los canarios estudiados estuvieron expuestos a distintos tutores, encontramos que existen gestos de presión que son comunes a todos ellos. Esto nos permitió generar una base de gestos respiratorios cuyos elementos son utilizados por los canarios para construir el canto típico de la especie. La diversidad de estos gestos de presión puede ser generada por un sistema no lineal sencillo. En una segunda etapa se buscó un sistema dinámico que fuera capaz de generar esta diversidad y que fuera lo más sencillo posible. El sistema propuesto es en algún sentido minimal: es la forma normal de un campo vector en la vecindad de una singularidad lineal forzada. Al estar constituido por el mínimo de términos necesarios para generar esta diversidad de gestos de presión, nuestro sistema constituye una restricción para cualquier implementación neuronal que pretende emular estos gestos. Luego se propuso un modelo neuronal que tiene en cuenta las propiedades anatómicas de las neuronas que forman el núcleo RA (Robustus acropalium) constituido por poblaciones excitatorias e inhibitorias. Este segundo modelo también es capaz de generar la diversidad de los patrones de presión y es compatible con la forma normal anteriormente mencionada. La ubicuidad de algunos gestos de presión, aún en aves que no estuvieron sometidas a las mismas experiencias auditivas, nos indujo a preguntarnos por el rol del aprendizaje en la ontogénesis de los mismos. Así, se expuso a canarios juveniles, al inicio del período sensorial motor, a un tratamiento con testosterona, conocido acelerador hormonal del canto en juveniles. Este tratamiento tuvo como resultado un rápido desarrollo del canto en ellos. Luego de 20 días de tratamiento, los gestos de presión producidos por los juveniles fueron similares a los producidos por los adultos aún si la comparación involucra sutiles propiedades morfológicas. De este modo pudimos mostrar que un extenso período sensorial motor no es necesario para producir los gestos de presión típicos involucrados en la producción del canto esta especie; uno de los dos gestos motores fundamentales requeridos para el control del aparato vocal aviar.

Descripción: Fil: Fukuda, Haydeé. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Este trabajo, ha tenido por finalidad confirmarlas conclusiones que Aylward y Wood señalan en Chemistry & Industry (London) N° 46, Nov. 12 (1955) pág. 1479 acerca de la ocurrenciade fenómenos de metanolisis durante la formación de aductosde urea con monoestearato de glicerilo comercial en un mediometanólico al 90% (no especifican si en volumen o en peso). Según ellos, hay una desaparición de monoglicéridos,cuando la cristalización de los compuestos de inclusión ocurredurante un lapso de tiempo prolongado, de acuerdo al siguiente esquema:monoestearato de glicerilo + metanol <----> estearato de metilo + glicerol Frente a lo breve de la publicación (no comprende determinacionesanalíticas) se decidió realizar un trabajo más ampliousando metanol de distintas graduaciones y trabajar con unasustancia más pura. En el cuadro siguiente (ver cuadro en la tesis), se detallan las característicasanalíticas y otras de las distintas fracciones obtenidasdurante el refraccionamiento por metanol de distinta graduación. El trabajo de laboratorio, consistió en: a) preparar un ácido palmítico lo más puro posible, por destilaciónfraccionada a 1 mm de Hg de los ésteres metílicos de un producto comercial. Se obtuvo un producto con 95,7% de ácido palmítico. b) este ácido, se esterificó con un exceso de glicerina lográndoseun producto rico en α-monoglicéridos (39.0%) c) este concentado en monoglicéridos, se sometió a un primerfraccionamiento por metanol absoluto y sobre la fracciónsoluble rica en α-monoglicéridos (66,2) se hizo: d) el fraccionamiento por formación de aductos en medios metanólicosde distinta concentración (100, 90 y 80%). De la observación de los resultados logrados en el curso de las experiencias, surge: 1) La confirmación de la conclusión de Aylward y Wood en elsentido de la ocurrencia de un fenómeno de metanolisiscon formación de ésteres metílicos durante la cristalizaciónlenta de los compuestos de inclusión con urea de monoglicéridosen metanol. 2) Operando con metanol de 100, 90 y 80% en peso, se pudocomprobar que, durante la formación de aductos con ureaa partir de un producto rico en monopalmitato de glicerilo,los fenómenos de metanolisis no son acusables -mediantelas determinaciones analíticas llevadas a cabo- cuandoel metanol es de concentración superior al 90%. En cambio, es evidente la metanolisis con formación depalmitato de metilo cuando se opera con metanol de 80%. Este resultado se pone de manifiesto por las variacionesen los valores de los índices de saponificación e hidroxiloy de los contenidos en α-monoglicéridos de la fracciónde glicéridos involucrada en los compuestos de inclusión. 3) Señálase la probable formación de ésteres de di o poliglicerolesdurante la esterificación de ácidos grasoscon glicerina a 200°C en presencia de cloruro estannosocomo catalizador. 4) Se confirman conclusiones de otros autores en el sentidode que los diglicéridos probablemente forman compuestosde inclusión con más facilidad que los diglicéridos.

Descripción: El trabajo de tesis presentado se refiere a la determinacióncuantitativa del contenido en flúor de hortalizas, en particularlechuga (Lactuca sativa, variedad criolla blanca) y radicheta (Cichorium intybus, variedad fina de cortar) y frutos, de los cualesse eligió el tomate (Lycopersicum esculentum, variedad San Marzano),cultivados en suelos artificialmente regados con soluciónde fluoruro, cuyo principal objeto ha sido establecer la medidaen que se fija el flúor procedente de los suelos. Como líquido deriego se empleó una solución de FNa (conteniendo 5 mg F-/l). Tantola lechuga, la radicheta, como también las plantas de tomate fueroncultivadas en un cantero aislado (localidad de Florida, Provinciade Buenos Aires) a fin de facilitar el riego artificial. Este almácigo, por así llamarlo, podía ser cubierto con un techo especialen caso de lluvia con el objeto de que la tierra únicamentefuera mojada por riego artificial. Operando sobre las plantas enteras de lechuga y radicheta.cosechadas en grado de madurez y sobre los frutos de tomate en idénticoestado, se ha determinado el contenido en flúor por incineraciónen presencia de carbonato de sodio como fijador de halógeno,destilación de flúor como ácido hidrofluosilícico según latécnica de Willard y Winter y determinación final por la técnicacolorimétrica de Lamar. Paralelamente también se efectuaron determinaciones análogas sobre los mismos frutos y vegetales (testigos)cultivados en idénticas condiciones pero sin ser sometidas a riegocon solución fluorada. Los resultados experimentales obtenidos figuran resumidas en elcuadro que se detalla a continuación, en el que se indican los valores extremos de mínimo y máximo para los tres tipos de productos examinados. CONTENIDO EN FLUOR DE PLANTAS DE LECHUGA Y RADICHETA Y DE FRUTOS DE TOMATES PROCEDENTES DE CULTIVOS CON Y SIN RIEGO FLUORADO: (ver cuadro de valores en la tesis). Del cuadro anterior se puede concluir que existe un comportamientomuy diferente en la acumulación de flúor por parte del fruto detomate y de las plantas de lechuga y radicheta. En efecto, promediandolos valores máximos y mínimos hallados y expresados en mg/Kg seco,se observa que el fruto de tomate obtenido con riego fluorurado contiene 2,6 veces más flúor que el procedente de cultivo normal; encambio la lechuga de cultivo fluorurado 27 veces más fluor que elcultivo normal y en el caso de la radicheta el valor observado es 15 veces mayor para el vegetal procedente de riego fluorurado. Los valores de contenido en flúor hallados en frutos de tomatey en plantas de lechuga provenientes de cultivo normal pueden considerarse acordes con los consignados en la literatura para esosmismos productos. La elevada concentración de flúor registrada en las plantas delechuga y radicheta cuando proceden de cultivo fluorurado excede almáximo de 7 mg/Kg tal cual, propuesto por la "Food and Drug Administration" para productos alimenticios de origen vegetal. Estos resultados hacen presumir que la ingestión prolongada y continuada deesos vegetales en forma cruda, cuando proceden de cultivos en suelosricos en flúor o que hayan sido regados en forma obligada con aguasque contienen ese halógeno en concentraciones elevadas, puede teneruna incidencia desfavorable desde el punto de vista nutricional.

Descripción: Estudiamos el siguiente tipo de problemas de segundo orden:u"= g(x,u) + p(x) x ∈ 2 (a,b)⊂R,where g ∈ C([a,b] X R^N,R^N). El objetivo principal de esta tesis es estudiar, bajo distintas condicionesde contorno, qué funciones p ∈ L^2((a,b),R^N) garantizan la existenciade solución. Donde la definición de solución sería dada en cadacaso. En otras palabras, analizamos la imagen del operador semilineal S(u) := u"-g(x,u), considerado como un operador continuo de H ⊂ H^2((a,b),R^N) to L^2((a,b),R^N), donde H es un subespacio cerrado que depende de lascondiciones de contorno. En primer lugar, estudiamos problemas resonantes bajo condicionesperiódicas, que generalizan, por un lado, la ecuación del péndulo forzadoy, por otro, las condiciones de Landesman-Lazer. Consideramos el casovariacional S(u) = u"-∇G(u), para el cual logramos caracterizar Im(S)y dar algunas de sus propiedades topológicas. En segundo lugar, estudiamos problemas con condiciones de contornode radiación, es decir,u'(0) = a0u(0), u'(1) = a1u(1),con a0,a1 > 0. Encontramos una condición de Hartman generalizadaque garantiza existencia de solución. En particular, si g es superlineal,probamos que el operador S es suryectivo. Para este caso, estudiamostambién condiciones necesarias y suficientes para la unicidad o multiplicidadde soluciones. Logramos obtener resultados más precisos para elcaso N = 1 empleando métodos topológicos y variacionales y Teoremade la Función Implícita.

Descripción: El acetilmetilcarbinol o acetoína es un cuerpo quetiene una situación excepcional en el estudio de la sistemáticay biología de las bacterias. Puede decirse que estáentre los primeros cuerpos que pudieron ser reconocidos porun método sencillo y cuya presencia adquirió muy precozmenteun valor taxonómico de primera magnitud. Probablementejunto con el indol ha sido el cuerpo investigado más frecuentemente enla rutina de la investigación bacteriológica. Por ello, son múltiples los métodos para facilitar su formaciónen los medios de cultivo y reconocerlos. La irregularidad de la intensidad de las reacciones dela acetoína y la falta de precisión de algunas indicacionespara llevar a efecto su investigación y su determinacióncuantitativa, decidieron la elección del tema de tesis queconsiste en el estudio comparativo de los métodos para demostrarla presencia del acetilmetilcarbinol y la utilizaciónde los mejores métodos de cultivo para lograr dichopropósito. Además nos propusimos estudiar la posibilidad de aplicaciónde un buen método de determinación cuantitativapara poderlo utilizar en forma de micro-método. Por último, se resolvió investigar los problemasvinculados a la formación y desaparición de la acetoína,fenómenos que están relacionados con la utiliZación de dichasubstancia como fuente de carbono por las bacterias. En la realización de este trabajo de tesis se ha seguidoel plan que se detalla a continuación: 1°. Elección de material y de métodos y enumeracióny descripción de los mismos. 2°. Investigación experimental. En el curso de lasinvestigaciones experimentales se realizó el examen de losmétodos cualitativos a los efectos de determinar su sensibilidady aplicabilidad. Se comparó el resultado de la aplicaciónde dichos métodos a líquidos fermentados, se estudióy adaptó un método cuantitativo para la determinaciónde pequeñas cantidades de acetoína y por último se investigóla desaparición del acetilmetilcarbinol y la utilizacióndel mismo como fuente de carbono.

Descripción: Fil: Fernández Menéndez, Blas R.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: El deterioro de leches en polvo, por fenómenos da destrucciónoxidativa es facilitado por su alto contenido en materiasgrasas y el elevado grado de dispersión da las mismas. En la literatura se consignan trabajos en éste sentido, conmiras a obviar los serios inconvenientes, especialmente desde elpunto de vista económico. El Dr. Pedro Cattáneo me sugirió ensayar el ácido nordihidroguayaréticoen grasa de leche, como paso previo a su posible utilizacióncomo antioxidante en polvo de leches enteras. Desde éste puntode vista ha sido encarado el presente trabajo.

Descripción: Fil: Ruth, Emiliano F.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: La cera de la Bulnesia retama es una cera de incipiente aplicación en nuestro medio y proviene de la planta mencionada que se desarrolla en las provincias de San Juan, Mendoza, Catamarca, La Rioja, Córdoba y San Luis. Su interés económico radica en su elevado punto de fusión. Al estudiar su composición se utilizó cera extraída con tricloroetileno, previa purificación con etanol al 40% a 50°C (Ver Cuadro I). De la cera saponificada con hidróxido de potasio alcohólico se separaron cinco fracciones de las cuales fueron estudiadas las fracciones A2, A3, A4 y A5. (Ver Cuadros II y III). Las fracciones A2 y A3 de los ácidos totales (que son las más abundantes) fueron percoladas, luego de haber sido metiladas, en columna de urea para investigar ácidos ramificados (Ver Cuadros V). Los ésteres a su vez se pasaron por una columna de alúmina grado III/IV de Brockman, separando una fracción de ésteres normales, otra de hidroxiácidos metilados y una fracción de ácidos provenientes de una demetilación de la columna (Ver Cuadro VI). Los ésteres normales fueron estudiados: por destilación amplificada aplicando el método de Weitkamp de adicionar a los ésteres un aceite lubricante de rango de destilación adecuado y de determinar posteriormente los índices de saponificación de las diversas fracciones para obtener una curva de índices de saponificación versus cantidad destilada. (Ver Cuadros VIII y IX) (Ver Gráficos I y II). Las primeras porciones, compuestas por ácidos de hasta 24 átomos de carbono, fueron cromatografiados por el método de Horvard y Martin (cromatografía en fase invertida de celite-diclorodimetilsilano) demostrándose la existencia de ácidos desde C16 hasta C24 (Ver Gráficos III). Con todos los datos pudo calcularse la composición aproximada en ácidos de la cera (los ácidos constituyen el 53,9% y el insaponificable el 45,5% del total de la cera): a) Saturados de cadena normal: 69,9% C14: Rastros C16: 2,3% C20: 1,0% C22: 1,3% C24: 1,2% C26: 6,3% C28: 9,2% C30: 23,4% C32: 17,4% C34: 5,0% b) Hidroxilados: 7,4% c) Otros ácidos (probablemente similares a los anteriores y en similar distribución): 13,1% d) Resinosos (Equiv. Sap. = 365,2): 0,4% e) No investigados (Equiv. Sap. = 403,6): 4,8% f) No investigados (Equiv. Sap. = 444,9): 4,4%

Descripción: Various bi- and polifunctional hydroxyalkanethiols were chemospecificallyacylated to O-acylesters by lipase-catalyzed transesterifications in organic media. Inaddition, hydroxyalkanethiols with two hydroxyl groups exhibited regiospecificity orregioselectivity, depending on the nature of both the substrate and the lipase. As the chainlength of the α,ω-hydroxyalkanethiol increased, the reaction was limited to smaller acylmoieties. Experimental conditions under which enzymatic acylations were carried out andtheir results are presented and discussed. Biocatalyzed transesterifications allowed thepreparation of twenty-four new esters. The preparation of some α,ω-hydroxyalkanethiolsand the mass spectra of substrates and products are also presented and discussed.

Descripción: En esta tesis estudiamos la respuesta fisiológica de individuos de C. quadricarinatus, una langosta de agua dulce originaria de los ríos del norte de Australia, expuestos a condiciones de estrés térmico, salino, o a la combinación de ambos factores. Demostramos que la combinación de ambos tratamientos produjo una inhibición en la ganancia de peso de los juveniles avanzados expuestos. El efecto de la temperatura sobre la fisiología del animal fue notable; la disminución de la temperatura impidió, en los juveniles expuestos, la eficiente regulación de los niveles de Na+ y K+ y generó incrementos superiores al 100 % en los niveles de glucosa, en hemolinfa. A su vez, la tasa metabólica varió levemente ante las diferentes condiciones ensayadas. Con el objetivo de estudiar la participación de la Hormona Hiperglucemiante de Crustáceos (CHH) en este tipo de estrés, medimos sus niveles de expresión por RT-PCR. Con ello demostramos que CHH se induce, bajo condiciones de estrés, en el tejido nervioso del pedúnculo ocular, sitio en el cual CHH es sintetizada, almacenada y secretada. Luego de producir CHH recombinante (rCqCHH) en bacterias, demostramos que la administración prolongada de esta hormona condujo a una disminución en los niveles de glucógeno en el hepatopáncreas y a un aumento de glucosa en la hemolinfa. Contrariamente, los niveles de glucógeno se mantuvieron estables en el músculo abdominal, luego de la administración de rCqCHH. Demostramos también que el aumento de los iones Na+ y K+ inducido por condiciones de alta salinidad, disminuyó por la administración de rCqCHH. Finalmente, las condiciones de estrés utilizadas en este trabajo condujeron a una desregulación en la expresión de PEPCK, enzima fundamental de la gluconeogénesis. En su conjunto, estos resultados sugieren una participación directa de la hormona CHH en el metabolismo energético asociado al mantenimiento de la homeostasis bajo condiciones de estrés térmico y salino. En línea con esta hipótesis, demostramos que bajo las condiciones de estrés mencionadas, los animales inyectados con rCqCHH poseen un significativo incremento en la ganancia de peso (200-300 %). El descubrimiento de la función de CHH como modulador del metabolismo energético en condiciones de estrés térmico y salino puede contribuir al desarrollo de nuevas tecnologías que puedan ser utilizadas para estimular el crecimiento de C. quadricarinatus en condiciones subóptimas, favoreciendo así la producción de la especie con fines comerciales.

Descripción: En este trabajo se desarrolla la síntesis, la caracterización estructural y el estudio de las propiedades espectroscópicas y electroquímicas de una familia de compuestos dinucleares y trinucleares del grupo VIII, puenteados por el ligando cianuro. El objetivo principal es estudiar el acoplamiento electrónico entre los centros metálicos y maximizar dicha interacción, ajustando las variables más determinantes. La reacción directa entre monómeros de Ru(II), conteniendo piridinas de basicidad variable, y un hexacianometalato (III) (Fe(III) o Co(III), da lugar a dímeros de fórmula trans-[(L)RuII(py)4(μ-NC)FeIII(CN)5]- y [RuII(DMAP)5(μ-NC)MIII(CN)5]-, según la identidad del fragmento central. La interpretación de las propiedades espectroscópicas, haciendo uso del modelo de dos estados de Mulliken - Hush, revela que estos sistemas aumentan la interacción metal - metal, a medida que ambos fragmentos se acercan en energía. Aún así, se observa que todos ellos pertenecen a la Clase II, según la clasificación de Robin - Day, siendo dominante la configuración [RuII-FeIII]. Sin embargo, el comportamiento espectroscópico observado para el dímero [RuII(DMAP)5(μ-NC)FeIII(CN)5]- y el trímero de valencia mixta [(CN)5FeII(μ-CN)RuII(DMAP)5(μ-NC)FeIII(CN)5]5-, en metanol, evidenciando un incremento en la comunicación electrónica entre los centros metálicos, propició la preparación de compuestos conteniendo osmio, bajo el supuesto de que la mayor extensión radial de los orbitales d del osmio incrementaría la mezcla metal - metal. De esta forma, se prepararon y estudiaron los sistemas trinucleares, de fórmula [(CN)5OsIII(μ-CN)RuII(DMAP)5(μ-NC)MIII(CN)5]4- (M: Co(III), Os(III), Fe(III)). La estructura cristalina de estos compuestos evidencia la presencia de arreglos lineales. Las distancias de enlace en el sistema simétrico sugieren una interacción extendida a lo largo del eje internuclear. Las propiedades espectroscópicas de los sistemas asimétricos revelan que la interacción rutenio - osmio es la que domina. El sistema simétrico, en metanol, presenta un comportamiento próximo a la delocalización electrónica (Clase III). Sin embargo, la especie de valencia mixta no exhibe un incremento en el acoplamiento donor - aceptor, debido a la fuerte interacción entre el fragmento {OsII(CN)5} y el solvente, desacoplando la interacción extendida a lo largo del eje internuclear. Estos resultados establecen un límite de máxima interacción para estos sistemas.

Descripción: Fil: Oviedo, Paola Soledad. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: En este trabajo se estudiaron problemas de epidemias influenciados por fenómenos sociales. Se plantearon modelos matemáticos en términos de ecuaciones integro diferenciales,y para estas se analizaron cuestiones de existencia, unicidad, dependencia continua, y comportamiento asintótico. Se estudia el acople de dos dinámicas, la de un modelo SIS para la transmisión de una enfermedad, con la de un modelo de opinión donde los individuos cambian sus medidas de prevención en un continuo a consecuencia de la interacción entre ellos y de la evolución de la epidemia. Se plantea un modelo SIS discreto basado en agentes. Cada agente tiene una opinión propia que influye su tasa de contagio. Con una heurıstica despejamos ecuaciones de campo medio para la proporción de infectados y la opinión media de la población. Despejamos los equilibrios y hacemos un análisis de la estabilidad. Se compara las simulaciones de los modelos de agentes con los equilibrios encontrados para verificar la legitimidad de las ecuaciones. El modelo discreto se generaliza con una ecuación cinética de tipo Boltzmann. La existencia y unicidad de soluciones en un espacio de medidas positivas sale utilizando teoremas de punto fijo, y se prueba que las soluciones encontradas efectivamente modelan una dinámica de enfermedad. Luego, se analiza el paso al límite cuando se rescala el tiempo, y se obtiene un sistema de ecuaciones en derivadas parciales de tipo Fokker-Planck, que son más sencillas de trabajar del punto de vista numérico. En la última parte de la tesis se estudian dos generalizaciones, considerando en una la influencia de una campaña gubernamental para implementar medidas de prevención, y en la otra, agregando individuos refractarios a cumplir estas medidas. Para ambas, se vuelven a plantear los modelos discretos de agentes y sus respectivas ecuaciones de campo medio. Luego pasamos a una ecuación de tipo Boltzmann solamente para la dinámica de opinión. La existencia y unicidad de soluciones se obtiene por un método basado en la prueba de Peano de existencia de soluciones para ecuaciones diferenciales ordinarias, pero extendido a una ecuación diferencial ordinaria en un espacio de Banach. La idea es construir una poligonal en el espíritu del método de Euler, desplazándose en la dirección del gradiente.

Descripción: Fil: Misetich, Antonio A.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: El pool de vesículas inmediatamente liberables (IRP) es un pequeño pool vesicular que corresponde aproximadamente al 25% del pool de vesículas preparadas para liberarse. Se piensa que el IRP, a diferencia del resto del pool de vesículas preparadas para ser liberadas (RRP), se libera frente a pulsos despolarizantes de corta duración debido a su proximidad a los canales de Ca^2+. Pusimos a prueba esta hipótesis utilizando buffers de Ca^2+ exógenos rápidos y lentos, y toxinas especificas que permitieron asociar específicamente a la exocitosis de IRP con los canales de Ca^2+ de tipo P/Q. Estos resultados son coherentes con lo observado previamente por nosotros en ratones KO de la subunidad α1A. Esto nos llevó a pensar en la posibilidad de que este acople funcional fuera generado a través de una interacción molecular específica. Evaluamos que dicha interacción estuviera mediada por la secuencia synprint (synaptic protein interaction site) ubicada en un loop intracelular de la subunidad α1A de los canales de Ca^2+ P/Q y N. Es conocido que el synprint puede interactuar con la maquinaria exocitótica, siendo esto determinante en el acople asociado a la exocitosis sincrónica en terminales nerviosas. De acuerdo con esta hipótesis, en diversos experimentos encontramos que las células de ratón en cultivo transfectadas con la secuencia del synprint (para interferir en la interacción canal / vesícula) presentan una exocitosis de IRP marcadamente disminuida, mientras que fases menos acopladas al estímulo no se hallar alteradas. La segunda parte de esta tesis está enfocada en analizar los límites funcionales del IRP frente a una estimulación que simule las condiciones fisiológicas de las células cromafines, como son los trenes de potenciales de acción a frecuencias en el rango 0.2-10 Hz. Descubrimos una fracción de IRP que se libera particularmente frente a potenciales de acción que es capaz de recuperarse velozmente (τ ~ 1 seg) luego de haber sido deprimida. Los resultados muestran que en nuestras condiciones experimentales dicho subpool de IRP le permite a las células cromafines mantener una liberación eficiente y sostenida a bajas frecuencias

Descripción: Fil: Drelichman, Irene. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: En este trabajo estudiamos propiedades de acotación fuertes y débiles de operadores fuertemente singulares laterales en espacios Lp ω, donde ω es un peso en la clase de Sawyer Ap^+ . Es de particular interés el tipo débil (1, 1) con peso que no era conocido. Probamos y utilizamos un teorema de interpolación entre espacios de Hardy laterales, el cual obtuvimos gracias a una descomposición atómica con la propiedad de que cada átomo tiene un vecino soportado a su derecha. Para obtener esta descomposición desarrollamos una sencilla técnica que permite partir un átomo en una suma de otros átomos. Utilizando la descomposición mencionada, también probamos un teorema de multiplicadores de Hörmander en H+^1 (ω).

Descripción: El VWF es una glicoproteína adhesiva, sintetizada en las CE y megacariocitos. Se sintetiza en forma monomérica, luego se organiza en dímeros y se multimeriza. El VWF media la adhesión de plaquetas al subendotelio vascular dañado y lel transporte del factor FVIII. La ADAMTS13, proteasa que cliva al VWF, pertenece a la familia de metaloproteasas ADAMTS, llamadas así por la combinación característica de una desintegrina y una metaloproteasa con motivos trombospondina tipo 1. La ADAMTS13 es sintetizada en el hígado. Además, se ha demostrado que se sintetiza y almacena en las CE, y que tiene actividad en los lisados celulares en condiciones estáticas y de flujo. La ADAMTS13 está involucrada en el proceso fisiológico de clivar a los multímeros extragrandes altamente trombogénicos, que cuando están presentes en el plasma o en la superficie de las CE llevan a una agregación intravascular y a la formación de un trombo plaquetario. Hemos observado que los niveles de ADAMTS13 descienden, mientras que los del VWF aumentan a medida que progresa el embarazo. En 1972, varios autores han descripto el aumento del 17β estradiol. También se ha observado que la administración de estradiol a las CE en dosis no fisiológicas produce un aumento de VWF. Hay antecedentes acerca de la acción de las hormonas determinantes del sexo en la muerte o proliferación celular en distintas líneas celulares y cultivos primarios. Se demostró la existencia de un factor embrionario liberador de histamina y una alta expresión de receptores para histamina durante la gestación en humanos. Además, se observó un aumento en los niveles de histamina en las últimas semanas de gestación en modelos de ratas y hamsters dorados. Los objetivos de esta tesis fueron: 1- analizar si los cambios hormonales que inducen o inhiben la síntesis o liberación de VWF y ADAMTS13 tienen influencia en la muerte o proliferación celular y 2- qué modificaciones producen las hormonas y concentraciones altas de histamina en la producción de VWF y ADAMTS13. Los experimentos se realizaron en cultivos de HUVEC. Se analizaron los efectos de las hormonas, a distintas dosis, en la proliferación o apoptosis, mediante el uso de técnicas de citometría de flujo y ensayo por colorimetría (MTS). Para evaluar el mecanismo de señalización se analizó la fosforilación de MAPK utilizando la técnica de SDS-PAGE e inmunotransferencia. Se observó que el efecto proliferativo del estradiol en HUVEC, ocurre a través de un aumento de la fosforilación de ERK2, inducido por el estímulo de la deprivación del suero. La progesterona y testosterona en dosis suprafisiológicas promovieron la apoptosis de HUVEC vía activación de p38 y JNK. Además se analizaron los niveles de mRNA (por Real Time PCR) y proteína intracelular y liberada (por SDS-PAGE e inmunotransferencia y ELISA) de VWF y ADAMTS13, en respuesta a los distintos tratamientos hormonales y con histamina. El estradiol, la progesterona y testosterona, no produjeron ningun cambio en la liberacion de VWF en las HUVEC, sin embargo combinadas con histamina, agonista de la liberación de VWF, produjeron inhibición de la actividad de la histamina. Por otra parte el estradiol, la progesterona y la testosterona no produjeron cambios significativos en la liberación de ADAMTS13, sin embargo el tratamiento con histamina indujo una disminución en los niveles de ADAMTS13, que fue revertida en la combinación con estradiol y progesterona. Finalmente, el estradiol, produjo un aumento en los niveles de mRNA de VWF y ADAMTS13. En la síntesis de ambos mRNA, el estradiol y la histamina presentan un efecto antagónico y la combinación de la progesterona y la histamina presentarían un efecto sinérgico.

Descripción: La toxina perfringens contenida en los cultivos de Clostridium welchii, tipo A., hemolisa los glóbulos rojos, y como demostró Todd (1941), es lábil al oxígeno y está relacionada conla streptolisina 0, con la cual posee comunidad antigénica. Eneste trabajo nos propusimos demostrar las condiciones ofactores que favorecen o inhiben la acción del oxígeno. Además,como al parecer se trata ds un sistema de óxido reducción, intentamosllegar experimentalmente a determinar de que tipo erael referido sistema, es decir, que sustancia o grupo de sustancias,rigen por cambios sucesivos esta clase de fenómenos. Elprimer punto que debimos resolver fué el siguiente: encontraruna sustancia reductora tal que, al ser adicionada a latoxina, no permita la oxidación de ésta. Así se puede mantenerel material con poder hemolítico lo suficientemente elevado,como para medir sus fluctuaciones, cuando se somete la toxinaa otros procesos. Ademas,la toxina entera, es decir, el filtrado de loscultivos de Clostridium welchii, tipo A, posee una composiciónextremadamente compleja. Las sustancias inertes que acompañan alprincipio hemolítico, producen muchas veces reacciones que interfierena las de la hemolisina propiamente dicha. Por esta razón,el segundo punto que tratamos de resolver fué el siguiente:separar y purificar el principio hemolítico. Para elloutilizamos los métodos clásicos de precipitación de la fracciónproteica por acción del sulfato de amonio a saturación, y luegopurificación posterior de esta por el método de diálisis. Así seobtuvieron varias fracciones, que al ser tratadas por agentesreactivantes, tales como el hidrosulfito de sodio o elácido tioglicólico, nos condujeron a resultados - en base a los cualespodemos sugerir - la existencia de una sustancia particular,presente en las toxinas enteras, que permite la acción reactivadoradel ácido tioglicólico, ya que al desaparecer esasustancia, la acción es nula o contraria a la reactivación. Lasexperiencias de oxidación por otros agentes, talescomo el iodo, o el ferricianuro de potasio, nos llevaron ademostrar que en estos casos, la inactivación de la toxina se llevaa cabo en forma irreversible, es decir al ser tratadanuevamente con hidrosulfito de sodio o con ácido tioglicólico no regenerarsu capacidad hemolítica. Estas experiencias se hicieronen base a las que ya habían efectuado C.V.Smythe y T.H. Harris (1940), con un determinado grupo de estreptococos hemolíticos. La interpretación de los resultados de estas experienciasde oxidación, así como la individualización de lassustancias cuya existencia fué anteriormente sugerida, se hacen muy dificultosasdebido a que, como todavia el Clostridiumwelchii, se cultiva en medios de composición compleja, las conclusionesde las experiencias efectuadas con esta clase de filtradospueden ser, a veces, erroneas o dispares. Por eso creemos,que el estudio racional de estos sistemas podrá ser encarado conmayores perspectivas de éxito cuando se llegue a cultivar el Clostridium welchii, en medios sintéticos. Sepuede atribuir además, a esa extrema complejidad enla composición de los flltrados, la inconstancia en los datosobtenidos cuando se trató de investigar la presencia de glutationy citocromo.

Descripción: Los virus dengue (DENV) y Zika (ZIKV), pertenecientes al género Flavivirus dentro de la familia Flaviviridae, son importantes patógenos para el hombre para los cuales no se dispone aún de un tratamiento antiviral específico. Ambos se transmiten al hombre a través de la picadura de mosquitos del género Aedes, pero en el caso de ZIKV también se ha comprobado la transmisión congénita, perinatal y sexual. La infección por cualquiera de los cuatro serotipos de DENV puede resultar en una enfermedad febril benigna o en patologías severas conocidas como dengue grave. Si bien la infección por ZIKV suele ser asintomática o presentarse como una enfermedad febril, la infección durante el embarazo aumenta el riesgo de microcefalia, daño cerebral y anomalías congénitas. Por otra parte, estudios retrospectivos sugieren que la infección por ZIKV estaría asociada al desarrollo del síndrome neurológico de Guillain- Barré. El presente trabajo tuvo como objetivos la evaluación y caracterización de la actividad antiviral in vitro de β-carbolinas naturales y sintéticas frente a DENV y el estudio del efecto inhibitorio de la anisomicina frente a DENV y otros flavivirus en cultivos celulares, así como la evaluación de su eficacia en un modelo animal de infección por ZIKV. Se evaluó la actividad antiviral de un grupo de β-carbolinas naturales y sus derivados sintéticos frente a DENV-2 en cultivos celulares. Se determinó que el harmol, de origen vegetal, y un derivado sintético de la harmina, la 9N-metilharmina, exhiben efecto inhibitorio sobre la producción de DENV-2, siendo menos activos frente al resto de los serotipos de DENV. La caracterización del modo de acción antiviral de la 9N-metilharmina frente a DENV-2 demostró que el compuesto no afecta ni las etapas iniciales de la infección ni la síntesis de ARN viral. La 9N-metilharmina inhibiría la maduración y liberación de las partículas virales al medio extracelular impidiendo la propagación de la infección. Se determinó además que el efecto inhibitorio del compuesto no estaría relacionado con su capacidad de modular la vía de señalización celular p38 dependiente de proteínas quinasas activadas por mitógenos (p38 MAPK). Por su parte la anisomicina, un activador de la vía p38 MAPK, exhibió actividad antiviral frente a los cuatro serotipos de DENV y frente a aislamientos clínicos de DENV-2. Su efecto inhibitorio se demostró tanto en cultivos de células Vero como en líneas celulares humanas. Las cinéticas de entrada y de desnudamiento viral no fueron afectadas por el compuesto. Por el contrario, el tratamiento con anisomicina provocó una fuerte inhibición de la expresión de proteínas virales y de la síntesis de ARN viral indicando que el compuesto inhibe la síntesis de macromoléculas virales. La realización de ensayos enzimáticos permitió establecer que este compuesto no afecta de manera directa la funcionalidad de la proteína viral NS5. Por otra parte, el tratamiento con el compuesto alteró la cinética de activación de la vía p38 MAPK inducida por la infección viral. Dado que la anisomicina exhibió también efecto inhibitorio frente a otros flavivirus, se decidió evaluar su eficacia antiviral en un modelo animal de infección por ZIKV. El tratamiento con anisomicina de ratones AG129 infectados con ZIKV mostró un efecto reverso del compuesto, mientras la dosis más alta de compuesto ensayada produjo un efecto exacerbado de la infección viral, la dosis más baja empleada provocó el retraso de la muerte de los animales y una disminución significativa de la carga viral respecto a los animales tratados con placebo. En conclusión, en este trabajo se logró identificar dos tipos de alcaloides con actividad antiviral frente a los flavivirus, siendo la anisomicina el compuesto que mostró mayor eficacia y selectividad in vitro. Los resultados obtenidos en el ensayo in vivo sugieren que se requiere la realización de nuevos esquemas de tratamiento a fin de determinar el potencial terapéutico de la anisomicina para hacer frente a la infección por ZIKV.

Descripción: Fil: Wachsman, Mónica Beatriz. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Meliacina (MA), un principio antiviral presente en las hojas de la planta Meliaazedarach L., es capaz de inhibir in-vitro la multiplicación de un amplio espectro de virus,algunos patógenos para el hombre como HSV-1 y el virus Junín (agente de la fiebrehemorrágica argentina), entre otros. El tratamiento con MA de células en cultivo antes de lainfección (pretratamiento) también desencadena un estado antiviral que afecta lamultiplicación de diferentes virus. En el presente trabajo de tesis los objetivos planteadosfueron, caracterizar el establecimiento del estado refractario a la infección viral en células Vero y determinar el mecanismo de acción de MA sobre el virus de la estomatitis vesicular (VSV), elegido como modelo de estudio. Los resultados obtenidos al utilizar inhibidores dediferentes funciones o procesos celulares permiten concluir que para inducir el estadoantiviral MA no requiere de los mecanismos de transcripción y traducción celulares activos;ni de la paiticipación de la PKR ni the ninguna otra quinasa o fosfatasa de Ser/Thr, mientrasque, tanto la actinomicina D como el vanadato y la tirfostina B46 potenciaron suestablecimiento. Al estudiar el efecto de MA sobre distintos pasos del ciclo de multiplicaciónde VSV se logró identificar al desnudamiento y al transporte de la glicoproteína G cómo losblancos de acción del pre y del post-tramiento, respectivamente. Considerando que, ambosprocesos tienen lugar en compartimentos celulares ácidos (endosomas y sistema de Golgi) yque hay una correlación entre la acción antiviral y la basificación que MA provoca en losendosomas, se plantea la hipótesis de que la acción antiviral de MA es una consecuenciadirecta de su efecto sobre la ATPasa vacuolar responsable de la acidificación de dichasorganelas.

Descripción: Las enfermedades infecciosas ocasionadas por virusrepresentan aún en muchoscasos un problema a resolver dentrodel campo de la medicina humana. Es conocido que la forma másefectiva de combatirlas es mediante la prevención por laaplicación de vacunas especificas, tal comoha ocurrido porejemplo con la viruela, la poliomielitis y el sarampión. Sinembargo, hoy en dia existen muchas enfermedades virales paralas que no se han podido desarrollar vacunas efectivas. Tales el caso de las infecciones herpéticas originadas por virusherpes simplex tipo 1 y 2 (HSV-1 y HSV-2), citomegalovirushumano (HCMV)y varicella-zoster (VZV), diarreas producidaspor rotavirus, algunas enfermedades respiratorias ocasionadaspor adenovirus y virus respiratorio sincicial (RSV), y porúltimo, el síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA)producido por el virus de la inmunodeficiencia humana (HIV). En todos estos casos la única forma de enfrentar laenfermedad es mediante la quimioterapia. La detección de un número creciente de casos de SIDA consu secuela de enfermedad y muerte es precisamente uno de losfactores que más ha motivado e impulsado el desarrollo deantivirales. Dado que en los pacientes con SIDA como en otrosprocesos de inmunodepresión se manifiestan con mayorseveridad las infecciones con HSV y HCMV, además de ensayardrogas que sean efectivas contra HIV, también se trabajaintensamente en la búsqueda de compuestos activos contradichos agentes. El presente trabajo de tesis constituye un aporte dentrode este campo, abordando el estudio y la caracterización dela actividad antiherpética de polisacáridos sulfatadosaislados a partir de algas marinas.

Descripción: Se investigó la variación de la actividad bacteriofágica para bacteriasde los grupos coli-salmonella-disentérico y lasupervivencia de bacterias de los grupos ooli-salmonella duranteel proceso de digestión a 37° y 55°c de barro cloacal. Los ensayos se efectuaron con muestras de barro cloacalde la ciudad de Buenos Aires procedentes de la Estación de Bombasde Wilde y obtenidas por sedimentación directa del líquido cloacal. Para el aislamiento del bacteriófago se empleó el siguientemétodo: la muestra de barro, cuyo pH fué ajustado previamente aun valor próximo a 7.5, fué adicionada de caldonutritivo y enriquecida con un cultivo jóven de la bacteria susceptible. Luego de incubar a 37° durante 24 horas se filtró primero porpapel de filtro y luego por bujía Berkefeld W. La actividad lítica se ensayó con la técnica de las dilucionesen serie del filtrado en caldo nutritivo (hasta ladilución 10^10) y subsiguiente siembra con un cultivo jóven de bacteriasy por la acción de una gota del filtrado original sobre una capauniforme en agar en cajas de Petri de un cultivo de la bacteria susceptible. La investigación de las bacterias del grupo salmonellase hizo empleando como medio de enriquecimiento el de Kauffmann-Müller (doble concentración); y como medio de aislamiento el de Kristensen, Lester y Jürgens (agar verde brillante) y el agar lactosa-tornasol. Para el E. coli (tipo I) se empleó el medio de Mc Conckey. Durante todos los ensayos de digestión de los barros se observó una gradual disminución de la actividad bacteriofágica hasta su anulación completa y una rápida desaparición de las bacterias ensayadas.

Descripción: De acuerdo a los objetivos planteados en este trabajo, hemos investigado laasociación entre componentes subcelulares del parásito con el gatillado y/odesarrollo del daño tisular en la forma crónica de la Enfermedad de Chagas. Nuestro primer paso fue investigar los componentes de la fracción CSresponsables de la respuesta inmune humoral en los PChCr y en particular,identificar aquellos que pudieren ser reconocidos exclusivamente por los PChCrcon cardiopatía severa. Para ello CS fue separada empleando geles depoliacrilamida, transferencia a hojas de nitrocelulosa y enfrentada con sueros de PChCr en distintos estadios clínicos. Estos estudios revelaron 32 componentesproteicos con PM entre 88 y 15 kDa, 30 de los cuales junto a 1 no visible por tinciónpara proteinas fueron reconocidos por al menos 1 de los 36 sueros ensayados,cada uno de los cuales reconoció entre 4 y 20 (media=12.6) bandas en CS. Si bienno pudo determinarse un perfil de reconocimiento particular para los PChCr condistinto compromiso clínico, se observó que el 75 % de los sueros reconocía 2polipéptidos con PM aparente de 52 y 42/42 kDa. En un segundo momento intentamos una caracterización química inicial delas estructuras peptídicas antigénicas de CS y Mc. El tratamiento con ácidoperiódico disminuyó significativamente la reactividad de los sueros contra ambasfracciones, indicando el rol central de los carbohidratos en su antigenicidad. Eltratamiento de CS con tripsina eliminó prácticamente toda la reactividad con lossueros de PChCr. El calentamiento y la reducción con 2 ME aunque tambiénredujeron la capacidad total de unión de los anticuerpos hacia CS y Mc, el efectofue más pronunciado para Mc. Sin embargo estos estudios revelaron que elantígeno calentado y reducido se resuelve en un mayor número de polipéptidosque el antígeno nativo, o solamente calentado o reducido. Con el objetivo de purificar antígenos relevantes se produjeron AcMo contra Mc. La reactividad anti-Mc y anti-CS de dichos AcMo fue evaluada empleandotécnicas de ELISA, dot blotting (DB) e inmunoblotting (WB). Se seleccionaron así 45hibridomas reactivos con Mc (28), Mc y CS (14) y CS (3). Entre los hibridomasproductores de anticuerpos capaces de reconocer en Mc al menos un polipéptidocon PM aparente mayor o igual a 50 kDa se seleccionaron 4 para su clonado. Deestos 4 AcMo, todos del tipo IgM, fue posible aislar un total de 24 clones: 3 a partirdel hibridoma 1A10, 12 a partir de 1D10, 2 a partir de 3C4 y 7 a partir de 2E9, lamayoría de los cuales se mostró reactivo con varios polipéptidos (3 a 9) en el mismogel. Si bien el rendimiento de los procesos de clonado fue diverso, de 2 a 23 clonesproductores de AcMo reactivos con Mc según el hibridoma de partida, la eficacia delclonado fue buena: en 3 de los 4 casos fue posible identificar y aislar clonesproductores de Ac reactivos con polipéptidos del tamaño buscado, y en todos estoscasos con reactividad más restringida que la del hibridoma original. A fin de investigar la presencia de determinantes antigénicos comunes al T. cruzi y a tejidos humanos se estudió la reactividad de los AcMo con muestras detejidos humanos, obtenidas a partir de dadores cadavéricos no chagásicos, libresde enfermedades autoinmunes, coronarias y tumorales. Empleando ensayos de DBse estudió la reactividad anti-miocardio (MIO) y anti-músculo esquelético (MES) de 52 sobrenadantes de hibridomas reactivos con Mc y/o CS y 11 sobrenadantesnegativos con ambas fracciones. En este primer estudio 27 de los 52 sobrenadantesde hibridomas reactivos con Mc y/o CS resultaron reactivos con MIO y/o MES. Conel propósito de establecer el perfil polipeptídico de MIO y MES humano amboshomogenatos fueron separados utilizando geles desnaturalizantes depoliacrilamida y transferidos a nitrocelulosa. Una porción de la misma se coloreócon Negro de Amido para evidenciar proteínas y la otra porción se aplicó a ladeterminación de glicoproteínas con Concanavalina A, para identificar residuoshidrocarbonados ricos en manosa y glucosa. MIO presentó 25 polipéptidos en elrango 79-15 kDa, 6 de los cuales contenían residuos azucarados, mientras MESreveló 24 bandas polipeptídicas, 7 de las cuales contenían hidratos de carbono. Una vez definido el perfil de MIO y MES se realizaron ensayos de WB paraidentificar los polipéptidos reconocidos por los AcMo en ellos. La fracción Mc es obtenida a partir de parásitos cultivados en un medio nodefinido que contiene homogeneizado de corazón bovino (TCM). Es entoncesposible que componentes del medio de cultivo acompañen la purificación y hayan “ensuciado” la producción y selección de los AcMo, que así podrían incluiranticuerpos específicos para corazón bovino capaces de dar reacción cruzada conmiocardio humano. A fin de investigar esta posibilidad se determinó en primer lugarla reactividad de dichos AcMo contra TCM y en aquellos casos donde esta fueencontrada se realizaron experimentos de absorción cuyos resultados demostraronque si bien para algunos AcMo existe reactividad cruzada entre Mc y TCM, lareactividad de los mismos hacia TCM es despreciable frente a la reactividad hacia Mc. Con el propósito de determinar no sólo la presencia sino también lalocalización subcelular de los antígenos de MIO y MES humano reconocidos por los AcMo anti-Mc se realizaron experimentos de inmunohistoquímica. Además seevaluó la especificidad de huésped y tejido empleando tejidos humanos y dehamster. En particular los AcMo ensayados (1A10C11, 1F3G2, 5A9B11 y 5F2)reconocieron estructuras en el MES humano y en MIO humano y de hamster. Entodos los casos los AcMo se unen a antígenos intracitoplasmáticos, y en algunoscasos (5A9B11 y 5F2) también a antígenos de la capa muscular de los vasos. El hecho de haber demostrado reactividad contra M10 de hamster dejóabierta la posibilidad de estudiar la actividad biológica de los mismos en modelosexperimentales y por lo tanto consideramos importante estudiar el grado dehomología entre los componentes del miocardio de distintos mamíferos. El perfilpolipeptídico obtenido por la separación electroforética de homogenatos de MIOmostró un importante grado de homologia entre especies. Por otro lado la realización de ensayos de Inmunoiluorescencia sobreparásitos fijados mostró que los epitopos reconocidos por los AcMo, a pesar depertenecer originalmente a una fracción interna del parásito, están tambiénrepresentados en la superficie y/o el flagelo del mismo. Otros estudios decaracterización de los AcMo anti-Mc revelaron que gran parte de los epitoposreconocidos por los mismos son al menos parcialmente de naturaleza glucídica. Enparticular entre los AcMo con reactividad cruzada dos (1A10C11 y 1F3G2)reconocen parcialmente epitopos de naturaleza glucídica mientras en los dosrestantes (5A9B11 y 5F2) los residuos hidrocarbonados no forman parte del sitio reconocido. Para determinar si los epitopos con reactividad cruzada eran reconocidos porlos PChCr y evaluar se ello tiene alguna importancia desde el punto de vistabiológico, se realizaron ensayos de inhibición. La capacidad para inmunoinhibir lareacción del AcMo 5F2 con Mc fue significativamente mayor entre los sueros de PChCr que en los controles. Más aún, 5F2 fue capaz de diferenciar a la poblaciónde PChCr sin compromiso cardíaco, o con grado mínimo, de la de PChCr concompromiso cardiaco. Es también interesante destacar que la capacidad parainmunoinhibir la reacción de 5F2 resultó entre sueros de PChCr sin compromisocardíaco directamente proporcional a la edad de los pacientes. El AcMo 5A9B11también fue capaz de separar la población de PChCr de la de los controles. Másaún, los epitopos del 5A9B11 fueron reconocidos en distinta medida por los PChCrsin compromiso cardiaco, definiendose dos poblaciones con baja y alta capacidadde inmunoinhibición respectivamente. Por último, y atendiendo al rol central que las citoquinas y las moléculas deadhesión celular tienen en la modulación de la respuesta inmune, tanto en su fazprotectora como en su potencial faz autoagresiva, en este trabajo estudiamos lacinética de expresión endógena de genes para citoquinas e ICAM-1 en células debazo (B) y corazón (C) de ratones infectados con las cepas Tulahuén y CA-1 delparásito. Luego de obtener el ARN y ADNc a partir de homogenatos de B y C serealizaron ensayos de PCR cuali y cuantitativo usando "primers" y/o competidoresespecíficos para IFN γ, TNF α, IL α, IL-6 e ICAM-1, encontrándose que la infecciónpor el parásito va acompañada por un claro aumento en los niveles intracelularesde precursores para citoquinas e ICAM-1, aunque la cinética depende del órganoestudiado y de la naturaleza de los parásitos infectantes.

Descripción: La medición de actividad y variabilidad estelar se realiza, casi con exclusividad, utilizando como indicador el flujo de las líneas H y K del Ca II (a 396.8 y 393.36 nm, respectivamente), en el extremo azul del espectro visible, asociado también al índice de Mount Wilson S. En general, los estudios observacionales sistemáticos se limitaron a estrellas en el rango F a K tempranas dado que las más tardías presentan muy baja luminosidad en la región espectral de dichas líneas y los tiempos de integración necesarios resultan ser mucho mayores. Sin embargo, en estrellas más frías la convección se vuelve predominante, al punto que las enanas M más tardías son completamente convectivas. Y dado que los campos magnéticos que causan la actividad estelar son creados por la interacción entre la convección y la rotación estelar (dínamo estelar ), es posible encontrar en estrellas tardías niveles de actividad mucho mayores que los que se encuentran en las más tempranas. El estudio de periodicidad tanto para las estrellas M activas (cuyos espectros presentan la línea Hα a 656.2 nm en emisión) como para las inactivas (con Hα en absorción) resulta particularmente interesante, ya que debería brindar información directa sobre la relación entre convección y variabilidad, y en última instancia, sobre los mecanismos responsables del dínamo estelar. Por otro lado, en las últimas décadas, ha surgido un nuevo interés en las enanas M debido a la abundancia de las mismas en la vecindad solar y a que muchas de ellas representan un importante laboratorio para la búsqueda de exoplanetas, debido a la alta tasa de ocurrencia de planetas extrasolares orbitando en su zona de habitabilidad. Sin embargo, la habitabilidad en estos planetas puede verse afectada por los altos niveles de radiación ultravioleta relacionados con la actividad estelar. El objetivo principal de esta tesis es caracterizar la actividad magnética de las estrellas M cercanas, puramente convectivas y aquellas que presentan un núcleo radiativo en diferentes escalas temporales. Para ello, contamos con una muestra total de 36 enanas M de diferentes niveles de actividad. 21 estrellas de la muestra fueron observadas por el Proyecto HKα, programa observacional propio desarrollado en CASLEO desde 1999, donde 10 de ellas son estrellas activas de tipo espectral entre dM0e y dM5e, y el resto son enanas inactivas de tipo espectral dM0-dM4. Las 15 estrellas M restantes de la muestra estudiada, son estrellas de baja masa dM3 a dM6 (<0.35M) activas e inactivas recientemente clasificadas en el catálogo CONCH-SHELL, publicado en el año 2015. En una primer instancia de esta tesis, estudiamos la actividad magnética a corto plazo para detectar y analizar aquellos eventos transitorios que liberan grandes cantidades de energía. Para llevar a cabo este estudio, utilizamos fotometría de alta precisión de los observatorios espaciales Kepler y Transiting Exoplanet Survey Satellite (TESS). En esta primera parte, estudiamos 27 enanas M de la muestra pertenecientes al Proyecto HKα y al catálogo CONCH-SHELL y analizamos su frecuencia de fulguraciones y sus períodos de rotación. Con el objetivo de detectar variaciones temporales a largo plazo, combinamos principalmente los índices de Mount Wilson derivados de espectros de CASLEO con aquellos espectros públicos disponibles en la base de datos del European Southern Observatory (ESO) y del Observatorio W. M. Keck. Contamos con un total de 1971 observaciones espectroscópicas tanto propias como públicas, obtenidas entre 1996 y 2019. A partir de las líneas de Ca II, analizamos los niveles de actividad a lo largo de décadas para un total de 23 estrellas, a partir de diferentes métodos de análisis de series temporales no equiespaciadas (periodogramas y wavelets). Detectamos por primera vez ciclos de actividad magnética en AU Microscopii, Ross 128 y Gl 729 y encontramos ciclos de actividad en 12 estrellas de la muestra. Actualmente se conoce que la actividad en las dMs tempranas y aún más frías puede ser caraterizada por su tasa de rotación. Las rotadoras más rápidas (Prot < 10 d) alcanzan un máximo nivel de actividad conocido como régimen saturado. Mientras que las rotadoras lentas, disminuyen su actividad al aumentar el Prot (régimen no saturado). En esta tesis, a partir de mediciones fidedignas de la actividad media a lo largo de décadas, observamos que las estrellas M puramente convectivas de muy baja masa, no acompañan este patrón. Por último, analizamos otros posibles indicadores de actividad estelar más idóneos para estudiar la actividad en enanas M. Dado que la correlación entre los flujos en el centro de las líneas de Ca II y Hα es positiva durante todo el ciclo solar, estudiamos la relación entre ambas líneas para un conjunto de estrellas M activas e inactivas, parcial y puramente convectivas y con diferentes niveles de actividad observables desde el hemisferio Sur. Concluimos que la correlación entre ambos indicadores no siempre es válida para estrellas individuales.

Descripción: La activación de las redes de regulación genética (RRGs) conduce a procesos de diferenciación celular, proliferación, apoptosis y homeostasis durante el desarrollo. Muchos de los genes dentro de las RRGs poseen regiones regulatorias de la transcripción con una arquitectura genética compleja. Dentro de las regiones regulatorias existen distintos tipos de elementos regulatorios, siendo los enhancers los elementos más profundamente estudiados. Los enhancers contienen la información necesaria para establecer dónde, cuándo y cuánto seexpresa un gen. En esta tesis estudiamos la estructura y función de la región regulatoria de la transcripción del gen shavenbaby (svb) de Drosophila melanogaster. Este gen se expresa en las células epidérmicas y promueve la formación de estructuras no sensoriales con forma de pelo (llamadas tricomas) en la cutícula. Al sintetizarse, Svb se comporta como un represor transcripcional (Svb-REP) y luego de un proceso de degradación de su extremo aminoterminal se convierte en un activador transcripcional (Svb-ACT). Svb-ACT activa la expresión de los genes efectores, los cuales ejecutan la formación de los tricomas en la cutícula. El patrón de expresión embrionario de svb es generado por siete enhancers que están localizados en una región de 90 kilobases ubicada río arriba del sitio de inicio de la transcripción del gen. Además del embrión, svb se expresa en las células epidérmicas de lapupa/adulto, que producen los tricomas de la cabeza, tórax, abdomen, patas y alas. Sabemos que los siete enhancers embrionarios también están activos en la epidermis de la pupa. Análisis de conservación de secuencia en la región regulatoria de svb sugieren que existen más enhancers con actividad en pupa, además de los ya conocidos. Con el objeto de determinar cuántos enhancers están activos durante el estadio pupal y cómo están distribuidos dentro de la región regulatoria de svb, llevamos a cabo experimentos que nos permitieron comprender como funciona la región regulatoria de svb en la pupa. En primer lugar, realizamos una caracterización del patrón de expresión de svb en la epidermis de la pupa. Encontramos que svb comienza a expresarse en la epidermis abdominal de la pupa a las 35 hrs. después de la formación del pupario (APF) y que a partir de las 40 hrs. APF se convierte en un activador transcripcional (Svb-ACT). Una vez que definimos la dinámicatemporal de expresión y actividad de svb/Svb en el abdomen de la pupa, decidimos estudiarla regulación transcripcional de svb en ese contexto. Analizamos la apertura de la cromatina (con la técnica ATAC-seq) y la presencia de la marca epigenética H3K27ac (con la técnica CUT&RUN) y realizamos ensayos funcionales con construcciones reporteras. Encontramos siete enhancers nuevos de svb activos en la epidermis pupa. Estos enhancers se suman a los siete enhancers embrionarios, que también presentan actividad en ese estadio del desarrollo.Al analizar el paisaje regulatorio del locus svb en la pupa, observamos que los 14 fragmentos con actividad enhancer cubren prácticamente toda la región en cis de svb. Esta arquitectura regulatoria es diferente a la epidermis del embrión, en donde la expresión de svbes generada por 7 enhancers discretos dispersos en las 90 kb de la región regulatoria del gen. Luego, nos propusimos determinar posibles genes blanco de Svb en la epidermis abdominal de la pupa. Nuestro objetivo era determinar si dichos genes son los mismos que son activados por Svb en la epidermis embrionaria. Realizamos un ensayo de RNA-seq y obtuvimos una lista de genes con diferentes niveles expresión en la epidermis abdominal de la pupa. Encontramos que aproximadamente el 93% de los genes blanco de Svb validados en el embrión están también expresados en la epidermis abdominal de la pupa. En esta tesis analizamos la regulación transcripcional de un gen durante el desarrollo de D.melanogaster. Nuestros resultados aportan a la comprensión de la arquitectura genética de las regiones regulatorias de la transcripción de genes pleiotrópicos.

Descripción: Se estudió la actividad de oxidasa alternativa y la respiración mitocondrial en mitocondrias aisladas de diferentes tejidos de plantas superiores. Incubando tejido de tubérculos de papa en una cámara húmeda (envejecimiento) durante 24 y 48 horas se observó un incremento de la proteína mitocondrial con un concomitante aumento en la actividad de oxidasa alternativa. Además en dichas mitocondrias se observó un incremento en el consumo de oxígeno y una disminución en el control respiratorio con el tiempo de incubación. Al determinar la producción de anión superóxido en mitocondrias aisladas de tubérculos de papa se encontró que representa una pequeña fracción del consumo de oxígeno total y que no se incrementa con el envejecimiento. El envejecimiento del tejido produce un considerable incremento en la actividad de superóxido dismutasa citosólica (enzima Cu-Zn) lo cual es consistente con un incremento en la producción citosólica de Ō¯2̄ en condiciones fisiológicas. En la determinación de la actividad de oxidasa alternativa en mitocondrias aisladas de ejes embrionarios de semillas de soja no se observó una actividad apreciable de oxidasa alternativa durante los primeros estadíos de incubación como habían propuesto Yentur y Leopold (1976) y su nivel se mantuvo bajo entre las 2 y las 14 horas de imbibición. En embriones de soja se observó un incremento en el consumo de oxígeno que es paralelo al observado en el peso fresco entre las 2 y las 14 horas de imbibición. En mitocondrias aisladas de ejes embrionarios de soja se observó un incremento en la respiración por el agregado de citocromo c exógeno, y una disminución del efecto del citocromo c con el tiempo de imbibición. Al medir la respiración de embriones de soja se observó que el 46-50% del consumo de oxígeno total es de origen mitocondrial siendo el resto del consumo de oxígeno extramitocondrial y debido a la actividad de otras enzimas como oxidasas, oxigenasas (por ej. tirosinasa, lipoxigenasa, etc.). Esto coincide con trabajos realizados con quimioluminiscencia (Boveris y col., 1980) donde se obtiene una gran actividad de lipoxigenasa en homogenados de semillas de soja. Esta actividad de lipoxigenasa es insensible al cianuro y a la antimicina, pero es sensible al SHAM, similarmente a la oxidasa alternativa que es sensible al SHAM e insensible a los otros dos inhibidores. En mitocondrias de raíces de maiz que crecen en una solución nutritiva, se encontró una actividad de oxidasa alternativa que da cuenta del 41% del consumo de oxígeno total. En dichas mitocondrias la actividad de la oxidasa alternativa parece asociarse a la denominada "respiración salina" donde se produce exceso de ácidos orgánicos cuya función es mantener la electroneutralidad frente a la absorción de iones. Se observó con el uso de inhibidores de la respiración, que en mitocondrias de raíces de maíz, el SHAM y la antimicina actúan en sitios separados, pero que muestran una ligazón cooperativa entre ambos sitios. Los estudios realizados sobre la actividad de oxidasa alternativa y su papel fisiológico se han hecho sobre tejidos y mitocondrias aisladas de los mismos. En los trabajos realizados con tejidos enteros, no se puede afirmar que la actividad medida sea la que corresponde a la oxidasa alternativa, porque hay que considerar otros factores que pueden influir en su determinación. En el trabajo realizado para esta tesis utilizando tejidos y mitocondrias aisladas de los mismos permite concluir que para determinar la actividad de la oxidasa alternativa de un tejido hay que aislar las mitocondrias del mismo.

Descripción: Dado que los insecticidas constituyen un grupo de sustancias químicassin las cuales la sociedad no podría subsistir, una estrategia obvia parael control de insectos es acelerar la búsqueda de compuestos químicosbiodegradables y selectivos que mataran al insecto, pero que no presentaranefectos nocivos para otros organismos o el medio ambiente (62). Sinduda, un análisis racional del sistema acelera la obtención de nuevos ymejores métodos de control. En este sentido los conocimientos básicossobre la fisiología y la bioquímica del insecto, así como los mecanismosque regulan la interacción del tóxico con el insecto permiten dirigir laestrategia de control. En particular, es sabido que el tegumento es la estructura más distintivade los Artrópodos (63). Es también la primera barrera que se interponeen la penetración del insecticida. Es de suma importancia entonces,conocer el inicio de la toxicocinética del insecticida, condicionadoen gran parte por el tegumento. El objetivo general de este trabajo ha sido analizar la primera interacciónentre insecticidas organofosforados y el Triatoma infestans,principal vector de la Enfermedadde Chagas en nuestro país, analizandoel mecanismo de penetración y la capacidad del tegumento en la degradaciónde estos compuestos. En consecuencia se estudió la actividad esterásica presente en el tegumento de T. infestans adulto, su localización, su dependencia de edady estado nutricional del insecto, además de la caracterización electroforética y mediante inhibidores específicos. Se determinó también el rolde estas enzimas en la degradación de compuestos organofosforados. En relación con el mecanismo de penetración se analizó la existenciade sitios preferenciales de penetración y su correlación con particularidades de la estructura tegumental. Asimismo se consideró el efecto que "carriers" de alto PM ejercen sobre la cinética y el modo de ingreso deestos compuestos. Estos estudios, además del conocimiento básico que aportan, podríanser utilizados en el futuro para el mejoramiento de las formulacionesde insecticidas utilizados en la lucha contra el vector del Mal de Chagas,a través de cambios cuali-cuantitativos que favorecieran lapenetración al insecto y disminuyeran la degradación a nivel del tegumento.

Descripción: Los virus de la familia Arenaviridae incluyen patógenos humanos causantes deseveras fiebres hemorrágicas, como los virus Lassa (LASV)y Junín (JUNV). Laproteína Z de los arenavirus, posee un motivo RING finger altamente conservadoentre los distintos arenavirus, necesario para la interacción con proteínas celularesy virales, y por lo tanto es un punto de ataque ideal para la quimioterapia antiviralcontra las fiebres hemorrágicas. El objetivo del presente trabajo fue estudiar laactividad inhibitoria de compuestos electrofílicos reactivos con motivos Zn fingers.provistos por el National Cancer Institute (USA), comprobar que Z es el blanco deacción de dichos compuestos y demostrar que su rol es esencial en el ciclo demultiplicación viral. Los compuestos, que incluyeron disulfuros alifáticos yaromáticos, derivados azoicos e hidrazidas fueron inicialmente evaluados por sucapacidad inhibitoria sobre la infección de células Vero contra los arenavirus JUNVy Tacaribe (TCRV). De un total de 15 compuestos ensayados, 2 presentaronsimilar eficacia en sus propiedades antivirales y virucidas, 6 presentaron unaactividad virucida superior a su efecto antiviral, 3 fueron estrictamente antivirales, 1 ejerció únicamente acción inactivante y 2 fueron inactivos. Los compuestosinactivantes mostraron ser efectivos también contra el virus de la coriomeningitislinfocitaria (LCMV), arenavirus prototipo de la familia. El análisis de los parámetros (tiempo y temperatura) que afectan la inactivación de JUNV y TCRV, demostróque la cinética de inactivación es rápida y que la reacción es dependiente de latemperatura, ya que no hubo inactivación del virus a 4°C. La interacción entre elvirus y el compuesto inactivante lleva a un bloqueo del ciclo de multiplicación virala nivel de la transcripción y replicación, ya que el mismo se adsorbe y penetra enlas células con igual eficacia que el virus control, pero no se detecta RNAcorrespondiente a los genes N, GPC y Z, en los viriones inactivados. Este hechose verificó por la ausencia total de síntesis de proteínas virales cuando se infectancélulas con virus inactivado. Sin embargo, los viriones inactivados mantienen lafuncionalidad de las proteínas externas, ya que se observaron títulos comparablesde anticuerpos neutralizantes en animales inoculados con viriones inactivados conrespecto a los inoculados con JUNV y TCRV infecciosos, indicando así lapreservación de la capacidad antigénica de las glicoproteínas luego deltratamiento inactivante. La acción diferencial de estos agentes sobre HSV-1 y losarenavirus confirma que la proteína Z de los arenavirus juega no sólo un rolregulatorio durante el ciclo viral, sino que tiene también importancia estructural, yaque los compuestos ejercen su acción tanto en la célula infectada, comodirectamente sobre el virión.Los resultados del estudio del efecto inhibitorio sobrela proteína Z purificada de LCMV y LASV, indicarían que los compuestos estándirigidos particularmente hacia la proteína Z de los arenavirus, interaccionandocon ella y provocando su multimerización, con la consiguiente pérdida defuncionalidad y capacidad infectiva del virión. Por otro lado, se sabe que lainfección con LCMV conduce a la recolalización de cuerpos nucleares de laproteína celular con homeodominios ricos en prolina (PRH) al citoplasma de lacélula infectada. En células infectadas con LCMV se observó que el tratamientocon NSC20625 inhibe la replicación del RNA viral, sin afectar la transcripción delgen celular prh. Además, el tratamiento con NSC20625, no sólo inhibió laexpresión de la proteína viral Z en las células infectadas con LCMV, sino queademás revirtió el patrón de distribución de la proteína PRH al patrón de PRHobservado en células normales. Por último, el compuesto azoico ANNB mostró unamplio rango de acción contra los arenavirus, ya que fue también inhibidor de lamultiplicación de otras cepas de JUNV, asi como de TCRV, Pichinde y LCMV. Elestudio del modo de acción antiviral manifestó que el ANNB afecta las etapastardías del ciclo de multiplicación viral; esto se comprobó al observar que ni lasetapas tempranas de adsorción e internalización viral, ni la síntesis y expresión deproteínas virales estaban afectadas. La producción de virus asociado a célulasestá igualmente afectada que el virus extracelular, por lo que el ANNB estaríabloqueando el correcto ensamblado dentro de la célula. Estos resultados demuestran por primera vez que una proteína esencial para losarenavirus es el blanco de acción de compuestos que representan agentesantivirales promisorios contra estos patógenos, mostrando similar eficacia in vitroque la ribavirina, la única droga conocida que ha sido ensayada en los pacientesinfectados con arenavirus.

Descripción: La capacidad y la actividad proteolítica endógenas del músculo de anchoita en maduración persisten y son, durante todo el proceso, mayores o iguales que las del músculo fresco. En el músculo las proteasas alcalinas son relativamente las mas importantes. La magnitud y oportunidad del incremento de la capacidad proteolítica muscular alcalina y/o neutra es uno de los determinantes de las velocidad de maduración.

Descripción: Los hongos causantes de la pudrición blanca de la madera son los únicos capaces de despolimerizar la lignina y degradarla hasta su completa mineralización por acción de las ligninasas. Stereum hirsutum es un Basidiomycete que pertenece a este grupo fisiológico de hongos, presenta actividad lacasa y manganeso peroxidasa (MnP). Se optimizaron las condiciones para la producción de estas enzimas en medio líquido. Los metales pesados produjeron mejores resultados al ser utilizados como inductores de la producción de ligninasas con respecto a los compuestos aromáticos. Una característica relevante de la cepa fue que sometida a estrés por pH, temperatura y xenobióticos como metales pesados y aromáticos no se produjo una reducción del crecimiento y se detectó actividad de ligninasas. Los cultivos en sustrato sólido presentaron como ventaja un importante incremento en la producción de enzimas y una estructura micelio sustrato de difícil disgregación que permitió realizar ensayos de decoloración en forma aeróbica originando como productos de la degradación del Verde de Malaquita, un fungicida, compuestos no tóxicos. Las ligninasas producidas tanto en SmF (fermentación sumergida) como en SSF (fermentación en sustrato sólido) fueron dos isoenzimas de lacasa de 66 y 102 kDa y una MnP de 26 kDa. Los ensayos de electroforesis permitieron establecer que ambas isoenzimas de lacasa y la MnP tienen acción decolorante sobre el índigo carmín y sobre el verde de malaquita.

Descripción: Los sistemas de eventos discretos están en el corazón de muchos sistemas de software que requieren operación continua como los sistemas reactivos. Cambiar estos controladores en tiempo de ejecución, para dar soporte a cambios del ambiente o cambios en los requerimientos, es una problema desafiante y no resuelto hasta ahora. En esta tesis, se plantea formalmente el problema de actualizar dinámicamente sistemas de eventos discretos que controlan sistemas reactivos. Presento aquí un enfoque general para especificar criterios de correctitud para actualizaciones dinámicas y una técnica que computa automáticamente un controlador que maneja la transición desde la vieja especificación hasta la nueva especificación, garantizando que el sistema alcance un estado en el cual esa transición pueda ocurrir correctamente y en la cual la arquitectura del sistema subyacente pueda reconfigurarse. La solución usa síntesis de controladores de eventos discretos para construir automáticamente un controlador que garantiza ambas: progreso sobre la actualización y actualizaciones seguras. La técnica desarrollada fue aplicada a distintos dominios como sistemas reactivos o sistemas robóticos. Cada uno de ellos comprende distintos desafíos entre los cuales se destaca la urgencia por adaptarse a los nuevos requerimientos y las variedades de estrategias que se pueden computar para lograr la actualización. Otro dominio de aplicación de la técnica fue la reconfiguración de procesos de negocio. Como es esperado, las organizaciones requieren que sus procesos de negocios evolucionen manteniendo el cumplimiento de nuevas políticas, estrategias y regulaciones. La reconfiguración de un proceso de negocio es un problema desafiante ya que no solo se debe idear un nuevo workflow, sino que también, requiere de entender de cómo debe ser la transición entre el viejo workflow y el nuevo. Si bien los procesos de negocio suelen ser más lentos que los sistemas reactivos o los sistemas robóticos, este problema solo fue levemente estudiado, sin poder garantizar un proceso automático que lo resuelva. En esta tesis producimos procesos de reconfiguración que garantiza la evolución de un antiguo workflow a uno nuevo, satisfaciendo los requerimientos de transición definidos por el usuario.

Descripción: Usually, OLAP(On Line Analytical Processing) systems provide data visualization through a multidimensionaldata model according to which a data fact is viewed as a mapping from a point in aspace of dimensions into one or more spaces of measures. Moreover, dimensions are organized inlevels which conform a hierarchy, providing a way of defining different levels of data aggregation, acentral issue in data analysis. In a relational implementation of OLAP(usually called ROLAP), wecan think of facts as being stored in fact tables, while each dimension is described in a dimensiontable. The industry solutions were built under the assumption that data in fact tables reflect thedynamic aspect of the data warehouse, while data in dimension tables represent static information. However, if we think of the data warehouse as a materialized view of data located in multiplesources, it is usual to find situations in which the structure of these sources changes, a new sourceis added, or an old one dropped. Any of these changes may require updates to the structure ofsome dimensions. Further, as multidimensional views are designed according to requirements fromend users, a redefinition of the initial requirements may cause a dimension update. In this thesis we argue that accounting for dimension updates is necessary in an OLAP toolin order to avoid constantly rebuilding dimensions from scratch. Thus, we first characterize theseupdates and study the view maintenance problem when they occur. We developed algorithms which,taking advantage of the nature of the dimension updates, in some cases outperform well-known viewmaintenance algorithms. We then propose an extension to the MDX language(a standard querylanguage for OLAP) and describe the implementation of TSOLAP, a multidimensional repositorywhich supports dimension updates and view maintenance, developed following the OLE DB for OLAP standard. We discuss the experimental results of tests performed over a real-life case study,a medical center in Buenos Aires. In the second part of the thesis we embed our proposal in the temporal database framework,introducing the Temporal Multidimensional Data Model, and a temporal query language for OLAPwhich we called TOLAP. TOLAP allows expressing complex OLAP queries in an elegant anddeclarative fashion. We discuss issues like syntax, semantics, safety and expressive power. We alsopresent an implementation including a graphic environment for temporal OLAP. Finally, we showhow the temporal approach can be applied to the case study mentioned above.

Descripción: Las invertasas son β-D-fructofuranosidasas (EC 3.2.1.26) que hidrolizan la sacarosa irreversiblemente a glucosa y fructosa. Hasta la fecha, se han identificado diferentes isoformas de invertasas que se clasificaron según su localización sub-celular en: a) solubles, las cuales se encuentran en citosol o vacuola, o b) insolubles, las cuales están unidas a componentes de la pared celular. En el marco de esta tesis doctoral se analizó el papel de dos enzimas invertasas, una vacuolar (At1g12240-Inv-vac) y una citosólica (Solyc04g081440-Slalk/ne-INV) en la acumulación de biomasa y distribución y composición del carbono en plantas superiores utilizando como modelo Arabidopsis thaliana y Solanum lycopersicum, respectivamente. A través de mapeo de QTLs se demostró que una invertasa vacuolar (Inv-vac) juega un rol determinante en el largo radicular en Arabidopsis. El objetivo del presente trabajo en entender el mecanismo fundamental de este QTL a través del análisis de las diferencias estructurales y funcionales de Inv-vac en dos genotipos parentales (Ler y CVI) y dos líneas introgresadas (N-14 y N-15) portando segmentos genómicos individuales de CVI, conteniendo al locus At1g12240, en el fondo genético de Ler. Se analizó la abundancia relativa de los transcriptos por qRT-PCR la cual mostro patrones de expresión similares entre ambos ecotipos. Sin embargo, el análisis de secuencia de ADN revelo varios polimorfismos que provocan cambios en la secuencia de la proteína correspondiente entre ellos. A su vez, ensayos de actividad en extractos de proteínas totales mostraron mayor actividad invertasa en los genotipos conteniendo el alelo de CVI mientras que los ensayos cinéticos utilizando proteínas recombinantes purificadas revelaron Km similares para ambos alelos y una Vmax ligeramente mayor para el alelo Ler. Tratamientos de extractos de plántulas con agitación y temperatura para minimizar la actividad de posibles inhibidores de invertasa provocaron un aumento importante en la actividad de Ler sin modificar la actividad de los genotipos conteniendo el alelo CVI. Análisis de qRT-PCR de dos inhibidores de invertasa vacuolar en plántulas de los 4 genotipos revelo patrones de expresión diferencial entre ellos. En conjunto, los resultados obtenidos demuestran que el QTL de invertasa vacuolar afecta la acumulación de biomasa radicular y la partición de carbono a través de una regulación diferencial de los inhibidores a nivel ARNm. Para el caso de Solanum lycopersicum, se obtuvieron plantas transgénicas silenciadas por ARNi para el gen que codifica para una invertasa alcalina neutra (Slalk/ne-INV) y se realizó una fenotipificación de las plantas que mostraron diferencias contrastantes con respecto al wild type, mayormente en la aparición de flores y seteo de frutos. A su vez, a través del análisis de acumulación de mensajero por qRT-PCR se observó un aumento de los niveles de expresión de LIN4 durante el desarrollo de los frutos que da cuenta de la importancia de esta enzima en los órganos destino. Los niveles de los principales carbohidratos solubles se midieron a lo largo de un periodo diurno en hojas fuente y la actividad de enzimas centrales del metabolismo de carbono fueron medidas en hojas y frutos rojos de las líneas transgénicas. Por otra parte, se obtuvieron perfiles metabólicos de hojas y frutos de las plantas transgénicas aplicando GC-MS y se realizaron experimentos de acumulación de ARNm por secuenciación masiva (RNAseq). El análisis conjunto de los datos de RNAseq y metabolómica muestran que el silenciamiento de la enzima Slalk/ne-INV genera un aumento de la expresión de genes involucrados principalmente en respuesta a estrés, defensa y muerte celular programada apoyando la idea de un papel principal de esta enzima sobre el metabolismo global de la planta, el crecimiento y la reproducción vinculando la adaptación al estrés, con los azucares y las señales del desarrollo.

Descripción: El objetivo general de este trabajo fue evaluar la utilización de biomasamicroalgal para la biosorción de metales en aguas y como materia prima rica en aceites procesables a biodiesel. Se seleccionaron dos especies microalgales: la diatomea Cyclotella meneghiniana para los estudios de acumulación de lípidos y biosorción de los metales cromo y plomo, y la microalga verde Golenkinia radiata para los estudios de acumulación de lípidos. Los estudios de caracterización superficial de la biomasa demostraron una amplia heterogeneidad de grupos funcionales superficiales disponibles (carboxilos, aminas, y silanol mayoritariamente). Se estudió el efecto del pH, la fuerza iónica, la dosis de biosorbente, el tiempo de contacto, y la concentración inicial de los metales en soluciones simples y binarias, sobre la biosorción de cromo y plomo. Se emplearon modelos cinéticos y de equilibrio a los cuales se ajustaron los datos experimentales. La biomasa presentó una mayor capacidad y afinidad de biosorción para el plomo respecto del cromo. La acumulación de lípidos fue mayor en C. meneghiniana respecto de G. radiata bajo condiciones de deficiencia de nitrógeno y fósforo, sin embargo G. radiata presentó una mayor productividad lipídica asociado a una mayor productividad en biomasa. C. meneghiniana presenta la capacidad de crecer en un efluente de un biodigestor anaeróbico con agregado de sílice permitiendo la biorremediación del efluente y la producción de biomasa y lípidos. Finalmente se estudió el escalamiento a cultivos masivos de G. radiata en regímenes batch y semicontinuos acoplado a un estrés salino para evaluar la acumulación y producción de lípidos. Se obtuvieron elevadas productividades de biomasa y lípidos con acumulación de carotenoides asociada a la fase de estrés.

Descripción: Fil: Vignau, Pedro T.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Schicht, Carlos A.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: La actividad mecánica y su respuesta a la hipoxia/reoxigenación fue estudiada en músculos papilares de ventrículo izquierdo de ratas sometidas a hipoxia hipobárica (53.8 kPa) durante varios períodos y en sus controles (101.3 kPa). Un retardo en la declinación de la contractilidad asociada a la edad y una mayor recuperación post-hipoxia se desarrollaron durante la aclimatización. Entre las enzimas mitocondriales analizadas en ventrículo izquierdo, se encontró una regulación específica de la mtNOS por la hipoxia. Para evaluar la regresión de estos efectos durante el retorno a la normoxia, se investigó la contractilidad en respuesta al calcio y a la hipoxia/reoxigenación y la actividad y expresión de mtNOS al cabo de tres períodos de desaclimatización. La actividad mecánica basal, la recuperación post-hipoxia, y la actividad de mtNOS declinaron linealmente, con un tiempo medio de 5.9, 5.3 y 5.0 meses, respectivamente. La expresión de mtNOS, la cual reaccionó con anticuerpos iNOS y nNOS, mostró un comportamiento similar. Se halló una correlación bifásica entre la actividad de mtNOS y la contractilidad, resultando ésta máxima a 0.70-0.74 nmol NO.min^-1.mg proteina^-1. Este modelo experimental proveería el efecto más persistente conocido actualmente sobre la preservación de la función miocárdica y la tolerancia a la hipoxia. Los resultados sugieren la participación de la mtNOS en el mecanismo involucrado.

Descripción: Fil: Flawiá, Mirtha María. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Carricarte, Valentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Kornblihtt, Alberto Rodolfo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Dran, Graciela Isabel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Se estudia el método de Willard y Greathousepara la determinación de manganeso por colorimetría de permanganato,utilizando como oxidante periodato de potasio. Se utiliza como patrón de comparación la pesada directa depermanganato de potasio "pro analisis". Se comprueba como era de esperar el cumplimientode la ley de Lambert Beer y la existencia de un máximode absorción en los 530 mu.comprobado que no existe diferencia en utilizaracidos nítrico o sulfúrico, se adopta para la determinaciónen maderas el acido nítrico en lugar del sulfúrico comunmenteutilizado, evitando eliminaciones de calcio que sepresentaron como interferencias en varios casos. Los ensayos de recuperación realizados sobre diferentesmaderas dieron resultados altamente satisfactorios. Se adopta la calcinación, frente a otros métodos,para la eliminación de materia orgánica. Se utiliza parala misma, material de porcelana por demostrar los ensayosde recuperación realizados por duplicado en porcelana yníquel, que la absorción por parte de la primera resultaba despreciable para los fines del trabajo realizado. Las determinaciones efectuadas sobre 40 maderas argentinasclasificadas se realizaron por duplicado en níquel yporcelana sin observarse inconvenientes. Se aconseja elníquel como material óptimo para la determinación. Se adopta la técnica propuesta por Enzo Riccien su tesis "Determinación espectrofotométrica de sílice encenizas de maderas" (Fac. de Ciencias Exactas y Naturales. Buenos Aires, 1954) para la obtención de muestras de maderas. Se observó que la mayoría de las maderas argentinas presentan un contenido en maganeso cercano a los 0,5 mg por 100 gr de madera seca. Coincidentemente con lo indicado por la bibliografíapara algunas maderas australianas del género Nothofagus,se encontró en el guindo (Nothofagus betuloides)un alto contenido en manganeso. Tres muestras de diferenteprocedencia dieron cantidades superiores a los 5 mg%g. Las otras especies de Nothofagus argentinos analizadasdieron cantidades normales. Si bien el número de determinaciones no permite obtener conclusiones definitivas, se observó que esta diferencia bastante marcada, puede servir con fines de diferenciación. Al efecto se propuesouna reacción cualitativizada del método para la mencionada diferenciación, basada en que partiendo de 5 gramos demadera, dada la sensibilidad del Mn04- solo serán observablescomo "positivas" las maderas que contengan cantidadescercanas a los 5 mg%g de manganeso. El guindo, daríareacción positiva frente a las demás especies del género. Se encontró cantidades anormalmente grandes demanganeso en los géneros Salix, Chorisia y Araucana, superioresa los 1,5 mg%g. La Araucaria araucana (pino Paraná) sería porlo tanto inconveniente para la utilización como "separador"en acumuladores eléctricos, ya que se indica como límitemáximo del contenido en manganeso para ello, el de 1,5 mg%gde madera seca.

Descripción: Se estudió la adquisición de la madurez sexual en Chasmagnathusgranulata según los criterios histológico (talla de maduración gonadal),alométrico (talla de cambio en el nivel de alometría de los caracteres sexualessecundarios) y funcional (talla a la que los individuos participan en el eventoreproductivo). Se discutió la relación de dichos criterios con el concepto de "muda puberal”. Para ambos sexos la madurez histológica es previa a la madurezalométrica. En las hembras, la madurez funcional se inicia en la tallahistológica haciéndose poblacionalmente más relevante a partir de la tallaalométrica. En los machos, la madurez funcional es previa a la talla alométrica,pero sería más relevante a tallas similares a la talla alométrica de las hembras. Existe "muda puberal" para ambos sexos. La madurez sexual se alcanzaría al segundo ó tercer año de vida,dependiendo del momento del reclutamiento de juveniles. Las hembras adultastendrían hasta 4 puestas por período reproductivo, con un período deincubación de 1 mes. Fuera del período reproductivo, ambos sexos mudandurante Abril y Mayo. Los adultos mudan 1 ó 2 veces al año; los juveniles almenos 3 ó 4 veces. Las puestas de huevos, eclosiones larvales y mudasestarían modulados por factores exógenos.

Descripción: Las células de la línea adrenocortical Y1 responden a ACTH, con un incremento en la síntesis y secreción de hormonas esteroides, con un consecuente cambio en la morfología celular (rounding up) que facilita la traducción de la señal mediada por el AMP cíclico, e inducción del transporte del colesterol de la membrana mitocondrial externa a la interna, paso limitante en la esteroidogénesis. La compartimentalización intracelular es fundamental para determinar la especificidad de distintos caminos de señalización mediados por el mismo segundo mensajero; es en este sentido que la existencia de los microdominios de membrana denominado caveola, han demostrado tener un rol fundamental en la comparti-mentalización de moléculas dentro de la célula. A su vez, la caveolina interactúa con diversas proteínas regulando así su actividad. El objetivo de la presente tesis fue estudiar la participación de caveolina-1, proteína estructural de la caveola, en un sistema esteroidogénico, dependiente de la vía de activación de la proteína quinasa A asociado a cambios en el citoesqueleto, y su regulación por ACTH y asociación con estructuras del citoesqueleto. Se demostró que ACTH, vía AMP cíclico, induce la traslocación y fosforilación en tirosina de caveolina-1. En condiciones basales la fosfocaveolina se distribuye en los extremos de los filamentos de actina, siendo su localización semejante a los sitios de adhesión focal. Luego de la estimulación por ACTH/8Br-AMPc, hay un cambio en la estructura asociada a fosfocaveolina, que se redondea formando una estructura en forma de anillo o roseta, que contiene un centro de F-actina circundado por fosfocaveolina-1, y se distribuye en la periferia celular. El número de anillos incrementa luego del tratamiento hormonal y se correlaciona con la inducción en la fosforilación de caveolina-1 por ACTH78Br-AMPc. Estudios de microscopía confocal y electrónica, además de colocalización con proteínas del citoesqueleto, revelan que se trata de una estructura de adhesión celular denominada podosoma. La formación de podosomas inducida por ACTH en las células Y1 depende de la actividad de una proteína tirosina quinasa mediada por inducción de la proteína quinasa A. Se demostró además la participación de las pequeñas proteínas Rho GTPasas en la inducción del redondeo celular mediado por ACTH. Estos resultados reafirman, una vez más, que las respuestas funcionales y morfológicas inducidas por la activación de la PKA en células esteroidogénicas están relacionadas con la dinámica del citoesqueleto y demuestran la participación de una nuevo blanco de ACTH, la caveolina-1.

Descripción: Los colorantes y metales pesados están usualmente presentes en los efluentes industriales de las actividades de minería, textil, papel, cuero, imprenta, etc. La utilización de adsorbentes de bajo costo se propone como una técnica eficiente, sencilla y económica para la remoción de colorantes y metales pesados presentes en las descargas industriales. En el caso particular de esta tesis se planteó la evaluación del uso de filtros de arcilla natural con alto contenido del mineral arcilloso montmorillonita, en sistemas de flujo continuo para la remediación de un contaminante orgánico catiónico, Cristal Violeta (CV), proveniente de una solución sintética y de metales pesados presentes en un efluente real de la empresa Minera Raura S.A. ubicada en Perú. En este trabajo se utilizaron arcillas provenientes de Perú y Argentina, que fueron caracterizadas y modificadas previamente a la construcción de los filtros. Para la remoción de CV se construyeron filtros en pequeña escala (trabajo en laboratorio) y se evaluó la eficiencia del material filtrante (filtros calcinadas) en distintas condiciones de operación como ser, caudal de alimentación, concentración inicial de colorante y altura de la columna. Las muestras fueron analizadas mediante espectroscopía visible a intervalos definidos de tiempos. Para el análisis de datos se utilizaron los modelos de Adams-Bohart y Thomas predecir las curvas de ruptura y con ello establecer los parámetros característicos del proceso. Los resultados obtenidos a diferentes alturas de lecho (3,4 y 6,5 cm), flujos volumétricos (33,3 y 133,3 mLmin^-1) y concentración inicial (10 y 50 mgL^-1) indican que el tiempo de servicio de la columna y la capacidad de remoción mejoran cuando se incrementa la altura del lecho y disminuye el flujo volumétrico. Con respecto a los modelos el de Thomas presentó el mejor ajuste para la descripción de las curvas de ruptura en las condiciones experimentales y el modelo de Adams-Bohart resultó adecuado para el comportamiento dinámico inicial. Los ensayos de remediación llevados a cabo sobre el efluente minero fueron realizados in situ en la bocamina Gayco en la Compañía Minera Raura (Perú). La arcilla utilizada para construir el material filtrante fue previamente tratada (termoactivación ácida) y calcinada logrando una mejora en su capacidad de adsorción para los metales presentes. Las aguas del efluente minero se hicieron circular a través de 4 bloques secuenciales de arcilla modificada en una canaleta, manteniendo un tiempo de contacto de 5 días. Se analizó de manera diaria el contenido de metales pesados disueltos y totales (Cu, Zn y Fe), pH y sólidos en suspensión del efluente, antes y después del filtrado. Según los resultados, los filtros de arcilla modificada y calcinada tienen la capacidad de reducir la concentración de metales totales y disueltos, los sólidos en suspensión y el pH en las aguas del efluente minero (bocamina Gayco). Debido a estos resultados se decidió realizar un análisis preliminar para evaluar la eficiencia del material para la descontaminación Pb, Hg, Cd, As, Mn y Cr. Los resultados indicaron que los filtros utilizados retienen más del 40% de la concentración inicial. Los valores obtenidos después del tratamiento estuvieron por debajo de lo estipulado por la legislación vigente a excepción del Hg. Los resultados encontrados en este trabajo de tesis resultan de suma importancia para el tratamiento de flujo continuo de contaminantes tanto orgánicos como inorgánicos. La implementación de estos materiales pudo mostrarse efectiva no solo en una escala piloto sino también, a escala industrial.

Descripción: La adsorción de gases nobles clásicos (Ne, Ar, y Xe) sobre sustratos sólidos de metales alcalinos (Cs, Rb, K, Na, y Li) y algunos otros compuestos es investigada en el marco de la Teoría del Funcional de la Densidad. Estudiamos tanto la adsorción sobre una sola pared plana como el llenado de ranuras planas simétricas. En primer lugar, proponemos una forma para la interacción de pares del fluido que pueda utilizarse en todo el rango de temperaturas, T, entre el punto triple y el crítico (Tt ≤ T ≤ Tc). Verificamos que la predicción para la tensión superficial de la interfase líquido-vapor del Ne, del Ar, y del Xe es correcta. Calculamos isotermas de adsorción y perfiles de la densidad. Analizamos líneas de pre-mojado y determinamos temperaturas de mojado, Tw, y críticas de pre-mojado, Tcpw. En el llenado de ranuras simétricas encontramos que bajo ciertas condiciones los estados fundamentales tienen perfiles de densidad que violan la simetría del potencial ejercido por las paredes. Hay una correlación entre la aparición de estos perfiles asimétricos y la existencia de líneas de pre-mojado. Resolvimos los sistemas aplicando las estadísticas correspondientes a los Ensambles Canónico (sistema cerrado) y Gran Canónico (sistema abierto). Mostramos que para sistemas abiertos también se obtiene soluciones asimétricas. Todos los temas están discutidos en detalle.

Descripción: La adsorción de los plaguicidas por los componentes del suelo es un proceso clave para determinar la viabilidad de las sustancias tóxicas en el suelo y su transporte a aguas superficiales y sub-superficiales y por lo tanto evaluar los riesgos por el uso del plaguicida así como el desarrollo de mejores tecnologías de remediación y dosificación. Los coloides del suelo, constituidos principalmente por los minerales arcillosos se caracterizan no solo por su gran superficie especifica, sino también por las cargas eléctricas superficiales provenientes de sustituciones isomórficas naturales, donde se producen sitios de adsorción específicos que conducen a uniones de tipo electrostáticas. En particular el herbicida Picloram (ácido 4-amino-3,5,6-tricloropicolinico) es comúnmente aplicado en la agricultura de Argentina y Brasil, entre otros países, presentando un efecto altamente tóxico sobre la microbiota del suelo. Las arcillas pilareadas (PILCs) son materiales interesantes para ser usados como catalizadores y adsorbentes, debido a sus múltiples centros cargados, amplia superficie, gran espacio interlaminar y estabilidad térmica. En este sentido, se llevó acabo un estudio de los procesos de adsorción de picloram sobre minerales arcillosos naturales y pilareados previamente caracterizados por DRX, XPS y espectroscopía de Mössbauer, análisis químico elemental y TG, determinación de: composición química superficial mediante EDS, dependencia del potencial zeta con el pH, IEPpH, área superficial, y CIC. Los minerales pilareados se sintetizaron a partir de montmorillonita y soluciones pilareantes de hierro lográndose un aumento en la capacidad de adsorción de picloram respecto al mineral sin modificar. La adsorción de picloram sobre la superficie de los minerales sucede a través de la formación de un ligando de esfera interna en un proceso de intercambio aniónico donde la interacción ocurre entre el nitrógeno piridínico y el grupo carboxílico del picloram y uno o dos centros metálicos de la superficie del adsorbente, lo que ocasiona un aumento de la adsorción con la disminución del pH. La utilización de minerales arcillosos pilareados con óxidos de aluminio y hierro, se estudió para su potencial uso como dosificadores de picloram, encontrándose un aumento de la disponibilidad del herbicida en el suelo, lo que indica que estos sólidos pueden ser la base para el desarrollo de materiales para regular la concentración de picloram en el suelo y su transporte hacia aguas superficiales y sub-superficiales.

Descripción: Fil: Ramirez, Silvana Andrea María. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Como habrá podido apreciarse a lo largo de esta exposición, el estudio de la composición y del comportamiento del aerosol de la atmósfera adquiere una relevancia especialísima en virtud de su participación en los procesos que conducen a la formación de las nubes y las precipitaciones atmosféricas. Aquí solo se ha tratado de mostrar el papel que le cabe a través de sus características químicas y físicas en la determinación de la microestructura de las nubes que en definitiva es determinante para que las precipitaciones se produzcan. En las experiencias de modificación artificial de las precipitaciones, lo que en definitivase hace es incrementar la concentración de ciertos tipos de núcleos inyectandolos en forma masiva en determinadas zonas, ya sean ellos núcleos higrosoópicos en forma de partículas de cloruro de sodio o de congelación utilizando complejos a base de ioduro de plata; los procesos que se generan con su introducción en la atmósfera aún no han sido del todo elucidados. Por otra parte, los resultados de esas experiencias están lejos de ser concluyentes, y en la última Conferencia Internacional de Modificación de las Precipitaciones, de Clermont-Ferrand, en el año 1980, se estableció la necesidad de su replanteo total. En un futuro próximo habrá que considerar también los efectos de los contaminantes originados por la actividad humana, pues si bien actualmente todavía están confinados a una escala local, el continuo aumento del nivel global de contaminantes antropogénicos hace necesario su control a escala mundial con el objeto de conocer mejor los efectos que provocan sobre los procesos físicos que se asientan en el interior de las nubes.

Descripción: Este trabajo de tesis tiene por objeto realizar estudios que permitan comprender la organización y diversificación genómica de las especies y subespecies del género Zea, los cuales brindarán nuevos datos en relación al origen alopoliploide del complejo, a las relaciones evolutivas de sus taxones y al origen del maíz domesticado. Con este fin, se realizaron distintos estudios de citogenética clásica y de Hibridación In Situ Fluorescente (GISH y FISH) en especies, subespecies e híbridos intra-e interseccionales. El análisis meiótico de los híbridos con 2n=20 cromosomas: Zea luxurians x Zea dip/operennís; Zea luxurians x Zea mays ssp. mays; Zea luxurians x Zea mays ssp. parvíglumis y Zea luxurians x Zea mays ssp. mexicana reveló anormalidades meióticas que explican la elevada esterilidad polínica de los mismos. Estas irregularidades pueden ser las determinantes del aislamiento reproductivo postcigótico entre las especies parentales. Por otra parte, en estos mismos híbridos se observó asincronía meiótica de dos grupos de 5 II cada uno durante diplotene-diacinesis, lo que sugiere la existencia de dos genomas ancestrales en las especies con 20 cromosomas. El análisis meiótico de los híbridos con 2n=30: Zea luxurians x Zea perennís y Zea mays ssp. mays x Zea perennís mostró que la configuración más frecuente en metafase I es de 5 trivalentes + 5 bivalentes + 5 univalentes. Este resultado junto con la asincronía observada en los híbridos de 20 cromosomas dan sustento a la hipótesis que sostiene que las especies del género son alopoliploides críptioos. El análisis GISH (Hibridación ln Situ Fluorescente usando sondas de ADN Genómico total) en estos mismos híbridos permitió distinguir el origen genómico de las configuraciones, y reveló que los bivalentes están formados por apareamiento autosindétióo entre genomas homeólogos de Zea perennís (2n=40) mientras que los univalentes provienen del genoma de la especie con 2n=20. Por otro lado, el mapeo FISH de genes ribosomales reveló que los mismos se encuentran localizados en los genomas parentales que presentan mayor homología. El análisis de las afinidades genómicas mediante GISH entre especies de la sección Luxuriantes y maíz reveló que Zea perennis presenta una importante divergencia genómica con respecto a las otras especies. De acuerdo a los patrones de hibridación se puede postular que uno de los genomas de esta especie aloctoploide es muy divergente, ya sea porque uno de sus antecesores era diferente, o bien porque ocurrieron divergencias genómicas a posteriori del proceso de especiación híbrida poliploide. Se realizaron experimentos de GISH hibridando cromosomas de maiz con sondas de ADN genómico total de las subespecies Zea mays ssp. parviglumis, Zea mays ssp. mexicana y Zea mays ssp. huehuetenanguensis. Se observó que Zea mays ssp. mays posee mucha mayor homología con Zea mays ssp. mexicana y Zea mays ssp. parviglumis que con Zea mays ssp. huehuetenanguensis. Sin embargo. mediante el uso de bloqueos genómicos, pudo revelarse que Zea mays ssp. mays y Zea mays ssp. parviglumis presentan importantes divergencias genómicas. Una de las teorías más aceptadas actualmente en relación al origen del maíz domesticado sostiene que el teosinte anual Zea mays ssp. parviglumis sería el antecesor directo del maíz moderno, debido a que éste es el que presenta mayor afinidad genética en marcadores isoenzimáticos y moleculares. Se discute esta teoría en base a los resultados obtenidos en este trabajo, y se propone que el origen de las divergencias con su probable progenitor podría deberse a diferencias en retroelementos o a procesos de especiación híbrida que habrían ocurrido durante la domesticación del maíz.

Descripción: Fil: Noto, María Gracia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: En el presente trabajo se estudiaron anomalías en el corazón y elpulmón fetal en un modelo de diabetes moderada en rata y se evaluaron los efectos dela administración de agonistas de los receptores activados por proliferadoresperoxisomales α y γ (PPARα, PPARγ) sobre dichas alteraciones. En el corazón y el pulmón fetal de rata diabética se evidenció en forma sexodependiente,sobreacumulación de lípidos, disminución en la expresión de enzimas deoxidación lipídica, aumento en la producción de óxido nítrico (NO) y lipoperoxidos ydisminución de la expresión de PPARα y PPARγ. La administración intrafetal de agonistas de PPARα (LTB4) y PPARγ (15dPGJ2)hacia finales de la gestación o tratamientos maternos con dietas enriquecidas enácidos grasos agonistas de los PPAR durante toda la preñez, mostraron regular variosparámetros alterados por la diabetes materna en corazón y pulmón fetal, entre ellos laanómala expresión de los PPAR y de enzimas y transportadores involucrados en elmetabolismo lipídico, la sobreproducción de NO y el daño oxidativo a lípidos. Variosde los efectos de los agonistas de PPAR variaron de acuerdo al órgano y el sexo fetal. Además, los tratamientos dietarios mostraron efectos particulares de acuerdo al tipode ácido graso suplementado en la dieta materna. De esta forma se identificaron anomalías en el metabolismo de lípidos ymarcadores de un estado pro-inflamatorio y pro-oxidante en corazones ypulmones fetales durante la gestación de rata diabética a término, que sevinculan con alteraciones en la expresión y función de los receptores nucleares PPAR. Estas anomalías podrían condicionar el desarrollo y función de dichosórganos teniendo consecuencias en la vida posnatal. A su vez, se describieronefectos benéficos de los agonistas de PPAR como moduladores de las alteracionesfetales provocadas por la diabetes materna.

Descripción: En sistemas acuosos las interacciones metal-ligando afectan la movilidad, destino y biodisponibilidad de los metales. También son relevantes en la evaluación de tecnologías de tratamiento de efluentes, puesto que la forma química del metal puede condicionar el tipo de tecnología a aplicar. La determinación de la capacidad complejante (CC) (concentración de ligando y constante condicional de complejamiento) es una forma de evaluar dicha interacción. En este trabajo se estudió la CC con respecto a cadmio de sistemas acuosos de baja salinidad y con concentraciones de ligandos en el orden micromolar. Empleando soluciones acuosas de composición controlada y voltamperometría de preconcentración electrolítica como técnica instrumental, se puso a punto la metodología experimental. Los resultados obtenidos muestran que la determinación es aplicable a dicho ámbito de concentraciones. Luego se aplicó la misma metodologíaen tres casos de interés ambiental: un curso de agua superficlal de un arroyo, un medio de cultivo empleado en microbiología y un efluente industrlal de galvanoplastía.

Descripción: Aproximadamente ~ 0.4 Myr después del Big Bang, el Universo se enfrió permitiendo la formaciónde hidrógeno neutro en el medio intergaláctico. Sin embargo, ~1 Gyr después del Big Bang, luego dela formación de las primeras galaxias, el medio intergaláctico se encontraba nuevamente ionizado. Lanaturaleza de las fuentes que proveyeron la energía necesaria para reionizar el Universo es aún temade debate. A pesar de que se atribuye a los fotones ultravioleta emitidos por las primeras poblacionesestelares la mayor parte de la reionización, se ha propuesto que la radiación X emitida por las binariasde rayos X de alta masa (HMXBs) podría haber contribuido a la ionización y al calentamiento delmedio a gran escala. La importancia del efecto de estas fuentes en el Universo primordial dependedel tamaño de las poblaciones, de las características de la emisión y de su interacción con el mediocircundante. En este contexto, en la presente Tesis analizamos el supuesto incremento en el número y la luminosidadde las binarias de rayos X de alta masa en galaxias de baja metalicidad. Para corroborar estahipótesis, compilamos de la literatura una muestra observacional del tamaño y la luminosidad en X depoblaciones de HMXBs en galaxias cercanas, con estimaciones de metalicidad y tasa de formación estelar. Mediante inferencia bayesiana ajustamos modelos de la dependencia en la metalicidad del tamañoy la luminosidad de estas poblaciones. Concluimos que las HMXBs son típicamente diez veces másnumerosas por unidad de tasa de formación estelar en galaxias de baja metalicidad (12+log(O/H)~≤8,que equivale a~≤20% solar) que en galaxias con metalicidad solar. La dependencia de la luminosidadde las HMXBs en la metalicidad es pequeña comparada con la del tamaño de la población. Estosresultados refuerzan la necesidad de considerar el feedback en forma de rayos X y flujos de materia deestas fuentes energéticas en el Universo temprano. Algunas binarias de rayos X, conocidas como microcuásares (MQs) expulsan chorros colimados demateria relativista (jets) que interactúan con el medio circundante. En esta Tesis exploramos la contribuciónde los electrones acelerados en los jets de microcuásares al calentamiento y la ionización delmedio intergaláctico durante la Época de Reionización. Desarollamos simulaciones tipo Monte Carlode la propagación y deposición de energía de dichos electrones en su trayectoria a través del medio,y encontramos que los MQs contribuyen significativamente al calentamiento del medio intergalácticopero que solo ionizan cerca de las galaxias. Su efecto al calentamiento es del mismo orden de magnitudque el de los rayos cósmicos acelerados en supernovas.

Descripción: Distintas observaciones han sugerido la existencia de agujeros negros con masas intermedias entre los agujeros negros de masa estelar y los supermasivos. Estudios teóricos y numéricos indican que los cúmulos globulares son los principales candidatos a albergar tales objetos, sin embargo su existencia es aún tema de debate. En esta tesis se investigan los efectos dinámicos que un hipotético IBMH genera en el medio circundante. Se desarrollan modelos hidrodinámicos para el proceso de acreción sobre el mismo, y se buscan observables que permitan establecer la presencia del IBMH y sus propiedades. Dichos modelos surgen de extender el de Bondi-Hoyle, con el fin de analizar el fenómeno en un escenario más realista. Se investiga la acreción de fluidos cosmológicos y del medio interestelar, buscando correlacionar los parámetros estructurales del cúmulo huésped con la tasa de acreción e investigar el impacto de los parámetros intrínsecos del modelo. Las predicciones de los modelos se contrastan con distintas observaciones disponibles en la literatura, entre ellas la luminosidad de las fuentes X en el centro de los cúmulos globulares, la densidad del medio interestelar de los mismos, y el enrojecimiento producido por el polvo presente en ellos.

Descripción: La teoría de gravedad de Lovelock es la extensión natural de la teoría de Einstein a dimensiones mayores que cuatro. Esta es una teoría de gran importancia en física teórica ya que incluye a la Relatividad general y a las llamadas Gravedades de Chern-Simons como ejemplos particulares. Además, la teoría de Lovelock emerge como una corrección de segundo orden en la parte gravitacional de la acción efectiva de bajas energías de ciertas teorías de cuerdas. En esta tesis, estudiamos soluciones de agujero negro y solitones gravita- torios en la teoría de Lovelock. Comezamos nuestro estudio discutiendo las motivaciones para considerar esta teoría de gravedad en particular. Luego, revemos cómo, en el régimen de distancias cortas, la física de los agujeros negros resulta modificada con respecto a lo que aprendimos de la mano de la Relatividad General. Discutimos en detalle los aspectos geométricos y termodinámicos. Luego, atacamos el problema de incluir términos de borde, y usamos éstos para construir soluciones de vacío que pueden ser pensadas como solitones gravitatorios de la teoría de Lovelock en cinco dimensiones. Analizamos detalladamente la (in)estabilidad y la estructura global de las nuevas soluciones. De la gran familia de nuevas soluciones que encontramos, prestamos particular atención a las soluciones de vacío tipo wormhole y tipo vacuum-shells, esféricamente simétricas. La existencia de este tipo de solu- ciones nos lleva a mostrar que los teoremas tipo Birkhoff en la teoría de Lovelock resultan ser válidos sólo localmente, a diferencia de lo que ocurre en la teoría de Einstein. También estudiamos la naturaleza de la singularidad en la teoría de Lovelock. En esta teoría, existen soluciones de masa positiva que, aún así, exhiben singularidades de curvatura desnudas. Probamos que, cuando estas singularidades son analizadas con el método de quantum probes, estos espacios singulares pueden ser considerados como regulares en el con- texto cuántico. Esta tesis está basada en los resultados que la autora ha publicado en las referencias [81, 80, 82]. El contenido también fue presentado por la autora en dos seminarios dictados en el Martin A. Fisher Physics Department de Brandeis University.

Descripción: Fil: Buzzola, Fernanda Roxana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Guerra, Fabiana Karina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Gadaleta, Patricia Gladys. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: En el presente trabajo se estudió la obtención de fracciones enriquecidas en fibra alimentaria soluble a partir de mesocarpio de calabaza (Cucurbita moschata Duch ex Poiret) obtenido en el mercado Argentino. Se aplicaron técnicas de extracción de fibra soluble las cuales involucraban el uso de una solución buffer de citrato de sodio con y sin presencia de enzima (hemicelulasa y/o proteasa). La extracción enzimática se llevó a cabo durante 4 horas a 45 °C y se estudió el efecto de las técnicas extractivas en el rendimiento y funcionalidad de los productos obtenidos al incluir o no una enzima degradadora de la pared celular. Asimismo, se realizó el aislamiento de fibra soluble mediante técnicas convencionales utilizadas a nivel industrial con fines comparativos (extracción con HCl a pH = 2 a 85 °C durante 60 min). Se caracterizó la composición química, capacidad emulsificante y espesante de cada fracción aislada. Las pectinas obtenidas presentaron propiedades fuertemente influenciadas por la técnica de extracción utilizada.

Descripción: El examen de la fracción alcaloídica contenida en la Laurácea sudamericana Ocotea puberula (Rich.) Nees, condujo al aislamiento de un nuevoalcaloide que suponemos perteneciente al grupo de la aporfina, y parael que se propone el nombre de ocoteína. El material examinado fué recolectado en el Departamento Iguazú, gobernaciónde Misiones, donde este vegetal se presenta como grandesárboles, de l5 a 20 metros de altura, conocidos por los lugareñoscomo Guaicá o Canela guaicá. El procedimiento de extracción adoptado consistió en un agotamientocon benceno de la corteza seca; precipitación de los clorhidratos delas bases por saturación del extracto bencénico con ácido clorhídricogaseoso, y purificación de éstos por disolución en agua, precipitaciónde las bases con hidróxido de amonio y extracción de las mismascon éter de petróleo. Mediante cristalización fraccionada de este extractose obtuvo una fracción cristalina muy rica en ocoteína, quepor un tratamiento ulterior dió el compuesto puro. La ocoteína forma cristales tetragonales, P.F. 140°C, óptivamenteactivos [α]D(22°C)=+37,2° (etanol 96%). Los análisis de la base y algunosderivados salinos (clorhidrato, picrato, yodhidrato, perclorato yyodometilato) condujeron a la fórmula empírica C21H2305N. Un examen analítico-funcional de la ocoteína indicó la existenciaen su molécula de un grupo metilimino, de uno dioximetilénico y detres metoxilos, siendo la función amina de carácter terciario. Por acción del anhidrido acético y del clorocarbonato de etilo, la ocoteínaprodujo N-derivados de sustitución, con pérdida de la actividadóptica y de sus propiedades básicas. Ambas reacciones han sido propuestascomo caracteristicas de los alcaloides de núcleo aporfínico. Este comportamiento, unido al hecho de haber sido aislada de una Laurácea, familia en la que existen exclusivamente alcaloides aporfínicos,nos conduce a suponer que se trate de una trimetoxi-dioximetilen-aporfina. La oxidación de la ocoteína con permanganato en acetona condujo al aislamientode un compuesto básico coloreado de composición C21H2107Nque se consideró, en base a lo comentado anteriormente, como una fenantrenoquinona sustituída.

Descripción: Del germen de trigo se aislan tres clucósidos fenólicos cuya estructura se determina. Se describe en primer lugar la técnica de aislamiento utilizada, luego los métodos empleados para la determinación de su estructura y finalmente la aplicación de éstos a los glucósidos del germen. Especial énfasis se da a los métodos de oxidación por el bromo y por oxidasas vegetales, los que permiten una aproximación muy grande para la determinación de la estructura de estos glucósidos fenólicos. Por acción del agua de bromo diluída, los glucósidos tales como la arbutina, el p-hidroxifenil celobiósido, el p-hidroxifenil genciobiósido y el derivado monometílico de la hidroquinona liberan inmediata y cuantitativamente el resto hidrato de carbono o metanol. En los glucósidos que tienen todas funciones hidroxilo bloqueadas no se produce reacción, o esta es incompleta. El estudio de los espectros ultravioletas comprueba la formación de la p-benzoquinona cuando se trata con agua de bromo arbutina, hidroquinona, p-etoxi o p-metoxifenol y luego la formación de hidroquinona por reducción con agua saturada con adhidrido sulfuroso. El caso del resorcinol glucósido, la liberación de glucosa se produce en forma gradual y rquiere un mayor agregado de agua de bromo. Los cambios producdos en los espectros así como los observados por cromatografía, evidencia la formación de derivados bromados y finalmente un compuesto cetónico con una doble ligadura. Se estudia además la acción sobre otros fenoles y sus respectivos glucósidos. En cuanto a la acción de la fenol oxidasa, se observa la liberaciión del resto de hidrato de carbono cuando se incuba con estas enzimas glucósidos tales como el resorcinol glucósido, la arbutina,el hidroxifenil ganciobiósido y celobiósido. Con glucósidos como el fenial glucósido, el p-metoxifenil glucósido y genciobiósido o el metoxihidroquinona glucósido no hay liberación de glucosa y no se observa cambio alguno. Los espectros de los productos de incubación de los diversos fenoles y glucósidos con la fenol oxidasa muestran cuando se incuba hidroquinona o arbutina la formación del espectro característico de la hidroxi p-benzoquinona; la metoxihidroquinona da lugar al máximo de las p-quinonas, mientras que su glucósido no cambia de máximo característico y la resorcina no experimenta ningún cambio. La reactividad de la fenol oxidasa con glucósidos como la arbutina y el resorcinol glucósido se explica de acuerdo a la reactividad de esta enzima frente a los fenoles con sustituyentes -CH3 ó -OCH3 en posición meta o para con respecto al grupo hidroxilo libre. Tanto la acción de la fenol oxidasa como la del agua de bromo diluída se usan en la identificación de los glucósidos aislados del germen de trigo. Estos se aislaron a partir de un extracto acuoso de germen previamente desengrasado, el que luego se purifica por adsorción en carbón y los glucósidos se aislan por cromatografía en papel. Por elución del papel se aislaron finalmente tres glucósidos fenólicos. El glucósido I, que corre menos en cromatografía, se obtiene en forma de un precipitado y es identificado como un trisacárido glucósido. El resto trisacárido es liberado cuantitativa e inmediatamente por acción del agua de bromo, hidrolizado por el ácido sulfúrico a glucosa la que es identificada específicamente por acción de la glucosa oxidasa. En cuanto a la parte del compuesto fenólico, éste es identificado como la metoxihidroquinona en tres solventes diferentes. Los espectros ultravioletas del glucósido natural son además idénticos a los espectros del glucósido preparado sintéticamente. Por acción de la glucosa oxidasa, tanto el glucósido natural como el sintético no reaccionaron y los espectros de los productos de reacción no presentaron cambios en el máximo. En cuanto a los otros dos glucósidos (II y III), se identificaron como disacáridos glucósido (II) y monosacárido glucósido (III). La parte de hidrato de carbono es identificada como genociobiosa (glucósido II) y como glucosa (glucósido III). Los espectros de estos glucósidos son idénticos a los del trisacárido glucósido. Por hidrólisis y cromatografía se comprueba que el fenol de estos glucósidos es también la metoxihidroquinona.

Descripción: Fil: Santa Coloma, Tomás Antonio. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Elizalde, Patricia Virginia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: La enzima nucleósido difosfato quinasa (NDP quinasa) es ubicua y cataliza la síntesis de NTPs a partir de sus correspondientes NDPs y un NTP dador (fisiológicamente el ATP). La reacción sigue una cinética de ping-pong con la formación del intermediario de alta energía (P)NDP quinasa. Aparte de su rol fundamental en la síntesis de NTPs, se ha relacionado a esta enzima con a) la activación de proteínas G en la transducción de señales, b) la diferenciación de Drosophila y distintas líneas celulares, c) inhibición de metástasis (nm23), y recientemente ha sido identificada como d) un factor de transcripción. En el presente trabajo se presentan resultados de la purificación y caracterización de la NDP quinasa de Candida albicans, un hongo patógeno oportunista de vertebrados. Se caracterizó la enzima bioquímicamente, en cuanto a su tamaño, al número de subunidades, su punto isoeléctrico, su estabilidad térmica, y la posibilidad de usar distintos NTPs y NDPs como dadores y aceptores de la reacción. A través de dos enfoques experimentales diferentes se demostró que los nucleótidos de guanina y adenina son los mejores aceptores de la reacción (Arch). Biochem. Biophys. (1995), 187-194). Se evaluó a su vez, la capacidad de NDP quinasas de distinto origen de fosforilar a análogos de nucleótidos utilizados en terapias antivirales; para ello, se desarrolló la metodología para medir la actividad NDP quinasa con estos sustratos (J. Biol. Chem. (1996), 271, en prensa). Se estudió la actividad y la presencia de la enzima durante el crecimiento y la morfogénesis del hongo; la actividad específica máxima se encontró durante el crecimiento logarítmico (An. Asoc. Quím. Argent. (1993), 81, 4-5, 359-366). Se realizó un estudio detallado del proceso de autofosforilación de la NDP quinasa, y se encontró que sólo se encuentra autofosforilada en residuos de histidina. La autofosforilación de la enzima también se realizó en extractos crudos de C. albicans y de Escherichia coli. Dado que la NDP quinasa se autofosforila en residuos de histidina como parte de su mecanismo de acción, los ensayos para estudiar la posible regulación de la enzima por fosforilación a través de alguna quinasa necesitan de una metodología que pueda distinguir la fosforilación en histidina de aquella en serina o treonina. Se desarrolló entonces una metodología sobre membranas de Immobilon con el uso de buffers de pH 1 y 14 con el agregado de 5 por ciento metano. Esta metodología se utilizó para estudiar la fosforilación in vivo en C. albicans y en células HeLa en cultivo. Se discuten las posibles implicancias de la fosforilación en serina in vivo.

Descripción: El picudo del algodonero, Anthonomus grandis Boheman (Coleoptera: Curculionidae), esconsiderado una de las plagas más importantes de algodón en América, presente en Argentinadesde 1993. El objetivo general del trabajo fue seleccionar aislamientos nativos de los hongosentomopatógenos Beauveria bassiana y Metarhizium anisopliae (Ascomycota: Hypocreales)virulentos para el picudo del algodonero. Para ello se obtuvieron aislamientos nativosprovenientes de muestras de suelo e insectos, así como cepas pertenecientes a la micoteca del Laboratorio de Hongos Entomopatógenos (IMYZA, INTA). Se evaluó la patogenicidad yvirulencia de 28 aislamientos de M. anisopliae y 66 aislamientos de B. bassiana sobre adultosde picudo y se estudiaron los efectos subletales sobre la alimentación y oviposición producidospor estos hongos. Por otro lado, fueron evaluadas distintas características de los aislamientosseleccionados, como la compatibilidad con los insecticidas químicos utilizados en campo, elefecto conjunto de los insecticidas químicos y los aislamientos sobre la plaga, y la tolerancia aaltas temperaturas de los aislamientos. Finalmente, se evaluaron parámetros de producciónmasiva de conidios de los aislamientos seleccionados y se realizaron evaluaciones en campo delas formulaciones experimentales. Los aislamientos de M. anisopliae (Ma 50 y Ma 20)resultaron los más virulentos donde la concentración letal media fue 1,13 x 10*7 y 1,20 x 10*7conidios/ml, respectivamente. Además, se encontró una disminución en la alimentación de lashembras infectadas con los aislamientos Ma20 y Bb23, y una disminución de la oviposición con Ma 20. Por otro lado, los aislamientos de M. anisopliae evaluados fueron compatibles con losinsecticidas piretroides y más tolerantes a temperaturas altas. Los resultados obtenidos indicanla posibilidad de utilizar M. anisopliae como agente de control microbiano incluyéndolo en unprograma de Manejo Integrado del Picudo del Algodonero.

Descripción: Fil: Silberstein Cuña, Susana Iris. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Los LePRKs son receptores quinasa que se localizan en la membrana plasmática de polen, posiblemente mediando interacciones polen-pistilo. Previamente, hemos demostrado que LePRK2 se encuentra fosforilada en polen maduro y germinado, y se desfosforila cuando microsomas de polen son incubados con extractos de estigma-estilo. Esto sugiere que por lo menos LePRK2 podría estar transduciendo una señal del pistilo a través de la actividad de LePRK2. En esta tesis, mostramos que la desfosforilación de LePRK2 está mediada por una molécula proveniente del pistilo resistente al tratamiento térmico, alcalino y proteasas. Basándonos en la desfosforilación de LePRK2, desarrollamos un protocolo de purificación con el cual obtuvimos un pico aislado de ~3550 Da (determinado por UV-MALDI-TOF MS) correspondiente a esta molécula peptídica que nombramos MrX. Con el fin de evaluar los efectos de MrX en tubos polínicos en crecimiento, realizamos ensayos de germinación in vitro en presencia de MrX parcialmente purificado y determinamos la longitud del tubo polínico como marcador del estado fisiológico. La adición de MrX al medio de germinación resultó en un aumento del largo del largo del tubo polínico en una forma dependiente de la dosis, mientras que las fracciones control no tuvieron efecto alguno. Nuestra hipótesis plantea que las interacciones polen-pistilo a través del complejo de LePRKs involucran la percepción de MrX por LePRK2, seguido de una desfosforilación de ésta y un incremento de la tasa de crecimiento del tubo polínico.

Descripción: Desde el inicio de la utilización de variedades transgénicas, la superficie agrobiotecnológica ha aumentado exponencialmente, con un incremento del orden de 80 veces en solo 14 años, y su uso se ha expandido a más de veinte especies vegetales. Las ventajas obtenidas con estos cultivos transgénicos de primera generación incluyen: mejor control de insectos y malezas, mayor productividad, y una reducción del uso de agroquímicos. Los avances de la biotecnología en los últimos años permitirán, probablemente en un futuro muy cercano, el desarrollo de cultivos con características de interés para los consumidores, relacionadas con una mejora en la calidad nutritiva.. En este sentido las semillas constituyen un blanco ideal para este tipo de cultivos debido a sus propiedades de dormición, almacenamiento de nutrientes y la capacidad de germinar en condiciones limitantes de nutrientes. En este trabajo, se aislaron las regiones promotoras de tres genes específicos de semillas de girasol (Helianthus annuus L. HA89), que codifican para una proteína de transferencia de lípidos (HaAP10), una oleato desaturasa (HaFAD2-1) y una oleosina (HaOLE), las cuales fueron clonadas y caracterizadas “in silico”. Los fragmentos aislados de 964, 867 y 1838pb respectivamente, contienen en sus secuencias varios motivos específicos de semilla como elementos GCN4, motivos (AACA) y (ACTG), Prolamine-Box, E-Box, G-Box, sitos de unión SEF, Sh1 Box y elementos RY/G repetidos entre otros. A su vez, contienen motivos de respuesta a hormonas ABRE y GARE (ácido abscísico y giberélico) relacionados con desarrollo embrionario. Se realizaron análisis funcionales mediante la fusión de los promotores aislados al gen reportero GUS en plantas transgénicas de Arabidopsis y lechuga. No se observó actividad de la proteína reportera en ningún tejido vegetativo exceptuando los cotiledones de plántulas pequeñas. Al ser analizados a lo largo del desarrollo de la semilla, se observó tinción específica restringida a tejido embrionario. En los ensayos fluorométricos cuantitativos se observó actividad en estadios tardíos del desarrollo, similares a los patrones típicos de genes de reserva, siendo el HaFAD2-1 un promotor con una fuerte actividad especifica de semilla, con niveles similares a los del promotor constitutivo 35S. En este trabajo de tesis se confirmó que las regiones promotoras aisladas dirigen la expresión a semilla en forma específica y fuerte, con diferencias temporales, constituyendo, por lo tanto, importantes herramientas que podrán ser de utilidad en futuras aplicaciones biotecnológicas.

Descripción: Fil: Fernández Cobo, Mariana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: El presente trabajo, comprende el estudio químico de los componentes aislados y caracterizados en Morrenia brachystephana Griseb. (Asclepiadácea), y su extensión al estudio de otras 5 especies del mismo género. En el mismo se describen: I. La familia de las Asclepiadáceas incluyendo al género Morrenia, su abundancia y distribución geográfica y una enumeración de las sustancias aisladas de la familia registradas en la literatura, que en algunos casos se hallan concentradas en la misma. II. Los antecedentes sobre la acción biológica de M. brachystephana, "tasi", desde la pintoresca narración de Alcalde Espejo en 1871 hasta nuestros días, en que se corroboró la actividad mencionada mediante ensayos modernos con animales de laboratorio. III. Los alcanos de Asclepiadáceas, con una introducción en la que se indican las características de estos compuestos de interés quimiotaxonómico, su abundancia y variaciones estructurales, y el análisis comparativo de los resultados encontrados en las 6 especies de Morrenia estudiadas. IV. Los flavonoides, también de interés quimiotaxonómico, sus variaciones estructurales, interrelaciones y biosíntesis de los distintos tipos. V. El triterpeno germanicol, componente mayoritario de los extractos en éter de petróleo de las especies estudiadas, una revisión bibliográfica de su aislamiento de fuentes vegetales, su determinación estructural, tranformaciones en medio ácido y biosíntesis de triterpenos pentacíclicos. VI. La discusión de los resultados obtenidos, indicando cómo se efectuó la separación y determinación estructural de las sustancias halladas. Estudio de los espectros de resonancia magnética de hidrógeno y de masa del germanicol y derivados. Se analiza la distribución de los flavonoides en las especies de Morrenia, frente a posibles relaciones taxonómicas, y se indican otros flavonoides aislados de Asclepiadáceas. También se comenta la evolución de los flavonoides en plantas superiores. VIII. La Parte Experimental, en la que se detallan las técnicas empleadas y los procedimientos seguidos en el aislamiento y cracterización de los distintos compuestos en los extractos en éter de petróleo y metanol en M. brachystephana. Posteriormente, se indican los datos obtenidos en la ampliación de este estudio a otras especies de Morrenia. Finalmente en un Apéndice se dan los datos de recolección de cada una de las especies estudiadas. Las referencias bibliográficas están ordenadas según orden alfabético del primer autor del trabajo y año del mismo, y aparecen al final de la Tesis.

Descripción: Fil: Fernández Murray, Jorge Pedro. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: En esta tesis se describe el aislamiento, bioguiado a través de ensayos de actividad antifúngica y/o antibacteriana, y la elucidación estructural de los metabolitos presentes en los cultivos de hongos provenientes de diversas fuentes naturales. Las especies analizadas Alternaria brassicicola, A. raphani, Aspergillus restrictus, Trichoderma koniigii y Ascosphaera apis fueron aisladas de polen de colmenas ubicadas en el apiario del INTA (Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria) de la ciudad de Balcarce, Buenos Aires, Argentina. De Alternaria brassicicola y A. raphani se aislaron los compuestos 1-4, siendo el ácido tenuazónico, compuesto 2, el responsable de la actividad antibacteriana frente a la bacteria P. larvae, patógena de las larvas de las abejas melíferas. El compuesto 1, ácido D-allo-tenuazónico, es aislado por primera vez como producto natural. De Aspergillus restrictus se aisló el compuesto 3, conocido como pseurotina A3. Del hongo entomopatógeno de las larvas de las abejas melíferas, Ascosphaera apis, se aislaron los compuestos 6-8, siendo 6 y 8 monoterpenos de estructura química no informada previamente. Los compuestos 6 y 8 mostraron actividades antibióticas, antifúngicas y antioxidantes moderadas, mientras que el compuesto 7 posee buena actividad frente al hongo fitopatógeno F. virguliforme. Del cultivo de Trichoderma koningii se aislaron los compuestos 9, ácido hidroxiaspergílico, y 10, ácido terréstrico, ambos con actividad antifúngica importante frente a F. virguliforme. El estudio del cultivo de una cepa endófita septada oscura (DSE1) aislada de raíces de plantas de soja, brindó los compuestos 11-13. Dichos metabolitos son activos frente a los hongos F. virguliforme y F. lateritium. Se sintetizaron nuevos agentes antimicrobianos previamente aislados del cultivo del hongo intermareal Acremonium furcatum, compuestos 14 y 15. Los intermediarios sintéticos 21 y 22 resultaron poseer muy buena actividad antifúngica frente a F. virguliforme, Aspergillus fumigatus, Botrytis cynerea, Colletotrichum trucatum y Macrophomina phaseolina. Todos los extractos de las especies estudiadas fueron fraccionados mediante distintas técnicas cromatográficas hasta la obtención de los metabolitos de interés puros. La elucidación estructural se llevó a cabo utilizando principalmente experimentos de RMN-1D y 2D, junto con espectrometría de masa.

Descripción: La Mandevilla pentlandiana es un sufrútice trepador perteneciente a lafamilia Apocynaceae, que se encuentra distribuida en el norte y centro denuestro país, principalmente en zonas serranas. El objetivo de este Trabajo de Tesis fue el aislamiento y elucidaciónestructural de los cardenólidos presentes en el extracto etanólico de raiz de Mandevilla pentlandiana. Se aislaron y caracterizaron también otros metabolitospresentes en el mismo extracto, tales como hidrocarburos, triterpenoides (libresy esterificados), esteroles (libres, glucosidados y esterificados con ácidosgrasos), peróxidos de esteroles, lignanos, un sesquiterpeno y un pregnanoglicosidado. El esquema de fraccionamiento del extracto se indica en Ia página 204. El aislamiento de los compuestos fue efectuado mediante diversastécnicas cromatográficas tales como cromatografía en columna, cromatografíaen columna seca, cromatografía en capa preparativa y cromatografía líquida dealta resolución. La elucidación de la estructura de los mismos se realizó por métodosespectroscópicos tales como RMN-1H,RMN-13C y EM. En RMN se utilizaronsecuencias especiales de pulsos y métodos de correlación H-C (COSY, HMQC. HMBC). En el caso de espectrometría de masa se utilizaron técnicas deionización por impacto electrónico (IE)y por bombardeo por átomos rápidos (FAB). La utilización de instrumental multisector permitió efectuarespectrometría de masa de alta resolución y la disociación por activacióncolisional permitió estudiar secuencias genéticas de iones seleccionados demuestras tal cual, cationizadas y desprotonadas. En el caso de glicósidos, la determinación de la estructura de la aglicona yde los hidratos de carbono se realizó por métodos espectroscópicos sobre losproductos de la hidrólisis y sobre el glicósido sin hidrolizar. Para determinar la estructura de los monosacáridos componentes sehidrolizaron los glicósidos y se derivatizaron convenientemente los productos dela hidrólisis. Dichos derivados se analizaron por CGL. Finalmente se determinóla secuencia en que los monosacáridos se hallaban unidos entre sí por mediode espectrometría de masa tandem empleando disociación por activacióncolisional. Se realizaron bioensayos para determinar la citotoxicidad de loscardenólidos aislados. Los compuestos aislados en este Trabajo de Tesis son los siguientes: Hidrocarburos lineales de 14, 16 a 31 y 34 átomos de carbono. Etil cetonas lineales de 13 y 15 a 19 átomos de carbono. Acidos grasos: C 16:0, C 17:0, C 15:3, C 18:0, C 18:1 y C 18:2.

Descripción: En el presente trabajo se describe el aislamiento y la elucidación estructural de metabolitos polares presentes en cuatro holotureos provenientes del Mar Argentino y uno del Mar Chileno. La primer especie estudiada fue Psolus patagonicus. A partir del extracto etanólico del organismo se aislaron los glicósidos triterpenoidales sulfatados Patagonicósidos A (1), B (2) y C (3). El compuesto mayoritario 1 fue aislado por primera vez en nuestro laboratorio a partir de ejemplares de P. patagonicus recolectados en Bahía Ensenada (Tierra del Fuego). Los glicósidos minoritarios 2 y 3 son compuestos novedosos. Los compuestos disulfatados 1 y 3 se diferencian únicamente en la posición de uno de los grupos sulfato unido a los monosacáridos de la cadena glicosídica, mientras que el compuesto 2 es monosulfatado y presenta una cadena glicosídica diferente a la de 1 y 3. Los compuestos 1-3 presentaron actividad citotóxica y antiproliferativa frente a las líneas celulares tumorales A549, Hep3B, MDA-MB231 y actividad antifúngica frente a Cladosporium cladosporoides, Cladosporium fulvus, Fusarium oxysporum y Monilla sp. Los glicósidos triterpenoidales bioactivos Patagonicósidos A (1), B (2) y C (3) también fueron aislados del holotureo Psolus squamatus, especie estudiada por primera vez desde el punto de vista químico en este trabajo de tesis doctoral. Del extracto etanólico de Pseudocnus dubiosus leoninus se aislaron dos glicósidos triterpenoidales (4 y 5). El compuesto novedoso 4 presenta la aglicona 16-cetoholost- 7-en-3β-ol y su cadena glicosídica corresponde a [3-O-metil-β-Dglucopiranosil-( 1-3)-6’’’-O-SO3Na-β-D-glucopiranosil-(1-4)-β-D-quinovopiranosil-(1- 2)-4΄-O-SO3Na-β-D-xilosa] identificada previamente en los glicósidos Cucumechinósidos A y C, aislados del holotureo Cucumaria echinata y en Hemoiedemósido A, aislado del holotureo Hemioedema spectabilis. Hemioedema spectabilis fue la cuarta especie estudiada. Se aislaron dos compuestos, Hemoiedemósidos A (6) y B (7), previamente caracterizados en nuestro laboratorio. Ambos compuestos presentan la misma aglicona y se diferencian en el grado de sulfatación de sus cadenas glicosídicas. Los glicósidos presentaron actividad citotóxica y antiproliferativa frente a las líneas celulares A549 y HeLa. El compuesto trisulfatado B (7) resultó más activo en ambas líneas celulares. De H. spectabilis se aisló además una mezcla compleja de glucosilceramidas compuesta por gluco- y galactocerebrósidos no informados anteriormente para este holotureo. Los compuestos aislados presentaron actividad citotóxica y antiproliferativa frente a la línea celular A549. El holotureo Athyonidium chilensis es una especie comestible explotada comercialmente por Chile. A partir de los extractos polares de su parte interna, epidermis y túbulos se aislaron fosfolípidos como componentes mayoritarios en las tres partes del organismo, además de glicósidos triterpenoidales minoritarios. Los ácidos grasos componentes de los fosfolípidos presentaron mezclas complejas de ácidos grasos saturados, monoinsaturados y poliinsaturados, incluyendo los ácidos araquidónico y eicosapentanoico. La gran concentración de fosfolípidos en A. chilensis, su composición en ácidos grasos esenciales y la baja concentración de saponinas tóxicas demuestran por primera vez el valor nutritivo de esta especie. Todos los extractos de las especies estudiadas fueron purificados mediante distintas técnicas cromatográficas. La elucidación estructural de los compuestos se realizó mediante una combinación de experimentos de RMN (1D y 2D), espectrometría de masa de alta resolución y reacciones químicas para la obtención de derivados.

Descripción: En este trabajo se detalla el aislamiento y elucidación estructural de los metabolitos secundarios presentes en los extractos orgánicos de las esponjas Siphonochalina fortis y Tedania sp.; de los octocorales Anthomastus bathyproctus, Primnoella divaricata, Primnoella scotiae y Paramuricea sp.; de los tunicados Aplidium conicum y Aplidium sp. y del briozoo Aspidostoma giganteum. Todos los extractos de las especies estudiadas fueron fraccionados mediante distintas técnicas de cromatografía hasta la obtención de los metabolitos secundarios de interés puros. La elucidación estructural se realizó utilizando los experimentos de RMN 1D y 2D, espectrometría de masa y reacciones de derivatización. De la esponja Siphonochalina fortis, colectada en Bahía Bustamante, Chubut, se aislaron tres ácidos biliares acetilados (70-72). Este trabajo es el primer aislamiento de ácidos biliares acetilados a partir de esponjas. El compuesto 71 fue detectado por primera vez como producto natural. De la especie Tedania sp., recolectada en el Golfo de San José, Península Valdés, Chubut, se aislaron tres nucleósidos: 2´-desoxiuridina (85), 2´-desoxiadenosina (86) y timidina (87) y un Anor esteroide (88). Del octocoral Anthomastus bathyproctus, recolectado en las islas Shetland del Sur, se aislaron 5 nuevos esteroides (103-107). De los octocorales Primnoella divaricata y Primnoella scotiae, colectados en el Golfo de San Jorge, Chubut, se obtuvieron dos ácidos biliares oxidados (108-109) y por último, del octocoral Paramuricea sp., recolectado cerca de las Islas Shetland del Sur, se aislaron 3 guayanólidos (110, 112 y 113). El compuesto 113 es nuevo. Del tunicado Aplidium conicum, recolectado en la Península Valdés, Chubut, se aisló el meroterpenoide, (+)-conicol (144). Del tunicado Aplidium sp., colectado en la Península Valdés, Chubut, se aislaron los rubrólidos L (146) y O (145). Del briozoo Aspidostoma giganteum, recolectado en el Golfo de San Jorge, Chubut, se aislaron 10 nuevos alcaloides bromados, las aspidostomidas A-H (198, 207, 210-212, 220-222, 225, 227). Este es el primer reporte de este tipo de alcaloides en briozoos. Cinco de estas aspidostomidas, presentan una estructura derivada de tirosina unida a un anillo pirrólico altamente halogenado, a través de un enlace amida, mientras que otros 3 compuestos presentan una estructura derivada de triptofano unido a un anillo de pirrolocetopiperazina, altamente halogenado. Por ultimo, la diaspidostomida, es un ejemplo único de una estructura dimérica que exhibe una estructura N,N-diacil hidrazida en su esqueleto.

Descripción: A partir del extracto polar de la estrella Cosmasterias lurida (Philippi, 1858) se aislaron y caracterizaron dos glicósidos esteroidales (Luridósidos A y B) y cuatro asterosaponinas (Cosmasterósidos A, B, C, y D), todos ellos de estructura novedosa. Se aislaron también el Pycnopodiósido C, Ophidianósido F y Forbésido H reportados con anterioridad en Pycnopodia helianthoides, Ophidiaster ophidianus y Asterias forbesi, respectivamente. El Cosmasterósido A contiene la misma cadena de oligosacárido que el Ophidianósido F con la aglicona (20S)-5α-colesta-9(11),24-dieno-3β,6α,20-triol3β-sulfato. Los Cosmasterósidos B, C y D contienen Thomasterol A como aglicona y difieren en el número e identidad de los monosacáridos de la cadena de azúcares. El Cosmasterósido B contiene una cadena de oligosacáridos novedosa que difiere de la del Ophidianósido F en el reemplazo de la unidad de quinovosa unida a C-6 de la aglicona por glucosa. Los tetrasacáridos Cosmasterósidos C y D están relacionados con el Cosmasterósido B y el Ophidianósido F respectivamente por la pérdida de la fucosa terminal. Del asteroideo Luidia ludwigi scotti Bell (1917) se aislaron dos asterosaponinas, los Acanthaglicósidos B y C aislados previamente de la estrella Acanthaster planci y tres esteroides polihidroxilados. Dos de ellos, 5α-colesta-3β,5,6β,15α, 16β,26-hexaol y Sα-colesta- 3β,5,6β,15α,26-pentol 15-sulfato, fueron previamente aislados de las estrellas Myxoderma platyacanthum y Luidia maculata respectivamente y 5α-colesta-3β,5,6β,15α,26-pentol 26-sulfato resultó novedoso. La presencia de una función hidroxilo en C-26 es común en esteroides polihidroxilados aislados de estrellas. Sin embargo, un grupo sulfato en esa posición es muy poco usual. Los cuatro esteroides polares aislados de Ophioplocus januarii (Lütken 1856) presentan grupos sulfato en C-3α y C-21,los anillos A/B fusionados en cis, y grupos hidroxilos en los carbonos C-4α y C-11β. El esteroide 24-norcolest-(22E)-5β-22-en-3α,4α,11β, 21-tetraol 3,21-disulfato resultó novedoso. Los otros tres esteroides fueron aislados previamente de los ofiuros Ophiocoma dentata, Ophiarthrum elegans y Ophiarachna incrassata. Se estudió la actividad antiviral de los compuestos aislados de Ophioplocus januarii contra cuatro virus patógenos en humanos: virus del Herpes simplex tipo 1 (HSV-1), virus Junin (JV), virus sincitial respiratorio (RSV) y virus del polio (PV). A partir del ofiuro antártico Ophionotus victoriae (Bell, 1902) se aislaron cuatro esteroides sulfatados, resultando dos de ellos novedosos. El estudio del ofiuro Ophiocoma echinata (Lamarck, 1816) permitió aislar dos esteroides polihidroxilados sulfatados 5β-colest-3α,4α,11β,12β,21-pentol-3,21-disulfato y 5β-colest- 3α,4α,11β,21-tetraol-3,21disulfato aislados previamente de Ophioderma longicaudum y Ophiocoma dentata respectivamente y un alqueno sulfatado de estrudura novedosa. El extrado polar del ofiuro antártico Astrotoma agassizii (Lyman, 1875) permitió aislar 5 esteroides polihidroxilados sulfatados. La presencia del grupo sulfato en C-2 es una característica poco común en los esteroides polares aislados de ofiuros. Además, los compuestos novedosos presentan un grupo isoprenilo en la cadena lateral y constituyen los primeros ejemplos de esta cadena en ofiuros. Los dos compuestos conocidos fueron aislados previamente del ofiuro antártico Ophiosparte gigas.

Descripción: Se describe el aislamiento y elucidacíón estructural de los withanólidos presentes en lasespecies Datura ferox, Jaborosa runcinata y Jaborosa odonelliana, utilizando técnicasespectroscópicas combinadas con modelado molecular. De la especie Datura feroxrecolectada en la provincia de Córdoba, se aislaron, por dos métodos diferentes, cuatrowithanólidos novedosos: el 15-hidroxiderivado de la nicandrina B y las daturolactonas 5, 6 y 7, además de siete withanólidos conocidos, withaferoxólido, withanólido mayoritariode esta especie, withanicandrina, withastrarnonólido, withametelina E y lasdaturolactonas l, 2 y 3. De la especie Jaborosa runcinata recolectada en la provincia de Entre Ríos, se aislaron siete jaborosolactonas novedosas de tipo espiránico: lasjaborosolactonas 1, 2, 3, 4, 5, 6 y 9. Estos compuestos presentaron un sistema l7(20)-en-22-ceto, funcionalizacíón no encontrada previamente en la familia de los withanólidos,siendo la principal diferencia entre los mismos la sustitución en el anillo B. De la especie Jaborosa odonelliana recolectada en la provincia de Salta en abril y diciembre, seaislaron, además de jaborosolactona P, compuesto mayoritario previamente reportado enesta planta, seis withanólidos espiránicos novedosos: las jaborosolactonas 10, ll, 12, 13 , 14 y 15. Como en el caso de los withanólidos aislados de Jaborosa runcinata, la principaldiferencia entre los compuestos aislados era la sustitución en los anillos A y B, siendo lacantidad y tipo de withanólidos diferente en ambas épocas de recolección. Esta variaciónestacional había sido encontrada previamente en otro tipo de Solanáceas, habiéndoserelacionado en algunos casos, con mecanismos de defensa química. Los compuestosmayoritarios de las especies antes mencionadas se evaluaron como antialimentarios delarvas de insectos y como agentes quimiopreventivos del cáncer obteniéndose resultadosprometedores.

Descripción: Fil: Veleiro, Adriana Silvia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Se describe el aislamiento y elucidación estructural de los withanólidos de S. origanifoliarecolectada en Buenos Aires en invierno y de la misma planta recolectada en la Pcia. de Salta en primavera-verano. De plantas recolectadas en Buenos Aires en agosto se aislaroncuatro salpichrólidos novedosos con anillo D aromático: los salpichrólidos E y F decadena lateral no cíclica, los salpichrólidos H e I como mezclas 26R/26S que presentan laapertura hidrolítica del 24,25-epóxido en la cadena lateral y además el salpichrólido A,mayoritario de esta especie y el salpichrólido C. De planta recolectada en noviembre seaislaron los salpichrólidos A y C y un withanólido fenólico nuevo, el 15-hidroxiderivadodel salpichrólido A. De S. origanifolia recolectada en la Pcia. de Salta se aislaron ademásde los salpichrólidos A y C tres withanólidos nuevos con anillo D aromático: lossalpichrólidos J y K con estado de oxidación de C-22 y C-26 invertido y el salpichrólido M, isómero del salpichrólido H con estereoquímica inversa en C-24 y C-25. También seobtuvieron dos withanólidos nuevos con anillo D de cinco miembros: los salpichrólidos Ly N. Los withanólidos aislados permitieron aclarar los caminos biosintéticos ydegradativos en Salpichroa origanifolia. El seguimiento cromatográfico anual de lossalpichrólidos mayoritarios, junto con los resultados de ensayos de actividadantialimentaria frente a Tribolíum eastaneum y Musca domestica sugieren que estoscompuestos desempeñan rol insecticida en la planta.

Descripción: En este trabajo se desarrolla la síntesis, caracterización estructural y análisis de laspropiedades espectroscópicas y electroquímicas de una serie de oligómeros de ruteniospuenteados por cianuro. El objetivo principal de esta tesis es explorar el efecto de sintonizar laenergía de los centros metálicos cambiando los ligandos auxiliares con el fin de obtenercomplejos que estén en la frontera de delocalización electrónica. Estos compuestos se preparan a partir de la reacción de tetrapiridinas de rutenio dicianuradas (trans-[RuIIL4(CN)2]) con fragmentos {–RuII(py)4Cl} o {–RuII(T)(bpy)}, siendo L = piridina (py), 4-metoxipiridina (MeOpy) o 4-dimetilaminopiridina (DMAP); T = 2,2’;6’,2’’-terpiridina (tpy) otris(1-pirazolil)metano (tpm) y bpy = 2,2’-bipiridina. Todos los complejos dinucleares ytrinucleares así obtenidos mantienen sus centros metálicos como RuII, los cuales adoptan unaconfiguración lineal en todos los casos. Algunos de ellos fueron caracterizados porcristalografía de rayos X de monocristal, la cual mostró que los oligómeros están formados porfragmentos robustos ya que el cambio de ligandos auxiliares no impacta apreciablemente enlas distancias de enlaces al comparar compuestos análogos. Mediante la técnica de espectroelectroquímica se estudió la espectroscopía UV-vis, NIR e IR detodos los estados de oxidación de los compuestos sintetizados. La espectroscopía electrónicade los estados de valencia mixta presenta intensas bandas de transferencia de carga metalmetal,las cuales aumentan en intensidad y se hacen asimétricas a medida que aumenta elacoplamiento electrónico entre los rutenios. En la familia de complejos trinucleares trans- [RuL4{(μ-CN)Ru(py)4Cl}2]3+, mientras más básico es el ligando L, mayor es la comunicaciónelectrónica entre los fragmentos terminales. El caso extremo se da con L = DMAP donde selogra la completa delocalización electrónica; siendo este, el primer ejemplo reportado enliteratura de un trímero puenteado por cianuro Clase III. Resultados similares se obtienen alreemplazar los cloros terminales por acetonitrilos en el complejo trans-[Ru(py)4{(μ- CN)Ru(py)4Cl}2]2+. Para estudiar la interacción metal-cianuro-metal y la naturaleza de las transiciones electrónicasasociadas, se realizaron cálculos de DFT (Density Functional Theory) y TD-DFT (Time- Dependent Density Functional Theory), tanto en vacío como en solvente, para todas lasespecies redox de los complejos medidos experimentalmente. Estos cálculos resultaron unaherramienta muy útil para asignar a algunos de los sistemas estudiados como delocalizados (Clase III). Además, nos permitieron explicar el drástico cambio en el acoplamiento electrónicoal cambiar la py por MeOpy en los dímeros trans-[(T)(bpy)RuII(μ-NC)RuIIIL4(CN)]3+, donde elanálisis de orbitales moleculares del sistema más desacoplado muestra que el orbital donor yel aceptor se encuentran perpendiculares. Esto nos permite concluir que es necesarioconsiderar la orientación relativa de los orbitales moleculares del sitio donor y el aceptor,además de sintonizar las energías de los fragmentos cuando se desea ajustar el acoplamientode los centros metálicos.

Descripción: Fil: Castrillón, José Alberto. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Lythgoe, Teodorico. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: El presente trabajo está dividido en dos partes: 1.- Alcaloides de Helietta longifoliata Britt. 2.- Alcaloides de Lupinus paniculatus Desr. 1.- Alcaloides de Helietta longifoliata Britt. Esta primera parte del presente trabajo está dividida en cuatro capítulos. En el primero, se mencionan los grupos químicos a los que pertenecen los alcaloides encontrados en la familia de las Rutáceas, indicándose el nombre y la fórmula del esqueleto. El segundo capítulo contiene una breve introducción en la que se mencionan algunas características importantes de los alcaloides furoquinolínicos. Se hace además una revisión de los nuevos alcaloides furoquinolínicos aislados desde la aparición del último trabajo de Resumen sobre el tema, en 1966 (Manske, tomo IX), hasta agosto de 1970, indicándose para cada uno el nombre, fórmula bruta, punto de fusión, poder rotatorio y especies de las cuales se los ha aislado. El tercer capítulo contiene un resumen de las teorías biogenéticas de los alcaloides furoquinolínicos y de las principales experiencias que llevaron a postularlas. En el cuarto capítulo se describe el aislamiento e identificación de los siete alcaloides furoquinolínicos de la corteza del tronco de Helietta longifoliata, en especial de la isodictamnina, aislada de la naturaleza por primera vez en esta oportunidad. La corteza del tronco de la planta, seca y molida, se extrajo sucesivamente con éter de petróleo y con metanol. Del extracto de éter de petróleo se aislaron cinco bases al estado puro, B1 (p.f. 129-130°), B2 (p.f. 133-134°), B3, B4 (p.f. 170-171°), B5 (p.f. 205-207°). Por cromatografía en capa delgada, se vió que la base B3 era idéntica a maculina (III), base aislada anteriormente de la misma planta. El espectro U.V. de las bases restantes indicó que se trataba de furoquinolinas, y el espectro de resonancia magnética nuclear llevó a postular como estructuras más probables, las de dictamnina (I), 6-metoxidictamnina (II), kokusaginina (IV) y flindersiamina (V), respectivamente, para los alcaloides B1, B2, B4 y B5. Del extracto metanólico se aisló otra base, B6, (p.f. 174-176°). Los datos de los espectros U.V. y de resonancia magnética nuclear, llevarona postular para el mismo la estructura más probable de skimmianina (VI) Del mismo extracto, se aisló otra base, B7, de p.f. 186-187°. El espectro I.R. de esta base, presenta una banda intensa a 1630 cm-1, asignable a un grupo C=O. Presenta además una banda intensa a 1590 cm-1 y dos bandas medias a 1540 y 1520 cm-1. Estas características, el observar en su espectro U.V. máximos a 243, 251, 258, 333,9, y 346 nm en etanol y el hecho de que el máximoa 243 nm se desplace a 240 nm en el espectro U.V. efectuado en ClH 0,2N en etanol, y que los máximos a 251 y 258 aparezcan en el espectro U.V. en medio ácido como hombros, llevó a pensar que se trataba de una 4-quinolona. El espectro de masa de este alcaloide indicó que el ión molecular (M+) correspondía al pico de m/e 199. La fragmentación que el mismo indicaba pudo racionalizarse en base a la estructura VII, confirmada por análisis del espectro de resonancia magnética nuclear y por comparacióncon una muestra de isodictamnina preparada a partir de dictamnina. 2).- Alcaloides de Lupinus paniculatus Desr. La segunda parte de este trabajo está dividida en dos capítulos. En el primero se exponen someramente las características configuracionales y conformacionales de los alcaloides quinolicidínicos y su relación con las bandas del espectro I.R. Este capítulo contiene también un resumende sus propiedades espectroscópicas de resonancia magnética nuclear y de masa. Se presenta también una revisión de las nuevas bases quinolicidínicas aisladas entre la segunda mitad del año 1966 y agosto de 1970. El segundo capítulo trata del aislamiento e identificación de dos alcaloides quinolicidínicos de la parte aérea del Lupinus paniculatus. La planta seca y molida se extrajo sucesivamente con éter de petróleo y con metanol. De cada uno de estos extractos se aislaron fracciones básicas, que en conjunto constituyen un 0,8 % en peso sobre planta seca. Estos extractos no presentan variación respecto de la proporción de los alcaloides que contienen. Por cromatografía analítica en capa delgada se han detectado dos, uno de ellos se encuentra en un 99,88% deltotal de las bases. La mayor parte de esta base se separó por arrastrecon vapor, y por medio de sus espectros infrarrojo y de resonancia magnética nuclear, así como por preparación de derivados se lo identificócomo esparteína (VIII). El alcaloide secundario (0,12 % del total de bases), presenta en suespectro I.R. bandas a 2630 y 1630 cm-1. Estas características, el análisis del espectro de masa del mismo, así como su p.f. (96-102° solidifica y vuelve a fundir a 245-250°), llevaron a concluir que se trataba del dihidrato del monoclorhidrato de lupanina. Esto se confirmó por síntesis del mismo a partir de lupanina. El valor del poder rotatorio del mismo ([α]D=+29° en etanol), permitió establecer que en el Lupinus paniculatus existe una mezcla de (+) y (-) lupanina (IX), con preponderancia de la primera.

Descripción: El presente trabajo está dividido en tres partes, I) Alcohol triterpénico de Helietta longifoliata Britt. II) Alcaloide principal de Helietta longifoliata Britt. III) Alcaloides de Colletia paradoxa (Spreng.) Escal. I)Alcohol triterpénico de Helietta longifoliata. Britt. En el comienzo de esta primera parte se presentan los esqueletos hidrocarbonados fundamentales de triterpenos pentacíclicos, se comentan las reglas para la nomeclatura de dichos compuestos y se ofrece una revisión de los monoalcoholes triterpénicos pentacíclicos conocidos hasta el presente (julio de 1967), indicándose para cada uno el nombre derivado del esqueleto fundamental, fórmula bruta, punto de fusión, poder rotatorio, derivados conocidos y especies de las cuales se los ha aislado. Se continúa con una revisión de la muy extensa bibliografía publicada sobre la biogénesis de terpenos,desde los precursores más sencillos hasta las etapas finales de la ciclación de los intermediarios, aún no del todo elucidadas, y se propone un esquema biogenético para el alcohol aislado de Helietta longifoliata Britt. En un nuevo capítulo se presenta una serie de métodos químicos de empleo estructural, que se han utilizado en ladeterminación original de muchas estructuras de triterpenos y continúan empleándose en el presente. En el capítulo siguiente se efectúa una discusión sobre los resultados obtenidos en el estudio del alcohol triterpénico pentacíclico aislado de Helietta longifoliata Britt., y que condujeron a la determinación de la estructura del mismo. Dicho compuesto tiene punto de fusión 168-170°C y es ópticamente activo ([α]D +45°, y analiza para C30H50O, lo cual fue confirmado por la determinación del peso molecular mediante espectrometría de masa. El espectro infrarrojo muestra una banda a 3400 cm^-1, indicando la presencia de un grupo hidroxilo. En el espectro de resonancia magnética nuclear no aparece señal alguna debida a protones olefínicos, de modo que el doble enlace, cuya presenciaes sugerida por la fórmula antes indicada, debe ser cuaternario. Esto se confirmó por oxidación del acetato del alcohol (p.f. 212-213°; [α]D +44°) con CrO3, pudiéndose aislar un compuesto de fórmula C32H48O4, cuyos espectros de absorción en el infrarrojo y en el ultravioleta permitieron determinar que el doble enlace es de tipo cuaternario con dos grupos metilenos vecinos. La curva de dispersión óptica rotatoria de la cetona obtenida por oxidación del alcohol (p.f. 184-185°; [α]D+ 76.5°)con reactivo de Kiliani es del mismo tipo que las diversas 3-cetonas con el doble enlace en 8 (9), indicando que la posición más probable de la doble ligadura es la indicada y que la del hidroxilo del alcohol es la más usual, el C-3. La configuración de dicho hidroxilo pudo ser determinada en base a un análisis de los espectros de resonancia magnética nuclear del alcohol y de su acetato, hallándose que la configuración del protón de C-3 es axial y, en consecuencia, el hidroxilo ecuatorial, lo cual se confirmó mediante una comparación de las diferencias de rotaciones moleculares de diversos alcoholes triterpénicos y sus acetatos, las cuales son positivas para los alcoholes β (ecuatoriales)- como ocurre en el caso de nuestro alcohol- y negativas para los α (axiales). Una última confirmación de la configuración del C-3 se logró por un método químico: la oxidación del alcohol a la cetona correspondiente y posterior reducción de ésta con BH4Na, permitieron obtener nuevamente el alcohol original. Un estudio comparativo de las constantes físicas del alcohol de Helietta longifoliata Britt. y de sus derivados, con las de los alcoholes (y sus derivados) conocidos, con el doble enlace en la posición 8(9), indica como estructura probable para nuestro alcohol la siguiente: *Ver imagen en tesis*que corresponde al isobauerenol o 3 β-hidroxi-D-; C-friedo-ursa-8-eno, no pudiéndose descartar aún, a esta altura, la posibilidad de que se trate de un compuesto similar con estructura de arborano o uno con esqueleto aún no conocido. Una primera confirmación de la estructura propuesta se pudo obtener mediante el estudio de los espectros de masa del alcohol, de la cetona e hidrocarburo correspondientes y de su acetato y éter metílico, y la comparación de los mismos con los de otros triterpenos pentacíclicos. La confirmación final de la identidad del alcohol con el isobauerenol se llevó a cabo por comparación directa con una muestra de este último, gentilmente cedida por el profesor Dr.P.Sengupta (Universidad de Kalyani, India). En el último capítulo de esta primera parte se dan los datos de todos los compuestos obtenidos, describiéndose las técnicas experimentales empleadas. II) Alcaloides principales de Helietta longifoliata Britt. Se describe el aislamiento e identificación del alcaloide principal de la mezcla de, por lo menos, cinco bases que contiene la corteza de Helietta longifoliata Britt. Las bases se aislaron por extracción con metanol, de la correteza seca y molida, previamente extraída con éter de petróleo. De la mezcla de base se pudo cristalizar, por tratamiento con metanol, una de ellas, la cual funde a 197-199°, y da un clorhidrato de p.f. 207-210°. El espectro de absorción en el ultravioleta indicó que se trataba de una base furoquinolínica, y el espectro de resonancia magnética nuclear llevó a postular como estructura más probable la de maculina, un alcaloide furoquinolínico que ya había sido aislado anteriormente de otras rutáceas. Esta estructura fue confirmada por comparación directa con una muestra auténtica de maculina, cedida por el Dr.E.Ritchie (Universidad de Sydney, Australia). *Ver imagen en tesis* III) Alcaloides de Colletia paradoxa (Spreng.) Escal. En ésta, la última parte del trabajo, se presenta una revisión de alcaloides bencilisoquinolínicos, en la cual aparecen todas las bases cuyas estructuras se determinaron desde 1965 hasta el presente (octubre de 1967), citándose también todos aquellos alcaloides ya conocidos y que se han aislado, durante ese lapso, de nuevas especies. Posteriormente se describe el aislamiento de dos bases cuaternarias de Colletia paradoxa (Spreng.) Escal., la separación de éstas por cromatografía sobre alúmina y la determinación de su estructura. Estos alcaloides resultaron ser idénticos a las bases benciltetrahidroisoquinolínicas colletina, obtenida como cloruro (p.f.130-131°; [α]D-132.2°) y magnocurarina (p.f. 201-203°; [α]D-91.1°), las cuales ya habían sido aisladas anteriormente de Colletia spinosissima Gmel. *Ver imagen en tesis*

Descripción: Fil: Sanchez Díaz, P. Abel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Las condiciones de fermentación para obtener una máxima producción de α-amilasautilizando salvado de trigo como sustrato de la FES resultaron: humedadinicial 58% (bh), temperatura 35°C, pH inicial 6,2-6,5. En estas condiciones el máximode producción de enzima es alcanzado entre las 36 y 48 hs de fermentación. Se estudió la influencia del pH inicial en la sintesis de la α-amilasa relacionándosela falta de producción de la misma a pHs inferiores a 5,5 con un posible mecanismo deregulación de la sintesis de la enzima por el pH del medio de cultivo. Se desarrolló un modelo matemático que describe la pérdida de peso seco delsistema y el consumo de sustrato a lo largo de la fermentación. Este modelo vinculadichas variables con el desarrollo de la biomasa, por lo tanto tiene la potencialidad deser un método sencillo para la estimación del crecimiento del micelio en FES. En las condiciones arriba mencionadas la cantidad de proteína correspondiente a laα-amilasa es de un 25-30 % de las proteínas totales presentes en el extracto defermentación y la presencia de actividades enzimáticas contaminantes resultó minima. La α-amilasa fue purificada a partir de los extractos de fermentación empleando DEAE - Sepharose y Concanavalina A - Sepharose. El método de purificacióndesarrollado permite purificar a la α-amilasa 3-4 veces así como la remoción deotras actividades enzimáticas y pigmentos producidos durante la fermentación. Se estudió la inactivación térmica de la α-amilasa de Aspergillus oryzaedeshidratada. La vida media de la enzima fue incrementada mediante su liofilización,pero este incremento resultó mayor cuando la enzima fue deshidratada en presenciade carbohidratos o polivinilpirrolidonade tal forma que ésta quede incluida dentro deuna matriz sólida. Los efectos de protectores de las matrices no pudieron serexplicados solo en base al estado vitreo de los sistemas, dado que la inactivacióntérmica de la enzima así como el pardeamiento no enzimático ocurrieron en todas lasmatrices vitreas estudiadas y a una velocidad particular para cada sistema. Para una matriz dada la protección resultó máxima en el estado vitreo, mientrasque las condiciones que favorecieron la cristalización de las mismas produjeron unarápida inactivación de la enzima y un incremento del pardeamiento no enzimático. La matriz de trehalosa demostró caracteristicas superiores brindando una mayorprotección contra la inactivación térmica e inhibiendo más efectivamente elpardeamiento no enzimática, aún en condiciones en que la matriz se encontró enestado gomoso (hasta 100°C). Los resultados concernientes al distinto grado deprotección dado por este azúcar a las diferentes enzimas presentes en el extractosugieren la existencia de una interacción enzima-matriz necesaria para laestabilización y para la cual la naturaleza de la molécula proteica es de relevancia.

Descripción: Se construye una familia de ejemplos de álgebras de Frechet noetherianas de espectro no trivial, es decir infinito. Este hecho responde la conjetura formulada hace ya varios años por G.Tomassini sobre la existencia de tal tipo de álgebras. El planteo surge como una forma de medir la posibilidad de obtener un resultado para álgebras de Frechet análogo al de Gleason (para álgebras de Banach) sobre analiticidad en el espectro, ya que un fenómeno de este tipo fuerza a que el espacio de caracteres de un álgebra de Frechet noetheriana sea finito. También tiene interés en sí mismo como cuestión estructural.

Descripción: En esta tesis se estudian álgebras de Nichols sobre grupos no abelianos. Un álgebra de Nichols viene dada por un par (X, q), donde X es un rack y q es un 2-cociclo en una teoría de cohomología no abeliana de racks. En este trabajo definimos racks de tipo D y demostramos que los racks simples y finitos de tipo D dan álgebras de Nichols de dimensión infinita para todo 2-cocyclo q. Muchas de las clases de conjugación de los grupos esporádicos, o de An, o de Sn son racks de tipo D. Con estos resultados y las técnicas que desarrollamos a partir de la clasificación de álgebras de Nichols de tipo diagonal de dimensión finita hecha por Heckenberger demostramos que no existen álgebras de Nichols de dimensión finita sobre G, donde G = An o G = Sn o G es un grupo simple esporádico distinto de Fi22, B o M. Como corolario, el método del levante nos da la clasificación de álgebras de Hopf punteadas de dimensión finita sobre estos grupos. En un apéndice presentamos brevemente un software que desarrollamos para poder realizar cálculos relacionados con racks y álgebras de Nichols. Este software resultó ser una poderosa herramienta para crear, entender y aplicar las técnicas que dan condiciones que garantizan que un par (X, q) (o una clase de conjugación de un grupo finito dado) dé solamente álgebras de Nichols de dimensión finita.

Descripción: En la primera parte de esta tesis se estudian álgebras de Nichols cuyo espaciode elementos primitivos es un módulo de Yetter-Drinfeld sobre un grupo finito. Estas álgebras son la herramienta principal en problemas de clasificación deálgebras de Hopf punteadas, y de ahí su interés. Se prueban resultados de estructurade álgebras de Nichols, cotas inferiores para sus dimensiones en funciónde sus elementos primitivos, y relaciones entre las dimensiones de estas álgebrascon las de determinadas subálgebras. Para probar los resultados de estructura seestudian las álgebras de operadores diferenciales cuánticos. En la segunda parte,se aplican los resultados de la primera para clasificar álgebras de Hopf punteadas. Se clasifican así las álgebras de Hopf punteadas de dimensión 32 y las corradicalmentegraduadas de dimensión p5, con p un primo impar. Se clasifican tambiénlas álgebras de Hopf punteadas de índice < 32, p y p², con p un primo.

Descripción: Esta tesis está dedicada al estudio de representaciones por operadores acotados en espacios Lp del álgebra de Leavitt LQ de un grafo. Sean Q un grafo orientado finito por filas y LQ su álgebra de Leavitt sobre C. Parap ∈ [1,∞) consideramos la noción de representación espacial de LQ por operadores linealesy acotados en un espacio Lp(X, μ), que generaliza la introducida por N.C. Phillips par el casoen que Q es la rosa de d pétalos, y LQ el álgebra de Leavitt Ld. Para cada p consideramos la completación Op(Q) de LQ bajo la norma ||a|| := sup ρ espacial ||ρ(a)|| (a ∈ LQ). Probamos que si LQ es simple y ρ es una Lp representación espacial no nula de LQ entonces ||a||ρ := ||ρ(a)|| no depende de ρ. En particular si LQ es simple, Op(Q) = ρ(LQ) paracualquier representación espacial no nula ρ. Probamos que si Q y F son dos grafos finitos por filas, y p y q distintos, no existe unmorfismo continuo de Op(Q) en Oq(F). Probamos además que Op(Q) es simple si y sólo si LQ lo es. Aquí, una Lp álgebra deoperadores A se dice simple si todo morfismo no nulo de A en otra Lp álgebra de operadoreses inyectivo. Esta definición de simplicidad no coincide con la de álgebras de Banach, puespodrían existir ideales cerrados que no sean el núcleo de un morfismo contractivo entre Lpálgebras de operadores, al contrario de lo que sucede en el caso de C*-álgebras. Probamos que existe una biyección entre la clase de ideales S1 invariantes en Op(Q) yel conjunto de subconjuntos de vértices hereditarios y saturados de Q. Este resultado esun análogo a la biyección ya conocida entre ideales graduados del álgebra de Leavitt y lossubconjuntos de vértices hereditarios y saturados. Para Q finito por filas arbitrario, calculamos la K-teoría topológica de Op(Q) y probamosque coincide con la de la C*-álgebra de Cuntz-Krieger de Q.

Descripción: En este trabajo calculamos el grupo de automorfismos de las álgebras de Weyl generalizadas definidas sobre K[h], K[h1, h2] y K[h±1] y las clasificamos salvo isomorfismo. Para aquellas definidas sobre K[h] también calculamos su homología y cohomología de Hochschild, estudiamos la estructura multiplicativa de la cohomología y describimos algunas de sus deformaciones.

Descripción: Fil: Milaszewicz, Juan Pedro. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Vasiliev, Saveliy. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Esta tesis está dedicada a ciertas tareas computacionales de geometríaalgebraica en característica cero. Apuntamos a analizar y descubrir la complejidadde problemas definidos por sistemas de ecuaciones polinomiales conuna perspectiva de álgebra computacional. La intratabilidad computacionalde los enfoques generalistas a los problemas de geometría computacional nosimpele a estudiar familias particulares de sistemas de ecuaciones polinomialesen los que la complejidad del peor caso es tratable (y significativamente másbaja que la del caso general). Cuando sea posible, proveeremos un métodoeficiente para encontrar su solución. Como “brújula” para determinar estas familias usamos técnicas de deformaciónlas que, según mostraremos, son sensibles a problemas con buenaspropiedades semánticas. Entonces, este trabajo consiste en establecer algunosproblemas de eliminación que son tratables y exhibir algoritmos eficientesque los resuelven. Nuestras técnicas de deformación se basan en un procedimiento de levantamientoà la Newton–Hensel que se adapta bien para producir algoritmosque corren en menos pasos cuando las propiedades semánticas referenciadasanteriormente son buenas. Construiremos, entonces, un catálogo de resultadossobre la resolución de sistemas de ecuaciones polinomiales, usando algoritmosde álgebra altamente eficientes, que constituyen mejoras en relacióncon el estado del arte.

Descripción: En esta tesis nos enfocamos en los aspectos algorítmicos de algunos de los tópicos más importantes del álgebra conmutativa. Estudiamos el cálculo de radicales y primos y minimales, la normalización de anillos e ideales y otros problemas relacionados. En los últimos años, se desarrollaron varios programas de álgebra computacional con implementaciones muy eficientes de las herramientas básicas para trabajar con polinomios, ideales y anillos. Esto renovó el interés por algoritmos eficientes para resolver algunos problemas difíciles del área. Proponemos nuevos algoritmos para algunos de estos problemas, basándonos en ideas matemáticas y resultados nuevos. Hemos implementado todos los algoritmos en esta tesis en Singular (Decker et al., 2011), uno de los programas de álgebra computacional más comúnmente utilizados, y están actualmente disponibles para su uso por toda la comunidad matemática. Si bien para la mayoría de estos problemas ya existían algoritmos, los nuevos algoritmos propuestos los superan en la mayoría de los casos, siendo ahora los algoritmos por default en SINGULAR.

Descripción: En esta Tesis se presenta un algoritmo paralelo eficiente para la resolución del problema inverso en tomografía óptica basado en la ecuación de transferencia radiativa en el dominio temporal. Esta ecuación provee un modelo físicamente preciso para el transporte de fotones en el tejido biológico, pero el alto costo computacional asociado a su resolución representa un obstáculo para su utilización en tomografía óptica, y otras áreas. En esta Tesis se aborda este problema mediante un número de innovaciones computacionales y de modelado, que incluyen 1) La incorporación de un método espectral de alto orden (continuación de Fourier en ordenadas discretas (FC–DOM)) que permite resolver la ecuación de transporte con gran precisión y con reducido esfuerzo computacional. 2) Una estrategia de paralelización basada en la descomposición del dominio espacial que presenta escalabilidad ideal para los problemas directos e inversos; 3) Una estrategia de Fuentes Múltiples Superpuestas (FMS) que resuelve el problema inverso de transporte con un costo computacional que es independiente del número de fuentes empleadas, y el cual acelera significativamente la reconstrucción de los parámetros ópticos. Adicionalmente, esta contribución presenta una derivación intuitiva de la formulación del problema adjunto para el cálculo de los gradientes funcionales, que incorpora las condiciones de borde de Fresnel. Se presentan soluciones de problemas inversos realistas en 2D, que fueron obtenidos en un cluster de computadoras con hasta 256 procesadores. La combinación del método FC–DOM, la estrategia de paralelización y la técnica FMS redujo el tiempo computacional requerido para la resolución de estos problemas, de meses a unas pocas horas.

Descripción: El problema de Localización y Ruteo de Vehículos con Capacidades (CLRP) es la combinación dedos problemas muy estudiados del área de la Investigación Operativa: el problema de localizaciónde depósitos con capacidades (CFLP) y el problema de ruteo de vehículos con múltiples depósitos (MDVRP). Dado un conjunto de posibles localizaciones se busca determinar cuáles utilizar parasatisfacer las demandas de un conjunto de clientes y programar las rutas que los visitan. Se buscaminimizar los costos de apertura de depósitos, de utilización de vehículos y de ruteo satisfaciendorestricciones de capacidad tanto en los vehículos como en los depósitos. En este trabajo se presenta una nueva versión del problema denominada Localización y Ruteode Vehículos con Capacidades y Premios (PC-CLRP) que busca generalizar el problema CLRPpermitiendo la posibilidad de que los clientes sean o no visitados. Los clientes atendidos otorganun beneficio y la maximización de la suma de los beneficios forma parte del objetivo del nuevoproblema. Se proponen en este trabajo algoritmos para el problema PC-CLRP. En primer lugar se introduceun algoritmo metaheurístico para resolverlo basado en el método de optimización por Colonia de Hormigas. Se implementa una metaheurística de 3 colonias de hormigas que colaboranconstruyendo las distintas etapas de una solución PC-CLRP: localización, clusterizado yruteo. Posteriormente, se presentan modelos de programación lineal entera basadas en modelosde flujo de 2 índices y 3 índices. Se analizan distintas familias de desigualdades válidas utilizadaspara CLRP y se proponen nuevas versiones de las mismas para el problema PC-CLRP. Además,se definen nuevas desigualdades válidas y cortes de optimalidad junto a sus correspondientes algoritmosde separación. Por último, se implementa un algoritmo Branch&Cut utilizando uno delos modelos de programación lineal entera propuestos. Se reportan los resultados obtenidos porambos algoritmos para el problema PC-CLRP sobre un conjunto de instancias especialmentedise~nadas para el nuevo problema. Se compara además los resultados frente a los reportados enotros trabajos sobre el problema CLRP obteniendo resultados competitivos. Palabras claves: problema de localización y ruteo de vehículos, programación lineal entera,branch and cut, colonia de hormigas, optimización combinatoria, recolección de premios.

Descripción: El método más comunmente usado para estimar los coeficientes de una regresión lineal es el de mínimos cuadrados. Este método que es óptimo en el caso de errores distribuídos normalmente, es muy sensible a la presencia de outliers. Para remediar ese problema se han desarrollado otros métodos de estimación llamados métodos robustos, los cuales se ven poco afectados por la presencia de datos atípicos. Una medida de la robustez de un estimador es su punto de ruptura. Entre los estimadores de regresión robustos se encuentran los LTS, LMS y los S estimadores. Estos estimadores son equivariantes por transformaciones afines, de regresión, y de escala y además tiene un alto punto de ruptura. El inconveniente que presenta su calculo es que requiere muchas horas de computadora. Rouseeuw y Van Driessen desarrollaron un algoritmo, llamado Fast -LTS, que mejora la velocidad de cálculo del estimador de mínimos cuadrados podados. El objetivo de este trabajo es desarrollar un nuevo algoritmo, análogo al Fast-LTS, para computar S estimadores. Del mismo modo que el algoritmo desarrollado por Rouseeuw, este nuevo algoritmo está basado en el mejoramiento local de los nuevos estimadores iniciales. Esto permite una significativa reducción del número de candidatos requeridos para obtener una buena aproximación de la solución óptima. Se ha realizado un estudio de simulación que ha mostrado que los S estimadores calculados con el algoritmo Fast-S, son comparativamente mejores a los estimadores LTS calculados con el algoritmo Fast-LTS. Algunas de las ventajas del nuevo algoritmo son: 1) Menor porcentaje de muestras afectadas por los datos atípicos. 2) Menor error cuadrático medio. 3) Menor tiempo de cómputo.

Descripción: Los problemas de dominación forman un área de investigación en crecimiento, debidoa la cantidad de aplicaciones que pueden modelar, entre las cuales podemos nombrarredes sociales, sistemas distribuidos, redes biológicas, problemas de localización deinstalaciones, etc. En esta tesis estudiamos los siguientes problemas de dominación (i) el conjunto dominante mínimo, (ii) dominación romana, (iii) dominación eficientepor vértices, (iv) dominación eficiente por aristas (también conocida como matchinginducido dominante), (v) dominación perfecta por vértices (vi) dominación perfectapor aristas, y (vii) subgrafo cordal máximo inducido sin vertices propiamentedominados (también conocido como eliminación de vértices para formar clusters). Para el problema (i) determinamos su complejidad para clases de grafos donde seprohiben subgrafos inducidos con a lo sumo cuatro vértices. Estudiamos los problemas (i) y (ii) para varias subclases de grafos P5-free, dando algoritmos eficientes, robustos ysimples en ambos casos. Algoritmos de complejidad lineal para grafos arco-circularesfueron presentados para los problemas (iv), (v), (vi) usando algoritmos existentespara el problema (iii). Damos tres algoritmos de tiempo exponencial para resolverel problema (iv) en grafos generales. Además, para el problema (iv), presentamosalgoritmos de complejidad O(n) restringidos a grafos cordales, dualmente-cordales, biconvexos,y claw-free. Estudiamos cuatro variantes del problema (vii) y presentamosalgoritmos eficientes para todos ellos cuando nos restringimos a grafos de intervalospropios, grafos de intervalos, grafos arco-circulares, grafos de permutación, y grafostrapezoide. Por otro lado, probamos que las cuatro variantes son NP-Dificil paragrafos bipartitos. Finalmente, mostramos que dos variantes son NP-Dificil para grafossplit, mientras que las otras dos variantes se pueden resolver en tiempo polinomial.

Descripción: Fil: Piscione, Carlos A. S.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: El trabajo cuyo título se menciona se divide en dos partes:en la primera se hacen algunas consideraciones generales de la cromatografíay en especial la que se usa como soporte al papel de filtro,incluyendo algunas definiciones, descripción de distintas técnicasy aparatos. La parte experimental comprende a la segunda parte de estatesis: en ella se estudian y discuten los resultados obtenidosen los distintos puntos en que se dividió su estudio, a sabor: l) Tratamiento químico de las tiras de papel de filtro. 2) Comportamiento de la solución con las variaciones de pH. 3) Estudio de las concentraciones óptimas ( máximas y mínimas de dichos iones; cuyo reconocimiento se hará con el rodizonato de sodiopara el bario y estroncio y la morina para el calcio. 4) Interferencias principales. Finalmente se resumen dichos resultados en las siguientesconclusiones: 1) a- Se comprueba el comportamiento de diversos papeles, encontrándose en particular que el papel de filtro común no se adapta para este tipo de separaciones.b- No se observan diferencias según se use el papel en sus dosdirecciones fundamentales. 2) Se estudia el comportamiento de las tiras de papel al tratarsecon diversas sustancias químicas, encontrándose que hayvariaciones en lo que se refiere a la migración y a la separación,que cuando se utilizan sin tratamiento químico previo. 3) Se estudian las variaciones de pH en la solución ensayo, tolerablespara una buena separación cromatográfica. 4) Se encuentran dificultades en el uso de la alizarina, como reactivopara el calcio; proponiéndose la morina como sustituto. 5) Se estudian las concentraciones máximas y mínimas permisiblespor esta técnica para los iones considerados. 6) Se observa la acción de algunos iones como interferencias.

Descripción: Fil: Gándara, Federico W.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: El espacio es un factor que ha sido históricamente dejado de lado pero en los últimos tiempos ha desmostrado ser fundamental para la ecología, tanto teórica como de campo. La utilización de modelos para el estudio de las interacciones espaciales es una herramienta impresindible que puede aportar soluciones tanto en casos en que la experimentacion no es posible como para realizar aportes teóricos. Los modelos espaciales plantean nuevos problemas, tanto de índole práctica como teórica. En la parte práctica, la simulación de este tipo de modelos posibilita la utilización de diferentes técnicas cuyas consecuencias no han sido exploradas. La comparación de los datos obtenidos con estos modelos y datos de campo requiere el uso de técnicas que no han sido completamente estudiadas. Usualmente en modelos de sistemas ecológicos se estudia su comportamiento en el equilibrio y se extraen hipótesis sobre el funcionamiento del sistema. En el caso de los modelos espaciales parece ser muy importante su comportamiento transitorio, es decir lo que pasa antes de llegar al equilibrio. Debido a la enorme cantidad de componentes de los ecosistemas la teoria de sistemas complejos y los fractales pueden ser utilizados para la interpretación de los mismos. En esta tesis se plantea el estudio de estos nuevos desafíos teóricos y prácticos y su aplicación a distintos ecosistemas.

Descripción: Fil: Longobardi, Ernesto. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Gatti, Julio J.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Costa, Norberto P.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Chaudet, Augusto. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: En la teoría de los núcleos singulares de convoluciónse estudia cuáles son las condiciones que debe satisfaceruna sucesión funcional kn para que se verifique la relaciónkn* f → f para determinadas funciones f, y donde la convergenciase entiende en sentido puntual o en norma L^p. Es bien sabido que 1a teoría engloba como casos particularesa ciertos núcleos clásicos, importantes en las aplicaciones,como ser los núcleos de Dirichlet, Poisson, etc. Sin embargo, sólo se suelen dar condiciones suficientespara la convergencia, pero no necesarias. En este trabajo prescindimos de la convergencia puntual,y damos condiciones necesarias y suficientes parala convergencia en norma, pero no sólo para los espacios L^p sino para los espacios de Sobolev Ll^p, y además generalizandoel problema para núcleos μn que sean medidas de Radon. Daremos una idea del método seguido, prescindiendode todo rigor. Si Tn es el operador definido mediante Tn(f) = μn*f, bajo ciertas condiciones se cumple Tn f= hn f *Ver en tesis*donde ^ indica la transformada de Fourier, y hn = μn, lo cual muestraque Tn es un operador multiplicador. El problema puede plantearse pues a grandes rasgosde esta manera: averiguar cuándo Tn está bien definido yes un operador continuo de L2^2 en L2^p, y converge hacia eloperador identidad. Entonces se trata pues de un caso particular del problema siguiente: a) averiguar qué condiciones debe cumpliruna función h para que sea un multiplicador de Lr^p en Ls^q; b) si Tn = T(hn) es el operador definido por el multiplicadorhn, averiguar cuándo la sucesión Tn converge fuertemente. De esta cuestión, que trasciende del problema primitivamenteplanteado, nos ocupamos también en el trabajo. Naturalmente,la parte a) ofrece muchas dificultades, puesse trata de un problema abierto aún para el caso de multiplicadoresentre espacios L^P. A continuación resumiremos brevemente el contenidodel trabajo. En *ver en tesis* 3 tratamos el problema a). El principal resultadoque obtenemos es un teorema que reduce el estudio demultiplicadores entre espacios de Sobolev al de los espaciosde Lebesgue. Asimismo, agregamos una generalizaciónreferente a multiplicadores matriciales. Hacemos tambiénalgunas consideraciones referentes a multiplicadores entreespacios de Lebesgue. En *Ver en tesis* 4 estudiamos la topología fuerte en los espaciosde multiplicadores. En primer lugar demostramos la completidadde esos espacios. Luego estudiamos la caracterizaciónde la convergencia. Lo logramos en algunos casos particularespara multiplicadores entre espacios de Lebesgue, yrespecto a los de Sobolev, de la misma manera que en lasección anterior, reducimos el problema al de los espaciosde Lebesgue. En *Ver en tesis* 5 aplicamos los resultados anteriores para resolverel problema de los núcleos singulares de convolución. En *Ver en tesis* 6 resolvemos el mismo problema para la convergenciaen L^2 de núcleos generados por sistemas ortogonales -que en general no serán de convolución-, dando una condiciónnecesaria y suficiente para la completidad de sistemas. El procedimiento seguido no utiliza la teoría de multiplicadores. En las últimas secciones extendemos el problema alcaso en el cual en lugar de la medida ordinaria de Lebesgue,se supone dada una medida de Radon cualquiera. En *Ver en tesis* 7 estudiamos la derivación respecto de la medida,para terminar definiendo los espacios de Sobolev correspondientes. En *Ver en tesis* 8 consideramos en primer lugar el problema dela determinación de una suma tal que la medida dada seasu medida de Haar, y con ella definimos la convolución. Esto permite introducir la definición de tranformada de Fourier, de manera que cumpla la propiedad multiplicativa. Los razonamientos han sido hechos para el caso unidimensional,agregando finalmente la generalización a variasdimensiones en algunos casos particulares.

Descripción: En esta tesis se analizan algunas propiedades de la interacción de apareamientonuclear, como su influencia sobre las reglas de suma para operadores de tipopartícula-agujero, y la estructura espacial de las correlaciones que induce. Debido a que esta interacción es una de las que mejor modela el hamiltonianoresidual nuclear, se cree que los resultados obtenidos permiten clarificaralgunos aspectos de la interacción. Se encontró que la interacción de apareamiento es invariante traslacionaly no es invariante de Galileo, y que por esta razón no conserva las reglasde suma. Este análisis se extendió a temperatura finita, y se encontró unarelación entre la regla de suma pesada por energía asociada al operador dipolarde masa y el gap de apareamiento. Se estudió el problema de la localización del par de Cooper, y se encontróque la no localización del par está asociada al tamaño del espacio de Hilbertutilizado.

Descripción: Fil: Penalba, Olga C.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: El objetivo del presente trabajo es el de estudiar laspropiedades fotofísicas y químicas de los derivados de lacumarina mediante el análisis espectral. Dicho análisis espectral se llevo a cabo empleando lastécnicas analíticas de espectrometría de luminiscenciaconvencional y sincrónica. Como herramienta complementaria, seutilizó la técnica absorciométrica. La interpretación de los espectros obtenidos permitiópostular mecanismos de excitación que explican los resultadosexperimentales. Las definiciones de fotofísica y fotoquímica sonvariadas e incluso existe cierta superposición para algunosautores. Cuando en este trabajo se hace referencia a procesosfotofísicos o procesos fotofísicos proimarios, se quiererepresentar a los procesos que ocurrren entre una determinadaespecie y cuanto de radiación, como por ejemplo, laabsorción o la emision de radiacion fluorescente. Por otra parte, los procesos fotoquímicos involucranreacciones químicas de las especies excitadas, como ser unareacción ácido base, un proceso de fototautomerización, etc. Las cumarinmas son productos naturales que se hallanampliamente distribuidas en la naturaleza. Tanto la cumarinacomo los derivados estudiados, la 7-hidroxicumarina, y la 6-metoxi-7-hidroxicumarina fueron aisladas de la POA HUECU (Gramineae). Tienen gran utilidad en la produccion de láseresde colorantes para la región del ultravioleta, y además sonpoderosos agentes blanqueadores de uso industrial. Se han medido, previa calibración del espectrómetro deluminiscencia, los rendimientos cuánticos de fluorescencia delas diferentes especies de las cumarinas. Parte de los resultados de este trabajo, dieron origen alas siguientes publicaciones: "Simultaneous Evaluation of 7-Hydroxycoumarin Excitated States by Synchronous Luminescence Spectrometry" Anal. Chem. 57, 1907-1910, 1985. "Simultaneous Determination of Umbelliferone and Scopoletineby Synchronous Luminescence Spectrometry" Canadian Journ. of Spectroscopy, 30 (5), 120-122, 1985.

Descripción: Fil: Mitta, Aldo Emilio Antonio. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Etchichury, María C.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Cussac, Víctor Enrique. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Guerrero, Graciela Alicia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Matkovic, Mario. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Zunino, Gabriel Eduardo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Ardila, Fernando Jorge. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Barañao, Rosa Inés. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: García, Rafael Antonio. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Rumi, Tomás J.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Con el objeto de revisar algunos aspectos sistemáticos y ecológicos de la subfamilia Triatominae, mediante análisis multivariados, se emplearon 1800 especímenes,provenientes de 30 muestras de cada sexo conformadas por 30 ejemplares pertenecientesa 8 especies, R. prolixus (5), R. robustus (11), R. neglectus (2), R. neivai (3), P.geniculatus (2), T. maculata (2), T. sordida (3) y T. infestans (2) a los cuales se lemidieron 22 variables morfométricas, en milímetros. El procesamiento estadísticoincluyó estadística descriptiva, tablas 1-60; correlaciones, tablas 61-120; Análisis de Componentes Principales (ACP) sobre las matrices de correlación y algunos Análisis Discriminantes como la Distancia Euclidiana. El análisis de correlación mostró laausencia de un patrón determinado. Aunque se reconoce el dimorfismo sexual, laprobabilidad de clasificación reveló errores totales de hasta el 17 y 18% para lasmuestras RRCTME y RRP1JAG respectivamente. Además se encontró que tanto elcautiverio, la procedencia geográfica y el microhabitat influyen en la expresión delfenotipo morfométrico. En general las hembras se presentan más homogéneas que losmachos. La reducción de los caracteres a 14 que incluyeron 13 de la cabeza y la talla (C4) produjeron resultados satisfactorios. De acuerdo con los resultados, se concluyeque, primero: los análisis multivariados constituyen una herramienta útil para análisissistemáticos, ecológicos, genéticos, etológicos, filogenéticos y evolutivos. segundo: lostriatominos poseen una elevada potencialidad de expresar la flexibilidad fenotípica ytercero que el microhabitat, el cautiverio y la procedencia geográfica influyen sobre elfenotipo de estos insectos. Se discuten los resultados en un contexto sistemático yecológico.

Descripción: Con motivo de un estadio general sobre la yerba mate quese está realizando bajo la dirección del Profesor Houssay en combinación con la Junta Reguladora de la Yerba Mate, que hizo una distribuciónde los trabajos sobre los diferentes temas a tratar en dicho estudio. La circunstancia de que en el Instituto Bacteriológico se hayaestudiado la existencia de la vitamina c en la yerba mate, determinóque se tomara en el presente trabajo algunos de los aspectos químicosmás interesantes del estudio iniciado. Uno de ellos, ya completamente terminado, fue la investigaciónsobre el insaponificable del extracto etéreo o clorofórmico de la yerbamate. Dio ésta por resultado el hallazgo de α-amirina y ácido ursólicoen la yerba. Nos hemos propuesto estudiar, después de ello, el problema delllamado tanino de la yerba mate, tratando principalmente de aislarlo alestado puro para el mejor estudio de su constitución o por lo menos estudiarsu naturaleza de acuerdo a su comportamiento químico. También hemos tratado de estudiar las substancias reductoraspresentes en los extractos de yerba mate y su posible naturaleza. Otro de los aspectos que nos ocupa es la existencia de teobrominaacompañando a la cafeína existente en el citado vegetal. Hemosabordado principalmente el problema de la caracterización del alcaloidemencionado. En todo momento hemos empleado la misma muestra de yerba mateenviada por la Junta Reguladora de la Yerba Mate, con la seguridad deque se tratara de la especie Mex Paraguariensis sin contaminación conotras especies vegetales. Dicha yerba procede del yerbal “Santa Inés',del Señor Pedro Núñez, del Radio Capital, en Misiones; de plantas en pleno desarrollo. Correspondea la cosecha do 1937, que se realizó desde el primero de mayoal 15 de octubre y que ha sido elaborada por el sistema "Barbacuá" y molida "para infusiones".

Descripción: Se ha encontrado un grupo de nuevas substancias: verseno, pirofosfatoy 8 hidroxiquinolina, que activan las preparaciones de succinoxidasaen buffer de fosfato, y las reactivan en buffer de bicarbonato. La pureza del substrato (succinato de sodio) es crítica. Purificándolose llegó a preparados que, activados con verseno, -el más poderosode los compuestos ensayados-, presentaban un QO2 (µl O2/hora/mgrde residuo seco libre de grasa) de 900. El verseno presenta un máximo de actividad cuando su concentraciónen el líquido del frasco manométrico es de 0.1 mgr/ml. Si la enzima se lava con agua destilada en recipiente de vidrioen vez de agua corriente, su actividad disminuye, pero puede ser todavíaactivada con verseno hasta su valor normal. La inactivación conbicarbonato se hace proporcionalmente menor. Se ha encontrado que la anserina activa ligeramente la enzima. Sales de calcio, aluminio y cromo activan la enzima con formaciónde tenues precipitados. Estos desaparecen al agregar verseno sin quese altere la actividad. Se ha encontrado que se obtienen condiciones óptimas para la actividadde la enzima cuando se la mantiene en una solución de bufferde fosfato 0.1 M adicionada con cloruro de potasio 0.1 M. Se discute el mecanismo de los activadores mencionados. Esto puedeatribuirse a su poder de complejantes de metales pesados. Efectos deadsorción como los mencionados por Keilin y Hartree se descartan. Sinembargo, otros efectos de carácter coloidal podrían ser importantes. Los resultados obtenidos parecerían indicar que la enzima poseeíntimamente ligados a ella, algún metal inhibidor de la misma, y otro metalo componente activador que sería eliminado por repetidos lavados delmúsculo de corazón de caballo con agua destilada en recipiente de vidrio.

Descripción: Siendo la fermentación acética la base de una gran industria en todo elmundo, cualquier factor que pueda aumentaro disminuir su rendimiento es de graninterés industrial. Por otra parte el mecanismo dela fermentación acética no está aún completamenteexplicada y todos los datosque puedan acumularse sobre las variacionesde la fermentación bajo condicionesy atmósferas distintas contribuiráneventualmente a su mejor entendimiento. Teniendo en cuenta lo expuestose estudió, mediante la determinación dela acidez producida, el desarrollo de lafermentación acética en atmósferas condistintas proporciones de oxígeno, conmiras a la posibilidad de establecer unaconcentración óptima con la cual se podríaefectuar la fermentación en un sistemacerrado de circulación de gases paraevitar las pérdidas de ácido acético porevaporación; estudiándose además la influenciade algunas sustancias químicasen diversas concentraciones. Dado que en el desarrollo deestas experiencias se comprobó en algunoscasos la presencia de un olor aromáticofuerte que resultó ser debido a laformación y acumulación de aldehido acéticoen el medio, se efectuaron experienciascon el fin de establecer algunosdatos cuantitativos sobre la formacióndel acetaldehido (además del ácido acético)bajo diversas condiciones. Para lograr los propósitosanteriores hubo que cambiar los métodosoriginales de trabajo y durante losensayos preliminares se comprobó que lacepa elegida, Acetobacter ascendens, daba lugar en presencia de aire a la acumulaciónde aldehido acético con pocaformación de ácido acético cuando el substratoera una solución de alcohol etílicoen agua destilada. Dado que en ensayos paralelosde fermentación de vino en presencia deaire habia mucha formación de ácido,tambien se trató de hallar al factor,existente en el vino, que permite laoxidación del acetaldehido a ácido acético

Descripción: Fil: Lazaro, María Mercedes. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Ojea, Ignacio. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Dentro de la teoría de autovalores para operadores el ópticos diferenciales, un problema de especial importancia es el de optimización de estos autovalores con respecto a los diferentes parámetros considerados. En esta tesis, nos dedicamos al estudio de algunos de estos problemas, considerando como operador no lineal modelo el p-Laplaciano que se define como (ver la ecuación en el resumen del pdf)

Descripción: La gaviota cocinera (Larus dominicanus) es una especie con hábitos de alimentación generalista y oportunista que en Península Valdés también se alimenta de trozos de piel y grasa de las ballenas francas del sur (Eubalaena australis). Este comportamiento se ha incrementado desde su primera observación en 1972 al igual que la población de gaviotas y de ballenas. Los objetivos de este trabajo fueron evaluar si este comportamiento parásito es una conducta generalizada en la población de gaviotas, describir la distribución espacio-temporal de los ataques, determinar las variables que más se relacionan con esta interacción y establecer las posibles consecuencias sanitarias para las ballenas. Durante las temporadas 2005 al 2008 se realizaron 1.559 embarques desde Puerto Pirámides con 5.703 avistajes. En los años 2009 y 2010 se realizaron 657 avistajes costeros en el área de El Doradillo. Las gaviotas atacaron a las ballenas en la mitad de las ocasiones en que co-ocurren en un avistaje al menos una gaviota y una ballena. Las mayores frecuencias y tasas de ataque se registraron sobre los pares madrecría, especialmente sobre las crías y cerca de la costa en agosto y septiembre, coincidentemente con el mayor número de ballenas y gaviotas en el área. El comportamiento de ataque fue más frecuente e intenso en la zona de El Doradillo. Una gran parte de las observaciones de ballenas adultas y casi todas las de crías de la población de Península Valdés presentaron heridas provocadas por gaviotas cocineras durante la temporada reproductiva y más de la mitad de las observaciones de ballenas adultas presentaron algún otro tipo de lesión de piel. El aumento de las tasas de ataque encontradas en la actualidad podría desencadenar un futuro problema de conservación para las ballenas.

Descripción: Fil: Calzetta Resio, Andrea Nilda. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Fil: Landa, María Elvira. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: La tuberculosis (TB) es considerada la segunda causa de muerte por infección, causando 1.7 millones de muertes al año. Se estima que un tercio de la población mundial está actualmente infectada con Mycobacterium tuberculosis (Mtb) y que sólo entre el 5‐10% de aquellos infectados desarrollarán la enfermedad, siendo desconocidos los mecanismos que conducen al establecimiento de la enfermedad tuberculosa latente o activa. El éxito de la infección depende principalmente de las estrategias de evasión de la respuesta inmune y de la capacidad de las células presentadoras de antígeno (CPA) de iniciar una eficiente respuesta. En este sentido, las células dendríticas (CD) son críticas para el desarrollo de la respuesta inmune antibacteriana y, por lo tanto, constituyen un blanco fundamental en la inmuno‐evasión inducida por Mtb. Nuestra hipótesis de trabajo es que durante la infección con Mtb se inducirían alteraciones en las CPA determinando la eficiencia de la respuesta inmune así como el curso de la infección; teniendo en cuenta esto, nuestro objetivo fue investigar las alteraciones en la generación de las CPA y su impacto en el desarrollo de la respuesta inmune en pacientes con TB. Para ello, caracterizamos el efecto de la bacteria sobre la diferenciación de monocitos (Mo) en controles sanos, observando que Mtb altera la diferenciación hacia CD a través de la secreción de IL‐10 y la activación de TLR‐2. Las células obtenidas presentaron baja expresión de receptores de entraba para la bacteria, baja capacidad de presentación de antígenos micobacterianos en el contexto de moléculas CD1 y mayor proliferación de clones T específicos de perfil TH2. Por otro lado, caracterizamos el fenotipo y la función de las CD obtenidas a partir de los Mo de pacientes con TB, las cuales presentaron alteraciones en la expresión de los marcadores típicos de CD así como una baja capacidad de presentación de antígenos micobacterianos. Finalmente, los Mo de los pacientes con TB mostraron un alto grado de activación y un enriquecimiento en la población de Mo CD16+, la cual fue previamente descripta como proinflamatoria. Esta población resultó ser menos eficiente para diferenciarse hacia CD y ha sido asociada a la severidad radiológica de la TB y a los niveles plasmáticos de TNF‐α, poniendo de manifiesto la relevancia clínica del hallazgo. En conclusión, en este trabajo de Tesis describimos un nuevo paso en la regulación de la respuesta inmune contra Mtb a través de la modulación de la capacidad de diferenciación de los Mo. Nuestros resultados amplian el conocimiento de los mecanismos involucrados en la evasión de la respuesta inmune ejercida por Mtb y, de ese modo, podrían contribuir al desarrollo de nuevos tratamientos y vacunas en esta enfermedad re‐emergente tanto a nivel local como mundial.

Descripción: El estrés experimentado durante la gestación tiene un gran impacto sobre eldesarrollo del sistema nervioso fetal. Esta situación altera la capacidad del organismopara enfrentar estímulos estresantes y lo hace más vulnerable a expresar trastornoscomportamentales y neuropsiquiátricos como el desorden de ansiedad, la depresión yla auto-administración de drogas. La mayoría de estas alteraciones han sido atribuidasa desbalances en los sistemas de neurotransmisión del cerebro. En los mamíferos, el glutamato es el principal neurotransmisor excitatorio delsistema nervioso central y participa en el desarrollo neuronal, en la integración de lasfunciones, promueve la plasticidad de las conexiones sinápticas y participa en losprocesos de memoria y aprendizaje. En el sistema glutamatérgico la síntesis deglutamato, la regulación de los niveles de los receptores, la función de lostransportadores y el control de la función sináptica en su conjunto dependen de lainteracción entre las neuronas y las células gliales. Las alteraciones en elfuncionamiento de los distintos componentes de la sinapsis glutamatérgica han sidoasociadas con el desarrollo de desórdenes neurológicos como los déficits cognitivos,las psicosis, desordenes de aprendizaje y memoria, así como también con laesquizofrenia. Los estudios retrospectivos y prospectivos con humanos, al igual quelas investigaciones con animales de experimentación han señalado que la exposicióntemprana a eventos adversos puede alterar la bioquímica del sistema glutamatérgico,así como también el comportamiento de los individuos en la edad adulta. Para evaluarel efecto del estrés prenatal sobre el metabolismo, la liberación y la captación delglutamato, se sometieron a estrés por inmovilización a ratas preñadas en su últimasemana de gestación. Se extrajo el cerebro de la cría adulta y se utilizaron la cortezafrontal y el hipocampo para medir la síntesis de glutamato, los niveles de losreceptores y de los transportadores del sistema y su función. Los resultados de losensayos, que se exponen en este trabajo, indicaron que el estrés gestacional afectalos niveles de expresión de los trasportadores de glutamato en el cerebro de las críasmacho, aumentando la cantidad de vGluT-1 en la corteza frontal y elevando el ARNmensajero y la proteína de GLT1 en el hipocampo. Paralelamente se registró en estosindividuos un aumento de la recaptación de glutamato en la corteza frontal efecto queno se observó en el hipocampo. Estos cambios demuestran que la influencia del estrésgestacional es específica para cada área del cerebro y que produce cambios a largoplazo que alteran el sistema de neurotransmisión glutamatérgica. Palabras claves: estrés prenatal, sistema glutamatérgico, transportadores deglutamato, ratas Wistar.

Descripción: se encuentra en franco aumento a nivel mundial, y dada la ausencia de un tratamiento eficiente se proyecta como uno de los grandes desafíos en el campo de la salud con injerencia social y económica para las sociedades modernas. Se caracteriza por la presencia de depósitos extracelulares de péptidos amiloides en el parenquima cerebral y agregados intraneuronales de proteína Tau hiperfosforilada. Además, se hace evidente un cuadro de neuroinflamación crónica, desregulación de la autofagia neuronal y daño vascular. En este sentido, el estudio integrado deneuronas, células gliales y vasculares –constituyentes de la unidad neurovascular- ha cobrado relevancia en los últimos años. En esta Tesis se planteó como principal objetivo estudiar el rol de las células microgliales, astrogliales y endoteliales –así como la interacción entre ellas- durante la instalación del cuadro neuroinflamatorio en etapas tempranas de la patología. Asimismo, se evaluó en etapas avanzadas si el sistema degradativo por autofagia se encontraba afectado en estas células no-neuronales. Para ello se empleó la cepa de ratones transgénicos PDAPP-J20, modelo animal ampliamente validado en la bibliografía, y modelos in vitro de la patología empleando los tipos celulares mencionados. En etapas tempranas de la enfermedad –antes de la presencia de depósitos amiloides- los ratones PDAPP-J20 presentan activación en la microglía y astroglia en el hipocampo. Sin embargo, la vasculatura no evidencia alteraciones ni en su morfología ni en su densidad. En etapas avanzadas, en cambio, la vasculatura cerebral presenta signos de atrofia y eventos detectables de daño vascular. Las células de la microglía y astroglía exhiben una evidente hipertrofia de su soma en la cercanía a placas amiloides, lo cual se asocia en parte a la acumulación de proteínas involucradas en el proceso de autofagia. En este sentido, en este trabajo de Tesis aporta evidencia original acerca del flujo autofagico en las células astrogliales en la cercanía de placas amiloides. Las células de la microglía, por su parte, presentan un impedimento en el flujo autofágico durante la estimulación crónica con péptidos amiloides fibrilizados y en el hipocampo de ratones PDAPP-J20. Por otro lado, la comunicación entre células astrogliales y endoteliales se vió afectada por el proceso de envejecimiento en este modelo animal. Los estudios realizados en sistemas in vitro demostraron que las células endoteliales son capaces de responder directamente a péptidos amiloides, pero también indirectamente a través de factores solubles liberados por microglía y astroglía que actuarían a través del receptor de moléculas asociadas al daño RAGE. Finalmente, el análisis por espectrometría de masa de la fracción proteica obtenida a partir de una muestra enriquecida en microvasculatura cerebral evidenció que los sistemas de metabolismo de ARN (principalmente la traducción y el splicing) se encuentran especialmente alterados en células vasculares durante etapas avanzadas de la patología. En su conjunto, estos resultados sugieren que hay claros indicios de instalación de un cuadro neuroinflamatorio en una etapa temprana de la patología, que contribuye a la progresiva disfuncion de la Unidad Neurovascular. En etapas avanzadas, alteraciones en la autofagia astroglial y microglial así como en los sistemas metabólicos básicos de las células endoteliales sugieren un cuadro de pérdida de homeostasis que probablemente promueva la exacerbación del proceso patológico.

Descripción: Fil: Fló Diaz, Juan. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Ratones transgénicos (knock-in, KI) con mutaciones del canal de calcio P/Q fueronutilizados como modelos murinos de Migraña Hemipléjica Familiar tipo I. Seestudiaron mediante técnicas de patch-clamp (whole cell) las corrientes de calciopresinápticas (IpCa) en los terminales nerviosos gigantes del caliz de Held y lascorrientes postsinápticas en las neuronas que este inerva. En los KI S218L se observola activación de las IpCa hacia potenciales más hiperpolarizados y una reducción de laamplitud de la corriente de calcio siendo esto ultimo dependiente de la duración de larepolarizacion del potencial de acción. A pesar de la reducción de las IpCa lascorrientes postsinápticas evocadas están incrementadas así como la frecuencia perono la amplitud de las espontaneas indicando la existencia de un ingreso continuo decalcio al terminal presinápticos, posible generador de cambios en la maquinaria deliberación responsable de la ganancia de función observada. La droga antiepiléptica pregabalina estudiada sobre ratones normales mostró serefectiva en disminuir la liberación evocada a través de la reducción de la amplitud delas IpCa y de la remoción de su inactivación. La mayor tasa de inactivación observadaen el KI R192Q fue absolutamente removida por la pregabalina.

Descripción: En un trabajo anterior Parodi (1) determinó el fósforo inorgániooy orgánico presente en el liquido alantoideo de huevoe degallina embrionados, inoculados con virus de influenze tipo A yencontró un descenso significativo de le fosfocreatina y del fósforototal. El presente trabajo continua esos estudios determinando fósforoinorgánico de fosfocreatia, ATP y ácido soluble total, enmúsculo de ratones blancos inoculadoe con virus de influenza, cepa Formosa. Materiales y Métodos. Animales: Se usaron ratones blancos adultos. Un lote se inoculóip. con 0,2 m1 de líquido alantoideo normal y otro con 0.2 m1de líquido alantoideo infectado con virus de influenza, cepa Formosa,cuyo título hemoaglutinante era 1:1280¡ un tercer lote seinoculó con 0.2 ml de una mezcle de virus y antisuero totalmenteneutralizada segun pruebes de infectividad en embriones. Estosanimales se sacrificaron a las 24, 48 y 72 hs. luego de la inoculaciónanestesiándolos oon pentotal y sumergiéndolos luego en unamezcla de nieve carbónica-éter. Mientras estaban congelados seles extrajo músculo que se pesó en una balanza de torsión y luegose trató con Cl3CCOOH Al 5% en Frío. Se filtró por un tubo de Barber y sobre este liquido libre de proteÍnas se hicieron leesiguientes determinaciones de fósforo. Determinación del fósforo: a) Fósforo inorgánico: Se llevó a cabo según el método de Lowryy Lopez (2) b) Fósforo de fosfocreatina: se dejó el filtrado libre de proteínasdurante l bora a temperatura ambiente y sobre una partealícuota se determinó fósforo según el método de Fiske-Subbarow (3). c) Fósforo de ATP: igual que el anterior pero se hizo previamenteuna hidrólisis de 10 minutos a 100°C en HCl 1N. d)Fósforo ácido soluble total: igual que el anterior pero eehidrolizó 3 hs. a 100°C en ClH 1N. Determinación del glucógeno muscular: Se trató un trozo de músculo de ratones obtenidos como anteriormentecon KOH al 30% en caliente, luego se precipitó glucógenocon l,l volumen de alcohol absoluto, se determinó y luegose hidrolizó en medio ácido. Se determinó glucosa según elmétodo de Valverde (4). Obtención del antisuero específico: Se inoculó un conejo adulto por vía intramuscular con 0,5mL de líquido alantoideo infectado con virus de influenzc más 1 m1 de adjuvante de Freund. Se lo sangró por punción cardíacaa los 15 dias y se obtuvo el suero. Determinación de infectividad en músculo: Se tomó una porción del músculo de le pata de ratones inoculadoscon virus de influenza, se maceró con caldo con antibiótico. (penicilina y estreptomicina), se centrifugó y se usóel sobrenadante. Este se inoculó en diluciones 10^-1, 10^-2, 10^-3, 10.^-4, 10^-5 en cavidad alantoidea de embriones de pollo de 11días de incubación. Los embriones se mantuvieron 24 hores a 37°C y luego se mataron por frío y se extrajo liquido alantoides,con el que se realizó una reacción de hemoaglutinación. Resultados: En la Tabla I se presentan los promedios,las desviacionesstandard, y los valoren de t (para el ensayo t) para lasdeterminaciones de ésteres fosforados. *Ver tabla en tesis* A las 24, 48 y 72 horas de la inoculación se observa un descenso significativo de la fosfocreatina, ATP y fósforo total. Esto no ocurre en los animales controles. Los valores de glucógeno muscular se dan en la Tabla II. *Ver tabla en tesis* No se observan variaciones en el contenido del glucógeno muscularde los ratones infectados. Los extractos de músculo de los ratones infectados con virusque fueron inoculados en embriones de pollo no demostraron poseerninguna actividad infecciosa. Discución El virus de influenza provoca cambios metabólicos en loshuespedes en los cuales desarrolla. En huevoss de gallina embrionadasse han encontrado variaciones en el volumen del líquido alantoideo,de su pH, del peso de la membrana corioalantoidea y de laglicólisis anaerobia de la membrana corioalantoidea. Unade las alteraciones más importantes es la detención desu desarrollo, fenómeno que se ha relacionado con el metabolismodel fósforo y sus ésteres, eapecialmente de la fosfocreatina y del ATP. Pappalardo (6) encuentra un aumento en 1a cantidad total decreatinina y creatina en el líquido alantoideo de embriones infectados. Parodi observa una notable disminución de la rostecreatinaen los embriones infectados que comienza a las 4 hs., seacentúa a las 7 hs. y vuelve a sun valores normales a las 24 hs.luego de la inoculación. Tambien observa un descenso del fósforoinorgánico y del fósforo ácido soluble total. En este trabajo se trató de observar si existían alteracionessimilares en ratones infectados intraperitonealmente con el virusde influenza. Se ha encontrado un descenso significativo del fósforo provenientede la fosfocreatina y del ATP,así comodel fósforo ácidosoluble total. Los valores hallados en ratones inoculados con liquido alantoideono infectado no muestran variaciones con respecto a losnormales, salvo en un caso (a las 48 hs. el fósforo del ATP aumenta)al cual no lo atribuimos significado. Las determinacionos de virus infeccioso en el músculo delanimal infectado han dado resultado negativo; tampoco co ha encontradovariación en los valores del glucógeno muscular aunqueéstos oscilan, en todos los casos, dentro de limites muy amplios. Siendo la fosfocreatina la fuente de fosfatos para la resíntesisdel ATP una disminución en los valoren de ambos hace pensaren la inhibición del proceso de síntesis de la primera que sereflejaría también en los valores del segundo. Un efecto análogo se encuentra en los músculos "envenenados"con iodoacetato en los cuales desaparece la fosfocreatina, aunquese encuentra un aumento del fósforo inorgánico y de la creatina. Este efecto se atribuyo a la inhibición de la gliceraldehido-3fosfato deshidrogenasa y al bloque de la resíntesis del ATP apartir del ATP. Dado que en el músculo no se encuentra virus infecciosos sepuede pensar que éste ejerce una acción tóxica que se manifiestade esta manera. Dicha acción podría deberse a la partícula en sio bien a alguna subunidad derivada de ella. Es conocida la toxicidadque tiene el virus de influenza. Hasta hace poco se pensabaque dicha toxicidad se debia a 1a partícula completa, pero enun reciente trabajo Kato y Okada han desintogrado el virus porultrasonido y han encontrado que a pesar de la perdida de infectividad, la toxicidad no disminuye y en algunos casos aumenta. Sugieren que la acción tóxica se debería a una proteina o lipoproteínafuertemente adherida a la hemoaglutinina, aunque partede ella permanece unida al antígeno. Una observación semejante de acción tóxica quo provoca undescenso de la fosfocreatina es el hallado por Pinchot y Blocval inocular toxina diftérica en ratas por vía subcutánea. De todas maneras, las experiencias anteriores indican quela noción tóxica es neutralizada por el antisuero específico. Encambio en este trabajo no se consiguió neutralizar el descensodel fósforo por la inyección simultánea del virus y del antisueroneutralizente, salvo en el caso del fósforo total. Esto podria explicarse si el descenso del fósforo se debieraa subunidades derivadas de la partícula viral y contra lascuales no hubiera anticuerpos en el conejo, a pesar de que elvirus se descompone en unidades menores al infectar las célulaso tejidos. Por otra parte se debe tener en cuente uns posible accióndebida al interferon. Se sabe que las células normales a lascuales se les agrega interferon aumentan su consumo de 02 así como suproducción de ac. láctico, pero el proceso de glicólisisqueda desconectado de la producción de ATP, pensándose que lafalta de este último es un factor importante en la acción del interferonfrente a los virus, dado que ellos precisan del ATP parasus procesos sintéticos. Podemos pensar entonces que nuestrosdescensos del ATP y fosfocreatina pueden ser causados por la accióndel interferon que fabricaría el animal el ser inoculado opor su presencia en el líquido alantoideo infectante. Conclusiones: 1.- Se hicieron determinaciones del fósforo inorgánico, del de fosfocreatina, ATP y ácido soluble total en ratones blancos inoculados con virus de influenza y en controles inoculados con líquido alantoideo normal. 2.- Se observó un descenso significativo en la fosfocreatina, ATP y fósforo total. 3.- Se discuten los resultados obtenidos y se propone su interpretación.

Descripción: Se evidenció que a partir de la activación nuclear hepática del tetracloruro de carbono (CCl4) se forman radicales libres triclorometilo (*CCl3). Los radicales *CC13 y los CCl3O2* derivados de la reacción de los primeros con el oxígeno, promueven reacciones de adición y de abstracción de H desde los lípidos nucleares. Las reacciones de adición son más intensas con los *CCl3 ; mientras que las de abstracción de H son promovidas más fuertemente por los CCl302*. Los *CCl3 se adicionan preferentemente a los ácidos grasos poliinsaturados de los fosfolípidos (PUFA) de la membrana perinuclear. Los CCl3O2* y los *CCl3 abstraen hidrógenos de los PUFA (especialmente ac. araquidónico) e inician procesos de peroxidación de lípidos de la membrana perinuclear que conducen a la formación de aldehídos reactivos (ej. malondialdehído). También abstraen H del colesterol de la membrana perinuclear formando productos de oxidación y cetoderivados del mismo. Por estudio comparativo en dos cepas de ratas con distinta susceptibdidad a sufrir cáncer hepático por efecto del CCl4, se deduce que la intensidad de producción de los radicales *CCl3 en las cercanías del ADN y la unión covalente de los mismos a fosfolípidos específicos, colesterol y ésteres de colesterol podrían tener relación con la susceptibilidad a sufiir los efectos carcinogénicos ejercidos por el CCl4. En resumen: Los resultados evidencian que durante la biotransformación nuclear hepática del CCl4 se forman radicales libres *CCl3 y CCl302*. Dichos radicales interactúan con los lípidos de la membrana perinuclear y generan productos potencialmente capaces de reaccionar o regular la función del ADN y/o las proteínas nucleares, con consecuencias potencialmente graves a nivel celular.

Descripción: La pérdida de audición debida al envejecimiento (presbiacusia), o bien a la exposición a sonidos de alta intensidad, constituyen dos de las formas más comunes de pérdida de audición en humanos. Si bien se pensaba que el rasgo común a ambas patologías era la pérdida de sensibilidad auditiva, recientemente se ha descrito que la aparición de alteraciones estructurales en las sinapsis que transmiten la información auditiva desde la cóclea al Sistema Nervioso Central (SNC) podrían producirse, en ambos casos, sin afectar los umbrales de audición, lo que se conoce como Pérdida de Audición Oculta (HHL, por sus siglas en inglés). Las células ciliadas internas (CCIs) ejecutan la mecanotransducción de los estímulos auditivos y luego transmiten la información sensorial hacia el SNC mediante sinapsis en cinta que forman con terminales dendríticos de neuronas del ganglio espiral (NGEs). Si bien se ha descrito que luego de la exposición a ruido se produce una reducción en el número de sinapsis CCI-NGE, se desconoce cuál es la integridad funcional de las sinapsis sobrevivientes para codificar la información auditiva. Con el propósito de estudiar los efectos de la exposición a ruido sobre la capacidad de la CCI para liberar neurotransmisor, se registraron los cambios en la capacitancia de membrana de las CCIs. Así, se vio que los ratones expuestos mostraron una mayor liberación vesicular que los controles a pesar de que el influjo de Ca2+ a la CCI fuera similar. Finalmente, se identificaron efectos dependientes e independientes de la liberación de glutamato sobre la dinámica de liberación vesicular y sobre la morfología sináptica. Las células ciliadas externas (CCEs) cuentan con un mecanismo electromótil mediante el cual contribuyen a la amplificación y sintonización fina de los estímulos auditivos. A su vez, dicho mecanismo puede ser inhibido por terminales eferentes colinérgicos de neuronas del complejo olivococlear medial (MOC, por sus siglas en inglés), ubicado en el tallo cerebral. Se ha establecido que la activación del reflejo MOC puede prevenir o reducir el impacto de la exposición a ruido. Sin embargo, el rol de las neuronas MOC en la prevención de la HHL o la presbiacusia no ha sido explorado. Con tal fin, distintas líneas de ratones genéticamente modificados con diferentes niveles de actividad del reflejo MOC fueron expuestas a ruido o criadas hasta el envejecimiento y mediante pruebas de fisiología auditiva y ensayos inmunohistoquímicos se analizó el nivel de daño post-exposición. En animales con actividad normal de las neuronas MOC se observó el desarrollo de un fenotipo de HHL luego de la exposición a ruido. Asimismo, al año de edad estos animales presentaban déficits funcionales y alteraciones estructurales compatibles con un fenotipo de presbiacusia. En cambio, animales con actividad MOC potenciada demostraron estar completamente protegidos del trauma acústico en términos funcionales y estructurales e igualmente tampoco presentaron signos de pérdida de audición al año de edad. El presente trabajo da cuenta, entonces, de nuevas evidencias relacionadas con los efectos de la exposición a ruido sobre la transmisión sináptica en la vía auditiva, a la vez que aporta evidencias sobre la potenciación de la vía eferente MOC como un mecanismo eficiente para la prevención de la presbiacusia y la pérdida de audición debida al envejecimiento.

Descripción: Luego de las lesiones de la médula espinal los pacientes experimentan déficits cognitivos relacionados con funciones hipocampales. En este sentido, el objetivo general de esta Tesis es estudiar las bases neurobiológicas responsables de dichos déficits. Para cumplirlo desarrollamos un modelo de lesión espinal parcial por compresión en ratas y ratones que permite evaluar el estado cognitivo de los animales lesionados, ya que estos tienen la misma actividad locomotora que los animales Sham pero severos problemas en la coordinación de sus pasos. Los resultados demostraron que luego de 60 días de la injuria espinal los animales presentaron déficits en la memoria de reconocimiento y en la memoria de trabajo espacial. Estos déficits coinciden con una disminución del número de neuronas del hileo, de CA1 y de la capa granular. También se observó una disminución de la neurogénesis tanto en la etapa aguda como en la crónica. En la fase aguda encontramos una disminución del número de progenitoras neurales amplificadas (ANP) mientras que en la etapa crónica se observó una disminución de la taza de proliferación de las células madres neurales (RGL) y de los ANP. Las alteraciones neuronales observadas en la etapa crónica coincidieron con alteraciones en la respuesta de las poblaciones de células gliales. De hecho en la etapa crónica, aumentó el número de astrocitos reactivos en ratas y ratones. Además, se produjo en ratas un incremento de las células microgliales activas, aumentando la expresión del ARNm de TNFα e IL-1β y disminuyendo el porcentaje de células microgliales del fenotipo M2 (anti-inflamatorio). En la etapa aguda, si bien el número de astrocitos reactivos y células de la microglía aumentaron, no se incrementaron los niveles del ARNm para TNFα e IL-1β. Con respecto a los mecanismos por los cuales la lesión espinal genera estas alteraciones hipocampales exploramos el rol de los glucocorticoides (GC) y de la degeneración transneuronal de los axones seccionados. En cuanto a los GC describimos que los animales sólo tuvieron altos niveles plasmáticos en la etapa aguda alcanzando valores similares a animales intactos en la etapa crónica. Mediante dos abordajes experimentales diferentes se bloqueó la acción de los GC en la etapa aguda y se estudió en la etapa crónica el proceso de neurogénesis y el desempeño cognitivo. Los resultados mostraron que la neurogénesis fue parcialmente restaurada, sin embargo los déficits cognitivos persistieron. Por otro lado, realizamos una hemisección de la médula espinal mediante la cual sólo los haces del funículo ventrolateral, que en su mayoría decusan, fueron dañados y medimos la neurogénesis 60 días después en el hipocampo ipsilateral y contralateral a la lesión. Observamos que la neurogénesis del lado contralateral a la lesión disminuyó con respecto al lado ipsilateral, involucrando a la degeneración transneuronal en esta disminución. El desarrollo de este trabajo sugiere que las alteraciones hipocampales descriptas en las neuronas maduras, en la neurogénesis y en el ambiente glial podrían explicar los déficits cognitivos observados en los roedores y en los pacientes. Los resultados sugieren que la lesión espinal podría generar un ambiente inflamatorio en la etapa crónica que conduzca eventualmente a la neurodegeneración hipocampal. Con respecto a los mecanismos subyacentes comenzamos estudiando la disminución de la neurogénesis y demostramos que los GC generados en la etapa aguda en parte fueron responsables de la disminución del proceso en la etapa crónica. También observamos que otro factor involucrado en la disminución de la neurogénesis en la etapa crónica fue la degeneración transneuronal. Este trabajo es pionero en el estudio de la encefalopatía luego de la lesión espinal y abre nuevas perspectivas que permiten la comprensión integral de la fisiopatología del paciente con lesión medular.

Descripción: El objetivo de este trabajo fue comprender las alteraciones inmunológicas inducidas por estrés y su asociación con trastornos que cursan con cambios conductuales. Se utilizó un modelo de estrés crónico moderado (CMS) que consiste en la aplicación de factores estresores de manera crónica, secuencial e impredecible durante varias semanas. Se observó el desarrollo de un estado anhedónico en animales expuestos a CMS, un aumento de la actividad locomotora y una disminución de su capacidad de aprendizaje y memoria, compatible con las alteraciones estructurales encontradas en el hipocampo. La respuesta inmune en estos animales se vio alterada, encontrándose una disminución en la respuesta T-dependiente y un aumento de la reactividad de linfocitos B. Estas alteraciones se correlacionaron con cambios en las señales intracelulares implicadas en la activación celular. Los niveles de hormonas del estrés (catecolaminas y corticosterona) no se hallaron aumentados en el momento de la aparición de la alteración inmunológica pero los linfocitos mostraron una alteración en la sensibilidad a su efecto. Se encontraron niveles aumentados en la producción de IL-6 evidenciándose un desbalance Th1/Th2 en animales estresados. La administración periférica de esta interleuquina indujo cambios conductuales y alteraciones en el hipocampo similares a los observados en los animales CMS. El estrés crónico induciría cambios inmunológicos que participarían en los cambios conductuales y estructurales que acompañan a patologías íntimamente asociadas al estrés como es la depresión.

Descripción: Las propiedades mecánicas de frutas y vegetales influencian en forma importante la textura de los mismos, la cual es uno de los principales atributos de calidad para determinar su aceptación. Las propiedades viscoelásticas de las frutas cambian ampliamente durante el procesamiento de las mismas, debido a las alteraciones de los componentes estructurales a diferentes niveles y sus interacciones químicas y físicas. Los métodos de medición de las características reológicas que utilizan pequeñas deformaciones proveen información sobre la microestructura del tejido, la cual es determinante en la conducta físico–mecánica exhibida. El objetivo general de esta tesis fue investigar las propiedades reológicas a pequeñas deformaciones de manzana y melón sometidos a distintos procesos de conservación y transformación y su posible relación con los cambios ultra y micro estructurales. Los procesos estudiados fueron: tratamiento térmico; deshidratación osmótica en solución acuosa de glucosa, con y sin agregado de calcio, a presión atmosférica o bajo vacío; escaldado en vapor y/o ultrasonido. Las muestras tratadas mostraron una disminución en el módulo de almacenamiento (G´) comparadas con el tejido fresco. Todas las muestras mostraron un comportamiento de sólido, con G´ dominando la respuesta viscoelástica. Los datos experimentales de fluencia fueron ajustados según el modelo de Kelvin generalizado con seis elementos con un coeficiente de correlación > 0,999. En general, las capacitancias inicial, viscoelásticas y viscosa aumentaron significativamente con los tratamientos, mientras que los tiempos de retardo permanecieron aproximadamente constantes. Estos resultados se correlacionaron con los cambios micro y ultraestructurales de los tejidos. La información obtenida permitirá lograr un mejoramiento en la calidad textural de las frutas procesadas a nivel comercial, a través de un mejor entendimiento de las alteraciones de los tejidos y su correlato a nivel mecánico.

Descripción: La asfixia perinatal (AP) puede ser causa de diferentes grados de lesiones en Ia retina, pudiendo llevar en casos severos a la ceguera. Los estudios clínicos revelan que las complicaciones obstétricas y en particular la AP, desarrollan una retinopatía proliferativa isquémica (RPI), patología que incluye a la retinopatía del prematuro (ROP). Esta es en particular Ia principal causa de ceguera en los niños tanto en países desarrollados como en países en vías de desarrollo, siendo en la actualidad una patología de interés prioritario para la Organización Mundial de la Salud. En esta Tesis se utiliza un modelo de AP experimental para estudiar las alteraciones moleculares y celulares que induce la asfixia en la retina, analizándose la implementación de la hipotermia como estrategia terapéutica. En estudios utilizando técnicas histológicas de rutina se observó mediante microscopía óptica Ia presencia de membrana neovascular epirretinal y signos de neurodegeneración. La utilización de un anticuerpo específico contra antígenos que se expresan al producirse neoformación de vasos (CD31) corroboró esta observación. Además, se puso en evidencia una hipertrofia en las células de Müller que fue visualizada utilizando anticuerpo contra la proteína gliofibrilar ácida (GFAP). Todos estos datos indican que el modelo de AP reproduce las alteraciones a largo plazo compatibles con las descripciones histopatológicas de RPI y ROP, Io cual lo hace ideal para estudiar los mecanismos que desencadenan estas patologías. Dado que uno de los posibles factores involucrados en la ROP es el óxido nítrico (NO), se utilizaron técnicas histoquímica e inmunohistoquímicas con anticuerpos específicos para las isoformas del óxido nítrico sintasa neuronal (nNOS), e inducible (iNOS) y contra nitrotirosina. Se observaron aumentos de la inmunorreactividad en el sistema nitrérgico en varias capas de la retina y en particular en las células amácrinas. Mediante técnicas de western-blot se corroboró lo observado por inmunohistoquímica, evidenciándose un aumento significativo en la expresión de las dos isoformas de Ia NOS y en la nitración de proteínas. Por otro lado, cuando los animales fueron sometidos a AP en condiciones de hipotermia las alteraciones producidas por la asfixia no fueron observadas poniendo de manifiesto el potente efecto protector de la hipotermia sobre los procesos neurodegenerativos observados en la retina. Este modelo de AP es por lo tanto aplicable al estudio de estas afecciones, pudiendo aportar valiosa información sobre los mecanismos neuropatológicos que se desencadenan. La profundización en el estudio del efecto protector de la hipotermia permitirá el desarrollo de terapias tempranas que eviten el daño neuronal y mejoren la calidad de vida del paciente.

Descripción: En el presente trabajo estudiamos el efecto del estrés prenatal (EP) en la respuestaneuroinmune en animales adultos. Observamos que machos y hembras respondierondiferente ante el EP, tanto a nivel inmunológico como comportamental. Los machospresentan una mayor respuesta inmune innata en relación a una mayor secreción de IFN-γ. Las hembras presentan algunos trastornos conductuales asociadosposiblemente a una disminución de BDNF así como también a un aumento central yperiférico de IL-4 y a una disminución periférica de IFN-γ. Ante nuevas situaciones deestrés en la adultez observamos que, las hembras EP tienen una respuesta inmunedesmejorada ante situaciones de estrés agudo y un peor desempeño en aquellaspruebas que evalúan la memoria espacial al ser expuestas a estrés crónico. Lasalteraciones inmunológicas podrían estar relacionadas con una disminución delbalance Th1/Th2 y un mayor efecto inhibitorio de los glucocorticoides. Los trastornosconductuales podrían estar asociados a una disminución del BNDF y a un aumento delos receptores a GC en hipocampo inducidos por EP. Los machos EP expuestos aestrés en la adultez presentan un aumento en la respuesta inmune innata que estaríarelacionado con un aumento en los niveles de IFN-γ. Sin embargo, tienen unadisminución en la inmunidad adaptativa, que al igual que las hembras, tendría relacióncon el mayor efecto inhibitorio ejercido por la corticosterona. Por otro lado, en losmachos tanto controles como EP, la exposición a estrés agudo o crónico no indujoalteraciones importantes en las pruebas comportamentales realizadas. Los resultados encontrados nos permiten concluir que el estrés materno inducecambios neuroinmunes en las crías que se pondrían especialmente en evidenciacuando estos individuos deben enfrentarse a nuevas situaciones de estrés en laadultez, siendo las hembras más sensibles que los machos. Además, hallamos que loscambios inducidos por exposición a EP se dan paralelamente en el hipocampo y en lascélulas del sistema inmune. Podría entonces sugerirse que estas células pueden serindicadores periféricos de una mayor susceptibilidad a padecer trastornos al serexpuestos a nuevas situaciones de estrés en la adultez.

Descripción: El autismo es un desorden severo del desarrollo neural que seencuentra principalmente caracterizado por un impedimento sostenido en lainteracción social, habilidades comunicativas reducidas y por patrones decomportamiento estereotipados o restrictivos. Existen cada vez másevidencias clínicas y experimentales que relacionan alteraciones en elsistema inmune con la patogénesis del desorden de espectro autista (DEA). Los individuos autistas muestran en diversas etapas de su desarrollo signosde neuroinflamación, respuestas inflamatorias alteradas y anormalidadesinmunes. El objetivo general de esta tesis fue el de estudiar el rol que juega larespuesta inflamatoria/glial del sistema nervioso central en la manifestaciónde comportamientos relacionados con el autismo. A tal fin utilizamosratones expuestos en la preñez a 600 mg/kg de ácido valproico (VPA600),los cuales muestran deficiencias en la interacción social y han sidopropuestos como un posible modelo de autismo. En este trabajo no sóloconfirmamos el fenotipo en una filial 1 (F1) de dos cepas endocriadas deratón, sino que extendimos el análisis conductual describiendo que losanimales expuestos a VPA muestran niveles aumentados decomportamientos relacionados con la ansiedad. Evaluamos en estos animales la respuesta periférica y central a unestímulo inflamatorio, así como el estado basal de activación glial. Evidenciamos signos de activación glial crónica tanto en el hipocampo comoen el cerebelo de los animales VPA600, así como una respuesta exacerbadaal ser expuestos a un estímulo inflamatorio periférico (lipopolisacáridointraperitoneal, LPS): los animales VPA600 muestran niveles más altos decorticosterona en sangre y un aumento en los niveles de expresión decitoquinas pro-inflamatorias en el bazo respecto de animales control. Sumado a esto, luego del estímulo con LPS los VPA600 muestran signos deneuroinflamación: tienen mayor número de células de la microglia en el hipocampo y exhiben mayores niveles de citoquinas pro-inflamatorias en elcerebelo. A fin de evaluar la posible relación causal entre la neuroinflamaciónobservada en el cerebro adulto de los animales expuestos a VPA y ladisminución en la interacción social, inyectamos LPS directamente en ellobulillo VI-VII del cerebelo. Al evaluar el comportamiento a las 24 horas,observamos una disminución en la interacción social, acompañada de unamarcada neuroinflamación. Los resultados que se presentan demuestran, por un lado, unaneuroinflamación basal y una respuesta inflamatoria alterada en el modelo VPA de autismo y, por otro, sugieren que la inflamación en una regiónespecífica del cerebelo puede modular los niveles de interacción social. Teniendo ambas cosas en cuenta, proponemos a este modelo como unaherramienta útil para evaluar la contribución de la inflamación al desarrollode los comportamientos relacionados con el autismo. Consideramos queestos estudios contribuirán a dilucidar el rol de las desregulacionesinflamatorias observadas en individuos con ASD.

Descripción: Se ha demostrado que la hipoxia produce diversas alteraciones en laneurotransmisión GABAérgica, principalmente en el período perinatal. El complejoreceptor GABAa está asociado a un canal de cloruro, el cual en presencia de GABAaumenta la conductancia al ion Cl- hacia el interior de la neurona produciendo suhiperpolarización. Los objetivos de la presente Tesis fueron diseñar una cámara hipóxicapara embriones de aves, y caracterizar las alteraciones que se producen en el complejoreceptor GABAa luego del trauma hipóxico. Los resultados obtenidos demuestran que losestadios embrionarios más tempranos son más sensibles a la injuria, exhibiendo unareducción del máximo número de sitios de unión de baja afinidad, y un aumento de laestimulación máxima producida por un barbitúrico (pentobarbital sódico) y unneuroesteroide (alopregnanolona). Asimismo, se observó un aumento de la captación de Cl̄ inducida por GABA de los receptores remanentes luego del tratamiento hipóxico. Dado que los embriones detectan en todos los estadios embrionarios la injuria producida,evidenciándose como un aumento en los niveles de lactato, es probable que existancambios durante el desarrollo en la composición de las subunidades del receptor que lohagan más resistente a la hipoxia, la cual además, ocurre fisiológicamente en los últimosdías de desarrollo. La expresión de algunas subunidades del receptor GABAa durante laembriogénesis, mostró cambios en los niveles de expresión de α1, β2 y ɣ2 en embrionescontrol luego del tratamiento hipóxico, los cuales correlacionaron con lo observado luegode producida la hípoxia fisiológica. Estos datos sugieren que, podrían existirconformaciones del receptor más resistentes a la hipoxia, y que los niveles de oxígenopodrían regular la expresión de algunas subunidades de alguna manera aún desconocida.

Descripción: El CCl4 afectó a proteínas por distintos mecanismos. In vivo disminuyó transitoriamente laincorporación de (14)C-Leucina a proteínas nucleares (totales y distintas fracciones proteicas) y microsomaleshepáticas de rata, siendo el efecto máximo a la hora. La cicloheximida causó un efecto similar. Los metabolitos reactivos del CCl4 (tridonometilo ('CCl3) y triclorometilperoxilo (CCl3O2'))formados por activacióncon luz ultravioleta C (UVC)causaron el aumento de grupos carbonilos (↑CO)yla disminución del contenido de grupos sulfhidrilo (↓SH) en albúmina de huevo (alb) y el ↑CO en 20aminoácidos. El ↑CO en alb fue parcialmente inhibido por Trolox y EDTA pero no α-tocoferol. Losmetabolitos del CCl4;formaron HCCl3 por reacción con alb (parcialmente inhibido por Trolox) y cisteína,posiblemente por abstracción de hidrógeno, la luz UVC per se ↑CO,abrió el puente disulfuro, pero casino afectó los SH de la alb. El 'CCl3 y el CCl3O2 ↑CO y ↓SH en proteínas microsomales in vitro, por acción directa o víaproductos de peroxidación de lípidos (PL) ya que fue parcialmente inhibido por antioxidantes y EDTA. No afectaron los CO y SH de proteínas nucleares, mitocondriales y citosólicas in vitro. El NADPH in vitro (probablemente vía PL) ↑CO y ↓SH de proteínas microsomales y nucleares, pero no mitocondriales Produjo ↑SH pero no de CO de compustos citosólicos. El CCl4 in vivo aumentó transitoriamente el contenido de CO de proteínas microsomales pero node nucleares hepáticas de rata. Las alteraciones causadas por los metabolitos reactivos del CCl4 en proteínas permitirían explicaralgunas de las alteraciones observadas en la intoxicación por CCl4(pérdida de funciones celulares, daño ala bomba de calcio del retículo endoplásmico),que podrían causar la muerte o desencadenar mecanismosde protección celulares.

Descripción: El autismo es un desorden del desarrollo neural caracterizado porimpedimentos en la interacción social, habilidades comunicativas reducidas y lapresencia de comportamientos estereotipados o repetitivos. Estos síntomastípicamente aparecen durante los primeros años de vida, y pueden afectar hasta a 1en 38 niños, con una incidencia entre tres y cuatro veces mayor en varones que enmujeres. Actualmente no se conoce una única causa del desorden, sino que seproponen múltiples agentes etiológicos. Estudios postmortem realizados en humanoshan establecido un nexo entre autismo y neuroinflamación. El objetivo general de esta tesis fue dilucidar el rol de la respuesta inflamatoriadel sistema nervioso central, particularmente la activación glial, en el desarrollo delautismo. Para ello utilizamos el modelo de administración prenatal de Ácido Valproico (VPA) en ratón. Encontramos que la exposición al VPA produce una disminución en lasociabilidad de los ratones macho adultos, pero no así de los ratones hembra. Además, las hembras VPA presentan micro y astrogliosis en el cerebelo, y unarespuesta inflamatoria periférica exacerbada ante la administración de un estímuloinflamatorio. Sin embargo, dichas alteraciones no se encuentran presentes en losmachos. Dado que los síntomas del autismo aparecen de manera temprana durante lainfancia, caracterizamos el estado inflamatorio periférico y central en el períodopostnatal y evidenciamos signos de alteraciones gliales tempranas en cerebelo ehipocampo entre el día postnatal (P) 21 y P35. Con el fin de evaluar el efecto directode la inflamación postnatal en los niveles de sociabilidad de los animales,administramos un estímulo inflamatorio a lo largo de dicho período crítico. Observamos que la inflamación postnatal afecta diferencialmente la interacción socialen los ratones VPA, dependiendo del sexo de los mismos. Mientras las hembras venreducidos sus niveles de sociabilidad, los machos restauran sus niveles normales. Al estudiar los mecanismos moleculares mediante los cuales se encuentraactuando el VPA, encontramos una disminución en los niveles de acetilación dehistonas en el cerebelo de animales P14. Dado que este fenómeno precede al períodopostnatal crítico, sugerimos que las alteraciones neuroinflamatorias observadas en elmodelo podrían estar siendo guiadas por un mecanismo epigenético. Los resultados aquí presentados evidencian efectos sexo-específicos del VPAsobre la sociabilidad y el estado inflamatorio de los animales, tanto central comoperiférico. Además, se demuestran efectos diferenciales de la inflamación postnatalsobre los comportamientos sociales de machos y hembras. Dado que la mayor partede la investigación en modelos animales de autismo ha sido desarrollada en animalesmacho, consideramos que este trabajo puede ayudar en la comprensión de lossíntomas particulares observados en las niñas autistas, y adicionalmente aportarevidencias sobre posibles mecanismos de resiliencia dentro de la población femenina.

Descripción: Se encaró en este trabajo el estudio de las alteraciones agudasradioinducidas en la microvasculatura de la piel de la rataneonata. Las finalidades de este trabajo han sido: a)Establecer parámetros histométricos y esterelógicos que permitieranevaluar cuantitativamente los cambios vasculares paracorrelacionarlos numéricamente con las dosis de radiación aplicadasy el tiempo post-irradiación. b)Analizar la influencia de las alteraciones vasculares en eldaño total producido en la piel por irradiación, teniendo encuenta que en el modelo experimental seleccionado se habíancaracterizado previamente las variaciones morfológicas y metabólicasde la epidermis. Se adaptó la técnica de inyección intravascular de peroxidasaque permite la visualización de todos los vasos funcionantes,incluyendo los capilares, en cortes gruesos de tejido, yse establecieron parámetros morfológicos que caracterizan el patrónvascular. Asimismo, dado que parte de la peroxidasa inyectadapermea el endotelio, pasa al tejido conectivo perivasculary es fagocitada por macrófagos, fue posible obtener informaciónsobre cambios radioinducidos en la permeabilidad capilara partir del contaje directo de células macrofágicas peroxidasapositivas y de la evaluación microfotométrica de la peroxidasapresente en el tejido conectivo revelada histoquímicamente. El hecho de que el producto final de la reacción histoquímicapara detección de la peroxidasa es electrónicamente denso permitióel estudio a nivel ultraestructural del material irradiado. Se irradió localmente la mejilla de la rata neonata con 8, 15,60 ó 120 Gy de Rayos X y se realizó la inyección intravascularde peroxidasa 3 horas, 1 día, 3 días y 6 días después de laexposición. El estudio morfométrico reveló que el patrón vascularnormal sufre alteraciones en función de la dosis y el tiempo post-irradiacióncon un aumento de la frecuencia de los calibres vascularesmayores a expensas de los menores, un aumento del volumenvascular y una disminución de la longitud vascular. La vasodilataciónasociada a una disminución en la longitud vascular redundaen una telangiectasia temprana no descripta en otros modelosde irradiación experimental de piel. La permeabilidad capilarinferida del contaje de células macrofágicas peroxidasa-positivasy la evaluación microfotométrica de la peroxidasa presente enel tejido conectivo perivascular sufrió un aumento progresivocon el tiempo post-irradiación. La presencia de telangiectasiastan tempranas asociadas a este aumento de permeabilidad sugiereque se instala en este modelo una rémora circulatoria que alteraríacualitativamente la nutrición del tejido irrigado. La exactitud con que el área afectada por la irradiación coincidecon la zona expuesta al haz de Rayos X y el daño endoteliala nivel ultraestructural sugeriría que, en este modelo, predominaun mecanismo de daño directo a la pared vascular. El daño vascularsería así la lesión previa que induciría una hipoxia parcial dela epidermis cuyas células experimentarían consecutivamente lasalteraciones morfológicas y metabólicas previamente estudiadasque conducen a la acantosis, hiperqueratosis y posterior necrobiosis.

Descripción: Estudios epidemiológicos y experimentales demostraron que el estrés puede influenciar el crecimiento tumoral. Sin embargo, los mecanismos implicados son poco conocidos. El objetivo de este trabajo fue estudiar la correlación existente entre la desregulación de mediadores neuroinmunoendocrinos inducidos por la exposición a estrés crónico y la evolución y comportamiento biológico del linfoma T EL4 creciendo in vivo. Los animales estresados, cuyo eje neuroinmunoendocrino se encontró desregulado, mostraron una mayor velocidad de crecimiento tumoral y mayor número de metástasis espontáneas. Adicionalmente, los tumores provenientes de ratones estresados mostraron aumentada expresión de ARNm de proteínas que promueven el ciclo celular y de marcadores de invasión tumoral. Por otra parte, los ratones estresados presentaron una disminución en la respuesta inmune antitumoral, evidenciada por una menor actividad de células NK y citotóxica específica. Experimentos de transferencia adoptiva de linfocitos indicaron un rol crucial del sistema inmune en la progresión tumoral inducida por estrés. Los antidepresivos son fármacos que se utilizan en pacientes con cáncer para aliviar los desórdenes del ánimo asociados a este tipo de patología. Por ello, en este trabajo se estudió el efecto de dos inhibidores selectivos de la recaptación de serotonina sobre la influencia del estrés en la evolución tumoral. Nuestros resultados evidenciaron un importante efecto beneficioso del tratamiento con fluoxetina o sertralina contrarestando los efectos del estrés sobre la progresión del linfoma EL4. En su conjunto, estos resultados sugieren que el estrés crónico altera mediadores neuroinmunoendocrinos que promueven el crecimiento tumoral. En este efecto estarían involucrados la regulación de proteínas relacionadas con la progresión y/o arresto del ciclo celular y la migración e invasión celular, y la respuesta inmune antitumoral. Además, la prevención de estos mecanismos con el tratamiento con fluoxetina o sertralina señala el posible beneficio del tratamiento farmacológico del estrés como co-adyuvante de la terapia antitumoral.

Descripción: La tuberculosis multirresistente a drogas (MDR-TB) plantea una amenaza real al control y la eliminación de la tuberculosis (TB) que, a pesar de ser una enfermedad prevenible y curable, continúa siendo uno de los principales problemas de la salud pública. En el presente trabajo caracterizamos la respuesta inmune adaptativa frente a dos cepas causantes de brotes de MDRTB en Argentina, M y Ra, en pacientes con MDR-TB, TB sensible a drogas (STB) e individuos sanos con infección latente (N). Además, determinamos cuáles son los factores involucrados en la evasión de la respuesta T citotóxica (CTL) por la cepa M, en comparación con 410, un aislado estrechamente relacionado con M pero de baja virulencia. Nuestros resultados muestran que: 1) la inducción de citoquinas y de la respuesta CTL Mtb-específicas dependen tanto del status inmunológico del huésped como del genotipo de Mtb; 2) los pacientes con MDR-TB presentan una alteración del eje IFN-γ/IL-4, una respuesta CTL disminuida y un aumento de linfocitos T reguladores; 3) M y Ra son pobres inductoras de IFN-γ en N y 4) M es una gran inductora de IL-4 en MDR-TB y S-TB, sugiriendo que M explota y aumenta la tendencia pre-existente de estos pacientes a generar respuestas Th2; y 5) M es una pobre inductora de CTL tanto en MDR-TB y S-TB como N a diferencia de 410, indicando que la carencia de CTL es una característica de M. La cepa M emplearía varios mecanismos para inhibir la respuesta CTL: a) alteración en la formación de conjugados CTL-CB; b) disminución en la expresión de moléculas líticas y RANTES; c) una activación disminuida, determinada por la baja expresión de CD69; y d) una escasa ayuda CD4+.

Descripción: El mejillón dorado Limnoperna fortunei, proveniente del sudeste Asiático, es causante de incrustaciones en redes de agua sin tratamiento. El uso de sustancias tóxicas para su control (principalmente cloro) es la estrategia más empleada, pero debido a sus efectos adversos sobre el ambiente el uso de tóxicos tiene numerosas limitaciones. Se investigaron alternativas sin uso de tóxicos para el control de la especie examinando su tolerancia a condiciones de anoxia, altas temperaturas y radiación UV. La supervivencia bajo anoxia se estimó con mejillones pequeños (6-7 mm) y grandes (20-21 mm) a 20 y 27°C. La especie sobrevivió entre 10,2 y 29,3 días, dependiendo de las tallas y aclimataciones. La tolerancia a las altas temperaturas se realizó a diferentes ritmos de calentamiento del agua: 1ºC/5, 15 y 30 min con aclimataciones a 12, 23 y 28ºC (temperatura letal aguda, TLA); y a siete temperaturas constantes: 34, 36, 38, 40-43ºC a 12 y 28ºC (temperatura letal crónica, TLC), con mejillones pequeños y grandes. En condiciones de TLA los animales mueren a los 43,5-51ºC. En los ensayos de TLC la muerte se produce luego de 0,7-644,3 hs, independientemente de las tallas y aclimataciones (excepto a 34 y 36ºC). La resistencia a la luz UV (254 nm) se evaluó con velígeras a dosis de entre 95 y 226 mWs/cm2 en primavera y verano. La mortalidad ocurre 72 hs después de la exposición a 226 (primavera) y 156 mWs/cm2 (verano). Los resultados indican que, a pesar de que Limnoperna fortunei es una especie muy resistente, éstos métodos constituyen excelentes alternativas al uso de tóxicos por sus bajos costos, facilidad de implementación e inocuidad ambiental.

Descripción: La endometriosis (EDT) es una de las enfermedades ginecológicas benignas más comunes en mujeres en edad reproductiva y se define por la presencia de tejido endometrial fuera de la cavidad uterina. Debido a la cuestionada eficiencia de la terapéutica actual y basándonos en trabajos previos de nuestro grupo, orientamos la búsqueda de terapias alternativas hacia compuestos naturales que puedan administrarse por períodos prolongados sin causar efectos adversos. El objetivo general de esta tesis consistió en evaluar el efecto del ácido elágico y dos de sus metabolitos, urolitina A y B; sobre el crecimiento de lesiones endometriósicas en un modelo murino de EDT. Asimismo, se evaluaron sus efectos sobre el crecimiento y comportamiento de células epiteliales y estromales endometriales in vitro. Los resultados obtenidos resultan prometedores ya que todos los tratamientos, especialmente con los metabolitos, provocaron efectos inhibitorios sobre el comportamiento celular y el desarrollo de la EDT, in vitro; así como las urolitinas demostraron tener efectos antiproliferativos y proapoptóticos in vivo. Estos resultados avalan continuar investigando los mecanismos de acción de estos compuestos, ya que podrían representar una nueva estrategia terapéutica potencial para el tratamiento de la EDT.

Descripción: El estilo de vida antes y durante el embarazo afecta la salud materna y fetal. Numerosos estudios han demostrado que las intervenciones orientadas a reducir el estrés y la ansiedad materna tienen efectos positivos en algunas complicaciones de la gestación, como la preeclampsia, la pérdida temprana del embarazo, la diabetes gestacional y el parto prematuro. En este trabajo, demostramos que el enriquecimiento ambiental, definido como un estímulo biológicamente significativo y no invasivo de la vía sensorial en combinación con actividad física voluntaria, disminuyó la tasa de parto prematuro (PP) en un 40%. Para ello, utilizamos un modelo murino de inflamación durante la preñez, inducido por la administración sistémica de lipopolisacárido bacteriano (LPS). Además, mostramos que el ambiente enriquecido (AE) modula el metabolismo materno produciendo un ambiente antiinflamatorio que contribuye al mantenimiento de la preñez. En el útero de ratonas preñadas, el AE disminuye la expresión de TLR4 y CD14 (el receptor de LPS y su proteína coactivadora), evitando el aumento de la producción de prostaglandina (PG) E2 y PGF2α y de la actividad de la óxido nítrico sintasa (NOS), inducido por LPS. En el cérvix, la exposición a un AE inhibe algunos de los eventos involucrados en la maduración cervical prematura, como la liberación de PGE2, el aumento de la actividad de la metaloproteinasa de matriz (MMP)-9 y el reclutamiento de neutrófilos, conservando así la función cervical. Además, observamos un efecto protector del enriquecimiento ambiental materno sobre la descendencia, reduciendo la muerte perinatal y algunos de los efectos nocivos del ambiente inflamatorio intrauterino, inducido por la administración de LPS. Nuestros resultados también sugieren que este efecto está mediado, en parte, por un entorno antiinflamatorio inducido por AE en el líquido amniótico, caracterizado por un aumento de la citoquina antiinflamatoria IL-10. Proponemos que el enriquecimiento ambiental podría ser una terapia no invasiva y preventiva para las complicaciones del embarazo que eventualmente puede trasladarse a las mujeres gestantes, disminuyendo el riesgo de sufrir un parto prematuro y en consecuencia las secuelas que están presentes en los niños y niñas que nacen demasiado pronto.

Descripción: La 5-Aminolevúlico dehidrasa (ALA-D), segunda enzima de la biosíntesis del hemo,es una metaloenzima que cataliza la condensación de dos moléculas de ácido 5-aminolevúlico (ALA) para formar el único monopirrol natural, el Porfobilinógeno (PBG). El ALA-D en general no es la enzima limitante de la síntesis de hemo. En la mayoríade los organismos estudiados su actividad es muy superior a la necesaria para la formaciónde la cantidad requerida de hemo, con la excepción de Neurospora crassa y levadura,organismos en los cuales se le ha asignado un rol regulatorio. Es una enzima altamenteconservada, aún entre organismos filogenéticamente muy distantes. Sin embargo, existendiferencias en cuanto al requerimiento por metales que cumplen un papel fundamental en lacatálisis y estado de oligomerización de la proteína. La enzima de mamíferos y aves,levadura y algunas bacterias requieren Zn++. Por el contrario, la enzima de plantas y algunasbacterias requiere Mg++ en lugar de Zn++; mientras que en Rp. spheroides el requerimientopor el metal puede sustituirse por K+. Se ha propuesto que en E. coli, P. sativum y B.japonicum están presentes ambos cationes, en diferentes proporciones. Los hongos dimórficos son un grupo de organismos capaces de crecer comolevadura o micelio en respuesta a las condiciones de crecimiento; según sean estasmodificaciones pueden inducir, además, la transición morfológica de levadura a micelio oviceversa. Esta propiedad, los hace interesantes para investigar los mecanismosbioquímicos y moleculares que operan durante la diferenciación celular. En el hongodimórfico Mucor rouxii existen evidencias de que el ALA -D también cumpliría un papelregulatorio en la biosíntesis del hemo y que esta enzima, a través de la mitocondriogénesisparticiparía en la transición morfogénica de levadura a micelio. En primer lugar se determinaron las condiciones óptimas para la extracción de laproteína y medición de la actividad enzimática de ambas formas, se encontró que ésta seduplica al pasar del estado fermentativo al del micelio aeróbico. Empleando diferentes técnicas para la purificación de proteínas, como diversascolumnas de geles de afinidad, hidrofóbicos, iónicos y sulfosustituídos, se purificó la enzimade ambas formas obteniéndose preparaciones enriquecidas alrededor de 700 y 500 vecespara micelio y levadura respectivamente. En ambos casos, el peso molecular fue de 280.000 Da, coincidiendo con el determinado para el ALA-D proveniente de otras fuentes. Tanto las propiedades de estabilidad térmica como cinéticas, también resultaronsimilares para ambas formas morfogénicas del hongo, comportándose en ambos casoscomo una enzima con cinética michaeliana y valores de Km comparables. Del estudio del efecto de cationes divalentes sobre la actividad enzimática seencontró que en la enzima de Mucor rouxii, el metal involucrado es el Zn++. Se postula laexistencia de diferentes sitios de interacción del Zn++, un sitio A, en el cual el metal seencuentra fuertemente unido, un sitio B, en el que el catión se puede eliminar por diálisis yreemplazarlo parcialmente por otros cationes y sitios C, donde el Zn++ actuaría cuando laenzima se encuentre en un medio no reductor, en cuyo caso, los grupos sulfhidrilosoxidados provocarían la pérdida de la actividad catalítica, en tal situación, este catión seríacapaz de restablecer las condiciones reductoras. Se estudió además la conocida inhibiciónde la actividad del ALA-D por el Pb++. Se demostró que este metal se puede unir a todos lossitios en los que se une el Zn++, produciendo una significativa inhibición. Se sabe que los átomos de Zn++ se unen a la proteína a través de una secuenciaaltamente conservada, rica en cisteínas e histidinas. Empleándose diversos agentesbloqueantes de grupos SH se comprobó la participación de residuos cisteína que sonesenciales para la actividad enzimática y/o unión del metal; su titulación indicó la existenciade 5 grupos SH por subunidad, de los cuales 1 no se encuentra expuesto. La inhibición por DEP reveló la presencia de 2 grupos histidina por subunidad catalítica, uno de ellos esesencial para la catálisis. Cuando se modificaron algunos parámetros de las condiciones de crecimiento, seencontró que en ambas formas del Mucor rouxii el camino metabólico del hemo es funcionaly se puede inducir por el agregado de concentraciones de ALA 10Exp-5–10Exp-3 M en el medio decultivo. La captación de ALA, acumulación de precursores y porfirinas y la actividad de ALADfue significativamente mayor para micelio que para levadura. El crecimiento encondiciones aeróbicas para el micelio requiere de un mayor contenido de hemoproteínas,fundamentalmente citocromos. Esta demanda se satisface por medio del funcionamientomás activo del camino biosintético de las porfirinas en micelio que en levadura. Así, los niveles de actividad del ALA-D en levadura fueron inferiores a los del micelio. Se demostró, además, su capacidad para regular la concentración de ALA acumuladointracelularmente. Durante la transformación dimórfica inducida mediante aireación del cultivo delevadura se observó la existencia de un camino biosintético del hemo eficientementeregulado. Por lo tanto si bien la inducción de la morfogénesis desde levadura a micelioestimuló la biosíntesis de porfirinas, lo que se puso en evidencia por el aumento de actividaddel ALA-D durante la misma, no se encontró acumulación significativa ni de precursores nide porfirinas. Los resultados obtenidos permiten asignar un rol regulatorio para el ALA-D enlevadura del hongo dimórfico Mucor rouxii.

Descripción: Para el estudio de los amonoideos del Miembro Pilmatué de la Formación Agrio del Cretácico temprano de la cuenca Neuquina se examinaron en el campo cincuenta localidades, se levantaron ocho secciones estratigráficas de detalle, con recolección de megafósiles capa a capa. Se describieron e ilustraron 32 especies, pertenecientes a cinco familias del suborden Ammonitina y cuando fue posible se ilustró el material tipo y otros ejemplares representativos, para mostrar los rangos de variabilidad de las especies. Este estudio sistemático ha permitido mostrar la total ausencia de taxones de los órdenes Lytoceratina y Phylloceratina que han sido siempre interpretados como de hábitos pelágicos y que probablemente no pudieron ingresar al relativamente somero engolfamiento Neuquino y ha confirmado la baja diversidad de la fauna, ya que raramente se encuentra más de un género en un determinado horizonte estratigráfico. Se han reconocido cinco zonas bioestratigráficas, cuatro de ellas subdivididas en subzonas, abarcando desde el Valanginiano temprano tardío al Hauteriviano temprano tardío. Estas biozonas han sido correlacionadas con la zonación estándar de la provincia Mediterránea occidental del reino del Tethys. Se discute la duración absoluta de estas biozonas y se muestra que el único dato de edad absoluta que se conoce en la base del suprayacente Miembro Agua de la Mula, es coherente con las edades actuales propuestas en la escala geológica mundial. Se ha comprobado un intercambio importante con el reino del Tethys, aunque éste claramente no fue uniforme a lo largo del lapso analizado y resulta evidente que las migraciones fueron episódicas y se produjeron durante intervalos de ascensos globales del nivel del mar.

Descripción: El objeto principal de este trabajo fue estudiar la acción del amoniaco líquido en un medio aprótico sobre derivados acilados de monosacáridos cíclicos, en particular 1,2,3,4,6-penta-O-benzoil-α-D-glucopiranosa, con el fin de evitar reacciones competitivas frente a la de amonólisis. En estas condiciones se obtuvieron una serie de productos con distintas características estructurales, los cuales se describen en el Capítulo III y se detallan a continuación: 6-O-benzoil-1,1-bis(benzamido)-1—desoxi-D-glucitol (29.0%). N-benzoil-6-O-benzoil-α-D-glucofuranosilamina (11.9%). N-benzoil-3,6-di-O-benzoil-α-D-glucofuranosilamina (9.6%). N-benzoil-5,6-di-O-benzoil-α-D-glucofuranosilamina (2.1%). N-benzoil-3,6-di-O-benzoil-β-D-glucofuranosilamina (0.2%). 2,6-di-0-benzoi1-α-D-glucopiranosa (0.7%). 2,4,6-tri-O-benzoil-α-D-glucopiranosa (1.u%). 3,4,6-tri-O-benzoil-α-D-glucopiranosa (5.u%). 2,3,4,6-tetra-O-benzoilr-α-D-glucopiranosa (2.H%).benzamida (1.047 moles / mol de sustrato).benzoato de amonio (0.866 moles / mol de sustrato).ácido benzoico (0.106 moles / mol de sustrato). Los monosacáridos aislados corresponden al 62.7% del sustrato empleado. Todos están benzoilados en C-6, confirmando la conocida resistencia a la amonólisis del grupo benzoilo que esterifica el carbinol primario. El bajo rendimiento de N-benzoil-3,6-di-O-benzoil-β-D-glucofuranosilamina (0.2%) frente a la alta produccción de derivados parcialmente O-benzoilados de N-benzoil-α-D-glucofuranosilamina (23.6%) corrobora que en la amonólisis de penta-O-acil-D-glucopiranosas no está favorecida la formación de N-acil-β-D-glucofuranosilaminas. Los cuatro derivados de N-benzoil-D-glucofuranosilamina obtenidos no habían sido descriptos hasta el presente. Por amonólisis metanólica los tres primeros produjeron N-benzoil-β-D-glucofuranosilamina y el cuarto originó N-benzoil-β—D—glucofuranosilamina. La estructura furanósica de los dos anómeros de la N-benzoil-D-glucofuranosilamina se demostró por oxidación con periodato; la configuración del C-1 se estableció por métodos quimicos y/o espectroscópicos. Se ensayó la aplicación de las reglas de isorrotación de Hudson al par anomérico de N-benzoil-D-glucofuranosilaminas. Se analizaron las limitaciones de dichas reglas y se discutió la influencia de factores polares y conformacionales sobre la correlación entre valores calculados y experimentales. Las posiciones de los grupos benzoiloxi en los derivados parcialmente 0-benzoilados de las N-benzoil-D-glucofuranosilaminas se determinaron por espectroscopía de R.M.N.- H. Se comprobó que, en el medio de reacción, la N-benzoil-3,6-di-O-benzoil-α-D-glucofuranosilamina y la N-benzoil-5,6-di-O-benzoil-α—D-glucofuranosilaminase interconvierten entre sí y se transforman parcialmente en N-benzoil-6-O-benzoil-α-D—glucofuranosilamina. Se estudió el equilibrio entre ambas N-benzoil-di-O-benzoil-α-Dglucofuranosilaminas. Dos de los derivados de α-D-glucopiranosa obtenidos, la 2,4,6-tri-O-benzoil-α-D-glucopiranosa y la 3,4,6-tri-O-benzoil-α-D-glucopiranosa, no estaban descriptos en la literatura. Sus estructuras se determinaron por métodos químicos, transformándolos en sustancias conocidas, y se confirmaron por espectro,etría de R.M.N.-1H. Ambas tri-O-benzoil-α-D-glucopiranosas se interconvierten entre si en el mediode reacción y se transforman parcialmente en 2,6-di-O-benzoil-α-D-glucopiranosa. En esta tesis se describen los siguientes compuestos nuevos: N-benzoil-α-D-glucofuranosilamina y su peracetato. N-benzoil-6-O-benzoil-α-D-glucofuranosilamina y su peracetato. N-benzoil-3,6-di-O-benzoil-α-D-glucofuranosilamina y su peracetato. N-benzoil-5,6-di-O-benzoil-α-D-glucofuranosilamina y su peracetato. N-benzoil-β-D-glucofuranosilamina. N-benzoil-3,6-di-O-benzoi1-β-D-glucofuranosilamina y su peracetato. 2,4,6-tri-O-benzoil-α-D-glucopiranosa y su peracetato. 3,4,6-tri—0—benzoil-α-D-glucopiranosa y su peracetato. 1,3,4-tri—0—acetil-2,6-di-O-benzoil-α-D-glucopiranosa. Se determinaron y analizaron los espectros de R.M.N.-1H de las afitaxfias aisladas y de los derivados acetilados preparados, los cuales permitieron establecer y/o confirmar las posiciones de los grupos benzoiloxi y las configuraciones anoméricas. Sobre la base de la información proporcionada por la espectroscopia de R.M.N.-1H, se estudiaron las conformaciones en solución de los compuestos obtenidos. Por amonólisis de 2,3,4,6-tetra-O-benzoil-1-O-benzoil(carbonilo14C)-α-D-glucopiranosa en las condiciones empleadas en esta tesis se demostró que el benzoiloxi-C-l forma principalmente benzamida (91.5%) y muy poco benzoato de amonio (2.5%). El benzoato de amonioy el ácido benzoico aislados (en total 0.972 moles) se formarian a expensas del benzoiloxi-C-2, como se argumenta en el Capítulo VI. Sobre la base de los resultados experimentales obtenidos en esta tesis, y teniendo en cuenta los progresos logrados en los últimos tiempos en el conocimiento de los mecanismos de las transformaciones que dan origen a los productos de la reacción de Wohl, se intentauna interpretación distinta de la propuesta inicialmente por Isbell y Frush. La interpretación que se adelanta permite sistematizar no sólo los resultados obtenidos en este trabajo sino una gran parte de los descriptos en 1a literatura relacionados con esta reacción.

Descripción: I) Se confirmó, haciendo uso de benzamida (carbonilo C14) como indicador, que la reacción de formación de la D-glucosa dibenzamida mediante la amonólisis de la pentabenzoil-D-glucosa y de la 2, 3, 4, 6-tetrabenzoil-D-g1ucosa, es intramolécular. II) Se han preparado las siguientes pentabenzoil-D-glucosas utilizando cloruro de benzoilo (carbonilo C14): a) pentabenzoil-(carbonilo C14)-D-g1ucosa b) 1-benzoil-(carbonilo C14)-2,3,4,6-tetrabenzoil-D-glucosa c) 1,2,3-tribenzoil-(carbonilo C14)-4,6-dibenzoil-D-g1ucosa d) l,3,4-tribenzoil-(carbonilo C14)-2,6-dibenzoil-D-glucosa e) 4-benzoil- (carbonilo C14)-1,2,3,6-tetrabenzoil-D-glucosa f) 4,6-dibenzoil-(carbonilo C14)-l,2,3-tribenzoil-D-glucosa g) 6-benzoil-(carbonilo C14)-1,2,3,4-tetrabenzoil-D-g1ucosa III) Se han preparado las siguientes tetrabenzoil-D-glucosas utilizando cloruro de benzoilo (carbonilo C14): a) 2,3-dibenzoil-(carbonilo C14)-4,6-dibenzoil-D-glucosa b) 3,4-dibenzoil-(carbonilo C14)-2,6-dibenzoil-D-glucosa c) 4,6-dibenzoil-(carbonilo C14)-2,3-dibenzoil-D-g1ucoea d) 4-benzoil-(carbonilo C14)-2,3,6-tribenzoil-D-glucosa e) 6-benzoil-(carbonilo C14)-2,3,4-tribenzoil-D-glucosa IV) Las amonólisis, en alcohol metílico amoniacal, de las pentabenzoil-D-glucosas radiactivas, antes mencionadas,han permitido demostrar: a) que el grupo benzoilo unido al carbono 1 no participa en la formación de la D-glucosa dibenzamida. b) que los grupos benzoilos ubicados en las posiciones 2,3,4 y 6 realizan, respectivamente, las siguientes contribuciones aparentes a la formación de los restos benzamida que están unidos al carbono 1 de la molécula de la D-glucosa:benzoilo posición 2: 5,7% ± 1,5%benzoilo posición 3: 37,8% ± 1,3%benzoilo posición 4: 41,1% ± 0,6%benzoilo posición 6: 15,4% ± 0,3% Se define como contribución aparente, aquella obtenida por la medida directa de la cantidad de grupo benzoilo, unido a determinada posición como éster, que pasa a formar parte de restos benzamida de la D-glucosa dibenzamida, sin tomar en cuenta posibles transposiciones que puedan ocurrir entre grupos benzoilos durante la amonólisis. V)Las amonólisis, en alcohol metílico amoniacal, de las 2,3,4,6—tetrabenzoil-D-glucosa radiactivas, antes mencionadas, han permitido establecer que las contribuciones aparentes, a la formación de la D-glucosa dibenzamida, de los grupos benzoilos ubicados en las posiciones 2,3,4 y 6 son respectivamente:benzoilo posición 2: 5,8% ± 1,7%benzoilo posición 3: 40,1% ± 1,5%benzoilo posición 4: 40,6% ± 0,7%benzoilo posición 6: 13,7% ± 0,2%. VI) Se han efectuado una serie de consideraciones para la interpretación de los resultados anteriores. Parecería que los factores determinantes de estas contribuciones son variables; en el caso del grupo benzoilo unido al hidroxilo del carbono 2 su baja contribución parece depender de su facilidad para amonolizarse, mientras que en el caso del grupo benzoilo unido al carbono 6 sería lo contrario, o sea, que su poca contribución se explica por su resistencia a la amonólisis; esta afirmación está atestiguada en VIII. Los grupos benzoilos de las posiciones 3 y 4 serían los de contribución más elevada por ser su reactividad intermedia. En estas consideraciones no se han tenido en cuenta factores estéricos, en especial conformacionales, sino que se basan únicamente en la desigual reactividad de los hidróxilos de un monosacárido. VII) En la amonólisis, tanto de la pentabenzoil-D-glucosa como de la tetrabenzoil-D-glucosa, el equivalente a dos de los grupos benzoilos, provistos en las proporciones antes indicadas, pasan a formar la D-glucosa dibenzamida; no todo el resto de los benzoilos se amonolizan a benzamida. Es evidente, como resultado de una experiencia bien controlada, que en el medio metanólico la acción básica del amoniaco cataliza la reacción de transesterificación con posible producción de benzoato de metilo. VIII) La amonólisis de la pentabenzoil-D-glucosa no radiactiva en alcohol isopropílico amoniacal produce, con redimiento del 26%,la 6-benzoil-D-glucosa dibenzamida cuya estructura se demostró mediante oxidación con periodato de sodio. La obtención de este compuesto prueba la mayor resistencia a la amonólisis del grupo benzoilo del carbono primario. Por similitud de la estructura, este resultado puede asociarse con la obtención de la 5-benzoil-D-lixosa dibenzamida y de la 5-benzoil-D-arabinosa dibenzamida por amonólisis de nitrilos benzoilados de ácidos aldónicos.

Descripción: Fil: Kievsky, Alejandro. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Se han aplicado en este trabajo, cuatro modelos moleculares semi-empíricos: CNDO/2, INDO, EHT, IEHT a dos haluros de oxalilo: el cloruro y el fluoruro. El propósito fue hacer un estudio comparativo de modelos moleculares fundados en aproximaciones y parametrizaciones distintas, para establecer en cada caso el origen físico y matemático de las predicciones que se obtienen de los modelos, ya sean éstas correctas o no. Asimismo se buscó aportar argumentos derivados de los cálculos teóricos, para estudiar la isomería rotacional de las moléculas elegidas, a la vez que calcular cargas, momentos dipolares y la frecuencia de la oscilación de torsión, para ambas moléculas. Se concluye que el modelo EHT es el que mejor reproduce las propiedads conformacionales relacionadas con la rotación interna, para ambas moléculas estudiadas, y se dan las razones por las que los otros modelos no pueden reproducir dichas propiedades conformacionales. En cuanto a la isomería rotacional de ambas moléculas, se concluye que el rotámero más estable del cloruro de oxalilo es alabeado, coexistiendo con él, a temperatura ambiente el rotámero trans. En el fluoruro de oxalilo en cambio, se concluye que la rotación interna es libre, o impedida por una muy baja barrera de potencial.

Descripción: El objetivo de esta tesis es dilucidar los determinantes genéticos de los contenidos de vitamina E (VTE) en tomate y su relación con el ambiente. Por un lado, se analizaron los contenidos de VTE en frutos de 150 entradas provenientes de distintos bancos de germoplasma y de 126 líneas recombinantes derivadas de un cruzamiento multiparental cultivados en ambientes contrastantes. Mediante estudios de asociación para el genoma completo (GWAS por sus siglas en inglés) y mapeo de QTLs, se identificaron numerosos loci potencialmente involucrados en la determinación de este carácter. Por otro lado, resultados previos del laboratorio indican que la expresión de los genes duplicados VTE3(1) y VTE3(2), cuyos productos son responsables de los últimos pasos de la biosíntesis de VTE, son capaces de modular la acumulación de VTE en hojas y frutos de tomate. En particular, la expresión de VTE3(1) es regulada epigenéticamente debido a la metilación variable del ADN de la secuencia promotora. Con el objetivo de caracterizar las bases moleculares de esta regulación, como así también la co-regulación transcripcional de ambos parálogos, se generó y caracterizó molecularmente una población de 80 líneas recombinantes derivada del cruzamiento de líneas de introgresión portando los alelos silvestres (S. pennellii) y domesticados (S. lycopersicum) de dichos genes. Adicionalmente, se caracterizó la variación natural de expresión y metilación del ADN de VTE3(1) y VTE3(2) en una población de variedades andinas de tomate. Estos experimentos revelaron que la modulación transcripcional de VTE3(1) y VTE3(2), mediada en parte por la variación en los niveles de metilación de sus promotores, es en efecto, un blanco importante para el mejoramiento de este carácter nutricional. En conjunto, esta tesis pone en evidencia la importancia de explorar tanto la variación intraespecífica como interespecífica para caracterizar las bases genéticas de fenotipos metabólicos y la necesidad de incluir la variación epigenética como un factor determinante de caracteres de interés agronómico.

Descripción: Las llanuras de inundación tropicales son regiones temporalmente o permanentemente inundadas debido al desbordamiento de los ríos en zonas de llanura. Las llanuras de inundación ubicadas sobre importantes ríos pueden tener un régimen anual de inundación predecible lo que explica que sean importantes lugares ecológicos con una gran biodiversidad proporcionando importantes servicios ecológicos. El Pantanal, una de las más extensas llanuras de inundación tropical del mundo, es la región de estudio de esta tesis. El objetivo es de desarrollar un esquema de llanuras de inundación para el modelo de superficie ORCHIDEE que sea compatible con modelos atmosféricos de alta resolución para las razones siguientes: (1) mejorar la representación del impacto de las llanuras de inundación sobre los ciclos del agua y de la energía en ORCHIDEE, (2) estudiar la dinámica del Pantanal y (3) evaluar los impactos de las llanuras de inundación sobre las interacciones suelo-atmósfera en esta región. En un primer tiempo, la versión original a baja resolución de las llanuras de inundación en ORCHIDEE fue utilizada para mostrar la importancia de incluir las llanuras de inundación en los modelos de superficie para mejorar la representación del ciclo del agua y permitir una representación más realista de los flujos suelo-atmósfera. El esquema de llanuras de inundación desarrollado está basado en la construcción del grafo rutaje de los ríos en una retícula atmosférica usando modelos de elevación digital a alta resolución vía el concepto de Unidades de Transferencia Hidrológica (HTU). Una herramienta de pre-procesamiento flexible y paralelizada fue desarrollada para facilitar y mejorar la construcción de los grafos de rutaje de los ríos en distintas retículas atmosféricas para facilitar la integración de datos hidrológicos suplementarios para la representación de las llanuras de inundación. Este esquema tiene que enfrentarse a nuevos problemas relacionados con la resolución como la posibilidad para un HTU de inundar a sus vecinos. Este esquema fue validado en comparación con observaciones y con su versión previa en ORCHIDEE. La comparación de simulaciones con y sin el esquela de inundación activado, forzadas por forzantes atmosférica a distintas resoluciones nos permitió evaluar (1) el impacto de las llanuras de inundación en las variables de superficie y (2) como la resolución afecta la simulación de la dinámica de las llanuras de inundación. El esquema de llanuras de inundación fue utilizado en una simulación del modelo RegIPSL (modelo acoplado ORCHIDEE-WRF) para estudiar cómo modifica las interacciones suelo- atmósfera sobre la región del Pantanal y cuales son los impactos locales y remotos sobre el clima de Sur America.

Descripción: La alta calidad de los frutos es una de las metas principales de lainvestigación actual en tecnologías postcosecha y de preservación. El diseñodel procesamiento mínimo de arándanos, tomates cereza y uvas requiere,entre otros, el conocimiento de las alteraciones estructurales yultraestructurales de células y tejidos debido a su influencia en las propiedadesfísico-químicas del fruto. El presente estudio examinó los principales cambios (micro-, ultra- y nano-) estructurales de la pared tangencial externa de laepidermis de frutos de arándano (Vaccinium corymbosum L.), tomate cereza (Solanum lycopersicum L. var. cerasiforme) y uva (Vitis labrusca L.) producidospor el tratamiento con peróxido de hidrógeno, la radiación UV-C, la aplicaciónde ultrasonido, la congelación y descongelación y el escaldado en vapor y suefecto en las propiedades mecánicas y ópticas. Se analizaron y discutieron las observaciones con microscopio óptico (MO), microscopio electrónico de barrido ambiental (MEBA), microscopioelectrónico de transmisión (MET) y microscopio de fuerza atómica (MFA). Seevaluaron las características reológicas mediante ensayos de punción con unamáquina de ensayos universales Instron y el color mediante los parámetros L*,a* y b* y las funciones C* y h* con un colorímetro. Cada tratamiento produjo en el epicarpo efectos estructurales específicos,que además dependieron del tipo de fruto. Los cambios observados afectaronlas propiedades mecánicas de punción y el color de los frutos en diferentegrado.

Descripción: La corteza comprende todos los tejidos existentes por fuera del cámbium vascular. Está compuesta por floema y peridermis y su renovación depende de la actividad del cámbium y el felógeno. Constituye, a la vez, una vía de transporte eficaz, un sitio de almacenamiento y una capa aislante y protectora que, en conjunto, permiten a los vegetales leñosos prosperar en variados ambientes. Tres especies de Cupressaceae son nativas de los bosques australes patagónicos de la Argentina. Austrocedrus chilensis es una de las especies leñosas argentinas más estudiadas en los últimos años. Fitzroya cupressoides y Pilgerodendron uviferum, ahora protegidas en distintos puntos, son reliquias vivientes que fueron llevadas hasta el borde de la extinción por su valiosa madera. La información referente a la corteza de estas especies es muy escasa. Otras 25 especies de la familia están introducidas y se cultivan en zonas del pais con variadas condiciones climáticas y edáficas, tanto en el ámbito rural como en el urbano. En esta tesis se abordó el estudio de la corteza de 13 géneros con 23 especies y 2 variedades de Cupressaceae, desde varios puntos de vista: a) macroscópico: exomorfología, textura y espesor, b) microscópico: anatomía estructural y ultraestructural, c) polución ambiental: utilización de la corteza como potencial biomonitor de contaminantes. La exomorfología es variada y denota una marcada influencia del medio ambiente sobre su diseño, espesor y textura. A través de los datos anatómicos estructurales del floema vivo es posible obtener una serie de caracteres diagnósticos propios para cada género y la mayoría de las especies. La citología permite incluir varios taxones no estudiados previamente en el grupo que posee en las células cribosas los plastidios tipo S. Finalmente, las especies de la familia ampliamente cultivadas en sitios urbanos, suburbanos e industriales ofrecen la posibilidad de utilizar su corteza para el monitoreo de la contaminación ambiental. Datos e interpretaciones inéditos completan la información concerniente a la anatomía de Cupressaceae y las coniferas en general. Constituyen éstos, además, un medio de referencia para esclarecer la sistemática de este grupo y para conocer aspectos necesarios en su uso industrial. Las posibilidades de utilización de las cortezas para productos como tableros aislantes o principios activos de uso farmacéutico, ubican a este recurso no maderero entre los principales componentes del aprovechamiento sustentable de los bosques y plantaciones.

Descripción: El volútido Odontocymbiola magellanica (Gmelin, 1791) se distribuye cerca de las costas del océano Atlántico desde el paralelo 35º S hasta el Estrecho de Magallanes (y en las Islas Malvinas) y en el océano Pacifico a la altura de la isla de Chiloé en Chile, a profundidades entre 10 y 200m. En los golfos norpatagónicos habita aguas someras en fondos mixtos de arena y canto rodado. Se estudiaron aspectos anatómicos de la especie, particularmente el sistema digestivo anterior, la ultraestructura de la glándula pedal, la morfología interna y externa de la concha, la morfometría y la ultraestructura y permeabilidad de las paredes de las ovicápsulas. La proporción de sexos en la población estudiada difirió de la relación 1:1 y la talla media (112 mm en machos y 114 mm en hembras) corresponde a individuos de 10 años de edad. La especie se desplaza a una velocidad promedio de 13,9 m/hora, la densidad observada fue baja y solo se encontraron agregaciones de individuos durante las épocas reproductivas. La edad y crecimiento fue determinada a través de la utilización de isótopos de oxigeno, con lo que se determinó la periodicidad de marcas de crecimiento semianuales previamente detectadas por análisis de rayos X y microscopía de barrido. El crecimiento se ajusta al modelo de Gompertz. La producción somática individual alcanzó un máximo de 29,3g/año y la tasa máxima de incremento de masa corporal fue similar a la de los volútidos comerciales Zidona dufresnei y Adelomelon brasilana de las costas de Mar del Plata. Se encontró una variabilidad fenotípica que fue corroborada mediante estudios genéticos. Fue estudiado el mecanismo de alimentación y los análisis de la dieta de O. magellanica indican que la especie es carnívora y se alimenta de otros moluscos, en particular gasterópodos y bivalvos. Las presas son capturadas con el pie y narcotizadas con el líquido salival de composición proteica secretado por las glándulas salivales y salivales accesorias. La edad a la cual la población alcanza la madurez sexual para machos y hembras fue de 8 y 9 años respectivamente. Esto fue estudiado mediante análisis histológico de las gónadas, el peso del cuerpo y la longitud del pene en los machos. La cópula fue observada durante casi todo el año y los espermatozoides pueden ser almacenados vivos durante cuatro meses en la bursa copulatrix de las hembras. Las ovicapsulas son moldeadas y fijadas al sustrato por la glándula pedal, la que a su vez secreta una capa externa de calcita magnesiana sobre las mismas. Los eventos de oviposición en el campo fueron observados sistemáticamente durante 5 años desde julio a diciembre y esporádicamente en los meses de enero a marzo. La histología gonádica confirmo los eventos de ovipisición. Se encontró que los machos liberan gametas durante todo el año y existe reabsorción de las mismas durante marzo, abril y octubre. Las gónadas femeninas presentan mayor actividad desde abril a diciembre y la etapa de mayor reabsorción gamética se da entre enero y marzo. Los oocitos libres en el lumen folicular tenían un diámetro total mayor a 150 μm. El estudio de ultraestructura gonadal indica que los oocitos están asociados a células acompañantes (nutricias y de sostén). Los testículos presentaron euespermatozoides y dos tipos de paraespermatozoides. El desarrollo embrionario, desde el huevo recién fecundado con un diámetro medio de 210 μm hasta los juveniles con un largo de concha promedio de 9 mm, es de aproximadamente 3 meses. Los embriones se alimentan del líquido intracapsular proteico que a su vez contiene el calcio necesario para la formación de la protoconcha. En las zonas cercanas a puertos con alto transito de embarcaciones se encontró la existencia de imposex en hembras, pero la ausencia de obstrucción de la vagina indica que la contaminación no pone en peligro a las poblaciones estudiadas.

Descripción: Este trabajo tiene como objetivo estudiar las características anatómicasadaptativas de la comunidad costera del río Salado (Noroeste de la Provincia de Buenos Aires). Geográficamente, el área en estudio pertenece a la Pampa Deprimida, fuera de los límites de la Depresión del Salado. A pesar de ello, lavegetación costera del río Salado tiene asociaciones vegetales similares a las dela Depresión, pero con dominancia de Diplachne uninervia, Cynodon dactylon, Paspalum vaginatum y especies con menor grado de corbertura, como Salicorniaambigua, Atriplex hastata, Sesuvium portulacastrum, Heliotropium curassavicum, Chenopodium macrospermum ssp. halophilum, Flaveria bidentis, Astersquamatus, Eclipta megapotamica, Apium leptophyllum, Sporobolus indicus, Chaetotropis imberbis, Bolboschoenus paludosus, Schenoplectus californicus, Distichlisspicata y Echinochloa crusgalli . Las 21 especies están adaptadas a unmedio húmedo y salino, debido a que hay períodos extensos de inundación y elsuelo tiene altas concentraciones de sales y pH alcalino. Por lo tanto, las especiesmuestran ventajas adaptativas representadas por características anatómicas talescomo, aerénquima, tejido acuífero, cutícula gruesa y con ceras, glándulas de sal,estructura Kranz, cristales de oxalato de magnesio y de calcio, cistolitos,mucilagos y taninos. Esto se desprende de la descripción anatómica, del análisisde las estructuras y los contenidos celulares de cada una de las especies, enalguno de los casos estudiadas por primera vez. Es importante destacar que estetrabajo contribuye a la ampliación de los estudios de la anatomía ecológica de lasespecies argentinas adaptadas a las condiciones de alta salinidad y humedad.

Descripción: Fil: Gramática, María Elena. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: El estudio de los riñones en los Elasmobranquios, ha sidomotivo de investigación para los naturalistas, interesados porla diversidad de formas con que se presentan en las especies;por la diferente estructura y función del riñón anterior segúnse trate de un individuo macho o hembra, joven o adulto;por su desarrollo que en los primeros estados recuerda a los Nefridios de los Annélidos; El presente trabajo que trata sobre la anatomía e histologíadel riñón de los Elasmobranquios argentinos, se ha realizadotomando en cuenta: situación, forma y dimensiones del riñónanterior (Glándula de Leydig en los machos) y posterior;conductos de Wolff y Müller; histología del riñón anterior yposterior. Las variaciones según sexos y especies. Lo considero parte de uno más amplio que deberá estudiar tambiénel aparato genital por las relaciones que guarda con elaparato urinario en su desarrollo, especialmente en lo que conciernea la Glándula de Leydig anexa al aparato genital, que esel riñón anterior en las hembras y que es riñón funcional enlos estados jóvenes de los machos. Por sus conductos de Wolffy Müller que en los sexos opuestos desempeñan funciones distintas:el conducto de Wolff en las hembras es un colector urinarioque en su última porción por ensanchamiento forma lavesícula urinaria de notable desarrollo en algunas especies. También será completado con la embriología y estudio del sistemavascular.

Descripción: El presente trabajo trata sobre la osteogénesis y el esqueleto adulto de Calyptocephalella gayi,único representante viviente de este género de neobatracios, y su aporte a la interpretación delcopioso registro fósil patagónico de especies supuestamente relacionadas con él. Históricamente, C. gayi, restringida a los bosques húmedos templados del sur y centro de Chile, ha sido considerada cercanamente emparentada a otros habitantes de estos bosques. Sinembargo, recientes análisis filogenéticos basados en secuencias de ADN de genesmitocondriales y/o nucleares han provisto nuevas hipótesis evolutivas, entre ellas la relaciónde grupos hermanos entre el pequeño clado sudamericano Calyptocephalellidae (Calyptocephalella + Telmatobufo) y el clado Myobatrachoidea de la región Australopapuana,los que a su vez forman el clado Australobatrachia. Los renacuajos de C.gayiestudiados fueron colectados en cuerpos de aguas naturales en el verano de 2007 y preparadossiguiendo las técnicas usuales de transparentación y tinción doble diferencial para visualizarcartílago y hueso. Los estadios de desarrollo fueron determinados de acuerdo al esquema de Gosner, estando representados en la serie disponible los estadios 34 a 43, así como variosejemplares juveniles. El condrocraneo de C. gayi presenta el patrón descripto en otras larvasexotróficas y micrófagas y, en general, el desarrollo y la metamorfosis de esta especiepresentan características similares a las conocidas para otros taxones de Neobatrachia. Noobstante, los más relevantes aspectos revelados por este estudio pueden sintetizarse así: 1) laslarvas presentan pliegues cutáneos en la porción posteroventral del cuerpo, los que protegenlas patas posteriores durante su desarrollo temprano; 2) la osificación del frontoparietal ocurrea partir de dos centros de osificación, uno sobre la taenia tecti marginalis y otro sobre la pareddorso medial de la cápsula ótica, lateral a la arteria occipital; 3) el cuerpo vertebral VIII seforma a partir de 3 centros de osificación, dos dorsolaterales y uno ventral a la notocorda; 4) elelemento carpiano distal 4-5 se forma a partir de tres núcleos cartilaginosos, d4+d5+unelemento de homología incierta lateral a d5; 5) el cleitro inicia su osificación muytempranamente; 6) el esqueleto adulto presenta un foramen en el otoccipital para el paso de laarteria occipital, la que continúa su recorrido por dentro de un canal óseo dentro delfrontoparietal, una cápsula ótica con superficie dorsal plana, sin evidencias de eminenciaepiótica, un foramen en el proceso posterolateral del aparato hioideo para el paso de un vasosanguíneo, procesos transversos de las vértebras II, III y IV robustos y ensanchadosdistalmente, especialmente aquellos de la vértebra II, una escápula con cresta en su margenanterior, un esqueleto esternal (i.e., omoesternón y esternón) cartilaginoso muy extenso y unilión con cresta ilíaca bien desarrollada; 7) material proveniente del Banco Negro Inferior, Formación Salamanca, recientemente coleccionado puede asignarse al género Callyptocephalella; 8) se reconoce aquí a la eocena Calyptocephalella pichileufensis comouna especie válida del género, 9) se distingue para la deseadense C. canqueli un patrón dedesarrollo diferente al de C. gayi, soportando la diferenciación taxonómica entre las dosentidades. El análisis del registro fósil de los callytocephalélidos en el contexto de losdrásticos cambios climático ambientales durante el Paleógeno sugiere que estos cambiospudieron haber afectado su ciclo de vida.

Descripción: Este trabajo pretende discutir la hipótesis tradicional de que la mayoría de las característicasesqueletales de la particular anatomía de los anuros son parte de un complejo sistema que seoriginó como una adaptación a la locomoción saltadora. Para ello, ha sido cuidadosamenteevaluada la anatomía funcional de la rana jurásica Notobatrachus degiustoi, considerada unode los miembros más basales mejor conocidos del linaje de los anuros. Dado que distintashipótesis acerca de la posición taxonómica de esta especie han sido propuestas, se harealizado un análisis de parsimonia basado en caracteres osteológicos. Tanto miembrosvivientes y fósiles de los linajes de anuros y salamandras como varios taxones fósilespaleozoicos que han sido propuestos como los más cercanamente emparentados con todos o algunos de los grupos de anfibios vivientes han sido incluidos en el análisis. Como resultado, se corroboró la posición basal de Notobatrachus degiustoi en el linajede los anuros, incluso basal al ancestro común de todas las formas vivientes, respresentando la rana postriásica más basal conocida. Por otra parte, el análisis funcional de la estructura esqueletaria postcraneana de Notobatrachus permitió inferirque no sería capaz de saltar ni desplazarse en el ambiente terrestre como lo hacen los anuros o las salamandras actuales, aunque podría desplegar un tipo de natación similar al observado en las ranas vivientes. El contraste de estos resultados (en suma a lasposibilidades funcionales inferidas para otros miembros del linaje ancestral de los anuros)con la hipótesis de las relaciones evolutivas del grupo, permite desacoplar la adquisiciónlas particularidades anatómicas de los anuros de su capacidad de saltar, descartando que setrate de adaptaciones para este tipo de locomoción. Aunque no puede descartarse que esas características constituyan adaptaciones a lanatación, la evidencia disponible suguiere que otros mecanismos evolutivos, alternativosa la adapatación, pudieron haber operado en la historia más temprana del linaje de los anuros.

Descripción: Fil: De la Serna, Carmen Juana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Descripción: Gracilisuchus stipanicicorum Romer, es un arcosaurio de pequeñas dimensiones provenientedel Triásico Medio de la Formación Chañares, Cuenca Ischigualasto – Villa Unión, La Rioja, República Argentina. Esta especie se halla representada por seis ejemplares depositadosen colecciones nacionales (PULR, PVL) y extranjeras (MCZ). La informaciónanatómica disponible de Gracilisuchus estuvo limitada durante casi una década a la someradescripción original (Romer, 1972a), y aunque fue posteriormente mencionado en otraspublicaciones, éstas fueron breves y carentes de detalle anatómico. Las relaciones de parentescode Gracilisuchus fueron muy debatidas, desde la interpretación original que lo vinculabacon Ornithosuchus Newton, hasta aquellas que lo relacionaban con diferentes clados de Archosauriformes incluyendo Crocodylomorpha. Se realizó una descripción anatómica detallada de los ejemplares disponibles de Gracilisuchuspara incluirlos en un análisis filogenético del clado Archosauriformes. Se amplió lalista de caracteres filogenéticamente informativos para el clado Arcosauriformes, se analizótanto la identidad taxonómica de la especie como su posición filogenética. Se reconoció a Gracilisuchus como un taxón monoespecífico con características únicas en el cráneo y postcráneo (fenestra supratemporal más ancha que larga, cara articular posterior cóncavoconvexasde las vértebras cervicales medias) que permitieron enmendar su diagnosis y seresolvió su posición filogenética como Suchia basal descartando su afinidad con Crocodylomorpha.

Descripción: Las Resonancias Multipolares Gigantes son vibraciones de la superficie nuclear generadas por la promoción de nucleones, a través de la superficie de Fermi, a capas desocupadas, que están descriptas como excitaciones coherentes de partícula-agujero. En este trabajo evaluamos el ancho de dispersión de las Resonancias Multipolares Gigantes usando la discontinuidad, a tiempos cortos, de la segunda derivada de la función de Green del bosón vibracional. Esto nos permitió aislar los procesos que contribuyen al ancho de dispersión en término de una expansión diagramática de Feynman del bosón vestido. Utilizamos para clasificar los procesos el tratamiento perturbativo del estado de un bosón que provee la Teoría Nuclear de Campos (NFT) y obtuvimos una simple expresión para el ancho de dispersión en el menor orden (no nulo) de teoría de perturbaciones. Extendimos el cálculo del ancho de dispersión de las Resonancias Multipolares Gigantes a temperatura finita, con el mismo método de la discontinuidad de la segunda derivada, pero usando la función de Green en el formalismo de Matsubara. Realizamos los cálculos numéricos del ancho de dispersión, a temperatura cero y temperatura finita, para el 208Pb y el 90Zr utilizando una fuerza separable isoescalar-isovectorial picada sobre la superficie nuclear del tipo ∂ V(r)/∂ r, siendo V(r) el potencial de Wood-Saxon.

Descripción: El uso de superconductores en aplicaciones tecnológicas depende del control dealgunos parámetros como la corriente crítica, la magnetización y la susceptibilidadmagnética. Todos estos parámetros están fuertemente ligados a las fuerzas de anclaje queel material ejerza sobre los vórtices superconductores. Adicionalmente, los vórtices enmateriales superconductores sometidos a potenciales de anclaje constituyen un sistemacomplejo análogo a otros de distintos orígenes como las ondas de densidad de carga,ondas de spin, coloides y capas atómicas adsorbidas en sustratos. Sin embargo, losvórtices conforman un marco ideal para el estudio de este tipo de sistemas debido a lasencillez para controlar las variables involucradas: las constantes elásticas se modificanvariando el campo magnético (distancia relativa entre vórtices) y las longitudescaracterísticas que gobiernan la interacción entre vórtices, y entre estos con cada centrode anclaje, se varían modificando la temperatura. Por estas razones, el efecto de loscentros de anclaje artificiales sobre el comportamiento de la red de vórtices en materialessuperconductores ha sido objeto de numerosas e intensas investigaciones en las últimasdécadas. En los últimos años se han obtenido muestras que proveen centros de anclajeordenados periódicamente en la escala submicrométrica. Estas muestras han sidosometidas a numerosos experimentos, y sus resultados contrastados con simulacionesnuméricas en base a diversos modelos. La confluencia de intereses científicos ytecnológicos ha mantenido muy activa esta área del conocimiento que aun cuenta connumerosos problemas por resolver. En este trabajo se estudió la dinámica de la red de vórtices en distintas películassuperconductoras provistas por colaboradores. Todas las películas superconductorasestudiadas son de Niobio (Nb) y cuentan con centros de anclaje intrínsecos. Estos centrosde anclaje se hallan distribuidos al azar y se generan inevitablemente durante el procesode fabricación. Adicionalmente, las películas estudiadas fueron provistas de centros deanclaje artificiales de distinto origen y ordenados de diferentes maneras. El objetivo deesta tesis fue el estudio de la competencia entre el anclaje intrínseco al azar y el anclajeartificial periódico, el efecto de las diferentes simetrías del potencial de anclaje periódico (triangular, cuadrado, rectangular) y el comportamiento de la red de vórtices frente apotenciales periódicos repulsivos o atractivos generados por heteroestructurassuperconductoras. En el capítulo 1 se ofrece una introducción sobre algunos aspectos teóricos de lasuperconductividad necesarios para el análisis de las muestras estudiadas. Las técnicas de medición utilizadas en este trabajo fueron la susceptibilidad ac yla magnetización dc. El capítulo 2 está dedicado a una breve descripción de las mismas. En el capítulo 3 se analiza una película de Nb con una red triangular de poros (conparámetro de red 100 nm) y otra similar pero sin ninguna estructura artificial particular. Se verifica que en la película sin estructuración existe un anclaje de la red de vórticesproveniente de los centros intrínsecos de esta muestra. Por otro lado, se verificó que en lapelícula porosa la corriente crítica de la misma aumenta anómalamente cuando el campomagnético aplicado produce una cantidad de vórtices que es un múltiplo entero delnúmero de poros existentes. Finalmente, se identificó a este efecto de conmensuracióncon un aumento en la eficiencia en el anclaje de la red debido a los poros. En el capítulo 4 del trabajo se agregó al análisis una película de Nb con inclusionesde Hierro (Fe). Esas inclusiones tienen tamaño y distribución similares a los poros de lapelícula porosa. Se encontró que en ambas muestras existe una competencia entre lospotenciales de anclaje artificiales (inclusiones de Fe y poros) y los intrínsecos del Nb. Seconcluyó que esta competencia es la responsable de un comportamiento magnéticohisterético por debajo de cierta temperatura reducida (aproximadamente 0.75). En el capítulo 5 se estudió una película de Nb con inclusiones de tamaño ydistribución similares a las anteriores, pero en este caso el material fue Vanadio (V). El V se torna superconductor a una temperatura inferior a la del Nb. Por lo tanto, a bajastemperaturas, las inclusiones funcionan como centros de anti-anclaje que repelen a losvórtices. Para temperaturas superiores a la crítica del V pero inferiores a la crítica del Nb,el V tiene un comportamiento metálico y las inclusiones cumplen la función de centrosde anclaje. En ambos regímenes se encontraron efectos de conmensuración. En el régimende bajas temperaturas el anclaje de la red se explica por un efecto de enjaulamiento de losvórtices que son repelidos por las inclusiones de V. Se encontró que el anclaje de la redpor enjaulamiento a bajas temperaturas es más eficiente que el producido por efectos deanclaje a altas temperaturas. En las muestras de los capítulos 3, 4 y 5, la geometría (triangular) de ladistribución de los centros de anclaje era coincidente con la geometría de una red devórtices en total ausencia de anclaje. En el capítulo 6 se trabajó con dos películas de Nbcon inclusiones de Níquel (Ni), pero en este caso la distribución de los centros de anclajeartificiales no fue triangular sino cuadrada (con parámetro de red 400 nm) y rectangular (parámetros de red 400 nm y 600 nm). En la muestra con distribución cuadrada seobservaron claros efectos de conmensuración y una evolución en la movilidad de la reddependiente del campo aplicado que coincide con predicciones obtenidas a partirsimulaciones numéricas. En el caso de la muestra con geometría rectangular no se observóel cambio de régimen en los efectos de conmensuración encontrado anteriormente porotros autores en experimentos de transporte e incluso algunos órdenes parecen haberseperdido. Se concluyó que esto es debido a la distribución azimutal de las corrientesinducidas en las mediciones de susceptibilidad ac, en contraste con la distribuciónunidireccional en los experimentos de transporte. De esta manera se examinaron diversos aspectos vinculados al anclaje de la redde vórtices por centros periódicos submicrométricos, en particular la competencia a bajastemperaturas con el desorden intrínseco, el anclaje por enjaulamiento repulsivo vs fuerzasatractivas y los efectos de la simetría del potencial de anclaje en experimentos desusceptibilidad ac.

Descripción: Las mitocondrias juegan un papel vital en el metabolismo energético; en el interior se produce la fosforilación oxidativa en la cadena de transporte de electrones y la generación de equivalentes de reducción por el ciclo del ácido tricarboxílico (TCA). La deficiencia de hemo producida por una síntesis reducida o un catabolismo acelerado provocaría un daño celular grave. Anteriormente, demostramos que los agentes porfirinogénicos afectaban a varios metabolismos en cerebro de ratones cepa CF1 y en un modelo genético murino de Porfiria intermitente aguda (AIP). El objetivo general de esta tesis fue estudiar los mecanismos por los cuales los anestésicos volátiles alteran el metabolismo mitocondrial. Los objetivos específicos fueron: I) Dilucidar el efecto de los anestésicos volátiles sobre la cadena respiratoria mitocondrial en el encéfalo de ratón. II) Comparar los resultados en animales con otros fármacos porfirinogénicos y en condiciones patológicas del precursor del metabolismo del hemo, ácido 5-aminolevulic (ALA). III) Evaluar, en el encéfalo del ratón, la posible relación entre la biosíntesis del hemo, el ciclo del ácido tricarboxílico y la cadena respiratoria. IV) Analizar la participación de la isoforma mitocondrial de la Óxido nítrico sintasa (mtNOS) en la regulación de la cadena respiratoria. Se observaron alteraciones bioquímicas en los Complejos de la cadena respiratoria que variaban según la cepa de ratones y la mutación. Los cambios observados en las actividades del ciclo de TCA darían como resultado una deficiencia de los equivalentes de reducción del donante, NADH y FADH2, y podrían justificar las alteraciones en las actividades de los Complejos de la cadena respiratoria informados anteriormente. Los resultados refuerzan nuestra resultados previos y apoyan la hipótesis de que habría más de un factor para explicar la patogénesis de los ataques agudos de la PAI además de confirmar la porfirinogenicidad de los anestésicos volátiles.