Análisis funcional del antígeno repetitivo presente en la trans-sialidasa de Trypanosoma cruzi

Institución otorgante:

Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

Fecha:

2000

Tipo de documento: 

info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
 

Formato:

application/pdf

Idioma:

spa

Temas:

TRYPANOSOMA CRUZI - TRANS-SIALIDASA - ANTIGENOS REPETITIVOS - ANTICUERPOS INHIBITORIOS DE TRANS-SIALIDASA - FARMACOCINETICA - TRYPANOSOMA CRUZI - TRANS-SIALIDASE - REPETITIVE ANTIGENS - TRANS-SIALIDASE INHIBITORY ANTIBODIES - PHARMACOKINETICS

Descripción:

El protozoario Trypanosoma cruzi, agente etiológico de la enfermedad de Chagas, expresaen su superficie moléculas con actividad trans-sialidasa. Esta actividad novedosa constituye laúnica vía de captación de residuos de ácido siálico en el parásito. La adquisición de estos azúcaresen glicoconjugados aceptores de superficie es indispensable para el reconocimiento y/o la infecciónde células de mamífero. La trans-sialidasa presente en el estadío infectivo de T cruzi tiene unaestructura quimérica, compuesta por una región responsable de la actividad catalítica y un dominiorepetitivo altamente inmunogénico (SAPA). Esta proteína es también secretada espontáneamente asangre del hospedador mamífero con propósitos inciertos. En el transcurso de la presente Tesis, hemos realizado un análisis funcional del antígeno SAPA. Más precisamente, hemos evaluado el rol que podría estar cumpliendo este dominio en lainteracción de la trans-sialidasa con el sistema inmune y en la biodisponibilidad de la moléculasecretada. Con este propósito, generamos y expresamos en bacterias distintas trans-sialidasasrecombinantes conteniendo o no al dominio SAPA. Las mismas fueron administradas en ratonessiguiendo distintos protocolos de inmunización a fin de analizar el curso de la respuesta inmunehumoral contra uno y otro dominio. Por otro lado, realizamos un análisis farmacocinético de lasdistintas enzimas purificadas. De tal manera, demostramos que la presencia del dominio SAPA cumpliría un rol dualdurante la infección; en un primer momento, estabilizando la actividad trans-sialidasa en sangre, locual podría estar asociado al mecanismo de infección y/o a las alteraciones del sistema inmune quese verifican durante la fase aguda de la enfermedad. En etapas más tardías, la presencia del dominio SAPA induce la formación de anticuerpos capaces de neutralizar la actividad trans-sialidasa. Larespuesta inmune inicial dirigida contra el dominio SAPA y/o la estabilización en sangre de lamolécula secretada en su conformación nativa podrían estar mediando la difusión de la respuestahumoral hacia epitopes presentes en la región catalítica. De hecho, también demostramos que losanticuerpos inhibitorios de trans-sialidasa están dirigidos contra epitope/s discontinuo/s en lasecuencia primaria de la enzima. Estos resultados son coincidentes con los datos clínicos, en los que se observa una faseinicial de la infección en la que puede llegar a detectarse actividad trans-sialidasa en circulación (asociado a altos niveles de parasitemia) y una fase tardía caracterizada por la presencia de anticuerposinhibitorios de dicha actividad (asociado a bajas o nulas parasitemias). La inducción de anticuerposinhibitorios mediada por SAPA contradice el rol inmunodistractor propuesto para este antígenorepetitivo, y sugiere un mecanismo seleccionado en la interacción parásito-hospedador para elestablecimiento de una infección crónica. La estabilización de la actividad trans-sialidasa en sangre requiere de un número mínimode unidades repetitivas y no depende de las secuencias no repetitivas presentes en el antígeno SAPA. El mecanismo molecular por el cual estas repeticiones aumentan la vida media de la transsialidasaen circulación no ha podido ser dilucidado, aunque no está mediado por una mayorresistencia a la degradación por proteasas séricas ni por unión de estas repeticiones a alguna proteínaendógena. De manera interesante, el dominio SAPA es también capaz de estabilizar la conformaciónnativa de otra proteína en sangre, en absoluto relacionada a la trans-sialidasa, por lo cual se sugiereuna posible aplicación biotecnológica.

Identificador:

https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3249_Buscaglia