Director(a):
Chertkoff, Lilien
Co-Director(a):
Monges, María Soledad
Jurado:
Perandones, Claudia - Dain, Liliana - Caputo, Mariela
Institución otorgante:
Universidad de Buenos Aires.   Facultad de Farmacia y Bioquímica
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales - Facultad de Medicina
Fecha de la defensa:
2013-12-16
Tipo de documento:
tesis de maestría - info:eu-repo/semantics/acceptedVersion
Grado alcanzado:
Magíster de la Universidad de Buenos Aires en Biología Molecular Médica 
Editor:
Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica
Formato:
application/pdf  |   kb.
Idioma:
español
Area Temática:
Palabras clave:
Descripción:
La Atrofia Muscular Espinal (AME) es una de las enfermedades autosómicas recesivas más frecuentes, y es causada por mutaciones en el gen SMN1. Esta enfermedad neuromuscular se caracteriza por degeneración de las motoneuronas del asta anterior de la medula espinal resultando en atrofia y debilidad muscular progresiva. Existen 4 formas clínicas de presentación desde la manifestación neonatal severa a la forma del adulto con mínima debilidad. La severidad de la enfermedad se ha correlacionado con el número de copias del gen SMN2, altamente homólogo y cercano a SMN1. El gen SMN2, a diferencia de SMN1, produce sólo un 10%-15% de proteína SMN activa. Actualmente se están desarrollando estudios de investigación clínicos con medicamentos que estimulan una mayor síntesis de proteína activa a partir de SMN2, entre ellos ácido valproico (VPA) y 4-fenilbutirato. Otro gen cercano a SMN1, denominado NAIP, se encuentra delecionado en la mayoría de los pacientes con AME severa. Objetivos El objetivo principal de este trabajo fue evaluar la influencia del número de copias del gen SMN2 y la ausencia del gen NAIP, en el fenotipo AME en niños diagnosticados en el Hospital de Pediatría J. P. Garrahan. Para ello: - Se determinó el número de copias del gen SMN2 mediante dos metodologías semicuantitativas de biología molecular - Se estableció la presencia o ausencia del gen NAIP - Se realizó un estudio de correlación Genotipo-Fenotipo en los niños con AME de nuestra población Pacientes y Métodos Se estudiaron 144 niños con diagnóstico de AME; los mismos fueron categorizados de acuerdo a los criterios establecidos por el Consenso Internacional de AME ?Consensus Statement for Standard of Care in Spinal Muscular Atrophy, 2007?. El número de copias del gen SMN2 se determinó mediante MLPA (Multiplex Ligation-dependet Probe Amplification) y PCR a tiempo real. La ausencia del gen NAIP se determinó mediante la metodología de MLPA. Resultados El número de copias del gen SMN2 pudo ser determinado mediante MLPA en la totalidad de los pacientes. Con la PCR a tiempo real se pudo establecer en 119/144 pacientes. Los resultados obtenidos por ambas técnicas fueron equivalentes en el 95% de los casos. Todos los niños con AME tipo I presentaron 2 copias, mientras que más del 98% de los pacientes con AME tipo II y III mostraron entre 3 y 4 copias de SMN2. Sólo en el grupo AME tipo III se observaron 4 copias de SMN2, siendo éstas más frecuente en los pacientes con el subtipo IIIb. El gen NAIP estuvo ausente en el 73,2% de los niños con AME tipo I y presente en más del 85% de los pacientes con AME tipo II y III. Conclusiones La metodología de MLPA resultó ser más robusta que la PCR a tiempo real y brinda mayor información acerca de la región AME. El número de copias del gen SMN2 y la ausencia del gen NAIP mostraron ser modificadores del fenotipo clínico de AME en la población estudiada. Estos biomarcadores no alcanzan a explicar la totalidad de los casos, sugiriendo la existencia de otros factores modificadores que aún no se conocen y deberán ser revelados en futuras investigaciones. El presente proyecto contribuyó a la incorporación de una nueva metodología que aumenta la sensibilidad diagnóstica (superando el 95%) y que permite la detección de portadores en el grupo familiar.
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Abstract:
Spinal Muscular Atrophy (SMA) is one of the most common autosomal recessive illnesses, caused by mutations of the SMN1 gene. SMA is characterized by symmetric proximal muscle weakness secondary to degeneration of the anterior horn cells of the spinal cord. SMA is clinically subdivided into four types, ranging from the severe neonatal presentation to the adult form with minimum weakness. Phenotypic variability has been associated with the number of copies of SMN2, a gene that is highly homologous and close to SMN1. Unlike SMN1, the SMN2 gene produces only 10%-15% of functional protein. Currently several clinic research studies are being developed with drugs that stimulate increased synthesis of functional SMN protein from SMN2, including valproic acid (VPA) and 4-phenylbutyrate. Another gene close to SMN1, called NAIP, is deleted in most patients with severe SMA. Objectives The main objective of this work was to evaluate the influence of the SMN2 copy number and absence of NAIP gene in SMA phenotype in children diagnosed at the Pediatric Hospital J.P Garrahan. For this purpose: - SMN2 copy number was determined through two semiquantitative molecular biology methodologies. - Presence or absence of NAIP gene was established. - A genotype-phenotype correlation study was conducted in SMA children of our population. Patients and Methodology We studied 144 children diagnosed with SMA; these were categorized according to the criteria established by the ?Consensus Statement for Standard of Care in Spinal Muscular Atrophy, 2007?. The number of copies of the SMN2 gene was determined by MLPA (Multiplex Ligation-dependet Probe Amplification) and Real Time PCR. The absence of NAIP gene was established by MLPA. Results The SMN2 copy number could be determined in all patients by MLPA. With the real time PCR it could be established in 119/144 patients. The results obtained by both techniques were equivalent in 95% of cases. All children with SMA type I had 2 copies of SMN2, while over 98% of patients with SMA type II and II showed between 3 and 4 SMN2 copies. Only in the group of patients with SMA type III were observed 4 copies of SMN2, being these more frequent in patients with the subtype IIIb. The NAIP gene was absent in 73,2% of children with SMA type I and present in more than 85% of patients with SMA type II and III. Conclusions The MLPA methodology proved to be more robust than real-time PCR and provides more information about SMA region. The number of copies of SMN2 and the absence of NAIP gene showed to be phenotypic modifiers of SMA in the study population. These biomarkers do not explain all cases, suggesting the existence of other modifying factors that are still unknown and should be disclosed in future research. This project contributed to the incorporation of a new methodology that increases diagnostic sensitivity (exceeding 95%) and allows detection of carriers in the family group.
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Calificación:
Sobresaliente (10 Diez puntos)
Dictamen:
El trabajo de tesis fue expuesto con claridad, mostrando solvencia profesional en el tema. La redacción fue ordenada y correcta. La presentación oral de la tesis fue excelente y la defensa fue adecuada.
Identificador(es):
http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=masteruba&cl=CL1&d=HWA_811
Filiación Institucional:
Fil: Medrano, María Sofía. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; Argentina
Institución aportante:
Facultad de Farmacia y Bioquímica
Biblioteca cooperante:
Biblioteca de la Facultad de Farmacia y Bioquímica
Derechos:
info:eu-repo/semantics/openAccess
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/
Licencia de uso:
Licencia Creative Commons

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Cita bibliográfica:

Medrano, María Sofía (2013-12-16). Influencia del número de copias del gen SMN2 y de la deleción del gen NAIP en el fenotipo de la Atrofia Muscular Espinal  (tesis de maestría). Universidad de Buenos Aires.  Facultad de Farmacia y Bioquímica. [consultado:  ] Disponible en el Repositorio Digital Institucional de la Universidad de Buenos Aires:  <http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=masteruba&cl=CL1&d=HWA_811>