Director(a):
Giordano, Mirta
Jurado:
Lazarowski, Alberto - Lanari, Claudia - Carballo, Marta
Institución otorgante:
Universidad de Buenos Aires.   Facultad de Farmacia y Bioquímica
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales - Facultad de Medicina
Fecha de la defensa:
2014-12-15
Tipo de documento:
tesis de maestría - info:eu-repo/semantics/acceptedVersion
Grado alcanzado:
Magíster de la Universidad de Buenos Aires en Biología Molecular Médica 
Editor:
Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica
Formato:
application/pdf  |   kb.   |  47 p.
Idioma:
español
Area Temática:
Descripción:
Antecedentes: Lurbinectedin, un alcaloide capaz de unirse al surco menor del ADN, presenta actividad antitumoral contra diferentes tumores sólidos, pero no ha sido evaluado aún en neoplasias hematológicas. La leucemia linfática crónica (LLC) es la leucemia más frecuente del adulto y pese a los avances terapeúticos logrados en los últimos años sigue siendo una enfermedad incurable. La supervivencia y multiplicación de las células B malignas en LLC dependen de señales del microambiente tumoral que están dadas por leucocitos no malignos, células estromales y endoteliales. Objetivos: Investigar la actividad citotóxica de Lurbinectedin sobre poblaciones leucocitarias humanas, evaluando la sensibilidad de los linfocitos B, T, células NK y monocitos de donantes sanos y pacientes con LLC. Investigar además el mecanismo de muerte celular inducido por Lurbinectedin. Materiales y Métodos: Separación de leucocitos de sangre periférica humana e incubación con Lurbinectedin. Evaluación de la muerte celular con la sonda fluorescente 7-AAD y análisis por citometría de flujo. Identificación de las poblaciones leucocitarias con anticuerpos específicos. Detección de la ruptura del ADN por evaluación de la expresión de ?H2AX por citometría de flujo. Detección de la fragmentación de PARP por Western blot. Resultados: Lurbinectedin induce muerte celular de manera dosis-dependiente sobre todas las poblaciones leucocitarias evaluadas, siendo los linfocitos B normales y leucémicos y las células de estirpe mieloide más sensibles que los linfocitos T y las células NK. En muestras de pacientes LLC, Lurbinectedin afecta la viabilidad de las células B leucémicas a través de la eliminación de las células de tipo nodriza diferenciadas de monocitos. El mecanismo citotóxico en células LLC involucra la fosforilación de la histona H2AX y la fragmentación de PARP. Conclusiones: Lurbinectedin es un agente citotóxico eficaz contra células B leucémicas de pacientes LLC ejerciendo no sólo un efecto directo si no también indirecto a través de la eliminación de las células de estirpe nodriza que colaboran con la supervivencia de las células leucémicas. La menor sensibilidad de los linfocitos T y células NK supondría una ventaja para el tratamiento de estos pacientes que presentan una inmunosupresión característica.
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Abstract:
Background: Lurbinectedin, an alkylating minor groove DNA-binder, has cytotoxic activity against different solid tumors, but it has not been evaluated in hematological malignancies yet. Chronic lymphocytic leukemia (CLL) is the most frequent leukemia in the adult and, despite the therapeutic advances made in recent years, it remains an incurable disease. The survival and proliferation of malignant B cells in CLL depend on tumor microenvironment signals which are given by non-malignant leukocytes, stromal and endothelial cells. Objectives: To investigate the cytotoxic activity of Lurbinectedin on human leukocyte populations, comparing the sensitivity of B, T, NK cells and monocytes from healthy donors and patients with CLL. To analyze the mechanism of cell death induced by Lurbinectedin. Materials and Methods: Isolation of human peripheral blood leukocytes and in vitro incubation with Lurbinectedin. Assessment of cell death with the fluorescent probe 7- AAD and flow cytometry analysis. Identification of leukocyte populations by specific antibodies. Detection of DNA breaks by evaluating ?H2AX expression by flow cytometry. Detection of PARP cleavage by Western blot. Results: Lurbinectedin induces cell death in a dose-dependent manner over all leukocyte populations evaluated, being normal and leukemic B cells and myeloid cells more sensitive than T lymphocytes and NK cells. In samples from patients with CLL, Lurbinectedin reduces viability of leukemic B cells through the elimination of nurse like cells differentiated from monocytes. The cytotoxic mechanism in CLL cells involves phosphorylation of histone H2AX and PARP fragmentation. Conclusion: Lurbinectedin is an effective cytotoxic agent against leukemic B cells from CLL patients, inducing not only a direct but also an indirect effect by removing nurse like cells that promote leukemic cells survival. Decreased sensitivity of T and NK cells to Lurbinectedin would be an advantage for the treatment these patients who present a typical immunosuppression.
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Calificación:
Sobresaliente (10 Diez puntos)
Dictamen:
El trabajo de tesis fue expuesto en forma concisa y clara. La redacción fue clara y con bibliografía actualizada. El trabajo permite avanzar en el desarrollo de nuevas estrategias terapéuticas en leucemia linfática crónica. La presentación oral de la tesis fue muy buena y la maestranda defendió con solvencia su trabajo y demostró un conocimiento acabado de su bibliografía.
Identificador(es):
http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=masteruba&cl=CL1&d=HWA_810
Filiación Institucional:
Fil: De Los Ríos Alicandú, María Mercedes. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; Argentina
Institución aportante:
Facultad de Farmacia y Bioquímica
Biblioteca cooperante:
Biblioteca de la Facultad de Farmacia y Bioquímica
Derechos:
info:eu-repo/semantics/openAccess
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/
Licencia de uso:
Licencia Creative Commons

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Cita bibliográfica:

De Los Ríos Alicandú, María Mercedes (2014-12-15). Estudio de la actividad citotóxica del compuesto Lurbinectedin sobre células leucocitarias normales y malignas de leucemia linfática crónica  (tesis de maestría). Universidad de Buenos Aires.  Facultad de Farmacia y Bioquímica. [consultado:  ] Disponible en el Repositorio Digital Institucional de la Universidad de Buenos Aires:  <http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=masteruba&cl=CL1&d=HWA_810>