Director(a):
Slavutsky, Irma
Jurado:
Wainstok, Rosa - Vanzulli, Silvia - Rossetti, Liliana
Institución otorgante:
Universidad de Buenos Aires.   Facultad de Farmacia y Bioquímica
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales - Facultad de Medicina
Fecha de la defensa:
2016-05-06
Tipo de documento:
tesis de maestría - info:eu-repo/semantics/acceptedVersion
Grado alcanzado:
Magíster de la Universidad de Buenos Aires en Biología Molecular Médica 
Editor:
Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica
Formato:
application/pdf  |   kb.   |  96 p.
Idioma:
español
Area Temática:
Descripción:
La micosis fungoide (MF) es un tipo de desorden linfoproliferativo clonal que preferentemente involucra la piel, cuya etiología y patogénesis son inciertas. Las características clínicas y morfológicas no siempre resultan suficientes para predecir el pronóstico de esta enfermedad. Las técnicas de hibridación genómica comparada y microarrays han mostrado desbalances de los genes CDKN2A (9p21) y C-MYC (8q24), con un probable valor pronóstico en esta patología. Además la sobreexpresión de miR-155 fue observada en diferentes tumores sólidos y hematológicos, promoviendo la inestabilidad genómica, proliferación y supervivencia de las células malignas. En el presente estudio, evaluamos los desbalances genómicos de CDKN2A y C-MYC, así como su asociación con la expresión de miR-155 en pacientes con diagnóstico de MF. Los resultados fueron correlacionados con las características clínico-patológicas de los pacientes. El estudio fue realizado en biopsias fijadas en formol y embebidas en parafina de 36 pacientes con MF (26 varones; edad media 62,5 años, rango: 31-82 años): 16 casos correspondieron a MF estadio tumoral (MF-T), 13 a MF con transformación histológica a un linfoma T de células grandes (MF-TR), y 7 casos a la variante MF foliculotrópica (MF-F). El análisis de FISH se realizó usando las sondas OTS9P21.3 (CDKN2A) y OTS8Q24 (C-MYC) (LiVE-Lexel, Argentina). Se cuantificó la expresión de miR-155 mediante PCR en tiempo real usando metodología TaqMan. Se evaluaron además diez muestras de enfermedades inflamatorias cutáneas, usadas como controles. El estudio fue aprobado por el Comité de Ética local. Todos los individuos proveyeron consentimiento informado para su participación. El estudio de FISH fue realizado en 34 pacientes, 20 (59%) mostraron alteraciones genómicas (AG): 8 (40%) casos tuvieron deleción de CDKN2A, 7 (35%) mostraron ganancias de CMYC y 5 (25%) exhibieron ambos desbalances. La deleción de CDKN2A fue observada en 7/13 (54%) MF-TR, 4/7 (57%) MF-F y 2/16 (12,5%) MF-T (p=0,03); mientras que la ganancia de C-MYC fue detectada en 7/13 (54%) MF-TR y en 5/7 (71,4%) MF-F. De esta forma, la frecuencia de AG fue de 14,3% MF-T frente a 92,3% MF-TR y 85,7% MF-F (p=0,001 y p=0,004, respectivamente). Estas aberraciones fueron más frecuentes en las lesiones ubicadas en cabeza, cuello y extremidades inferiores (77,8%) en contraste con las halladas en el tronco y miembros superiores (40%) (p=0,03). Por inmunohistoquímica, la mayoría de los casos con < 25% células CD30+ no presentaban AG (91% vs 9%) (p=0,01), mientras que los pacientes con alteraciones mostraron una mayor media del índice de proliferación (Ki-67) (49,5%) que los casos sin alteraciones (SA) (5%) (p=0,003). Adicionalmente, las MF-TR de origen foliculotropo tenían más frecuentemente deleción 9p21 (80%) que ganancia de 8q24 (40%) respecto a las de origen clásico (42,8% y 71,4%, respectivamente). La respuesta clínica al tratamiento fue ausente en 11/20 (55%) de los casos con AG respecto a 2/14 (14,3%) pacientes SA (p=0,02). Aunque no se alcanzaron diferencias significativas, los niveles de LDH y Beta 2 microglobulina, y la recaída extracutánea fueron mayores en relación al grupo SA. Además, el grupo con AG mostró la sobrevida más corta (92 meses) comparado con los casos SA, que no alcanzaron la media de supervivencia (Log-rank p=0,04), indicando su asociación con un pronóstico desfavorable. El análisis de la expresión génica (n=36) mostró sobreexpresión de miR-155 en el 25% de las MF-TR y en el 28,6% de las MF-F, mientras que sólo se observó en el 7,7% 7,7% de las MF-T. No se detectó sobreexpresión de miR-155 en los controles. La correlación con los resultados de FISH mostró incremento de la expresión de miR-155 en el 26,3% de los pacientes con AG respecto de 8,3% de los casos SA. Nuestros resultados muestran una alta proporción de pérdidas de 9p21 y 8q24 en pacientes con MF. La MF-TR exhibió la mayor frecuencia de AG, apoyando un rol de éstas alteraciones en el proceso de transformación neoplásica. Aún cuando el número de MF-F es reducido en nuestra serie, esta variante morfológica podría estar asociada a una mayor frecuencia de AG. Finalmente, nuestros hallazgos en la expresión de miR-155 apoyan su relación con la inestabilidad genómica y el desarrollo tumoral, pudiendo constituir un aporte para la profundización de la caracterización biológica de esta patología.
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Abstract:
Mycosis fungoides (MF) is a clonally derived lymphoproliferative disorder that preferentially involves the skin, which etiology and pathogenesis remains elusive. Morphological and clinical features are not always accurate enough to predict the disease outcome. Comparative genomic hybridization and microarrays have shown imbalances of CDKN2A (9p21) and C-MYC (8q24), with probable prognostic value in this pathology. In addition, miR-155 overexpression was observed in several hematological and solid tumors, promoting genomic instability, proliferation, and survival of malignant cells. In this study, we have evaluated CDKN2A losses and C-MYC gains and their association with miR-155 expression, in patients with diagnosis of MF. Results were correlated with clinicopathological features of patients. The study was performed on formalin-fixed and paraffin-embedded biopsies from 36 patients with MF (26 males; median age 62.5 years, range: 31-82 years): 16 cases were tumor stage MF (T-MF), 13 were MF with histological transformation to a large T-cell lymphoma (TR-MF) and 7 were folliculotropic MF (F-MF) variant. FISH analysis using OTS9P21.3 (CDKN2A) and OTS8Q24 (C-MYC) probes (LiVE-Lexel, Argentina), was performed. Gene expression was quantified by real time PCR using TaqMan methodology. Ten control samples from benign skin diseases were also evaluated. The study was approved by the local Ethics Committee. All individuals provided their informed written consent. FISH study was performed in 34 patients, 20 (59%) showed genomic alterations (GA): 8 (40%) cases had CDKN2A deletion, 7 (35%) showed C-MYC gains and 5 (25%) exhibited both anomalies. CDKN2A deletion was observed in 7/13 (54%) TR-MF, 4/7 (57%) F-MF and 2/16 (12.5%) T-MF (p=0.03); meanwhile C-MYC gain was detected in 7/13 (54%) TR-MF and 5/7 (71.4%) F-MF. Thus, GA rate was lower in TMF 14.3% with respect to TR-MF 92.3% and F-MF 85.7% (p=0.001 and p=0.004, respectively). These aberrations were more frequent in head, neck and lower limbs (77.8%) in contrast with trunk and upper limbs (40%) (p=0.03). By immunohistochemistry, majority of cases with <25% CD30+ cells did not show GA (91% vs 9%) (p=0.01); meanwhile patients of GA group had more high median proliferation index (Ki-67) (49.5%) in comparison to cases with no genomic aberrations (NA) (5%) (p=0.003). Interestingly, TRMF with follicular origin had more frequently 9p21 deletion (80%) and less 8q24 gain (40%) respect to classic origin (42.8% and 71.4%, respectively). Clinical response to treatment was absent in 11/20 (55%) of cases with GA vs. 2/14 (14.3%) patients with NA (p=0.02). Although no significant differences were reached, mean LDH and Beta 2 microglobulin levels and extracutaneous relapse were higher with respect to those with NA. In addition, the group with GA showed shorter overall survival (92 months) compared to cases with NA, that not reached the median survival (Log-rank p=0.04), indicating their association with poor outcome. Gene expression analysis (n=36) showed miR-155 upregulation in 25% TR-MF and 28.6% F-MF and in only 7.7% T-MF. No miR-155 expression was observed in controls. The correlation with FISH results found miR-155 overexpression in 26.3% of patients with GA and 8.3% of cases with NA. Our results showed high proportion of 9p21 losses and 8q24 gains in MF patients. TR-MF exhibited the highest frequency of GA, supporting a role in the process of neoplastic transformation. Although the number of F-MF is reduced in our series, this morphological variant would seem to be associated to an increased frequency of genomic imbalances. Moreover, our findings on miR-155 expression support its relation with genomic instability and tumor development, contributing a better biological characterization of this pathology.
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Calificación:
Sobresaliente (10 puntos)
Dictamen:
El trabajo presenta bibliografía actualizada y fue desarrollado en la versión impresa en forma excelente. La presentación oral de la tesis fue excelente. La estrategia experimental fue pertinente para los objetivos planteados. Los resultados obtenidos son novedosos en un tema poco investigado y tiene una importante perspectiva para el seguimiento en pacientes.
Identificador(es):
http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=masteruba&cl=CL1&d=HWA_1915
Filiación Institucional:
Fil: Huamán Garaicoa, Fuad Olmedo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, Argentina
Institución aportante:
Facultad de Farmacia y Bioquímica
Biblioteca cooperante:
Biblioteca de la Facultad de Farmacia y Bioquímica
Derechos:
info:eu-repo/semantics/openAccess
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/
Licencia de uso:
Licencia Creative Commons

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Cita bibliográfica:

Huamán Garaicoa, Fuad Olmedo (2016-05-06). Estudios genéticos en linfomas cutáneos de células T  (tesis de maestría). Universidad de Buenos Aires.  Facultad de Farmacia y Bioquímica. [consultado:  ] Disponible en el Repositorio Digital Institucional de la Universidad de Buenos Aires:  <http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=masteruba&cl=CL1&d=HWA_1915>