Director(a):
Angaroni, Celia Juana
Co-Director(a):
Dodelson de Kremer, Raquel
Jurado:
Paz, Cristina - Rivolta, Carina - Aranda, Eliseo Isaac
Institución otorgante:
Universidad de Buenos Aires.   Facultad de Farmacia y Bioquímica
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales - Facultad de Medicina
Fecha de la defensa:
2016-10-26
Tipo de documento:
tesis de maestría - info:eu-repo/semantics/acceptedVersion
Grado alcanzado:
Magíster de la Universidad de Buenos Aires en Biología Molecular Médica 
Editor:
Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica
Formato:
application/pdf  |   kb.   |  55 p.
Idioma:
español
Area Temática:
Palabras clave:
Descripción:
La Enfermedad de Atesoramiento del Glucógeno tipo IX (EAG-IX) es causada por un defecto genético en una de las subunidades de la fosforilasa-b-quinasa (PHK) codificadas por los genes PHKA2, PHKB y PHKG2. La deficiencia de PHK ligada al cromosoma X (EAG-IXa), gen involucrado PHKA2, presenta dos variantes enzimáticas XLG1 (disminuida en hígado y eritrocitos) y XLG2 (sólo disminuida en hígado). Las deficiencias de PHK y fosforilasa hepáticas, conforman los Defectos del Sistema de la Fosforilasa (DSF), conduciendo a las denominadas EAG-IX y EAG-VI, respectivamente. La fosforilasa hepática es codificada por el gen PYGL. En el presente trabajo, inicialmente, se planteó la estandarización del diagnóstico molecular de la EAG-IX ligada al cromosoma X (gen PHKA2), sin embargo teniendo en cuenta los aspectos clínicos y bioquímicos de las EAG-IXa y EAG-VI, indistinguibles en la primera infancia, se extendió nuestro estudio al gen PYGL. Este trabajo propone definir nosológicamente los DSF mediante la consideración del sexo del paciente, actividad PHK en eritrocitos y análisis molecular del gen PHKA2 y gen PYGL. Se estudiaron 2 varones y 3 mujeres de 4 familias no emparentadas. La actividad PHK en eritrocitos de los individuos disponibles, resultó deficiente en 1 de los 2 pacientes varones, valores normales en 2 de las 3 probandos de sexo femenino y no se efectuó el ensayo enzimático en los 2 pacientes restantes (hermanos mellizos de diferente género). Se diseñó un algoritmo para el estudio de los genes involucrados en los DSF teniendo en cuenta genero de los pacientes y actividad PHK eritrocitaria. El estudio del gen PHKA2 en 1 de los pacientes de sexo masculino definió su condición de hemicigota mutado encontrándose un cambio en el sitio aceptor de ?splicing? en posición -1 del intrón 10 (c.1042-1G>A) llegando al diagnóstico definitivo EAG-IX ligada al cromosoma X con variante XLG1. El análisis del gen PYGL, identificó cuatro sustituciones y un polimorfismo: p.Gly233Ser, p.Gly686Arg, p.Met1Lys, p.Glu673Lys y IVS15-2delA, respectivamente. La frecuencia alélica de todas las variaciones génicas detectadas en el gen PYGL resultó del 50% para p.Gly686Arg que estuvo presente en 3 de los 6 alelos estudiados y del 16,6% para los restantes cambios encontrados en este gen en los pacientes investigados en nuestro centro. Se estima que esta investigación es el inicio en un área del conocimiento previamente no abordado en nuestro país que permitió definir pacientes con EAG IX y EAG VI demostrando que el análisis genético representa un procedimiento útil para establecer un diagnóstico certero.
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Abstract:
The Glycogen Storage Disease type IX (GSD-IX) is caused by a genetic defect in one of the hepatic PHK subunits encoded by PHKA2, PHKG2 and PHKB genes, respectively. The PHK deficiency linked to the X chromosome (PHKA2 gene) presents two enzymatic variants: XLG1 (reduced in liver and erythrocytes) and XLG2 (only decreased in liver). The phosphorylase-b kinase (PHK) and phosphorylase deficiencies in the liver constitute the phosphorylase system defects (PSD), leading to Glycogen Storage Disease Type IX (GSD-IX) and Type VI (GSD-VI), respectively. The hepatic phosphorylase is encoded by PYGL gene. Both types of GSD (VI and IX) are clinical and biochemical similar in early childhood. The aim of this work is to define nosologically PSD, taking into account the gender of the patient, PHK activity in erythrocytes, and molecular analysis of the PHKA2 gene and PYGL gene. 2 men and 3 women of 4 unrelated families were tudied. PHK activity in erythrocytes was analysed in 1 of the male patients that resulted deficient, and was normal in two of the female probands. The molecular analysis of the PHKA2 gene, in 1 of the male patients, identified a mutation in intron 10 (c.1042-1G>A). On the other hand, the molecular anaylisis of the PYGL gene identified three novel missense mutations, p.Gly233Ser and p.Gly686Arg, p.Met1Lys, one already described missense mutation p.Glu673Lys and the IVS15-2delA polymorphism. The allele frequency of P.Gly686Arg was 50%. The in silico studies predict that new mutations would affect the enzyme functionality. This study allowed the accurate diagnosis of GSD-IX and GSD-VI. This research represents a continuity of the Project for the exact definition of PSD, unprecedented area of knowledge in our country.
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Calificación:
Distinguido
Dictamen:
El manuscrito presentado cumplió con los requisitos necesarios para presentar la temática. Los resultados obtenidos son el inicio de nuevas estrategias moleculares diagnósticas requiriéndose estudios poblacionales para convalidar los hallazgos identificados. La presentación oral de la tesis fue buena, respondiendo adecuadamente a las preguntas formuladas por el Jurado.
Identificador(es):
http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=masteruba&cl=CL1&d=HWA_1664
Filiación Institucional:
Fil: Castillo, Ana Leila. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Buenos Aires, Argentina
Institución aportante:
Facultad de Farmacia y Bioquímica
Biblioteca cooperante:
Biblioteca de la Facultad de Farmacia y Bioquímica
Derechos:
info:eu-repo/semantics/openAccess
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/
Licencia de uso:
Licencia Creative Commons

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Cita bibliográfica:

Castillo, Ana Leila (2016-10-26). Bases moleculares de la deficiencia de fosforilasa B quinasa hepática ligada al cromosoma X (Gen PHKA2) en pacientes argentinos  (tesis de maestría). Universidad de Buenos Aires.  Facultad de Farmacia y Bioquímica. [consultado:  ] Disponible en el Repositorio Digital Institucional de la Universidad de Buenos Aires:  <http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=masteruba&cl=CL1&d=HWA_1664>