Director(a):
D´Alessio, Cecilia
Jurado:
Abdian, Patricia - Portela, Laura - Paveto, Cristina
Institución otorgante:
Universidad de Buenos Aires.   Facultad de Farmacia y Bioquímica
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales - Facultad de Medicina
Fecha de la defensa:
2014-08-14
Tipo de documento:
tesis de maestría - info:eu-repo/semantics/acceptedVersion
Grado alcanzado:
Magíster de la Universidad de Buenos Aires en Biología Molecular Médica 
Editor:
Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica
Formato:
application/pdf  |   kb.   |  61 p.
Idioma:
español
Area Temática:
Palabras clave:
Descripción:
Durante el proceso de N-glicosilación de proteínas el complejo oligosacariltransferasa (OST) en la membrana del retículo endoplasmático (RE) transfiere Glc3Man9GlcNAc2 desde el dolicol-PP al residuo Asn de la secuencia Asn-X-Ser/Thr de las proteínas que se están translocando al interior del RE. La adición de un glicano hidrofílico voluminoso mejora la eficiencia del plegamiento de proteínas, ya que reduce la agregación de intermediarios de plegamiento. Los defectos en la reacción de transferencia de glicanos debidos a mutaciones en la OST o a la formación de estructuras de glicanos truncadas sobre el Dol-PP pueden resultar en la hipoglicosilación de proteínas (sitios de N-glicosilación que normalmente están ocupadas con un glicano están vacíos). Esto provoca defectos generales en el plegamiento de glicoproteínas y las enfermedades humanas conocidas como trastornos congénitos de la glicosilación tipo I (CDG I). Se ha demostrado recientemente que una variante de GFP en la que se introdujo un sitio de N-glicosilación (GlyGFP) pierde su fluorescencia cuando dicho sitio está ocupado por un glicano. Hemos expresado GFP y la variante GlyGFP fusionadas en el N-terminal a un de Péptido Señal de S. pombe y en el C-terminal a una señal de retención RE tanto en una cepa de S. pombe salvaje como en una mutante ?alg6, en la que se produce hipoglicosilación de glicoproteínas. Nuestros resultados mostraron que mientras que la ER-GFP emite fluorescencia de en el ER de ambas cepas, ER-GlyGFP sólo emite fluorescencia en el ER de la mutante ?alg6, lo que indica que la intensidad de fluorescencia de esta construcción se puede utilizar para probar la hipoglicosilación de proteínas in vivo en S. pombe.
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Abstract:
During N-glycosylation the endoplasmic reticulum (ER) membrane oligosaccharytransferase complex (OST) transfers Glc3Man9GlcNAc2 from a dolichol-PP donor to the sequence Asn-X-Ser/Thr of proteins that are entering into the ER. The addition of a bulky hydrophilic glycan enhances protein folding efficiency as it reduces aggregation of folding intermediates. Defects in the glycan transfer reaction due either to OST mutations or to truncated glycan structures built in the Dol-PP may result in protein hypoglycosylation (the N-glycosylation sites that are normally occupied with a glycan are empty) thus causing ubiquitous defects and in human diseases known as congenital disorders of glycosylation type I. It has been recently shown that a GFP variant in which an N-glycosylation site was introduced (GlyGFP) loses its fluorescence when such site is occupied by a glycan. We expressed GFP and GlyGFP variants fused to an N-terminal S. pombe signal peptide and a C-terminal ER retention signal (ER-GFP and ER-GlyGFP), both in a wild type and in a ?alg6 mutant strain in which hypoglycosylation occurs. Our results showed that while expressed ER-GFP fluoresces in the ER of both strains, ER-GlyGFP only fluoresces in the ER of ?alg6 mutant, indicating that the fluorescence intensity of this construction may be used to test the glycoprotein hypoglycosylation in vivo in S. pombe.
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Calificación:
Sobresaliente diez (10) puntos
Dictamen:
El trabajo de tesis fue expuesto en forma concisa y clara. La redacción fue ordenada y con bibliografía actualizada. Se concretaron los objetivos y el trabajo enmarca en un proyecto futuro mas general. La presentación oral de la tesis fue excelente y la maestranda demostró un cabal conocimiento del tema a través de sus respuestas y de una discusión fructífera.
Identificador(es):
http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=masteruba&cl=CL1&d=HWA_1228
Filiación Institucional:
Fil: Herrera Aguilar, Nathalia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; Argentina
Institución aportante:
Facultad de Farmacia y Bioquímica
Biblioteca cooperante:
Biblioteca de la Facultad de Farmacia y Bioquímica
Derechos:
Licencia de uso:
Licencia Creative Commons

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Cita bibliográfica:

Herrera Aguilar, Nathalia (2014-08-14). Desarrollo de herramientas moleculares para determinar hipoglicosilación de proteínas in vivo en levaduras  (tesis de maestría). Universidad de Buenos Aires.  Facultad de Farmacia y Bioquímica. [consultado:  ] Disponible en el Repositorio Digital Institucional de la Universidad de Buenos Aires:  <http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=masteruba&cl=CL1&d=HWA_1228>