Director(a):
Mujica, María Teresa
Co-Director(a):
Cuestas, María Lujan
Jurado:
Catalano, Mariana - Arechavala, Alicia - Vay, Carlos
Institución otorgante:
Universidad de Buenos Aires.   Facultad de Farmacia y Bioquímica
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales - Facultad de Medicina
Fecha de la defensa:
2015-07-13
Tipo de documento:
tesis de maestría - info:eu-repo/semantics/acceptedVersion
Grado alcanzado:
Magíster de la Universidad de Buenos Aires en Biología Molecular Médica 
Editor:
Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica
Formato:
application/pdf  |   kb.   |  79 p.
Idioma:
español
Area Temática:
Descripción:
Introducción. El embarazo es uno de los factores de riesgo para el desarrollo de una Candidiasis vulvovaginal (CVV) y su diagnostico y tratamiento permite prevenir posibles complicaciones gineco-obstetricas. La especie Candida albicans es la principal agente etiológico, sin embargo, las CVV debidas a Candida no- albicans se encuentran en paulatino ascenso y presentan una mayor resistencia a los antifúngicos. Por ello, es necesaria la identificación de los aislamientos de Candida y los métodos convencionales de diagnóstico microbiológico en algunas especies no son concluyentes. Objetivo. Informar sobre la frecuencia de las CVV y de la portación por especies de Candida en pacientes gestantes inmunocompetentes. Determinar la distribución y prevalencia de las distintas especies de levaduras aisladas en las pacientes con CVV y en la portación asintomática de estos microorganismos. Diferenciar mediante técnicas moleculares a las especies de los complejos C. albicans (C. albicans, C. dubliniensis y C. africana), C. parapsilosis y C. glabrata. Comparar las técnicas microbiológicas convencionales con las moleculares para su detección. Determinar la frecuencia de otros patógenos de riesgo obstétrico o causantes de vulovaginitis y conocer la posible asociación con las diferentes especies de Candida. Materiales y Métodos. Se analizaron 210 exudados vaginales obtenidos de gestantes inmunocompetentes y 64 secreciones vaginales de embarazadas que se encontraban entre las semanas 35 y 37 de gestación para la investigación de Streptococcus agalactiae y su asociación con especies de Candida. Para la identificación de levaduras se realizaron estudios microbiológicos convencionales ( estudio microscópico de la muestra, cultivos en medio CHROMagar Candida, producción de clamidoconidios en agar leche Tween 80 al 1 % y en medio de Staib, asimilación de azúcares, y método API ID 32C) y métodos moleculares (PCR a partir de las suspensiones de levaduras con primers específicos para: i) diferenciar entre C. albicans, C. dubliniensis y C. africana (gen actina y HWP1); ii) C. parapsilosis, C. orthopsilosis y C. metapsilosis (regiones ITS1-ITS2 del rDNA); y iii) C. glabrata, C. bracarensis y C. nivariensis (gen RLP31 que codifica para una proteína ribosomal de 60S). Se realizaron además estudios microbiológicos por métodos convencionales para la identificación de S. agalactiae, Ureaplasma spp., Mycoplasma hominis. Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis y Trichomonas vaginalis, Se realizó el análisis estadístico de los resultados mediante estadísticas descriptivas y el test de Chi cuadrado. Programa GraphPad Prism (versión 6.0). Resultados: La prevalencia de CVV en las gestantes estudiadas fue del 25% (52/210). Se observó un incremento de los síntomas a medida que aumentaron las semanas de gestación, siendo mayor en el 2do y 3er trimestre del embarazo, probablemente secundario a la mayor colonización por Candida spp. La colonización por Candida spp alcanzó en las pacientes asintomáticas el 13,8 %. En las pacientes con CVV se aisló C. albicans en el 80,7% y el 19,3% restante fueron otras especies de levaduras, en tanto que en las pacientes asintomáticas en el 50% se aislaron S. cerevisiae, Rhodotorula spp y Candida no- albicans (p <0,005). Ello sugiere que la colonización de levaduras en la vagina se asocia con Candida no- albicans u otras levaduras y que el desarrollo de la CVV dependería entre otros factores del reemplazo de estas especies por C. albicans. En las CVV, los aislamientos de especies de Candida no- albicans dominantes fueron C. glabrata (7,68%) y C. dubliniensis (3,84%). Estas dos últimas especies, se hallaron en las gestantes tanto como biota colonizante como en las VVC, en ambos casos con una diferencia no significativa. Los métodos moleculares empleados en el presente trabajo permitieron diferenciar las especies de Candida no distinguidas mediante métodos fenotípicos convencionales, como a C. parapsilosis sensu stricto. La amplificación por PCR para el intrón del gen de actina en C. dubliniensis corroboró la identificación microbiológica convencional. No se registró mediante la PCR con los cebadores específicos la presencia de C. africana, C. bracarensis y C. nivariensis. La amplificación por PCR del gen HWP1 permitió detectar aislamientos de C albicans heterocigotos y homocigotas para este gen, no encontrándose diferencias significativas en las pacientes con CVV y en aquellas con portación asintomática de este patógeno. Al considerar otros patógenos en la población estudiada (n=210) observamos que la VB afectó al 18,09 %, C. trachomatis al 1,43%, N. gonorrhoeae al 0,48%, Ureaplasma spp. y Mycoplasmas hominis al 17,62% y 2,85%, respectivamente. En las pacientes que cursaban el embarazo entre las semanas 35 y 37 (n= 64) se halló S. agalactiae en el 12,5 % de las pacientes, y en un 4,7% se asoció con C. albicans. Algunas especies de Candida se asociaron con vaginosis bacteriana (VB), Streptococcus agalactiae, Ureaplasma spp. y Mycoplasma hominis. Conclusiones: La prevalencia de CVV en embarazadas fue del 25% y C. albicans la especie más frecuente. Los métodos fenotípicos no resultaron concluyentes en la identificación de las distintas especies de Candida, mientras que el empleo de técnicas moleculares, permitió un conocimiento más certero de la epidemiología en mujeres gestantes en Argentina, particularmente por la importancia en especies C. albicans y no albicans.
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Abstract:
Introduction. Pregnancy is one of the risk factors for the development of vulvovaginal candidiasis (VVC). Its diagnosis and treatment can prevent potential obstetrical and gynecological complications. The species Candida albicans is the primary etiological agent; however, VVC due to non-Candida albicans species has increased gradually and is becoming more resistant to antifungal agents. Thus, the identification of Candida isolates is essential since conventional methods in diagnostic microbiology are inconclusive for some species. Objective. Report on the frequency of VVC and the carriage of Candida species in immunocompetent pregnant patients. Determine the distribution and prevalence of yeasts from different species isolated from patients with VVC and asymptomatic carriage of these microorganisms. Differentiate the C. albicans species complex (C. albicans, C. dubliniensis and C. africana), C. parapsilosis and C. glabrata by molecular methods. Compare conventional microbiological techniques with molecular methods aimed at its detection. Determine the frequency of other pathogens with increased obstetric risk factors or causing vulovaginal infections and recognize the possible association with the different Candida species. Materials and Methods. We obtained 210 vaginal swabs and 64 vaginal secretion samples from immunocompetent pregnant women at 35-37 weeks of gestation to analyze Streptococcus agalactiae and its association with Candida species. For yeast identification, conventional microbiological studies were performed (microscopic examination of samples, CHROMagar Candida culture media, chlamydoconidia production in milk agar 1% Tween 80 and Staib medium, assimilation of sugars, and API ID 32C method) and molecular methods (PCR from yeast suspensions using specific primers in order to: i) differentiate between C. albicans, C. dubliniensis and C. africana (actin and HWP1 gene); ii) C. parapsilosis, C. orthopsilosis and C. metapsilosis (ITS1-ITS2 regions of the rDNA); and iii) C. glabrata, C. bracarensis and C. nivariensis (RLP31 gene encoding a 60S ribosomal protein). Microbiological studies were also carried out by conventional methods for the identification of S. agalactiae, Ureaplasma spp., Mycoplasma hominis, Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis and Trichomonas vaginalis. Statistical analysis of the results was performed using descriptive statistics and chi-square test; GraphPad Prism (version 6.0). Results: The prevalence of VVC in pregnant women was 25% (52/210). Increased symptoms were observed as gestation progressed, being higher in the 2nd and 3rd trimester of pregnancy, probably secondary to the increased colonization by Candida spp. Colonization by Candida spp in asymptomatic patients was 13.8%. C. albicans was isolated in 80.7% of VVC patients and the remaining 19.3% showed other yeast species, whereas in 50% of asymptomatic patients, S. cerevisiae, Rhodotorula spp and non-Candida albicans were isolated (p <0.005). This suggests that yeast colonization in the vagina is associated with non-Candida albicans or other yeasts and that the development of VVC could depend, among other factors, on the replacement of these species with C. albicans. In the VVC population, the most predominant isolates of non- Candida albicans species were C.glabrata (7.68%) and C. dubliniensis (3.84%). The latter two species were found in pregnant women as well as in colonizing VVC biota, in both cases with no significant differences. The molecular methods used in this study allowed the differentiation of Candida species not distinguished by conventional phenotyping, like C. parapsilosis sensu stricto. PCR amplification of the intron of the actin gene in C. dubliniensis confirmed the conventional microbiological identification. Neither the presence of C. africana, C. bracarensis nor C. nivariensis could be observed by PCR using specific primers. PCR amplification of the HWP1 gene allowed the identification of isolates of heterozygous and homozygous C. albicans for this gene. No significant differences were observed in VVC patients or in those with asymptomatic carriage of the pathogen. When considering other pathogens engaged in the study population (n=210), we observed that BV involved 18.09%, C. trachomatis 1.43%, N. gonorrhoeae 0.48%, Ureaplasma spp. and Mycoplasma hominis 17.62% and 2.85% respectively. S. agalactiae was found in 12.5% of pregnant women at 35-37 weeks of gestation (n=64), and 4.7% was associated with C. albicans. Some Candida species were associated with bacterial vaginosis (BV), Streptococcus agalactiae, Ureaplasma spp. and Mycoplasma hominis. Conclusions: The prevalence of VVC in pregnant women was 25% with C. albicans being the most common species. The phenotypic methods were inconclusive in identifying the different Candida species, while the use of molecular techniques provided a more accurate knowledge of this epidemiology in pregnant women in Argentina, particularly due to the importance of C. albicans and non-C. albicans species.
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Calificación:
Sobresaliente (10 Diez puntos)
Dictamen:
El trabajo de tesis fue expuesto en forma, concisa y clara. La redacción fue ordenada y con bibliografía actualizada. El trabajo permite avanzar en el conocimiento de la epidemiología molecular de la candidiasis vulvovaginal. El trabajo realizado exigió un gran esfuerzo y dedicación. La presentación oral de la tesis fue excelente y la maestranda defendió con mucha solvencia su trabajo y demostró un vasto conocimiento del tema.
Identificador(es):
http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=masteruba&cl=CL1&d=HWA_1123
Filiación Institucional:
Fil: Mucci, María Josefina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; Argentina
Institución aportante:
Facultad de Farmacia y Bioquímica
Biblioteca cooperante:
Biblioteca de la Facultad de Farmacia y Bioquímica
Derechos:
info:eu-repo/semantics/openAccess
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/
Licencia de uso:
Licencia Creative Commons

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Cita bibliográfica:

Mucci, María Josefina (2015-07-13). Epidemiología molecular de la candidiasis vulvovaginal (CVV) en gestantes en Argentina  (tesis de maestría). Universidad de Buenos Aires.  Facultad de Farmacia y Bioquímica. [consultado:  ] Disponible en el Repositorio Digital Institucional de la Universidad de Buenos Aires:  <http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=masteruba&cl=CL1&d=HWA_1123>