2019junio
Buzzano, Orlando Omar
2019-06-28

Descripción: Esta investigación priorizó el interés de evaluar e interrelacionar los diferentes datos obtenidos de los veinte pacientes caninos con CMD primaria con los cuales hemos trabajado. En este contexto, realizamos distintos estudios para conocer si se presentaban cambios en la estructura cardíaca, en las funciones o en la condición eléctrica y, de ser así, poder cuantificarlos para comprobar los efectos terapéuticos del clorhidrato de amiodarona (A) y de su combinación con el maleato de enalapril (A+E). Los pacientes con CMD primaria incluidos se separaron en dos grupos (G); (G1- CMD y G2-CMD). Según los protocolos terapéuticos utilizados, los mencionados grupos recibieron la denominación definitiva de G1-CMD+A y G2-CMD A+E respectivamente. En el G1-CMD+A se logró controlar o mejorar las variables relacionadas con las alteraciones electrofisiológicas. Dicho efecto es atribuido a las propiedades del clorhidrato de amiodarona. No ocurrió lo mismo con las variables relacionadas con los cambios estructurales y funcionales, ya que, el propio avance de la CMD primaria, en general, continuó deteriorándolas. A través de los distintos controles cardiológicos realizados, observábamos que,los resultados más importantes se produjeron en el G2-CMD A+E. En dicho grupo, también mejoraron las variables electrofisiológicas alteradas, los aspectos funcionales y anatómicos, hecho que atribuimos al efecto del maleato de enalapril. Además, fueron relevantes en el G2-CMD A+E las modificaciones que se encontraron tanto en las variables de estructura como en las de función sistodiastólica del ventrículo izquierdo (VI). Estos cambios, demostraron en general, una mejor función de bomba y el control de la disritmia ventricular. Los aspectos comparativos de todos los casos se refieren a los valores pre y postratamiento intragrupo. Creemos que hubiésemos logrado mejores resultados en algunas de las variables estudiadas, prolongando el lapso terapéutico. Para explicar más claramente lo que sucedió en nuestra investigación,agrupamos las veintinueve variables y los dos índices, con los que trabajamos, de la siguiente manera: 1.- Evaluación de la función sistólica del VI. Para estudiar los cambios pre y post tratamiento de esta función, hemos analizado en ambos grupos la evolución de dieciocho variables. Estas se detallan en materiales y métodos, y sea analizan en resultados. Como mencionáramos, dicha función mejoró en el G2-CMD A+E, encontrándose: 1.- Una disminución en los valores de: la SSPE, del DDVI, del DSVI, de la MMVI, del IMMVI, del VDF, del VSF, del PPE, y del IE (este último desde ambas ventanas). La VacCf reveló una tendencia a la reducción del tiempo de acortamiento, pero no hubo diferencias significativas. 2.- Un aumento de: la FA%, la FAm%, la FEy%, la Vp. Ao, del PE, y la onda S` tisular parietal.3.- No hemos encontrado modificaciones en el EPR. Es importante mencionar que el AI continuó aumentando sus dimensiones en los grupos tratados; consecuentemente, suponemos que el maleato de enalapril no remodeló inversamente esta cámara, pero si lo hizo en el VI, en el cual se observó la disminución de ambos diámetros. Con respecto a los dos índices estudiados (Weissler y Tei) se observó que, al inicio de la investigación ambos estaban aumentados en los dos grupos (G1-CMD y G2- CMD). Al final de la experiencia dichos índices se redujeron en el G2-CMD A+E, indicando una mejoría de la función sistólica y sistodiastólica respectivamente. 2.- Evaluación de la función diastólica del VI: Esta función se ha estudiado analizando en forma conjunta cinco variables. Hemos comprobado por Doppler de flujo transmitral que el G1 presentó características de un patrón restrictivo, indicativo de alteración diastólica. No ocurrió lo mismo en el G2-CMD A+E, en el cual se observó la disminución de: la Vp. de la onda E y de la relación E/A, así como el aumento del Tpo.D.E, de la Vp. de la onda A y del TRIV. 3.- Evaluación electrofisiológica no invasiva.Hemos analizado y categorizado seis variables electrofisiológicas de la siguiente manera: 3.1.- Evaluación de las alteraciones de la repolarización ventricular: 3.1.1.- El IQT se prolongó aproximadamente un 10% en ambos grupos. Asimismo, en todos los caninos con CMD no tratados, dicho IQT fue menor a causa del aumento compensatorio de la FC.3.1.2.- La DTR (IT-p-e) se redujo en los dos grupos tratados con clorhidrato de amiodarona. El efecto contrario ocurrió en los dos grupos previo al tratamiento. 3.1.3.- No hemos hallado MAlt.T en ninguno de los grupos investigados. 3.2.- Evaluación del sistema nervioso autónomo: 3.2.1.- La VFC en el componente SDNN disminuyó en los G1-CMD y G2-CMD por efecto del incremento de la FC. En ambos grupos tratados (G1-CMD+A y G2-CMD A+E) observamos un valor mayor del SDNN. 3.2.2.- El parámetro TO% de la TFC fue negativo en el G1-CMD y G2-CMD y positivo tanto en el G1-CMD+A como en el G2-CMD A+E. La amiodarona incrementó la longitud de ciclo RR post CPV, y no lo hizo de la misma manera en la secuencia pre CPV. El TS mseg/RR fue mayor que la referencia de normalidad y disminuyó en los dos grupos tratados. 3.3.- Evaluación del segmento ST: 3.3.1. - En ninguno de los grupos de caninos con CMD (pretratados y posteriormente tratados) se comprobó la existencia de supra o infradesnivel del segmento ST significativa. Consideramos que, tanto la hipótesis como los objetivos planteados en esta investigación han sido cumplidos. Asimismo, hemos dado a conocer nuestros resultados a través de diversas publicaciones científicas con referato.Un aspecto fundamental de la presente investigación es que, si bien el tratamiento utilizado no cura la enfermedad, ha permitido mejorar la calidad de vida de los enfermos estudiados y prolongar su supervivencia.
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Tipo de documento: tesis doctoral | Formato: unknown (tamaño kb.)

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abril
Gulin, Julián Ernesto Nicolás
2019-04-05

Descripción: La enfermedad de Chagas, endémica del continente americano, es una antropozoonosis causada por el protozoario Trypanosoma cruzi (T. cruzi) que afecta aproximadamente a 10 millones de personas provocando cerca de 10.000 muertes por año debido a complicaciones cardiovasculares y/o gastrointestinales. Los medicamentos disponibles, nifurtimox y benznidazol, se asocian a una frecuencia relativamente alta de eventos adversos, siendo los más comunes náuseas, anorexia, cefalea, molestias gastrointestinales y artralgias. También es común la aparición de eritema y prurito. Estos efectos, sumado a la prolongada duración del tratamiento (hasta 2 meses) y a la percepción de limitada efectividad durante la fase crónica, son causas frecuentes de abandono del tratamiento. En este escenario, la búsqueda de alternativas terapéuticas seguras y accesibles para el tratamiento de la enfermedad de Chagas es un objetivo pendiente. Existe escaso interés por parte de la industria farmacéutica en investigación y desarrollo de medicamentos para la enfermedad de Chagas, en gran medida debido a las características socioeconómicas de la población afectada. El reposicionamiento o reorientación de fármacos y la terapia combinatoria surgen como alternativas al desarrollo de nuevas moléculas, e implican una inversión de recursos significativamente menor. En este trabajo se seleccionaron fármacos disponibles para uso clínico y se desarrollaron métodos de evaluación in vitro en in vivo para determinar la actividad anti-T. cruzi de las drogas candidatas. Se evaluaron treinta y ocho fármacos sobre estadios tripomastigote y amastigote in vitro con un sistema de cribado de bajo rendimiento utilizando la cepa VD de T. cruzi, caracterizada previamente. Además, se estandarizó y optimizó un sistema de cribado de alto rendimiento con la cepa Dm28c/pLacZ, con el cual se evaluaron otras treinta y ocho drogas. A partir de estos resultados, cinco drogas (nitazoxanida, pirimetamina, ivermectina voriconazol y miltefosina) fueron evaluadas en un modelo murino de infección aguda con T. cruzi. Los efectos tripanocidas y/o tripanostáticos de las drogas estudiadas permiten confirmar la actividad anti-T. cruzi de los fármacos disponibles para uso clínico, validando la estrategia del reposicionamiento para identificar nuevos compuestos candidatos para el tratamiento de la enfermedad de Chagas.
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Tipo de documento: tesis doctoral | Formato: unknown (tamaño kb.)

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marzo
Marfil, María Jimena
2019-03-29

Descripción: La tuberculosis bovina, causada por Mycobacterium bovis (M. bovis), es endémica en la Argentina. Su presencia en el ganado bovino representa un riesgo para la salud humana debido a su carácter zoonótico, pudiendo además afectar a diversos mamíferos. En el hombre, M. bovis causa enfermedad con presentación pulmonar o extrapulmonar siendo la clínica indistinguible de la producida por Mycobacterium tuberculosis. Los más expuestos son los niños que consumen leche o sus derivados sin pasteurizar, los adultos relacionados con la actividad laboral pecuaria y también los cazadores. Para evitar la llegada del agente al consumidor, una de las últimas barreras de protección es la inspección bromatológica en el frigorífico para poder detectar lesiones compatibles con tuberculosis y decomisar los órganos afectados y si está generalizado la res completa. Se realiza visualmente y por palpación, pero debido a la patogenia de la tuberculosis, sólo las lesiones crónicas pueden ser evidenciadas por este monitoreo. La micobacteria puede estar presente incluso en tejidos sin lesión aparente, siendo los principales órganos afectados los linfonódulos y los pulmones, pudiéndose encontrar en otros órganos parenquimatosos como el hígado. Esto puede conducir a escapes del sistema de vigilancia permitiendo que las micobacterias lleguen a los comercios y posteriormente al consumidor. En este trabajo fueron recolectados 210 pulmones junto con los linfonódulos orrespondientes y 6 hígados bovinos, provenientes de un frigorífico y de 6 carnicerías de la Ciudad Autónoma de Buenos Aires y de la provincia de Buenos Aires. Los pulmones recolectados en el frigorífico fueron inspeccionados in situ y se tomaron muestras del órgano para el trabajo en el laboratorio. Los pulmones e hígados que fueron comprados completos en carnicerías y fueron inspeccionados en el laboratorio. Se obtuvieron un total de 5 aislamientos de M. bovis en medio Stonebrink confirmados por PCR IS-6110 (aislamientos N° 134, 719, 179, 182 y 184) y además 12 aislamientos de micobacterias no tuberculosas confirmadas por la secuenciación de los genes hsp65, rpoB, 16S ARNr y secuenciación genómica de alto rendimiento para uno de ellos. Los aislamientos de M. bovis fueron caracterizados molecularmente por Spoligotyping y MIRU-VNTR. Se pudieron distinguir 3 patrones de Spoligotyping que se correspondieron con 3 patrones de MIRU-VNTR, 3 aislamientos compartieron ambos patrones y los otros 2 fueron únicos. Adicionalmente, se investigó en 3 de los aislamientos su capacidad de resistencia a drogas utilizadas en el tratamiento de la tuberculosis en humanos (rifampicina, isoniazida, etionamida, levofloxacina y estreptomicina), encontrándose que el aislamiento 184 era resistente a isoniazida y el aislamiento 134 era multirresistente (presentando resistencia a los 4 antibióticos probados y considerado ?border? para levofloxacina). Se realizó la secuenciación completa del genoma de uno de los aislamientos identificado como M. kansasii empleando una plataforma Illumina mySeq. El genoma fue anotado y se describió sus características así como también se evaluó la presencia de single nucleotide polymorphism (SNPs) en genes de virulencia y genes relacionados a la resistencia a antibióticos y codificantes de antígenos empleados para el diagnóstico de tuberculosis. Se evaluó la virulencia y transmisibilidad de los aislamientos N° 134 y 182 junto con una cepa de referencia M. bovis AN5 (considerada de virulencia intermedia), en un modelo murino. Los animales fueron inoculados intratraquealmente, con 1x105 UFC de cada una de las cepas a evaluar, y dichos animales se pusieron en contacto con ratones sin inocular en una relación 1:1. Se evaluó la virulencia en los animales inoculados, mientras que en los contactos sanos, se evaluó la transmisibilidad de las cepas. Se realizó la eutanasia de 5 animales infectados y 5 animales contactos sanos de cada grupo, en los tiempos 30, 60 y 90 días post-inoculación. Se cultivaron los pulmones y bazos de todos los animales infectados y los contactos sanos en los medios apropiados, evaluando su crecimiento semanalmente. Adicionalmente, los bazos fueron procesados para cuantificar las citoquinas IL-4, TNF ? e INF? por citometría de flujo mediante el kit comercial Cytometric bead array. El aislamiento N° 134 demostró ser virulento por producir sintomatología incompatible con la vida al día 16 posterior a la inoculación, produciendo la muerte de 9 animales, los 6 restantes fueron eutanasiados. El aislamiento N° 182 generó esplenomegalia en los ratones infectados, pero no se observó el desmejoramiento ni la muerte de los animales. Además, se pudo describir la transmisibilidad del aislamiento 182, mediante el aislamiento de la micobacteria a partir de bazo de uno de los animales ?contacto?. A partir del presente trabajo se pudo detectar la presencia de micobacterias tanto zoonóticas como ambientales en vísceras comercializadas. La virulencia, transmisibilidad y la resistencia a antibióticos de cada una de ellas fue variable, requiriéndose de estudios futuros para una mejor comprensión del impacto de estas observaciones en la dinámica de la enfermedad tanto en el ámbito veterinario como en Salud pública.
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Tipo de documento: tesis doctoral | Formato: PDF (tamaño kb.)

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Porta, Natalia Gabriela
2019-03-27

Temas:   Virología   -  Ternero   -  Virus de la leucosis bovina   -  Anticuerpos   -  BLV   -  ELISA   -  PCR   -  Ig Y   -  Transmisión   -  Leche

Descripción: En este trabajo se estudió el efecto del uso de anticuerpos de yema de huevo (IgY) anti BLV específicos como suplemento en la leche de consumo de terneros durante todo el período de cría, monitoreando a los animales desde el nacimiento hasta los 9 meses de vida. El objetivo central fue obtener evidencia que el consumo de leche pueda ser una vía de transmisión del virus y si así fuera, proponer una alternativa para interferir con el desafío natural de infección por BLV por consumo de leche. Como objetivo complementario, se realizaron infecciones experimentales en ovinos en las que se determinó la dosis mínima infectiva tanto de virus asociado a células FLKBLV como de virus libre en sobrenadante celular de FLK-BLV. También se analizó la capacidad neutralizante de los anticuerpos presentes en suero de un animal infectado con BLV. Cabe destacar que previamente al uso de animales se intentó poner a punto un ensayo in vitro. Se realizó la caracterización del rodeo donde se desarrolló la experiencia con terneros. Se observó una prevalencia individual de anticuerpos del 96% en las muestras de sangre, y de un 90% en las muestras de leche. Los títulos de anticuerpos en sangre fueron significativamente más altos que los encontrados en leche. Se detectó la presencia de provirus en el 82% de las muestras de sangre y 59% de las muestras individuales de leche. La carga proviral en leche fue significativamente menor que en sangre. En la leche de tanque del ordeñe diario, se encontraron anticuerpos con un título de 1:32 en todas las muestras, mientras que en las muestras de leches individuales el rango de títulos de anticuerpos variaba entre <1:16 y >1:64. Al comparar las leches individuales con un título de 1:32 con las leches de tanque que poseen el mismo título, se pudo observar que el 90% de las leches de tanque evidencian cargas provirales detectables, mientras que solo el 60% de esas leches individuales evidencian carga proviral detectable. Se detectaron anticuerpos anti BLV en el 95,5% de los terneros recién nacidos, lo que demostraría un correcto calostrado de los animales, de los cuales el 13% de los terneros nacieron infectados (detección de provirus en sangre). En el bioensayo de ovinos, se observó que fueron necesarias 5.000 células FLK-BLV por inoculo para generar la infección en los dos corderos inoculados, mientras que el virus libre en sobrenadante celular FLK-BLV resultó infectivo hasta la dilución 1/1.000. El suero bovino positivo a BLV impidió la infección en los corderos inoculados con el virus libre de células, mientras que todos los ovinos se infectaron cuando se inocularon con virus libre de células en presencia de suero bovino negativo a BLV. Se produjo la cantidad necesaria de un preparado de polvo de huevo con anticuerpos específicos anti BLV para el ensayo controlado de eficacia a campo. La preparación fue caracterizada por ELISA y por infección experimental en corderos. Todos los corderos resultaron infectados cuando fueron inoculados con virus libre de células FLK-BLV previamente incubado con la preparación de IgY concentrada anti BLV y con la preparación de polvo de huevo anti BLV, no demostrando la capacidad de las IgY anti BLV de neutralizar el virus presente en el sobrenadante de células FLK-BLV. Si bien el ensayo in vivo fue una alternativa para el ensayo in vitro con el objeto de analizar la capacidad neutralizante de los anticuerpos IgYs, y aunque no se obtuvieron los resultados esperados, su realización ha resultado beneficiosa para el grupo de trabajo, como una herramienta nueva y válida para realizar distintos estudios. Este polvo fue suministrado a los terneros en cada toma de leche durante la cría. Paralelamente en un grupo control, no se les ofreció ningún suplemento en las tomas diarias de leche. En los primeros días de vida de los terneros se observó tanto en el grupo control como en el grupo tratado, anticuerpos en el 93% de las muestras. Estos valores concuerdan con lo previamente reportado para infecciones en terneros recién nacidos. Los siguientes muestreos se realizaron hasta completar el seguimiento a los 9 meses de los terneros en donde se observó una prevalencia del 6.6% en el grupo tratado y del 7.7% en el grupo control. Este trabajo de tesis aportó datos sobre la epidemiologia natural de la infección, que deberían ser utilizados para el diseño y prosecución de una estrategia de control. En un contexto de infección natural francamente endémica, la estrategia de uso de anticuerpos como complemento en la toma diaria de leche podría ser valiosa para la reducción de la dinámica en la edad temprana.
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Tipo de documento: tesis doctoral | Formato: PDF (tamaño kb.)

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Quintana, María Eugenia
2019-03-25

Descripción: El Virus de la Diarrea Viral Bovina (VDVB) representa un importante desafío a nivel productivo debido a su carácter endémico a nivel mundial. La infección por el VDVB es altamente prevalente en la Argentina y provoca pérdidas económicas para la industria lechera y ganadera, asociadas mayormente a problemas reproductivos. La enfermedad provocada por el VDVB se presenta con una variada signología que puede ir desde un curso subclínico a cuadros agudos hemorrágicos cuyo desenlace suele ser fatal. A esto se suma el efecto inmunosupresor del VDVB que predispone a infecciones bacterianas y parasitarias que pueden comprometer la vida del animal. El VDVB pertenece a la familia Flaviviridae, género Pestivirus y está representado por 3 genotipos: VDVB-1, VDVB-2 y VDVB-3 o ?Virus HoBi-like?. A su vez, este agente puede ser clasificado según su biotipo en citopático (CP) y no citopático (NCP). Una característica fundamental del VDVB es su capacidad de generar infecciones persistentes. El nacimiento de animales persistentemente infectados (PI) tiene lugar cuando las hembras preñadas se infectan con una cepa NCP del VDVB entre los días 30 y 150 de gestación. Estos individuos no son capaces de montar una respuesta inmune y eliminan grandes cantidades de virus en todas las excreciones y secreciones. Actualmente se proponen dos medidas principales para el control de la enfermedad: la detección y eliminación de animales PI, y la posterior vacunación de todo el rodeo no PI. La primera medida es recibida con fuerte resistencia por parte de los productores. Por otro lado, la inmunidad que confieren las vacunas que se encuentran en el mercado requiere más de dos semanas para desarrollarse e incluso de más de una dosis, siendo dudosa su eficacia en presencia de inmunidad materna. A estos inconvenientes se suma que la mayoría de las formulaciones comerciales no brindan cobertura contra todas las cepas del virus que circulan en el campo. Para complementar el conjunto de herramientas para el control del VDVB se precisan antivirales que puedan prevenir la dispersión viral y evitar la inmunosupresión. Los antivirales podrían utilizarse en casos de brotes o como preventivo antes de ciertas maniobras como el transporte, encierro, inseminaciones, introducción de nuevos animales, etc. En este trabajo proponemos el uso de Interferones (IFNs) ya que son antivirales naturales, de sencilla producción y amplio espectro. En contraste con la respuesta inmune adaptativa, los mecanismos innatos de defensa inmune mediados por los IFNs son inmediatos, y resultan operativos incluso en las primeras etapas de desarrollo intrauterino. La administración de IFNs como agentes bioterapéuticos es una medida efectiva para el tratamiento de varias infecciones virales. Tradicionalmente, en terapias desarrolladas para humanos, se ha utilizado el IFN de tipo I (IFN-?). Este está siendo actualmente reemplazado, dada su toxicidad hematológica, por el IFN de tipo III (IFN-?). El efecto antiviral de esta última citoquina es idéntico al del IFN-? pero localizado en epitelios, principalmente en mucosas, sin efecto sobre las células sanguíneas. La familia del IFN-? se encuentra conservada en bovinos y el tratamiento con IFN-?3 ha mostrado ser eficaz en controlar la infección oronasal por el virus de la fiebre aftosa (VFA). No se ha estudiado la aplicación terapéutica ni la funcionalidad del IFN-?3 contra otros virus que afectan la producción ganadera. Este trabajo plantea las siguientes hipótesis: ?El IFN-?3 bovino posee actividad antiviral contra el VDVB?; y ?El IFN-?3 bovino recombinante es un candidato para ser utilizado como bioterapéutico en infecciones con el VDVB?. Para contrastar estas hipótesis, hemos clonado y expresado el IFN-?3 y el IFN-? bovinos en células de mamífero en cultivo y evaluamos su actividad antiviral frente a distintas cepas del VDVB tanto in vitro como in vivo para comprobar su potencial uso como bioterapéutico en bovinos. Los IFN recombinantes (IFNr) producidos en sobrenadantes de células HEK293T transfectadas fueron cuantificados en función a las unidades activas determinadas sobre un virus de referencia y utilizando un ensayo reportero de actividad basado en células de riñón bovino Madin-Darby T2 (MDBK-T2) transfectadas en forma estable con el promotor del gen Mx río arriba del ORF para la cloranfenicol acetiltransferasa (CAT). Para establecer la sensibilidad de cepas de campo y de referencia del VDVB a los IFNr, desarrollamos una técnica de alto rendimiento aplicable a cepas CP y NPC. Se trata de un ELISA en células que permite la medición directa de la infección detectando una proteína no estructural del virus en microplacas de cultivo celular, sin necesidad de cosechar las células. Utilizando este ensayo estimamos la concentración inhibitoria 50% para cada IFNr utilizando seis cepas de VDVB de diferente biotipo y genotipo, verificando que las cepas CP son más susceptibles a ambos IFNr que las NCP y, particularmente, las cepas NCP de tipo 2 resultaron más sensibles al IFN-?. La actividad de los IFNr fue evaluada luego in vivo, en un modelo murino de virulencia desarrollado en nuestro laboratorio, en el que ratones de la cepa BALB/c infectados con cepas del tipo 2 del VDVB desarrollan viremia a los 4 ó 7 días post infección (dpi), según la virulencia de la cepa. La cepa de alta virulencia suprimió además la respuesta proinflamatoria en estos animales. A juzgar por nuestros resultados, el tratamiento de los ratones infectados con la cepa 98-124 (de baja virulencia) con IFNr murinos comerciales mostró que el IFN-? fue más eficiente en prevenir la infección mientras que el IFN-? evitó la viremia. Experimentos de tratamiento combinado con dos dosis de IFN pre y post infección, combinando el uso de ambos IFNs, reveló que el tratamiento con IFN-? antes de la infección seguido luego por IFN-? fue efectivo en controlar la viremia en los ratones. Además, el tratamiento pre y post-infección con IFN-? resultaba igualmente protector. La limitación de la replicación del VDVB se verificó además por la ausencia de TNF-? sistémico. Estos resultados entonces indicaron que el IFN-? resultaba efectivo contra el VDVB in vivo, y que no era necesario combinarlo con IFN-?. Para evaluar el uso de nuestros IFNr en bovinos establecimos primero la inocuidad de los mismos sobre células sanguíneas bovinas (ex vivo) donde ambos IFNs mostraron ser seguros a las dosis de uso propuestas, a pesar de que el IFN-? causó apoptosis de células inmunes bovinas a dosis altas. La determinación de la inocuidad posológica se realizó directamente en los animales mediante el control de parámetros hematológicos durante 14 días post-inoculación, revelando la ausencia de toxicidad con las diferentes dosis de IFN?r evaluadas. A partir de estos resultados se realizó una prueba de concepto en terneros para evaluar la factibilidad de la utilización de IFN-?r frente a la infección con una cepa de baja virulencia aislada en la provincia de Buenos Aires, del genotipo 2 y biotipo NCP, ampliamente caracterizada en nuestro laboratorio. Se seleccionaron para el estudio 6 terneras libres del VDVB, que fueron infectadas con la cepa antedicha. Cuatro de ellas fueron inoculadas por vía sub-cutánea con dos dosis de IFN-?r dos días previos a la infección y dos días posteriores a la misma, mientras que las otras dos terneras recibieron tratamiento placebo (medio de dilución). Los animales infectados-no tratados desarrollaron enfermedad clínica con síntomas respiratorios entre los 2 a 4 días post-infección, detectándose también viremia y excreción viral a través de secreciones nasales. Los animales del grupo tratado con IFN-?r no desarrollaron enfermedad ni presentaron signos clínicos. En tres de ellos no de detectó viremia ni excreción viral nasal. Un individuo de este último grupo presentó viremia y excreción viral pero con valores menores a los del grupo no tratado. Hemos desarrollado un antiviral seguro y eficaz, IFN-?3 bovino recombinante, demostrando la factibilidad de su potencial utilización para la prevención y el tratamiento de las infecciones por el VDVB. Comprobamos el efecto antiviral del IFN-?r sobre cepas de campo y de referencia in vitro, como así también su inocuidad y eficacia en bovinos contra una cepa de campo Argentina del genotipo 2, biotipo NCP. Además, establecimos un modelo ratón de viremia por el VDVB, de gran utilidad para los estudios in vivo con este virus. Desarrollamos una técnica novedosa, que consiste en un ELISA en células que utiliza un anticuerpo detector contra una proteína conservada no estructural que puede ser potencialmente aplicable para medir con precisión la infectividad de cualquier cepa viral, independientemente de su capacidad de causar la muerte de células en cultivo. Este trabajo constituye la primera evidencia experimental del potencial bioterapéutico del IFN-? bovino contra el VDVB in vivo, abriendo una nueva perspectiva enfocada en el uso de antivirales biológicos económicos, biodegradables y seguros para reducir la incidencia de las infecciones virales en animales en ámbitos productivos. La aplicación de esta herramienta podría impactar indirectamente en la disminución del uso de antibióticos al decrecer la tasa de infecciones bacterianas que devienen de las infecciones virales inmunosupresoras.
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Vidal, Patricia Noemí
2019-03-22

Descripción: La Enfermedad de Cushing (EC) se caracteriza por un estado de hipercortisolismoncrónico, que provoca alteraciones metabólicas y sistémicas. Está asociada a gran cantidad de comorbilidades entre ellas la hipertensión arterial, de alta prevalencia, que conduce, junto con el hipercortisolismo, a la enfermedad renal, y ambas tienen repercusión en parámetros de coagulación, induciendo un estado denhipercoagulabilidad con riesgo de trombosis.nPara el estudio de estas comorbilidades se evaluaron perros con EC, evidenciándosendisminución del oxido nítrico (NO) correlacionado con el aumento del cortisol (r= -0.67; P<0.0001), asociados al aumento de presión arterial , con predominio de la presión diastólica (PD). PD correlacionó con cortisol (r=0.63; P<0.0001) de forma positiva y con el NO (r= -0.81; P<0.0001) de forma inversa. Repercutiendo la PD, en parámetros renales afectándose la tasa de filtrado glomerular (GFR) (r= - 0.58; P=0.007) y aumentando la proteinuria,nevidenciada por el aumento en la relación proteína/creatinina en orina (UPC) (r= 0.8;nP<0.001). UPC es un indicador de daño glomerular temprano. La utilización del Índicende resistencia (IR), relacionado al UPC y la presión arterial, posee gran valor pronostico de afección renal. Para el posterior empleo de la terapia renoprotectora enhipotensora más efectiva, se realizó la comparación entre 2 grandes grupos de perrosncon EC según valor de UPC, a su vez subdivididos según presión arterial. Se comparónenalapril vs doxazosina entre los distintos grupo, siendo más efectiva la Dozaxosina en reducir UPC (*P-valorBvsE= 0,01) y presión arterial (PS: P-valorBvsE = 0,01 y P-valorBvsD= 0,029; PD P-valorBvsE = 0,002).nSe pudo comprobar el estado de hipercoagulabilidad en perros con EC, a través de su comparación con un grupo control (perros sanos), encontrándose las concentracionesnde Factor de von-Willebrand (FvW) y el Inhibidor del Activador de Plasminogeno-1 (PAI-1) elevadas (P-valor=0,003 y P-valor=0,002 respectivamente), y disminuida la actividad de Antitrombina III (ATIII), la cual se asoció al aumento de UPC (r=-0,75; Pvalor <0,001) y presencia de Dímero-D + (DD) (r=-0,5; P-valor=0,008), habiendoncorrelación en ambos casos. Resultados de gran utilidad para su posterior utilizaciónncomo indicadores tempranos de riesgo de trombosis o Tromboembolismo pulmonarn(TEP), asociados a sintomatología clínica e imágenes confirmatorias, para posterior terapia profiláctica. Se evaluaron las concentraciones de aldosterona y angiotensina II (Ang II) en perrosncon EC comparándola con perros sanos, para explicar parte de los mecanismosninvolucrados en el desarrollo de hipertensión. Los resultados arrojaron que lanaldosterona no estaría involucrada, ya que su concentración fue la misma en controles sanos que perros con EC (P-valor= 0,8), no así la Ang II que se la encontró aumentada en los perros Cushing (P-valor< 0,0001). Los datos aportados en esta tesis son de gran relevancia para ampliar el conocimientonen la fisiopatología de esta enfermedad y mejorar el diagnóstico precoz de estasncomorbilidades e implementar terapias preventivas adecuadas en la clínica diaria quenmejorarán la calidad y sobrevida del paciente.nPalabras clave: Enfermedad de Cushing
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Aporte: Biblioteca y Centro Multimedia de la Facultad de Ciencias Veterinarias

Barrionuevo, Florencia Mariel
2019-03-21

Descripción: La fiebre aftosa (FA) es una enfermedad viral infectocontagiosa de curso agudo que se caracteriza por producir lesiones vesiculares en tejidos de la mucosa oronasal (incluyendo lengua, encías y paladar), ubres, espacios interdigitales y rodetes coronarios de las pezuñas de los animales infectados. Su agente etiológico, el virus de la fiebre aftosa (VFA), es un virus perteneciente a la familia Picornaviridae que afecta a animales biungulados, incluyendo por tanto a bovinos, porcinos, caprinos y ovinos domésticos, junto con numerosas especies silvestres que pueden actuar como reservorios bajo determinadas condiciones ecológicas. La virulencia, el amplio rango de huéspedes, la diversidad de variantes y la alta capacidad infecciosa y de contagio del VFA, explican su presencia y re-emergencia en diversas partes del mundo y la convierten en un problema sanitario de escala global. La enfermedad genera enormes pérdidas económicas a la industria ganadera debido al cierre obligado de los mercados externos y a pérdidas considerables en el mercado interno, asociadas a la disminución de la producción, al sacrificio y al bloqueo del movimiento de animales. En trabajos previos de nuestro grupo de investigación, se evidenciaron respuestas inmunes de anticuerpos tanto a nivel sistémico como en mucosas, observables luego de la infección con VFA, así como de la vacunación sistémica en bovinos, siendo su ocurrencia, por lo tanto, independiente de la ruta inicial de contacto con el antígeno viral. Dentro de este panorama, la contribución relativa a la inmunidad protectora de los diferentes mecanismos inmunes potencialmente implicados en la respuesta generada, es difícil de discernir. La presente tesis doctoral plantea como hipótesis de trabajo que los anticuerpos sistémicos, administrados mediante la inmunización pasiva de terneros seronegativos para VFA, son capaces de evitar la diseminación del virus luego de la infección por vía aerógena y en ausencia de otros mecanismos inmunes. Para esto, inicialmente se realizaron una serie de experimentos donde se ajustaron las condiciones para la inmunización pasiva contra el VFA en terneros. En estos procedimientos se utilizaron plasmas de bovinos vacunados con formulaciones tetravalentes comerciales anti-aftosa de serie. Los mismos fueron reunidos en una sola fracción y diferentes volúmenes de esta preparación fueron transferidos a terneros seronegativos. Una vez realizado el procedimiento, se midieron diversos parámetros de inmunidad humoral específicos contra el VFA, entre las 0 h y los 30 días post-transferencia. A partir de estos resultados, se determinó el volumen de plasma requerido para llevar a cabo la inmunización pasiva, así como los protocolos de administración y los tiempos adecuados para realizar las infecciones posteriores en los animales pasivamente inmunizados. Para el segundo experimento, se utilizaron vacunas monovalentes de la cepa O1/Campos de alta carga antigénica, con las que se inmunizaron bovinos seronegativos (n=8). Se obtuvo plasma de cuatro de estos animales a los 7 días post-vacunación (dpv) y a los 26 dpv en los cuatro restantes. Así se conformaron dos pooles de plasma inmunes (7 y 26 dpv) que diferían tanto en la composición isotípica de las inmunoglobulinas, así como en los títulos de anticuerpos totales y neutralizantes anti-VFA. En el caso del pool de plasma de 7 dpv el isotipo predominante detectado fue la IgM y el título de anticuerpos neutralizantes fue 1,6; mientras que para el pool de 26 dpv, se detectaron ambos subtipos de IgG (1 y 2) y niveles menores de IgM, con un título de anticuerpos neutralizantes de 2,7. Los animales pasivamente inmunizados se infectaron por vía oronasal y estos resultados se compararon con los obtenidos en animales vacunados e infectados a los mismos tiempos post-vacunación (7 y 26 dpv). Nuestros resultados demostraron que los anticuerpos circulantes previenen la generalización de la fiebre aftosa solo en el caso de los animales pasivamente inmunizados con plasma de 26 dpv, ya que los animales que recibieron el plasma de 7 dpv mostraron signos clínicos de la enfermedad luego de la infección aerógena. Esto indicaría que, en ausencia de otros mecanismos inmunitarios adaptativos preexistentes, los anticuerpos circulantes en sangre efectivamente son capaces de evitar el desarrollo de la enfermedad, aunque existe un umbral de título de anticuerpos por debajo del cual se desencadena la enfermedad luego de la infección oronasal. Para el caso de los animales vacunados, se obtuvo una protección total de los mismos, tanto en los infectados a los 7 como a los 26 dpv. Esto ocurrió aun cuando el animal vacunado 7 días antes de la infección presentaba, al momento del desafío, niveles de anticuerpos sistémicos neutralizantes similares a los de los animales inmunizados pasivamente con plasma de 7 dpv y que mostraron signos clínicos de fiebre aftosa post-infección. El estudio de las respuestas de anticuerpos post-infección, tanto a nivel sistémico como en mucosas respiratorias, indicó que la vacunación promovió la generación de una respuesta de anticuerpos rápida tras la exposición al virus, presentando la misma un perfil de respuesta de tipo secundaria. En ambos casos, los infectados a los 7 dpv o a los 26 dpv, mostraron rápidos cambios de los isotipos predominantes de las inmunoglobulinas VFA-específicas, así como un aumento de los títulos de anticuerpos y de la avidez en los sueros obtenidos post-infección. Interesantemente, estas observaciones se verificaron tanto a nivel sistémico como local, en linfonódulos drenantes del tracto respiratorio. En conjunto estos resultados indican que los anticuerpos circulantes pueden ser suficientes para evitar la generalización de la enfermedad en bovinos infectados por la vía oronasal, aun en ausencia de otros mecanismos activos de inmunidad específica. A su vez, la caracterización de las respuestas de anticuerpos posteriores al desafío, tanto a nivel sistémico como local, reveló que la inmunización sistémica con vacunas convencionales anti-aftosa promovió rápidamente un aumento del título de anticuerpos, así como de la avidez de los sueros inmunes y la modificación en los isotipos en las inmunoglobulinas predominantes, todos cambios asociables a respuestas anamnésicas contra el virus. Se resalta el carácter protector de que estos procesos frente al establecimiento de la enfermedad, y el hecho que los mismos se verificaron en tiempos muy cercanos a la vacunación (7 dpv) y aun cuando la infección aerógena se realizó en presencia de títulos bajos de anticuerpos neutralizantes.
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Tipo de documento: tesis doctoral | Formato: PDF (tamaño kb.)

Aporte: Biblioteca y Centro Multimedia de la Facultad de Ciencias Veterinarias