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Palabras contadas: inmune: 7, respuesta: 8
Colavecchia, Silvia
2011-03

Descripción: .La vacunación es el método más efectivo para controlar una infección.Las vacunas efectivas inducen una respuesta inmune protectora, activando linfocitos T y B, que convertidos en células de memoria controlan infecciones producidas por el patógeno incluido en la formulación de la vacuna. Las vacunas elaboradas con virus o bacterias inactivados o a subunidades tienen la capacidad de generar una respuesta inmune específica eficiente, pero a veces débil ya que no se multiplican en el huésped. Es por eso, que requieren el uso de adyuvantes que potencien la respuesta inmune. La selección de un adyuvante apropiado no solamente permite aumentar la respuesta inmune sino que también permite modular el isotipo de inmunoglobulina que se produce y también el tipo de perfil, Th1 o Th2. El Lipoarabinomanano (LAM) se encuentra unido de forma no covalente a la membrana plasmática de las micobacterias y se extiende hasta el exterior de la pared celular. Esta molécula juega un papel muy importante en la fisiología de las bacterias así como también en la modulación de la respuesta inmune del huésped durante la infección. Numerosos grupos de investigadores describen los efectos adyuvantes y moduladores de las micobacterias induciendo la respuesta hacia un perfil Th1 cuando se agregan a vacunas. El objetivo de este trabajo de tesis fue evaluar el efecto de la aplicación de ovalbúmina (OVA) junto con LAM y adyuvante de Freund incompleto (AFI) en la respuesta inmune celular y humoral de bovinos específica a OVA. Se extrajo y purificó LAM de Mycobacterium avium subsp. avium utilizando una extracción química publicada previamente por Hamasur et al. (1999), y se obtuvo un rendimiento similar al obtenido por dichos autoresMediante el uso del anticuerpo monoclonal que reconoce específicamente LAM de Mycobacterium tuberculosis se confirmó que la estructura del LAM obtenido a partir de cultivos de Mycobacterium avium subsp. avium conserva un alto grado de similitud antigénica con el de Mycobacterium tuberculosis. Se utilizaron 22 terneros mestizos de entre 10 y 12 meses de edad los cuales fueron asignados al azar a 4 grupos de tratamiento, G-AFI, inmunizados con PBS y 1 mL de AFI, G-LAM, inmunizados con LAM 1 mg/dosis y AFI, G-OVA, inmunizados con OVA (1 mg/dosis) y AFI, y GOVALAM, inmunizados con OVA, AFI y LAM. Se inmunizaron en forma subcutánea a los días 0, 21 y 42. Dado que una de las limitantes más importantes del uso de adyuvantes es el posible efecto tóxico directo o indirecto sobre los productos derivados al consumo humano se evaluaron una serie de parámetros fisiológicos a fin de controlar la formulación del inmunógeno utilizado. El análisis de los parámetros evaluados (valores hematológicos, fórmula leucocitaria absoluta, perfil de proteínas séricas, ganancia de peso, reactividad a derivado proteico purificado de Mycobacterium avium subsp. avium (PPA)) indicó que el tratamiento con LAM no indujo alteraciones detectables, esto podría constituir un primer acercamiento a la evaluación de la inocuidad del inmunomodulador. Se evaluó la respuesta inmune innata a través de la detección de la producción de intermediarios reactivos de oxígeno en células periféricas adherentes a tiempo 0 (preinmunización) y a tiempo final (15 días post-tercera inmunización) y se ha detectado una disminución de la producción de los intermediarios reactivos del oxígeno en el grupo G-OVALAM evaluado a tiempo final. La modulación producida en la respuesta inmune celular se evaluó a través de la proliferación de células mononucleares estimuladas con mitógenos y antígenos, las subpoblaciones de linfocitos en sangre periférica, la producción de IFN? a tiempo 0 y tiempo final y la hipersensibilidad cutánea. específica. Se detectó un incremento en la respuesta proliferativa de aquellos animales pertenecientes al grupo G-OVALAM indicando que el LAM incrementa la respuesta inmune celular específica y con mitógenos como ConA. Se ha detectado un aumento en la producción de IFN? en sobrenadantes de cultivo de células mononucleares estimuladas in vitro con OVA y ConA, en los animales tratados con LAM con niveles de entre 600 y 800 pg/mL. Se obtuvo además, un incremento en el porcentaje de células con el marcador CD25 en superficie. La expresión de este marcador se relaciona con el incremento de subpoblaciones con funciones reguladoras aunque aún estas funciones no se han demostrado en bovinos. Dado que la respuesta específica frente a derivado proteico purificado de Mycobacterium bovis no pudo ser detectada en los grupos inoculados con LAM como inmunomodulador, los resultados obtenidos indican que la modulación por LAM no interfiere con el diagnóstico de tuberculosis in vivo ni en el de paratuberculosis in vitro. Se evaluó la cinética de respuesta específica de anticuerpos frente a OVA a los días 0, 21, 42 y 57 y la respuesta de isotipos utilizando anticuerpos anti IgM, IgG1, IgG2 e IgG3 bovinos. Los resultados obtenidos muestran que la modulación por LAM en bovinos indujo anticuerpos específicos de alto título desde la primera inmunización. Estos niveles se incrementaron en la segunda dosis y se mantuvieron luego de la tercera inmunización. La respuesta sérica predominante frente a OVA es IgG1 e IgG2 y en menor proporción IgG3. La relación entre IgG1/IgG2 mostró una disminución en los animales inmunizados junto con LAM. Esto sugiere una tendencia de LAM a inducir una respuesta de tipo Th1. Este trabajo de tesis nos permitió conocer el efecto del agregado de LAM al adyuvante de Freund incompleto como posible modulador hacia una respuesta de tipo Th1 frente a OVA inoculada simultáneamente.
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Tipo de documento: tesis doctoral  |  Formato: PDF  (tamaño kb)  Pag. 141 h.

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Bucafusco, Danilo
2014-03-27

Descripción: La Fiebre Aftosa es la primera enfermedad para la cual la OIE estableció una lista de países y zonas libres Argentina ha sido declarada libre de la enfermedad sin vacunación hacia el sur del paralelo de 42º Sur, y con vacunación para el resto del país. La valoración de la potencia de las vacunas comerciales puede estimarse por desafío o bien indirectamente mediante la determinación de niveles séricos de anticuerpos (Ac) específicos por ELISA en fase líquida (FL-ELISA) o seroneutralización viral (SNV) a los 60 días post-vacunación. Partiendo de datos históricos de serología y desafío, se han construido curvas que permiten calcular una expectativa potencial de protección según el título de anticuerpos Ac. Al aplicar masivamente la vacunación, los animales de corta edad representan el eslabón más vulnerable ya que su inmunidad depende de la transferencia de calostro inmune desde la madre, y se desconoce cómo esto puede influir en la respuesta a la vacuna inactivada. Una evidencia práctica de este hecho es que los terneros representan la única categoría que se vacuna 2 veces por año, a diferencia de los adultos que sólo reciben una vacunación anual. Para el caso particular de la vacuna inactivada contra la fiebre aftosa existen sólo cuatro estudios publicados acerca de la posible interferencia de anticuerpos maternos en terneros, el más reciente es de hace 15 años. En estos trabajos se utilizan cepas que actualmente no circulan o no forman parte de la vacuna, y adyuvantes que son diferentes a los actuales. Las mediciones de Ac de estos estudios se hicieron mediante FL-ELISA o SNV (no ambas), por lo que nunca se aplicó más de una técnica serológica para estudiar la respuesta inmune de los terneros. El objetivo principal de esta tesis fue analizar los mecanismos inmunológicos que se desarrollan en los terneros a partir de la transferencia de inmunidad pasiva por parte de madres vacunadas. Para alcanzar este objetivo se determinamos la composición del calostro y las características de la transferencia de anticuerpos específicos contra el virus de la fiebre aftosa (VFA) al ternero. Estudiamos la magnitud y la duración de la respuesta humoral a la primovacunación en terneros de diferentes edades nacidos de madres vacunadas y la respuesta a la vacunación en un esquema de dos dosis en terneros con altos o bajos niveles de Ac calostrales . Finalmente, evaluamos la respuesta humoral y celular inducida por una dosis de vacuna anti-aftosa aplicada a los 32 días de vida terneros privados de calostro y en grupos de terneros recibieron cantidades equivalentes de preparaciones de calostro que diferían en la presencia o no de células inmunes maternas pero que eran equivalentes en cuanto a la cantidad y calidad de Ac anti VFA (Ac totales, neutralizantes, isotipos). Nuestros resultados muestran que el calostro proveniente de madres vacunadas transfiere al ternero anticuerpos mayormente neutralizantes y del isotipo IgG1. Calculamos la vida media de los Ac totales, neutralizantes, IgG1, IgG2 e IgM específicas contra VFA. Comprobamos que la presencia o ausencia de células inmunes en el calostro suministrado a los terneros no interfiere con la transferencia de los anticuerpos anti-VFA. Por otro lado pudimos detectar respuesta celular anti-VFA en terneros calostrados que aún no habían recibido vacunación anti-aftosa. La transferencia de células inmunes a través del calostro estaría brindando a los terneros no vacunados inmunidad celular específica sistémica durante los primeros meses de vida, sin interferir con la inducción de respuestas inmunes a la vacunación. Adicionalmente, los componentes solubles del calostro ejercerían algún efecto que favorece la respuesta inducida. Los terneros vacunados, no calostrados o tratados con calostros completos o acelulares, inducen respuesta celular anti-VFA a partir de la semana de vacunación, independientemente también de los niveles de Ac específicos transferidos desde el calostro. Por el contrario, demostramos que la presencia de altos títulos de Ac calostrales en los terneros interfiere con la inducción de respuesta de Ac neutralizantes anti-VFA por vacunación. En este sentido, la respuesta primaria al VFA (IgM) se hace evidente cuanto más bajos son los títulos de Ac calostrales. Verificamos que la aplicación de esquemas de vacunación-revacunación espaciadas en un mes en terneros con altos niveles de Ac calostrales, evita la caída de los Ac totales, medidos por FL-ELISA, pero no los de los Ac neutralizantes. En los programas de relevamiento serológico estos animales presentarían títulos de FL-ELISA correspondientes a una EPP superior al 75%, que es considerado aceptable para la cobertura vacunal poblacional. Sin embargo, las diferencias con los valores observados por SNV ameritarían profundizar el ajuste de las distintas técnicas serológicas (soportado con ensayos de desafío) para este grupo etario. Esta tesis constituye el primer reporte sobre las características del calostro proveniente de madres vacunadas, su composición a nivel humoral y su transferencia a los terneros. Describimos también por primera vez que la presencia o ausencia de células maternas en el calostro no modifica en forma sustancial la respuesta a la vacunación anti-aftosa. Los resultados de esta tesis constituyen además, los primeros datos disponibles sobre el estudio de la respuesta inmune humoral en terneros calostrados inducida por vacunación, evaluada no solo en cuanto a Ac totales o neutralizantes, sino también en cuanto a la avidez y al perfil de isotipos de los Ac inducidos. Nuestro trabajo analizó la respuesta inmune humoral y celular a la vacunación anti-aftosa en los terneros, considerando el posible efecto modulador de la transferencia de inmunidad pasiva por parte de madres vacunadas, un tema además poco explorado en relación a la inmunidad de los bovinos.
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Tipo de documento: tesis doctoral  |  Formato: unknown  (tamaño kb)  Pag. 137 h.

Aporte: Biblioteca y Centro Multimedia de la Facultad de Ciencias Veterinarias

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Langellotti, Cecilia Ana
2012-03

Descripción: La Fiebre Aftosa es una enfermedad viral aguda y altamente contagiosa, causada por el Virus de la Fiebre Aftosa (VFA). La enfermedad afecta a bovinos, ovinos, cerdos y varias especies silvestres, se caracteriza por la aparición de fiebre y lesiones vesiculares localizadas en la cavidad bucal, lengua y alrededor de las pezuñas. Desde un punto de vista económico, es la enfermedad más importante del ganado a nivel mundial. Las consecuencias económicas de la infección se deben al deterioro físico y productivo más que a pérdidas por mortalidad, pero para los países exportadores de animales y de productos animales, como Argentina, las pérdidas de mayor importancia se deben a las fuertes restricciones en el comercio internacional. El VFA interacciona con las células dendríticas, tanto de sus huéspedes naturales como de los ratones, pero el impacto de esta interacción sobre la respuesta inmune adaptativa es controversial. Las vacunas utilizadas actualmente contra la fiebre aftosa contienen la forma inactivada del virus. Poco se conoce sobre las diferencias entre el virus infeccioso y el inactivado, en términos de subpoblaciones de células dendríticas involucradas en la activación de la respuesta inmune. En el presente trabajo de tesis, llevado a cabo en el modelo murino, mostramos como la infección con el VFA induce inmunosupresión temprana, a nivel de reducción en el número de células dendríticas esplénicas de las diferentes subpoblaciones y la inhibición de la activación y maduración de las mismas. Además, la infección induce la secreción de bajos niveles de IFN-a en sangre periférica. La linfoproliferación se encuentra inhibida en estadios tempranos de la infección, pero la respuesta celular se reestablece luego de cinco días postinfección. Por el contrario, el virus inactivado provoca un aumento del porcentaje de células dendríticas plasmacitoides en bazo y la producción de IL-10, que desencadena la activación de una respuesta de células T regulatorias en los ratones
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Tipo de documento: tesis doctoral  |  Formato: unknown  (tamaño kb)  Pag. 128 h.

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Fernández, Bárbara
2016-07-11

Descripción: La paratuberculosis, causada por el Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (Map), es una patología crónica intestinal que afecta a rumiantes. El diagnóstico es engorroso y permite identificar principalmente a los bovinos en estadios avanzados (clínico). El objetivo general del trabajo fue caracterizar los anticuerpos bovinos totales y específicos frente a Map y sus proteínas, e identificar su efecto en la viabilidad bacteriana. Los objetivos particulares fueron: Identificar el efecto de la infección con Map en los niveles de anticuerpos totales. Caracterizar la respuesta inmune humoral específica frente a Map y sus proteínas en sobre la viabilidad bacteriana intracelular. Los anticuerpos bovinos se estudiaron por la metodología de ELISA (niveles) y mediante un modelo de infección de macrófagos in vitro (funcionalidad). Se evaluaron un total de 120 animales. Los grupos de bovinos analizados difirieron según los experimentos, pero en general fueron: infectados naturalmente en estadio subclínico, clínico y terminal, infectados experimentalmente, expuestos, inmunizados con proteínas específicas de Map y controles sanos. Se demostró que: La paratuberculosis afecta los niveles de anticuerpos totales en muestras de suero y materia fecal, según el estadio. Los bovinos con paratuberculosis clínica presentan incrementos en los niveles de IgM sérica, así como de IgM, IgG e IgA a nivel local. El estudio del isotipo IgG2 específico frente a la bacteria entera o al antígeno protoplasmático de Map (PPA) mejora la identificación de bovinos infectados en estadio subclínico (sensibilidad de IgG2 e IgG/ELISA-PPA del 54% y del 23%, respectivamente). El isotipo IgG2 aparece de manera temprana en la infección experimental (p=0,013, a los 60 días postinfección). Los anticuerpos específicos frente a la proteína p34 inhiben la viabilidad intracelular de Map en el modelo de infección de macrófagos bovinos in vitro utilizado. Estos resultados impactan sobre las metodologías diagnósticas utilizadas en la actualidad y revalorizan el papel de los anticuerpos específicos frente a p34. Este hallazgo justifica la continuación de su análisis en modelos de infección y protección en la especie bovina.
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Tipo de documento: tesis doctoral  |  Formato: PDF  (tamaño kb)  Pag. 229 h.

Aporte: Biblioteca y Centro Multimedia de la Facultad de Ciencias Veterinarias

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Barrionuevo, Florencia Mariel
2019-03-21

Descripción: La fiebre aftosa (FA) es una enfermedad viral infectocontagiosa de curso agudo que se caracteriza por producir lesiones vesiculares en tejidos de la mucosa oronasal (incluyendo lengua, encías y paladar), ubres, espacios interdigitales y rodetes coronarios de las pezuñas de los animales infectados. Su agente etiológico, el virus de la fiebre aftosa (VFA), es un virus perteneciente a la familia Picornaviridae que afecta a animales biungulados, incluyendo por tanto a bovinos, porcinos, caprinos y ovinos domésticos, junto con numerosas especies silvestres que pueden actuar como reservorios bajo determinadas condiciones ecológicas. La virulencia, el amplio rango de huéspedes, la diversidad de variantes y la alta capacidad infecciosa y de contagio del VFA, explican su presencia y re-emergencia en diversas partes del mundo y la convierten en un problema sanitario de escala global. La enfermedad genera enormes pérdidas económicas a la industria ganadera debido al cierre obligado de los mercados externos y a pérdidas considerables en el mercado interno, asociadas a la disminución de la producción, al sacrificio y al bloqueo del movimiento de animales. En trabajos previos de nuestro grupo de investigación, se evidenciaron respuestas inmunes de anticuerpos tanto a nivel sistémico como en mucosas, observables luego de la infección con VFA, así como de la vacunación sistémica en bovinos, siendo su ocurrencia, por lo tanto, independiente de la ruta inicial de contacto con el antígeno viral. Dentro de este panorama, la contribución relativa a la inmunidad protectora de los diferentes mecanismos inmunes potencialmente implicados en la respuesta generada, es difícil de discernir. La presente tesis doctoral plantea como hipótesis de trabajo que los anticuerpos sistémicos, administrados mediante la inmunización pasiva de terneros seronegativos para VFA, son capaces de evitar la diseminación del virus luego de la infección por vía aerógena y en ausencia de otros mecanismos inmunes. Para esto, inicialmente se realizaron una serie de experimentos donde se ajustaron las condiciones para la inmunización pasiva contra el VFA en terneros. En estos procedimientos se utilizaron plasmas de bovinos vacunados con formulaciones tetravalentes comerciales anti-aftosa de serie. Los mismos fueron reunidos en una sola fracción y diferentes volúmenes de esta preparación fueron transferidos a terneros seronegativos. Una vez realizado el procedimiento, se midieron diversos parámetros de inmunidad humoral específicos contra el VFA, entre las 0 h y los 30 días post-transferencia. A partir de estos resultados, se determinó el volumen de plasma requerido para llevar a cabo la inmunización pasiva, así como los protocolos de administración y los tiempos adecuados para realizar las infecciones posteriores en los animales pasivamente inmunizados. Para el segundo experimento, se utilizaron vacunas monovalentes de la cepa O1/Campos de alta carga antigénica, con las que se inmunizaron bovinos seronegativos (n=8). Se obtuvo plasma de cuatro de estos animales a los 7 días post-vacunación (dpv) y a los 26 dpv en los cuatro restantes. Así se conformaron dos pooles de plasma inmunes (7 y 26 dpv) que diferían tanto en la composición isotípica de las inmunoglobulinas, así como en los títulos de anticuerpos totales y neutralizantes anti-VFA. En el caso del pool de plasma de 7 dpv el isotipo predominante detectado fue la IgM y el título de anticuerpos neutralizantes fue 1,6; mientras que para el pool de 26 dpv, se detectaron ambos subtipos de IgG (1 y 2) y niveles menores de IgM, con un título de anticuerpos neutralizantes de 2,7. Los animales pasivamente inmunizados se infectaron por vía oronasal y estos resultados se compararon con los obtenidos en animales vacunados e infectados a los mismos tiempos post-vacunación (7 y 26 dpv). Nuestros resultados demostraron que los anticuerpos circulantes previenen la generalización de la fiebre aftosa solo en el caso de los animales pasivamente inmunizados con plasma de 26 dpv, ya que los animales que recibieron el plasma de 7 dpv mostraron signos clínicos de la enfermedad luego de la infección aerógena. Esto indicaría que, en ausencia de otros mecanismos inmunitarios adaptativos preexistentes, los anticuerpos circulantes en sangre efectivamente son capaces de evitar el desarrollo de la enfermedad, aunque existe un umbral de título de anticuerpos por debajo del cual se desencadena la enfermedad luego de la infección oronasal. Para el caso de los animales vacunados, se obtuvo una protección total de los mismos, tanto en los infectados a los 7 como a los 26 dpv. Esto ocurrió aun cuando el animal vacunado 7 días antes de la infección presentaba, al momento del desafío, niveles de anticuerpos sistémicos neutralizantes similares a los de los animales inmunizados pasivamente con plasma de 7 dpv y que mostraron signos clínicos de fiebre aftosa post-infección. El estudio de las respuestas de anticuerpos post-infección, tanto a nivel sistémico como en mucosas respiratorias, indicó que la vacunación promovió la generación de una respuesta de anticuerpos rápida tras la exposición al virus, presentando la misma un perfil de respuesta de tipo secundaria. En ambos casos, los infectados a los 7 dpv o a los 26 dpv, mostraron rápidos cambios de los isotipos predominantes de las inmunoglobulinas VFA-específicas, así como un aumento de los títulos de anticuerpos y de la avidez en los sueros obtenidos post-infección. Interesantemente, estas observaciones se verificaron tanto a nivel sistémico como local, en linfonódulos drenantes del tracto respiratorio. En conjunto estos resultados indican que los anticuerpos circulantes pueden ser suficientes para evitar la generalización de la enfermedad en bovinos infectados por la vía oronasal, aun en ausencia de otros mecanismos activos de inmunidad específica. A su vez, la caracterización de las respuestas de anticuerpos posteriores al desafío, tanto a nivel sistémico como local, reveló que la inmunización sistémica con vacunas convencionales anti-aftosa promovió rápidamente un aumento del título de anticuerpos, así como de la avidez de los sueros inmunes y la modificación en los isotipos en las inmunoglobulinas predominantes, todos cambios asociables a respuestas anamnésicas contra el virus. Se resalta el carácter protector de que estos procesos frente al establecimiento de la enfermedad, y el hecho que los mismos se verificaron en tiempos muy cercanos a la vacunación (7 dpv) y aun cuando la infección aerógena se realizó en presencia de títulos bajos de anticuerpos neutralizantes.
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Tipo de documento: tesis doctoral  |  Formato: PDF  (tamaño kb)  Pag. 140 h.

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Dibárbora, Marina
2016-03-28

Descripción: La infección por Influenza A virus (IAV) es considerada una de las principales causas de enfermedad respiratoria en cerdos. Además, su carácter zoonótico representa un riesgo para la salud pública. En Argentina, si bien existían reportes de presencia de anticuerpos, el primer aislamiento de IAV en cerdos fue en el año 2008, de un subtipo H3N2 completamente humano. Luego, asociado a la pandemia humana del año 2009, se aisló un subtipo H1N1 pandémico (H1N1pdm09) y se reportaron múltiples cuadros clínicos relacionados a este virus. Es por ello que el objetivo general de este trabajo fue caracterizar las cepas de IAV circulantes en cerdos en Argentina y la forma de presentación de dicha infección. Se realizaron estudios clínicos, patológicos, serológicos y virológicos en nueve granjas intensivas porcinas. Los resultados demostraron una presentación clínico-epidemiológica endémica en 8 granjas en animales de entre 21 y 50 días. Desde el punto de vista anatomopatológico, el diagnóstico más frecuente fue la bronconeumonía supurativa con bronquiolitis necrotizante. Los estudios serológicos evidenciaron dos patrones. En uno de ellos se observó una caída de los anticuerpos calostrales entre los 21 y 49 días y un posterior aumento marcado en el porcentaje de animales seropositivos (20 a 80%), lo cual se asoció con una circulación activa del virus. En cambio, en el otro patrón, observado en dos granjas, se detectó un bajo porcentaje de animales seropositivos en reproductores, menos del 50%, y en la línea de producción, el mayor porcentaje de cerdos positivos fue del 20%, lo cual es sugerente de una infección endémica con baja circulación del virus. Los resultados de los ensayos de Inhibición de la Hemoaglutinación detectaron anticuerpos contra H1pdm09, ?H1 y H3 en todas las granjas y en el 75% de los animales presencia de anticuerpos contra más de un subtipo. Se detectó, mediante rRT-PCR, IAV en 7 granjas, la mayoría entre los 21 y 50 días de vida, y se obtuvieron 5 aislamientos, 4 fueron caracterizados como subtipo H1N1pmd09 y uno como subtipo H3N2. Se realizaron además, estudios clínicos y virológicos en 12 granjas intensivas que reportaron cuadros compatibles con infección por IAV. La inspección clínica determinó, en 8 granjas, el cuadro clínico endémico y en 4 granjas se observó la forma epidémica. La edad de presentación de los signos clínicos fue variable, siendo los animales de postdestete los más afectados (30 a 40 días). Todas las granjas evaluadas fueron positivas por rRT-PCR y la edad de detección del virus coincidió con la edad de presentación de los signos clínicos. Se obtuvieron un total de 13 aislamientos de IAV, H1N1pdm09 (7), H1N2 ?2 (3) y H3N2 cluster II (3). Se evaluó la circulación de IAV en pequeños productores y productores familiares. Se tomaron muestras de 57 establecimientos de distintas regiones del país. Los estudios serológicos detectaron la presencia de anticuerpos contra H1pdm09 en más del 60% de los establecimientos y en el 40% de los animales, mientras que menos del 17% de los establecimientos y del 2% de los animales fueron positivos para el subtipo H3. Se realizó el diagnóstico y la caracterización de IAV a partir de muestras enviadas al Laboratorio de Aves y Porcinos, CICVyA, INTA. Se recibieron muestras de 51 establecimientos, de 10 provincias y se obtuvieron 27 aislamientos. El 70% de los subtipos aislados fueron caracterizados como H1N1pdm09. También se obtuvieron aislamientos de los subtipos ?2 H1N2; ?2 H1N1; ?1 H1N1 y H3N2. El análisis filogenético del total de los aislamientos (N=45), mostró un predominio en la circulación del subtipo H1N1pdm09. Solamente 5 aislamientos se caracterizaron como subtipo H3N2 cluster II, 8 aislamientos como ?2 H1N2, un único aislamiento como subtipo ?2 H1N1 y el restante como subtipo ?1 H1N2. Todos ellos poseen gen M pandémico y genes externos de IAV humanos estacionales. Se identificaron 9 introducciones de IAV de humanos a cerdos, 7 relacionadas con la pandemia H1N1 del año 2009 y 2 con IAV humanos estacionales H3 y H1, circulantes más de una década atrás. Los estudios de cartografía antigénica demostraron que, a pesar de la similitud a nivel genético en los virus detectados en el país, las diferencias antigénicas son marcadas. La infección por IAV se encuentra ampliamente diseminada en cerdos de nuestro país. En la mayoría de las granjas evaluadas se observó la presentación endémica (subclínica). Estos resultados alertan sobre la posible generación de virus reasortantes y la presencia de un porcentaje variable de animales sin anticuerpos contra IAV que permitirían la persistencia de la infección. La totalidad de los subtipos de IAV circulantes en cerdos en Argentina corresponde a introducciones de virus de origen humano, en algunos casos relacionados con cepas circulantes más de una década atrás. Esto resalta la importancia del hombre en la epidemiología de IAV en cerdos en nuestro país y supone un riesgo para la población humana por la posibilidad de reintroducciones. La información generada en este estudio muestra que los subtipos circulantes en el país no se corresponden con los reportados en Norteamérica y Eurasia. Este hecho, sumado a la alta variación antigénica observada y a la rápida evolución de IAV, alerta sobre la necesidad de desarrollo de inmunógenos locales y ensayos diagnósticos que permitan el correcto control de IAV en las explotaciones porcinas de nuestro país.
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Tipo de documento: tesis doctoral  |  Formato: PDF  (tamaño kb)  Pag. 105 h.

Aporte: Biblioteca y Centro Multimedia de la Facultad de Ciencias Veterinarias

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Franco Mahecha, Olga Lucía
2014-12-19

Descripción: El virus de la diarrea viral bovina (VDVB) es un patógeno del ganado que causa inmunosupresión en los animales infectados, provocando la muerte de los linfocitos y monocitos-macrófagos. El VDVB no afectaría a las células dendríticas (DC), sin embargo, no existen estudios que describan la actividad del virus sobre estas células a las pocas horas post-infección. El control de esta enfermedad se ve afectado por la falta de vacunas eficaces. Las vacunas tradicionales (virus inactivado) no logran inducir protección y no se ha avanzado en el uso de vacunas de nueva generación. Uno de los problemas es la dificultad de contar con animales libres del virus para evaluar las vacunas. Estas evidencias apoyan la búsqueda de herramientas creativas para la selección de antígenos vacunales, reduciendo el número de pruebas realizadas en la especie destino. En el presente trabajo se investigó la posibilidad de seleccionar inmunógenos candidatos vacunales según su actividad sobre las DC. Estudiamos también la interacción entre el VDVB infectivo y las DC durante el primer día de infección, a fin de establecer la influencia de estas células en la inmunopatogenia del virus. Se estableció un protocolo de selección de antígenos vacunales de acuerdo a su capacidad de inducir la activación de DC in vitro, tanto en DC murinas como bovinas. Se evaluaron: el virus inactivado, la glicoproteína E2 (principal blanco de la respuesta neutralizante) truncada, expresada en el sistema Baculovirus recombinante-células de insecto (Bt-E2) y plásmidos que expresan t-E2. La activación de las DC se estableció midiendo la expresión de moléculas co-estimulatorias y la producción de citoquinas pro-inflamatorias. Los resultados obtenidos muestran que solamente los vectores plasmídicos lograron una completa activación de las DC, por lo que no requerirían de adyuvante, mientras que la Bt-E2 y el virus inactivado, no inducían una activación completa. Se obtuvieron resultados similares con DC murinas y bovinas. Los antígenos candidatos vacunales se evaluaron en ratones, cobayos y bovinos. Las vacunas génicas no fueron eficientes en activar la respuesta humoral, mientras que la Bt-E2 formulada con diferentes adyuvantes indujo altos niveles de anticuerpos (Ac) neutralizantes e inmunidad celular. El perfil de la respuesta inducida fue influenciado por el adyuvante. La aplicación de un adyuvante nanoparticulado diseñado especialmente para activar a las DC, permitió una mejor respuesta, humoral y celular, aún con baja masa antigénica. La inducción de altos niveles de Ac neutralizantes en bovinos guardó relación con la masa de E2 de la vacuna, ya sea recombinante o propia del virus inactivado. Verificamos que Bt-E2 puede ser utilizada como aditivo antigénico para alcanzar una masa adecuada de E2 en las vacunas. Demostramos que el VDVB es capaz de infectar y replicar rápidamente en las DC, y que a pesar de tratarse de un virus de biotipo citopático, no induce apoptosis en estas células. Las Mo-DC infectadas no pueden adquirir un fenotipo activado durante las primeras horas de infección. Proponemos que, al infectar y mantener la viabilidad de las DC, el virus ganaría acceso al tejido linfoide, causando la muerte masiva de linfocitos. La metodología desarrollada en este trabajo resultó ser especialmente útil para comparar antígenos de la misma naturaleza química. La selección de antígenos en base a su capacidad de inducir la activación de DC murinas in vitro, constituye una herramienta muy útil en el desarrollo de vacunas veterinarias porque permite reducir el número de candidatos vacunales para evaluar in vivo; apoyando los esfuerzos por reducir, refinar y finalmente reemplazar los ensayos con animales para la evaluación de productos biológicos.
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Tipo de documento: tesis doctoral  |  Formato: PDF  (tamaño kb)  Pag. 138 h.

Aporte: Biblioteca y Centro Multimedia de la Facultad de Ciencias Veterinarias

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