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Institución otorgante:
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Fecha:
2002
Tipo de documento: 
Tesis Doctoral
 
Formato:
text; pdf
Idioma:
Español
Temas:
Biología / Biología Molecular y Celular
Descripción:
Los factores de transcripción AP-1 (Activation protein-1) son genes tempranos involucrados en gran diversidad de procesos regulatorios. El éster de forbol 12-O-tetradecanoilforbol- l3-acetato (TPA) es utilizado habitualmente para inducir la actividad de AP-1 y proteinquinasa C (PKC). El propósito de este trabajo es explorar los mecanismos moleculares involucrados en la regulación por TPA de la expresión del gen de 5-aminolevulinato sintetasa (ALAS), la primer enzima y determinante de velocidad de la biosíntesis de hemo. Análisis previos de la secuencia 5’ flanqueante revelaron la existencia de dos elementos de respuesta a cAMP (CRE) requeridos para la expresión basal y estimulada por CAMP. El fragmento —833a +42 en la región 5’flanqueante del gen de ALAS de rata, fue subclonado en un vector con el gen reporter cloranfenicol acetiltransferasa (CAT). El vector de expresión, pALAS/CAT, produjo una significativa actividad CAT en células de hepatoma humano HepG2 transfectadas transientemente, que fue reprimida por TPA. Mediante análisis de secuencias y deleciones dctectamos un elemento de respuesta a TPA (TRE), localizado entre —261 y -255 que según establecimos por mutagénesis, es crítico para la regulación por TPA. Demostramos que c-Fos, c-Jun y JunD están involucrados en el efecto inhibitorio por su habilidad de interactuar con TRE-ALAS, como evidenciamos por análisis de supershift y su capacidad para reprimir la actividad del promotor en ensayos de transfección. Demostramos la participación de componentes de diferentes vías de señalización. Se encuentran involucradas la isoforma α de la PKC, la fosfatidilinositol 3-quinasa (PI3K), la quinasa regulada por señales extracelulares (ERK 1/2) y la quinasa N-terminal de c-Jun (JNK). Asimismo, presentarnos a la quinasa p90RSK2 como un posible punto de convergencia de las vías de PI3K y ERK. Mediante sobreexpresión de CBP (CRE protein binding protein) o p300, se bloqueó significativamente la represión por TPA o sobreexpresión de Fos/Jun, de la actividad del promotor de ALAS. Por otra parte, cuando el sitio TRE se ubicó en diferente contexto con respecto a los sitios CRE, éste se comportó como un enhancer de la transcripción. Proponemos que la disminución en la actividad basal del promotor de ALAS en presencia del TPA puede reflejar una disminución en la capacidad del promotor de ensamblar un complejo de pre-iniciación eficiente, debido al secuestro de CBP, por parte de AP-1. Asimismo, sugerimos que las propiedades transcripcionales del sitio TRE serian dependientes de la disposición espacial, con respecto a los sitios CRE.
Identificador:
http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_3496_Guberman
Identificador único:
http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/h/2070
Derechos:
info:eu-repo/semantics/openAccess
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/
Licencia de uso:
Licencia Creative Commons

Descargar texto: Tesis_3496_Guberman.oai

Cita bibliográfica:

Guberman, Alejandra Sonia  (2002).     Represión de la expresión génica mediante el secuestro de un coactivador : Transducción de la señal y elementos involucrados en la regulación ejercida por ésteres de forbol sobre el promotor del gen 5-aminolevulinato sintetasa.  (Tesis Doctoral).    Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.    [consultado:  ] Disponible en el Repositorio Digital Institucional de la Universidad de Buenos Aires:  <http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_3496_Guberman>