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Institución otorgante:
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires
Fecha:
2002
Tipo de documento: 
Tesis Doctoral
 
Formato:
text; pdf
Idioma:
Español
Temas:
Biología / Neurociencias - Biología / Biología Molecular y Celular - FOSFATASAS DE SERINA Y TREONINA - DESARROLLO - CEREBELO - CULTIVOS CELULARES - CALCINEURINA - APOPTOSIS
Descripción:
El objetivo en esta tesis fue caracterizar el comportamiento de las fosfatasas de serina y treonina (STPasas) durante el desarrollo del sistema nervioso. Como modelo experimental se empleó en primera instancia el desarrollo postnatal del cerebelo de ratón, ya que durante este período se dan numerosos procesos, como el crecimiento axonal, la formación de sinapsis y la apoptosis, en los cuales las distintas STPasas podrían llegar a estar involucradas. Para caracterizar la expresión de los ARNm de las fosfatasas, se diseño una nueva estrategia, SSDD (Single-Strand Differential Display), la cual nos permitió determinar como era la expresión de los distintos mensajeros a distintas edades. Esta técnica no solo nos permitió observar que cada una de las STPasas detectadas presenta una expresión diferencial, sino que también identificar una nueva variante de splicing de la isoforma gamma de la PP1. Esta técnica también fue empleada con éxito para el estudio de STPsas en tumores del sistema nervioso, pudiéndose observar que tanto la expresión de la isoforma alfa de la PP1 como de las isoformas alfa y beta de la PP2A era mayor en tumores de índole maligna que en benignos. Además, se detectó por primera vez la isoforma gamma de la calcineurina (CaN Aγ) en tumores del sistema nervioso. Durante el desarrollo del cerebelo, se observó que PP2A no muestra variaciones significativas ni en la expresión de proteínas ni en la actividad fosfatasa que posee. Por otro lado, PP1 sí muestra diferencias no solo en la expresión de proteínas, donde se observa un aumento a P13 y una disminución posterior a P20, sino también en lo que respecta a su actividad, cuyo incremento coincide con el período en el cual se empiezan a formar las sinapsis entre los axones de las células grano y las espinas dendríticas de las células de Purkinje. En el mutante cerebeloso staggerer, en el cual se encuentran afectadas las células de Purkinje y no se produce la estabilización sináptica, se encontró que los niveles proteicos de PP1 no disminuyen a P20 como ocurre en el cerebelo normal, y que la actividad no se incrementaba. Por otro lado, la fosfatasa que mostró mayores variaciones durante el desarrollo fue la calcineurina. Específicamente, los niveles de proteínas de la isoforma CaN Aα se incrementan gradualmente con el tiempo, lo cual coincide con el período de formación de sinapsis. En este período además, se produce un incremento en la actividad de la calcineurina. En el mutante staggerer, los niveles de esta isoforma son similares hasta P11, pero después no se incrementan como sucede en el ratón normal. La actividad fosfatasa en el mutante decae también a partir de esta edad. Con el fin de estudiar con mayor detalle la función de la calcineurina, se estudió lo que ocurría en distintos cultivos del sistema nervioso (células PC12, células NT2 y cultivos primarios de células grano). Para esto se incubaron los distintos cultivos con inhibidores de la calcineurina y con oligonucleótidos antisentido contra las dos isoformas. En todos los casos se observó que, tanto la inhibición de la actividad como de la expresión, particularmente de la isoforma CaN Aβ, provocaba que las células murieran por apoptosis, independientemente del estadío de diferenciación en el que ellas se encontraran. Este proceso estaba relacionado con un aumento en los niveles de Bax y una disminución de Bad. Particularmente en el caso de las células NT2, se pudo observar que el aumento de la expresión de Bax coincidía con un incremento en la translocación de la proteína al núcleo, mientras que la disminución de Bad lo hacía con la aparición de “parches” en el citoplasma, lo que es indicativo de una translocación a mitocondria. Posteriormente se estudió lo que ocurría con estas proteínas pro-apoptóticas en el mutante staggerer, el cual presentaba una muy baja actividad de calcineurina. Bad no mostró variaciones pero los niveles de Bax a P20 aumentaron considerablemente. Todos estos resultados sugieren que la inhibición de la expresión o de la actividad de la calcineurina ocasiona que las células entren en apoptosis por un mecanismo que involucra, por lo menos, un aumento en los niveles de Bax.
Identificador:
http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_3456_VilaOrtiz
Identificador único:
http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/h/3483
Derechos:
info:eu-repo/semantics/openAccess
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/
Licencia de uso:
Licencia Creative Commons


Cita bibliográfica:

Vilá Ortiz, Guillermo  (2002).     Caracterización de la expresión y actividad de las fosfatasas de Serina y treonina durante el desarrollo del sistema nervioso central : función de la Calcineurina.  (Tesis Doctoral).    Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires.    [consultado:  ] Disponible en el Repositorio Digital Institucional de la Universidad de Buenos Aires:  <http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_3456_VilaOrtiz>