Plataforma biotecnológica integrada para la purificación de antígenos recombinantes para el diseño de reactivos de diagnóstico para dengue

En la presente tesis, se desarrolló una plataforma integrada para la producción y purificación eficiente y de bajo costo de antígenos recombinantes de aplicación en kits de diagnóstico. Se evaluó la expresión de los dominios III de los cuatro serotipos y consenso de la proteína E del virus del dengue fusionados a la Hidrofobina I de Trichoderma reesei, utilizando diferentes sistemas de expresión. Entre los sistemas de expresión evaluados, las proteínas recombinantes fueron expresadas mediante el sistema de baculovirus en células de insecto y en larvas de la especie Rachiplusia nu. En la levadura Pichia pastoris se expresaron las proteínas recombinantes, salvo la proteína del dominio III serotipo 2. Las proteínas recombinantes fueron purificadas mediante sistemas de dos fases acuosas (ATPS) utilizando Tritón X-114 al 2%. El sistema de ATPS fue aplicado satisfactoriamente para la remoción de producto in situ del cultivo de Pichia pastoris. Los antígenos fueron utilizados para el desarrollo de un kit diagnóstico para la detección de inmunoglobulinas IgG anti-dengue en el suero de pacientes. La inmunogenicidad de los antígenos recombinantes se estudió en ratones, como modelo animal. La tesis, presenta avances y sienta bases para continuar la investigación de estrategias integradas para la obtención de antígenos con aplicación en kits diagnósticos y potenciales antígenos vacunales para dengue y otras enfermedades infecciosas.