Rol del 2-Iodohexadecanal en el mecanismo de autorregulación de la Glándula Tiroidea

Introducción: El iodo juega un importante papel en la bioquímica y fisiología tiroidea. Si bien la TSH es el principal regulador de la función y crecimiento de la glándula tiroides, el contenido intratiroideo de iodo es un importante regulador de estos parámetros. El exceso de iodo revierte la acción ejercida por la TSH tanto in vivo como in vitro. A medida que el aporte de iodo aumenta, se incrementa la biosíntesis de las hormonas tiroideas. Sin embargo, cuando la concentración de iodo supera un cierto límite, se pierde la proporcionalidad entre ambos parámetros y se inhibe progresivamente la biosíntesis hormonal (efecto Wolff-Chaikoff). El bloqueo provocado por el iodo es temporal. Se ha demostrado que para que el iodo ejerza su acción autorregulatoria debe ser incorporado a moléculas orgánicas (Elemento XI). Se han postulado como intermediarios, lípidos iodados. Uno de ellos es el 2-iodo-hexadecanal (2- IHDA). Objetivo: Estudiar los parámetros tiroideos regulados por el 2-IHDA tales como proliferación celular, función tiroidea y la expresión de genes específicos tiroideos y determinar la potencial función de la familia de receptores nucleares PPAR (Peroxisome Proliferative Activated Receptor) en el mecanismo de acción del 2-IHDA. Materiales y Métodos: Células FRTL-5 fueron cultivadas y tratadas durante 24 y/o 48 h con dosis crecientes de KI, 2-IHDA. Se estudiaron distintos parámetros fisiológicos como viabilidad celular, captación y eflujo de 125I, captación de 3HDOG, niveles de Ca++ libre intracelular, producción de H2O2. Todos estos procesos fisiológicos de la célula tiroidea fueron analizados en asociación a las proteínas involucradas NIS, PDS, DUOX1, DUOX2, TPO y Tg, a nivel proteico (Western Blot), de RNAm (qRT-PCR) y actividad transcripcional de sus promotores. Así mismo se analizaron los factores de transcripción canónicos como PAX8, NKX2-1 y FOXE1 y su grado de asociación al DNA de los sitios definidos en las regiones promotoras a través de inmunoprecipitación de cromatina (ChIP). Estudios desarrollados con plásmidos que expresan proteínas quiméricas permitieron determinar la activación específica de los subtipos de PPAR. Mediante análisis informático se definieron sitios putativos de interacción con el ADN en las regiones promotoras de los genes Nis, Tpo, Tg, Pax-8, Nkx2-1 y Foxe1, a través de ChIP se definió cual de los sitios putativos poseía actividad verdadera. También se realizaron ensayos durante 24 h aplicando agonistas y siRNAs para PPAR alfa y PPAR gamma. Resultados: El iodolípido generó una disminución de la captación de iodo, un aumento del eflujo del halógeno, inhibición de la captación de desoxiglucosa, efecto dual sobre la producción de peroxido de hidrógeno e inhibición de la proliferación. Bajo efecto del 2-IHDA se observó disminución de los niveles proteicos de NIS, TPO, Tg, PAX8 y FOXE1, aumento de NKX2-1 y efecto dual sobre DUOX2. Mismos resultados fueron observados por qRT-PCR y por medio de transfecciones transientes. Mediante ChIP se determinó que el 2- IHDA promueve una disminución de la interacción de PAX8 sobre las regiones promotoras de Nis, Tg y Tpo y un aumento de NKX2-1 y FOXE1. Mediante transfecciones transientes con construcciones quiméricas se observó que el 2-IHDA promueve la activación de los subtipos alfa y gamma de los PPARs. Mediante ChIP se observó un aumento de la interacción de estos subtipos en los sitios putativos definidos in silico mediante la aplicación PROMO 3.0. La utilización de agonistas específicos para cada uno de los subtipos además permitió diferenciar la acción específica que desarrolla el iodolípido a través de ellos. Es así que se observó que el 2-IHDA a través de la activación del PPAR alfa promueve una inhibición de Nis y Foxe1. El subtipo gamma desarrolla la inhibición de Pax8 y Tg. Conclusión: Los resultados obtenidos demuestran que el 2-IHDA sería el principal compuesto en la identidad del Elemento XI, y el mismo