Impacto de la conformación y la estabilidad en la tendencia a la agregación : el caso de una familia de proteínas todo-ß

?98? y ?78? son dos variantes truncadas todo-ß de IFABP (proteína que une ácidos grasos de intestino de rata). Esta familia se constituye como un modelo estructural útil para estudiar los determinantes moleculares relacionados con la agregación de proteínas de la clase ß. Las variantes abreviadas revelan una plasticidad conformacional incrementada, una topología del tipo nativa y un plegado cooperativo. Este trabajo de tesis aborda el estudio de la conformación, estabilidad y la tendencia amiloidogénica de estas proteínas. Optamos por el 2,2,2 trifluoroetanol (TFE) como el agente disparador de la agregación, investigándose el mecanismo cinético y las características morfológicas de los agregados amiloides. Asimismo, evaluamos el impacto de bajas concentraciones de TFE (< 15 % v/v) -condición donde la proteína se mantiene soluble- sobre la conformación y la estabilidad de las proteínas mediante diversas técnicas biofísicas. Dichos estudios revelaron la coalescencia conformacional de las tres proteínas y permitieron refinar el modelo estructural planteado para las variantes abreviadas. Finalmente, con el fin de abordar los primeros eventos que conducen a la formación de núcleo de agregación, se estudiaron los cambios que ocurren inmediatamente después de la adición de 25 % v/v TFE. Se concluye que el cambio estructural alcanzado a 10 % v/v TFE mimetizaría aquel necesario para desencadenar la agregación.

?98? and ?78? are two all-ß variants of IFABP (intestinal fatty acid binding protein). These frameworks became useful for studying the molecular determinants related to aggregation of ß barrel proteins. Albeit displaying increased conformational plasticity, these variants exhibit a native-like ß barrel topology and are able to support a cooperative folding behavior. This thesis work explores the conformation, stability and amyloidogenic tendency of these proteins. We chose 2,2,2 trifluoroethanol (TFE) as the aggregation triggering agent, investigating the kinetic mechanism and the morphological characteristics of the amyloid aggregates. We also evaluated the impact of low concentrations of TFE (< 15 % v/v) ? a condition where the protein remains soluble - on conformation and stability using various biophysical techniques. These studies revealed the conformational coalescence of the three proteins and allowed to refine the structural model proposed for the abbreviated variants. Finally, in order to address the early events leading to the formation of the aggregation nucleus, we studied the changes occurring immediately after the addition of 25 % v/v TFE. We concluded that the structural change achieved at 10 % v/v TFE would mimic the events necessary to trigger aggregation.