Virus papiloma humano cutáneos (HPVc) : su detección y tipificación en lesiones de piel y probable asociación con el desarrollo de cáncer cutáneo no melanoma

Los virus papiloma humano (HPV) se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza y se caracterizan por su tropismo epitelial, infectando piel y mucosas. Actualmente se identificaron más de 200 tipos virales. Los tipos que infectan la piel muestran gran heterogeneidad, distribuyéndose en los géneros alfa (?), beta (?), gamma (?), mu (?) y un (?). La asociación de los HPV que infectan mucosas y el cáncer anogenital (en especial del cuello uterino) está firmemente establecida; sin embargo, el rol de los HPV cutáneos (HPVc) en el desarrollo del cáncer cutáneo no melanoma (CCNM) no ha sido aún esclarecido. Esta neoplasia que incluye principalmente el carcinoma de células escamosas (CCE) y el carcinoma de células basales (CCB), representa el segundo cáncer más frecuente en población caucásica. Su etiología se vincula con la exposición solar, aunque también se ha postulado a la infección con HPVc como un co-factor. El objetivo de la tesis fue estudiar los HPV que infectan la piel y aportar al esclarecimiento de su potencial rol en la carcinogénesis cutánea; para ello se abordó la genotipificación y la cuantificación de los HPVc en piel sana y lesiones de distinta gravedad. Se planteó un estudio descriptivo transversal. Las muestras analizadas fueron: a) 200 hisopados de piel sana; b) 332 lesiones de 287 pacientes sin epidermiodisplasia verruciforme (EV) que incluyeron: Lesiones Benignas (LB) (n=38), Queratosis Actínicas (QA) (n=94), CCE (n=85) y CCB (n=115), c) 5 lesiones de 3 pacientes con EV que incluyeron: LB(n=1) y CCE (n=4); d) 104 lesiones de 30 pacientes trasplantados renales (TR) que incluyeron: LB (n=3), QA (n=30), CCE (n=55) y CCB (n= 16). Para cada participante, se completó una ficha epidemiológica y se les solicitó la firma del consentimiento informado. La integridad del ADN se verificó por PCR para el gen de la ?-globina humana. La detección y tipificación viral se realizó mediante dos PCR genéricas combinadas con hibridación reversa en línea (PCR-RLB), empleando oligosondas tipo-específicas que permitieron identificar 35 tipos de HPVc: 5 ?-HPV (HPV 2, 3, 7, 10 y 27); 25 ?-HPV (HPV 5, 8, 9, 12, 14, 15, 17, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 36, 37, 38, 47, 49, 75, 76, 80, 92, 93 y 96) y 5 ?-HPV (HPV 4, 48, 50, 60 y 65). Se llevó a cabo la determinación de la carga viral por PCR en tiempo real para 13 tipos de HPVc (HPV 5, 8, 9, 12, 15, 20, 23, 24, 25, 36, 38, 47 y 80). La frecuencia de HPVc fue: a) en piel sana: 87,1% (149/171); b) en los pacientes sin EV: 50% (19/38) en las LB, 43,4% (36/83) en las QA, 31,1% (23/74) en las CCE y 16,7% (16/96) en las CCB; c) en los pacientes con EV: 100% (5/5);y d) en los pacientes TR: 66,7% (2/3) en las LB, 80% (20/25) en las QA, 55,1% (27/49) en las CCE y 58,3% (7/12) en las CCB. Al menos un ?-HPV fue detectado en la mayoría de las QA y CCNM, tanto en pacientes trasplantados como no trasplantados. Los tres tipos más frecuentemente detectados fueron los HPV 8, 17 y 20 en ambas poblaciones; no se encontró asociación estadísticamente significativa entre ninguno de ellos con los grupos de lesiones evaluados. Las infecciones múltiples (con dos o más tipos) fueron muy frecuentes. La cuantificación de los HPVc en hisopados de piel sana mostró mayoritariamente (49,6%) valores menores a 10 copias/célula. En las dos muestras analizadas de pacientes con EV se observó un valor alto de carga para HPV5 (101-500 copias/célula) en el CCE y menor a 10 copias/célula en la LB. En los pacientes sin EV, se analizaron 35 lesiones: QA(n=25); CCE (n=6); CCB (n=3); LB (n=1), siendo los valores de carga viral menores a 10 copias/célula. En los TR, se analizaron 13 muestras: QA (n=5); CCE (n=6); CCB (n=2); solo en 2 CCE se observaron valores altos de carga para HPV8 (101-500copias/célula). La estrategia de PCR-RLB aplicada en la genotipificación demostró ser muy útil para detectar en forma rápida, sensible y específica un amplio espectro de tipos de HPVc, en un único ensayo. Asimismo, evidenció un muy buen desempeño para muestras en fresco (células o tejidos), así como también para tacos de biopsia. En la piel sana se observó un amplio espectro de tipos virales de los 3 géneros (?-? y ?-HPV). Sin embargo, en las lesiones, el espectro de genotipos encontrado se fue acotando, y a medida que aumentó la gravedad de las mismas, comenzaron a predominar los ?-HPV, con una tendencia creciente en la proporción de HPV5 y/o HPV8 en los CCNM. Esto suma evidencia epidemiológica a favor del rol de estos virus en la carcinogénesis cutánea. Este estudio aportó los primeros datos de cuantificación de HPVc en nuestro país y en la región; si bien los valores de carga viral obtenidos no fueron concluyentes, se resalta la necesidad de seguir profundizando en este tema, ya que la asociación entre la carga viral y CCNM no ha sido suficientemente evaluada. El desarrollo de esta tesis aportó como valor adicional, la conformación del primer grupo multicéntrico y multidisciplinario enfocado en el tema; asimismo, en el marco de las actividades como Laboratorio Nacional y Regional de Referencia de HPV, el exhaustivo trabajo de implementación de nuevas técnicas, podrá ser transferido a otros laboratorios del país y de la región.