Estudio de las alteraciones moleculares del gen CYP21B en pacientes con Hiperplasia Suprarrenal Congénita por déficit de la enzima 21 hidroxilasa

La HSC por déficit de la enzima P450c21, es un desorden hereditario autosómico recesivo, que presenta una forma clásica, de expresión temprana durante la vida fetal, y una forma no clásica (NC) de expresión tardía postnatal. La forma clásica incluye, una forma severa en la cual está alterada la síntesis de cortisol y aldosterona (forma perdedora de sal, PS) y una forma en la cual la función mineralocorticoidea está conservada (forma virilizante simple, VS). En la forma NC, el exceso de producción de andrógenos adrenales se manifiesta en la prepubertad o adolescencia. Si bien estos pacientes poseen deficiencias parciales de la enzima P450c21, la razón por la cual presentan manifestaciones clínicas más tardías no se conoce. Sin embargo la edad en que se expresa fenotípicamente, coincide con la edad en que se produce la adrenarca, caracterizada por el aumento fisiológico en la producción de andrógenos adrenales. En el humano ha sido descripto un gen activo que codifica para la enzima 21 hidroxilasa, el CYP21B, y un pseudogen inactivo, el CYP21A, duplicados en tandem junto con los genes que codifican para los componentes C4 del complemento, C4A y C4B. Estos genes, ubicados en el brazo corto del cromosoma 6 banda 21.3, presentan un 98% de homología entre sí, lo cual dificulta su análisis a nivel molecular. En pacientes con HSC por déficit de la enzima P450c21, en poblaciones norteamericana y europeas, ha sido descripto que el 25 % de las alteraciones del gen CYP21B representan deleciones, o macroconversiones del gen CYP21B en una forma similar al CPY21A . El 75 % restante representan mutaciones puntuales (MP). Existe escasa información acerca de la frecuencia de estas alteraciones génicas en población latinoamericana Los objetivos del presente estudio fueron :1-Caracterizar las alteraciones del gen CYP21B en pacientes con HSC por déficit de la enzima P450c21, en población argentina. 2- Evaluar las implicancias de la enzima 3?-HSD en la regulación de la síntesis de andrógenos en la adrenal humana, y analizar su vinculación con el inicio de la adrenarca y la expresión fenotípica de la forma NC de HSC por déficit de la enzima P450c21. Nueve alteraciones descriptas del gen CYP21B (deleciones o macroconversiones génicas, P30L, In2, I172N, Ex3, ClEx6, V281L, Q318X y R356W) fueron analizadas en 73 pacientes (146 alelos) con diagnóstico de HSC por déficit de la enzima P450c21, ( 38 con la forma PS, 15 con la forma VS y 20 con la forma NC). Se elaboró una estrategia de estudio del gen CYP21B, que nos permitió caracterizar un 85% de los alelos de pacientes con las formas clásicas, y un 77.5% en pacientes con la forma NC. En las formas clásicas de HSC las alteraciones más frecuentes fueron, al igual que en otras poblaciones, las deleciones o macroconversiones génicas (20.7%), y la MP In2 (24.5%). En los pacientes con la forma NC, la MP más frecuente fué la V281L (57%). La correlación entre el fenotipo y el genotipo mostró que la expresión fenotípica de la patología estaría vinculada a la severidad de la mutación presente en el alelo menos afectado. El análisis de MP poco frecuentes o no descriptas del gen CYP21B, permitió detectar en dos pacientes una sustitución de GG por C en el codón 483, que provocaría un corrimiento de marco de lectura abierto. Esta MP fue descripta previamente en un paciente en población sueca. Sin embargo, los efectos de esta alteración sobre la funcionalidad de la proteína no han sido determinados. Por otro lado, la abundancia del ARNm de las enzimas 3?-HSD y P450c21 fue analizada en 15 tejidos adrenales normales prepuberales. El análisis de los resultados se realizó dividiendo a los sujetos en 2 grupos : Grupo1(Gr1), menores de 8 años, y Grupo2 (Gr2), mayores de 8 años. La abundancia del ARNm de 3?-HSD también fue analizada en 2 tejidos adrenales tumorales virilizantes (TV) y un tumor sindrome de Cushing (TSC). Se observó que la abundancia del ARNm de la enzima 3?-HSD fue significativamente mayor en el Gr1 que en el Gr2, mientras que la abundancia del ARNm de la enzima P450c21 no mostró diferencias entre ambos grupos. Además, la abundancia del ARNm de la enzima 3?-HSD en los TV fue significativamente menor que en el TSC. La caracterización de las alteraciones del gen CYP21B en pacientes con HSC por déficit de la enzima P450c21 en población argentina, representa un aporte de relevancia ya que existe escasa información disponible en poblaciones latinoamericanas. Por otro lado, se vincula a la transferencia asistencial, dado que nos ha permitido realizar diagnóstico prenatal, e implementar conductas terapéuticas destinadas a evitar la virilización genital en los fetos femeninos afectados. Además, posibilitó precisar el diagnóstico en pacientes con la forma NC, en los cuales las técnicas bioquímicas clásicas no son concluyentes. Por otro lado el descenso de la expresión de la enzima 3?-HSD en función de la edad cronológica, podría ser responsable del incremento de la secreción de DHEA y DHEA-S, observado durante la adrenarca. En pacientes con la forma NC de HSC por déficit de la enzima P450c21, probablemente el descenso fisiológico de la expresión de la enzima 3?-HSD ocasione un incremento en la producción de DHEA y DHEA-S de mayor magnitud, dado que ha sido descripta una mayor sensibilidad de la glándula adrenal al ACTH en este grupo de pacientes. Finalmente, los resultados obtenidos sugieren que la expresión del ARNm de la enzima 3?-HSD sería la llave síntesis androgénica en la adrenal humana.