Análisis de cepas diarreogénicas de Escherichia coli provenientes de bovinos de Tierra del Fuego y su posible impacto en la salud

Escherichia coli shigatoxigénico (STEC), con presentación endémica en Argentina, y E. coli enteropatógena (EPEC) son patovares de impacto en la niñez. La patogenia de STEC incluye cuadros asintomáticos, de diarrea leve y severa, síndrome urémico hemolítico (SUH), y en ocasiones la muerte del paciente. Se ha documentado como principal reservorio al bovino. Las cepas EPEC están asociadas a diarreas y constituyen la segunda causa de muerte en niños menores a 5 años. En Tierra del Fuego (TDF), la tasa de SUH y diarreas es elevada. La provincia de TDF no cuenta con estudios de portadores ni de reservorios de STEC ni EPEC. El objetivo de este estudio ha sido determinar la portación de STEC y EPEC en bovinos de TDF destinados a faena. Se realizó un estudio epidemiológico transversal observacional en Julio 2016 para la detección de STEC-LEE negativas, AE-STEC y EPEC. Las muestras se recolectaron en las dos playas de faena existentes en Ushuaia y Río Grande.Para cada animal se tomó una muestra por hisopado rectal. Se realizó pre-enriquecimiento en caldo tripteína soja seguido de siembra en agar Mac Conkey para la identificación de EPEC y STEC no-O157. Para STEC O157 se utilizó separación inmunomagnética. Se realizó PCR de stx2, stx1, rfbO157 y eae a partir de la zona de confluencia con posterior rastrillaje de los patovares en muestras positivas. Las cepas aisladas fueron caracterizadas bioquímicamente y serotipificadas. En cepas STEC se caracterizó el subtipo stx mediante PCR, se evaluó la producción de toxina y de enterohemolisina calcio dependiente. En cepas EPEC se analizó la presencia de bfp y se evaluó fenotípicamente el patrón de adhesión. Además se buscó presencia de híbridos con otros patovares y se realizaron ensayos de susceptibilidad a antimicrobianos. Los resultados fueron analizados mediante test de diferencia de proporciones. Se analizaron 194 muestras de bovinos de TDF. La prevalencia de STEC fue del 15% (30/194), y de EPEC del 5% (10/194). Se aislaron 27 cepas STEC que pertenecieron a los siguientes serotipos O1:H21 (1/27); O6:H34 (1/27); O113:H21 (1/27); O130:H11 (1/27); O130:H- (1/27); O171:H2 (1/27); O174:H28 (1/27); O178:H19 (5/27); O179:H8 (1/27); O185:H7 (6/27); O185:H19 (7/27); O187:H7 (1/27), y una cepa EPEC O152:H25. No se detectaron cepas AE-STEC ni STEC O157 en este trabajo. En cepas STEC predominó la presencia de stx2 (92,6%). Los tipos de toxinas detectados fueron stx2 (16/27), stx1/stx2 (9/27), stx1 (2/27). El subtipo prevalente stx2c (37%). El 14% de las cepas presentó por lo menos algún subtipo de toxina no tipificable (4/27). La producción de toxina Shiga se detectó en 25/27 cepas. La cepa EPEC aislada resultó ser atípica (aEPEC), sin patrón de adhesión definido, con capacidad de generar lesión A/E. En total 16/28 cepas presentaron el gen que codifica para enterohemolisina (ehxA) y 12 fueron capaces de producir la enterohemolisina calcio dependiente. No se detectaron cepas de patovares híbridos. Todas las cepas evidenciaron resistencia a Ampicilina y 20/28 fueron resistentes a aminoglucósidos (20/20 a XII Estreptomicina, con 6/20 resistentes a Estreptomicina y Amikacina). No se observaron diferencias estadísticamente significativas en la detección de cepas STEC y EPEC al considerar el tipo de producción y la playa de faena. La relación EPEC/STEC detectada fue 1/3. Bajo este criterio la probabilidad de exposición en esta región a STEC sería tres veces mayor que a EPEC. Por otro lado se podría inferir que no existiría inmunidad protectora cruzada entre las cepas EPEC y las AE-STEC provenientes del ganado bovino.

Shiga toxin producing E. coli (STEC), which has endemic presentation in Argentina, and enteropathogenic E. coli (EPEC), are probably the most significant pathovars, known for causing disease in childhood health. STEC pathogenesis includes mild to severe diarrhea, hemolytic uremic syndrome (HUS) which can lead to death. Cattle have been recognized as the main reservoir of STEC. EPEC causes diarrhea and have been reported to be the second cause of death in under five-year-old children. In Tierra del Fuego (TDF), SUH and diarrheas have high rates. There are no previous studies of carriers or reservoirs of STEC and EPEC in TDF. The aim of this study was to establish the prevalence of STEC and EPEC in cattle from slaughterhouses in TDF. A cross-sectional epidemiological study was carried out in July 2016 to determine the prevalence of STEC, EPEC and AE-STEC in cattle being raised for consumption in TDF. Samples were taken in two slaughterhouses in TDF (Ushuaia y Río Grande). We collected one rectal swab from each animal. For non-O157 STEC and EPEC each sample was enriched in tryptone soy broth. Later, the samples were cultivated on MacConckey agar. For O157 STEC inmunomagnetic separation was carried out. Screening was carried out using conventional PCR for stx1, stx2, rfbO157 and eae genes. Positive samples at screening were analysed looking for positive pathovar strains. Each isolated strain was biochemically characterized and serotyped. Subtyping of stx1 and stx2 were performed by PCR, and Shigatoxin and enterohemolysin production were carried out in STEC strains.The presence of the bfpA gene, and strain adhesion pattern was determined in isolated EPEC strains. Antimicrobial susceptibility was test for each isolate. Statistical analysis was carried out using Test of Differences. A total of 194 samples were analysed. The prevalence of STEC was 15% (30/194), and the prevalence of EPEC was 5% (10/194). Twenty eight strains were isolated. STEC strains had the following serotypes: O1:H21 (1/27); O6:H34 (1/27); O113:H21 (1/27); O130:H11 (1/27); O130:H- (1/27); O171:H2 (1/27); O174:H28 (1/27); O178:H19 (5/27); O179:H8 (1/27); O185:H7 (6/27); O185:H19 (7/27); O187:H7 (1/27) and EPEC strain belong to O152:H25 serogroup. AE-STEC nor serogroup O157 were not detected in this study. The main toxin type in STEC strains was stx2 (92,6%). The stx types detected were stx2 (16/27), stx1/stx2 (9/27) and stx1 (2/27). The most prevalent stx genotypes was stx2c (37%). 14% of the strains showed at least one nontypeable subtype (4/27). Shiga toxin production was detected in 25/27 STEC strains. EPEC strain was categorized as atypical with no specific adhesion pattern and with the ability to cause A/E lesion. The ehxA gene was present in 16/28 strains, 12 of them produced enterohemolisin. There were no hybrid strains detected in this work. Antimicrobial susceptibility tests showed that all the strains were resistant to ampicillin, and 20/28 were resistant to aminoglycosides (20/20 streptomycin with 6/20 amikacin). No significant difference could be seen in the detection of STEC or EPEC by slaughterhouse or XIV production (extensive or intensive). EPEC/STEC relation was 1/3, which means that it´s three times more likely to be infected by STEC tan by EPEC and there is no cross reactive immunity between strains