Evaluación de células progenitoras de tipo OPCs (Oligodendroglial precursor cells) en especímenes cerebrales quirúrgicos obtenidos de pacientes con epilepsia focal farmacorresistente : análisis inmunohistoquímico y molecular

Introducción. La epilepsia es una enfermedad neurológica frecuente que afecta a más de 50 millones de personas en todo el mundo. Cuando las crisis epilépticas permanecen por dos años refractarias al tratamiento farmacológico se plantea la intervención quirúrgica. Las entidades clínico-patológicas más frecuentemente observadas en los especímenes quirúrgicos por farmacorresistencia son la Esclerosis del hipocampo (HS), los Tumores asociados a epilepsia de larga data y las Malformaciones del desarrollo cortical dentro de las cuales se encuentran las Displasias corticales focales (DCF). Tanto para la HS como para la DCF existe una clasificación principalmente histopatológica publicada por la Liga internacional contra la epilepsia que las divide en distintos tipos. A su vez, cuando la HS se asocia a DCF tipo II se define como Patología dual (PD). Se ha descripto, en algunas de estas patologías y en entidades histopatológicas no definidas asociadas a epilepsia farmacorresistente, un incremento de células oligo-like en sustancia blanca y en capas corticales profundas. En algunos de estos estudios han identificado que parte de esas células correspondían a células precursoras oligodendrogliales (OPCs). Objetivos. Evaluar las OPCs en las DCF, HS y PD con el fin de determinar su implicancia en estas patologías. Materiales y métodos. Se han evaluado las OPCs utilizando doble inmunotinción con los anticuerpos PDGF?R y Olig2 y por medio de la técnica de PCR en tiempo real para evaluar la expresión relativa de los transcriptos de PDGF?R y de NG2 (marcadores putativos de las OPCs) a nivel de sustancia gris de neocorteza en 8 casos con DCF, 5 casos con HS y 3 con PD. La edad media de los pacientes fue de 33 ±15 años, siendo 10 mujeres y 6 varones. Resultados. Al evaluar el nivel de expresión relativa de los transcriptos de PDGF?R y NG2 no se observaron diferencias significativas entre las tres patologías estudiadas. Tampoco se detectaron diferencias significativas en la mediana de células doble positivas. Al dividir los casos en base a la edad al inicio de las crisis se evidenció un incremento significativo en el número de OPCs totales en los pacientes con un inicio de crisis a edades mayores de 16 años comparados con los que iniciaron sus crisis a edades menores a 5 años (p=0,022, Test de Kruskal Wallis), mostrando a su vez correlación positiva significativa entre la edad de inicio y el número de OPCs totales (r=0,706, p=0,0029; correlación de Spearman) y en posición de satelitosis perineuronal (r=0,695, p=0,003). El análisis en base al tiempo de evolución de las crisis no mostró diferencias significativas ni en el nivel de transcriptos ni en el número de células dobles positivas. Al agrupar los casos en base a la edad en el momento de la cirugía se observó incremento significativo del número de OPCs en posición de satelitosis perineuronal entre el grupo de pacientes mayores a 36 años y el de menores a 20 años (p=0,049), detectándose a su vez correlación positiva significativa entre ambas variables (r=0,694, p=0,003). Posteriormente, identificamos que los casos de pacientes mayores al momento de la cirugía se correspondían en parte con aquellos que presentaban edades tardías de inicio de las crisis. Conclusiones. La población de células precursoras oligodendrogliales a nivel de sustancia gris de neocorteza no mostró diferencias significativas entre casos con displasia cortical focal, esclerosis del hipocampo y patología dual, interpretando que estas células no se verían afectadas en forma diferente entre estas patologías y especulando así mismo, en asociación con hallazgos en trabajos previos, que no intervendrían en forma significativa con el incremento de células oligo-like descripto en estas patologías. A su vez, hemos identificado que la afectación de crisis convulsivas desde edades tempranas de la vida generaría una reducción del número de estas células con respecto a pacientes con debut más tardío de inicio de las crisis. Consideramos que este hallazgo podría deberse a una mayor susceptibilidad de estas células ante el daño producido por las crisis en pacientes pediátricos menores a 5 años.

Introduction. Epilepsy is a frequent neurological disease which affects about 50 million people worldwide. Surgical intervention is considered when the seizures are refractory to pharmacological treatment during more than two years. The three most common clinic-pathological diseases observed in surgical cerebral specimens from patients with therapy-refractory epilepsies are hippocampal sclerosis (HS), long-term epilepsy-associated tumors and malformations of cortical development. Focal cortical dysplasia (FCD) belongs to the last group. There is a histopathological classification of both HS and FCD published by the International League against Epilepsy. When HS is associated to FCD type II is defined as Dual Pathology (DP). Both in some of these pathologies and in not well defined histopathological entities associated with therapy-refractory epilepsies have been described an increase of oligo-like cells in white matter and in deep cortical gray matter. Few of those publications have identified that some of the cells were oligodendroglial precursor cells (OPCs). Objectives. Evaluating the OPCs in FCD, HS and DP with the aim of determining their implication in these entities. Material and Methods. OPCs have been evaluated using both dual immunohistochemical with PDGF?R and Olig2 antibodies and Real time PCR to study relative expression of PDGF?R and NG2 mRNA transcripts (putative markers of OPCs). The study was performed in the neocortex grey matter of 8 cases with FCD, 5 cases of HS and 3 cases with DP. Average age of patients was 33 years old; ten were females and six were males. Results. There were not significant differences in the relative expression of both transcripts between the three analyzed pathologies. Neither has it been observed significant differences in the median of double positive cells. We detected a statistical significant increase of total number of OPCs in the group of patients older than16 years old compared to those patients younger than 5 years old at seizure onset (p=0.022, Kruskal Wallis test). We also observed a positive significant correlation between age of seizure onset and total number of OPCs (r=0.706, p=0.0020; Spearman correlation) and perineuronal OPCs (r=0.695, p=0.003). There were no significant differences in the number of OPCs or in the expression levels of transcripts based on epilepsy duration. We found an increase in the number of perineuronal OPCs in the group of patients older than thirty-six years old at the surgical time in relation to patients younger than twenty years old (p=0.049). We also detected positive significant correlation between the number of perineuronal OPCs and age of patients at surgical time (r=0.694, p=0.003). Then we noticed that patients older than thirty-six years old at the surgical time were in part those with the later onset. Conclusions. Focal cortical dysplasia, hippocampal sclerosis and dual pathology did not show significant differences in oligodendroglial precursor cell population, deducing that these cells would not be affected in a different way between these entities. In association with previous publications we speculate that OPCs are not a significant component of the oligo-like cell increase described in these kinds of pathologies. Moreover, we have also identified that suffering seizures since early life ages would produce a reduction of the number of OPCs in comparison with an onset at higher ages than sixteen years old. We consider that this find might be a consequence of a greater susceptibility of these cells in front of damages generated by seizures in pediatric patients younger than five years old.