Director(a):
Zerbini, Elsa Virginia
Co-Director(a):
Kusznierz, Gabriela Fabiana
Jurado:
Carballal, Guadalupe - Polack, Fernando - Oubiña, José Raúl
Institución otorgante:
Universidad de Buenos Aires.   Facultad de Farmacia y Bioquímica
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales - Facultad de Medicina
Fecha de la defensa:
2014-08-11
Tipo de documento:
tesis de maestría - info:eu-repo/semantics/acceptedVersion
Grado alcanzado:
Magíster de la Universidad de Buenos Aires en Biología Molecular Médica 
Editor:
Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica
Formato:
application/pdf  |   kb.   |  105 p.
Idioma:
español
Area Temática:
Descripción:
Las infecciones respiratorias agudas (IRA), cuyas patologías más frecuentes son la neumonía, la bronquiolitis y la enfermedad tipo influenza, afectan a toda la población, pero principalmente a los menores de 5 años y mayores de 65 años, encontrándose entre las primeras causas de mortalidad a nivel mundial. En Argentina, son la principal causa de consulta e internación en todas las edades, y en Santa Fe, representaron casi el 20% de las internaciones registradas en el hospital pediátrico de referencia de la ciudad durante el año 2010. Los patógenos virales más frecuentes causantes de IRA son el virus sincicial respiratorio (VSR), influenza, parainfluenza, adenovirus, metapneumovirus, coronavirus y rinovirus. Los rinovirus humanos (HRV) pertenecen a la familia Picornaviridae. Son virus esféricos no envueltos y su genoma es una única molécula lineal de ARN de sentido positivo, que se encuentra recubierta por una cápside de simetría icosaédrica. Aislados por primera vez en 1956, en la actualidad se conocen más de 100 serotipos diferentes que se encuentran agrupados en tres especies, HRVA, HRVB y HRVC. Son termoestables y se diseminan a través de las secreciones respiratorias contaminadas mediante el contacto directo entre personas. Es posible hallarlos en personas de todas las edades, su diseminación es a nivel mundial y, aunque la frecuencia de circulación suele ser mayor en los meses de otoño y primavera, pueden detectarse en todos los meses del año. Si bien históricamente los HRV fueron considerados patógenos de las vías aéreas superiores, en la actualidad se ha demostrado que también ocasionan infecciones en el tracto respiratorio inferior, causando hospitalizaciones de niños con neumonía, bronquiolitis y obstrucciones pulmonares crónicas. También se encuentran asociados a pacientes que presentan episodios de sibilancias recurrentes, exacerbaciones de asma, bronquitis, sinusitis y otitis media aguda. El diagnóstico virológico es necesario para determinar la etiología de las IRAs, ya que los cuadros clínicos producidos por los distintos virus suelen ser similares. Además, permite restringir el uso innecesario de antibióticos. El aislamiento viral en cultivo de tejido seguido por el test de labilidad ácida representa el método estándar en el laboratorio para la confirmación de una infección por HRV, pero el tiempo requerido es superior a dos semanas, lo que es de valor limitado para una decisión terapéutica. Las técnicas basadas en la detección de ácidos nucleicos por reacción en cadena de la polimerasa (PCR) han permitido incrementar la identificación de este virus. El hecho de que en Santa Fe no se hayan efectuado hasta el momento estudios relacionados a los HRV motivó la realización de este trabajo, que se propuso seleccionar y optimizar una técnica de PCR que permitiera la detección del virus en pacientes pediátricos hospitalizados con IRA durante el período marzo 2010-febrero 2011, para luego estudiar su frecuencia, estacionalidad y epidemiología, como así también aspectos clínicos-epidemiológicos de los pacientes infectados. Para el desarrollo del estudio, se seleccionó una RT-PCR anidada, altamente sensible y específica, que fue testeada por Steininger et al. (2001) para la mayoría de los serotipos de HRV conocidos y que amplifica un fragmento altamente conservado del genoma viral. Se optimizó la técnica con controles de positivos del virus, variando parámetros críticos del ensayo, y se corroboró la especificidad de la misma al ensayar controles positivos de otros virus respiratorios. Se obtuvieron un total de 2020 aspirados nasofaríngeos (ANF) de pacientes durante el período estudiado, a los cuales se les realizó la detección de antígenos VSR, adenovirus, parainfluenza e influenza A y B por inmunofluorescencia (IF). La detección de influenza A y B se realizó además por RT-PCR real time. A un porcentaje representativo de ANF que resultaron negativos por IF (452 muestras) se les realizó la determinación de HRV mediante RT-PCR, detectando el genoma del virus en 172, lo que representó una positividad del 38,1% y un segundo lugar (8,5%) en la frecuencia de circulación de virus respiratorios. Se encontró en todos los meses del año, predominando durante marzo de 2010 y desde agosto hasta febrero de 2011. El 60% de los niños hospitalizados con IRA atribuibles a HRV fueron menores de 6 meses, siendo la mediana de la edad de 4 meses. Se comprobó que la edad no fue un factor de riesgo para desarrollar enfermedad grave. La proporción de infectados fue similar para ambos géneros. Se analizaron aspectos clínicos y epidemiológicos de 145 pacientes. El 31% presentó antecedentes clínicos, entre los que se destacaron la prematurez (55,6%) y las sibilancias recurrentes (51,1%). Los diagnósticos de egreso más frecuentes fueron la neumonía (35,2%), la bronquiolitis (32,4%) y la bronquitis (12,4%). Como hallazgos radiológicos se observó atrapamiento aéreo (75,2%), infiltrado instersticial (67,9%) e infiltrado alveolar (35,8%). El 72,7% de los pacientes presentó leucocitosis. Se utilizaron antibióticos en el 66,4% de los tratamientos y el 85,5% de los niños requirió suministro de oxígeno durante la internación. La mediana de la duración de la estadía hospitalaria fue de 6 días y el 15,9% de los pacientes requirió internación en unidad de terapia intensiva (UTI). No se observaron diferencias significativas entre las edades de los pacientes internados en UTI y las de aquellos que no presentaron un cuadro clínico de gravedad, como así tampoco el presentar un antecedente clínico fue un factor de riesgo para desarrollar enfermedad severa. El presente estudio evidenció que los HRV están asociados a hospitalizaciones de niños por IRA. La implementación de una técnica de RT-PCR de punto final logró detectar con rapidez, sensibilidad y especificidad un virus que se ubicó en el segundo lugar de circulación (luego del VSR), y permitirá, en forma rutinaria, disminuir los casos de IRA de origen desconocido, estableciendo el papel que desempeñan estos virus en nuestro medio y facilitando la elección de conductas terapéuticas apropiadas.
Descripción completa
Abstract:
Acute respiratory infections (ARIs), among which the most frequent pathologies include pneumonia, bronchiolitis and influenza-like illness, affect the whole, but especially people under 5 and over 65. It is among the leading causes of mortality worldwide. In Argentina, ARIs are the leading cause for consultation and hospitalization in all ages, and in Santa Fe they accounted for nearly 20% of admissions at the local pediatric referral hospital in 2010. The most common IRA-causing viral pathogens are respiratory syncytial virus (RSV), influenza, parainfluenza, adenovirus, metapneumovirus, coronavirus and rhinovirus. Human rhinovirus (HRV) belongs to the family Picornaviridae. They are nonenveloped spherical viruses and their genome is a single positive-sense RNA linear molecule which is coated by a capsid of icosahedral symmetry. First isolated in 1956, over 100 different serotypes are currently known which are grouped into three species, HRVA, HRVB and HRVC. They are heat stable and can spread through contaminated respiratory secretions through direct contact between people. They may be found in people of all ages and are spread worldwide. Although their frequency of circulation is usually higher in autumn and spring, they can be detected in every month of the year. While historically considered upper airways pathogens, they have recently been shown to cause infections in the lower respiratory tract as well, causing hospitalizations of children with pneumonia, bronchiolitis and chronic pulmonary obstruction. They are also associated with patients with recurrent episodes of wheezing, asthma exacerbations, bronchitis, sinusitis and acute otitis media. Virological diagnosis is needed to determine the etiology of ARIs, since the clinical symptoms caused by each of these viruses are often similar. In addition, the unnecessary use of antibiotics can be thus restricted. Viral isolation in tissue culture followed by an acid liability test represents the standard method in the laboratory for confirmation of HRV infection, but the time required is longer than two weeks, which is of limited value for therapeutic decision. Techniques based on the detection of nucleic acids through chain reaction (PCR) have led to advance in ARI identification. The fact that no HRV-related studies have been conducted in Santa Fe so far led to the completion of this work, which aims to select and optimize a PCR technique enabling the detection of the virus in ARI hospitalized pediatric patients during THE march 2010-february 2011 period, and then study their frequency, seasonality and epidemiology, as well as clinical and epidemiological aspects of infected patients. In order to develop the study, a highly sensitive and specific nested RT-PCR was selected which was tested by Steininger et al. (2001) for most known HRV serotypes, amplifying a highly preserved fragment of the viral genome. Technique was optimized with positive virus controls, varying critical test parameters, and specificity was thereby confirmed by testing positive controls of other respiratory viruses. A total of 2020 nasopharyngeal aspirates (NPA) were obtained during the study period from patients who underwent antigen detection RSV, adenovirus, parainfluenza and influenza A and B by immunofluorescence (IF). Detection of influenza A and B was also carried out through real time RT-PCR. For a representative proportion of NPAs who were negative by IF (452 samples) HRV was determined through RT-PCR, detecting the virus genome in 172. This resulted in a 38.1% positivity and a second place (8.5%) in the rate of respiratory virus flow. It was found in all months of the year, predominantly during March 2010 and from August to February 2011. 60% of hospitalized children with HRV attributable to ARI were under 6 months, with a median age of 4 months. Age proved not to be a risk factor for developing severe disease. The proportion of infected children was similar for both genders. Clinical and epidemiological aspects of 145 patients were analyzed. 31% had a medical history, including prematurity (55.6 %) and recurrent wheezing (51.1%) as prevailing conditions. The most common discharge diagnoses were pneumonia (35.2%), bronchiolitis (32.4%) and bronchitis (12.4%). The aerial radiological findings observed include (75.2%) trapping interstitial infiltrate (67.9 %) and alveolar infiltrates (35.8%). 72.7% of patients had leukocytosis. Antibiotics were used in 66.4 % of treatments and 85.5% of the children required oxygen supply during hospitalization. The median duration of hospital stay was 6 days and 15.9 % of patients required admission to intensive care unit (ICU). No significant differences were observed between the age of ICU patients and that of patients who did not have severe clinical symptoms. Similarly, having a clinical history did not prove a risk factor for developing severe disease. This study showed that HRVs are associated with ARI-induced children hospitalizations. The implementation of an RT-PCR endpoint technique could quickly detect, with sensitivity and specificity, a virus that is the second in importance with greatest circulation (after VSR), and will be capable of routinely reducing ARI cases of unknown origin, thus establishing the role these viruses play in our environment and facilitating the choice of appropriate therapeutic approaches.
Complete abstract
Calificación:
Sobresaliente 10 (Diez)
Dictamen:
El trabajo de tesis fue expuesto en forma didáctica, concisa y clara. La redacción fue cuidadosa, ordenada y con bibliografía actualizada. Los objetivos específicos fueron concretados y abren camino a futuros proyectos. La presentación oral de la tesis fue excelente y el maestrando demostró un cabal conocimiento del tema a través de sus respuestas y de una discusión fructífera.
Identificador(es):
http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=afamaster&cl=CL1&d=HWA_1389
Filiación Institucional:
Fil: Rudi, Juan Manuel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; Argentina
Institución aportante:
Facultad de Farmacia y bioquímica
Biblioteca cooperante:
Biblioteca de la Facultad de Farmacia y Bioquímica
Derechos:
info:eu-repo/semantics/openAccess
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/
Licencia de uso:
Licencia Creative Commons

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Cita bibliográfica:

Rudi, Juan Manuel (2014-08-11). Rol del rinovirus en niños hospitalizados con infección respiratoria aguda  (tesis de maestría). Universidad de Buenos Aires.  Facultad de Farmacia y Bioquímica. [consultado:  ] Disponible en el Repositorio Digital Institucional de la Universidad de Buenos Aires:  <http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=afamaster&cl=CL1&d=HWA_1389>