Expresión y caracterización de genes de fosfolipasas C de Trypanosoma cruzi

Institución otorgante:

Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

Fecha:

1999

Tipo de documento: 

info:eu-repo/semantics/bachelorThesis
 

Formato:

application/pdf

Idioma:

spa

Descripción:

Trypanosoma cruzí posee varias proteínas y glicoproteínas de membrana que están ancladas vía glicosilfosfatidilinositol (GPI). Se demostró, en todos los estadios de su ciclo de vida, la presencia de diferentes actividades de fosfolipasa C (PLC) que solubilizan proteínas de superficie ancladas por GPI. Estas actividades enzimáticas fueron involucradas en procesos tales como la liberación de proteínas de superficie durante la diferenciación entre distintos estadios o la entrada del parásito al citoplasma de la célula huésped. El gen de la PLC específica para GPI (GPI-PLC) de Trypanosoma brucei se encuentra bien caracterizado. Recientemente en este laboratorio, se aisló un gen homólogo al mismo en T.cruzi, el gen Tcplcl. Por Southern blotting de DNA genómico se determinó que existen al menos cinco genes que codifican para PLCs en T.cruzi. Utilizando el gen Tcplcl como sonda, se identificaron otros dos genes de PLC en T.cruzi, Tcplc2 y Tcplc3. La secuencia de estos genes reveló la conservación de la mayoría de los residuos involucrados en la actividad enzimática de las PLCs bacterianas específicas para PI sugiriendo un mismo mecanismo de acción. Los genes Tcplcl y Tcplc3 fiieron expresados en Escherichia coli y las proteínas recombinates resultantes fueron purificadas. Se utilizó un ensayo standard de actividad enzimática para fosfolipasas C específicas para GPI que consiste en la digestión de un precursor del GPI, el glicolípido A. La PLC 1 recombinante fue capaz de digerir el glicolípido A aunque en menor medida que la GPIPLC de T.brucei.

Identificador:

https://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO000642_Courel