Expresión de la poliproteína Gag del Virus de inmunodeficiencia de felinos (FIV) utilizando el sistema eucariótico del virus vaccinia : mutagénesis del dominio Matriz

Institución otorgante:

Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

Fecha:

1998

Tipo de documento: 

info:eu-repo/semantics/bachelorThesis
 

Formato:

application/pdf

Idioma:

spa

Descripción:

El virus de inmunodeficiencia de felinos (FIV), miembro de la Familia Retroviridae, causa en sus huéspedes (gatos, pumas, leones) una enfermedad similar al SIDA de humanos. El genoma de FIV está formado por los genes gag, pol y env. El gen gag se localiza en el extremo 5' del genoma y codifica para un precursor poliproteico Gag. Este precursor es clivado por la proteasa viral (PR) para dar las proteínas matriz (MA), cápside (CA) y nucleocápside (NC). Un aspecto fundamental del ciclo de replicación de FIV como es el ensamblado de Gag en partículas virales no ha sido estudiado aún. El desarrollo de este tema contribuirá al conocimiento de cómo han evolucionado los mecanismos de morfogénesis en los virus de inmunodeficiencia. Por lo tanto nos propusimos, por un lado, construir un virus vaccinia recombinante que dirija la síntesis, procesamiento, transporte y ensamblado del precursor Gag en partículas virales y, por el otro, comenzar con el estudio del rol de la proteína matriz en el ensamblado de FIV a través de la mutage'nesis dirigida del gen que codifica para esta proteína. Como primer paso se construyó un virus vaccinia recombinante portador del gen gag y de la región PR del gen pol de FIV. Esta construcción permitió expresar eficientemente en células de mamífero el precursor Gag de FIV. Tanto el precursor Gag como sus productos de clivaje MA y CA pudieron ser detectados en la fracción particulada purificada a partir del medio de cultivo de células de mamífero infectadas con el virus vaccinia recombinante, lo cual sugiere que el precursor Gag de FIV producido utilizando este sistema resultó capaz de ensamblarse en partículas que son liberadas al medio extracelular. Posteriormente se introdujeron mutaciones en regiones específicas de la proteína MA de FIV. Estas regiones incluían dos zonas de carácter hidrofóbico y una de carácter básico en la región amino-terminal de la proteína. La mutación que afectó la zona de carácter básico provocó una inhibición total en la producción de partículas, mientras que las mutaciones en las dos regiones hidrofóbicas provocaron una inhibición significativa de este proceso. Por lo tanto los resultados obtenidos sugieren que estas regiones están involucradas en el proceso de ensamblado ya que los cambios introducidos afectaron la formación de partículas

Identificador:

https://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO000608_DelPilarCelma