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Design of a reverse genetic system for foot-and-mouth disease virus

Giraldez, Adrián Nicolás

Director(a):

Mattion, Nora Marta - Malirat, Viviana

Institución otorgante:

Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

Fecha:

2013-11-19

Tipo de documento:

info:eu-repo/semantics/doctoralThesis

Formato:

application/pdf

Idioma:

spa

Temas:

VIRUS DE LA FIEBRE AFTOSA - GENETICA REVERSA - CLON INFECCIOSO - REPLICON - INGENIERIA GENETICA - FOOT AND MOUTH DISEASE VIRUS - REVERSE GENETICS - INFECTIOUS CLONE - REPLICON - GENETIC ENGINEERING

Descripción:

El presente trabajo tiene como objetivo generar un sistema para ser utilizado comoherramienta en técnicas de genética reversa vinculadas al estudio del virus de la Fiebre Aftosa. Se diseñó y construyó un clon basado en una copia en ADN del genoma completo de la cepa O1/Campos, que se transcribe a partir del promotor de la polimerasa del fago T7. A pesar dedetectar replicación del genoma viral por identificación de ARN de cadena negativa en lascélulas transfectadas y en pasajes sucesivos de éstas, no se observó generación de efectocitopático en células BHK-21. Se valoró la influencia de algunos cambios en nucleótidos sobreesta incapacidad, tales como mutaciones en la secuencia amino acídica, estructura secundariadel ARN, estructura secundaria y terciaria de las proteínas involucradas, y se generaronreversiones de las mutaciones que se consideraron más importantes. Se desarrolló un sistemade cuantificación de ARN viral por RT-PCR en Tiempo Real. Por otro lado, se generaron dosreplicones mediante el remplazo parcial o completo de las proteínas de la cápside viral por elgen reportero Luc, incapaz de generar virus infeccioso, de modo de poder realizar estudios enlaboratorios de nivel bioseguridad menos estrictos. Este sistema puede usarse para el estudiofuncional de las proteínas no estructurales del virus, así como de las regiones 5’ y 3’ nocodificantes. Se detectó replicación por identificación de ARN de cadena negativa en las célulastransfectadas así como traducción de proteínas virales por medio de técnicas deinmunofluorescencia indirecta.

Identificador:

https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n5447_Giraldez

Derechos:

info:eu-repo/semantics/openAccess
http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/

Licencia de uso:

Descargar texto:

tesis_n5447_Giraldez.oai

Cita bibliográfica:

Giraldez, Adrián Nicolás (2013-11-19). Diseño de un sistema de genética reversa del virus de la fiebre aftosa. (info:eu-repo/semantics/doctoralThesis). Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. [consultado: ] Disponible en el Repositorio Digital Institucional de la Universidad de Buenos Aires: <https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n5447_Giraldez>