Caracterización de antígenos recombinantes de la glicoproteína E2 del virus de la diarrea viral bovina y su utilización como vacunas y reactivos de diagnóstico

Institución otorgante:

Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

Fecha:

2003

Tipo de documento: 

info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
 

Formato:

application/pdf

Idioma:

spa

Descripción:

El Virus de la Diarrea Viral Bovina (BVDV) pertenece al género Pestivirus de lafamilia Flaviviridae y es causante de importantes pérdidas económicas en la industriaganadera regional y mundial. Las manifestaciones clinicas de la infección son variadasy las pérdidas en la producción ganadera se deben principalmente a la disminución enla producción de leche, retraso en el crecimiento, aumento de infecciones secundariasy aumento de la mortalidad en animales jóvenes. El control epidemiológico de BVDV se realiza a través de programas devacunación masiva y eliminación de animales persistentemente infectados, principalesdiseminadores del virus en los rebaños. Los bajos títulos virales obtenidos en cultivo de tejidos constituyen unadificultad importante en la elaboración industrial de vacunas inactivadas. La utilizaciónde cepas atenuadas como vacunas anti BVDV es, por otra parte, un riesgo mayor yaque la aparición de revertantes en un animal pre-infectado con BVDV podríadesencadenar la “enfermedad de las mucosas”, que es fatal y en vacas preñadaspodría dar origen a una camada de terneros persistentemente infectados. Eldiagnóstico de las infecciones con BVDV, realizada a través de la detección deanticuerpos en suero bovino por seroneutralización y/o inmunoensayo enzimática (ELISA) también presenta dificultades debidas, entre otras, a la necesidad de contarcon infraestructuras adecuadas para el cultivo de células y a los desafios técnicos quepresenta la obtención de antígeno purificado. En este trabajo se expresó en sistemas recombinantes y se caracterizóbioquímica e inmunológicamente al principal inmunógeno de BVDV, la glicoproteína E2. La proteína fue expresada en células de mamífero y de insecto, en su formaentera (rE2) y delecionada en su extremo carboxilo terminal de anclaje a membrana (ΔrE2) y se ensayó su desempeño como vacuna y como antígeno para diagnóstico. Laproteína recombinante E2 (rE2) presento características electroforéticas einmunoquímicas idénticas a la E2 viral y resultó ser un potente inmunógeno enbovinos. La incorporación del gen de rE2 en el genoma de un Virus de la estomatitisvesicular (VSV) recombinante permitió, también , la creación de un virus atenuado de VSV (VSV-E2) capaz de inducir una excelente respuesta humoral anti BVDV enratones y óptima producción de E2 recombinante en células de BHK en cultivo. En este trabajo también se demostró que la proteína ΔrE2 es expresada yliberada al sobrenadante del cultivo de células de Drosophila melanogaster lo quepermitió contar con una preparación rápida y relativamente pura de antígeno. Este fueutilizado en un test de ELISA de captura (a través de un anticuerpo monoclonal antirE2, también desarrollado en el curso de este trabajo de Tesis) que presenta altasensibilidad y especificidad para la detección de anticuerpos anti BVDV en suerosbovinos.

Identificador:

https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3615_Marzocca