Acción de los lisados de bacterias lisogénicas y no lisogénicas sobre la capacidad infecciosa de fago lambda temperado y una mutante virulenta

Institución otorgante:

Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

Fecha:

1964

Tipo de documento: 

info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
 

Formato:

application/pdf

Idioma:

spa

Descripción:

El trabajo realizado se puede resumir en tres puntos: a) Estudio del efecto de los lisados de bacterias sobre el poder infectante del fago y una mutante virulenta. Se trabajó con lisados de bacterias lisogénicas K12 (T)W 1895 y no lisogénicas K12 W 1485. Los lisados se obtuvieron sometiendo a las bacterias al efecto de una descompresión brusca. Luego se centrifugaron a 10.000 rpm. para eliminar restos de membranas y bacterias remanentes. Los ensayos de inhibición de los fagos, se efectuaron incubando el fago con el lisado a 37°C durante 30 minutos. La inhibición se determinó en base a la disminución del número de placas producidas por el fago en presencia del lisado, respecto de un control. Las bacterias utilizadas fueron las K12 W 1485 sensibles a ambos fagos. También se trabajó con lisados obtenidos a partir de protoplastos de esas mismas cepas. Los resultados indican que los lisados de las bacterias lisogénicas y no lisogénicas inhiben el fago T virulento pero no tienen acción sobre el fago temperado. Los lisados de los protoplastos, se comportan en igual forma. La inhibición del fago virulento nunca es inferior al 50%. Las variaciones obtenidas (95-50%) dependen de la concentración del poder inhibitorio de cada lisado utilizado. b) Estudio de las propiedades del lisado de bacterias lisogénicas. Resultados: 1) El lisado es estable a 0°C por lo menos durante 30 días, luego comienza a perder título. 2) A los 5 minutos de calentamiento a 56 °C, se destruye rápidamente parte de la actividad del lisado. El resto permanece inalterado por lo menos hasta 30 minutos de calentamiento. 3) El lisado se inactivo a 100 °C. 4) Se incubó lisado con DNasa y RNasa; el poder inhibitorio no se altera por efecto de estas enzimas. 5) Se inactiva incubando el lisado con 250 Ɣ de tripsina por ml. 6) El lisado dializa parcialmente a 4 °C. 7) El lisado precipita por el agregado de ácido tricloroacético al 5% en frío. El precipitado resuspendido en buffer pH 7.0 tiene más actividad que el lisado original. 8) El lisado se puede sedimentar por ultracentrifucación. 9) El caldo donde crecieron las bacterias, a partir de las que se obtuvo el lisado, no tiene actividad inhibitoria. c) Interacciones entre lisado y fago. 1) La temperatura óptima de contacto fago-lisado es de 37 °C. A 0°C también se produce la unión entre el fago y el lisado, pero en menor proporción. A 56 °C esta unión no tiene lugar. 2) La cinética de la inhibición del fago por el lisado a 37°C, indica que la reacción es de primer orden. La reacción procede rápidamente, hasta que a los 50 minutos se detiene. 3)Los experimentos realizados para determinar si el lisado se une al fago temperado, aunque no lo inhiban indican que el lisado no interacciona en ninguna forma con el fago. Hay que hacer notar que en presencia de lisado, el fago temperado produce un número mayor de placas, que cuando se plaquea sin el mismo. 4) El efecto del lisado se debe a una acción directa sobre la partícula delfago y no a una interacción con la superficie de las bacterias sensibles. Conclusiones: Se postula que los receptores bacterianos que pasan a solución al obtenerse el lisado, son los responsables de la inhibición del fago virulento. Como estos receptores no parecen actuar sobre el fago temperado, se deduce que este fago se une a receptores diferentes de los que se une el virulento.

Identificador:

https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n1205_Coto